[go: up one dir, main page]

CN106892973A - 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用 - Google Patents

植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106892973A
CN106892973A CN201710021544.XA CN201710021544A CN106892973A CN 106892973 A CN106892973 A CN 106892973A CN 201710021544 A CN201710021544 A CN 201710021544A CN 106892973 A CN106892973 A CN 106892973A
Authority
CN
China
Prior art keywords
plant
gene
sequence
ghmyb4
encoding gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710021544.XA
Other languages
English (en)
Inventor
王飞兵
陈新红
周青
叶玉秀
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huaiyin Institute of Technology
Original Assignee
Huaiyin Institute of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huaiyin Institute of Technology filed Critical Huaiyin Institute of Technology
Priority to CN201710021544.XA priority Critical patent/CN106892973A/zh
Publication of CN106892973A publication Critical patent/CN106892973A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明提供了蛋白GhMYB4，编码基因，含有上述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，扩增上述编码基因全长或其任意片段的引物对；还提供了蛋白GhMYB4，编码基因，含有上述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在提高植物耐盐性中的应用。本发明的蛋白及其编码基因对培育抗逆性植物品种具有重要的应用价值，从而提高农作物产量具有重要意义，将在农业领域具有广阔的应用空间和市场前景。

Description

植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用，特别涉及来源于陆地棉的抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用。
背景技术
世界上存在大面积的盐渍化的土地。据统计，全世界共有8亿hm2盐碱地，在灌溉地区还有占耕地面积33％的次生盐渍化土地，土壤的盐溃化严重影响现代农业的发展。就我国而言，在全国18亿亩耕地中有近十分之一的次生盐溃化土地，另外还有2000万hm2盐碱荒地。一般来说，盐浓度在0.2％-0.5％会影响作物的生长，但是盐碱地的盐分大都在0.6％-10％。大面积的盐渍化土地的存在严重影响了粮食生产，成为限制农业生产的主要因素。
并且随着全球气候的变化异常、生态平衡的破坏以及人口数量的急剧增长，水资源匮乏也已成为当今农业生产发展面临的最严峻的挑战之一。FAO调查结果显示，干旱胁迫是造成发展中国家粮食安全最主要的原因，对粮食生产造成的影响远远超过洪涝、地震、台风、泥石流等自然灾害(FAOSTAT，2006)。由于全球气候变化异常、降雨年际变化大以及降雨时空分布不均匀等因素的影响，我国农业生产受干旱灾害的影响越来越严重，粮食安全面临严峻挑战。
植物的生长发育与外界环境密切相关，植物的各个生长发育阶段都会受到各种逆境胁迫影响，包括非生物胁迫和生物胁迫。非生物胁迫如干旱、高盐、低温等是制约植物生长、降低农作物产量与质量的重要因素。在农业生产中，由非生物胁迫造成的作物产量的损失使得全球主要农作物的平均产量减少50％以上。植物在长期的进化及适应过程中，逐步形成了一系列抵御外界不良环境变化的机制。植物的抗逆机理相当复杂，它涉及到生长发育、形态结构、生理特征以及代谢调节等诸多方面。当植物受到盐胁迫时，植物的形态、生理生化等方面都会发生一系列的变化，才能维持其生存。盐害抑制植物组织、器官的生长和分化，影响植物细胞膜结构，使细胞膜透性增大，降低光合速率，导致大量电解质和非电解质外渗，膜脂组分发生改变，膜蛋白的组分和活性受到影响，进而影响植物的生理代谢。
植物在逆境胁迫条件下，会采用一定的策略去阻止或减轻胁迫带来的的危害，在长期的进化过程中，植物发展出了一系列的抗逆机制。随着分子生物学的迅速发展，植物抗逆生理生化机制日益明确，使得克隆与植物抗逆相关基因成为可能。加强植物抗逆生理的研究，探明植物在逆境下的生命活动规律并加以人为调控，培育具有抵抗不良环境性状的优良品种，以提高作物的产量和品质，对于获得农业高产稳产具有重要意义。
棉花是重要的纤维和油料作物之一，是中度耐盐作物，被作为盐碱地的先锋作物。近年来，我国棉区逐渐向西北内陆盐碱旱地以及滨海地区转移；因此，我国盐碱地、旱地种植棉面积不断扩大。培育高度耐盐抗旱、农艺性状和产量性状优良的棉花新材料，是目前棉花育种工作中迫切需要解决的问题，提高棉花抗逆性具有重要的理论及现实意义。
发明内容
技术问题：为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种植物抗逆性相关蛋白及其编码基因，还提供了上述蛋白的应用。
技术方案：本发明提供的与植物抗逆性相关蛋白，其名称为GhMYB4(MYB转录因子)，来源于陆地棉(Gossypiumhirsutum)，是如下(a)或(b)：
a)由序列表中序列SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
b)将序列表中序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆性相关的由SEQ ID NO：2衍生的蛋白质。
本发明还提供了编码蛋白GhMYB4的基因。
所述基因，是如下(i)-(iii)中任何一种的DNA分子；
i.其核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的DNA分子；
ii.在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码植物抗逆性相关蛋白的DNA分子；
iii.与(1)或(2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或者至少具有99％同源性且编码植物抗逆性相关蛋白的DNA分子。
上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
序列表中的序列SEQ ID NO：1由1224个碱基组成，编码序列表中序列SEQ ID NO：2所示的蛋白。
本发明还提供了含有所述与植物抗逆性相关蛋白的编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
所述重组载体为将上述基因插入表达载体中即得。
具体地，所述重组载体是在载体pCBGUS的多克隆位点间插入所述编码基因得到的。
其中，所述载体pCBGUS是通过包括如下步骤的方法得到的：
(1)将pCAMBIA1301载体经过HindIII和EcoRI双酶切，回收载体大片段；
(2)将pBI121载体经过HindIII和EcoRI双酶切，回收包含gusA基因的片段；
(3)将步骤(1)中回收的载体大片段与步骤(2)中回收的包含gusA基因的片段连接，得到重组载体pCBGUS。
所述pCAMBIA1301载体购自CAMBIA公司；所述pBI121载体购自Clontech公司。
本发明还提供了扩增所述与植物抗逆性相关蛋白的编码基因全长或其任意片段的引物对。
具体地，所述引物对序列如下：
GhMYB4-GC-F：5’-CACATAGGGAGATGGGGAGG-3’
GhMYB4-GC-R：5’-CAGTTTACAAAGAAAACAAAGCA-3’
本发明还提供了蛋白GhMYB4、其编码基因或其重组载体、表达盒、转基因细胞系、重组菌在提高植物耐盐性中的应用；所述植物为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物为拟南芥和水稻。
本发明还提供了一种培育转基因植物的方法，包括以下步骤：将上述蛋白的编码基因导入目的植物，即得。
具体地，上述蛋白的编码基因是通过上述的重组载体导入目的植物；所述植物具体为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物为拟南芥和水稻。
有益效果：本发明提供的GhMYB4基因所编码的蛋白可以提高植物的抗逆性，具有重要的应用价值，为提高植物抗逆性的研究提供重要的依据。
本发明的蛋白及其编码基因对培育抗逆性植物品种具有重要的应用价值，从而提高农作物产量具有重要意义，将在农业领域具有广阔的应用空间和市场前景。
附图说明
图1本发明陆地棉GhMYB4基因植物表达载体简图。
图2本发明GhMYB4转基因拟南芥植株的PCR检测结果图。
图3本发明GhMYB4转基因拟南芥植株在200mMNaCl和25％PEG6000的MS培养基上的生长和生根情况，WT为野生型拟南芥植株，#3和#6为转基因拟南芥植株。
图4本发明GhMYB4转基因拟南芥植株抗逆性和抗旱性盆栽鉴定，WT为野生型拟南芥植株，#3和#6为转基因拟南芥植株。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
下述实施例中，所用的试验材料及其来源包括：
陆地棉(Gossypiumhirsutum)品种‘中G5’，由淮阴工学院生命科学与食品工程学院江苏省植物生产与加工实践教育中心实验室保存。
拟南芥(Arabidopsis thaliana)的种子经过2.5％(v/v)CaClO2消毒后种植在黑土：蛭石：珍珠岩(1:1:1)的混合基质中，22℃，16h光照培养(16h光照，8h黑暗，冷光源)生长2周。
大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α由淮阴工学院生命科学与食品工程学院江苏省植物生产与加工实践教育中心实验室保存。克隆载体PMD-18-Simple T、各类限制性内切酶、Taq聚合酶、连接酶、dNTP、10×PCR buffer和DNA marker购自宝生物工程大连有限公司。所有的化学试剂都从美国西格玛化学公司和上海国药化学试剂公司购买。
本发明中常规的分子生物学操作具体参见《分子克隆》【Molecular Cloning.2nded.Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989】。
下述实施例中常规的基因操作参照分子克隆文献进行【Sambook J,Frets EF,Mannsdes T et al.In:Molecular Cloning.2nd ed.Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989】。
实施例1陆地棉抗逆性相关的蛋白及其编码基因的获得
1.实验材料
参照Zhang等(2011)【Zhang X,Zhen J,Li Z,Kang D,Yang Y,KongJ,HuaJ.Expression profile of early responsive genes under salt stress in uplandcotton(Gossypiumhirsutum L.).Plant Molecular Biology Reporter,2011,29(3):626-637】的方法，将陆地棉品种‘中G5’的水培苗材料取下，液氮速冻，-80℃保存。
2.叶片总RNA提取和纯化
取中G5叶片约2.0g，在液氮中研磨成粉状，加入10mL离心管，用Applygen植物RNA提取试剂盒(Applygen Technologies Inc，Beijing)提取甘薯块根总RNA，试剂盒中包括：Plant RNA Reagent，植物组织裂解、分离RNA、去除植物多糖和多酚；Extraction Reagent，有机抽提去除蛋白质、DNA、多糖和多酚；Plant RNA Aid，去除植物多糖多酚和次生代谢产物。利用QIAGEN Oligotex Mini mRNA Kit(QIAGEN，GmbH，Germany)从总RNA中纯化mRNA。最后，取1μL于1.2％琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，另取2μL稀释至500μL，用紫外分光光度计检测其质量(OD260)和纯度(OD260/OD280)，提取的PN40024无菌苗叶片总RNA，经非变性胶琼脂糖凝胶电泳检测，28S和18S条带清晰，且二者亮度比值为1.5～2︰1，表明总RNA没有降解，纯化所得mRNA符合实验要求，可用于葡萄GhMYB4蛋白cDNA全长的克隆。
3.GhMYB4蛋白cDNA的全长克隆
以NCBI(National Center for Biotechnology Information)上的GhMYB4的cDNA序列设计引物进行GhMYB4蛋白cDNA的全长克隆。
引物序列如下：
GhMYB4-GC-F：5’-CACATAGGGAGATGGGGAGG-3’
GhMYB4-GC-R：5’-CAGTTTACAAAGAAAACAAAGCA-3’
以中G5叶片总RNA经Oligo(dT)反转录为模板，用高保真的FastPfu酶，进行PCR扩增，PCR条件为95℃1min，随后95℃20s，53℃20s和72℃1min，进行36个循环，最后72℃延伸5min。琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，获得1362bp长度的扩增片段。
综合上述步骤的结果，获得了目的cDNA序列，其核苷酸序列如序列表中序列SEQID NO 1所示。序列表中序列SEQ ID NO 1由1362个碱基组成，自5’端第1位-第1362位碱基为其开放阅读框，编码具有序列表中序列SEQ ID NO 2所示的氨基酸残基序列的蛋白质。序列表中序列SEQ ID NO 2由453个氨基酸残基组成。将该基因命名为GhMYB4，将其编码的蛋白命名为GhMYB4。
实施例2 GhMYB4基因过表达载体的构建
将实施例1中测序鉴定正确的含有序列表SEQ ID NO 1所示核苷酸的DNA片段用BamHI和SacI进行双酶切，用1％琼脂糖凝胶回收DNA片段，通过T4DNA连接酶将回收的GhMYB4基因片段与含有双35S启动子pYPx245质粒连接，酶切鉴定和序列分析测定获得了含有葡萄GhMYB4基因的重组质粒AH128。该表达载体还包含gusA报告基因和带内含子卡那霉素抗性标记基因，载体如图1所示。
实施例3 GhMYB4基因转化拟南芥
将实施例2构建的葡萄GhMYB4基因的植物表达载体pCAMBIA1301-GhMYB4用蘸花法转化拟南芥，具体方法如下：
1.农杆菌的准备
(1)将pCAMBIA1301-GhMYB4用电击法转化根癌农杆菌LBA4404菌株(BiovectorCo.,LTD)，得到含有pCAMBIA1301-GhMYB4的重组农杆菌，并涂布于含有卡那霉素抗性的平板筛选转化子。
(2)挑取农杆菌单菌接种于5mL LB液体培养基(利福平50μg/mL，氯霉素100μg/mL)中，28℃，250rpm培养20h。
(3)取1mL菌液转接入20-30mL LB液体培养基(利福平50μg/mL，氯霉素100μg/mL)中，28℃，250rpm培养约12h，测OD 600≈1.5。
(4)8000rpm，4℃，10min离心收集菌体，重悬于农杆菌转化渗透液(5％蔗糖，0.05％Silwet L-77)并稀释至OD 600≈0.8。
2.拟南芥蘸花法转化
(1)将拟南芥的花薹浸入上述侵染液中，轻轻搅动约10s后取出，全部转化完毕后，用保鲜袋罩住拟南芥，以保持湿润环境，水平放置，22℃避光培养，24h后去掉保鲜袋直立培养。
(2)初次转化四天后，可再进行一次转化，重复两次，总共转化三次，这样可以对花序上发育的不同时期的花蕾进行转化，提高转化效率。
(3)生长约两个月后，收集种子，4℃冰箱储存待用。
经过蘸花法转化的拟南芥生长约两个月后，正常开花结子。
实施例4 GhMYB4基因转基因拟南芥植株PCR检测
1.转基因拟南芥种子的筛选
(1)称25-30mg种子放入1.5mL离心管。
(2)1mL 75％乙醇消毒1min(不停摇晃振荡)，8000rpm离心5s，去上清。
(3)加入1mL过滤后的漂白粉(2.5％)消毒15min(不停摇晃振荡，充分消毒)，8000rpm离心5s，去上清。
(4)无菌水洗涤3-4次。
(5)将种子均匀的播撒到1/2MS平板(潮霉素50μg/mL)上，Parafilm膜封口，4℃冰箱放置两天，22℃，16h光照培养10天。
(6)将抗性植株移栽到盆中培养，苗稍大后，进行GUS活性检测，选出阳性植株(T1)培养至开花结实，收集T1植株上所结T2种子，进一步筛选得到T3种子。
2.转基因拟南芥植株PCR检测
(1)试验方法
用CTAB法提取T3拟南芥转基因植株和野生型植株的基因组DNA。用常规方法进行PCR检测，所使用的GhMYB4基因引物为：Primer 1：5’-GAACTCGCCGTAAAGACTGG-3’和Primer2：5’-AAGAAAACAAAGCATCAGAATTGAA-3’。在0.2mL Eppendorf离心管中加入10×PCRbuffer 2μL、4dNTP(10mol/L)1μL、引物(10μmol/L)均为1μL、模板DNA(50ng/uL)2μL、TaqDNA聚合酶0.25μL，加ddH2O至总体积20μL。反应程序为94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸2min，共35个循环。
(2)试验结果
电泳检测扩增结果见图2(图2中，泳道M为Maker；泳道W：水；泳道P：阳性对照(重组质粒pCAMBIA1301-GhMYB4)；泳道Col-0：野生型拟南芥植株；泳道#2、#3、#4、#6：为转化pCAMBIA1301-GhMYB4的拟南芥转基因植株)。从图中可见，转化pCAMBIA1301-GhMYB4的拟南芥拟转基因植株和阳性对照扩增出1423bp的目标条带，表明GhMYB4基因已经整合到拟南芥的基因组中，并证明这些再生植株为转基因植株；野生型拟南芥植株没有扩增出1423bp的目标条带。转基因植株为后续功能分析。
实施例5 GhMYB4基因转基因拟南芥植株耐盐性和抗旱性鉴定
1.转基因植株耐盐性和抗旱性离体鉴定
(1)试验方法
将转基因拟南芥和野生型种子，消毒灭菌后播种继代培养于200mMNaCl和25％PEG6000的1/2MS培养基上，胁迫培养2周后，观察拟南芥植株的生长状态和生根情况。
(2)试验结果
结果显示，转基因拟南芥植株的生长状态和生根情况显著优于野生型植株，转基因植株根长和植株鲜重均显著优于野生型植株(图3)，表明转基因植株的耐盐性和抗旱性较野生性有显著提高。
2.转基因植株耐盐性和抗旱性盆栽鉴定
(1)试验方法
将转基因拟南芥和野生型种子在1/2MS培养基上培养2周后，将植株移栽到盆中培养2周后，进行盐、干旱胁迫处理。用含有300mMNaCl的1/2霍格兰营养液每个2天灌溉1次，每次200mL，处理4周，观察植株生长情况并统计存活率；干旱处理6周后，观察植株生长情况并统计存活率。
(2)试验结果
结果显示，通过耐盐性和抗旱性盆栽鉴定，结果见图4，盐处理4周或干旱处理6周后，转基因植株的生长状态显著优于野生型植株，转基因植株的存活率显著高于野生性植株。表明过表达GhMYB4基因显著提高转基因拟南芥植株的耐盐性和抗旱性。
SEQUENCE LISTING
<110> 淮阴工学院
<120> 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用
<130> 20170110001
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1362
<212> DNA
<213> 棉花（Gossypiumhirsutum）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1362)
<400> 1
atggggaggg cgccttgttg cgaaaaagtg gggttgaaga aggggagatg gacggcggaa 60
gaggatgtgt tattgaccaa gtatattcaa gctaacggtg aaggctcctg gagatcatta 120
cccaagaatg caggattact gaggtgtggg aagagttgca gactaaggtg gattaattac 180
ttgagagctg acttgaaaag gggaaacttt acttcccaag aggaagaagt catcattaac 240
ttgcatgcta ctttgggaaa taggtggtct ttaattgcca gttacttacc aggaagaaca 300
gacaacgaga ttaagaacta ttggaactct catttgagta gaaaaatcca tagctttaga 360
aggccattaa ctcaaagcat gccagtcatc atggacctca ccaagacggc cgtgattgct 420
aagcggaaag gaggtagaac tagcgaaggg tcgatgaagg aaaacaaaag ctgcagtacc 480
cagaaagata ctggaagttg ttcaaataaa cctactgaaa acgtttgtgt taatgaagtt 540
gagccattcc catccactcc attgttagaa aaagaaacct tgtccactac agccattgaa 600
gatcgcatgg tactggatca acatggagaa gataaggaga gaacaaccca tgttgtaccc 660
agtccttgtc acgacaccgt tgttgaagga atgttgggtt caagcgagga gagagagagc 720
ctggtgactg aggaaggaac catagagaat tcaatgcagt gccctagtgg caacgctgag 780
aaagggactg gtattttagc accacatgag agtattgata gcagtgagat agagtggttt 840
aatgatatcc tggatagtga attgctacag ccaagtgggc atttgacgtt tactgaacta 900
ggagaggaca ggtggaatgt gaaaacacac acaactgcag ctaataacga ggaaatagtg 960
agtaggaact gtagtgcaga tagtggtggg gtcttgagct catgtacttc aacaacattt 1020
tactttgttg atgattggga aaatgttgtt ccaagaagtg agctttggga tgagaaggaa 1080
tacatgtgtt cttggctgtg ggagccaagc gactatcatg ggaaaggaga gagacataaa 1140
gtggatgata atggctttga ggggcacaat cccatgattg ctgctaacgt cgcttttctc 1200
ctaatgctcc tccttgttcc tcctgcttta gtgtctagct acacttccat gtcaatattt 1260
tatctaggta gacagtgtga acatgtcctg ccgttttttc tttttgtttt acttttagat 1320
tttgcttctc ttttcaattc tgatgctttg ttttctttgt aa 1362
<210> 2
<211> 453
<212> PRT
<213> GhMYB4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(453)
<400> 2
Met Gly Arg Ala Pro Cys Cys Glu Lys Val Gly Leu Lys Lys Gly Arg
1 5 10 15
Trp Thr Ala Glu Glu Asp Val Leu Leu Thr Lys Tyr Ile Gln Ala Asn
20 25 30
Gly Glu Gly Ser Trp Arg Ser Leu Pro Lys Asn Ala Gly Leu Leu Arg
35 40 45
Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Ile Asn Tyr Leu Arg Ala Asp
50 55 60
Leu Lys Arg Gly Asn Phe Thr Ser Gln Glu Glu Glu Val Ile Ile Asn
65 70 75 80
Leu His Ala Thr Leu Gly Asn Arg Trp Ser Leu Ile Ala Ser Tyr Leu
85 90 95
Pro Gly Arg Thr Asp Asn Glu Ile Lys Asn Tyr Trp Asn Ser His Leu
100 105 110
Ser Arg Lys Ile His Ser Phe Arg Arg Pro Leu Thr Gln Ser Met Pro
115 120 125
Val Ile Met Asp Leu Thr Lys Thr Ala Val Ile Ala Lys Arg Lys Gly
130 135 140
Gly Arg Thr Ser Glu Gly Ser Met Lys Glu Asn Lys Ser Cys Ser Thr
145 150 155 160
Gln Lys Asp Thr Gly Ser Cys Ser Asn Lys Pro Thr Glu Asn Val Cys
165 170 175
Val Asn Glu Val Glu Pro Phe Pro Ser Thr Pro Leu Leu Glu Lys Glu
180 185 190
Thr Leu Ser Thr Thr Ala Ile Glu Asp Arg Met Val Leu Asp Gln His
195 200 205
Gly Glu Asp Lys Glu Arg Thr Thr His Val Val Pro Ser Pro Cys His
210 215 220
Asp Thr Val Val Glu Gly Met Leu Gly Ser Ser Glu Glu Arg Glu Ser
225 230 235 240
Leu Val Thr Glu Glu Gly Thr Ile Glu Asn Ser Met Gln Cys Pro Ser
245 250 255
Gly Asn Ala Glu Lys Gly Thr Gly Ile Leu Ala Pro His Glu Ser Ile
260 265 270
Asp Ser Ser Glu Ile Glu Trp Phe Asn Asp Ile Leu Asp Ser Glu Leu
275 280 285
Leu Gln Pro Ser Gly His Leu Thr Phe Thr Glu Leu Gly Glu Asp Arg
290 295 300
Trp Asn Val Lys Thr His Thr Thr Ala Ala Asn Asn Glu Glu Ile Val
305 310 315 320
Ser Arg Asn Cys Ser Ala Asp Ser Gly Gly Val Leu Ser Ser Cys Thr
325 330 335
Ser Thr Thr Phe Tyr Phe Val Asp Asp Trp Glu Asn Val Val Pro Arg
340 345 350
Ser Glu Leu Trp Asp Glu Lys Glu Tyr Met Cys Ser Trp Leu Trp Glu
355 360 365
Pro Ser Asp Tyr His Gly Lys Gly Glu Arg His Lys Val Asp Asp Asn
370 375 380
Gly Phe Glu Gly His Asn Pro Met Ile Ala Ala Asn Val Ala Phe Leu
385 390 395 400
Leu Met Leu Leu Leu Val Pro Pro Ala Leu Val Ser Ser Tyr Thr Ser
405 410 415
Met Ser Ile Phe Tyr Leu Gly Arg Gln Cys Glu His Val Leu Pro Phe
420 425 430
Phe Leu Phe Val Leu Leu Leu Asp Phe Ala Ser Leu Phe Asn Ser Asp
435 440 445
Ala Leu Phe Ser Leu
450
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> GhMYB4-GC-R
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(20)
<400> 3
cacataggga gatggggagg 20
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> GhMYB4-GC-R
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(23)
<400> 4
cagtttacaa agaaaacaaa gca 23

Claims (10)

1.一种蛋白，是如下(a)或(b)：
a)由序列表中序列SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
b)将序列表中序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆性相关的由SEQ ID NO：2衍生的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下(1)-(3)中任何一种的DNA分子；
i.其核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的DNA分子；
ii.在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码植物抗逆性相关蛋白的DNA分子；
iii.与(1)或(2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或者至少具有99％同源性且编码植物抗逆性相关蛋白的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体为将权利要求2或3所述基因插入表达载体中即得。
6.扩增权利要求2或3所述基因全长或其任意片段的引物对。
7.如权利要求6所述的引物对，其序列如下：
GhMYB4-GC-F：5’-CACATAGGGAGATGGGGAGG-3’
GhMYB4-GC-R：5’-CAGTTTACAAAGAAAACAAAGCA-3’。
8.权利要求1所述蛋白、权利要求2或3所述编码基因或权利要求4所述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在提高植物抗逆性中的应用；所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
9.一种培育转基因植物的方法，其特征在于：包括以下步骤：将权利要求1所述蛋白的编码基因导入目的植物，即得。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：权利要求1所述蛋白的编码基因是通过权利要求4或5所述的重组载体导入目的植物；所述植物具体为双子叶植物或单子叶植物。
CN201710021544.XA 2017-01-12 2017-01-12 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用 Pending CN106892973A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710021544.XA CN106892973A (zh) 2017-01-12 2017-01-12 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710021544.XA CN106892973A (zh) 2017-01-12 2017-01-12 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106892973A true CN106892973A (zh) 2017-06-27

Family

ID=59197955

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710021544.XA Pending CN106892973A (zh) 2017-01-12 2017-01-12 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106892973A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107663232A (zh) * 2017-10-27 2018-02-06 淮阴工学院 植物抗逆相关蛋白OsIAA18及其编码基因与应用
CN111534539A (zh) * 2020-05-14 2020-08-14 中国农业科学院作物科学研究所 一种与植物抗逆性相关的SiMYB4蛋白及其相关生物材料与应用
CN117186198A (zh) * 2022-05-30 2023-12-08 中国科学院遗传与发育生物学研究所 高粱SbMYB12蛋白质及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1491962A (zh) * 2002-10-25 2004-04-28 中国科学院遗传与发育生物学研究所 棉花的一种Myb转录因子及其编码基因与应用
CN103114091A (zh) * 2013-02-22 2013-05-22 山东师范大学 一种与植物耐盐性相关的miRNA及其应用
CN104946665A (zh) * 2015-06-26 2015-09-30 江苏省农业科学院 GmMYB62在培育抗逆性提高的转基因植物中的应用
CN105073772A (zh) * 2013-04-24 2015-11-18 创世纪种业有限公司 一个棉花myb类转录因子myb1-1及其编码基因与应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1491962A (zh) * 2002-10-25 2004-04-28 中国科学院遗传与发育生物学研究所 棉花的一种Myb转录因子及其编码基因与应用
CN103114091A (zh) * 2013-02-22 2013-05-22 山东师范大学 一种与植物耐盐性相关的miRNA及其应用
CN105073772A (zh) * 2013-04-24 2015-11-18 创世纪种业有限公司 一个棉花myb类转录因子myb1-1及其编码基因与应用
CN104946665A (zh) * 2015-06-26 2015-09-30 江苏省农业科学院 GmMYB62在培育抗逆性提高的转基因植物中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GOSSYPIUM HIRSUTUM MYB-LIKE DNA-BINDING DOMAIN PROTEIN (MYB4) MR: "GenBank: AF034132.1", 《GENBANK DATABASE》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107663232A (zh) * 2017-10-27 2018-02-06 淮阴工学院 植物抗逆相关蛋白OsIAA18及其编码基因与应用
CN107663232B (zh) * 2017-10-27 2019-09-24 淮阴工学院 植物抗逆相关蛋白OsIAA18及其编码基因与应用
CN111534539A (zh) * 2020-05-14 2020-08-14 中国农业科学院作物科学研究所 一种与植物抗逆性相关的SiMYB4蛋白及其相关生物材料与应用
CN111534539B (zh) * 2020-05-14 2022-05-10 中国农业科学院作物科学研究所 一种与植物抗逆性相关的SiMYB4蛋白及其相关生物材料与应用
CN117186198A (zh) * 2022-05-30 2023-12-08 中国科学院遗传与发育生物学研究所 高粱SbMYB12蛋白质及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108864267B (zh) 甘薯类胡萝卜素合成和耐盐抗旱相关蛋白IbARF5及其编码基因与应用
CN107541520B (zh) 与水稻根发育和抗逆性相关OsSAUR11基因及编码蛋白与应用
CN108948164B (zh) 甘薯耐盐抗旱相关蛋白IbbZIP1及其编码基因与应用
CN110904122B (zh) 一种苹果抗旱基因MdbHLH130及其应用
CN110643618B (zh) 小桐子MYB类转录因子JcMYB16基因及其在提高植物抗旱性中的应用
CN112941086B (zh) OsPIL15基因在调控水稻耐盐性中的应用
CN104829700A (zh) 一种玉米CCCH型锌指蛋白及其编码基因ZmC3H54与应用
CN109232725B (zh) 大豆c2h2型单锌指蛋白转录因子及编码基因与应用
CN112898391B (zh) 枳抗寒基因PtrERF9在植物抗寒遗传改良中的应用
CN108047320B (zh) 蛋白GmMYB12及编码基因在提高大豆异黄酮积累和耐盐性中的应用
CN102329805A (zh) 一种水稻OsMYB基因的编码序列和应用
CN111218470A (zh) 一种调控植物抗逆性的方法
CN115896045A (zh) 杜梨E3泛素连接酶基因PbrATL18在植物抗干旱和炭疽病遗传改良中的应用
CN111454972B (zh) 枳抗寒基因PtrBADH及其在植物抗寒遗传改良中的应用
CN106892973A (zh) 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用
CN114480341A (zh) 枳蛋白激酶PtrSnRK2.4在植物抗旱遗传改良中的应用
CN118879742A (zh) 一种铁皮石斛ABA关键合成酶DoNCED1编码基因与应用
CN106749577B (zh) 耐逆性相关转录因子蛋白nac及其应用
CN107663232B (zh) 植物抗逆相关蛋白OsIAA18及其编码基因与应用
CN106520723B (zh) 蛋白VvMas、编码基因及其在提高植物耐盐性中的应用
CN106906224A (zh) 一种玉米抗逆相关基因ZmDi19‑5及其应用
CN114480416B (zh) 草果AtDRM2基因在提高植物耐冷性中的应用
CN116655761A (zh) 枳转录因子PtrTGA2及其在植物抗寒遗传改良中的应用
CN109628468A (zh) 一种春兰CgWRKY53基因及其应用
CN111171124B (zh) 一种植物抗逆性相关蛋白VvIAA18及编码基因与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170627

RJ01 Rejection of invention patent application after publication