CN107058259A - 分子标志物mk2基因及其应用 - Google Patents

Abstract

分子标志物MK2基因及其应用，属于分子诊断领域，涉及骨髓瘤细胞中的分子标志物MK2基因在制备诊断多发性骨髓瘤的产品中的应用。本发明的实验证明与正常骨髓组织相比,MK2基因在多发性骨髓瘤患者中表达量明显升高。通过受试者中MK2的表达，可以判断受试者是否患有多发性骨髓瘤或存在患有多发性骨髓瘤的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或治疗方案。MK2基因是一种新的生物标记物，相比传统的检测手段，基因诊断不仅稳定、方便，且灵敏、特异，能够实现多发性骨髓瘤的早期诊断，从而及时控制多发性骨髓瘤的进程，降低死亡率。

Description

分子标志物MK2基因及其应用

技术领域

本发明涉及肿瘤的分子诊断领域，更具体地，本发明涉及骨髓瘤细胞中的分子标志物MK2基因及其在制备诊断多发性骨髓瘤的产品中的应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种浆细胞恶性肿瘤，其特点是骨髓中浆细胞克隆性增殖，并分泌单克隆免疫球蛋白或轻链。由于异常浆细胞浸润骨骼、骨髓和全身多个器官组织，引起病理性的骨骼破坏，患者的血清中出现异常的单克隆免疫球蛋白，从而抑制了机体的正常的多克隆免疫球蛋白，患者的尿内出现蛋白，患者最后表现出导致贫血、肾功能损害及病理性骨折等。MM是全世界发病率排名第二位的血液肿瘤，当前我国50岁以上的肿瘤病人中MM患者大约占据3％左右，随着我国人口的老龄化，MM发病率以每年1％的速度上升。目前认为MM发生是一个逐步进展的过程，很多患者在早期发生意义不明的单克隆球蛋白症，然后进展为MM，部分患者最终发展为髓外骨髓瘤(浆细胞白血病)，整个过程中患者骨髓浆细胞伴有多种基因的突变。

目前多发性骨髓瘤的诊断主要依靠骨髓克隆性浆细胞比例和(或)活组织病理学检查作为MM诊断基础。国际骨髓瘤工作组(IMWG)于2014年修订了意义未明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)、MM诊断标准。MM诊断标准包括骨髓中克隆性浆细胞比例≥10％和/或活组织病理学检查证实为浆细胞瘤；同时伴有以下一种或多种情况：高钙血症、肾功能不全、贫血和溶骨性骨损害。单克隆免疫球蛋白(M蛋白)是临床常用的MM诊断标志物，但修订后的诊断标准强调M蛋白不是诊断MM的必备条件，但可用来区别分泌型或非分泌型MM。此外，MRI、低剂量全身CT、FDG/PET及PET/CT等现代影像学技术被纳入检查辅助方法。

目前多发性骨髓瘤诊断的方法复杂、检查项目多，缺少一种可靠、方便的临床诊断方法。近年来，本课题组基于基因芯片表达谱，发现在多发性骨髓瘤患者中，MK2基因的表达显著增高，MK2基因的表达水平与与多发性骨髓瘤患者病理进程及耐药性密切相关。表明MK2是一种高危的骨髓瘤基因，可为多发性骨髓瘤的临床诊断提供可靠的判断。

MK2(mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 2，MAPKAPK2)是于1992年发现并被纯化的第一个MAPK激活蛋白激酶，主要被p38蛋白激酶直接磷酸化激活，是p38蛋白激酶的重要底物，在介导胞外信号引起的细胞增殖、分化、衰老、凋亡及炎症等反应中起着重要作用。MK2为致癌基因，可通过磷酸化途径直接活化多种肿瘤相关因子如细胞分裂周期蛋白25B/C和热休克蛋白27等；其亦可通过转录后调控机制上调多个癌基因和促炎因子的表达，而促进肿瘤包括肺癌的发生发展；MK2过表达可活化LIM激酶而激活VEGF诱导的血管生成过程，从而促进肿瘤的侵袭和转移。

发明内容

解决的技术问题：本发明的目的在于提供一种分子标志物MK2基因及其在制备诊断多发性骨髓瘤的产品中的应用。

技术方案：分子标志物MK2基因，序列如SEQ ID NO.1所示。

分子标志物MK2蛋白，序列如SEQ ID NO.2所示。

分子标志物MK2基因在制备诊断多发性骨髓瘤的产品中的应用。

上述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫组化、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测MK2基因表达水平以诊断多发性骨髓瘤的产品。

上述用实时定量PCR诊断多发性骨髓瘤的产品至少包括一对特异扩增MK2基因的引物；所述用免疫组化诊断多发性骨髓瘤的产品包括：与MK2蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断多发性骨髓瘤的产品包括：与MK2基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断多发性骨髓瘤的产品包括：蛋白芯片和基因芯片，其中蛋白芯片包括与MK2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与MK2基因的核酸序列杂交的探针。

上述用实时定量PCR诊断多发性骨髓瘤的产品至少包括一对特异扩增MK2基因的引物，序列如：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

一种用于诊断多发性骨髓瘤的工具，该工具能够检测样本中MK2基因的表达。

上述工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。

上述芯片包括基因芯片或蛋白质芯片，所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测MK2基因转录水平的针对MK2基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的MK2蛋白的特异性抗体；所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫组化试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测MK2基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫组化试剂盒包括MK2蛋白的特异性抗体；所述试纸包括用于检测MK2基因转录水平的试纸；所述高通量测序平台包括用于检测MK2基因转录水平的试剂。

上述检测MK2基因转录水平的试剂包括针对MK2基因的引物和/或探针。

有益效果：本发明首次发现了MK2基因表达与多发性骨髓瘤相关。本发明发现了一种诊断多发性骨髓瘤的分子标志物MK2，使用该分子标志物可以在多发性骨髓瘤发生的早期即可作为判断，或者判断受试者是否存在患有多发性骨髓瘤的风险,提供了患者的生存率。本发明发现了一种新的生物标记物MK2基因，相比传统的检测手段，基因诊断不仅稳定、方便，且灵敏、特异，从而及时控制多发性骨髓瘤的进程，降低死亡率。

附图说明

图1显示利用基因芯片(Gene expression profiling,GEP)检测MK2基因在多发性骨髓瘤患者和正常人中的表达差异图。分析22例正常骨髓(NP)、44例意义未明的单克隆丙种球蛋白疾病(monoclonal gammopathy of undetermined significance，MGUS，骨髓瘤前体疾病)以及351例初诊MM患者样本，MK2表达水平在MM患者样本中显著升高。

图2显示利用QPCR检测MK2基因在多发性骨髓瘤患者和正常人中的表达差异图。

图3显示利用免疫组化(IHC)染色方法分析MK2在正常骨髓和MM患者骨髓样本中表达情况图，结果显示MK2在MM患者样本中表达显著升高。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

本发明提供了检测MK2基因表达的产品在制备诊断多发性骨髓瘤的工具中的应用。

进一步，上面所提到的检测MK2基因表达的产品包括：通过实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台等检测MK2基因表达水平以诊断多发性骨髓瘤的产品。

进一步，所述用实时定量PCR诊断多发性骨髓瘤的产品至少包括一对特异扩增MK2基因的引物；所述用免疫检测诊断多发性骨髓瘤的产品包括：与MK2蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断多发性骨髓瘤的产品包括：与MK2基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断多发性骨髓瘤的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与MK2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与MK2基因的核酸序列杂交的探针。

在本发明的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断多发性骨髓瘤的产品至少包括一对特异扩增MK2基因的引物的序列如：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

优选地，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量测序平台是一种特殊的诊断工具，检测MK2基因表达的产品可以应用于该平台实现对MK2基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知MK2基因的异常与多发性骨髓瘤相关也属于MK2基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。

本发明还提供了一种多发性骨髓瘤的工具，所述产品包括芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。

其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测MK2基因转录水平的针对MK2基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的MK2蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括MK2基因在内的多个基因(例如，与多发性骨髓瘤相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括MK2蛋白在内的多个蛋白质(例如与多发性骨髓瘤相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与多发性骨髓瘤相关的标志物同时检测，可大大提高多发性骨髓瘤诊断的准确率。

其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测MK2基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括MK2蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测MK2基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对MK2基因的引物和/或探针。根据基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测MK2基因表达水平的引物和探针。

所述高通量测序平台包括检测MK2基因表达水平的试剂。

所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够检测MK2基因的转录水平。

与MK2基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其他衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4碱基对，以免影响杂交效率。

进一步，所述MK2蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述MK2蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如：嵌合抗体，scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等)。只要所述片段能够保留与MK2蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗体。

本发明的具体实施方案中，所述针对MK2基因的引物序列如下：正向引物序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物序列如SEQ ID NO.4所示。

用于诊断多发性骨髓瘤的MK2基因及其表达产物的来源包括但不限于骨髓、血液、组织液、尿液、唾液等可以获得基因组DNA的体液。在本发明的具体实施方案中，用于诊断多发性骨髓瘤的MK2基因及其表达产物的来源是骨髓。

本发明的上下文中，“MK2基因”包括MK2基因以及MK2基因的任何功能等同物的多核苷酸。MK2基因包括与目前国际公共核酸序列GeneBank中MK2基因(NC_000001.11)DNA序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；

优选地，MK2基因的编码序列包括以下任意一种：

(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA序列；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码相同蛋白质的DNA序列；

(3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有70％、优选地，90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。

在本发明的具体实施方案中，所述MK2基因的编码序列是SEQ ID NO.1所示的DNA序列。

在本发明的上下文中，MK2基因表达产物包括MK2蛋白以及MK2蛋白的部分肽。所述MK2蛋白的部分肽含有与多发性骨髓瘤相关的功能域。

“MK2蛋白”包括MK2蛋白以及MK2蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括MK2蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨条件下能与MK2的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。

优选地，MK2蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：

(1)由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(2)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列衍生物的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个，较佳地1-20个，最佳地1-10个。

(3)与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列至少具有80％同源性(又称为序列统一性)，更优选地，与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列至少约90％至95％的同源性，常为96％、97％、98％、99％同源性的氨基酸序列构成的多肽。

在本发明的具体实施方案中，所述MK2蛋白是具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的蛋白质。

通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。

通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是MK2蛋白的融合蛋白。对于与MK2蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制，只要所得的融合蛋白保留MK2蛋白的生物活性即可。

本发明的MK2蛋白也包括对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的非保守修饰，只要经过修饰的蛋白质仍然能够保留MK2蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中突变的氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更少，例如3个或者更少。

在本发明的上下文中，“多发性骨髓瘤”既包括判断受试者是否已经患有多发性骨髓瘤、也包括受试者是否存在患有多发性骨髓瘤的风险。

实施例1筛选多发性骨髓瘤患者和正常人中差异表达的基因

1、研究对象：

收集多发性骨髓瘤患者8例，正常人8例

多发性骨髓瘤患者的纳入标准：所有多发性骨髓瘤的诊断根据WHO诊断多发性骨髓瘤标准，所有初治多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞标本获得病人的知情同意。

多发性骨髓瘤患者的排除标准：转移癌，反应性浆细胞增多症和未定性的单克隆免疫球蛋白病。

2、骨髓中总RNA的提取

(1)骨髓单个核细胞的分离：向收集到的骨髓标本中加入3倍体积的红细胞裂解液，用滴管反复吹打混匀后于冰上放置10～15min，使骨髓标本中的红细胞充分裂解；1200rpm/min离心5min，弃上清，PBS洗涤细胞1次。弃上清，加入1mL PBS吹打混匀后转移至1.5mL EP管中，1200rpm/min离心5min，弃上清。每个样本加1mL Trizol，吹打混匀。

(2)每1mL Trizol加入氯仿200μL，充分混匀剧烈震荡15秒，室温静置10min等待分层。

(3)于4℃12000rpm/min离心15min。离心后可见管中混合物液面分为3层，最上层为无色水相，含有RNA；中间层为白色絮状，含有蛋白层与DNA；最下层为红色的酚-氯仿有机相。

取上层水相约400μL至另一EP管中，注意避免吸入中间的蛋白层，每管加入等体积异丙醇，轻轻上下颠倒混匀，室温静置10min，于4℃12000rpm/min离心10min，可见管底白色沉淀。

弃上清，加入-20℃预冷的75％DEPC酒精1mL，悬起沉淀，4℃7500rpm/min离心5min。

弃上清，室温放置10-20min风干沉淀，依据沉淀量的多少酌情加入DEPC水溶解沉淀。-80℃冰箱保存。

3、RNA样品的质量分析

紫外分光光度计检测RNA样品，OD260/OD280为1.8-2.0。

4、基因芯片杂交及扫描

采用Affymetrix U133Plus 2.0microarrays检测RNA水平。多发性骨髓瘤患者组的数据可在NIH基因表达综合(GEO)下GSE2658检索号查得，正常组和未定性的单克隆免疫球蛋白病的基因芯片数据在GSE5900下。

5、芯片数据处理与分析

基因芯片的数据分析基于GCO1.1软件(Affymetrix)，包含对与疾病相关相关的生存的单变量的对数等级检测。对于两组比值的自然对数绝对值大于2.0或小于0.5的基因作为差异表达基因。

6、统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，组间差异比较采用单因素方差分析法，P＜0.05有显著意义。

7、结果

结果显示(如图1所示，分析22例正常骨髓，44例意义未明的单克隆丙种球蛋白疾病(monoclonal gammopathy of undetermined significance，MGUS，MM前体疾病)，351例MM初诊病人浆细胞基因芯片数据库，发现MK2基因的表达水平在MM患者中要明显高于正常以及MGUS样本)，与正常人相比，多发性骨髓瘤患者MK2基因的MRNA水平显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

实施例2QPCR实验验证多发性骨髓瘤患者和正常人中差异表达的基因

1、研究对象

筛选标准同实施例1，多发性骨髓瘤患者46例，正常人66例。

2、骨髓中总RNA的提取

步骤同实施例1。

3、逆转录

根据TAKARA逆转录试剂盒进行RNA逆转录。采用10μL反应体系，分别加入5×PrimeScript RT Master Mix 2μL，总RNA 0.5μg，加一定量RNase Free Water至10μL。37℃反应15min，85℃反应5s。产物cDNA置-20℃冰箱保存。

4、QPCR

采用10μL反应体系，每个样本设置3个复孔，加样过程避光。配制以下反应体系：2×SYBGREEN Master Mix 5μL，正向引物0.5μL，反向引物(5pm)0.5μL，反向引物(5pm)0.5μL，模板cDNA 1μL，ddH₂O 3μL。扩增MK2基因的正向引物序列为5’-TGGGGCGTTAACTGCATCTGG-3’(SEQ ID NO.3)，反向引物序列为5’-TGGGCCTGCTGTTCACAGTT-3’(SEQ ID NO.4)；扩增GAPDH基因的正向引物序列为5’-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’(SEQ ID NO.5)，反向引物序列为5’-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3’(SEQ ID NO.6)，各项操作均于冰上进行。扩增程序为：95℃1min，95℃15s，60℃15s，72℃30s；共40个循环。以SYBR Green作为荧光标记物，在LightCycler荧光实时定量PCR仪上进行反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，△△CT法进行相对定量。

5、统计学方法

结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析，两者之间差异采用t检验，认为当P＜0.05时具有统计学意义。

6、结果

结果如图2所示，与正常人相比，多发性骨髓瘤患者的MK2基因的mRNA水平显著增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，结果同基因芯片实验。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 南京中医药大学

<120> 分子标志物MK2基因及其应用

<130>

<160> 6

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 49266

<212> DNA

<213> 人源

<400> 1

gggcgccggg ccggtgggag ccagcggcgc gcggtgggac ccacggagcc ccgcgacccg 60

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ccattctgcc tcagcctcct gagtagctgg gactacaggc gcccgtcacc atgcccggct 3780

aattttttgt atttttagta gagatggggt ttcactgtgt tattcaggat ggtcttgatc 3840

tcctgacctc gtgatctgcc tgcctcagcc tgcctaagtg ctgggattac aggtgtgagc 3900

taccgcgccc ggcctgtatt acttctttga taaggacacc tagtctcaac ccacttgtgt 3960

attaattagt tgtattcccc gggagggttc ctcagctgct tgccgcttca ctgtgtcatg 4020

gtgaccctta ggtgttagct caacaaattt aattaaagac tgtatcgttg ttctctgctg 4080

tgcaactctg attaggtgaa gcatgttact gctttataaa atatagaatg ttgtcgtaac 4140

ttatctctgt gtatctttcc attgcgtgga ttagagaaaa caaggtcctg tagtttcttt 4200

tcctttcctt tctccagcat tcctctctcc ctaggtcatg gaagtgccac tgcgatgtgg 4260

cttcctttgt tctggtgaag gggagatgat tggagcctct catgattatt ctggatgctg 4320

ttggagggaa atgccagagc tcccacatcc ccacagtaca ggcaccatct cctttccaac 4380

acacctcata ctgtgtacct gtggagggca agacagttag tgtggctagg tgagaggcag 4440

tgtcccaaac tggagtttgc tggagttgtc acaaggttag gaaaatttca ttgaccaagc 4500

cagcctcttt tatatgcaat atggttacag gtaggtaaca gtttgctgaa tatctatcat 4560

aagcttagtt gcatggagga tacacatgta aaaaatggcc tgtaaaattt tgagtcaaga 4620

aacttattta gagaaggtga aattaacaca tgtaggctag ggctgcactg tccaatctgg 4680

tagccactac cctcacatag ctaattaaat taaaattaat taacatgaat ggattaaact 4740

aaattaaatt tgaaaaatca gttgctagcc acacttcaag tgttcagtaa acatgtggct 4800

aatggctatc gaattgaaca atgcagaaga acattttcat ccttgcagaa cgttctccta 4860

gactttgttg gtctgggagc taaatcgtgt ggctgggaat agaggagctt tgaaagaggg 4920

gaatctgtgg tgactccagg agctaaggga ggctccagct ggggtcagtg ggacatggct 4980

gtgcctctga ggagtgagca agtctgtgag aggtgtggtg acattggcct ggctagaact 5040

gaggggagga acaggaggtc agagtggtca ggggttggtg gctccaaatt gaagctaact 5100

catcttgtgt caaagcaggc tttaaagtgt ttgaggggca tgaaggtgtc aaaaaaggtt 5160

aggaatcatt gaagatgggc ttacagaatt atgagggaag ggtcaggttt gtggtttcag 5220

agatcctgtc cctcctggcc gtagccctga ccccagccct gacccctggc tcctgcagca 5280

gggcccttgg catccactga ggcaagattg aagctgggtc agctcactgt ccttttttac 5340

ttgtgaattc tgggctttga ctgagcttgg agacaatctc cagctaagat acgggatcag 5400

tggctgacag gaggggagag acaagcagtc cctgggcctt agggccaaat attggtgggt 5460

gtctaggaaa caaaagaacc cctttgtggg aggaggaagg tattgggacc tgtgatgttt 5520

ctgctacttg ggacctgaga ggttgggcca tccataattg atgatttttc ttatgaagca 5580

ggtacagggg attgggagga gggcctggaa gagcccagcc tcagaactgc tggaggcaaa 5640

cttaatcctt gggctagggg aggggccaaa gctcctgtta gccagagccc aggagtgtgc 5700

tgagtgggtg ccaggaggaa tgtcagccaa gatggggaag agcagggcac agtcgtctgc 5760

atctgagcca ttgcccagtt cccaagcagc cttgccatgc tctgagctgg ggttcttcct 5820

ggtggcgtga tgtctgtggt gcaggattca ctctattctc ctacctttcc tctacttcag 5880

gccctgccaa gtgtcatgtg aggtctcttt tccccctctt ccctgcactg tatctttcca 5940

gatggttctg tgtcctggag ggaggtggat gggcagagaa gagttgttct ttgcagggac 6000

tgcagctttt cttggtaatg gtttgaggcc cagtggcaaa gcaacccaca cttcatagta 6060

acttagaacc cacactccct ggtcatcttt cttgactcct tgcacatcac tgaggaagaa 6120

gctggcctag tgcagaaatg ttcagtggca tgtccaaggt cttacatggt gtcagcatcc 6180

gagccacatc ttgagacctg gttccctggg acctgctctt ggtctgggcc cctttggttt 6240

ttggttgcta gaagactgta gacctggtgg agcaaaactg agctccacta acgcatcagc 6300

taggatcttt ccacatgggt taccttgtaa atgggggcat tggtgaagag aaggggccat 6360

gtcactggac agtgtaataa cgtatggcag ttatagaacc caaatcagat tgctgtgtac 6420

cttttctagt ttttaggaaa atactggtat tttgtatttt aagatatata tatatatata 6480

tatatacaca catacacaga tatagatatg tagagatgag cttgttacca tgggttatgt 6540

gctagataag aaagcaaaaa taagtgcata cataaataga aagcttccag tgtttgtatg 6600

ctgctaacaa gttacatgac cttgaatagg tcagctaaac tttccaggcc tcattgcaca 6660

gagggtcggc tcgagcagct cctgagcacc ggcagggtga ggcagtagaa ggcggtgctg 6720

caggccagag gtggagggca ggcaggatag cttgctgact tgctccgggt ctgaccatca 6780

gcagtatctg ggtcagcaca gatgcccttt cgtaagctta gtgcctggct ccagggcagc 6840

ctgtgtccag ttaatgaata atcatcactg accagctgct ccttctcttg tgtgaagact 6900

tagaaagtgt tctatgctgg tgactcggca gagaggatag actacgtaat ttagcagggt 6960

gtgcatcttc tctttcctta aaatcagaag aatcatagtg tagtggtggt gcaaagtaga 7020

gatgaggaac tctattccct gtttgagatt cctttctcaa gttatggggc atttgagggc 7080

cactgtgatt tctggtgcag gctgttccct gtgcacaggg atctggttga ggagctaagc 7140

gaaggctgaa gtccagccac tgtctccttg cttggctttg tctttgtgtg tggctgggtt 7200

ctttcaaagg agtgccttct aattcaccaa aggtatggtt atggattagg ggttgttctt 7260

aggttagagt tggggactga ttcacagagc tgatgaggaa attaggattt acattcaggt 7320

gaccctcagc ccctcagacc aggctgagta agaagagata tcaggaatcc aaggaagcag 7380

gaggaaaagg ggttgcctgg tgatgtctgt tctctttcct cctcttcctg cccatgcaag 7440

gctagagcag ctgtttcagc cccggaggtt tagactgtgg ggtcctgtgt gctgggccat 7500

caggtttggt gggaggagga agaaagccac agtagaagga gacataaagt tgggctgggc 7560

ctctggcagt gaaaggttct tggggtcttt attgtctgat cagtaaacac ctctgtgtgc 7620

cagaatgagc tgggacaagg ccccaaggtc agcccatatt tgtatctggt gttctcctcc 7680

aagaccagcc aagctgtgcg ctcattctgc tgggaacctg agccctccaa aagggtcata 7740

tgaaagggca tcttattctt gagggacgtt tccaagcatc tctgtggcca gtgtccatcc 7800

aggactcatc ttagaggtga agagtggtgg ccagaggcgg aagctagtgg ccacccgatg 7860

ggagcctttt ctgtttcaga gcatatgagg gagctgaggg agctgtactg ttgatgcctt 7920

ctctctggct catctccatg aagattcttt tgaaccagaa gcaaaggtga agtctctctg 7980

aggggagggg ctgaacagga gatctactga ctgtccccct gccgactcct ccactttcgt 8040

cctccggcgg ggctccttat cctcctgctt gtctacaggg agaagatcga gttgttcgtt 8100

tgctgccatt ttaatgatcc acattgttag gaggctctca gtacacaccg gaccttagca 8160

gcctggcctc ctgcccaggg cccagaactg ttactcagcc cctctgccga acagctaaaa 8220

ataaacctgc cactgctgca gtctcccctc acagccaggc cctgttagct gtcccagtgc 8280

ttcctgccac accgctgacc tgtttctctc actttctgct gatattctcc ctgcttgccc 8340

ctttctcttc cagcctgagc ttggtaggtg atttggggct aactcactct tctgagtgct 8400

gggagacgtg ctatggtttt tatgtctcca ggtgtctaga tttgtgtgta tgaaagctcc 8460

gtgaagctgt cctgcttatt tcccagtagg gaaagggtta gacaaaaagg agagtgacca 8520

agctcatcag agtggatcag accttctact gtgctcgcct ccagccctgg cttcctccag 8580

ttttacctcc aagcaggcct ctttgccaga gttacctggt tatggtaaca gagttaccat 8640

agttatatgc taggacagcc ccacatgggc agtctgcccc aggccttcaa cccgactgcc 8700

ctgtcaccga gcatgctacc taccgtgtac tcctgccctg ttgctacgtt atattctcca 8760

cctccgcagt gtgaggcttt gggctaccac attcaaaagt gtgacctcat cttgtcagcg 8820

tccaagaata actgggccct ggctctcagg atctccttcc tgagtcaggc catggcacct 8880

ctggcccttc cagctcagcc acatgcagaa tgtcaccgag tgcatgggtt tcttctacct 8940

cttgactgca gtattgatgt gtgtccatgg aggtgtggcc tcttcctcta ctccccaggg 9000

atcctggaga cttgtggagc aagatgagga aaggggctca ggtagctaga atatttgctt 9060

agctgataga tactgggcag agtctgacat tggcattctg ttcttcagcg tggcgttagt 9120

attctttctg attttttcta atccctagac aggtgttgat actaatcgtg gcctaggagg 9180

gctctatgtc tgctttcagg aattatggtt tatttggggg aaggggtgta tggtggagag 9240

tgatggcaat gacaaccaag acataggact tgaggaaccc actgccttca gctagagtta 9300

catactctga ccatgtgtcg atggcctcct tctcccacct ctcccctggg gccacatttc 9360

ctctgcaagg aaagatttat ctgccaaggc ccattggcct gtgcagagga agagttgggc 9420

atagttgcta agtgtttatt tttaactctg acagaaggag cccctgtcct cagaatagcc 9480

ataccctctg tctttcccta tcccgactgc cttccttggc ttctgtgatt cctagaagaa 9540

ggttagtagg attctaaagg ccaggcttca cgggagctgg agaaggctag cttctctaag 9600

tgaggaatct gcaggttgct cgtcatgctt ggcttctgca gagctcaaag ggtcctgcgg 9660

ggagagccct ggacactaaa ggccgtgtgt ctggaacttg gagaattcta ggaatgcagg 9720

tgacctgatg aggaggctgc atgtgccctg cagctcagag cagcctggct gcacagctga 9780

gttggacagc ccagcaaggg gtcatcccat accttctaca tccttacagg cacccagatc 9840

tctggcagat ggggaggcca cagggagaaa atgagcatat gtagtaacct gccctggaaa 9900

cacttgcgct tgcagacacg ccaagtgctg tcattccctc tgactgccag gctcacgagc 9960

atcatgtcct ttccagcaga gcccacctgc gactcttagt gacttcatac cctttgtgtt 10020

ctcttcccct gatgtgcttt agtgacctgt gctcacagag aggaggagga agggtggcag 10080

tgccccctct cctgggtctc agactttcct gactttatgc atttgatttg gctacctggg 10140

ctcggatact ttaaaagaaa ataaaattag gtttgaggtg taaccagaga gagaaggaat 10200

agagagtagt agggggtggg atgggtggtt gaaacatgtg gctaactctg agaaccctca 10260

gctatggaag gaaggtcttg cccccatgat tcttcggcgt gcagtggggg attagtttgc 10320

ccagagccca gctctgatca tgtagcttcc cagcttaagc ccttcagtgg gtctctctgc 10380

ctgcagaata catgagatat ccacatcttt cccagatctg gccctgatct gttttttttt 10440

ttttttttgg aacacatgct ttttttttct ccccagctta agtggcttat atatgttgtt 10500

tctttaacag aactgtgctt tccaccccca caccttagca tctatccatc tgcatcttct 10560

ctgtaccatg cctgtccccc gtcctgtcta tatctacctt ttccaccctg cacagatgct 10620

gcttttccag agcctttcgc accaaaagtg ggtcttccca tccttcccca tcaaacttgc 10680

tgatacactc ttacctttta tttctctgtt taagtgcatt tctccatgtg caaggcatct 10740

ctctctctct ctcttttttt ttttaacagg aaggtaattt attaacggaa aatatttgag 10800

gagtcctgtg cacagtgacc atggcaaccc cccttcctgc gggtgctgtc agaggggttg 10860

ggagtgacgt cctcaatctg tccgatcttc atacctgagc gggcaagggc cctgagggcc 10920

acctgggccc caggtccagg ggtcttggtt ctacttcctc ctatggctcg gagttcgatg 10980

tgtagggcag tgatacccag ctctgggcca catcccgggc agccaacata gcagcatgtg 11040

gtgaggattc atctcacctg ccttcacctt catcctacca gtcacacggc agatgatttc 11100

tttgccagaa agatcagtga catggacaaa agtgtcattg aaggatgcaa agatatggca 11160

gacaccaaat acattctctc cttcagccac ctgaggtctg aggctgatga cctgttcttc 11220

cttcttttcc ttcccctttc aaggtgccat ttctgcatgt tgtttccaga ctccgcacag 11280

gaacgcaagg cacctcttta gatatcggat tggactgtaa atcccctgaa aacctacatc 11340

ttcattattt ttgtgtcctc ttattttcat gtagtgaccg tatgtcctca ttaaaaaact 11400

caggccaggc atggtggctc acgcctgtaa tctcagtgct ttggaaggac aagtgggagg 11460

atcttttgaa ctcaggagtt tgatatcagc ctgggcaaca taacaagacc ccatctctac 11520

aaaaaattaa aaaggttagc cagctgtggt ggcacatacc catagtttca gctactcagg 11580

aggctgaggt gggaggatca cttgagccca ggaagtcacg gttacagtga gctatgatca 11640

tgtcagtgca ctccagcctg ggtgacagag cgagaccccg tctctgaaaa aagaatccta 11700

gagtattttg gcactgtgca ttatatgcat tatacttagc tgctgaataa aggtgtgata 11760

actgagtaat agtggatgcc accgatatta aatgtgatgt actagaggta atcctcagag 11820

tcagggactg tggcagccct gggagtggga tagtactggg ctgtgctctc tgagactgag 11880

ctggggtaga gtgatgatct ctcacattgt ctgttctcat tcttctgctg ctgaaaagct 11940

gctcttagtc ttctgagcat ttcttccctc tacccacttg gatctgctga ctcaagcagg 12000

caccttctat ttctgcttac agagttctca ttcttacaag gaccctgacc acagtttctc 12060

attgatgcct ctcctccttc tccctgttcc aaggcccctc ctattcctgt tcagtcatgg 12120

agatgaccct tttgcccttt ggagaacttt aactgaggga gggacagatg tggagcttgc 12180

caactttcct acagctcctg gcattttcta gttagctaca gacacggcac agacacacag 12240

atgcagtcca ttgttttcta tctgctggtc ctgctcctgt gtgttgcaag agggacgagt 12300

gttaaacact gtattagtcc attttgtgtt gcactaaagg agtatctgag actgggtaat 12360

ttatagagaa aagaggttta ttgctcacag ttctgcaggc tgtacaagga tcatggcacc 12420

agcatctgct tctggtgagg acctcaggaa gcttttgctc atgggggaag ttgaaggggg 12480

agcaggcatg tcacatgtcg agaagaggga gcatgggggt gggggaggcc ctcgactctt 12540

tttaacaacc agatcttcta tgaactcaga gcgagaactc actgccacaa ggagggcacc 12600

aagccattca tgagggatct gcccccaaga cccaaacatc tcccaccggg ccccacctcc 12660

aacactgggg atcatacttc aacatgagat ttggaggggc caaatatcca aactatatca 12720

agtacccagt tgctgggact gaggtcaaag gtttgaacct catggggctg cttaactcca 12780

tgccacaaca gatttacaca agaaagagaa cctgacacta gactggaatc tgggagacct 12840

ggctactaac tctacctgtg tggccccaag caagtcctag gacctgtctg ggcctcactc 12900

agtttcctca ttgtaaatca acaggactag acttgacctt gaaggactcc tgcaccgaaa 12960

gcctttcatc actgttgttg catccgcact gctgggaaaa taacctgatg ctgggaaaca 13020

agtggtcggc ctgggtccca gggagcctcg gggactaaga gccatcatct ctgtcctcag 13080

tttctgcagg acagtgttac ttcacctttt tcctggctgc agtgttttta ttcattcagc 13140

caatgtttat aaatgtttat tgttctccat gcctgcctcc tgtcttccct gctgactggc 13200

catcaggagg cccagatggc aggattagct tggaatggca gaacagtcaa gggtcatcct 13260

cttgggttta gaccccttta atacctctgc tatatgagat gagaagaatt tagaacattg 13320

atccttccag cagcttagac tagacccctg cctttctaag caggatttgc ctgtgggtac 13380

cttctatacc cttgagatcc aaagcaactt actactcaag aaaattaatt agcaatgcca 13440

agagtgactt gtacagctcc cctaaggata gctcaaaaca gcagatagac tttgatacaa 13500

tataacaaat ttctattatt cagatcactg taggaaactt agcaactctg tgaaggtttc 13560

ccagattaat aacaagtctt tattgagcag atactatgta tcaggcattg tgttaggtgt 13620

tttacttaca ttcttgttaa tccttaaaat aaccctttta ctgcaaagtg aaagtcccca 13680

ttttacagaa gaaacatgtt catgtacaga ataattcctt agcaattatt tattgagcac 13740

ctactaagtg ctaagcatta tcttgggctc tggatataca tcagtatata aaacagacaa 13800

aaaagctatt tggggggtgg gaagggggac caggtagagg aatagcaagt gcaaaggcaa 13860

aagcctgagg cttattaata agtgtgtcta actctaaaac ctaggctccc tccagctcac 13920

agtattgcct ctctaatggt cctttgtgac tccattataa ttgggtactt agatgaccta 13980

gcaattttaa gtttatccaa tatttatggg atacttattt tgtgcaaatt gctacgatga 14040

gatgaataag ttgtaggccc tgcctttgga aacatacagt ttagaggaac gaacacccgt 14100

gtgtataaaa atgaatgaaa gaggacttcc tctcaaaatc cagatcttac catttcttgc 14160

atttttgtca tttgaccctt gtaggccaga tggtgtggtt cctcgttttg tatctgaagg 14220

aagagtttca gggagtgggt gggggtaagt gtctgggcac cagggtggcc aataaaggat 14280

gcagagacac atgatgggct cttcaaggtg ggaggaagta gagggtggga tcactgcctg 14340

gcatgggcag aggatacttc atggacatat acctgtgaca cagccagggg agggtgcaga 14400

tgaaaatacg tccagtggga tggtttctaa ggagaagtgt gagggactcc actggggctc 14460

cgtattttgt ctggctgagg agggagagat gctgcctctc caggaatctg gtaataggca 14520

atgcttgaga ttggtgtgaa ccaacgcatc acatagagcc aggagaagtc acgaaggagg 14580

caagaaaaag aaatggctgg gctaaagctg tggcagagcc ctttttatcc tcctttgggc 14640

cctcatatgg cttctctttt ggtctgaaga atctcatcct tcttgagttt agccttctag 14700

gtgaaggagt gggcagactg catgcaggga gacagggagg ccgtgtttgt gtccttcagc 14760

tcaggagctg agagaacaga ggtcagggct tgggatggag ctgaccgtta gtgcagatgg 14820

gaaagtgaag caatgggtcg ggtctgtttg ttcctgagca tgtcctgtga caaaggaagt 14880

tgcaacatgt ctgtctgtct ttctctctct ttttcttttc tcctttcttt tcgtttcttt 14940

ctctctctct ctcttctttt tttctctttc tttcttcttc ttactttttt tttttttttt 15000

tttaaataaa gaaagaagca ggtaaaacca tcttccagaa aatgccagaa agaatatctg 15060

gtctgtgatg ggtggttctt gcccctcccg ctgcaatgct tttcctgtgt agtttttctt 15120

ttgtccttcc tttcccatcc acactttcca ctctcctttc ctctgagagg ttgtgtctct 15180

gcagcaggcc agctatgtct ccaaagggaa gtagtcagtg cttggactga gggaaccttg 15240

agagagaatc ctctcctttg tcctccaggt gagagagctg ttgcatccac tcacacctgg 15300

aaggttgctg gtctcctctc gctggacact gagagctgtt taaatttgac aggtggttcc 15360

tgattcccac ctggcatttt ttgctgctgc acaggtctgt gttgtgtctt agaaggctga 15420

gggaatactt acttctcaac tcagataacc accttgttgg taggttcagt gtgtgtctgt 15480

gtcaaggcag atgctgggaa aaaagggccc agaatgtgag tgggaggtag aaatcaaggc 15540

tagaagacca cacatgttaa tctggagtac ttggtcaggt ttgattttgg cctgtgtgct 15600

atagctgggc aagaagccag ttgtgtttgg aaatgtacag atgatctatt ttcctgatga 15660

aaccttttga ggtctggaat aaacatagct tgctttctct ctttccctct tttgagattc 15720

aatttctctc ccttggactt ctatacccta gtagagccaa aagttccagt acaaaccagt 15780

tttgagactc cagcattagt caactaaggg atgttgtagg tcatccctga gaacgagggc 15840

tgcttgctct ggggaagctg ggaaatggca ccaggtgtca ggccctactg cccaggatgg 15900

gatgacagct gctggtgtta attacgtttc tgggcagaac agggtaaagt ccttgggggt 15960

gagagttttt gtttaggcac tgtgttccct gtacctgttg cctctggtac agctgctgca 16020

gagcccctcc ttgcctgcag tcttctttga atttaatctc cctgtgatcc agtgcatctc 16080

ttcagactgg aggtgagccc agaggagtgg tggagggagt ggggccagaa tttacttgtt 16140

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tggtacccac tggccatatg tgactattaa aattgaaatt aagtgttaat aacatttaaa 16260

attcagttcc tcagtagtgc cagccacatt ttaagtgctc agtggttagc tagtggccac 16320

ggttttatgt ggcacagata gagaacattt tatcatcaca gaatagtctc ttagacaatg 16380

caagattctg agataatttt tctaatcctg gtagacactt agctggaagg ggatttgagg 16440

aagggtacag ggagaggttt tgaagcccag gtgagagggc aagtagaagg tattcattta 16500

gaaaaggatc ttaaaaagta tttagtttgt agggccaggt gcagtggctc atacctataa 16560

tcccagcagt tcatgaggct gaggcaggca aattgcttga gcccaggagt tcgagaccag 16620

cctgagcaac atggggaaac actgtctcta caaaaaatac aaaaattagc ctggcgtggt 16680

ggcgtacaca catggttcga tctactcagg aggctgaggt gggaggatca cttgagcctg 16740

ggaggccaag gctgcagaga gccgttattg cactgcactc caacctgggc aacagaatga 16800

gaccctgtct ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaagag gagttcacct tgttgaggac 16860

tacatcctaa gagatggtca cctggcccag tggctcccaa accaggatga ttgttagact 16920

cacttgtggg tagcatttca agatacagat tcctgggcac cactctttgt gtctagttga 16980

atccaagact cttcagagga ggtaacctgg aatgtgcatt tttaatgtgc tccccaagtg 17040

ataattatct gggtttggca accaccaacc tatcatacct gtgcttaaat tcttccaatg 17100

gtaaggagct tatccctttt caagaaaacc ttaccattaa ggaaaaattc gctgttgtta 17160

aagttctatg tttttcgaat cttgagattt ggttctttga ggtcatgaaa tcctttggtg 17220

ctcattgcat ctttagagcc tcgcagaacc gtcatcttca tccttgcact cagtcttcag 17280

cagatatttg agggcagctg tggtgtggtc cctgccactc caagtcatgg catgcgtcag 17340

agtgcttgat ctgccaaggg ctctagggag atgcagagat gcaacatcat tccaggatcc 17400

ttccaattgt caggccttgc tgagagccag aggaaaggtc tgaatctcag tggagcccta 17460

cagggacagc ccaagggcca tccagccggt gagggccatg tgtgtgtctg cctctctgca 17520

tcctgctccg tagggaagag tccctgcttc tttgcatgtt agcacttgtt aacaccgacc 17580

tggttttctt cagagacatt gagagattca gccatccatt cccggtaatg acagatgtca 17640

tttctgttta gagaccttca gtagcctccc ttcacttcca gtgtaaaatt caaactcctg 17700

aacgtggcat tcaagcaagc tggtttgtcc tgccttccac actttgcctt ccaggagagc 17760

actccttccc gctctgcctt gcatttatct gcttccacat cttctcttgg atcttacatt 17820

tgcttatctt cagttttttc tggtagaact gtatttatcc ttcaaggctc ataatagatt 17880

ttaccccctt actcccctgc ccaattccag gcagaactgc ctccctcctc tgccctagtg 17940

agggttcatt ctgcctgcat gactgctatg cactcaaatt acagccccct gccaggccct 18000

ccctgctaga ccaagctcct tgcggacaag aactatgtct tacttggctt gatatcccca 18060

agtgcaagca agcaccagtg ctggagcctc cttttcctgc attggcattc ttaccctcag 18120

tggcccagag ctcatcagct ccaatgagaa aagtgctact tagcagctga taattaacag 18180

acaggacgtg aggtttggct acttcagagg caaaactggt atttaaacaa taaggttttt 18240

aaaaatcaag cattaaagtg tcagcttcag aagcagctac ttccaaacat aatcctgccc 18300

agttagagaa gacaaatgga ataatgagtg gaaccaaaga tttctctcta gccttgagaa 18360

gagttcaggg gaaagaggcc tgggtggcgt attggcagga gattggaaaa ggggccttca 18420

tatttctttt ctctggaatg gggctggggc tgcttggaga gcaggtggga ggtgcttcct 18480

tagaaagggc tgtctgtgtt ctcttccatt cccaatttct atagattgga ctagttttgc 18540

caagtgagca agcaagaaaa attgggaaac agagggtagg catcaaccct ggcatttatc 18600

ctaaggtgat gcagcacaca cttgtattca gcgatagaga cttttccgta atgcctggta 18660

atatctcatt gtattttctt ttgatgctcc tgggggcagg aggggagagc tgacatcaga 18720

gcctcctccc ttctagatca caaccagagc atgaggaatt ccccagcccc ttgaggtacc 18780

cagacactaa ccacaatctc catctctgct gaaggcgttg taagaaacat gcaggccagg 18840

aacagtcagt ggcttcagag caggggcagc ctgctaaaga ggcagaggct tcttgtgagg 18900

gcggggagct tgagagtgcc ctgcacccca tcctggggga ggtgagcatc tgcttctggg 18960

ttcagctgcc tgcggaagtc agtgggagac accctttcag ggtctgcttc attatgaatg 19020

aagcaaaaag cctatcccag gaaatcacag aggctgatgg gtatacccca gggtacacag 19080

gctatatttt tccaatccaa agtgagggtc tatctgatag tttttcctgg agttggggag 19140

gggtcctact ttcagatcca aaagaaaatc tgagatatgt catttgaata tgaacgcact 19200

agactttctg ggaaatgttg aagatttacg cctgtctgag tgtctctcac tcgttgttac 19260

ctgtccattt gttacctggc ccacggatgg aggaggtcgg atggggtctc ccagggtccc 19320

cttgctgggc acgcttggca ggcatcctgc ttttcctttc aggttgctgg aattagtggt 19380

ggtggtggct cagctcaccc agaccatgtg tgatggttat ggtggtgact tctcactgac 19440

tgctgatgtg tacagtacat tgaaagcagt cacccaactt cctttatagc cggatacaaa 19500

acagtgcctg aggtccaggg tcggggagga cttgatgagg gaataaaacc agccggctca 19560

tctaggggct gatatctgtc cgtggtgaca taagcacaca tgatctgcag tcaaggttga 19620

cttgagggtg tgcatgggtt cagtcccttt tatgaagtct aatggtcctt ccagaagctt 19680

catcatcatt tgaactgaat aagtgaagat gagtgcacca caagtgtgtg tgtgcacttc 19740

ttaatctgtc cattcatctg ttcactgcag gcttattgag ggagaaacat gtaagcaagg 19800

tatttcttgt gtactccaag tggtaggaga gctatgttca gggaactggg tgaacttgga 19860

agaaggagcc gcccgtttct ccaagtgcag cgccagtccc gagacactct gtgatcatct 19920

aaactgggga acagtctgca atgcacatta ctgaattaaa agctctgaga agttctacag 19980

tgaaagaatc tgtttaactt tgtttaacct ggtgcttctg ccatctatat gacccctttt 20040

tacttagcac ttattaacat cctacggaat actatttgag aaatggcaac agcccccctt 20100

ctctgggaga actgttcagt gattcagagc aaaagtcacc tgactctggg tcagcacaag 20160

ttggagaggt ttgaaaaagg tgtatgtatg tttgcatgtg tatgtacggt gggttggggg 20220

gaggggtgtg gcagaggagg ggccccggca ggtggcttct attgaaatca gctctgtctg 20280

cctccctgtt ggctttgtgc ttctggagaa gcttttgtcc tggcatgaaa acactgaata 20340

gcagctgcat ctgtcatgcc tgggaagcag caatgtgcag catggggttg catgagtaga 20400

cactcctgct ggagggccag gctgccgaga gtgcctgggt attggacaag ggagaggctg 20460

gtgattctga ggcagctgct tgctaatcct ggaagcagag gggaacaaga tttagctccc 20520

ttatctctct gccttctcct ttccgatggg tgcaattgtg ttgactcttg agggacagcc 20580

aggaagaagc aggtgggctg gatgctttct cctttctcca ccaacccaag ggcatctgga 20640

gggtggacca gggcagaaag gcgattagct ctccgttacc cagggagctg agacaaaggc 20700

attttgggtt aaattcaagg aggaattcag aattgtgaac tggatttatg gaagtttgtg 20760

gagtttgaaa attcgagagt cctggctgga cttgtgcttg gaacgttggt cggaggtgga 20820

tatgaatgat gggtcctgca gatggccgac tcctgagaaa tgactgggag gctttactgg 20880

atttttcgct tggaacaaac ccaggcttag ggaattcccg gagcctgttg caggcctcaa 20940

cacccttctg gtgcagcttc gctgtgaggc agtggttatt tctcaggaaa ctggcaactg 21000

ggagtaaatg ggagtgtggg gtgggaatca gctactcttc ctgaggatta tacacttcca 21060

gtgtaattaa ggcggggtca ggatttccta tctcttattt atttatttat ttatttattt 21120

atttatttat ttatttattt gcttaatctt aaaaggctgc ttttcccctc ctggtcttcc 21180

cacagggaca ggagttagtc tgttcccaga aggagctagg ggaggtgtcc ttcatctccc 21240

attccttctt gccctctccc tgcctttccc tggccacagc cacagagacc cagagtcact 21300

cagatggggg aggagcaaag ccagtccctc tgatcattgc ctctttgtta gtggagaaag 21360

ggcagatgct gctctgcagt tatcccgacc accctgcagg acgtctgggt gggccgggct 21420

ttggtttggg aatcgggagt attagctgca gctgccaact gggcttgtac ttgcagactc 21480

ccaggctcca ggctctctgg aggggaccag cagctctgac ccccgtgggc ttgctgtggt 21540

ccccagggag caagcccttg ccaagaacct ctgagctcac cgaggcgggt atggggtaag 21600

gatggagaag gcctggggag cagaagtgtg cagatgactc cctccttccc ctcagctggg 21660

tatgcatcac cgctgctggg aagacgttca ggccacttct agacaaatcg gtcatgatgg 21720

aaattttttc ttgcccgtgg gtggggcttt acttgttcag aagtggcttc agatgtgctc 21780

tttctaggtc ctggcttgag tgctgagcat ttacctgcag cccctcgggg ctagaaggca 21840

gggcagtgtc tgagcccctt ccctacccct tggggctaga aggcagggca gtgtctgagc 21900

cccttcccta cccctcattc attctctccc ctcacctgtc attccatccg tcagccccga 21960

acagcttggc agccttgcgg ctccagctgg agcttagtag gcatgtagtt ggaggaggga 22020

acggcactgc agccgcgctc ttctctctcc cacaggtctt cttcttgttg ggcctccact 22080

tcctgtcagg gccctgcttg cagctgtggc acatctggac ctagacgggg tatcctgttg 22140

tcctgcatga tgaggatccc agatttcccc taggtgatga ccacagtcat tccagggtgg 22200

gagcaggact tcccccaccc ccaggcactc cagagacttc ctccaggccc ccactaagta 22260

gtctgttccc aactccatct ctcccccatg gagaatggtg ggaaggaagt tctgccagag 22320

gttgtttttg gtttgtgagg taatagactt tggtttgaga aacatacatc tctccctctt 22380

ctttaagatg tgaagccaga agcaccagac tctggtttcc ttggaaacca gagcagcaaa 22440

ggtagagaaa aaaggggctg gttgtaggca ctgaaattgg ggaggattct ctggatccca 22500

gcacttttct ggggaatcca catggtctgc cctgggccct gggttgtagc cctcactgtg 22560

ttaatggact gtgtaacctt ggtaaaatgc ctgcaactct ctgcacctta gtttccgcca 22620

agatgcctaa ggtggggaac atgttggctc cactcagatt ctgtgcccca gagacctgct 22680

gggtgtgtgt gggggtttgg gggtagggca tggggctcct gctcactgat ttagcatttg 22740

ctgtggctaa actacaaagt ggacagtcca catggagaca gttgagagct acttgcaccc 22800

aggtcctttc tttgagaata cagtgatgta acaggagact tcttgcattt tgcctatgtg 22860

aaaccagctg gattttgctg aagctgtaat tgtgtctcta cattctttga ttcctgtcta 22920

aaaaaaatgg tttccacaaa tgctgtgaag aatagactga cagagctgga aagcgttaag 22980

tagggatcct ttaaacagat ccctacattg tacattgatc ccttcaacca cagccagaga 23040

ggggcaggga cttacttgct ctgatcacac agtcagaaca agaactaaca acagtaaagg 23100

tctgggtagc agcctcacat atgctaagat tccctgttgg ctaagtttgt ctgttcccag 23160

gtcaccctgg ccttttgcaa ttctgccctc cgcaggcccc tgtgttggct gaaaccagcc 23220

ctcttcttcc ccttgcgctt tcctcctgtg acctcccagc cacctcttgt ttcccctgtg 23280

gtgttcccca cctgttgtta cttcctattc ctcctcacaa ctttttatta tgaaacattt 23340

cagatgtgca gcaaactgga aagaattgta cagtgaacat gattatacca aaccacctag 23400

attcaaccat tagcctttta ctatgtttac tttatcatgt ctctacgtgt ttcaatctct 23460

ctatccattg accagtccat cttattttgg ggatgcattt tgtagtaaat tgcagacatc 23520

aatgtacttt acccctaaac atctcagcat acataggcat taatttgagt tcaatatttg 23580

ttcatgcatt tttttgatga taatatttat attaacagtg aaaaatgcac aactcttaag 23640

gtatcacctg ataagctttg ataaatgcct ctatctgtgc aacccaaacc tctgtcaact 23700

atagaacaaa aagttttatt acctaattaa ttccctcgtg ttgtttccca atcatcccaa 23760

cacatacccc ctcgcaagtg atcacagttc tgatgttttc tcactgtaga ttagttttgc 23820

tttttctgga acctcatata aatgggataa tcagtatgaa ctctcccttt tgtgtgaatt 23880

tcatctgcat ggtgacatgt atcagtagtt tgttatgctg agcagtattc cattgtatag 23940

atatgataaa atttgcttct ccattcccct gttgatggac atttgggctg tgtccagttt 24000

tgggctatga tgaataaagc tcctgttaac attcttgcac aaatcttgtt gtggatgtaa 24060

tgttttcatt tctcctgggt aaacaacgag gagtgtgatt gcagagttac aggaggctgt 24120

tacttattgt tcctatctga ctctctgccc tgccctctca ttgtactgtg cacccaatta 24180

ttttaggact gttatcacat ccagtccctc agttgctcct tcagggtttc tcttcttccg 24240

gcaattcacc ctagtttatt gaactgttgc tcttatgtta tgctcctcag atcttttata 24300

tcctggttgt cctcctctgg aagtataata ctcttttaca gatgtgttgc ccagaactga 24360

gttctcgctg ctcgatgtga tctacatgtg gattctaggt atgggagaaa tatagagtgt 24420

gggtgcattt ggatccctgt cttgagctag gtacttgatc tgtgagctga aggaaatatt 24480

aactttttgg cagccacgtc atggcatcag atcagatgag ttaatgtttg taaaaatacc 24540

acaaatctaa ggtcatatta agatatccat tcagcttgaa gtcagtccga gcctctgata 24600

ctaatggcat ttattatgaa ctttctactt gccattgtgt catttagttt ttgcctacca 24660

cttggtgaga aaggtactat tcaaattagc ttaataaaaa ctccttgatt taaaactagg 24720

gtacttagct ttggcactgt tgaccttttg gaccagataa gcctttgttt gttgtggggg 24780

attgtcctgt gctttgtagg agttagcagc atccctggcc tctacccact tgatgccagt 24840

tgcaaccatc tatctaccca tgcccccaag ttatgacaac agaaaatgcc ttcagacatt 24900

gccaaacgtc ccctgggggg caaattaaca ccaggttgag aactattccc aaggtgtaga 24960

gcttagtcac cgagaaaaaa tttaaacaat atagctcttc ctgaaaggta atcactgcca 25020

gctctttagc atatatactt acagattatg ctctttctat ggacagtcct catttttcat 25080

ggttctaatc tgtgtgaatt tcagttacta tggtttggtt aaataacatc agtcctcgaa 25140

gaatttggct caaatttgag ttgccaggat atatgtatta caagtaactg catgcagtac 25200

aaactttgct gttagctctt cagtccacag atcactatgt acataacaga tgctcttcat 25260

ggtcactgac taatcatgtt tcttcttgaa gagtcttttg gtgattggtc actgcctatc 25320

tgttcacttc acacgcagac aggaaagtgt gtagttgtgt tgcctccctg tctcctagtg 25380

agaaactcgt gacattttac aaaaatggac aattgatgag ggaattggcc aagaaagatg 25440

aaatttcaaa tgaaatgtgg taatgctggt agtgaatttc aagccaaacg taatggaatt 25500

atatagacta gatagctgac tgtgggaatg tcaacactgt cactgttcaa gactacatat 25560

acagcctggg aaactcagtg aaggtggcat gtcagcataa atgaggaaag tggtttgatg 25620

aaaaggatga agaggtccca gaggaggtga cactgcagaa ggaaacttca cattaaaggc 25680

accttgaaga tatttcacaa catcgaaagt gcaaaggata aaacgttaga agcagatcca 25740

aacttagaaa ggagtatgac aatttgcaaa ggcatatgaa agatactcat tccatattgg 25800

atgttaaaca acaagaaggc aagtgctgtt caaattactc tggataaggt ttttacaaag 25860

caataaaaca ctcattctca gtgactctaa tgttttagag tatacacaat aaatagtttt 25920

actgttttct catttcctta tttataattt gacagcaaga gagtttttaa tgttttgacc 25980

gaaattttta aatgtcgtgg aaaaatcata attttcctca ttggtgatta gggttgcttt 26040

gcatggtcat ttttatggtt ccgcattact gtgcaaagca agagctgcct gtatttacaa 26100

aaagtgtggg tgaatacaca tgcacacatg cacacaccat gctttttctc tttttaaaac 26160

attttacaaa atgggatcag actatatgta tcaaattaca acttgctttt ttcatggaag 26220

ttttttttgt ttgtttgttt gtttgttttt gagacaccat ctctctgtcg cccaggctgg 26280

agcgcagtgg cgctatctca gcccactgca acctccacct ctcggagttc aagtgattct 26340

catgcctcag cctcccaagt agctggtacc acaggtgcgt accaccacac ccagctaatt 26400

tttgtgtttt taatagagat ggggtttcgc catgttggct aggctggtct cgaactcctg 26460

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cctcattctt tttttttttt ttttttttta tgtttttgag acaggtctca ctctgtcccc 26640

catgctggag ttcagtggtg tgatctctgc tcagtgaaac ccctgcctcc caggctcaag 26700

tgatcctcat gtctcagctt cccaagtagc taggactact ggcctgtgcc accacaccca 26760

gctagttttt tctgtatttt attcgtagag acagggtttt gccatgttgc ccaggttggt 26820

ctcaaactcc tgggctcaag tgatccatct gcctcggcct ctcaaagtgc tgggattaca 26880

ggtgtgcgtc actgtgcctg gccccgttgt ctattaacag ctgtttagtt tatttccttc 26940

tgtcccctaa tttgaaataa tgctaaagtg aatatttttg atggatacta tcataaactc 27000

catttaatcg atgagttcaa tggagattta gaatgtgaag taactggcta aggtcaggca 27060

gctactaagc tttagagctg gtgtttgaac ttggggcagt gtaatttcag agcccttgca 27120

atcacaatgc tttacacctt ctcttccttg ttcttagaag cagcttttaa caacgacaac 27180

aaataataaa aaaaagatct tactgagtca ggtacaattc taagtgcaat tatattgtta 27240

ttattcacta aataacaacc tgcgagttag ataatgttgt tatccctgta ttacagtgaa 27300

ggaaaccgga ggtataagaa ggttaggaaa ggtgctcagg gcccacagca gtttaatgga 27360

ggagctggga ctgcccccat gcagcctggc ttcagaacct tggctctcat tcatgttata 27420

aagatgtgac tagagaaaag tctctttcat cctgtgctgt tgaagatggg tttttttgtt 27480

gttgttgttg ttagttttgg cgtatatttt ctcctactgt aatcttttaa aaatctacta 27540

cctagcacag actgcctctc ccattgtttt cttagggggt gtcacttgga agtttgataa 27600

gcttactgcc tactatgtct ttagtcagct tgttggtaaa atattaatac taggcaaagc 27660

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tgaatgactt gaggtcagga gtttgagacc agcctggcca atgtggtgaa accccatctg 27780

tactaaaaat ataaaaattt gctgagtgtg gtggtgggcg cctgtagtcc cagctactca 27840

ggaggctgag gcacgagaat ctcttggacc cgggaggtgg agatttcagt gagctgagat 27900

cgtgccactg cattccagcc tgggcgacag aatgagactc catcacacac acacacacac 27960

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tagtcaacaa gtagatactt attgaacacc tcctaaatgc catgtaccgg gtctaggatt 28080

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tctgtgggca cagagaggca gaggggctga ctctgcctgg aagtggtcag agaggcttca 28260

cagaggaggt gacattgcca tggttcttac agacgtgaag tcatgacaag gcctggcttg 28320

cctgaggtca ggaagtgcat tgtagcttca atatagggga tgtgttggga ggttagggta 28380

gcgatgatgt ggataggagc tagggaagac taagttaggg aatttggatt ttatcatgtc 28440

agccagtgga gatgtttaag gaggaaaatg tcctgctcag ctttgccttt cagcatgtga 28500

cccaagatgt actgggatgg agtacgtctc ccttctagaa accagttaga aaacacagaa 28560

gagtaggcca ggcatggtgg ctcatgcctg taatcctagt actttcggag gccgaggtgg 28620

acagatcact tgaggtcagg agattgagac cagcctggcc aacatgtgaa accccgtttc 28680

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ggtgcttgag gtgggagaat tgcttgaacc caagaggcgg agtttgcagt gagctgaaat 28800

catgccactg cactccagcc tgggggacag aatgagaccc tgtctcaaaa agagaaagca 28860

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gtctgaggat gagtactcaa gatttatatc tgggagcctg gctagatagt gatgtcattg 29040

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cagcagcctg tcctagatcc accaaacagc actttattac tggccattta taacaactgc 29160

aaatattatc taaatgcttt gtcatctcac tgcctcctcc tttgtcatcc ctaaggtctg 29220

ggcaggagac tgtgttcata tacttcatag aggtccagac cccttgcgtc tggcattcct 29280

ttggtctata attcagtaaa ctctgctaaa aaggaaacga gactagcttg ctgtggcctc 29340

ttaagcgacc cagggtagct tgtgatggtt cagattatga tttgttctag agcttttcca 29400

gaggcagatg ttgaggagtt tatcctattt gtccccttcc ctttaaacaa acaaaagtgc 29460

cggctggacg cagtggctca tgctggtaat cccagcattt tgagaggctg aggcaggcgg 29520

atcacctgag gtcaggagtt cgaaactaag cctggccagc atggtgaaac cctgtctcta 29580

cttaaaaaaa aaaaaattag ttgggtgtgg tggtgggagc ctataatccc agccactcgg 29640

gaggctgagg tgggagaatt gcttgaatct gggaggtgga ggttgcagtg agctgagatc 29700

acaccattgc actccagcct gggtagcaga gtgaaactcg gtcacaaaaa aaaaaaaaaa 29760

aagaagtccc aaccccccag ttttttatat cctcttagtc atcatagttt attaacagtt 29820

ttgtttacat attgcttctt tttccctctt ggctagactg tgaaccttga agccctgtga 29880

gcttggtcta gtgcctggag cattgtgggt accaggtttc gagagaatgt gtgctgccag 29940

aaagcagatc tttgccacct cctctcccct cagctcctga accactgcca gcagtggttc 30000

tggaatcaac ctgtactttc cttctgcatc ctgggatgta attctgggtg attgtaagtt 30060

ggtttatggt ctagcttaga attgaggctt ctcttgagag agagcatgtg tgtaaatgtt 30120

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gaaaattctc cattctctgt cattttgtgt gttagagtct ctgtccccat cccagggcca 30240

cttcctccct ggttcttctt atggctttgg atgtagcttg aagacatgct cctagcattt 30300

tcacaagctc tgcttgttgt gtttagtgag cgcagactac tcccttcggg cctgtcctgg 30360

ctcatgggca gttgctcgtg tctttgcaca catcctttac tgtctcagct cttcacttct 30420

ccctgacatt tgtggctgcc tcctcctggt ttcttcttta agcgattatt gtgttttaga 30480

tgatcagaat tcacttttta gagacttgga ccttgtcttt caaaatgcat tcccttttgg 30540

gatctctgcc catcatactc cttggtctca acatctaaat attggttttt tttttctttt 30600

tctttctttc tttttttttt tttttgagat agggtctcac tctgttgccc aggctgaagt 30660

gcagtggtac gatcattggc tcactgcagc cttgacctcc tgggctcagt gatcttcctg 30720

cctcagcctc ctgagtagct ggggccacag gctagtgcca ccatgccctg ctaatttttt 30780

aaattattca tagagacggg gtctccctgt gttgcccagg ctggtcttga actcctcctt 30840

ctcctttttg tatcctctta gtcatcaagc catcctcctg cctcagcctc ccaaagtgct 30900

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aaacaactgt ttttgtctca gttttttttt ttttaatttc cctcctttga actctgaatt 31020

gacaagctta cttcctccca atgtggtgtt cttgttatta ttgtttttgc tagctgaagt 31080

attttttttt tttttaaaca taatttacta ggtttttctt cctggccaga agtaagttca 31140

gggtaatagt tcccttcctt gtatcttcag ctgtgtgaga ggtaatgtag agtgagaatt 31200

tatttatcag gtgccctgct cgtagcagaa ggcatgacct cgacttctct ctcacagtga 31260

ccttgtgttt gtgttggtgg cttgaactca ctcttgtgtc tgggccattt ctctcactgt 31320

gtaggaaaga gtggttcctg tcttctccct ggccatgtag tctgctgtgt gtcaccataa 31380

caatcatcta tcttccggtt ctttttcctt ctctcctcac ccagttgtct ccagtcttag 31440

gcgtgtggaa ttgtgtactg ggtgggggat gtgtgtgtgt gggccgccct cttgatttgt 31500

aggatccttc tcttcctcca cattctctgt caactctcct ccaccccctg tgagatctgt 31560

ggactcaggt atacgttgct gtgagtctca ttctgctcag ctggggtgat gaaggtgaga 31620

ttgcttttgt cgcttcaaag taaaatttta gatttgcttt ggcagccgca cagggtcgta 31680

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tcttgctagt ttgtccatct ctgtggattt tttaaagtag atactagata cctagatact 31800

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ctgtgcccca actgctgcca cctcatgata ggctgaaagg ttgggatggg gagcatcttt 45600

cacagagaaa ctgagtggat cacagggttc tgagggccgg cccacccatg ttgacctttg 45660

atttgcagct ccagaagtgc tgggtccaga gaagtatgac aagtcctgtg acatgtggtc 45720

cctgggtgtc atcatgtaca tcctgtgagt gtgctgggga gggggctggg tggggcaggg 45780

agtcagggcg gcctgtactt ctccaggaca agaggaagag gcagacgtta gcattcccct 45840

ttgtacaggg gagtcccctg cgtgcccctt ctctcagttc cgatagctaa gtggcgggtg 45900

taaaccagct catgggctgg aaagtgtgcg ccttagatac ttgctatgct ggattcccgg 45960

gccccgggct tgactttgta tattgtgcct gtgtcaataa gccctgattt ctctgtgacc 46020

tttacaagga gaagagcctg tttctcatcc tgttcctggt acagggccac taagtgacag 46080

ctgttctgtc tcccacttcc ttcctcctgt tgatgcaggc tgtgtgggta tccccccttc 46140

tactccaacc acggccttgc catctctccg ggcatgaaga ctcgcatccg aatgggccag 46200

tatgaatttc ccaacccaga atggtcagaa gtatcagagg aaggtaagaa cccaggcttt 46260

caggacaagg ggaagagccc gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt atgtgtgtac acgcagacac 46320

atgtatgggc ctccatctca tgtgcgtggt gtaactgtgg gttagcacct atgcccacgc 46380

ctgcggggtg cgtcctgctt cattttgcct gtgtggaggg ctggaggcag ggccaaggct 46440

gtggggctgt gcagggcctc tcaagtggta cagccgtaat ggtccttggg gccagttgct 46500

ccggcagcct gcctccatgc accccctctt tgaacctggt ttccccatga aaactgggga 46560

aaggagcagg ccagggagag tgacccctga gctgtcactg ccccctgtcc caccccacag 46620

tgaagatgct cattcggaat ctgctgaaaa cagagcccac ccagagaatg accatcaccg 46680

agtttatgaa ccacccttgg atcatggtaa gctcggcagg ctggggagcc ttgggtctca 46740

cgggactatt ccacaggaca gagtcttagc caggacccta ccccaggctt tcactcggac 46800

cccttttctc tcttctcagc aatcaacaaa ggtccctcaa accccactgc acaccagccg 46860

ggtcctgaag gaggacaagg agcggtggga ggatgtcaag gtgaggggca ccactgggtg 46920

agaggggctc caggtggggt gggcggcttg cggggagtgc ccaggtgtga ggcgtggtgc 46980

tggtagggga gagcttgatt ctgcctctct catcccaggg gtgtcttcat gacaagaaca 47040

gcgaccaggc cacttggctg accaggttgt gagcagagga ttctgtgttc ctgtccaaac 47100

tcagtgctgt ttcttagaat ccttttattc cctgggtctc taatgggacc ttaaagacca 47160

tctggtatca tcttctcatt ttgcagaaga gaaactgagg cccagaggcg gagggcagtc 47220

tgctcaaggt cacgcagctg gtgactggtt ggggcagacc ggacccaggt ttcctgactc 47280

ctggcccaag tctcttcctc ctatcctgcg ggatcactgg ggggctctca gggaacagca 47340

gcagtgccat agccaggctc tctgctgccc agcgctgggg tgaggctgcc gttgtcagcg 47400

tggaccacta accagcccgt cttctctctc tgctcccacc cctgccgccc tcaccctgcc 47460

cttgttgtct ctgtctctca cgtctctctt ctgctgtctc tcctacctgt cttctggctc 47520

tctctgtacc cttcctggtg ctgccgtgcc cccaggagga gatgaccagt gccttggcca 47580

caatgcgcgt tgactacgag cagatcaaga taaaaaagat tgaagatgca tccaaccctc 47640

tgctgctgaa gaggcggaag aaagctcggg ccctggaggc tgcggctctg gcccactgag 47700

ccaccgcgcc ctcctgccca cgggaggaca agcaataact ctctacagga atatattttt 47760

taaacgaaga gacagaactg tccacatctg cctcctctcc tcctcagctg catggagcct 47820

ggaactgcat cagtgactga attctgcctt ggttctggcc accccagagt gggagaggct 47880

gggaggttgg gaggctgtgg agagaagtga gcaaggtgct cttgaacctg tgctcatttt 47940

gcaattttat cagtaatttg acttagagtt tttacgaaac ctcttttgtt gtccttgccc 48000

cactcctctc caccagacgc cttcctctct ggatactgca aaggcttgtg gtttgttaga 48060

gggtatttgt ggaaactgtc atagggattg tccctgtgtt gtcccatctg ccctccctgt 48120

ttctccacaa cagcctgggg ttgtccccgc tggctcacgc gttctgggag ctcaaggcca 48180

ccttggagga ggatgccacg cacttcctct ctcggagccc tcagacatct ccagtgtgcc 48240

agacaaatag gagtgagtgt atgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgcac acgtgtgtat 48300

gagtgcgcag atctgtgcct gggatcgtgc atttgagggg ccaggggcag gcagggctgc 48360

agagggagac ggccctgctg gggcttagga accttctccc ttcttgggtc tgccctgccc 48420

atactgagcc tgccaaagtg cctgggaagc ccacccagat tctgaaacag gccctctgtg 48480

gcctgtctct attagctggg ttccgggagg cagagaggag tgaccgggca ctggcactgc 48540

gatcaggaag actggacccc cagcccccag ggcccccctc cccccactta gtgctggtcc 48600

taggtcctct gaggcactca tctactgaat gacctctcta cttccccttc ttgccattat 48660

taacccattt ttgtttattt tccttaaatt tttagccatt tctccatggg ccaccgccca 48720

gctcatgtag gtgagcctgg gcagcttctg ttggcagagc ttttgcattt cctgtgtttg 48780

tcctgggttc tggggcatca gccagctacc ccttgtgggc aaaggcaggg ccacttttga 48840

agtcttccct cagatttcca ttgtgtggcc tggtgggtca gggggagtct ttgcaccaaa 48900

gatgtcctga ctttgccccc ttgcccatca gccatttgcc atcaccccaa acaactcagc 48960

ttcggggccg gtgaggggag gggcctcccc cagcacagat gaggagcagc tggggtaggc 49020

tgtctgtgcc atggcccccc actccccctt cccttggagg gagaggtggc aggaatactt 49080

cacctttcct ctccctcagg ggcaggtggt ggaggggcgc ccagggtcgt ctttgtgtat 49140

gggggaaggc gctgggtgcc tgcagcgcct cccttgtctc agatggtgtg tccagcactc 49200

gattgttgta aactgttgtt ttgtatgagc gaaattgtct ttactaaaca gatttaatag 49260

ttgaga 49266

<210> 2

<211> 400

<212> PRT

<213> 人源

<400> 2

Met Leu Ser Asn Ser Gln Gly Gln Ser Pro Pro Val Pro Phe Pro Ala

1 5 10 15

Pro Ala Pro Pro Pro Gln Pro Pro Thr Pro Ala Leu Pro His Pro Pro

20 25 30

Ala Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gln Gln Phe Pro Gln Phe His Val

35 40 45

Lys Ser Gly Leu Gln Ile Lys Lys Asn Ala Ile Ile Asp Asp Tyr Lys

50 55 60

Val Thr Ser Gln Val Leu Gly Leu Gly Ile Asn Gly Lys Val Leu Gln

65 70 75 80

Ile Phe Asn Lys Arg Thr Gln Glu Lys Phe Ala Leu Lys Met Leu Gln

85 90 95

Asp Cys Pro Lys Ala Arg Arg Glu Val Glu Leu His Trp Arg Ala Ser

100 105 110

Gln Cys Pro His Ile Val Arg Ile Val Asp Val Tyr Glu Asn Leu Tyr

115 120 125

Ala Gly Arg Lys Cys Leu Leu Ile Val Met Glu Cys Leu Asp Gly Gly

130 135 140

Glu Leu Phe Ser Arg Ile Gln Asp Arg Gly Asp Gln Ala Phe Thr Glu

145 150 155 160

Arg Glu Ala Ser Glu Ile Met Lys Ser Ile Gly Glu Ala Ile Gln Tyr

165 170 175

Leu His Ser Ile Asn Ile Ala His Arg Asp Val Lys Pro Glu Asn Leu

180 185 190

Leu Tyr Thr Ser Lys Arg Pro Asn Ala Ile Leu Lys Leu Thr Asp Phe

195 200 205

Gly Phe Ala Lys Glu Thr Thr Ser His Asn Ser Leu Thr Thr Pro Cys

210 215 220

Tyr Thr Pro Tyr Tyr Val Ala Pro Glu Val Leu Gly Pro Glu Lys Tyr

225 230 235 240

Asp Lys Ser Cys Asp Met Trp Ser Leu Gly Val Ile Met Tyr Ile Leu

245 250 255

Leu Cys Gly Tyr Pro Pro Phe Tyr Ser Asn His Gly Leu Ala Ile Ser

260 265 270

Pro Gly Met Lys Thr Arg Ile Arg Met Gly Gln Tyr Glu Phe Pro Asn

275 280 285

Pro Glu Trp Ser Glu Val Ser Glu Glu Val Lys Met Leu Ile Arg Asn

290 295 300

Leu Leu Lys Thr Glu Pro Thr Gln Arg Met Thr Ile Thr Glu Phe Met

305 310 315 320

Asn His Pro Trp Ile Met Gln Ser Thr Lys Val Pro Gln Thr Pro Leu

325 330 335

His Thr Ser Arg Val Leu Lys Glu Asp Lys Glu Arg Trp Glu Asp Val

340 345 350

Lys Glu Glu Met Thr Ser Ala Leu Ala Thr Met Arg Val Asp Tyr Glu

355 360 365

Gln Ile Lys Ile Lys Lys Ile Glu Asp Ala Ser Asn Pro Leu Leu Leu

370 375 380

Lys Arg Arg Lys Lys Ala Arg Ala Leu Glu Ala Ala Ala Leu Ala His

385 390 395 400

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tggggcgtta actgcatctg g 21

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

tgggcctgct gttcacagtt 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

gcaccgtcaa ggctgagaac 20

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

tggtgaagac gccagtgga 19

Claims (10)

1.分子标志物MK2基因，其特征在于序列如SEQ ID NO.1所示。

2.分子标志物MK2蛋白，其特征在于序列如SEQ ID NO.2所示。

3.分子标志物MK2基因在制备诊断多发性骨髓瘤的产品中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述产品包括：通过实时定量PCR、免疫组化、原位杂交、基因芯片或高通量测序平台检测MK2基因表达水平以诊断多发性骨髓瘤的产品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述用实时定量PCR诊断多发性骨髓瘤的产品至少包括一对特异扩增MK2基因的引物；所述用免疫组化诊断多发性骨髓瘤的产品包括：与MK2蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断多发性骨髓瘤的产品包括：与MK2基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断多发性骨髓瘤的产品包括：蛋白芯片和基因芯片，其中蛋白芯片包括与MK2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与MK2基因的核酸序列杂交的探针。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述用实时定量PCR诊断多发性骨髓瘤的产品至少包括一对特异扩增MK2基因的引物，序列如：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

7.一种用于诊断多发性骨髓瘤的工具，其特征在于所述工具能够检测样本中MK2基因的表达。

8.根据权利要求7所述的工具，其特征在于所述工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。

9.根据权利要求8所述的工具，其特征在于所述芯片包括基因芯片或蛋白质芯片，所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测MK2基因转录水平的针对MK2基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的MK2蛋白的特异性抗体；所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫组化试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测MK2基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫组化试剂盒包括MK2蛋白的特异性抗体；所述试纸包括用于检测MK2基因转录水平的试纸；所述高通量测序平台包括用于检测MK2基因转录水平的试剂。

10.根据权利要求9所述的工具，其特征在于所述检测MK2基因转录水平的试剂包括针对MK2基因的引物和/或探针。