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CN106978506A - 一种检测大肠杆菌的荧光定量pcr方法 - Google Patents

一种检测大肠杆菌的荧光定量pcr方法 Download PDF

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CN106978506A
CN106978506A CN201710313179.XA CN201710313179A CN106978506A CN 106978506 A CN106978506 A CN 106978506A CN 201710313179 A CN201710313179 A CN 201710313179A CN 106978506 A CN106978506 A CN 106978506A
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CN
China
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escherichia coli
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coli
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Application number
CN201710313179.XA
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English (en)
Inventor
李泽卿
骆杰
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Wuhan Genebook Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Wuhan Genebook Biotechnology Co Ltd
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Publication date
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification

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Abstract

本发明公开了一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针；S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA；S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，本发明具有的优点如下：1、能够准确高效地提取出高纯度的大肠杆菌DNA，有助于提高实验结果的准确性；2、通过利用双标准曲线法，构建标准曲线方程，从而计算出样品中大肠杆菌的数量；3、提供了灵活的、操作简便的且快速高效的检测体系，能够用于大肠杆菌的定性和定量检测。

Description

一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法
技术领域
本发明涉及常规分子学技术领域，尤其涉及一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法。
背景技术
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)通常被称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌；直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜(禽)，常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类：肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)和弥散粘附性大肠杆菌(DAEC)；大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌(G-)；其检测方法较多，但大多较为繁琐，且结果并不准确，本发明的目的是提供一种能够快速有效检测目标中大肠杆菌的方法。
发明内容
本发明提出了一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明提出了一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：
S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针如下：
引物A：5’-TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT-3’；
引物B：5’-AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT-3’；
引物C：5’-TGCTATTCTAACTGGGCTAATAAG-3’；
引物D：5’-AGCTATTCTATCTCTGCTAATAAC-3’；
探针P：5’-FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’；
S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA；
S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，其具体步骤如下：
A1、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，取4-6μgRNA提取物加入离心管，在60-65℃环境中保温5min，然后冰浴6-8min；
A2、在离心管中依次加入下列组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，10×M-MLVReactionBuffer2μL，DTT(200mM)1μL和逆转录酶(M-MLV)1μL；
A3、将离心管内部组份轻轻混匀后，进行离心操作；
A4、将离心得到的产物放入恒温箱，先在40℃保温1-2h，然后72℃保温20-30min，最后在-20℃环境中保存留用；
S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，检测结果保证1.7＜OD260/OD280＜1.9，以保证提取物为纯DNA，结果不满足则说明含有RNA和蛋白质杂质，需要重新提取；
S5、荧光定量PCR，取大肠杆菌DNA 2μL，10μmol/L的引物A和引物B各3μL，10μmol/L的探针P0.5μL，2×TaqMan Universal Master Mix 10μL，再加入ddH2O补充至25μL，混合均匀后转移到加热箱中进行加热，其加热保温过程为：先在55-60℃环境中保温1min，之后使用96-100℃加热5-6min，之后转到80-88℃加热5min，最后采用70℃保温1min，进行55-60个循环，在58℃进行单点荧光检测；
S6、采用双标准曲线法，对样品检测的CT值进行实验结果分析：
A、无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含大肠杆菌；
B、Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含大肠杆菌；
C、当Ct值＞35.0，则该样品做重复实验；重复实验结果无Ct值则该样品中不含大肠杆菌；若重复实验结果有Ct值，则该样品中含大肠杆菌。
优选的，所述S2中关联的具体步骤如下：
B1、选取处于生长旺盛时期的大肠杆菌样品；
B2、去掉培养基，加入1μL TRNzol在-70℃环境中保存4-8h；
B3、加入氯仿后2200-2400rpm离心40s，静置得到位于下层的有机层和位于上层的水样层；
B4、收集水样层加入异丙醇，沉淀得到RNA；
B5、收集有机层加入乙醇，沉淀后得到DNA。
优选的，所述S3中的离心操作为在-0.09MPa环境中采用2200-2400rpm离心40s。
本发明具有的优点如下：
1、能够准确高效地提取出高纯度的大肠杆菌DNA，有助于提高实验结果的准确性；
2、通过利用双标准曲线法，构建标准曲线方程，从而计算出样品中大肠杆菌的数量；
3、提供了灵活的、操作简便的且快速高效的检测体系，能够用于大肠杆菌的定性和定量检测。
具体实施方式
下面结合具体实施例来对本发明做进一步说明。
实施例1
一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：
S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针如下：
引物A：5’-TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT-3’；
引物B：5’-AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT-3’；
引物C：5’-TGCTATTCTAACTGGGCTAATAAG-3’；
引物D：5’-AGCTATTCTATCTCTGCTAATAAC-3’；
探针P：5’-FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’；
S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA，具体步骤如下：
B1、选取处于生长旺盛时期的大肠杆菌样品；
B2、去掉培养基，加入1μL TRNzol在-70℃环境中保存4h；
B3、加入氯仿后2200rpm离心40s，静置得到位于下层的有机层和位于上层的水样层；
B4、收集水样层加入异丙醇，沉淀得到RNA；
B5、收集有机层加入乙醇，沉淀后得到DNA；
S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，其具体步骤如下：
A1、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，取4μgRNA提取物加入离心管，在60℃环境中保温5min，然后冰浴6min；
A2、在离心管中依次加入下列组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，10×M-MLVReactionBuffer2μL，DTT(200mM)1μL和逆转录酶(M-MLV)1μL；
A3、将离心管内部组份轻轻混匀后，在-0.09MPa环境中采用2200离心40s；
A4、将离心得到的产物放入恒温箱，先在40℃保温1h，然后72℃保温20min，最后在-20℃环境中保存留用；
S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，检测结果保证1.7＜OD260/OD280＜1.9，以保证提取物为纯DNA，结果不满足则说明含有RNA和蛋白质杂质，需要重新提取；
S5、荧光定量PCR，取大肠杆菌DNA 2μL，10μmol/L的引物A和引物B各3μL，10μmol/L的探针P0.5μL，2×TaqMan Universal Master Mix 10μL，再加入ddH2O补充至25μL，混合均匀后转移到加热箱中进行加热，其加热保温过程为：先在55℃环境中保温1min，之后使用96℃加热5min，之后转到80℃加热5min，最后采用70℃保温1min，进行55个循环，在58℃进行单点荧光检测；
S6、采用双标准曲线法，对样品检测的CT值进行实验结果分析：
A、无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含大肠杆菌；
B、Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含大肠杆菌；
C、当Ct值＞35.0，则该样品做重复实验；重复实验结果无Ct值则该样品中不含大肠杆菌；若重复实验结果有Ct值，则该样品中含大肠杆菌。
实施例2
一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：
S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针如下：
引物A：5’-TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT-3’；
引物B：5’-AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT-3’；
引物C：5’-TGCTATTCTAACTGGGCTAATAAG-3’；
引物D：5’-AGCTATTCTATCTCTGCTAATAAC-3’；
探针P：5’-FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’；
S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA，具体步骤如下：
B1、选取处于生长旺盛时期的大肠杆菌样品；
B2、去掉培养基，加入1μL TRNzol在-70℃环境中保存5h；
B3、加入氯仿后2300rpm离心40s，静置得到位于下层的有机层和位于上层的水样层；
B4、收集水样层加入异丙醇，沉淀得到RNA；
B5、收集有机层加入乙醇，沉淀后得到DNA；
S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，其具体步骤如下：
A1、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，取4.5μgRNA提取物加入离心管，在62℃环境中保温5min，然后冰浴6.5min；
A2、在离心管中依次加入下列组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，10×M-MLVReactionBuffer2μL，DTT(200mM)1μL和逆转录酶(M-MLV)1μL；
A3、将离心管内部组份轻轻混匀后，在-0.09MPa环境中采用2300rpm离心40s；
A4、将离心得到的产物放入恒温箱，先在40℃保温1.5h，然后72℃保温25min，最后在-20℃环境中保存留用；
S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，检测结果保证1.7＜OD260/OD280＜1.9，以保证提取物为纯DNA，结果不满足则说明含有RNA和蛋白质杂质，需要重新提取；
S5、荧光定量PCR，取大肠杆菌DNA 2μL，10μmol/L的引物A和引物B各3μL，10μmol/L的探针P0.5μL，2×TaqMan Universal Master Mix 10μL，再加入ddH2O补充至25μL，混合均匀后转移到加热箱中进行加热，其加热保温过程为：先在56℃环境中保温1min，之后使用97℃加热5-6min，之后转到82℃加热5min，最后采用70℃保温1min，进行56个循环，在58℃进行单点荧光检测；
S6、采用双标准曲线法，对样品检测的CT值进行实验结果分析：
A、无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含大肠杆菌；
B、Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含大肠杆菌；
C、当Ct值＞35.0，则该样品做重复实验；重复实验结果无Ct值则该样品中不含大肠杆菌；若重复实验结果有Ct值，则该样品中含大肠杆菌。
实施例3
一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：
S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针如下：
引物A：5’-TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT-3’；
引物B：5’-AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT-3’；
引物C：5’-TGCTATTCTAACTGGGCTAATAAG-3’；
引物D：5’-AGCTATTCTATCTCTGCTAATAAC-3’；
探针P：5’-FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’；
S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA，具体步骤如下：
B1、选取处于生长旺盛时期的大肠杆菌样品；
B2、去掉培养基，加入1μL TRNzol在-70℃环境中保存7h；
B3、加入氯仿后2350rpm离心40s，静置得到位于下层的有机层和位于上层的水样层；
B4、收集水样层加入异丙醇，沉淀得到RNA；
B5、收集有机层加入乙醇，沉淀后得到DNA；
S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，其具体步骤如下：
A1、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，取5.5μgRNA提取物加入离心管，在64℃环境中保温5min，然后冰浴7.5min；
A2、在离心管中依次加入下列组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，10×M-MLVReactionBuffer2μL，DTT(200mM)1μL和逆转录酶(M-MLV)1μL；
A3、将离心管内部组份轻轻混匀后，在-0.09MPa环境中采用2350rpm离心40s；
A4、将离心得到的产物放入恒温箱，先在40℃保温1.8h，然后72℃保温28min，最后在-20℃环境中保存留用；
S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，检测结果保证1.7＜OD260/OD280＜1.9，以保证提取物为纯DNA，结果不满足则说明含有RNA和蛋白质杂质，需要重新提取；
S5、荧光定量PCR，取大肠杆菌DNA 2μL，10μmol/L的引物A和引物B各3μL，10μmol/L的探针P0.5μL，2×TaqMan Universal Master Mix 10μL，再加入ddH2O补充至25μL，混合均匀后转移到加热箱中进行加热，其加热保温过程为：先在59℃环境中保温1min，之后使用99℃加热5.8min，之后转到88℃加热5min，最后采用70℃保温1min，进行59个循环，在58℃进行单点荧光检测；
S6、采用双标准曲线法，对样品检测的CT值进行实验结果分析：
A、无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含大肠杆菌；
B、Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含大肠杆菌；
C、当Ct值＞35.0，则该样品做重复实验；重复实验结果无Ct值则该样品中不含大肠杆菌；若重复实验结果有Ct值，则该样品中含大肠杆菌。
实施例4
一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：
S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针如下：
引物A：5’-TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT-3’；
引物B：5’-AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT-3’；
引物C：5’-TGCTATTCTAACTGGGCTAATAAG-3’；
引物D：5’-AGCTATTCTATCTCTGCTAATAAC-3’；
探针P：5’-FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’；
S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA，具体步骤如下：
B1、选取处于生长旺盛时期的大肠杆菌样品；
B2、去掉培养基，加入1μL TRNzol在-70℃环境中保存8h；
B3、加入氯仿后2400rpm离心40s，静置得到位于下层的有机层和位于上层的水样层；
B4、收集水样层加入异丙醇，沉淀得到RNA；
B5、收集有机层加入乙醇，沉淀后得到DNA；
S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，其具体步骤如下：
A1、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，取6μgRNA提取物加入离心管，在65℃环境中保温5min，然后冰浴8min；
A2、在离心管中依次加入下列组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，10×M-MLVReactionBuffer2μL，DTT(200mM)1μL和逆转录酶(M-MLV)1μL；
A3、将离心管内部组份轻轻混匀后，在-0.09MPa环境中采用2400rpm离心40s；
A4、将离心得到的产物放入恒温箱，先在40℃保温2h，然后72℃保温30min，最后在-20℃环境中保存留用；
S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，检测结果保证1.7＜OD260/OD280＜1.9，以保证提取物为纯DNA，结果不满足则说明含有RNA和蛋白质杂质，需要重新提取；
S5、荧光定量PCR，取大肠杆菌DNA 2μL，10μmol/L的引物A和引物B各3μL，10μmol/L的探针P0.5μL，2×TaqMan Universal Master Mix 10μL，再加入ddH2O补充至25μL，混合均匀后转移到加热箱中进行加热，其加热保温过程为：先在60℃环境中保温1min，之后使用100℃加热5-6min，之后转到88℃加热5min，最后采用70℃保温1min，进行60个循环，在58℃进行单点荧光检测；
S6、采用双标准曲线法，对样品检测的CT值进行实验结果分析：
A、无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含大肠杆菌；
B、Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含大肠杆菌；
C、当Ct值＞35.0，则该样品做重复实验；重复实验结果无Ct值则该样品中不含大肠杆菌；若重复实验结果有Ct值，则该样品中含大肠杆菌。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、根据目的基因序列设计特异性的引物和荧光探针如下：
引物A：5’-TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT-3’；
引物B：5’-AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT-3’；
引物C：5’-TGCTATTCTAACTGGGCTAATAAG-3’；
引物D：5’-AGCTATTCTATCTCTGCTAATAAC-3’；
探针P：5’-FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’；
S2、选取大肠杆菌样品，提取样品的DNA/RNA；
S3、将提取得到的RNA转换成cDNA，其具体步骤如下：
A1、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，取4-6μgRNA提取物加入离心管，在60-65℃环境中保温5min，然后冰浴6-8min；
A2、在离心管中依次加入下列组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，10×M-MLVReactionBuffer2μL，DTT(200mM)1μL和逆转录酶(M-MLV)1μL；
A3、将离心管内部组份轻轻混匀后，进行离心操作；
A4、将离心得到的产物放入恒温箱，先在40℃保温1-2h，然后72℃保温20-30min，最后在-20℃环境中保存留用；
S4、使用紫外分光光度计检测上一步中提取物，检测结果保证1.7＜OD260/OD280＜1.9，以保证提取物为纯DNA，结果不满足则说明含有RNA和蛋白质杂质，需要重新提取；
S5、荧光定量PCR，取大肠杆菌DNA 2μL，10μmol/L的引物A和引物B各3μL，10μmol/L的探针P0.5μL，2×TaqMan Universal Master Mix 10μL，再加入ddH2O补充至25μL，混合均匀后转移到加热箱中进行加热，其加热保温过程为：先在55-60℃环境中保温1min，之后使用96-100℃加热5-6min，之后转到80-88℃加热5min，最后采用70℃保温1min，进行55-60个循环，在58℃进行单点荧光检测；
S6、采用双标准曲线法，对样品检测的CT值进行实验结果分析：
A、无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含大肠杆菌；
B、Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含大肠杆菌；
C、当Ct值＞35.0，则该样品做重复实验；重复实验结果无Ct值则该样品中不含大肠杆菌；若重复实验结果有Ct值，则该样品中含大肠杆菌。
2.根据权利要求1所述的检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述S2中关联的具体步骤如下：
B1、选取处于生长旺盛时期的大肠杆菌样品；
B2、去掉培养基，加入1μL TRNzol在-70℃环境中保存4-8h；
B3、加入氯仿后2200-2400rpm离心40s，静置得到位于下层的有机层和位于上层的水样层；
B4、收集水样层加入异丙醇，沉淀得到RNA；
B5、收集有机层加入乙醇，沉淀后得到DNA。
3.根据权利要求1所述的检测大肠杆菌的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述S3中的离心操作为在-0.09MPa环境中采用2200-2400rpm离心40s。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111334596A (zh) * 2020-05-20 2020-06-26 天津欧德莱生物医药科技有限公司 一种定量E.coli细胞残留的核酸检测试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1954829A1 (en) * 2005-11-29 2008-08-13 Alexander Seitz Polynucleotide amplification
CN102758004A (zh) * 2012-03-15 2012-10-31 深圳市生科源技术有限公司 粘附性大肠杆菌检测试剂盒及检测方法
CN103215358A (zh) * 2013-04-10 2013-07-24 深圳市疾病预防控制中心 致泻性大肠杆菌检测试剂盒及其检测分型方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1954829A1 (en) * 2005-11-29 2008-08-13 Alexander Seitz Polynucleotide amplification
CN102758004A (zh) * 2012-03-15 2012-10-31 深圳市生科源技术有限公司 粘附性大肠杆菌检测试剂盒及检测方法
CN103215358A (zh) * 2013-04-10 2013-07-24 深圳市疾病预防控制中心 致泻性大肠杆菌检测试剂盒及其检测分型方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
REBECCA A GUY 等: "Quantification of E. Coli O157 and STEC in Feces of Farm Animals Using Direct Multiplex Real Time PCR (qPCR) and a Modified Most Probable Number Assay Comprised of Immunomagnetic Bead Separation and qPCR Detection", 《JOURNAL OF MICROBIOLOGICAL METHODS》 *
王良玉 等: "荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染方法的建立", 《中国妇幼健康研究》 *
陶永光: "《肿瘤分子生物学与细胞生物学实验手册》", 30 November 2014, 湖南科学技术出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111334596A (zh) * 2020-05-20 2020-06-26 天津欧德莱生物医药科技有限公司 一种定量E.coli细胞残留的核酸检测试剂盒

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