[go: up one dir, main page]

CN106716131A - Mdm2拮抗剂的癌症疗法的患者个性化方法 - Google Patents

Mdm2拮抗剂的癌症疗法的患者个性化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106716131A
CN106716131A CN201580048899.7A CN201580048899A CN106716131A CN 106716131 A CN106716131 A CN 106716131A CN 201580048899 A CN201580048899 A CN 201580048899A CN 106716131 A CN106716131 A CN 106716131A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mdm2
patient
cancer
compound
inhibitor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201580048899.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106716131B (zh
Inventor
S·D·布洛特纳
G·陈
L·茹科夫斯基
G·尼克尔斯
W·E·皮尔赛尔
B·赖斯
R·吕格尔
H·钟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of CN106716131A publication Critical patent/CN106716131A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106716131B publication Critical patent/CN106716131B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A61K31/77—Polymers containing oxygen of oxiranes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4748—Details p53
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70589—CD45
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood
    • G01N33/4915—Blood using flow cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本申请公开了一种预测具有癌症的患者对用如本文中公开的式I，II和III的MDM2拮抗剂进行的治疗的响应性的方法，所述方法包含一项多变量分析，其包含检测某些MDM2蛋白表达性细胞的相对量和任选的选自如本文中公开的基因签名，p53突变状态，患者的年龄和基线时的ECOG得分的另外的协变量作为生物标志物用于预测所述患者对治疗的响应。

Description

MDM2拮抗剂的癌症疗法的患者个性化方法
发明背景
TP53基因编码一种在癌症发生期间的保护中起关键作用的肿瘤抑制蛋白。P53在多细胞生物体中是至关重要的，其中它调节细胞周期，并因此作为参与预防癌症的肿瘤抑制物起作用。而且，它是调节参与细胞周期控制，诸如凋亡，DNA修复和衰老的多种基因的转录因子。
在非应激条件下，p53蛋白的水平经由负反馈环受到MDM2(Murine Double Minute2)控制，其中MDM2转录由p53驱动。MDM2蛋白结合TP53蛋白并阻断其反式激活域。MDM2还能作为p53泛素连接酶发挥功能，其标记p53用于泛素依赖性降解。
在过表达MDM2的细胞中，P53灭活，导致无效的生长停滞和凋亡。阻断P53--MDM2相互作用可能恢复P53功能，而且可能是癌症治疗的一种新颖办法。用MDM2拮抗剂处理肿瘤细胞应能够使p53介导其下游功能，包括激活基因转录和诱导细胞周期停滞和凋亡。
TP53突变在急性骨髓性白血病(AML)中是罕见的，而且通常不认为在这些恶性肿瘤的发生中是最重要的。然而，已经发现MDM2在AML中频繁过表达，而且能经由消除p53功能增强致瘤潜力和对凋亡的抗性。已经发现，具有野生型p53的AML细胞系和16份原代aAML样品通过诱导p53依赖性凋亡响应MDM2拮抗剂(抑制剂)。这些发现支持靶向p53-MDM2相互作用作为AML的治疗策略的原理。
基于所提出的药物作用机制，功能性p53蛋白和相关途径效应分子的存在对于这类药物是有效的是需要的。并非所有患者都会具有功能性p53蛋白和相关途径效应分子。为了更好地确定患者是否能受益于疗法，需要发现预测性分子测试用于鉴定最有可能响应疗法的患者。用于评估对MDM2拮抗剂的潜在响应的一种办法是评估TP53基因是否突变。然而，这因为在癌症中能找到TP53的大量突变的事实变得复杂。并非所有这些突变都会干扰p53蛋白的活性，进一步使TP53突变测试的解读变得复杂。另外，在野生型TP53细胞系和患者中存在对MDM2拮抗剂的一系列响应。还有，已经观察到，虽然许多携带p53突变的AML患者对MDM2拮抗剂疗法不响应，但是仍然存在对此类疗法展现持久响应的具有某些p53突变的患者。因此，从易于解读的诊断工具预测对MDM2拮抗剂的响应性的能力是MDM2拮抗剂的临床开发中未满足的需求。
现在已经发现，基于某些MDM2蛋白表达干细胞的量的生物标记物可以提供选择最有可能响应MDM2拮抗剂疗法的患者的手段。此方法还具有与其它生物标志物评估，包括特别是p53突变状态，年龄和ECOG性能状态组合，产生在区分临床终点方面具有更大灵敏度和特异性的算法的潜力。
发明概述
在一个实施方案中，本发明提供一种用于确定癌症患者对用MDM2抑制剂进行的治疗的响应的方法，其特征在于在治疗之前自该患者获得的样品中检测到的％MDM2阳性细胞越高，所述患者达到有益临床终点的可能性越高，其中MDM2阳性(或MDM2表达性)细胞选自由CD45dim母细胞，CD117+(c-kit)和CD34+干细胞，或其组合组成的组。
在另一个方面，本发明涉及一种用于预测具有癌症的患者对疗法的响应的方法，其中该患者的疗法包含用作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物进行的治疗，所述方法包含下述步骤：
a)测量自癌症患者预获得的样品中CD45dim母细胞和/或CD117+(c-kit)和/或CD34+干细胞的水平以获得代表此水平的一个或多个值；或
b)测量自癌症患者预获得的样品中MDM2表达性CD45dim细胞和/或CD117+(c-kit)和/或CD34+干细胞的％；并
c)将来自步骤a)和/或b)的一个或多个值与一个或一套标准值比较。
作为MDM2-p53相互作用的抑制剂(MDM2抑制剂，MDM2拮抗剂)起作用的化合物是本领域已知的。MDM2抑制剂和用于生成它们的方法披露于例如美国专利8,354,444 B2，以及WO 2007/063013，WO 2010/031713和WO 2011/098398，将它们完整收入本文。另外的MDM2抑制剂披露于WO 2013/135648，将它完整收入本文。
美国专利8,354,444 B2，以及WO 2010/031713，WO 2011/098398披露了例如式I，II和IIa的化合物，
WO 2013/135648披露了例如式III的化合物，
在一个方面，本发明涉及一种用于预测具有癌症的患者对疗法的响应的方法，其中该患者的疗法包含用如美国专利8,354,444 B2，或WO 2007/063013，WO 2010/031713，WO2011/098398和WO 2013/135648的实施例中具体披露的作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物(“MDM2抑制剂”)进行的治疗。
在又一个方面，本发明涉及一种在有需要的患者中治疗赘生性疾病，诸如癌症的方法，其包含测量自患者获得的样品中MDM2阳性细胞类型的水平以检测代表此水平的一个或多个值，或表达可检测MDM2表达物的此类细胞的％，并当所述值在参照水平以上时用包含如本文中进一步定义的通式I，II，IIa或III的化合物或其药学可接受衍生物的药物治疗患者，且其中所述细胞的类型为一种或多种选自由CD45dim细胞，CD117+(c-kit)和CD34+干细胞组成的组的细胞类型。
在仍有另一个方面，本发明涉及一种用于预测癌症患者对用包含如本文中定义的MDM2抑制剂的药物进行的治疗的响应的试剂盒，其包含在自所述患者获得的样品中测量一种或多种选自CD45dim(母)细胞，CD117+(c-kit)和CD34+干细胞的细胞类型的水平和任选的还测量p53基因突变状态必需的试剂。该试剂盒还包含比较模块，其包含与该样品中的响应水平为比较的一个或一套标准值，连同如何进行此类比较的说明书。该试剂盒还可包含一种或多种其它治疗活性剂，用于与如本文中定义的MDM2抑制剂组合。
更优选地，该试剂盒包含MDM2抑制剂，优选如美国专利8,354,444 B2，或WO 2007/063013，WO 2010/031713，WO 2011/098398和WO 2013/135648中具体公开的MDM2抑制剂；或依照式IIa或III的化合物；或如本文中公开的具体MDM2抑制剂。
照此，本发明涉及一种用于鉴定对MDM2拮抗剂疗法的敏感性的方法。而且，本发明涉及一种通过在治疗之前(在基线时)对患者测试血液中MDM2蛋白表达性细胞的量用MDM2拮抗剂治疗癌症患者的方法，其中所述MDM2蛋白表达性细胞选自CD45dim(母)细胞和/或CD117+(c-kit)和/或CD34+干细胞。
本发明还涉及CD45dim细胞，CD117+(c-kit)和/或CD34+干细胞作为预测机制用于确定罹患癌症，更特别的是急性骨髓性白血病(AML)的患者对用如本文中定义的MDM2抑制剂，或所述MDM2抑制剂连同阿糖胞苷(Ara-C)和/或蒽环类抗生素的组合进行的治疗的响应的用途。
本发明还涉及用于鉴定对MDM2拮抗剂疗法的敏感性的任何上述方法，其进一步包含检测至少一种选自由BAX，RPS27L，EDA2R，XPC，DDB2，FDXR，MDM2，CDKN1A，TRIAP1，BBC3，CCNG1，TNFRSF10B，或CDKN2A组成的组的基因的水平并将该值与依照任何上述方法检测的MDM2蛋白表达性细胞的所述相对量组合以获得组合得分“S”，并使用该组合得分“S”作为生物标志物用于预测该患者对化合物的响应，其中该化合物为MDM2-p53相互作用的抑制剂。
附图简述
图1：活细胞，CD45dim/SSC低母细胞和CD34+母细胞通过电子门控的鉴定。
图2：CD45dim母细胞群中和CD45dim/CD34阳性母细胞群中Mdm2阳性细胞的鉴定。使用同种型对照(上部两幅点图)来绘制Mdm2阳性的边界。
图3：CD45dim(母)细胞中的MDM2蛋白表达对最佳总体响应；(a)包括突变型p53；和(b)没有突变型p53。
图4a：AML临床试验(标识符：NP29679，部分1和2)中患者的组合得分“S”与响应(CR，非CR)的关联，其中“S”是使用实施例2的4基因签名和MDM2阳性CD45dim母细胞的相对量(SMDM2-流式)计算的，包括p53突变型患者：
4a i)S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式，
4a ii)S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)，
4a iii)S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)；
且其中“S”是使用实施例2的4基因签名和MDM2阳性CD45dim母细胞的相对量(SMDM2-流式)计算的，只包括p53野生型(wt)患者：
4a iv)S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式，
4a v)S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)，
4a vi)S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)。
图4b：AML临床试验(标识符：NP29679，部分1和2)中患者的组合得分“S”与响应(CR，非CR)的关联，其中“S”是使用实施例2的3基因签名和MDM2阳性CD45dim母细胞的相对量(SMDM2-流式)计算的，包括p53突变型患者：
4b i)S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式，
4b ii)S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)，
4b iii)S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)；
且其中“S”是使用实施例2的3基因签名和MDM2阳性CD45dim母细胞的相对量(SMDM2-流式)计算的，只包括p53野生型(wt)患者：
4b iv)S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式，
4b v)S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)，
4b vi)S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)。
图5：包括p53野生型(wt)和p53突变型患者的AML临床试验(标识符：NP29679，部分1和2)中患者的基于mRNA表达水平关于单独的MDM2(i)，BBC3(ii)，XPC(iii)或CDKN2A(iv)每一项的得分与响应(CR，非CR)的关联。
发明详述
在一个实施方案中，供依照本发明的方法中使用的抑制MDM2-p53相互作用的化合物(也称作“MDM2抑制剂”或“MDM2拮抗剂”)为任何MDM2抑制剂，优选小分子MDM2抑制剂。在另一个实施方案中，所述MDM2抑制剂为如美国专利8,354,444 B2中，或WO 2007/063013，WO2010/031713，WO 2011/098398和WO 2013/135648中具体公开的化合物。
在一个实施方案中，供依照本发明的方法中使用的MDM2抑制剂为式I的化合物，
其中
X选自由H，F，Cl，Br，I，氰基，硝基，乙炔基，环丙基，甲基，乙基，异丙基，乙烯基和甲氧基组成的组，
Y为一至四个独立选自由H，F，Cl，Br，I，CN，OH，硝基，低级烷基，环烷基，低级烷氧基，低级烯基，环烯基，低级炔基，芳基，杂芳基，杂环，COOR’，OCOR’，CONR’R”，NR’COR”，NR”SO2R’，SO2NR’R”和NR’R”组成的组的基团，其中
R’和R”独立选自H，低级烷基，取代的低级烷基，低级环烷基，取代的低级环烷基，低级烯基，取代的低级烯基，低级环烯基，取代的低级环烯基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，或取代的杂环。
且在R’和R”可以独立连接以形成选自取代的或未取代的环烷基，取代的或未取代的环烯基，取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的杂环的环状结构的情况中，
R1和R2之一选自由低级烷基，取代的低级烷基，低级烯基，取代的低级烯基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，环烯基，和取代的环烯基组成的组且另一为氢或低级烷基，
R3为H或低级烷基，
R4和R5之一选自由低级烷基，取代的低级烷基，低级烯基，取代的低级烯基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，环烯基，和取代的环烯基组成的组且另一为氢，
R6和R7选自由(CH2)n-R’，(CH2)n-NR’R”，(CH2)n-NR’COR”，(CH2)n-NR’SO2R”，(CH2)n-COOH，(CH2)n-COOR’，(CH2)n-CONR’R”，(CH2)n-OR’，(CH2)n-SR’，(CH2)n-SOR’，(CH2)n-SO2R’，(CH2)n-COR’，(CH2)n-SO3H，(CH2)n-SONR’R”，(CH2)n-SO2NR’R”，(CH2CH2O)m-(CH2)n-R’，(CH2CH2O)m-(CH2)n-OH，(CH2CH2O)m-(CH2)n-OR’，(CH2CH2O)m-(CH2)n-NR’R”，(CH2CH2O)m-(CH2)n-NR’COR”，(CH2CH2O)m-(CH2)n-NR’SO2R”，(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOH，(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOR’，(CH2CH2O)m-(CH2)n-CONR’R”，(CH2CH2O)m-(CH2)n-SO2R’，(CH2CH2O)m-(CH2)n-COR’，(CH2CH2O)m-(CH2)n-SONR’R”，(CH2CH2O)m-(CH2)n-SO2NR’R”，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-R’，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-OH，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-OR’，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-NR’R”，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-NR’COR”，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-NR’SO2R”，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOH，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOR’，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-CONR’R”，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-SO2R’，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-COR’，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-SONR’R”，(CH2)p-(CH2CH2O)m-(CH2)n-SO2NR’R”，-COR’，-SOR’和SO2R’组成的组，其中R’和R”如上文所述，
m，n和p独立为0至6，
及其药学可接受盐和酯。
在这个实施方案内，优选的式I的化合物可以具有如式II所示立体化学结构：
在一个实施方案中，供依照本发明的方法中使用的MDM2抑制剂为式IIa的化合物，
其中
R6为-(CH2)n-R’，且
R’为环己基，或5至10元，单或双环芳香族烃，其中1或2个碳原子可以用N，S或O替换，且其中任何上述环己基或芳香族烃可以用独立选自低级烷基，低级烯基，低级炔基，二氧代低级亚烷基(形成例如苯并二氧基基团)，卤素，羟基，CN，CF3，NH2，N(H，低级烷基)，N(低级烷基)2，氨基羰基，羧基，NO2，低级烷氧基，硫代-低级烷氧基，低级烷基磺酰基，氨基磺酰基，低级烷基羰基，低级烷基羰基氧基，低级烷氧基羰基，低级烷基-羰基-NH，氟-低级烷基，氟-低级烷氧基，低级烷氧基-羰基-低级烷氧基，羧基-低级烷氧基，氨基甲酰基-低级烷氧基，羟基-低级烷氧基，NH2-低级烷氧基，N(H，低级烷基)-低级烷氧基，N(低级烷基)2-低级烷氧基，低级烷基-1-环氧乙烷基-低级烷氧基-低级烷基，2-氧代-吡咯烷-1-基，(1,1-二氧代)-2-异噻唑烷，3-低级烷基亚磺酰基，取代的或未取代的杂环状环，取代的或未取代的芳基环，取代的或未取代的杂芳基环，三氟-低级烷基磺酰基氨基-芳基，低级烷基磺酰基氨基羰基，低级烷基磺酰基氨基羰基-芳基，羟基氨基甲酰基-苯基，苄基氧基-低级烷氧基，单或二-低级烷基取代的氨基-磺酰基和低级烷基(其可以任选用卤素，羟基，NH2，N(H，低级烷基)或N(低级烷基)2取代)的基团取代一次或两次；且
n为0或1。
在这个实施方案内，优选式IIa的化合物，其中
R6为-(CH2)n-R’，且
R’为苯基，吡啶基，吡嗪基或嘧啶基，每个可以是未取代的或用独立选自卤素，C1-6烷氧基，C1-6烷基，羟基羰基，羧基，羧基C1-6烷氧基，氧代和CN的取代基取代一次或两次的；且
n为0。
在另一个实施方案中，供依照本发明的方法中使用的MDM2抑制剂为式III的化合物，
其中
X选自由H，F，Cl，Br，I，氰基，硝基，乙炔基，环丙基，甲基，乙基，异丙基，乙烯基和甲氧基组成的组，
Y为一至四个独立选自由H，F，Cl，Br，I，CN，OH，硝基，低级烷基，环烷基，低级烷氧基，低级烯基，环烯基，低级炔基组成的组的基团，
Z为低级烷氧基，
R1选自由低级烷基，取代的低级烷基，低级烯基，取代的低级烯基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，环烯基，和取代的环烯基组成的组，
R2为选自下述的取代的苯基：
W为F，Cl或Br，
V为H或F，
R3选自由氢，低级烷基或取代的低级烷基组成的组，
R4选自由下述组成的组：
R5选自由低级烷基，取代的低级烷基，杂环，取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，天然和非天然氨基酸，-(OCH2CH2)n-OH，-(OCH2CH2)n-OCH3，-(NCH2CH2)n-OH，-(NCH2CH2)n-OCH3和-(OCH2CH2)n-OP(O)(OR6)2组成的组，其中
n为3至60，优选3至45，
R6为氢或苄基；
或其药学可接受盐或酯。
在这个实施方案内，优选式III的化合物，其中
X选自H，F或Cl，
Y选自H，F或Cl，
R1为低级烷基或取代的低级烷基，
R3为氢或低级烷基，
R5选自由低级烷基，取代的低级烷基，天然和非天然氨基酸，-(OCH2CH2)n-OH，-(OCH2CH2)n-OCH3，-(NCH2CH2)n-OH，-(NCH2CH2)n-OCH3，-(OCH2CH2)n-OP(O)(OR6)2组成的组，其中
n为3至60，优选3至45，且
R6为氢；
或其药学可接受盐。
而且，在这个实施方案内，优选式III的化合物，其中
X选自H，F或Cl；
Y选自H，F或Cl；
Z为C1-6烷氧基；
R1为C1-6烷基；
R2为
其中
W为F，Cl或Br；
V为H或F；
R3为氢或C1-6烷基；
R4为–C(O)-R5；其中
R5选自由-(OCH2CH2)n-OH；-(OCH2CH2)n-OCH3；和-(OCH2CH2)n-OP(O)(OR6)2组成的组，其中n为3至60，且R6为氢；
或其药学可接受盐。
更具体地，n为3至55，更优选地，n为3至45。在这个实施方案内，尤其优选其中R5为-(OCH2CH2)n-OCH3且n为40至60的化合物。
在说明书中，指出各种基团可以用1-5个或优选1-3个独立选自由低级烷基，低级烯基，低级炔基，二氧代-低级亚烷基(形成例如苯并二氧基基团)，卤素，羟基，CN，CF3，NH2，N(H，低级烷基)，N(低级烷基)2，氨基羰基，羧基，NO2，低级烷氧基，硫代-低级烷氧基，低级烷基磺酰基，氨基磺酰基，低级烷基羰基，低级烷基羰基氧基，低级烷氧基羰基，低级烷基-羰基-NH，氟-低级烷基，氟-低级烷氧基，低级烷氧基-羰基-低级烷氧基，羧基-低级烷氧基，氨基甲酰基-低级烷氧基，羟基-低级烷氧基，NH2-低级烷氧基，N(H，低级烷基)-低级烷氧基，N(低级烷基)2-低级烷氧基，低级烷基-1-环氧乙烷基-低级烷氧基-低级烷基，2-氧代-吡咯烷-1-基，(1,1-二氧代)-2-异噻唑烷，3-低级烷基亚磺酰基，取代的或未取代的杂环环，取代的或未取代的芳基环，取代的或未取代的杂芳基环，三氟-低级烷基磺酰基氨基-芳基，低级烷基磺酰基氨基羰基，低级烷基磺酰基氨基羰基-芳基，羟基氨基甲酰基-苯基，苄基氧基-低级烷氧基，单或二-低级烷基取代的氨基-磺酰基和低级烷基(其可以任选用卤素，羟基，NH2，N(H，低级烷基)或N(低级烷基)2取代)组成的组的取代基取代的。对于环烷基，环烯基，芳基，杂芳基和杂环环优选的取代基为卤素，低级烷氧基，低级烷基，羟基羰基，羧基，羧基低级烷氧基，氧代和CN。对于烷基优选的取代基为烷氧基和N(低级烷基)2。
术语“烷基”指具有1至约20个碳原子的直链或支链饱和烃基团，包括具有1至约7个碳原子的基团。在某些实施方案中，烷基取代基可以是低级烷基取代基。术语“低级烷基”指具有1至6个碳原子，和某些实施方案中1至4个碳原子的烷基基团。烷基基团的例子包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，和仲戊基。
如本文中使用的，“环烷基”意图指任何稳定的仅仅由碳原子组成的单环或多环体系，它的任何环是饱和的，而术语“环烯基”意图指任何稳定的仅仅由碳原子组成的单环或多环体系，它的至少一个环是部分不饱和的。环烷基的例子包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金刚烷基，环辛基，双环烷基，包括双环辛烷诸如[2.2.2]双环辛烷或[3.3.0]双环辛烷，双环壬烷诸如[4.3.0]双环壬烷，和双环癸烷诸如[4.4.0]双环癸烷(萘烷)，或螺化合物。环烯基的例子包括但不限于环戊烯基或环己烯基。
如本文中使用的，术语“烯基”表示含有一个双键且具有2至6个，优选2至4个碳原子的不饱和的直链或支链脂肪族烃基团。此类“烯基基团”的例子有乙烯基，烯丙基，异丙烯基，1-丙烯基，2-甲基-1-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，2-乙基-1-丁烯基，3-甲基-2-丁烯基，1-戊烯基，2-戊烯基，3-戊烯基，4-戊烯基，4-甲基-3-戊烯基，1-己烯基，2-己烯基，3-己烯基，4-己烯基和5-己烯基。
如本文中使用的，术语“炔基”表示含有一个三键且具有2至6个，优选2至4个碳原子的不饱和的直链或支链脂肪族烃基团。此类“炔基基团”的例子有乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，3-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基，3-戊炔基，4-戊炔基，1-己炔基，2-己炔基，3-己炔基，4-己炔基和5-己炔基。
如定义中使用的，术语“卤素”表示氟，氯，溴，或碘，优选氟和氯。
“芳基”表示单价，单环或双环，芳香族碳环烃根，优选6-10元芳香族环体系。优选的芳基基团包括但不限于苯基，萘基，甲苯基，和二甲苯基。在芳基基团为双环的情况中，优选的基团为1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基基团。
“杂芳基”表示含有多至两个环的芳香族杂环环体系。优选的杂芳基基团包括但不限于噻吩基，呋喃基，吲哚剂，吡咯基，吡啶基，吡嗪基，口恶唑基，噻唑基(thiaxolyl)，喹啉基，嘧啶基，咪唑基，取代的或未取代的三唑基和取代的或未取代的四唑基。
在芳基或杂芳基为双环的情况中，应当理解，一个环可以为芳基而另一个为杂芳基且二者是取代的或未取代的。
“杂环”或“杂环状环”表示取代的或未取代的5至8元，单或双环，非芳香族烃，其中1至3个碳原子用选自氮，氧或硫原子的杂原子替换。例子包括吡咯烷-2-基；吡咯烷-3-基；哌啶基；吗啉-4-基等等，它们继而可以是取代的。“杂原子”表示选自N，O和S的原子。
“烷氧基，烷氧基或低级烷氧基”指附着至氧原子的任何上述低级烷基基团。典型的低级烷氧基基团包括甲氧基，乙氧基，异丙氧基或丙氧基，丁氧基等等。烷氧基的含义内进一步包括的是多重烷氧基侧链，例如乙氧基乙氧基，甲氧基乙氧基，甲氧基乙氧基乙氧基等等和取代的烷氧基侧链，例如二甲基氨基乙氧基，二乙基氨基乙氧基，二甲氧基-磷酰基甲氧基等等。
如本文中使用的，术语“mPEG”表示甲氧基聚乙二醇，它是商品化的(例如Sigma-Aldrich或ID Biochem(Korea))。mPEG的分子量分布可以随制造商和/或批次变化。在本发明的一个实施方案中，mPEG具有约1500Da至约3000Da的平均分子量(MW)。在本发明的另一个实施方案中，mPEG具有约2000Da和约2200Da的平均MW。平均MW是通过MALDI-TOF质谱术测定的。
“药学可接受衍生物”，诸如药学可接受盐和酯，载剂，赋形剂，表示药学可接受的且对接受特定化合物施用的受试者基本上无毒的。
“药学可接受盐”指保留本发明化合物的生物学有效性和特性且自合适的无毒有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规酸加成盐或碱加成盐。例示性酸加成盐包括那些自无机酸诸如氢氯酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸衍生的，和那些自有机酸诸如对甲苯磺酸，水杨酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸/延胡索酸，三氟乙酸等等衍生的。例示性碱加成盐包括那些自铵，钾，钠和，季铵氢氧化物，诸如例如四甲基铵氢氧化物衍生的。药物化合物(即药物)成为盐的化学修饰是药物化学家公知的用于获得化合物的改良物理和化学稳定性，吸湿性，流动性和溶解性的技术。参见例如Ansel etal.,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(6th Ed.1995),pp.196和1456-1457。
术语“ECOG量表”或ECOG性能状态”表示由科学家和内科医师开发的用来评估患者的疾病(癌症)如何进展及影响所述患者的日常生活能力的参数或标准。该量表是由Eastern Cooperative Oncology Group(ECOG)开发的且是本领域技术人员公知的。详情参见例如Oken,M.M.et al,Am.J.Clin.Oncol.,1982,649-655。
在一个实施方案中，依照本发明的一种具体MDM2抑制剂为式(A)的化合物，也称作化合物A(RG7112)，
此化合物及其生成方法披露于例如WO 2007/063013。
在另一个实施方案中，供依照本发明的方法中使用的一种MDM2抑制剂为式(B)的4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸，
此化合物及其生成方法披露于例如WO 2011/098398。
依照本发明的另一种具体化合物为2-((1-(4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-甲氧基苯甲酰基氧基)乙氧基)羰基氨基)乙酸。
依照本发明的另一种具体化合物为2-(((4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-甲氧基苯甲酰基氧基)甲氧基)-羰基氨基)乙酸。
依照本发明的又一种化合物为4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-甲氧基苯甲酸3-氧代-2,4,7,10,13,16,19-七氧杂二十烷基酯。
依照本发明的一种具体化合物为4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2000)。
依照本发明的一种具体化合物为4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2200)
依照本发明的一种具体化合物为4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-甲基酯(mPEG，平均MW，～2000)。
依照本发明的一种具体化合物为4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-甲氧基苯甲酸3-氧代-2,4,7,10,13-五氧杂十四烷基酯。
依照本发明的一种具体化合物为4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-甲氧基苯甲酸27-氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,28-十氧杂三十烷-29-基酯。
依照本发明的一种具体化合物为4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-[(2R,3R,4R,5S)-2-((R)-1,2-二羟基-乙基)-4,5-二羟基-四氢-呋喃-3-基氧基羰基氧基]-乙基酯。
依照本发明的另一种具体化合物为4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-(2-{2-[2-(2-二苄基氧基磷酰基氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基羰基氧基)-乙基酯。
还有，依照本发明的一种具体化合物为4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-(2-{2-[2-(2-膦酰基氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基羰基氧基)-乙基酯。
还有，依照本发明的一种具体化合物为式(C)的4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2000)，
平均MW：～2695。
此化合物及其生成方法披露于例如WO 2013/135648。
还有，依照本发明的一种具体化合物为式(D)的4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2200)，
平均MW：～2900。
此化合物及其生成方法披露于例如WO 2013/135648。
依照本发明，提供了一种预测具有癌症的患者对疗法的响应性的方法，所述方法包含检测在治疗之前(基线时)自所述癌症患者获得的样品中一种或多种MDM2蛋白表达性细胞类型的相对量，并使用所述相对量或表达MDM2蛋白的细胞的百分比(％)作为生物标志物用于预测所述患者对用药物进行的治疗的响应，其中该药物包含如本文中定义的作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物，且其中所述MDM2蛋白表达性细胞类型或生物标志物选自由CD45dim细胞，CD117+(c-kit)和/或CD34+干细胞，或其组合子集组成的组。
在一个实施方案中，该方法为体外方法。
在另一个实施方案中，可以使用每一种选自CD45dim细胞，CD117+(c-kit)和CD34+干细胞的MDM2表达性细胞类型的相对量(％)作为生物标志物用于预测所述患者对用所述MDM2抑制剂进行的治疗的响应。在另一个实施方案中，也可以使用所述细胞类型的组合子集。在这个实施方案内，优选的子集为i)MDM2阳性CD117+(c-kit)和CD45dim细胞的相对量(％)；或ii)MDM2阳性CD34+和CD45dim细胞的相对量(％)；或iii)MDM2阳性CD34+和CD117+和CD45dim细胞的相对量(％)；或iv)MDM2阳性CD45dim细胞的相对量(％)。
如此，在另一个实施方案中，本发明提供一种预测具有癌症的患者对疗法的响应性的方法，所述方法包含检测在治疗之前(基线时)自所述癌症患者获得的样品中至少CD45dim(母)细胞的相对量，并使用所述相对量或表达MDM2蛋白的CD45dim(母)细胞的百分比(％)作为生物标志物用于预测所述患者对用药物进行的治疗的响应，其中该药物包含如本文中定义的作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。在这个和前述实施方案内，“量”为以给定类型，诸如例如CD45dim，CD34+或CD117+的MDM2表达性细胞在治疗之前(基线时)自所述癌症患者获得的样品中检测到的该相同类型的所有细胞中的百分比(％)表示的相对量。细胞的检测可以通过熟练技术人员知道的任何手段，优选通过流式细胞术来进行。
在一个实施方案中，本方法为连续变量测量。优选地，本方法基于多变量办法，因而考虑一套或多套变量。依照本发明，如上文段落[00053]中定义的MDM2表达性细胞的子集为优选的变量。在另一个实施方案中，依照本发明的多变量办法另外包含患者的年龄和/或ECOG得分作为另外的变量。多变量分析用于将患者分层入代表预期治疗结局的各组的基本原理是本领域技术人员，诸如例如临床肿瘤学家公知的。本发明的一个目标是定义单独或连同患者的年龄和/或ECOG得分作为所述分析中的变量的，如本文中定义的某些MDM2表达性细胞和子集的相对量(见例如段落[00053])。
在另一个实施方案中，本发明鉴定阈(或截留)值或一套值，诸如例如范围，其特征在于基于临床数据(研究No.NP28679，部分1和2)鉴定最有可能响应MDM2拮抗剂疗法的患者的MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的量。该量为以MDM2表达性细胞在所有CD45dim母细胞中的百分比(％)表示的相对量。该量优选通过流式细胞术来检测，且特征在于至少45％，优选至少50％MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞。MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞在那些水平以上的患者最有可能响应用MDM2抑制剂(MDM2拮抗剂)进行的治疗，即达到有益的临床终点。术语“响应”在本文中有进一步定义。所述MDM2表达性CD45dim母细胞的相对量是在治疗之前自癌症患者获得的样品中测量的，因此具有充当用如本文中定义的MDM2抑制剂治疗所述癌症患者的预后性和/或预测性生物标志物的潜力。在另一个实施方案中，如上文段落[00053]中i)至iv)下定义的具体细胞子集的阈值为10％；或15％或20％。MDM2蛋白表达性细胞的相对量在那些水平以上的患者最有可能响应用MDM2抑制剂(MDM2拮抗剂)进行的治疗，即达到有益的临床终点。
在一个实施方案中，该癌症(或“赘生性疾病”)选自由乳腺癌，前列腺癌，宫颈癌，卵巢癌，胃癌，结直肠癌(即包括结肠癌和直肠癌)，胰腺癌，肝癌，脑癌，神经内分泌癌，肺癌，肾癌，血液学恶性肿瘤，黑素瘤和肉瘤组成的组。在另一个实施方案中，该癌症选自由血液学恶性肿瘤，包括白血病，淋巴瘤，和多发性骨髓瘤组成的组。在还有另一个实施方案中，该癌症为急性骨髓性白血病(AML)，或骨髓异常增生综合征(MDS)，或骨髓增生性赘生物(MPN)。
如本文中使用的，术语“响应”表示达到任何临床终点。优选地，当例如与安慰剂或标准护理比较时，该临床终点对患者是有益的。在一个实施方案中，如本文中使用的，临床终点或响应表示总体存活(OS)，无进展存活(PFS)或无事件存活(EFS)。在另一个实施方案中，术语响应表示完全响应(CR)，部分响应(PR)，伴有不完全血小板恢复的完全响应(CRi)，血液学改善(HI)，或无形态学白血病状态(MLFS)。
术语“MDM2表达性细胞”或“MDM2阳性细胞”或“MDM2蛋白表达性细胞”表示选自由MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞，CD34+和CD117+(c-kit)干细胞组成的组的细胞类型。
MDM2蛋白表达性细胞的“相对量”表示MDM2蛋白表达性细胞在如上文定义的相同细胞类型的所有细胞中的百分比(％)。在一个实施方案中，术语“相对量”表示在患者的样品中检测到的相同类型的所有细胞中约30％至约100％，或约45％至约100％的MDM2阳性细胞。在另一个实施方案中，术语“相对量”表示约45％至约90％，或约55％至约85％，或约65％至约80％，或约70％至约75％MDM2蛋白表达性细胞。在另一个实施方案中，术语“相对量”表示至少约45％，或至少约55％，或至少约65％，或至少约75％MDM2蛋白表达性细胞。在另一个实施方案中，上文所述相对量指MDM2阳性CD45dim(母)细胞的量，而且MDM2阳性CD45dim(母)细胞的量是相对于样品中的所有CD45母细胞而言的。如果使用数种类型的细胞(子集)进行分析，那么术语“相对量”也可以表示MDM2表达性细胞基于所述子集内细胞总数的百分比。
所述MDM2蛋白表达性细胞的相对量可以在治疗之前(基线时)自所述癌症患者获得的任何合适样品中测量。在一个实施方案中，所述样品为血液样品。在另一个实施方案中，所述样品为骨髓样品。可应用本领域技术人员知道的任何技术来检测所述MDM2蛋白表达性细胞的所述相对量。在一个实施方案中，所述MDM2蛋白表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的相对量是通过流式细胞术检测的。
在一个实施方案中，该患者为罹患如本文中定义的癌症的人。在另一个实施方案中，该患者罹患血液学病症，诸如例如AML。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于确定癌症患者对用MDM2抑制剂进行的治疗的响应的方法，其包含下述步骤：
a)自患者取得样品；
b)测量样品中MDM2蛋白表达性细胞的相对量；
c)将来自患者的所述相对量与标准值，例如自具有相同癌症的患者获得的值比较；并
d)施用作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
在这个实施方案内，如果应用本方法作为患者对治疗的响应的预测方法的话，a)中的样品是在治疗起动之前获得的；而且b)中的MDM2蛋白表达性细胞选自由CD45dim(母)细胞，CD117+(c-kit)和CD34+组成的组中的一项或多项。
在另一个实施方案中，本发明提供一种鉴定罹患癌症的患者为有可能响应包含MDM2抑制剂的疗法的体外方法，该方法包含：
a)测量在治疗之前自该患者获得的样品中MDM2蛋白表达性细胞的相对量；
b)将所述相对量与参照水平比较；并
d)当样品中MDM2蛋白表达性细胞的相对量在所述参照水平以上时，鉴定所述患者为更有可能响应包含所述MDM2抑制剂的疗法，
且其中a)中的MDM2蛋白表达性细胞选自由CD45dim(母)细胞，CD117+(c-kit)和CD34+组成的组中的一项或多项。
在这些实施方案内，a)中获得的相对量在参照水平以上指示患者有较高的可能性响应用MDM2抑制剂进行的治疗，而相对量在所述水平以下指示所述患者不太可能响应该治疗。
在来自NP28679白血病试验的标本的临床设置中测试MDM2拮抗剂预测性CD45dim(母)细胞签名的性能(图3)。作为一项剂量扩大研究的一部分治疗的30名AML患者提供全血标本，可通过流式细胞术进行分析。将临床响应终点分层入5个范畴：完全响应(CR)，伴有不完全血小板恢复的完全响应(CRi)，无形态学白血病状态(MLFS)，部分响应(PR)，血液学改善(HI)，和进展性疾病(PD)。在基线筛选时收集血液白血病样品。通过流式细胞术分析样品并表征CD45dim母细胞，然后在这些细胞的子集内进一步表征评分为MDM2蛋白表达呈阳性的CD45dim细胞的％。然后在响应者(CR，CRi，MLFS)和非响应者(PR，HI，PD)之间对基线％MDM2阳性细胞测试显著相关性。
如此，在一个实施方案中，本发明提供一种用于确定癌症患者对用MDM2抑制剂进行的治疗的响应的方法，其特征在于在治疗之前自该患者获得的样品中检测到的％MDM2阳性CD45dim母细胞越高，所述患者响应所述治疗的可能性越高，如例如通过临床药理学领域技术人员公知的ROC(AUC)值和分析指示的。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于确定癌症患者对用MDM2抑制剂进行的治疗的响应的方法，其包含下述步骤：
a)自患者取得样品；
b)测量样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量；
c)将来自患者的所述相对量与标准值，例如自具有相同癌症的患者获得的值比较；并
d)施用作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
如果应用本方法作为患者对治疗的响应的预测方法的话，a)中的样品是在起动治疗之前获得的。
在另一个实施方案中，本发明提供一种鉴定罹患癌症的患者为有可能响应包含MDM2抑制剂的疗法的体外方法，该方法包含：
a)测量在治疗之前自该患者获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量；
b)将所述相对量与参照水平比较；并
d)当样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量在所述参照水平以上时将所述患者鉴定为更有可能响应包含所述MDM2抑制剂的疗法。
在一个实施方案中，a)中获得的相对量在参照水平以上指示患者有较高的可能性响应用MDM2抑制剂进行的治疗，而相对量在所述水平以下指示所述患者不太可能响应该治疗。
在一个实施方案中，a)中获得的样品为血液白血病样品，或骨髓活检样品。
在一个实施方案中，该MDM2抑制剂为如美国专利8,354,444 B2中，或WO 2007/063013，WO 2010/031713，WO 2011/098398和WO 2013/135648中具体公开的化合物；或依照式I，II，IIa或III的化合物，或其组合。在另一个实施方案中，依照本发明使用的MDM2抑制剂为式(A)，(B)，(C)或(D)的化合物。
在另一个实施方案中，该MDM2抑制剂为式(B)的化合物4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸，
在还有另一个实施方案中，该MDM2抑制剂为式(C)的化合物4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2000)，
(平均MW：～2695)。
在还有另一个实施方案中，该MDM2抑制剂为式(D)的化合物4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2200)，
(平均MW：～2900)。
供依照本发明使用的MDM2抑制剂是本领域技术人员已知的。式II，IIA或(B)的化合物，用于生成它们的方法以及含有它们的药物制剂披露于例如美国专利No.8,354,444或WO2011/098398。式III，或(C)，或(D)的化合物和它们的制备披露于例如WO2013/135648。为了将所述MDM2抑制剂施用于患者的目的，可以依照药物投递方面技术人员公知的技术将这些化合物加工成药物制剂。
在依照本发明的一个实施方案中，化合物(B)作为口服剂量形式施用，其中它以其无定形形式分子散布。在另一个实施方案中，化合物(B)以单位剂量固体配制剂施用，其特征在于使用滚筒混合仪将通过化合物(B)连同占约80％wt/wt的核重的共聚维酮(PVP VA64)喷雾干燥获得的固体分散体与填充剂(6.8％直至10.8％的核重)，优选选自甘露醇，微晶纤维素，乳糖单水合物或二氧化硅；一种或两种崩解剂(4％wt/wt的核重)，选自交联羧甲基纤维素钠或交聚维酮；助流剂(1％wt/wt的核重)，优选胶体二氧化硅；和润滑剂(0.2％wt/wt的核重)，硬脂酸镁进一步混合。化合物(B)的上述剂量形式以及其它可应用剂量形式披露于例如WO2014/114575，通过援引将其收入本文。
式III，或(C)，或(D)的化合物的药物制剂包括那些适合于口服，鼻和/或胃肠外或静脉内施用的。配制剂可以方便地以单位剂量形式存在且可以通过药学领域公知的任何方法来制备。在一个实施方案中，式(C)或(D)的化合物以稳定的冻干配制剂提供，其用于静脉内施用，包含约0.1mg至约100mg化合物(I)，约10mM至约100mM缓冲剂，约25mg至约125mg冻干填充剂和等渗剂。经由用HCl或NaOH调节，所得配制剂应具有约5-7的pH。在另一个实施方案中，式(C)或(D)的化合物通过漩涡震荡在含0.9％氯化钠的无菌水中溶解，然后过滤通过滤器进入隔膜密封的管形瓶，用于静脉内施用。优选作为用于静脉内施用的冻干配制剂施用。式III，或(C)，或(D)的化合物的这些制剂以及其它可应用制剂披露于例如国际专利申请No.PCT/EP2014/062982，通过援引将其收入本文。
用于对患者施用本MDM2抑制剂的剂量和剂量进度表同样是本领域技术人员知道的且披露于例如WO2013/139687或美国专利申请No.14/217929(作为US 20140200255 A1公布)。依照本发明，式III，特别是式(C)和(D)的化合物是式(B)的化合物的前体药物。如此，式III，特别是式(C)和(D)的化合物会以在患者的血浆中实现有效剂量的式(B)的化合物的方式施用。如此，在一个实施方案中，依照本发明的药物包含式(C)或(D)的化合物，其特征在于它们以如下的方式进行剂量给药，对于28天治疗周期，多至约7天，优选多至约5天的施用期，在第1-7天，或优选第1-5天，以约50至约3000mg/天，或约80至约2500mg/天，或约80至约1600mg/天，或约200至约1600mg/天，或约400至约1600mg/天，或约400至约1200mg/天，或约400至约1000mg/天，或约400至约800mg/天，或约400至约600mg/天的量投递式(B)的化合物，接着是约21至约23天，优选多至约23天的休息期。日剂量，即以mg/天表示的化合物(B)的量，可以作为一剂(qd)或以两剂(BID)施用。当给予两剂时，它们优选以相等的量施用，一次在上午，一次在下文。在另一个实施方案中，本药物包含式(C)或(D)的化合物，其特征在于它们以如下的方式定进行剂量给药，对于28天治疗周期，多至5天的施用期，在第1-5天，以约200至约1200mg/天，或约400至约1200mg/天的量投递式(B)的化合物，接着是23天的休息期。
在另一个实施方案中，式(B)的化合物也可以直接施用，即不是经由式III，或(C)，或(D)的前体药物，而且使用上文所述口服剂量形式。如此，在本发明的另一个实施方案中，式(B)的化合物使用固体，口服剂量形式，例如包膜片剂来施用，对于28天治疗周期，多至5天的施用期，在第1-5天，以其无定形形式及以约200至约1200mg/天，或约400至约1200mg/天的量提供式(B)的化合物，接着是23天的休息期。
包含如本文中定义的MDM2抑制剂的药物可以与已知用于给定类型的癌症的另一疗法组合施用。例如，在治疗AML的情况中，所述MDM2抑制剂优选与阿糖胞苷或与阿糖胞苷和蒽环类抗生素组合。依照本发明的阿糖胞苷的治疗有效量(或“有效量”)表示有效实现协同，即大于叠加效应的量。由于阿糖胞苷作为AML的骨干疗法使用多年，因此本领域技术人员，例如临床医师可得到关于人中有效和耐受剂量的大量信息。例如，已经发现阿糖胞苷可以在AML的治疗(诱导方案)中作为单一药剂以较大的量给药，诸如第1至6天每12小时在2小时里多至3g/m2(静脉内)的量。关于在白血病的治疗中使用阿糖胞苷的一篇综述见例如“Nicholas D.Reese,Gary J.Schiller；Curr Hematol Malig Rep,2013,8:141-148”。在某些组合疗法(例如急性非淋巴细胞性白血病的诱导疗法)中，与其它抗癌药物组合的常用阿糖胞苷剂量为连续iv输注(第1-7天)100mg/m2/天或每12小时(第1-7天)iv 100mg/m2。(参见例如www.hospira.com)。
同样，技术人员，诸如临床肿瘤学家，完全知晓基于蒽环类抗生素的癌症疗法的可得性和使用。此类治疗选项的一篇广泛综述见例如：G.Minotti et al,Anthracyclines:Molecular Advances and Pharmacologic Developments in Antitumor Activity andCardiotoxicity,Pharmacological Reviews,2004,Vol.56 No.2,185-229。
在另一个实施方案中，依照本发明的MDM2抑制剂，优选式III，或(B)，或(C)，或(D)的化合物与化合物Cobimetinib组合施用，用于治疗如本文中定义的癌症。Cobimetinib的剂量形式，剂量和剂量方案可以自例如已公开的coBRIM III期试验(ClinicalTrials.gov标识符NCT01689519)获得。通过援引将NCT01689519研究中使用的Cobimetinib的所述剂量形式，剂量和剂量方案收入本文。
可以在p53基因突变状态的背景中使用对如本文中定义的MDM2阳性细胞，特别是MDM2阳性CD45dim(母)细胞获得的信息以更加准确地区分患者对治疗的响应/结局。患者的p53基因突变状态可充当另外的标志物来以改进的灵敏度和/或特异性检测所述患者对用依照本发明的MDM2抑制剂进行的治疗的响应。因此，在还有另一个实施方案中，本发明提供如本文中之前公开的用于测量自癌症患者获得的样品中如本文中定义的MDM2表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的％的任何方法，其进一步包含检测所述患者的样品中p53基因突变状态的步骤。在这个实施方案内，p53基因突变状态优选野生型。然而，p53基因突变的检测一般不应解释为该患者响应或受益于如本文中公开的MDM2抑制剂的治疗的可能性的排除标准。如此，在还有另一个实施方案中，本发明提供如本文中定义的MDM2表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的％的多变量分析和p53突变状态的组合，用于提供所述患者达到有益的临床终点，即响应治疗的可能性的更加精确的预测。
治疗方法
在还有另一个实施方案中，本发明还涉及治疗方法，其中首先检测自罹患癌症的患者获得的样品，优选血液或骨髓样品中如本文中定义的MDM2蛋白表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的相对量，相对于一个或一组标准水平或治疗前起始水平检测敏感性，然后施用MDM2抑制剂。优选所述MDM2抑制剂为如上文定义的通式I，II，III的化合物，或其药学可接受衍生物，更优选式IIa或III的化合物或其药学可接受衍生物。所述化合物可以以本领域技术人员公知的药物组合物施用。尤其优选用于对温血动物，尤其人施用，诸如鼻，口腔，直肠或，尤其口服施用，和用于胃肠外施用，诸如静脉内，肌肉内或皮下施用的组合物。更特别地，优选用于静脉内施用的组合物。
在这个实施方案内，通式I，II或III，优选IIa或III的化合物，或其药学可接受衍生物可以单独或与一种或多种其它治疗剂组合施用。可能的组合疗法可采取固定组合，或者交错或彼此独立给予的本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂的施用，或者固定组合和一种或多种其它治疗剂的组合施用的形式。
也在这个实施方案内，另外，通式I，II或III，优选IIa或III的化合物，或其药学可接受衍生物可以尤其与化学疗法(细胞毒性疗法)，靶向疗法，内分泌疗法，放射疗法，免疫疗法，手术干预，或这些的组合组合施用用于肿瘤疗法。在如上文描述的其它治疗策略的背景中，长期疗法与辅助疗法同等可能。其它可能的治疗有在肿瘤消退后维持患者的状态的疗法，或甚至例如在处于风险的患者中的化学预防疗法。
试剂盒和装置
一方面，本发明涉及一种试剂盒，而另一方面，涉及一种用于预测(优选受试者(或患者)中的癌症)对如本文中定义的通式I，II，III；或IIa或III；或(A)，(B)，(C)或(D)的化合物或其药学可接受衍生物的响应的装置，所述试剂盒包含用于样品收集，尤其是用于收集血液或骨髓样品的设备，工具或装置和如何检测所述样品中本文中定义的MDM2蛋白表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的相对量的说明书。
该试剂盒和装置还可以优选包含比较模块，其包含一个或一组标准值，与之比较样品中如本文中定义的所述MDM2蛋白表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的水平。
在另一个实施方案中，提供了一种用于预测对用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物进行的治疗的响应的试剂盒，其包含：
a)用于自罹患癌症，特别是血液学病症，诸如白血病，特别是AML的患者获得样品，优选血液或骨髓样品的设备；
b)如何自该样品检测一种或多种如本文中定义的MDM2蛋白表达性细胞类型，特别是CD45dim(母)细胞的相对量的说明书，优选通过使用流式细胞术，和任选还检测选自所述患者的p53基因突变状态，年龄和/或ECOG得分的另外的变体；
c)比较模块，其包含标准值和如何使用它们的说明书；和
d)药物，其包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
在还有另一个实施方案中，提供了如上所述的试剂盒，其中该作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物为如本文中定义的式I，II，III；或IIa或III；或(A)，(B)，(C)或(D)的化合物或其药学可接受衍生物。该一个或一组标准值可以如上所述确定。
在仍有另一个实施方案中，提供了如本文中定义的MDM2蛋白表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞作为用于预测患者对用MDM2抑制剂(拮抗剂)进行的治疗的响应的生物标志物的用途。
与预测性基因签名的组合
在另一个实施方案中，本方法，即如本文中之前定义的依照任何实施方案的MDM2蛋白表达性细胞的相对量(％)的检测，可以与作为另一个协变量的基线时自相同患者的样品检测的基因签名的评估组合。合适的基因签名和用于获得它们的方法披露于例子PCT/EP2014/064039，通过援引将其完整收入本文。此类组合通过应用特定的演算法(多变量分析)来进行，它可提供更加准确的患者临床受益于如本文中定义的MDM2抑制剂治疗的预测。改进的准确性可以例如通过与单独的任何早已较强的生物标志物(MDM2表达性细胞；或基因签名)相比多变量分析的AUC升高(即自0.93至0.95)和p值升高(自10-3至10-5)来证明。
因此，在一个实施方案中，本发明提供一种预测具有癌症的患者对疗法的响应性的方法，所述方法包含a)自所述患者取得一份或多份样品；b)测量步骤a)中获得的所述样品中至少一种MDM2蛋白表达性细胞类型的相对量(％)；c)检测步骤a)中获得的样品中至少一种依照表1的基因的表达水平；d)使用a)和b)的信息应用多变量分析以计算一项值(组合得分“S”)；e)比较“S”的所述值与标准值(或参照值)；并f)当“S”的值在所述标准值以上时将所述患者鉴定为更有可能响应疗法；其中所述疗法包含对所述患者施用如本文中之前定义的作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物(MDM2抑制剂)。
表1：MDM2抑制剂治疗的重要基因表达预测物
在这个实施方案内，该方法优选为体外方法。该患者为癌症患者，而且术语“癌症”如本文中之前定义的。用于步骤b)和c)中测量的样品可以相同或不同，而且如本文中之前定义的。优选所述相同或不同样品为在治疗起动之前(基线时)自所述患者取得的血液和/或骨髓样品。步骤b)中的术语“相对量”和“MDM2表达性细胞类型”如本文中之前定义的。优选地，MDM2蛋白表达性细胞类型选自CD45dim细胞，CD117+(c-kit)和CD34+干细胞。可以使用一种单一细胞类型或所述细胞类型的组合子集的相对量的，也如本文中之前定义的。所述细胞类型的测量是如上文定义进行的，优选通过流式细胞术。方法步骤c)中“至少一种基因”的检测包含检测依照表1的一种单一基因的水平或包含依照表1的2，或3，或4，或5，或6，或7，或8，或9，或10，或11，或12种基因的组合水平，或检测依照表1的所有13种基因。基因的检测优选表示检测mRNA表达水平，例如通过RT-PCR(实时聚合酶链式反应)或阵列技术，如PCT/EP2014/064039中公开的，及还如技术人员知道的。当通过RT-PCR测量基线时的mRNA表达水平时，自基线时(即在治疗之前)测量的相对表达水平(2Δ-CP)乘以体外观察到的方向后的之和来计算患者的签名得分。步骤d)中获得的组合得分“S”是基于b)中获得的自MDM2流式测量获得的值与c)中获得的基因签名得分相乘或相加而分析的。优选地，所述组合得分“S”是依照表2中所列演算法基于b)中获得的MDM2流式测量与3基因或4基因签名得分之积或和计算的。
表2：用于计算组合得分“S”的演算法
No. 名称 描述
1 3g得分.乘.MDM2.流式细胞术 3基因-签名-得分*MDM2.流式细胞术
2 3g得分.乘.log2.MDM2.流式细胞术 3基因-签名-得分*log2(MDM2.流式细胞术)
3 3g得分.加.log2.MDM2.流式细胞术 3基因-签名-得分+log2(MDM2.流式细胞术)
4 4g得分.乘.MDM2.流式细胞术 4基因-签名-得分*MDM2.流式细胞术
5 4g得分.乘.log2.MDM2.流式细胞术 4基因-签名-得分*log2(MDM2.流式细胞术)
6 4g得分.加.log2.MDM2.流式细胞术 4基因-签名-得分+log2(MDM2.流式细胞术)
g得分＝依照表1的3或4种基因的基因签名得分，如披露于PCT/EP2014/064039。
MDM2.流式细胞术＝如通过流式细胞术测量的MDM2表达性细胞类型的相对量。
依照表2中的演算法可获得的组合得分“S”与患者对用所述MDM2抑制剂进行的治疗的响应有关联。在一个实施方案中，在标准值(或参照值)以上的“S”值指示患者有可能响应或受益于用所述MDM2抑制剂进行的治疗，而在所述标准值以下的相对量指示所述患者不太可能响应或受益于该治疗。该标准值可取决于用于计算“S”的算法。例如，当在S的计算中使用3基因或4基因签名时，或当应用log2度量时(见图4)，参照水平是不同的。术语“响应”为如本文中之前定义的。同样，术语“MDM2抑制剂”如上文定义的。优选地，此类MDM2抑制剂为如本文中定义的式IIa，或III，或(B)，或(C)，或(D)的化合物，包括如本文中之前定义的任何药物制剂。在另一个实施方案中，所述MDM2抑制剂还可以与其它药学活性化合物，例如阿糖胞苷或cobimetinib组合，亦如本文中之前公开的。
在一个实施方案中，在上述方法的步骤c)中使用3或4基因签名得分。该3基因签名由XPC，BBC3和CDKN2A；或MDM2，XPC和BBC3的mRNA表达水平组成；该4基因签名由MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A的mRNA表达水平组成。当通过RT-PCR测量mRNA表达水平时，自基线时(即在治疗之前)测量的相对表达水平(2Δ-CP)乘以体外观察到的方向后的之和计算患者的签名得分，定义为4基因签名得分：S4基因-RT-PCR＝GMDM2+GXPC+GBBC3–GCDKN2A，其中Gx＝2Δ-CPx且Δ-CPMDM2＝CP持家–CPMDM2，Δ-CPXPC＝CP持家–CPXPC，Δ-CPBBC3＝CP持家–CPBBC3，Δ-CPCDKN2A＝CP持家–CPCDKN2A。术语“持家”表示任何合适的对照基因。在本发明的一个实施方案中，“持家”为作为内源对照基因的TMEM55B。
假设SMDM2-流式表示选定细胞类型，例如CD45dim母细胞群体中具有可检测MDM2蛋白表达的细胞的百分比。通过组合蛋白质表达测量MDM2SMDM2-流式和基于RT-PCR的4基因签名得分S4基因-RT-PCR，可以以下述三种方式计算组合得分“S”：
S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式；或
S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)。
类似地，假设3基因签名得分S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3–GCDKN2A，其自得分计算省略GMDM2，可以以相同方式计算组合得分“S”：
S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式；或
S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)。
同样地，用于计算组合得分“S”的上述方式也可应用于3基因签名得分S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3+GMDM2，其自得分计算省略GCDKN2A。
通过使用两样品Wilcoxon秩和检验及经由计算分类曲线下面积(AUC)检验基于任何上述六种定义的签名得分是否能显著区分响应者与非响应者，将组合签名得分“S”与NP29679试验(适应症：AML)部分1和2的临床响应关联。
因此，在一个实施方案中，上述方法的步骤b)包含检测下述各项的相对量：
i)MDM2阳性CD45dim细胞；或
ii)MDM2阳性CD117+(c-kit)和CD45dim细胞；或
iii)MDM2阳性CD34+和CD45dim细胞；或
iv)MDM2阳性CD34+和CD117+和CD45dim细胞；i)至iv)下获得的每个值称作SMDM2-流式；且
步骤c)包含通过RT-PCR检测3基因签名的mRNA水平，其中该3基因签名包含XPC，BBC3和CDKN2A或MDM2，XPC和BBC3并称作S3基因；且
依照选自由下述组成的组的算法通过多变量分析计算步骤d)中的组合得分“S”：
S＝S3基因×SMDM2-流式；或
S＝S3基因×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S3基因+log2(SMDM2-流式)；且
步骤a)，e)和f)如上文定义的。
在另一个实施方案中，上述方法的步骤b)包含检测下述各项的相对量：
i)MDM2阳性CD45dim细胞；或
ii)MDM2阳性CD117+(c-kit)和CD45dim细胞；或
iii)MDM2阳性CD34+和CD45dim细胞；或
iv)MDM2阳性CD34+和CD117+和CD45dim细胞；i)至iv)下获得的每个值称作SMDM2-流式；且
步骤c)包含通过RT-PCR检测4基因签名的mRNA水平，其中该4基因签名包含MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A且称作S4基因；且
依照选自由下述组成的组的算法通过多变量分析计算步骤d)中的组合得分“S”：
S＝S4基因×SMDM2-流式；或
S＝S4基因×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S4基因+log2(SMDM2-流式)；且
步骤a)，e)和f)如上文定义的。
在还有另一个实施方案中，提供了一种预测具有癌症的患者对疗法的响应性的体外方法，所述方法包含下述步骤：
a)基线时自患者取得血液和/或骨髓活检样品；
b)测量a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量(％)(SMDM2-流式)；
c)通过RT-PCR测量a)中获得的样品中MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A的mRNA表达水平，并依照下式计算3基因签名得分S3基因-RT-PCR：
S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3–GCDKN2A，或
S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3+GMDM2；
其中Gx＝2Δ-CPx且Δ-CPx＝CP持家–CPx；
d)依照下述演算法之一使用b)和c)中获得的值应用多变量分析以计算S的值：
S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式；或
S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)；
e)比较d)中获得的“S”的所述值与标准值，例如自具有相同癌症的患者获得的值；并
f)当d)中获得的“S”的值在所述标准值以上时施用如本文中定义的作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物，优选式IIa，III，(B)，(C)或(D)的化合物。
在这个实施方案内，“标准值”(或参照值)可依照步骤d)中应用的算法而不同。因此，在一个优选的实施方案中，当依照S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式计算“S”时，用于依照步骤e)的比较的标准值为约50，或约100，或约150(见图4b ii)和v))。在另一个优选的实施方案中，当依照S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)计算“S”时，用于依照步骤e)的比较的标准值为约8，或约10，或约12，或约15(见图4b i)和iv))。在另一个优选的实施方案中，当依照S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)计算“S”时，用于依照步骤e)的比较的标准值为约7，或约8，或约8.5，或约9(见图4b iii)和vi))。
在还有另一个实施方案中，提供了一种预测具有癌症的患者对疗法的响应性的体外方法，所述方法包含下述步骤：
a)基线时自该患者取得血液和/或骨髓活检样品；
b)测量a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量(SMDM2-流式，以％计)；
c)通过RT-PCR测量a)中获得的样品中MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A的mRNA表达水平，并依照下式计算4基因签名得分S4基因-RT-PCR：
S4基因-RT-PCR＝GMDM2+GXPC+GBBC3–GCDKN2A
其中Gx＝2Δ-CPx且Δ-CPx＝CP持家–CPx；
d)依照下述演算法之一使用b)和c)中获得的值应用多变量分析以计算S的值：
S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式；或
S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)；
e)比较d)中获得的“S”的所述值与标准值，例如自具有相同癌症的患者获得的值；并
f)当d)中获得的“S”的值在所述标准值以上时施用如本文中定义的作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物，优选式IIa，III，(B)，(C)或(D)的化合物。
在这个实施方案内，“标准值”(或参照值)可依照步骤d)中应用的算法而不同。因此，在一个优选的实施方案中，当依照S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式计算“S”时，用于依照步骤e)的比较的标准值为约200，或约300，或约400，或约450，或约500(见图4a i)和iv))。在另一个优选的实施方案中，当依照S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)计算“S”时，用于依照步骤e)的比较的标准值为约27，或约30，或约33，或约36，或约40(见图4a ii)和v))。在另一个优选的实施方案中，当依照S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)计算“S”时，用于依照步骤e)的比较的标准值为约10，或约10.5，或约11，或约11.5或约12(见图4a iii)和vi))。
在另一个实施方案中，如任何上述实施方案中定义的组合得分“S”在治疗期间使用，即监测用如本文中之前定义的MDM2抑制剂对癌症患者进行的治疗。在这个实施方案内，依照任何上文所述方法的步骤a)中的样品是在治疗期间取得的，而且当d)中获得的组合得分在相应标准值以上时继续治疗。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于确定癌症患者对用如本文中定义的MDM2抑制剂进行的治疗的响应的方法，其特征在于依照本文中之前定义的任何算法获得的组合得分“S”越高，所述患者响应所述治疗的可能性越高，如例如通过临床药理学领域技术人员公知的ROC(AUC)值和分析指示。
依照上文定义的任何方法/算法获得的组合得分“S”可以在p53基因突变状态的背景中使用以甚至更加准确地区分患者对治疗的响应/受益。患者的p53基因突变状态可充当另外的标志物来以改善的灵敏度和/或特异性检测所述患者对用如本文中定义的MDM2抑制剂进行的治疗的响应。因此，在还有另一个实施方案中，本发明提供用于获得如本文中定义的组合得分“S”的任何方法，其进一步包含检测所述患者的样品中p53基因突变状态的步骤。在这个实施方案内，p53基因突变状态优选为野生型。然而，p53基因突变的检测一般不应理解为患者响应或受益于用如本文中公开的MDM2抑制剂进行的治疗的可能性的排除标准。如此，在还有另一个实施方案中，本发明提供组合，多变量分析，其组合如本文中定义的％MDM2表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞与基因签名得分，优选如上文定义的3和4基因签名得分，和p53突变状态以提供所述患者达到有益的临床终点的可能性，即响应治疗的更加精确的预测。在仍有另一个实施方案中，这项多变量分析中的又一些协变量为患者的年龄和/或ECOG得分。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗癌症患者的方法，其包含依照上文定义的任一方法获得组合得分“S”，并如果“S”的所述值在亦如本文中之前定义的标准或参照值以上的话对所述患者施用MDM2抑制剂。在一个实施方案中，该MDM2抑制剂为如本文中之前定义的。在另一个实施方案中，该MDM2抑制剂为如上文定义的式(II)，(IIa)，(B)，(C)或(D)的化合物。在另一个实施方案中，还在自所述癌症患者获得的样品中检测的p53突变状态为优选野生型。
一方面，本发明涉及一种试剂盒，而另一方面，涉及一种用于预测(优选受试者(或患者)中的癌症)对如本文中定义的通式I，II，III；或IIa或III；或(A)，(B)，(C)或(D)的化合物或其药学可接受衍生物的响应的装置，所述试剂盒包含用于样品收集，尤其是用于收集血液或骨髓样品的设备，工具或装置和如何检测所述样品中如本文中定义的MDM2蛋白表达性细胞，特别是CD45dim(母)细胞的相对量，和一种或数种依照表1的基因，优选3或4基因签名的mRNA水平的说明书。
该试剂盒和装置还包含如何自检测到的MDM2蛋白表达性细胞的相对量和mRNA水平获得组合得分“S”的说明书。
该试剂盒和装置还可以优选包含比较模块，其包含一个或一组标准值，与之比较自患者的样品获得的“S”的值。
在另一个实施方案中，提供了一种用于预测对用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物进行的治疗的响应的试剂盒，其包含：
a)用于自罹患癌症，特别是血液学病症，诸如白血病，特别是AML的患者获得样品，优选血液或骨髓样品的设备；
b)如何检测下述各项的说明书：
i)该样品中一种或多种如本文中定义的MDM2蛋白表达性细胞类型，特别是CD45dim(母)细胞的相对量，优选通过使用流式细胞术，
ii)XPC，BBC3，CDKN2A和任选的MDM2的mRNA表达水平，优选通过使用RT-PCR；和
iii)任选还检测选自患者的p53基因突变状态，年龄和/或ECOG得分的协变量；
c)比较模块，其包含标准值和如何使用它们的说明书；和
d)药物，其包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
在还有另一个实施方案中，提供了如上所述的试剂盒，其中该作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物为如本文中定义的式I，II，III；或IIa或III；或(A)，(B)，(C)或(D)的化合物或其药学可接受衍生物。该一个或一组标准值可以如上所述确定。
下述实施例例示而非限制本发明。
实施例
实施例1
此实施例描述自参与研究NP28679(部分1和2)的患者获得的MDM2表达性CD45dim母细胞的相对量使用流式细胞术的检测。
材料
CD34 PerCP BD(Becton Dichinson)，产品目录号340666
CD45 AF700，由赞助CRO定制
Mdm2 AF647，Santa Cruz Biotech，产品目录号sc-5304AF647
渗透缓冲液III，BD，产品目录号558050
BD裂解/固定，产品目录号558049
含1％BSA的PBS，依照赞助CRO的SOP的定制制备
染色规程
依照下述规程对细胞染色：将适宜供体的100μl血液添加至适宜标记的管。随后通过添加抗体荧光染料缀合物对除CD34以外的表面标志物染色或使用相应同种型对照。然后将管漩涡震荡并于室温在黑暗中温育20分钟。用PBS BSA缓冲液清洗后，将管离心并倾倒。然后添加2ml预热的1x BD裂解/固定液，将管漩涡震荡并于在37℃水浴中温育15分钟。温育后，将管离心并倒出上清液。两个清洗步骤后，使用BD裂解/固定渗透缓冲液与PBS/BSA一起添加用于细胞内染色的适宜抗体或同种型对照。添加CD34或相应同种型。将管于室温在黑暗中温育30分钟。然后将管用PBS/BSA清洗两次并最终在500μl中重悬浮用于在FACSCantoII流式细胞仪中获取。获取了250’000例事件。
用于结果输出的电子门控
对于结果生成，必须使用流式细胞术分析软件像Winlist或Flowjo。首先，围绕具有正常尺寸(前向散射，FSC)和粒度特征(侧向散射，SSC)的所有细胞设立一个门：全部有核细胞门(TNC，图1中的R1)。在此TNC子集中，然后通过围绕具有可疑CD45表达和低侧向散射特性的细胞设立一个区域来鉴定AML母细胞群体(图1中的R3)。通过门控CD34阳性或阴性母细胞(图1，分别为R6和R39)，可以进一步精炼母细胞群体。CD34阳性的阈可以通过在该相应通道中使用同种型对照染色来鉴定(未显示)。
接下来，如图2中所示，在点图中显示CD45dim一般母细胞群体和另外表达CD34的更加精炼的母细胞群体。使用同型对照代替Mdm2染色可以用于设置Mdm2阳性的阈(图2上部两幅小图)。包括Mdm2识别抗体的染色条件显示在图2的底部。落在定义为Mdm2阳性的区域中的细胞群体通过计算相应母细胞亲本群体内Mdm2表达性细胞的百分比来确定。
MDM2表达性CD45dim母细胞的相对量与患者对用式(B)的MDM2抑制剂进行的治疗的响应的关联
依照上文所述方法对参与研究NP28679(部分1和2)的患者获得MDM2表达性CD45dim母细胞的相对量，并将所述量对所述患者的响应绘图(图3)。取决于是否将部分响应(PR)包括在响应者组中，证明治疗之前MDM2表达性细胞的相对量指示该患者对用式(B)的MDM2抑制剂进行的治疗的响应。特别地，证明了在患者的样品中检测到的所有CD45母细胞中，％MDM2阳性CD45dim母细胞越高，该患者具有改善的临床终点获益(“响应”)的可能性越高，如例如由ROC(AUC)值和分析指示的。
实施例2
此实施例描述如本文中定义的“S”组合得分的计算，及其与参与研究NP28679(部分1和2)的患者的响应的关联。依照实施例1检测MDM2阳性CD45dim细胞的相对量，并通过RT-PCR测量基线时MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A的mRNA表达水平。通过UV吸收对自血液或骨髓分离的总RNA定量。对于每个PCR反应，使用固定的总RNA输入。使用来自Roche Molecularsystems的专有DNA聚合酶实施PCR。该聚合酶能够逆转录，所以用一套基因特异性引物在一个反应中对RNA实施直接扩增和检测。实时PCR利用技术及用于扩增和检测靶物和对照核酸的引物和探针。使用3个反应孔来检测4种靶物基因。在每个反应孔中包括内源对照。使用z480分析仪进行扩增和检测。
使用机载的(LC)480软件为每个荧光通道计算循环阈值(Cp)。用TMEM55B作为内源对照基因进行表达的标准化，其中靶基因(x)的相对表达水平(浓度)定义为Gx＝2Δ-CPx，其中Δ-Cpx＝Cp(TMEM)–Cpx，且靶基因(x)为MDM2，BBC3，XPC和CDKN2A。
然后自基线时(即在治疗之前)测量的相对表达水平(Gx)，乘以在体外观察到的方向之后的和计算患者的签名得分，定义为4基因签名得分S4基因-RT-PCR＝GMDM2+GXPC+GBBC3–GCDKN2A。同样地，3基因签名得分定义为S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3–GCDKN2A。
对于组合得分“S”的后续计算，假设SMDM2-流式表示CD45dim母细胞群体中具有可检测的MDM2蛋白表达的细胞的百分比。通过组合蛋白质表达测量MDM2SMDM2-流式和基于RT-PCR的4基因签名得分S4基因-RT-PCR，以下述三种方式计算组合得分“S”：
1.S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式；
2.S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；
3.S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)。
相似地，假设3基因签名得分S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3–GCDKN2A，其自得分计算省略GMDM2，以相同方式计算“S”：
1.S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式；
2.S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；
3.S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)。
然后通过使用两样品Wilcoxon秩和检验及经由计算分类曲线下面积(AUC)检验基于任何上述六种定义的签名得分是否能显著区分响应者与非响应者，将组合签名得分“S”与在罹患AML的患者的临床试验(NP29679试验部分1和2)中看到的临床响应关联。结果显示于图4a和4b。关联患者的响应与单独的MDM2，BBC3，XPC和CDKN2A每一项的mRNA表达水平的比较数据显示于图5。

Claims (35)

1.一种预测具有癌症的患者对疗法的响应性的体外方法，所述方法包含检测在治疗之前自所述癌症患者获得的样品中一种或多种MDM2蛋白表达性细胞类型的相对量和使用所述相对量或表达MDM2蛋白的细胞的百分比(％)作为生物标志物用于预测所述患者对用药物进行的治疗的响应，其中该药物包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物，且其中所述MDM2蛋白表达性细胞类型或生物标志物选自由CD45dim细胞，CD117+(c-kit)或CD34+干细胞，或其组合子集组成的组。
2.依照权利要求1的方法，所述方法包含：
a)自癌症患者取得样品；
b)检测a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的所述相对量；
c)将b)中获得的MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量与来自具有相同癌症的患者的标准值比较；并
d)如果b)中检测到的量在所述标准值以上的话，施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物。
3.依照权利要求1或2的方法，其中该癌症选自由乳腺癌，前列腺癌，宫颈癌，卵巢癌，胃癌，结直肠癌，胰腺癌，肝癌，脑癌，神经内分泌癌，肺癌，肾癌，血液学恶性肿瘤，黑素瘤和肉瘤组成的组。
4.依照权利要求3的方法，其中所述患者罹患血液学癌症，特别是白血病。
5.依照权利要求4的方法，其中所述患者罹患AML。
6.依照权利要求1至5任一项的方法，其中MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量是通过流式细胞术检测的。
7.依照权利要求1或7任一项的方法，其中自所述患者获得的样品是血液样品或骨髓样品。
8.依照权利要求1至7任一项的方法，其中当在治疗之前自所述患者获得的所述样品中检测到的MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量超过45％或55％时施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的所述药物。
9.依照权利要求1的方法，所述方法包含：
a)自罹患AML的患者取得血液或骨髓样品；
b)通过流式细胞术检测a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量；
c)将b)中获得的MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量与来自具有相同癌症的患者的标准值比较；并
d)如果b)中检测到的量在所述标准值以上的话，施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物。
10.依照权利要求1至9任一项的方法，其中该药物包含下述各项作为MDM2-p53相互作用的抑制剂，
式(IIa)的化合物
其中
R6为-(CH2)n-R’，且
R’为苯基，吡啶基，吡嗪基或嘧啶基，每个可以是未取代的或用独立选自卤素，C1-6烷氧基，C1-6烷基，羟基羰基，羧基，羧基C1-6烷氧基，氧代和CN的取代基取代一次或两次的；且
n为0，及其药学可接受盐；或
式(III)的化合物
其中
X选自H，F或Cl；
Y选自H，F或Cl；
Z为C1-6烷氧基；
R1为C1-6烷基；
R2为
其中
W为F，Cl或Br；
V为H或F；
R3为氢或C1-6烷基；
R4为–C(O)-R5；其中
R5选自由-(OCH2CH2)n-OH；-(OCH2CH2)n-OCH3；和-(OCH2CH2)n-OP(O)(OR6)2组成的组，其中n为3至60，且R6为氢；或
其药学可接受盐。
11.依照权利要求10的方法，其中该药物包含式(B)的化合物4-{[2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸作为MDM2-p53相互作用的抑制剂，
12.依照权利要求10的方法，其中该药物包含式(C)的化合物4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2000)作为MDM2-p53相互作用的抑制剂，
13.依照权利要求1至12任一项的方法，其中在与阿糖胞苷或阿糖胞苷和蒽环类抗生素的组合的同时或序贯组合中施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物。
14.依照权利要求1至13任一项的方法，其进一步包含在施用包含MDM2-p53相互作用的抑制剂作为活性组分的药物之前检测癌症患者的p53基因突变状态的步骤。
15.MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞用于预测罹患癌症的患者对用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物进行的治疗的响应的用途。
16.依照权利要求15的用途，其中该患者罹患血液学病症，诸如白血病，特别是AML。
17.一种治疗有需要的患者中的癌症的方法，所述方法包含：检测在治疗之前自所述癌症患者获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量，并当所述母细胞的相对量超过45％或55％时施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物。
18.权利要求17的方法，其中该患者罹患选自由乳腺癌，前列腺癌，宫颈癌，卵巢癌，胃癌，结直肠癌，胰腺癌，肝癌，脑癌，神经内分泌癌，肺癌，肾癌，血液学恶性肿瘤，黑素瘤和肉瘤组成的组的癌症。
19.权利要求17或18的方法，其中该患者罹患血液学病症，诸如白血病，特别是AML。
20.依照权利要求17至19任一项的方法，其中该样品为在治疗之前自患者获得的血液或骨髓样品，且MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量是通过流式细胞术检测的。
21.权利要求17的方法，其包含：
a)自罹患AML的患者取得血液或骨髓样品；
b)通过流式细胞术检测a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量；
c)将b)中获得的MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量与来自具有相同癌症的患者的标准值比较；并
d)如果b)中检测到的量在所述标准值以上的话，施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物。
22.依照权利要求17至21任一项的方法，其中该药物包含下述各项作为MDM2-p53相互作用的抑制剂，
式(IIa)的化合物
其中
R6为-(CH2)n-R’，且
R’为苯基，吡啶基，吡嗪基或嘧啶基，每个可以是未取代的或用独立选自卤素，C1-6烷氧基，C1-6烷基，羟基羰基，羧基，羧基C1-6烷氧基，氧代和CN的取代基取代一次或两次的；且
n为0，及其药学可接受盐；或
式(III)的化合物
其中
X选自H，F或Cl；
Y选自H，F或Cl；
Z为C1-6烷氧基；
R1为C1-6烷基；
R2为
其中
W为F，Cl或Br；
V为H或F；
R3为氢或C1-6烷基；
R4为–C(O)-R5；其中
R5选自由-(OCH2CH2)n-OH；-(OCH2CH2)n-OCH3；和-(OCH2CH2)n-OP(O)(OR6)2组成的组，其中n为3至60，且R6为氢；或其药学可接受盐。
23.依照权利要求22的方法，其中该药物包含式(B)的化合物4-{[2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸作为MDM2-p53相互作用的抑制剂，
24.依照权利要求22的方法，其中该药物包含式(C)的化合物4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG，平均MW，～2000)作为MDM2-p53相互作用的抑制剂，
25.依照权利要求17至24任一项的方法，其中在与阿糖胞苷或阿糖胞苷和蒽环类抗生素的组合的同时或序贯组合中施用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物。
26.依照权利要求17至25任一项的方法，其进一步包含在施用包含MDM2-p53相互作用的抑制剂作为活性组分的药物之前检测癌症患者的p53基因突变状态的步骤。
27.一种用于预测对用包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物的药物进行的治疗的响应的试剂盒，其包含：
a)用于自罹患癌症，特别是血液学病症，诸如白血病，特别是AML的患者获得样品，优选血液或骨髓样品的设备；
b)如何自该样品检测MDM2蛋白表达性CD45dim母细胞的相对量，和任选的还有p53基因突变状态的说明书；
c)比较模块，其包含b)中检测的参数的标准值和如何使用它们的说明书；和
d)药物，其包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
28.依照权利要求27的试剂盒，其中作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物为依照权利要求21至23的方法中使用的化合物。
29.依照权利要求1至14任一项的方法，其进一步包含检测至少一种选自由BAX，RPS27L，EDA2R，XPC，DDB2，FDXR，MDM2，CDKN1A，TRIAP1，BBC3，CCNG1，TNFRSF10B，或CDKN2A组成的组的基因的水平并将该值与依照权利要求1的MDM2蛋白表达性细胞的相对量组合以获得组合得分“S”，并使用该组合得分“S”作为生物标志物用于预测患者对化合物的响应，其中该化合物为MDM2-p53相互作用的抑制剂。
30.权利要求29的方法，其中所述方法为包含下述步骤的预测具有癌症的患者对疗法的响应性的体外方法：
a)在基线时自患者取得血液和/或骨髓活检样品；
b)测量a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量(％)(SMDM2-流式)；
c)通过RT-PCR测量a)中获得的样品中MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A的mRNA表达水平，并依照下式计算3基因签名得分S3基因-RT-PCR：
S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3–GCDKN2A或
S3基因-RT-PCR＝GXPC+GBBC3+GMDM2，
其中Gx＝2Δ-CPx且Δ-CPx＝CP持家–CPx；
d)依照下述演算法之一使用b)和c)中获得的值应用多变量分析以计算值S：
S＝S3基因-RT-PCR×SMDM2-流式；或
S＝S3基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S3基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)；
e)将d)中获得的“S”的所述值与标准值，例如自具有相同癌症的患者获得的值比较；并
f)当d)中获得的“S”的值在所述标准值以上时施用作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
31.权利要求29的方法，其中所述方法为包含下述步骤的预测具有癌症的患者对疗法的响应性的体外方法：
a)在基线时自患者取得血液和/或骨髓活检样品；
b)测量a)中获得的样品中MDM2蛋白表达性CD45dim(母)细胞的相对量(SMDM2-流式，以％计)；
c)通过RT-PCR测量a)中获得的样品中MDM2，XPC，BBC3和CDKN2A的mRNA表达水平，并依照下式计算4基因签名得分S4基因-RT-PCR：
S4基因-RT-PCR＝GMDM2+GXPC+GBBC3–GCDKN2A，
其中Gx＝2Δ-CPx且Δ-CPx＝CP持家–CPx；
d)依照下述演算法之一使用b)和c)中获得的值应用多变量分析以计算值S：
S＝S4基因-RT-PCR×SMDM2-流式；或
S＝S4基因-RT-PCR×log2(SMDM2-流式)；或
S＝S4基因-RT-PCR+log2(SMDM2-流式)；
e)将d)中获得的“S”的所述值与标准值，例如自具有相同癌症的患者获得的值比较；并
f)当d)中获得的“S”的值在所述标准值以上时施用作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
32.依照权利要求30或31的方法，其中该癌症患者罹患AML且该MDM2-p53相互作用的抑制剂为依照权利要求10至12的方法中使用的化合物。
33.一种用于治疗罹患癌症，优选AML的患者的方法，其包含依照权利要求30或31的方法检测值“S”，并当“S”的值在标准值以上时起动或继续所述治疗，其中该治疗包含作为MDM2-p53相互作用的抑制剂起作用的化合物。
34.依照权利要求1，30或31的方法，其进一步包含至少一种独立选自患者的p53突变状态，年龄或ECOG得分的组的另外的协变量。
35.基本上如说明书中定义的新颖方法和用途。
CN201580048899.7A 2014-10-10 2015-10-07 Mdm2拮抗剂的癌症疗法的患者个性化方法 Expired - Fee Related CN106716131B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462062214P 2014-10-10 2014-10-10
US62/062,214 2014-10-10
US201462085863P 2014-12-01 2014-12-01
US62/085,863 2014-12-01
PCT/EP2015/073078 WO2016055497A1 (en) 2014-10-10 2015-10-07 Methods for personalizing patient cancer therapy with an mdm2 antagonist

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106716131A true CN106716131A (zh) 2017-05-24
CN106716131B CN106716131B (zh) 2020-07-24

Family

ID=54324951

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580048899.7A Expired - Fee Related CN106716131B (zh) 2014-10-10 2015-10-07 Mdm2拮抗剂的癌症疗法的患者个性化方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20170227544A1 (zh)
EP (1) EP3204776B1 (zh)
JP (1) JP6608439B2 (zh)
CN (1) CN106716131B (zh)
WO (1) WO2016055497A1 (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101730708B (zh) 2007-03-28 2013-09-18 哈佛大学校长及研究员协会 缝合多肽
EP2768518A4 (en) 2011-10-18 2015-05-27 Aileron Therapeutics Inc PEPTIDOMIMETIC MACROCYCLES
CA2864120A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Aileron Therapeutics, Inc. Triazole-crosslinked and thioether-crosslinked peptidomimetic macrocycles
KR20150082307A (ko) 2012-11-01 2015-07-15 에일러론 테라퓨틱스 인코포레이티드 이치환 아미노산 및 이의 제조 및 사용 방법
CA2961029A1 (en) 2014-09-24 2016-03-31 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and formulations thereof
JP2017533889A (ja) 2014-09-24 2017-11-16 エルロン・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｉｌｅｒｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ペプチド模倣大環状分子およびその使用
WO2016154058A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1934072A (zh) * 2004-01-30 2007-03-21 派普林生物脂股份有限公司 治疗和载体分子
CN101415420A (zh) * 2006-04-05 2009-04-22 诺瓦提斯公司 用于治疗癌症的治疗剂的组合
CN103153302A (zh) * 2010-04-09 2013-06-12 密歇根大学董事会 针对用于治疗疾病的mdm2抑制剂的生物标记

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8354444B2 (en) * 2008-09-18 2013-01-15 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrrolidine-2-carboxamides
WO2012087278A1 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 Tebbi Cameron K Methods of detecting leukemia/ lymphoma and induction of the same
US8993614B2 (en) * 2012-03-15 2015-03-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Substituted pyrrolidine-2-carboxamides
US20130245089A1 (en) * 2012-03-19 2013-09-19 Hoffmann-La Roche Inc. Method for administration
US20150159222A1 (en) * 2012-07-31 2015-06-11 Novartis Ag Markers associated with human double minute 2 inhibitors
US9657351B2 (en) * 2013-12-06 2017-05-23 Hoffman-La Roche Inc. MRNA-based gene expression for personalizing patient cancer therapy with an MDM2 antagonist

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1934072A (zh) * 2004-01-30 2007-03-21 派普林生物脂股份有限公司 治疗和载体分子
CN101415420A (zh) * 2006-04-05 2009-04-22 诺瓦提斯公司 用于治疗癌症的治疗剂的组合
CN103153302A (zh) * 2010-04-09 2013-06-12 密歇根大学董事会 针对用于治疗疾病的mdm2抑制剂的生物标记

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A VAN RHENEN ET AL.: "Aberrant marker expression patterns on the CD34+CD38- stem cell compartment in acute myeloid leukemia allows to distinguish the malignant from the normal stem cell compartment both at diagnosis and in remission", 《LEUKEMIA》 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3204776A1 (en) 2017-08-16
EP3204776B1 (en) 2019-09-04
CN106716131B (zh) 2020-07-24
JP6608439B2 (ja) 2019-11-20
US20170227544A1 (en) 2017-08-10
WO2016055497A1 (en) 2016-04-14
JP2017533422A (ja) 2017-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Offringa et al. The expanding role for small molecules in immuno-oncology
CN106716131B (zh) Mdm2拮抗剂的癌症疗法的患者个性化方法
Xia et al. Autophagic adaptation to oxidative stress alters peritoneal residential macrophage survival and ovarian cancer metastasis
Punekar et al. The current state of the art and future trends in RAS-targeted cancer therapies
Fan et al. A dual PI3K/HDAC inhibitor induces immunogenic ferroptosis to potentiate cancer immune checkpoint therapy
Farago et al. Combination olaparib and temozolomide in relapsed small-cell lung cancer
Hu et al. Discovery and characterization of SY-1365, a selective, covalent inhibitor of CDK7
Yuan et al. Signal pathways and precision therapy of small-cell lung cancer
Felsenstein et al. Precision medicine for urothelial bladder cancer: update on tumour genomics and immunotherapy
Yang et al. HCK is a survival determinant transactivated by mutated MYD88, and a direct target of ibrutinib
Zamarin et al. Mogamulizumab in combination with durvalumab or tremelimumab in patients with advanced solid tumors: a phase I study
Chaft et al. Coexistence of PIK3CA and other oncogene mutations in lung adenocarcinoma–rationale for comprehensive mutation profiling
JP2024037857A (ja) ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤を用いて癌患者を治療する方法
Keenan et al. Clinical efficacy and molecular response correlates of the WEE1 inhibitor adavosertib combined with cisplatin in patients with metastatic triple-negative breast cancer
Casaluce et al. Resistance to crizotinib in advanced non-small cell lung cancer (NSCLC) with ALK rearrangement: mechanisms, treatment strategies and new targeted therapies
Scolaro et al. Nucleotide metabolism in cancer cells fuels a UDP-driven macrophage cross-talk, promoting immunosuppression and immunotherapy resistance
Nkandeu et al. The involvement of a chemokine receptor antagonist CTCE‐9908 and kynurenine metabolites in cancer development
US20220267445A1 (en) Methods and Compositions for Determining Susceptibility to Treatment with Checkpoint Inhibitors
Wang et al. ZFP91 disturbs metabolic fitness and antitumor activity of tumor-infiltrating T cells
Yeh et al. The c. 1085A> G genetic variant of CSF1R gene regulates tumor immunity by altering the proliferation, polarization, and function of macrophages
Lee et al. Tumour regression via integrative regulation of neurological, inflammatory, and hypoxic tumour microenvironment
Zhang et al. D3S-001, a KRAS G12C inhibitor with rapid target engagement kinetics, overcomes nucleotide cycling, and demonstrates robust preclinical and clinical activities
Badeaux et al. Arginase therapy combines effectively with immune checkpoint blockade or agonist anti-OX40 immunotherapy to control tumor growth
Wu et al. Inhibition of B-cell receptor signaling disrupts cell adhesion in mantle cell lymphoma via RAC2
Pei et al. AXL antibody and AXL-ADC mediate antitumor efficacy via targeting AXL in tumor-intrinsic epithelial-mesenchymal transition and tumor-associated M2-like macrophage

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1238330

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20200724

Termination date: 20211007

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1238330

Country of ref document: HK