CN106852938A

CN106852938A - 拟杆菌(Bacteroides)在治疗和预防肥胖相关疾病中的应用

Info

Publication number: CN106852938A
Application number: CN201510907257.XA
Authority: CN
Inventors: 冯强; 张东亚
Original assignee: BGI Shenzhen Co Ltd
Current assignee: BGI Shenzhen Co Ltd
Priority date: 2015-12-09
Filing date: 2015-12-09
Publication date: 2017-06-16

Abstract

本发明公开了一种拟杆菌(Bacteroides)在治疗和预防肥胖相关疾病中的应用，具体地，本发明的拟杆菌用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于选自下组的一种或多种用途：(a)预防和/或治疗肥胖；(b)降低血脂；(c)预防或治疗心血管疾病；和/或(d)预防和/或治疗糖尿病。本发明的拟杆菌能够显著降低体重、降低血脂、降低体脂比。

Description

拟杆菌(Bacteroides)在治疗和预防肥胖相关疾病中的应用

技术领域

本发明属于微生物学领域，具体地，本发明涉及拟杆菌(Bacteroides)在治疗和预防肥胖及其相关疾病中的应用，也涉及包含拟杆菌(Bacteroides)的组合物及其应用。

背景技术

人体内存在大量共生微生物，它们大部分寄居在人的肠道中，数量超过1000万亿(10¹⁴数量级)，是人体细胞总数的10倍以上。在漫长的进化过程中，肠道微生物与人类达成了良好的合作，对人体的营养、代谢和免疫都起着至关重要的作用，许多研究者更多地是将人体肠道微生物群落看作是人体的一个“器官”，或者是人体第二基因组，其中蕴含的海量遗传信息与人类健康密切相关。通过对糖尿病、冠心病、肥胖、结肠癌等数百种疾病近万种样品的研究发现，某些特定的物种与疾病呈现出显著的关联，这些结果在疾病的临床评定和诊断以及后期的干预治疗提供了一个全新的方向。

肥胖症是一种慢性疾病，许多因素都会导致肥胖，其发病起源至今未研究清楚。肥胖同时也是一系列疾病的诱导因子，如高血压、糖尿病、冠心病、胆囊病、骨关节炎、睡眠中呼吸窒息、呼吸失调、子宫瘤、前列腺癌、乳腺癌和结肠癌等。根据NIH的报告，目前约有9700万美国人超重和过度肥胖，其中与过度肥胖相关的II型糖尿病人数达到约1510万人，每年约有20万人死于与肥胖症相关的疾病。

肥胖通常是由于生理或生物化学功能改变而导致的体脂肪过剩。脂肪通常包括中性脂、磷脂和胆固醇。脂肪的增加是由于能量摄入大于能量的消耗。从发病原理上讲，肥胖有两种类型：(a)单纯性肥胖(simple obesity)和(b)继发性肥胖(second obesity)。单纯性肥胖可划分为先天性肥胖(idiopamic obesity)和后天性肥胖(acquired obesity)，单纯性肥胖患者数量可占95％以上的总肥胖数目。先天性肥胖是由大量的脂肪细胞所致，且常见于儿童期肥胖。后天性肥胖是由更大尺寸的脂肪细胞所致，且常见于成年期肥胖。继发性肥胖又被称为症状性肥胖，其通常是由内分泌或新陈代谢疾病所致。

目前有五种治疗肥胖的策略：节食、锻炼、行为治疗、药物治疗和康复手术(therapetltic operation)。采取哪种策略主要视病人的健康危险因子和体重减轻的速度和效果而定，可选择或组合这些策略对肥胖病人进行治疗。其体重减轻的速度和效果受诸如年龄、身高、家族史和危险因子等多个因素的影响。饮食—锻炼疗法，即吃低热量、低脂肪食物和进行有氧锻炼，但这种方法一般认为对普通大众不成功，且需要长期经常性地坚持；去除体内脂肪手术能达到立竿见影的效果，但存在诸多限制，如手术风险、除脂效果难以持久和花费过于昂贵等。

药物治疗是目前主要的临床治疗肥胖及其肥胖相关疾病(如糖尿病)的方法。药物治疗的机制包括抑制食欲、增加能量消耗、刺激脂肪移动、降低甘油三酯合成和抑制脂肪吸收。目前主要的药物为：苯丙醇胺(phenylpropanolamine，PPA)、罗氏鲜(orlistat，XenicalⅢ)和诺美婷(sibutramine，ReductilTM)。某些糖尿病人的高血糖通过饮食和/或锻炼疗法或使用上述治疗化合物仍然不能得到适当控制。对于这些病人，应使用外源胰岛素。对病人来说，使用外源胰岛素是很昂贵和痛苦的方法，还会给病人带来多种并发症。例如，由于没有吃饭或不正常锻炼，胰岛素剂量的计算错误会导致胰岛素响应(低血糖)。此外，使用药物还可能发生对药物的局部或全身过敏或免疫抗性。

目前本领域还没有一种有效的、副作用小的治疗和预防肥胖及其相关疾病的方法和药物。

因此本领域迫切需要开发一种的新的，无毒副作用的，用于治疗和预防肥胖及其相关疾病的药物。

发明内容

本发明的一个目的是提供拟杆菌在治疗和预防肥胖及其相关疾病方面的用途。

本发明的另一目的是提供一种有效的无毒副作用的，用于治疗和预防肥胖及其相关疾病的药品、饮料、食品组合物，或动物饲料组合物。

本发明的另一目的是提供一种降低体重和/或血糖的方法及其应用。

本发明第一方面提供了一种拟杆菌的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于选自下组的一种或多种用途：(a)预防和/或治疗肥胖；(b)降低血脂；(c)预防或治疗心血管疾病；和/或(d)预防和/或治疗糖尿病。

在另一优选例中，所述拟杆菌选自下组：多氏拟杆菌(Bacteroides dorei)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、溶木聚糖拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens)、或其组合。

在另一优选例中，所述多氏拟杆菌选自下组：Bacteroides dorei DSM 17855、Bacteroides dorei JCM 13472、Bacteroides dorei BD1、或其组合。

在另一优选例中，所述卵形拟杆菌选自下组：Bacteroides ovatus ATCC8483、Bacteroides ovatus SD CMC 3f、Bacteroides ovatus RF Cell 1b2、或其组合。

在另一优选例中，所述溶木聚糖拟杆菌选自下组：Bacteroides xylanisolvensXB1A(DSM 18836)、Bacteroides xylanisolvens XB4A、Bacteroides xylanisolvensXB3A、或其组合。

在另一优选例中，所述组合物选自下组：食品组合物、保健组合物、药物组合物、饮料组合物、饲料组合物、或其组合。

在另一优选例中，所述的组合物为口服制剂。

在另一优选例中，所述的组合物为液态制剂、固态制剂、半固态制剂。

在另一优选例中，所述的组合物的剂型选自下组：粉末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、和舌下含片。

在另一优选例中，所述的食品组合物包括乳液制品、溶液制品、粉末制品、或悬浮液制品。

在另一优选例中，所述的食品组合物包括乳品、乳粉、或乳液。

在另一优选例中，所述的液态制剂选自下组：溶液制品或悬浮液制品。

本发明第二方面提供了一种拟杆菌的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于选自下组的一种或多种用途：(i)降低哺乳动物中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平；和/或(ii)改善瘦素抵抗，提高体内对Leptin的敏感性。

在另一优选例中，所述组合物或制剂还独立地或额外地用于选自下组的一种或多种用途：

(iii)抑制哺乳动物的体重增长；

(iv)降低哺乳动物的体脂比(脂肪重量/体重之比)；

(v)降低哺乳动物的血脂水平；

(vi)提高哺乳动物中的高密度脂蛋白(HDLC)的水平；

(vii)降低哺乳动物中的低密度脂蛋白(LDLC)水平。

在另一优选例中，所述哺乳动物包括人、啮齿动物(如大鼠、小鼠)。

在另一优选例中，所述降低哺乳动物的血脂水平包括降低总胆固醇(TC)水平和/或甘油三酯水平。

本发明第三方面提供了一种用于治疗和/或预防肥胖的组合物，所述组合物包括：(i)安全有效量的拟杆菌；和(ii)食品上或药学上可接受的载体；其中，所述拟杆菌选自下组：多氏拟杆菌(Bacteroides dorei)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、溶木聚糖拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens)、或其组合。

在另一优选例中，所述组合物含有1×10-1×10²⁰cfu/mL或cfu/g的拟杆菌，较佳地1×10⁴-1×10¹⁵cfu/mL或cfu/g的拟杆菌，按所述组合物的总体积或总重量计。

在另一优选例中，所述的组合物中，含有0.0001-99wt％，较佳地0.1-90wt％所述的拟杆菌，以所述组合物的总重量计。

在另一优选例中，所述的组合物为单元剂型(一片、一粒胶囊或一小瓶)，每个单元剂型中所述组合物的质量为0.05-5g，较佳地为0.1-1g。

另一优选例中，所述的组合物还含有其它益生菌和/或益生元。

在另一优选例中，所述的益生菌选自下组：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合。

在另一优选例中，所述的益生元选自下组：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、或其组合。

本发明第四方面提供了一种本发明第三方面所述组合物的制法，包括步骤：

将本发明第一方面所述的拟杆菌、与食品上可接受的载体或药学上可接受的载体混合，从而形成本发明第三方面所述的组合物。

在另一优选例中，所述的组合物为口服制剂。

本发明第五方面提供了一种降低体重和/或血脂的方法，给所述对象施用本发明第一方面所述的拟杆菌或本发明第三方面所述的组合物。

在另一优选例中，所述的施用包括口服。

在另一优选例中，所述的施用剂量为0.01-5g/50kg体重/天，较佳地，0.1-2g/50kg体重/天。

在另一优选例中，所述的对象包括哺乳动物，如人。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了灌胃多氏拟杆菌后各组小鼠的体重增长情况。

图2显示了灌胃卵形拟杆菌后各组小鼠的体重增长情况。

图3显示了灌胃溶木聚糖拟杆菌后各组小鼠的体重增长情况。

图4显示了灌胃组合菌后各组小鼠的体重增长情况。

图5显示了灌胃多氏拟杆菌9周后各组小鼠的体脂比。

图6显示了灌胃卵形拟杆菌9周后各组小鼠的体脂比。

图7显示了灌胃溶木聚糖拟杆菌9周后各组小鼠的体脂比。

图8显示了灌胃组合菌9周后各组小鼠的体脂比。

图9显示了灌胃多氏拟杆菌对血脂的影响。

图10显示了灌胃卵形拟杆菌对血脂的影响。

图11显示了灌胃溶木聚糖拟杆菌对血脂的影响。

图12显示了灌胃组合菌对血脂的影响。

图13显示了灌胃多氏拟杆菌对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。

图14显示了灌胃卵形拟杆菌对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。

图15显示了溶木聚糖拟杆菌对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。

图16显示了组合菌对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。

图17显示了灌胃多氏拟杆菌对瘦素(Leptin，LEP)的影响。

图18显示了灌胃卵形拟杆菌对瘦素(Leptin，LEP)的影响。

图19显示了灌胃溶木聚糖拟杆菌对瘦素(Leptin，LEP)的影响。

图20显示了组合菌对瘦素(Leptin，LEP)的影响。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究和实验，意外地发现，拟杆菌(Bacteroides)具有预防和治疗肥胖及其相关疾病(如心血管疾病)的作用，将含有拟杆菌的活性组合物饲喂食实验对象，发现该组合物能够抑制体重增加，降低体脂比，降低血脂，有效减轻心血管及肥胖等病症。在此基础上完成本发明。

如本文所用，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

如本文所用，所述“体脂比”是指脂肪重量/体重的比值。

本发明的拟杆菌及其应用

如本文所用，所述“本发明的拟杆菌”与“Bacteroides”可互换使用，指拟杆菌中多个菌的一个或多个混合。

在本发明的一个优选例中，所述“本发明的拟杆菌”包括多氏拟杆菌(Bacteroides dorei)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、溶木聚糖拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens)。

拟杆菌(Bacteroides)是拟杆菌科(Bacteroidaceae)的1个属，又称类杆菌属，为革兰氏染色阴性、无芽胞、专性厌氧的小杆菌。

本发明提供了拟杆菌在治疗和预防肥胖及其相关疾病(如心血管疾病)方面的应用。受验者摄入高脂肪的食物，拟杆菌具有(i)抑制该受验者体重增加；(ii)降低血脂；和(iii)降低体脂比的能力。根据本发明的一个优选例，经拟杆菌来治疗的被喂以可导致肥胖的高脂肪的食物的C57BL/6J雄性小鼠，与未接受治疗的对照组相比，其体重增加幅度减缓且血脂下降，并且各种与肥胖或心血管疾病相关的指标也下降，如瘦素(LEP)以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。因此，所述拟杆菌能够用以预防和治疗肥胖及由肥胖引起的疾病，如心血管疾病等。

组合物及其应用

本发明还提供了一种组合物，优选地，为药物组合物。所述组合物包括有效量的拟杆菌，在一个优选例中，所述组合物还包括选自下组的益生菌：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合；和/或选自下组的益生元：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、或其组合。

在一优选例中，所述的组合物为液态制剂、固态制剂、半固态制剂。

在一优选例中，所述的液态制剂选自下组：溶液制品或悬浮液制品。

在一优选例中，所述的组合物的剂型选自下组：粉末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、和舌下含片。

本发明药物组合物可以以药物片剂，针剂或胶囊的任一种形式给药，所述药物制剂包括赋形剂、药物允许的媒介和载体，这些物质可根据给药途径进行选择。本发明中药物制剂可进一步包含辅助的活性组份。

乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁或矿物油等都可用作本发明中药物组合物的载体、赋形剂或稀释剂等。

此外，本发明的药物组合物可进一步包括润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂和香料等。本发明的药物组合物可通过多种公知的方法以肠衣制剂生产，以便于药物组合物的活性成分即微生物能顺利通过胃而不被胃酸所破坏。

另外，本发明的微生物可以常规方法制备的胶囊形式使用。例如，标准赋形剂和本发明的冷干微生物混合制成小球药丸，然后将药丸装填入明胶胶囊中。此外，本发明的微生物和药物允许使用的赋形剂如液体胶、纤维素、硅酸盐或矿物油等混合制作悬浮液或分散液，这种悬浮液或分散液可装入软的明胶胶囊中。

本发明的药物组合物可制成肠衣片供口服使用。本申请中的术语—“肠衣”，包括所有常规药物允许使用的包衣，这些包衣不被胃酸降解，但在小肠中能充分分解并快速释放出本发明的微生物。本发明的肠衣能在合成胃酸如pH＝1的HCl溶液中在36-38℃维持2小时以上，并优选在合成肠液如pH＝7.0的缓冲液中在1.0小时内分解。

本发明的肠衣为以每片约16-30mg进行包衣，较佳地16-25mg，更佳地16-20mg进行包衣。本发明中肠衣厚度为5-100μm，理想的厚度为20-80μm。肠衣成分选自己公开知晓的常规聚合物。

本发明优选的肠衣由纤维素乙酸邻苯二甲酸酯聚合物或偏苯三酸酯聚合物以及异丁烯酸的共聚物(例如，含有40％以上异丁烯酸和含有甲基纤维素邻苯二甲酸羟丙酯或其酯类衍生物的异丁烯酸的共聚物)制备。

本发明中肠衣所使用的纤维素乙酸邻苯二甲酸酯的粘度为约45-90cp，乙酰含量17-26％，邻苯二甲酸含量30-40％。用于肠衣中的纤维素乙酸偏苯二酸酯粘度为约5-21cp，乙酞含量17-26％。纤维素乙酸偏苯三酸酯由Eastman科达公司生产，可用于本发明中的肠衣材料。

用于本发明肠衣中的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酷，分子量一般为20,000-130,000道尔顿，理想分子量为80,000-100,000道尔顿，羟丙基含量为5-10％，甲氧基含量为18-24％，邻苯二甲酰基含量为21-35％。

用于本发明肠衣中的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酷为HP50，由日本Shin-Etsu Chemidnl Co.Ltd.生产。HP50含有6-10％羟丙基，20-24％甲氧基，21-27％的丙基，其分子量为84,000道尔顿。另一种肠衣物质为HP55，HP55含有5-9％的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，18-22％甲氧基，27-35％的邻苯二甲酸，其分子量为78,000道尔顿。

本发明肠衣如下制备：使用常规方法将肠衣溶液喷雾到核心上。该肠包衣方法中所有溶剂为醇类(如乙醇)、酮类(如丙酮)、卤代烃化合物(如二氯甲烷)、或其组合物。将软化剂如二-正丁基邻苯二甲酸酯和三乙酸甘油酯加入到肠衣溶液中，其比例为1份包衣物对约0.05份或约0.3份软化剂。喷雾方法优选连续执行，所喷雾的料量可根据包衣所采用的条件进行控制。喷雾压力可随意调节，一般而言，能在平均1-1.5帕压力下获得理想的结果。

说明书中“药物有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。比如，在本发明中，可制备含有1×10-1×10²⁰cfu/ml或cfu/g(特别的，可含有1×10⁴-1×10¹⁵cfu/ml或cfu/g；更特别地，可含有1×10⁶-1×10¹¹cfu/ml或cfu/g)的拟杆菌的制剂。

当用于制备药物组合物时，所用的拟杆菌的有效剂量可随施用的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约1×10-1×10²⁰cfu/ml或cfu/g(特别的，可含有1×10⁴-1×10¹⁵cfu/ml或cfu/g；更特别地，可含有1×10⁶-1×10¹¹cfu/ml或cfu/g)的活性拟杆菌的活性成分。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

所述的拟杆菌可通过口服等途径给予。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：培养基、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合拟杆菌特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。口服给药是优选的。

将本发明组合物施用给所述个体，每天给药1次或多次。给药剂量单位表示其形式上能分开且适用于人类或其他所有哺乳动物个体的剂量。每一单位含有药物允许的载体和有效治疗量的本发明微生物。给药量随病人的体重和肥胖严重程度、所包括的补充活性组份和所使用的微生物而变化。此外如可能，可分开给药，并且如需要可连续给药。因此，所述给药量不会对本发明造成限制。此外，本发明中的“组合物”不仅意味着药品而且表示可作为功能性食品和健康补充食品。在一个优选例中，所述组合物包括：饮料、食品、药品、动物饲料等。

在本发明的一个优选例中，还提供了一种食品组合物，它含有有效量的拟杆菌，以及余量的食品上可接受的载体，所述的食物组合物的剂型选自固体、乳品、溶液制品、粉末制品、或悬浮液制品。

在一优选例中，所述组合物的配方如下：

1×10-1×10²⁰cfu/mL的拟杆菌；以及食品上或药学上可接受的载体，和/或赋形剂。

在另一优选例中，所述组合物的配方如下：

1×10⁶-1×10¹¹cfu/mL的拟杆菌；以及食品上或药学上可接受的载体，和/或赋形剂。

降低体重和/或血脂的方法

在另一优选例中，所述方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、饮料组合物、或其组合。所述实验对象为人。

在另一优选例中，所述方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、或动物饲料，或其组合。所述实验对象为动物，较佳地为鼠类，兔类。

本发明的主要优点包括：

(a)本发明的拟杆菌能够显著降低体重、降低血脂、降低体脂比。

(b)本发明的拟杆菌能够显著降低与肥胖及其相关疾病(如心血管疾病)相关的指标(如胆固醇和甘油三酯)。

(c)本发明的拟杆菌能够显著降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的水平。

(d)本发明的拟杆菌能够显著提高高密度脂蛋白的水平。

(e)本发明的拟杆菌能够改善胰岛素抵抗，还可降低动脉粥样硬化和心血管疾病发生的风险。

(f)本发明的拟杆菌能够显著降低单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平。

(g)本发明的拟杆菌能够有效地改善肥胖症伴随的瘦素抵抗，提高体内对Leptin的敏感性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照《微生物：实验手册》(James Cappuccino和Natalie Sherman编，Pearson Education出版社)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1含多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合的食品组合物原料配比如表1。

表1食品组合物配方

原料	质量百分比(％)
		菌组分	0.5
牛奶	90.0
		白糖	9.5

配方1－9中的菌组分为单细菌组分，分别含有Bacteroides dorei DSM17855、Bacteroides dorei JCM 13472、Bacteroides dorei BD1、Bacteroides ovatusATCC 8483、Bacteroides ovatus SD CMC 3f、Bacteroides ovatus RF Cell 1b2、xylanisolvens XB1A(DSM 18836)、Bacteroides xylanisolvens XB4A、Bacteroidesxylanisolvens XB3A。

配方10中的菌组分为上述9种菌的任意两种或两种以上(优选3种)的混合物(重量比为1:1或1:1:1)。

按照上述配方比例混合牛奶、白糖，搅拌至完全混合，预热，20Mpa压力均质，90℃左右杀菌5-10分钟，冷却至40-43℃，接种1-100×10⁶cfu/g的菌组分，即制成含菌组分(如多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌)的食品组合物。

实施例2

含多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合的药物组合物

原料配比见表2。

表2药物组合物配方

原料	质量百分比(％)
		菌组分	1.0％
乳糖	2.0％
		酵母粉	2.0％
蛋白胨	1.0％
		纯净水	94.0％

按照比例将乳糖、酵母粉、蛋白胨以纯净水混合均匀，预热到60-65℃，20Mpa压力均质，90℃左右杀菌20-30分钟，冷却至36-38℃，接入菌组分(1-50×10⁶cfu/mL)，36-38℃发酵至pH值为6.0，离心，冷冻干燥至水份含量小于3％，即制备含有菌组分的冷冻干燥物。称取0.5克含有菌组分的冷冻干燥物与麦芽糊精等量混合后装入胶囊中，即制成含菌组分(如多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌)的药物组合物。

实施例3对于肥胖模型小鼠的治疗作用

实验材料:

小鼠：购买C57BL/6J雄性小鼠(购自广东省医学实验动物中心)，为正常饲养小鼠，6周龄。小鼠生长过程处于同一环境，且喂养同样的食物。

发明人从保藏机构获得9株拟杆菌，并保存于深圳华大基因研究院。同时，选取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，来自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号CGMCC No.8198，作为对照组(LP组)。

其中，上述9株拟杆菌的来源信息如表3所示。所有菌株经16S rDNA测序鉴定无误后开始实验。

菌株信息见表3。

表3菌株信息

其中，Bacteroides dorei BD1(菌3)来源于丹麦欧登塞大学医院临床微生物系(Department of Clinical Microbiology,Odense University Hospital,Odense,Denmark)(Pedersen,R.M.,Marmolin,E.S.,&Justesen,U.S.(2013).Speciesdifferentiation of Bacteroides dorei from Bacteroides vulgatus and Bacteroidesovatus from Bacteroides xylanisolvens–Back to basics.Anaerobe,24,1-3.)。

Bacteroides ovatus SD CMC 3f(菌5)和Bacteroides ovatus RF Cell 1b2(菌6)均来源于美国内迪克语军士中心(Natick Soldier Center)(Arcidiacono,Steven,Mark Morrison,Arthur Ragauskas,and Cherie J.Ziemer."Novel fibro-bioticbacterium isolate."U.S.Patent Application 12/569,572,filed September 29,2009.)。

Bacteroides xylanisolvens XB4A(菌8)和Bacteroides xylanisolvens XB3A(菌9)均来源于法国国立农业研究院(INRA)(Chassard C,Delmas E,Lawson PA,Bernalier-Donadille A.Bacteroides xylanisolvens sp.nov.,a xylan-degradingbacterium isolated from human faeces.International Journal of Systematic andEvolutionary Microbiology 2008；58:1008-1013.)。

高脂饲料(HF)：含78.8％基础饲料、1％胆固醇、10％蛋黄粉、10％猪油和0.2％胆盐，购自南通特洛菲饲料科技有限公司。

普通维持饲料：购自广东省医学实验动物中心。

实验方法：

选取正常喂养的C57BL/6J成年雄性小鼠，随机分成四个实验组，分别为对照组(CK)，菌剂组(菌1组，菌2组，菌3组，菌4组，菌5组，菌6组，菌7组，菌8组，菌9组，菌1+菌5组，菌2+菌9组，菌4+菌7组，菌3+菌6+菌8组)、对照组(LP，Lactobacillus plantarum CGMCC No.8198)和肥胖模型组(HF)，每组10只，在SPF(无特定病原体(Specific pathogen Free))环境下自由进食和饮水。LP组、HF组和菌剂组喂食高脂饲料，CK组喂食普通维持饲料。喂养4周后，菌剂组和LP组开始灌胃相应菌株菌液；HF组和CK组灌胃等量培养基，灌胃9周。

灌喂菌量定为0.15mL/10g体重，菌浓为1×10⁷cfu/mL，浓缩后浓度为1×10⁸cfu/mL，频率为隔天一次。菌液需提前培养，每周活化保证新鲜，分别测定浓度，并调整至1×10⁸cfu/mL。对于单一菌剂组，取相应菌液按上述剂量灌胃；对于混合菌剂组，将各单菌菌液等比例混合后按上述剂量灌胃。

实验期中，每周记录小鼠体重、状态、进食量等数据。实验最后一周各组小鼠进行葡萄糖耐量(OGTT)试验。实验结束后处死小鼠，记录脂肪重量，并取血清，用Elisa试剂盒检测血脂和蛋白因子含量。

实验结果：

(1)多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合对鼠体重的影响。

表4灌胃多氏拟杆菌后各组小鼠的体重增长情况

注：表中数据为平均值±方差，对于每一列的任意两组数据，数字后面没有相同字母表示差异显著(p<0.05)，表5-19与此相同。

表5灌胃卵形拟杆菌后各组小鼠的体重增长情况

表6灌胃溶木聚糖拟杆菌后各组小鼠的体重增长情况

表7灌胃组合菌后各组小鼠的体重增长情况

结果如表4-7和图1-4所示。结果表明，灌胃拟杆菌9周，多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合可有效减缓肥胖模型小鼠的体重的增长(P<0.05)。

(2)多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合对体脂比的影响。

表8灌胃多氏拟杆菌9周后各组小鼠的体脂比

分组	脂肪重量/体重×100％
		CK	2.46±0.20e
菌1	3.18±0.20d
		菌2	4.07±0.24c
菌3	3.25±0.17d
		LP	5.41±0.30b
HF	7.21±0.48a

表9灌胃卵形拟杆菌9周后各组小鼠的体脂比

分组	脂肪重量/体重×100％
		CK	2.61±0.14d
菌4	3.53±0.21c
		菌5	3.55±0.20c
菌6	3.83±0.23c
		LP	6.39±0.35b
HF	8.28±0.60a

表10灌胃溶木聚糖拟杆菌9周后各组小鼠的体脂比

表11灌胃组合菌9周后各组小鼠的体脂比

分组	脂肪重量/体重×100％
		CK	2.72±0.16e
菌1+5	3.26±0.20d
		菌2+9	3.94±0.24c
菌4+7	4.02±0.21c
		菌3+6+8	3.89±0.16c
LP	5.84±0.29b
		HF	8.56±0.46a

结果如表8-11和图5-8所示。结果表明，多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合能显著降低肥胖模型小鼠的体脂比(P<0.05)。

(3)多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合对血脂的影响。

表12灌胃多氏拟杆菌9周后各组小鼠血脂含量

表13灌胃卵形拟杆菌9周后各组小鼠血脂含量

分组	TC(mmol/L)	TG(mmol/L)	LDLC(mmol/L)	HDLC(mmol/L)
					CK	3.06±0.14d	0.85±0.04d	0.98±0.04e	3.53±0.16a
菌4	4.17±0.28c	1.15±0.05c	1.48±0.09d	3.06±0.18b
					菌5	4.16±0.23c	1.11±0.08c	1.63±0.10c	3.00±0.13bc
菌6	4.12±0.24c	1.13±0.04c	1.55±0.11cd	2.92±0.14c
					LP	4.98±0.33b	1.36±0.09b	2.16±0.13b	2.33±0.14d
HF	5.83±0.28a	1.45±0.08a	2.59±0.12a	1.94±0.11e

表14灌胃溶木聚糖拟杆菌9周后各组小鼠血脂含量

分组	TC(mmol/L)	TG(mmol/L)	LDLC(mmol/L)	HDLC(mmol/L)
					CK	3.01±0.11e	0.88±0.05d	1.07±0.05c	3.48±0.19a
菌7	3.89±0.22d	1.11±0.07c	1.46±0.10b	3.13±0.16b
					菌8	4.18±0.28c	1.17±0.07c	1.55±0.09b	3.04±0.17b
菌9	3.95±0.23cd	1.12±0.06c	1.54±0.07b	3.07±0.16b
					LP	4.95±0.23b	1.34±0.09b	2.39±0.12a	2.40±0.13c
HF	6.06±0.31a	1.50±0.08a	2.49±0.17a	2.10±0.13d

表15灌胃组合菌多氏拟杆菌9周后各组小鼠血脂含量

结果如图9-12和表12-15所示。血脂中的主要成份是胆固醇和甘油三酯，血浆中胆固醇和甘油三脂水平的升高与动脉粥样硬化的发生有关。结果表明，多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合可降低血脂，降低动脉粥样硬化相关疾病(如心血管疾病)的相关指标。并且，多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合降低总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDLC)，以及增加高密度脂蛋白(HDLC)的作用尤为明显(P<0.05)。

(4)多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合对瘦素(Leptin，LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。

表16灌胃多氏拟杆菌9周后各组小鼠瘦素(Leptin，LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量

分组	MCP-1(pg/ml)	LEP(pg/ml)
			CK	283.24±29.63c	861.08±97.92d
菌1	324.25±39.07b	1000.57±75.18cd
			菌2	337.49±38.40b	1066.72±147.59c
菌3	321.83±31.00bc	1077.86±121.55c
			LP	357.96±42.29b	1380.96±177.61b
HF	401.08±55.00a	1614.76±172.50a

表17灌胃卵形拟杆菌9周后各组小鼠瘦素(Leptin，LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量

表18灌胃溶木聚糖拟杆菌9周后各组小鼠瘦素(Leptin，LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量

分组	MCP-1(pg/ml)	LEP(pg/ml)
			CK	306.91±17.80c	892.75±96.46d
菌7	322.58±40.51bc	1016.35±113.03cd
			菌8	331.12±35.88b	1017.95±106.34c
菌9	357.34±26.73b	1022.09±132.54c
			LP	398.97±47.47a	1284.90±147.36b
HF	409.23±34.18a	1411.82±164.13a

表19灌胃组合菌9周后各组小鼠瘦素(Leptin，LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量

分组	MCP-1(pg/ml)	LEP(pg/ml)
			CK	289.94±43.91c	877.80±109.21d
菌1+5	328.18±40.48b	1016.86±83.57b
			菌2+9	324.64±29.45b	1035.89±126.59b
菌4+7	334.74±29.24b	1027.75±122.81b
			菌3+6+8	301.10±32.03bc	963.31±120.90c
LP	389.72±49.29a	1346.63±114.18a
			HF	410.43±46.56a	1438.63±125.94a

结果如图13-20及表16-19所示。结果显示，多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合能明显降低肥胖模型小鼠血清中的瘦素(LEP)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量(P<0.05)。

结果表明，多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合能够改善瘦素抵抗，提高体内对瘦素(LEP)的敏感性；并且，经过多氏拟杆菌、卵形拟杆菌、溶木聚糖拟杆菌或其组合治疗后血清MCP-1水平降低，有利于改善胰岛素抵抗，可降低动脉粥样硬化和心血管疾病发生的风险。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种拟杆菌的用途，其特征在于，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于选自下组的一种或多种用途：(a)预防和/或治疗肥胖；(b)降低血脂；(c)预防或治疗心血管疾病；和/或(d)预防和/或治疗糖尿病。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述拟杆菌选自下组：多氏拟杆菌(Bacteroides dorei)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、溶木聚糖拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens)、或其组合。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述多氏拟杆菌选自下组：Bacteroides dorei DSM 17855、Bacteroides dorei JCM 13472、Bacteroides doreiBD1、或其组合。

4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述卵形拟杆菌选自下组：Bacteroides ovatus ATCC 8483、Bacteroides ovatus SD CMC 3f、Bacteroidesovatus RF Cell 1b2、或其组合。

5.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述溶木聚糖拟杆菌选自下组：Bacteroides xylanisolvens XB1A(DSM 18836)、Bacteroides xylanisolvens XB4A、Bacteroides xylanisolvens XB3A、或其组合。

6.一种拟杆菌的用途，其特征在于，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于选自下组的一种或多种用途：(i)降低哺乳动物中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平；和/或(ii)改善瘦素抵抗，提高体内对Leptin的敏感性。

7.一种用于治疗和/或预防肥胖的组合物，所述组合物包括：(i)安全有效量的拟杆菌；和(ii)食品上或药学上可接受的载体；其中，所述拟杆菌选自下组：多氏拟杆菌(Bacteroides dorei)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、溶木聚糖拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens)、或其组合。

8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物含有1×10-1×10²⁰cfu/mL或cfu/g的拟杆菌，较佳地1×10⁴-1×10¹⁵cfu/mL或cfu/g的拟杆菌，按所述组合物的总体积或总重量计。

9.一种权利要求7所述组合物的制法，包括步骤：

将权利要求1所述的拟杆菌、与食品上可接受的载体或药学上可接受的载体混合，从而形成权利要求7所述的组合物。

10.一种降低体重和/或血脂的方法，给所述对象施用权利要求1所述的拟杆菌或权利要求7所述的组合物。