CN106860855A - 多肽及多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及纤维化疾病防治领域，公开了一类多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物在制备预防和治疗纤维化疾病药物中的应用。本发明涉及多肽进行氨基酸缺失、添加、替换后的产物，也涉及经各种化学修饰后的产物，所述多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物的组合物，药学上可用的载体和剂型，制备预防和治疗纤维化疾病药物的应用。采用所述多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物能够有效抑制组织器官炎症和纤维化的发展，具有理想的新药开发价值。

Description

多肽及多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及纤维化疾病防治领域，具体涉及多肽及其衍生物在制备预防和/或治疗纤维化疾病药物中的应用。

背景技术

蛋白质是机体的物质基础、生命活动的主要承担者，涉及生长、发育、免疫调节、新陈代谢等生理过程。蛋白质及其参与的信号转导异常是疾病的发生和发展的根本原因，利用机体自身调控来进行疾病防治是生物医药的本质思想，因此，蛋白质既是药物靶点的来源，也是生物医药的重要类别，而蛋白质功能片段则为精准用药提供了保障。多肽就是蛋白质发挥功能的活性片段，当研究发现多肽片段活性与疾病发生相关联时，这些活性多肽便可用于开发具有临床应用价值的药物。对蛋白质功能片段的研究为疾病的治疗提供了理论基础，也为基于蛋白质功能片段的多肽药物研发提供了更广阔的发展空间。

多肽药物在药物研发领域具有明显的优势：与一般有机小分子药物相比，多肽药物具有活性高、用药剂量小、毒副作用低等突出优点；而与蛋白质药物相比，较小的多肽免疫原性相对较小，可化学合成，产品纯度高，质量可控。目前的多肽药物多数源于或模拟内源性肽或其他天然肽，其结构清楚，作用机制明确，代谢产物氨基酸为机体基本组分，不会蓄积体内，毒副作用低。目前随着多肽合成技术的发展，多肽的生产、工艺和纯度问题已有效解决，另外可通过进一步研究活性多肽的构效关系，发掘多肽发挥生物活性所必需的最短片段，以便以更短的多肽来代替；或者使用氨基酸替换提高其生物活性或改变其临床不良反应，使得小片段多肽具有更好的生物相容性，减少临床不良反应，可通过替换肽链中易酶解的氨基酸来延缓酶降解速度，使多肽药物的半衰期有效延长。

但多肽本身仍存在一些缺点，如多肽易被酶解，半衰期短，生物利用度低等。为解决多肽在制备药物应用中的问题，除了改变多肽药物给药途径，化学修饰成为多肽药物研发中非常重要的研究方向，是延长蛋白质多肽类分子半衰期、实现长效化的重要技术手段之一。根据多肽药物的特点，运用多种手段进行结构设计和化学修饰，对多肽药物本身的分子结构进行改造，利用合适的修饰方法和修饰剂对蛋白质多肽类药物的主链结构或对侧链基团进行化学修饰，可改变其分子大小，电荷和受体结合能力，提高脂溶性，同时通过修饰基团形成的空间位阻保护易受蛋白水解酶进攻的区域，延缓活性蛋白的降解，提高药物的稳定性，最终改变多肽的理化性质和药代动力学，充分发挥多肽药物的优点，克服甚至避免其缺点。

目前已知的多肽修饰方法包括乙酰化修饰，酰胺化修饰，糖基化修饰，聚乙二醇（PEG）修饰，脂肪酸修饰，磷酸化修饰等。多肽类药物常用主链末端修饰方法是氨基（N）端乙酰化和羧基（C）端的酰胺化修饰，分别对肽链两端氨基和羧基进行保护，其基本原理都是增加多肽分子的相对分子量和空间位阻，延续或抑制多肽水解酶的作用，提高多肽药物稳定性，减少肾小球的滤过作用。糖基化修饰是将单糖、寡糖或多糖结构与多肽链中某些特殊氨基酸侧链上的功能团以共价键形式相连，如N-糖基化是通过天冬酰胺使侧链的酰胺氮进行连接，O-糖基化是与丝氨酸或苏氨酸残基上的氧相连。糖基化能够增加侧链空间位阻，提高多肽对酶的稳定性。如用于治疗慢性肾功能衰竭及贫血的促红细胞生长素（EPO），糖基化修饰后的EPO使用频率可由每周2-3次，降低至每周1次或每2周1次。PEG修饰是利用不同的PEG修饰剂与多肽主链或侧链的氨基、羧基，侧链的咪唑基、巯基或羟基等功能基团共价连接得到修饰产物。PEG本身是由环氧乙烷聚合的大分子聚合物，有不同的结构和不同的分子量，可以在体内降解，无毒、无抗原性，并有较高的亲水性和生物相容性、宽泛的相对分子选择范围等优点。PEG修饰后的多肽药物溶解度显著增高，体内释放缓慢，半衰期延长，并且能够形成空间位阻，降低免疫反应，抑制蛋白酶解。PEG是目前最常用的修饰剂，在研或上市的PEG修饰蛋白或多肽药物种类较其它修饰方法更多，世界上第1个PEG修饰的蛋白药物PEG-腺苷脱氨酶在1991年获FDA批准上市，另外还有PEG修饰的天冬酰胺酶、集落刺激生长因子、干扰素α等。脂肪酸修饰是将脂肪酸结构与蛋白质多肽分子中的某些特殊官能团以共价连接，包括氨基、羧基、巯基和羟基等的修饰。脂肪酸是构成胞膜磷脂及人体脂肪与类脂的成分，因此脂肪酸修饰能够有效提高多肽药物脂溶性与吸收，封闭多肽分子易受酶降解的区域，延缓或抑制蛋白酶解；脂肪酸还能够增强多肽药物与血浆白蛋白的结合，形成较大的复合物，以延长药物的在体内滞留时间。上市的脂肪酸修饰多肽药物如用于治疗2型糖尿病的利拉鲁肽（Liraglutide，诺和诺德），利拉鲁肽将人GLP-1第34位的赖氨酸（Lys）替换为精氨酸（Arg），并在26位Lys上又引入一个由谷氨酸（Glu）介导的16碳棕榈酸侧链，使GLP-1的不良反应显著减少，但完全保留了其生物活性。

在实际的临床应用中，通过以上所述化学修饰的多肽药物已经显示具有明显良好的优势，能够显著延长多肽药物的半衰期，提高药物疗效，降低给药频率，从而带来良好的治疗依从性。未来多肽修饰种类和修饰方法仍会不断发展和成熟，其最终目的都是使多肽药物能够从实验室研究走向安全有效的临床应用。

本发明基于生物医药领域中的多肽药物技术的发展，针对机制复杂、治疗困难的纤维化疾病，提供了一类经化学修饰后的多肽衍生物在制备预防和治疗纤维化疾病药物中的应用。

纤维化是在损伤部位或炎症病灶及周边，由胶原和粘连蛋白等胞外基质增加所导致的纤维结缔组织过度沉积和重塑紊乱，会造成永久性瘢痕、器官功能障碍甚至死亡。纤维化与多种疾病发生密切相关，这种临床常见的病理改变，是普遍的慢性炎症疾病的最终病理结局，也是慢性自身免疫病的主要病理症状，同时能够影响肿瘤的侵袭转移和慢性移植物排斥反应。纤维化可发生于多种组织器官，尤其是重要功能脏器（肝，肺，肾和心脏等），常常呈不可逆地进行性加重，严重破坏器官结构，最终导致器官功能减退及至衰竭，进而极大降低病患生活质量，严重威胁人类生命健康。统计资料显示，因各类疾病死亡的人群中，45%可归于纤维化。

尽管纤维化疾病发病率和死亡率居高不下，但目前针对纤维化疾病大多集中在预防、器官移植等非药物治疗，其它药物辅助治疗，甚至姑息治疗，纤维化疾病可选择的特效治疗药物极少，远远不能满足临床上真正有效和安全的需求。如：马凡综合征（Marfansyndrome），一种由常染色体上编码糖蛋白微纤蛋白（FBN1）基因突变引起的遗传性结缔组织疾病，患者四肢细长不均匀，并伴有心血管系统异常，同时累及骨骼、神经系统、皮肤和眼部等重要组织器官，多数病人死于主动脉瘤破裂和心力衰竭，只能存活至中年，但目前全球范围内尚无可用于治疗马凡综合征的药物。

另外一种临床上以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为特征，并累及心、肺、肾、消化道等内脏器官的结缔组织病，被称作系统性硬化症（Systemic scleroderma，SSc）。据相关资料统计，全球大约有200万例系统性硬化症患者，常呈缓慢发展，预后不良，高达90%患者可能有不同程度的肺部疤痕，约占死亡病例的35%。目前全球范围内仅有一个治疗药物：尼达尼布（Nintedanib，勃林格殷格翰），该药物于2016年通过欧盟委员会和美国FDA的孤儿药认证的快速通道获批，只对症治疗系统性硬化症相关间质性肺病（SSc-ILD），其上市后的临床治疗效果还有待评价。而系统性硬化症是尼达尼布发展的新适应症，最初尼达尼布是用于治疗一种最为严重的肺部纤维化疾病：特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonaryfibrosis，IPF）的药物。

特发性肺纤维化，是一种未知原因的慢性、进行性、纤维化性的间质性肺疾病，被称为类肿瘤疾病，并常常伴有急性加重，诊断后的平均生存期仅2.8年，死亡率高于除肺癌之外的全部肿瘤疾病。目前全球范围内治疗特发性肺纤维化的药物只有吡非尼酮（Pirfenidone，罗氏）和尼达尼布，是2014年FDA经快速审批通道进入市场的孤儿药，也是2015年美国胸科协会/欧洲呼吸协会/日本胸科协会/拉丁美洲胸科协会联合发布的《特发性肺纤维化临床治疗推荐指南》中推荐等级最高（条件推荐）的两大药物。其中吡非尼酮是一个抗纤维化、抗炎和抗氧化性的化合物，其确切的作用机制尚未完全清楚。尼达尼布是一种多重酪氨酸激酶抑制剂，作用于调控纤维化信号通路中的三个重要细胞因子受体：成纤维细胞生长因子受体（FGFR）、血小板源生长因子受体（PDGFR）和血管内皮生长因子受体（VEGFR），尼达尼布能够与受体上的ATP结合位点特异性结合，阻止受体的磷酸化激活，从而阻断其介导的信号通路转导。吡非尼酮和尼达尼布的出现填补了肺纤维化治疗领域的空白，但是Global Data分析（2016年）认为，这两个药物仅用于延缓病患肺功能下降的速度，不是有效中止肺部病变进程的药物，临床研究结果也显示对死亡率并没有很好的改善，远不满足肺纤维化治疗的需求。另外，由于两个药物均是小分子化合物，不适于孕妇或伴有肝脏问题的患者群体使用，需要较大口服剂量才能实现有效的肺部药物浓度，并有明显的不良胃肠道反应，吡非尼酮还会导致严重的光敏反应和皮疹，在临床使用时，病人用药依从性较差。

除上述三种适应症，纤维化疾病还涉及其它重要器官如肝，肾，心和眼部等，纤维化疾病患者往往出现器官组织受累，在无有效延缓或阻断纤维化病变进程的药物时，最终治疗选项局限于供体困难且风险较高的器官移植，治疗昂贵，也带来极重的社会经济负担。而已有药物的临床治疗效果和安全性无法满足治疗需求，未来纤维化疾病确诊病例仍会增加，因此，亟需深入研究纤维化疾病发生机制，充分结合创新的医药发展趋势，开发新的能够有效阻断纤维化疾病且临床使用安全的治疗药物。

纤维化是由反复损伤或较大损伤导致炎症而逐渐向纤维化发展的病理过程，发病机制可大致分为三个阶段：第一阶段是损伤期和止血期，由感染、毒素、药物、外伤等引起上皮或内皮细胞损伤，触发凝血反应，循环血液中的血小板接触损伤血管暴露的胶原纤维而被激活，释放血小板因子，形成纤维蛋白凝块确保快速止血；激活的血小板同时释放多种细胞因子，如血小板源生长因子（PDGF），趋化因子及转化生长因子β（TGF-β）。第二阶段为炎症和增殖期，即再生阶段，在趋化因子介导下炎性细胞向损伤部位趋化并聚集，骨髓干细胞活化为巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞，分泌多种细胞因子（如IL-13、IL-17、TGF-β等）促进免疫修复和炎症反应；上皮和先天免疫细胞来源的细胞因子能够激活特异性免疫反应，进一步促进炎症和免疫修复。炎症和免疫介质（细胞因子、趋化因子、自由基等）激活静止的成纤维细胞，刺激胞外基质的胶原合成，促进其分化为肌成纤维细胞。第三阶段为成熟期，即组织重构或纤维化，正常情况是最终血管生成，创口收缩，组织再生，但当有害刺激持续存在，炎症反应和慢性愈合反应加剧，反复进行组织损伤—修复—再生反应，肌成纤维细胞持续被激活，分泌更多胞外基质并发生沉积，最终导致组织增厚和重塑紊乱，形成纤维化。

纤维化发生机制复杂，涉及炎症反应、氧化应激、免疫应答和纤维化发生相关的多种细胞因子及其介导的信号通路。发挥主要功能的细胞因子包括IL-1β，TNF-α，IL-13，PDGF和TGF-β等。其中，IL-1β能够通过与胞外基质结合激活TGF-β前体而间接促进或直接调控胞外胶原合成，促进成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，还可通过FAK/rac1/NOX/ROS信号通路调控成纤维细胞中胞外基质合成，与结缔组织生长因子CCN2结合促进纤维化发生。TNF-α和IL-1β都是促进炎症调控因子，能够加剧实质细胞损伤，通过TGF-β信号通路诱导上皮间质转化和肌成纤维细胞激活。TNF-α和IL-1β也能够促进成纤维细胞中的自分泌生长因子IL-6的活性。IL-13是2型辅助性T细胞（Th2细胞）分泌的细胞因子，能够通过整合素β1，IL-6和趋化因子MCP-1促进成纤维细胞增殖，表达IL-13的Th2细胞还会刺激巨噬细胞分泌TGF-β前体，IL-13再通过金属基质蛋白酶和组织蛋白酶等相关蛋白酶水解途径激活TGF-β。PDGF是成纤维细胞的有丝分裂原，通过刺激成纤维细胞增殖、迁移、转变产生更多的肌成纤维细胞，同时刺激胶原合成。TGF-β能够直接诱导成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，促进胶原表达和沉积，而分泌胞外基质的肌成纤维细胞是所有纤维化疾病的最终结果。

以上所述细胞因子可由多种类型细胞分泌，或通过炎症反应、免疫应答间接调控，或直接激活TGF-β信号通路促进纤维化发生。因此，TGF-β被认为是纤维化调控中最关键的细胞因子。已有大量报道证实纤维化疾病与细胞因子TGF-β及其下游信号通路的异常调控紧密相关，公开报道的与TGF-β信号通路相关的纤维化疾病包括类风湿性关节炎，肺纤维化，肝纤维化，肝硬化，肾纤维化，骨髓纤维化，囊性纤维化，心肌纤维化，硬皮病，结节病，瘢痕疙瘩，烧伤致增生性瘢痕，增生性视网膜病变，青光眼，白内障，晶状体后囊混浊，血管成形术、血管手术或血管损伤后血管再狭窄，马凡综合症等。研究表明，在多种疾病动物模型中，对TGF-β信号通路的抑制均能延缓纤维化进程。

随着近30年来对纤维化疾病相关机制的深入研究，基于纤维化发生涉及的多个细胞因子及其激活的胞内信号通路的分子机制，这些通路中各主要节点成为目前全球范围内的在研防治纤维化药物的主要靶点。由于纤维化涉及细胞因子众多，寻找最有效的靶标因子是治疗纤维化疾病的关键，鉴于TGF-β信号通路在纤维化疾病中的重要作用，以TGF-β信号通路作为药物靶点有望成为阻断纤维化疾病的理想药物。

哺乳动物TGF-β包括三种亚型，分别为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β1是组织中含量最高，分布最广的亚型，也是最主要促进组织纤维化的因子。TGF-β1 在体内是以无活性的前体蛋白（Pre-pro-TGF-β1）形式产生，只有经过一系列酶解和构象变化，才可释放具有生物活性的TGF-β1，主要通过激活Smad家族蛋白的下游信号通路而促进纤维化发生。基于其信号激活和转导机制，应用多肽合成技术制备或模拟TGF-β1发挥功能所需的关键序列，阻断TGF-β1分泌、活化和信号转导，能够从关键节点上阻抑最关键的纤维化调控信号通路，从而有效地抑制纤维化病理过程的发生发展。

已有研究表明实验条件下，多肽KRFK，CSVTCG，YRVRFLAKENVTQDAEDN和CNLAVAAASHIYQNQFVQ能够抑制TGF-β信号通路转导，从而延缓纤维化进程。但在实际应用过程中，多肽存在溶解度低和稳定性差的问题，极大影响多肽成药性，在制备防治纤维化疾病药物的应用方面还需要在其理化性质方面有较高的提升。本发明基于此，在其中一种多肽序列基础上，进行氨基酸删除、替换、添加以发掘最有效的活性片段，并在此基础上经过化学修饰，提高多肽溶解度，增加多肽稳定性，延长其半衰期，提高生物活性，降低毒副作用，以增强多肽药物的成药性，最终应用于制备临床安全有效的预防和治疗纤维化疾病的药物。

发明内容

在本发明针对目前缺乏临床使用有效且安全的预防和治疗纤维化疾病药物的现状，提供一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物的在制备预防或治疗纤维化疾病中的应用。

本发明所述的多肽是指由氨基酸通过肽键相连构成的一类化合物，是不限于氨基酸数目的产物。

本发明所述的多肽SEQ ID NO：1能够抑制TGF-β信号通路转导，使炎性细胞浸润减少，细胞外基质蛋白合成降低，从而抑制炎症和纤维化反应，达到预防和治疗纤维化疾病的目的。

本发明所述的对多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列进行氨基酸缺失、添加、替换或修饰的目的是为了使其适于不偏离本发明在制备预防或治疗纤维化疾病中的应用。

本发明提供的一类多肽片段是多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列进行氨基酸缺失后得到的多肽片段，其可以是在多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列的氨基端、羧基端或者氨基酸序列内部，分别进行氨基酸缺失；也可以是在多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列的氨基端和羧基端，同时进行氨基酸缺失；也可以是在多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列的氨基端和序列内部，进行氨基酸缺失；也可以是在多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列的羧基端和序列内部，进行氨基酸缺失；也可以是在多肽SEQ ID NO：1的氨基酸序列的氨基端、羧基端和序列内部，同时进行氨基酸缺失。本发明所述的氨基酸缺失的数目在12个氨基酸以内，包括12个氨基酸，多肽片段的氨基酸数目可以是6个至17个之内的任一种，包括6个和17个。

本发明所述的一类多肽片段的衍生物是针对SEQ ID NO：1的多肽片段的氨基酸序列，进行氨基酸替换或/和添加后产生的衍生物。本发明所述的一类多肽的衍生物是针对SEQ ID NO：1的氨基酸序列，进行氨基酸替换或/和添加后产生的衍生物。

本发明所述的氨基酸替换是指使用其它构象或其它种类的氨基酸取代SEQ IDNO：1的多肽片段或者SEQ ID NO：1的氨基酸序列中的某个氨基酸。

本发明所述的氨基酸添加是指在SEQ ID NO：1的多肽片段或者SEQ ID NO：1的氨基酸序列中的任意氨基酸位置加入氨基酸。

本发明所述的氨基酸替换和氨基酸添加可以分别进行，也可以同时进行，可以在同一氨基酸位置进行，也可以在不同氨基酸位置进行。

本发明所述的氨基酸位置是指在多肽的氨基酸序列中，由氨基端向羧基端依次排列的氨基酸所在的位置数，但氨基酸位置是相对的，当氨基酸序列中进行氨基酸缺失或添加时，氨基酸的位置可能发生变化，这种变化可以由本领域技术人员确定。

本发明所述的用于替换或/和添加的氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸，其中，天然氨基酸指自然界存在的氨基酸，非天然氨基酸包括D型氨基酸及其它人工合成的氨基酸。

本发明所述的一类多肽片段的衍生物中，其中进行氨基酸替换得到的衍生物，可以替换的氨基酸数目是6个以内，包括6个，其中进行氨基酸添加得到的衍生物，可以添加的氨基酸数目是6个以内，包括6个。

本发明提供的衍生物是指多肽的一种变型，在本发明中可以是对多肽序列进行氨基酸替换或添加后的产物，也可以是在多肽分子主链或侧链末端的氨基、羧基、巯基、酚羟基、咪唑基、胍基、吲哚基、甲硫基等作为修饰位点进行化学修饰后的产物。

本发明所述的化学修饰是在多肽水平上，使用合适的修饰方法和修饰剂对其进行化学修饰，使修饰后的多肽类药物的溶解度提高，稳定性增加，半衰期延长，具体可由本领域技术人员以常规方式确定。所述的化学修饰能够改变肽链的主链结构或侧链基团，包括乙酰化、酰胺化、糖基化、聚乙二醇（PEG）修饰、脂肪酸修饰及本领域已知的其它多肽修饰技术。

本发明所述的乙酰化和酰胺化是多肽常用的主链末端修饰方法，通常是在多肽主链N端乙酰化，多肽主链C端酰胺化。

本发明所述的糖基化修饰是指将糖结构与蛋白质多肽分子中某些特殊功能团以共价键相连接，包括N-糖基化、O-糖基化、S-糖基化、C-糖基化以及糖基磷脂酰肌醇修饰等。所述的N-糖基化是通过天冬酰胺使侧链的酰胺氮进行连接，O-糖基化是与丝氨酸或苏氨酸残基上的氧相连。所述的糖结构包括各种单糖、寡糖和多糖。

本发明所述的PEG修饰是指以多肽主链氨基、侧链氨基、主链羧基、侧链羧基、咪唑基、巯基及羟基等官能团为修饰位点选择相应类型的PEG进行修饰。所述的PEG是由环氧乙烷聚合的大分子聚合物，不限结构，也不限分子量。所述PEG修饰类型包括直链PEG，支链PEG，同双官能团PEG衍生物，异官能团双取代PEG衍生物和多臂官能团PEG衍生物等。

本发明所述的脂肪酸修饰是指将脂肪酸结构与蛋白质多肽分子中的某些特殊官能团以共价连接，包括氨基、羧基、巯基和羟基等的修饰。脂肪酸修饰可分为不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸修饰，饱和脂肪酸主要以肉豆蔻酸、棕榈酸进行修饰；不饱和脂肪酸修饰主要是以油酸、亚油酸等进行修饰。

本发明所述的多肽修饰可以使用本领域技术人员所熟知的方法。本发明所述的修饰目的是为了改变多肽序列的理化性质，提高多肽的成药性，但修饰后的多肽仍能够抑制TGF-β信号转导。

本发明所述的抑制TGF-β信号通路转导是指在TGF-β信号通路激活的情况下，使用本发明所述的一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物抑制TGF-β的活化，受体的磷酸化，TGF-β信号通路中蛋白不限形式的激活，以及下游调控基因的转录和表达，可由本领域技术人员以常规方式确定。

本发明所述的一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物可作为活性成分制备预防或治疗纤维化药物。其中，所述的预防或治疗纤维化药物中包含预防或治疗的安全和有效量的一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物的一种或多种。预防或治疗的安全和有效量是指在合理的医学判断范围内，给予所需对象足以有效且可避免严重副作用的活性成分含量。虽然其安全和有效量随如下因素变化：所选择的多肽（例如，考虑多肽的结构、稳定性和半衰期）；选择的给药途径；待治疗的病症及严重程度；待治疗对象的年龄、体型、体重和身体状况；待治疗对象的病史；治疗持续时间；期望的治疗效果及类似因素，但可由本领域技术人员以常规方式确定。

本发明所述“预防”是指在可能的促纤维因素的存在下，使用后防止或降低纤维化的产生。本发明所述“治疗”是指降低纤维化的程度，或者治愈纤维化使之正常化，或者减缓纤维化的进程。

本发明所提供的纤维化疾病是由于TGF-β细胞因子及其信号通路过度激活所导致的，本领域专业研究结果公认的纤维化疾病包括但不限于类风湿性关节炎，肺纤维化，肝纤维化，肝硬化，肾纤维化，骨髓纤维化，囊性纤维化，心肌纤维化，硬皮病，结节病，瘢痕疙瘩，烧伤致增生性瘢痕，增生性视网膜病变，青光眼，白内障，晶状体后囊混浊，血管成形术、血管手术或血管损伤后血管再狭窄，马凡综合症等。

本发明所述的肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期改变。肺组织中肺泡巨噬细胞，中性粒细胞，肺泡上皮细胞和成纤维细胞均广泛表达TGF-β前体，在上皮细胞受损后TGF-β激活从促进肺泡巨噬细胞和成纤维细胞增殖并转化为肌成纤维细胞，同时诱导上皮间质转化，最终使胞外基质异常增多而沉积，肺纤维化是正常的肺泡组织被损坏后经异常修复导致的疤痕形成。本发明所述的肺纤维化可以为特发性肺纤维化，即原因不明的肺纤维化；也可以为继发性的肺纤维化，既多种病因引起的肺纤维化，所述病因可以是职业性粉尘（SiO2等）、放射性损伤、自发免疫疾病、药物副作用（博来霉素等）、慢性肺感染（肺结核）、急性肺损伤等。本发明所述的肺纤维化包括过敏性肺炎，放射性诱导的肺纤维化，博来霉素诱导的肺纤维化，特发性肺纤维化，矽肺，石棉肺和肺结核。所述肺纤维化可以表现为肺部炎症尤其是间质性肺炎、肺功能退化和肺实变（如肺间质形成大量纤维结缔组织和肺结构紊乱）中的一种或多种。

本发明所述的类风湿关节炎是一种慢性的，以滑膜炎为主的炎症性疾病，常伴有关节外器官受累，可导致关节畸形及功能丧失。滑膜组织中有大量过度表达和激活的细胞因子，其中TGF-β在类风湿关节炎发生前异常激活，招募间充质干细胞至软骨下骨骨髓，导致破骨细胞骨吸收和未偶联骨的骨吸收和骨形成，使上覆关节软骨退化，关节损伤和破坏。

本发明所述的骨髓纤维化是一种由于骨髓造血组织中胶原增生，纤维组织严重影响造血功能所引起的骨髓增生性疾病。TGF-β在骨髓中血小板、巨核细胞和骨髓细胞中广泛表达，促进胶原和纤连蛋白的合成，抑制分解胶原的基质金属蛋白酶，并促进金属蛋白酶抑制子的合成，最终导致胶原沉积。TGF-β还可能造成血管内皮细胞增殖和骨髓微血管生长。

本发明所述的系统性硬化症是临床上以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为特征，并累及心、肺、肾、消化道等内脏器官的结缔组织病。TGF-β能够促进皮肤成纤维细胞胞外基质的过度沉积，同时促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。

本发明所述的烧伤致增生性瘢痕是烧伤患者创面愈合后严重后遗症，是一种不具备正常皮肤组织结构及生理功能的，失去正常组织活力的、异常的、不健全的组织，涉及机制复杂，研究发现在烧伤后的瘢痕中的角质细胞中TGF-β的表达量较高，另外TGF-β及其下游调控因子结缔组织生长因子，核心蛋白聚糖和结合蛋白P311在伤口愈合和瘢痕形成过程中起重要作用。

本发明所述的囊性纤维化是一种遗传性外分泌腺疾病，主要影响胃肠道和呼吸系统。囊性纤维化患者与正常群体相比TGF-β1显著增加，肌成纤维细胞活化明显，其机制涉及机械刺激导致激活的TGF-β，促进上皮间质转化，内皮间质转化，成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，最终导致的胞外基质分泌增加，胶原沉积和组织挛缩。

本发明所述的结节病是一种非干酪样坏死性上皮细胞肉芽肿炎症性疾病，以侵犯肺实质为主，并累及全身多脏器，如淋巴结、皮肤、关节、肝、肾及心脏等组织。其病因不完全清楚，但主要涉及在肉芽肿瘤内或周边炎性细胞释放大量细胞因子和生长因子如 TGF-β。

本发明所述的心肌纤维化是由中至重度的冠状动脉粥样硬化性狭窄引起心肌纤维持续性和（或）反复加重的心肌缺血缺氧所产生的结果，导致逐渐发展为心力衰竭的慢性缺血性心脏病。TGF-β能够促进心肌成纤维细胞和纤维细胞转化为肌成纤维细胞、上皮间质转化和内皮间质转变，增加胞外基质合成，还能促进结缔组织生长因子的表达促进纤维化发生。

本发明所述的肝纤维化是一个病理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生，纤维化的过程长期持续会发展为肝硬化。肝硬化是慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。TGF-β信号通路参与肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌整个病理过程。正常情况在肝细胞中，TGF-β能够抑制细胞生长和促进凋亡的作用，慢性肝损伤后中TGF-β过度激活导致肝星状细胞向肌成纤维细胞转化，胞外基质过度沉积，大量肝细胞死亡产生炎症和氧化应激而产生纤维化直至肝硬化。

本发明所述的肾纤维化是慢性肾病中关键且不可逆的过程，导致肾脏不可逆的损伤，TGF-β能够刺激肾小管上皮细胞胶原合成，并通过上皮间质转化诱导肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转化，从而导致肾纤维化。本发明所述的肾纤维化可以由药物中毒、高血压、糖尿病、持续感冒、感染等致病因素引发。

本发明所述的青光眼是由于眼内压增高而引起视盘凹陷、视野缺损，最终能够导致失明的严重眼病。眼压增高是由于胞外基质沉积所导致的由小梁网途径的房水外流排出系统发生病变、房水流出阻力增加。来源于房水的TGF-β可局部诱导小梁网细胞表达粘连蛋白等多种胞外基质，打破胞外基质的合成和分解平衡导致胞外基质沉积。

本发明所述的白内障是各种原因如老化，遗传，局部营养障碍，免疫与代谢异常，外伤，中毒，辐射等，引起的晶状体代谢紊乱，导致晶状体蛋白质变性而发生混浊。晶状体后囊混浊是白内障行囊外摘除术后最常见的并发症。白内障术后晶状体后囊混浊是术中残留的晶状体上皮细胞的异常生长和变性纤维化所致。TGF-β诱导的晶状体上皮间质转化是晶状体后囊混浊和纤维的白内障的主要原因。

本发明所述的增生性玻璃体视网膜病变：是孔源性视网膜脱离术后视网膜表面和玻璃体后面广泛纤维增殖膜收缩、牵拉而引起的再次视网膜脱离。纤维增殖膜由视网膜色素上皮细胞，成纤维细胞，胶质细胞和巨噬细胞构成。TGF-β在玻璃体、视网膜下积液和增殖膜中过度表达，诱导视网膜色素上皮细胞迁移、增殖，并转换为肌成纤维细胞，及神经胶质细胞的增生和收缩。

本发明所述的瘢痕疙瘩是皮肤损伤愈合过程中，胶原合成代谢机能失去正常的约束控制，持续处于亢进状态，以致胶原纤维过度增生的结果，又称为结缔组织增生症。TGF-β刺激成纤维细胞增殖，增加基质蛋白酶抑制剂的合成和活性，激活结缔组织生长因子促进胶原沉积和结缔增生。

本发明所述的血管再狭窄是指血管成形术、血管手术或血管损伤后血管愈合反应所造成的平滑肌增生、胶原和瘢痕组织增生，导致局部血管腔的再次狭窄。TGF-β能够调控下游Smad和ERK/MAPK信号通路促进血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成，促进胞外基质蛋白分泌而加强内膜增生。

本发明所述的马凡综合征是一种遗传性结缔组织疾病，患病特征为四肢、手指、脚趾细长不匀称，身高明显超出常人，伴有心血管系统异常，同时可影响包括肺、眼、硬脊膜、硬颚等其他器官。马方综合征由15号染色体上编码糖蛋白微纤蛋白的微纤蛋白-1（FBN1）基因突变引起，阻碍了微纤丝的形成，由于微纤蛋白与潜在TGF-β结合蛋白的相互作用可用于稳定非活性的TGF-β潜在复合物，当微纤蛋白异常时就导致TGF-β过度激活。受累的胞外基质组成和异常的信号转导共同决定马凡综合征的表型。

本发明所述的治疗对象是指患有上述疾病和病症或可能患有上述疾病和病症的人或动物。

本发明所述的预防和治疗纤维化疾病的应用是指所述一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物可作为单一活性成分，或者互相联用，或者与其他具有预防或治疗纤维化活性的中药、化合物或生物制剂联合作为活性成分。

本发明所述的一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物，可以直接作为原料药使用，也可以通过药学上可接受的载体来制备预防或治疗纤维化疾病的药物。其中，所述药学上可接受的载体可根据药物剂型进行常规选择，例如稀释剂、填充剂、赋形剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、泡腾剂、表面活性剂、吸收促进剂、润滑剂、吸附载体、缓释微球、埋植剂、原位微球、脂质体、微乳、原位水凝胶、纳米粒、蛋白酶抑制剂、生物黏附剂、融合蛋白、抗体、多肽等。

本发明所述的一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物的剂型没有特别限制，为本领域常规剂型，较佳地是固体、半固体或液体，也可以是水溶液、非水溶液或混悬液，可以为片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、眼用制剂、吸入制剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、散剂、涂剂、植入剂、洗剂等。

本发明所述的一类多肽片段，一类多肽片段的衍生物，一类多肽衍生物，及上述片段及其衍生物经化学修饰改造后的多肽衍生物可以通过任何合适的给药途径给药，较佳地为注射给药，也可以通过口服给药、肺部给药、鼻腔给药、经皮给药和眼部给药等。其中，所述的注射给药的方式较佳地包括：静脉注射或静脉滴注、腹腔注射、皮下注射及肌肉注射等。

在本发明的一个较佳实例中，所选多肽为SEQ ID NO：1的片段，为序列表中SEQ IDNO：2（简称N2），所选的多肽衍生物SEQ ID NO：3（简称N3）是N2化学修饰后的产物，是将PEG2通过酰胺键连接至多肽N-末端。

在本发明的一个较佳实例中，所选多肽的剂型为水溶液，溶剂为无菌的0.01 MPBS缓冲液。

在本发明的一个较佳实例中，所选的治疗对象为博来霉素（Bleomycin，BLM）所诱导的肺纤维化大鼠，所选大鼠来源为无特定病原体级（Specific Pathogen Free，SPF）的Sprague–Dawley（SD）大鼠，大鼠体重为200~250g。

在本发明的一个较佳实例中，所选多肽N2和N3的给药途径为微创气管内灌注方式，且多肽N2和N3的较佳给药剂量均为2.5 mg/kg。

在本发明的一个较佳实例中，与气管内仅灌注博来霉素相比，大鼠气管内共同灌注博来霉素和多肽N2或者N3后，使炎性细胞浸润减少，细胞外基质蛋白合成降低，胶原沉积减少，从而抑制由博来霉素诱导的大鼠肺部炎症和纤维化。

本发明的有益效果在于：本发明提供了多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物在制备预防和治疗纤维化药物中的用途。

附图说明

图1 实验动物肺系数。

图2实验动物病理切片图。

图3实验动物病理切片评分结果。

图4实验动物支气管肺泡灌洗液中炎性细胞分类计数。

图5实验动物肺组织匀浆胞外基质蛋白表达图。

图6实验动物肺组织匀浆胞外基质蛋白半定量分析图。

图7实验动物肺组织羟脯氨酸含量。

图8实验动物肺组织匀浆Smad蛋白表达图。

图9实验动物肺组织匀浆Smad蛋白半定量分析图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步详细说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照本领域常规方法和条件或商品说明书进行。

实施例1 多肽和大鼠肺纤维化模型

1. 主要实验材料和动物

博来霉素由日本化药株式会社生产（批号650472）；舒泰50麻醉剂由法国维克有限公司生产。

多肽N2和N3由成都凯捷生物医药科技发展有限公司合成。N2序列为：Tyr-Arg-Val-Arg-Phe-Leu-Ala-Lys-Glu-Asn-Val-Thr-Gln-Asp-Ala-Glu-Asp（序列如序列表中SEQID NO：2所示）。N3序列为：PEG2-Tyr-Arg-Val-Arg-Phe-Leu-Ala-Lys-Glu-Asn-Val-Thr-Gln-Asp-Ala-Glu-Asp（PEG2通过酰胺键连接至多肽N-末端，序列如序列表中SEQ ID NO：3所示）

SPF级SD大鼠购自重庆市大坪医院，雄性，体重200-250g。

2. 大鼠肺纤维化模型

给药前称重，肌肉注射舒泰麻醉液，剂量为65 mg/kg，待大鼠进入Ⅲ期麻醉后将实验大鼠以斜侧卧位保定，用12号灌胃针从口腔经声门插入大鼠气管并灌注药物。实验动物气管内给药后第1日至第7日正常饲喂，每天定时称重，不限制饲料、饮水。

空白对照组大鼠麻醉后不做任何处理；模型组（博来霉素）大鼠气管内灌注博来霉素（3 mg/kg）；PBS对照组大鼠气管内灌注等体积的无菌PBS缓冲液（0.01 M，pH=9.5）；药物对照组大鼠气管内灌注2.5 mg/kg的多肽N2（溶剂为0.01 M，pH=9.5的PBS缓冲液）；N2治疗组大鼠气管内同时灌注2.5 mg/kg的多肽N2和3 mg/kg博来霉素，N3治疗组大鼠气管内同时灌注2.5 mg/kg的多肽N3和3 mg/kg博来霉素。

实施例2 检测大鼠的肺系数

取实施例1中的大鼠，称取体重后过量麻醉处死大鼠，取下大鼠两侧肺组织，仔细去除肺组织周围结缔组织，经生理盐水洗涤后用滤纸吸干，电子天平称取全肺湿重。电子天平称取全肺湿重后，根据公式计算肺系数，肺系数=肺质量（mg）/体重（g）（结果见图1）。结果显示：与空白对照组、PBS对照组及药物对照组大鼠相比，博来霉素组大鼠左肺、右肺及全肺的肺系数均显著增高（*：P<0.01），提示大鼠肺组织发生病变；与博来霉素组大鼠相比，N2和N3治疗组大鼠左肺、右肺及全肺的肺系数均显著降低（#：P<0.05），提示N2和N3治疗组大鼠肺组织病变减轻。

实施例3大鼠肺组织病理切片HE染色

取实施例1大鼠的肺组织用4%多聚甲醛固定后石蜡包埋，在包埋肺组织的蜡块最大横截面切片，苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理学变化，在光学显微镜下（低倍镜）观察肺组织病理学改变，放大倍数100倍（结果见图2）。结果显示：PBS 对照组及药物对照组的大鼠肺泡形态正常，肺泡壁纤细，间质中有极少量的炎性细胞浸润；模型组大鼠肺组织有较多的小片实变区，实变区肺泡壁增厚，间隔断裂，融合形成肺大泡，有较多肺泡结构消失，间质有较多的炎性细胞浸润；与模型组对比，N2和N3治疗组大鼠的肺组织肺泡结构较为完整，有少量的小片实变区，间质有少量的炎性细胞浸润。

参照Szapie等提供的方法评价肺泡炎程度，根据病变范围的不同可分为0～3 级，对应0~3分，肺泡炎程度判断使用的评价指标如下：0级：未发生肺泡炎；1级轻度肺泡炎，表现为肺泡间隔稍增宽，单核细胞的浸润，以及靠近胸膜部或仅限于局部，病变范围小于20%，而无肺泡结构破坏；2 级中度肺泡炎，病变范围为20%～50%，而近胸膜部相对严重；3级重度肺泡炎，呈弥漫性分布，其病变范围超过50%，偶可见实变。炎症病理评分（结果见图3）结果显示：与空白对照组、PBS 对照组及药物对照组大鼠相比，博来霉素组大鼠出现显著的炎症病理改变（*：P<0.01），与BLM 组大鼠相比，N2和N3治疗组大鼠肺组织炎症病变程度均显著减轻（#：P<0.01），结果表明多肽N2和N3能够抑制由博来霉素所致的大鼠肺部炎症。

实施例4 瑞氏-姬姆萨染色法检测大鼠支气管肺泡灌注液中炎性细胞数量的变化

取实施例1大鼠，颈部解剖，暴露气管进行插管，经插管灌注预冷的生理盐水，反复灌洗，收集支气管肺泡灌洗液，离心重悬，另取5μl细胞重悬液涂于载玻片上，待细胞悬液自然晾干后，加适量甲醇作用30 s后进行瑞氏-姬姆萨染色，显微镜下观察进行细胞分类计数。计数方法为：根据100个完整细胞中巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的各自占有比例，用炎性细胞总数算出巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的数量（结果见图4）。与空白对照组、PBS对照组和药物对照组大鼠相比，博来霉素组大鼠巨噬细胞、异型核细胞和淋巴细胞数量均显著升高（*：P<0.01）；与博来霉素组大鼠相比，N2和N3治疗组大鼠巨噬细胞、异型核细胞及淋巴细胞数量均显著减少（#：P<0.05），说明多肽N2和N3能够博来霉素所致的大鼠肺部炎症。

实施例5 免疫印迹检测大鼠肺组织匀浆中胞外基质蛋白含量

取实施例1大鼠的肺组织，使用RIPA裂解液（100mg肺组织对应1mL裂解液）进行组织匀浆，离心取上清后，采用BCA方法测定蛋白浓度，取等量的蛋白样品，使用anti-GAPDH，anti-Fibronectin，anti-CollagenⅠ和anti-Collagen Ⅲ抗体进行蛋白免疫印迹（Westernblot）实验（结果见图5）。

使用GAPDH 作为内参照，与空白对照组，PBS 对照组和药物对照组相比，BLM 组大鼠的肺组织中Fibronectin、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达条带亮度明显增加，表明博来霉素引发大鼠肺部组织中胞外基质沉积；而与博来霉素组相比，治疗组大鼠的肺组织中Fibronectin、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达条带亮度几乎恢复至对照组水平，表明多肽N2和N3能够明显降低博来霉素所致的肺纤维化。

使用Image pro plus 6.0图像分析软件对各个条带的灰度值进行检测并分析（结果见图6），结果显示：与空白对照组、PBS对照组和药物对照组大鼠相比，博来霉素组大鼠肺组织中Fibronectin、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白水平均显著增高（*：P<0.01）；与博来霉素组大鼠相比，N2和N3治疗组大鼠Fibronectin、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白水平均显著降低（#：P<0.05）。灰度值检测支持了上述描述。

实施例8 ELISA法检测大鼠肺组织匀浆中羟脯氨酸含量

取实施例1大鼠，采用博士德羟脯氨酸碱水解法检测试剂盒（货号：A030）检测肺组织匀浆中羟脯氨酸的含量（结果见图7）。结果显示：与空白对照组、PBS对照组以及药物对照组相比，博来霉素组肺组织中的羟脯氨酸的含量显著升高（*：P<0.01），表明BLM 引发大鼠肺部胶原纤维沉积；与博来霉素组相比，N2和N3治疗组的肺组织中羟脯氨酸的含量显著降低（#：P<0.05），表明多肽N2和N3对BLM 诱导的肺纤维化具有显著抑制作用。

实施例9免疫印迹检测大鼠肺组织匀浆Smad蛋白含量

取实施例1大鼠的肺组织，使用RIPA裂解液（100mg肺组织对应1mL裂解液）进行组织匀浆，离心取上清后，采用BCA方法测定蛋白浓度，取等量的蛋白样品，使用anti-GAPDH，anti-p-Smad2和anti- p-Smad3抗体进行蛋白免疫印迹（Western blot）实验（结果见图8）。

使用GAPDH 作为内参照，与空白对照组，PBS 对照组和药物对照组相比，BLM 组大鼠的肺组织中p-Smad2 （磷酸化的Smad2）和p-Smad3（磷酸化的Smad3）的表达条带亮度明显增加，表明博来霉素引发大鼠肺部组织中TGF-β/Smad 信号通路转导；而与博来霉素组相比，N2和N3治疗组大鼠的肺组织中p-Smad2和p-Smad3的表达条带亮度几乎恢复至对照组水平，表明多肽N2和N3能够明显抑制博来霉素所致的肺部组织中TGF-β/Smad 信号通路转导。

使用Image pro plus 6.0图像分析软件对各个条带的灰度值进行检测并分析（结果见图9），结果显示：与空白对照组、PBS对照组和药物对照组大鼠相比，博来霉素组大鼠肺组织中p-Smad2和p-Smad3蛋白水平均显著增高（*：P<0.01）；与博来霉素组大鼠相比，N2和N3治疗组大鼠p-Smad2和p-Smad3蛋白水平均显著降低（#：P<0.05）。灰度值检测支持了上述描述。

以上所述仅为本发明专利的实施例，并非因此限制本发明专利的专利范围，凡是利用本发明专利说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明专利的专利保护范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 成都惠泰生物医药有限公司

<120> 多肽及多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用

<130> 2017

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 18

<212> PRT

<213> 人（Homo Sapiens）

<400> 1

Tyr Arg Val Arg Phe Leu Ala Lys Glu Asn Val Thr Gln Asp Ala Glu

1 5 10 15

Asp Asn

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人（Homo Sapiens）

<400> 2

Tyr Arg Val Arg Phe Leu Ala Lys Glu Asn Val Thr Gln Asp Ala Glu

1 5 10 15

Asp

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PEG2通过酰胺键连接至N-末端

<400> 3

PEG2 Tyr Arg Val Arg Phe Leu Ala Lys Glu Asn Val Thr Gln Asp Ala Glu

1 5 10 15

Asp

Claims (29)

1.一类多肽片段在预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述一类多肽片段是对多肽SEQ ID NO：1进行氨基酸缺失后的一类多肽片段。

2.根据权利要求1所述的一类多肽片段，其特征在于：所述的一类多肽片段是在多肽SEQ ID NO：1的氨基端、羧基端或氨基酸序列内部，分别进行氨基酸缺失后的多肽片段。

3.根据权利要求1所述的一类多肽片段，其特征在于：所述的一类多肽片段是在多肽SEQ ID NO：1的氨基端和羧基端，同时进行氨基酸缺失后的多肽片段。

4.根据权利要求1所述的一类多肽片段，其特征在于：所述的一类多肽片段是在多肽SEQ ID NO：1的氨基端和氨基酸序列内部，同时进行氨基酸缺失后的多肽片段。

5.根据权利要求1所述的一类多肽片段，其特征在于：所述的一类多肽片段是在多肽SEQ ID NO：1的羧基端和氨基酸序列内部，同时进行氨基酸缺失后的多肽片段。

6.根据权利要求1所述的一类多肽片段，其特征在于：所述的一类多肽片段是在多肽SEQ ID NO：1的氨基端、羧基端和氨基酸序列内部，同时进行氨基酸缺失后的多肽片段。

7.根据权利要求2-6中任一所述的氨基酸缺失，其特征在于：所述的氨基酸缺失的数目是12个氨基酸以内。

8.一类多肽片段的衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述一类多肽片段的衍生物是对权利要求1所述的多肽片段进行氨基酸添加后的衍生物，或者对权利要求1所述的多肽片段进行氨基酸替换后的衍生物，或者对权利要求1所述的多肽片段同时进行氨基酸添加和替换后的衍生物。

9.根据权利要求8所述的进行氨基酸添加后的衍生物，其特征在于：所述的氨基酸添加后的衍生物是对权利要求1所述的一类多肽片段的氨基酸序列的包括氨基端、羧基端和序列内部的任意氨基酸位置，进行氨基酸添加。

10.根据权利要求8所述的进行氨基酸替换后的衍生物，其特征在于：所述的氨基酸替换后的衍生物是对权利要求1所述的一类多肽片段的氨基酸序列的包括氨基端、羧基端和序列内部的任意氨基酸位置，进行氨基酸替换。

11.根据权利要求8所述的同时进行氨基酸添加和替换后的衍生物，其特征在于：所述的氨基酸添加和替换后的衍生物是对权利要求1所述的一类多肽片段的序列的包括氨基端、羧基端和序列内部的任意氨基酸位置，同时引入氨基酸的添加和替换。

12.根据权利要求9-11中任一所述的用于添加或替换的氨基酸，其特征在于：所述的用于添加或替换的氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸。

13.根据权利要求9-11中任一所述的用于添加或替换的氨基酸，其特征在于：所述的氨基酸添加或替换的数目是6个氨基酸以内。

14.一类多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述一类多肽衍生物是对SEQ ID NO：1进行氨基酸添加后的衍生物，或者对SEQ ID NO：1进行氨基酸替换后的衍生物，或者对SEQ ID NO：1同时进行氨基酸添加和替换后的衍生物。

15.根据权利要求14所述的进行氨基酸添加后的衍生物，其特征在于：所述的氨基酸添加后的衍生物是对SEQ ID NO：1的包括氨基端、羧基端和序列内部的任意氨基酸位置，进行氨基酸添加。

16.根据权利要求14所述的进行氨基酸替换后的衍生物，其特征在于：所述的氨基酸替换后的衍生物是对SEQ ID NO：1的包括氨基端、羧基端和序列内部的任意氨基酸位置，进行氨基酸替换。

17.根据权利要求14所述的同时进行氨基酸添加和替换后的衍生物，其特征在于：所述的氨基酸添加和替换后的衍生物是对SEQ ID NO：1的包括氨基端、羧基端和序列内部的任意氨基酸位置，同时引入氨基酸添加和替换。

18.根据权利要求15-17中任一所述的用于添加或替换的氨基酸，其特征在于：所述的用于添加或替换的氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸。

19.根据权利要求15-17中任一所述的用于添加或替换的氨基酸，其特征在于：所述的氨基酸添加或替换的数目是6个氨基酸以内。

20.一类多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述的一类多肽衍生物是对权利要求1中所述的多肽片段进行化学修饰后产生的衍生物。

21.一类多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述的一类多肽衍生物是对权利要求8中所述的多肽片段的衍生物进行化学修饰后产生的衍生物。

22.一类多肽衍生物在预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述的一类多肽衍生物是对权利要求14中所述的多肽衍生物进行化学修饰后产生的衍生物。

23.根据权利要求20-22中任一所述的化学修饰，其特征在于：所述化学修饰包括但不限于聚乙二醇修饰，脂肪酸修饰，糖基化修饰，乙酰化修饰，酰胺化修饰，磷酸化修饰及已知的其它多肽修饰。

24.根据权利要求1、8、14、20、21或22所述的纤维化疾病，其特征在于：纤维化疾病是由于TGF-β细胞因子及其信号通路过度激活所导致的疾病，包括类风湿性关节炎，肺纤维化，肝纤维化，肝硬化，肾纤维化，骨髓纤维化，心肌纤维化，结节病，系统性硬化症，瘢痕疙瘩，烧伤致增生性瘢痕，增生性视网膜病变，青光眼，白内障，晶状体后囊混浊，血管成形术、血管手术或血管损伤后血管再狭窄，囊性纤维化，马凡综合征。

25.根据权利要求1、8、14、20、21或22所述的多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物，其特征在于：所述多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物的制备方法包括自然提取、酶水解法、发酵法、基因重组表达、化学合成。

26.根据权利要求1、8、14、20、21或22所述的预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物可作为单一活性成分，互相联用或者与其他药物联合作为活性成分。

27.根据权利要求1、8、14、20、21或22所述的预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物所述药学上可接受的载体包括稀释剂、填充剂、赋形剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、泡腾剂、表面活性剂、吸收促进剂、润滑剂、吸附载体、缓释微球、埋植剂、原位微球、脂质体、微乳、原位水凝胶、纳米粒、蛋白酶抑制剂、生物黏附剂、融合蛋白、抗体、多肽。

28.根据权利要求1、8、14、20、21或22所述的预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物的剂型包括片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、眼用制剂、吸入制剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、散剂、涂剂、植入剂、洗剂。

29.根据权利要求1、8、14、20、21或22所述的预防和治疗纤维化疾病中的应用，其特征在于：所述的多肽片段、多肽片段的衍生物和多肽衍生物的给药途径包括口服给药、肺部给药、鼻腔给药、经皮给药、眼部给药、静脉滴注、腹腔注射、皮下注射、肌肉注射。