CN106661584B - 用于增加植物生长和产量的方法和组合物 - Google Patents
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Abstract
本文提供了用于改善植物生长的组合物和方法。也提供了用于表达转录因子(TF)的表达构建体、多核苷酸和多肽，包含该表达构建体、多核苷酸和多肽的植物，和产生转基因植物的方法，该转录因子的表达可改善农业性质，包括但不限于作物产量、生物和非生物胁迫耐受性、和早期活力。
Description
发明领域
本发明涉及用于控制参与植物生长和发育的基因表达的方法和组合物。
发明背景
持续增加的世界人口和日渐减少的农业可耕种土地供应推动开发具有增加的生物质和产量的植物。常规农作物和园艺改进手段采用选择性育种技术来鉴定具有所需特性的植物。然而，这种选择性育种技术具有几个缺陷，即，这些技术一般是费力的并且产生通常含有异源遗传组件的植物，其可能并不总是导致所需的性状从亲本植物传递下去。分子生物学的进展提供了调节植物种质的手段。植物遗传改造要求分离和操作遗传物质(一般是DNA或RNA的形式)并且随后向植物导入该遗传物质。这种技术具有向作物或植物递送各种改善的经济、农业或园艺性状的能力。
感兴趣性状包括植物生物质和产量以及对非生物胁迫条件的耐受性。产量通常定义为可测量的来自作物的有经济价值的产物。这可以量和/或质来定义。产量直接取决于几个因素，例如，器官的数量和尺寸、植物结构(例如，分枝数量)、种子产生、叶衰老等。根发育、营养摄入、胁迫耐受性和早期活力也可能是决定产量的重要因素。因此，优化上述因素可产生增加的植物产量。植物遇到的非生物胁迫可包括高或低温度胁迫、干旱或浇水过度和盐胁迫。植物对于这些和其他非生物胁迫的响应可能对产量有重要影响，因为这些胁迫可导致产量显著降低。因此需要产生面对非生物胁迫时保持其生长以最大化其在非优化生长条件下的产量的植物和植物变体。
种子产量的增加是特别重要的性状，因为许多植物的种子对于人和动物消耗而言是重要的。作物例如玉米、水稻、小麦、油菜和大豆占总人热量摄入的超过一般，无论是通过直接消耗其种子或通过消耗在经加工的种子上产生的肉制品。它们也是工业过程中使用的糖类、油脂和许多类型矿物质的来源。种子含有胚(新芽和根的来源)和胚乳(在萌发期间和幼苗的早期生长期间胚生长的营养源)。种子的发育涉及许多基因，并且需要将代谢物从根、叶和茎转移到生长的种子中。尤其是胚乳，其吸收了糖类、油脂和蛋白质的代谢前体并将它们合成储存大分子以填充谷粒。植物生物质的增加对于饲料作物如苜蓿、青贮玉米和干草而言重要。许多基因参与植物生长和发育。因此，需要调节这些基因的方法。
发明内容
提供了用于获得更高的作物产量而增加植物生长的方法和组合物。组合物包含转录因子，包含转录因子的构建体，和含有转录因子的转基因植物、种子和植物部分。可使用转录因子通过调节感兴趣植物中一种或多种转录因子的表达水平和/或表达模式来改变植物生长和/或胁迫耐受性。可调节调控参与植物生长、光合作用的基因或其他基因的转录因子来增加植物生长、增加植物质量、改善植物胁迫耐受性、并且增加植物产量。
本发明的实施方式包括：
1.一种通过改变或调节编码选自下组的多肽或其片段或变体的至少一种核苷酸序列的表达来改善感兴趣植物中的植物生长的方法：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、21、23、27、29、31、33、35、37、39、43、45、47、49、或51。
2.如实施方式1所述的方法，其中所述核苷酸序列编码选自下组的多肽或其片段或变体：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、或16。
3.如实施方式1所述的方法，其中至少一种核苷酸序列上调，使得TF的表达相对于对照植物细胞增加。
4.如实施方式1所述的方法，其中至少一种核苷酸序列下调，使得TF的表达相对于对照植物细胞减少。
5.如实施方式1、2、3或4所述的方法，其中所述调节通过稳定插入至少一种表达构建体来实现，所述表达构建体包含驱动在植物细胞中表达的启动子，所述启动子可操作地连接至编码至少一种转录因子的至少一种核苷酸序列，其中所述转录因子包含选自下组的多肽：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、21、23、27、29、31、33、35、37、39、43、45、47、49、或51。
6.如实施方式1或2中任一项所述的方法，其中所述片段或变体与所述核苷酸序列或所述多肽序列具有至少80％的序列相同性。
7.如实施方式1或2中任一项所述的方法，其中所述片段或变体与所述核苷酸序列或所述多肽序列具有至少90％的序列相同性。
8.如实施方式1或2中任一项所述的方法，其中所述片段或变体与所述核苷酸序列或所述多肽序列具有至少95％的序列相同性。
9.如实施方式1-4中任一项所述的方法，其中所述调节通过稳定插入DNA构建体来实现，所述DNA构建体包含驱动在植物细胞中表达的至少一个启动子，所述启动子可操作地连接至针对编码选自下组的转录因子多肽的至少一种核苷酸设计的一个或多个amiRNA盒：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、21、23、27、29、31、33、35、37、39、43、45、47、49、或51。
10.如实施方式1-4中任一项所述的方法，其中所述调节是通过稳定插入转化构建体来实现，所述转化构建体包含一个或多个在植物细胞中可操作的启动子，所述启动子可操作地连接至针对至少一种感兴趣转录因子设计的一个或多个RNAi盒。
11.如实施方式1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述调节通过用衍生自植物病毒并包含在植物细胞中可操作的至少一个启动子的自复制转化构建体来转化感兴趣植物物种来实现，所述启动子可操作地连接至编码至少一种转录因子的至少一个开放阅读框。
12.如实施方式1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述调节通过用衍生自植物病毒并包含在植物细胞中可操作的至少一个启动子的自复制转化构建体来转化感兴趣植物物种来实现，所述启动子可操作地连接至针对至少一种感兴趣转录因子设计的至少一个amiRNA盒。
13.如实施方式1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述调节通过用衍生自植物病毒并包含在植物细胞中可操作的至少一个启动子的自复制转化构建体来转化感兴趣植物物种来实现，所述启动子可操作地连接至针对至少一种感兴趣转录因子设计的至少一个RNAi盒。
14.如实施方式1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述调节通过将至少一个顺式调节元件在一定位置插入植物细胞的基因组来实现，使得所述顺式调节元件可改变至少一种感兴趣转录因子的表达水平和/或表达概况。
15.如实施方式9-13中任一项所述的方法，其中所述至少一个启动子是组成型启动子。
16.如实施方式9-13中任一项所述的方法，其中所述至少一个启动子是非组成型启动子。
17.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子是发育调节的启动子。
18.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子是昼夜节律调节或昼调节的启动子。
19.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子是组织特异性启动子。
20.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子是诱导型启动子。
21.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子是光调节的启动子。
22.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子包含SEQ ID NO：17所示的序列。
23.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子包含SEQ ID NO：18所示的序列。
24.如实施方式16所述的方法，其中所述至少一个启动子包含SEQ ID NO：19所示的序列。
25.如实施方式1-24中任一项所述的方法，其中所述感兴趣植物是单子叶植物。
26.如实施方式1-24中任一项所述的方法，其中所述感兴趣植物是双子叶植物。
27.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码转录因子的核苷酸序列，与SEQID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、21、23、27、29、31、33、35、37、39、43、45、47、49、或51所示的氨基酸序列有至少90％序列相同性。
28.如实施方式27所述的分离的多核苷酸，其中所述多肽与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、21、23、27、29、31、33、35、37、39、43、45、47、49、或51所示的氨基酸序列有至少95％序列相同性。
29.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述改善植物生长包括向所述感兴趣植物提供对高pH条件的耐受性。
30.如实施方式29所述的方法，其特征在于，所述植物可耐受超过8的pH。
31.如实施方式29所述的方法，其特征在于，所述植物可耐受超过8.5的pH。
32.如实施方式29所述的方法，其特征在于，所述植物可耐受超过9的pH。
33.如实施方式29所述的方法，其特征在于，所述植物可耐受超过9.5的pH。
34.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述改善植物生长包括向所述感兴趣植物提供对高盐条件的耐受性。
35.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过50ppm的Na+浓度。
36.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过55ppm的Na+浓度。
37.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过60ppm的Na+浓度。
38.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过90ppm的SO4 2-浓度。
39.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过100ppm的SO4 2-浓度。
40.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过110ppm的SO4 2-浓度。
41.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过120ppm的SO4 2-浓度。
42.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过130ppm的SO4 2-浓度。
43.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过140ppm的SO4 2-浓度。
44.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过150ppm的SO4 2-浓度。
45.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过20ppm的Cl-浓度。
46.如实施方式34所述的方法，其特征在于，所述高盐条件包括超过50ppm的Na+浓度、超过90ppm的SO4 2-浓度、和超过20ppm的Cl-浓度。
发明详述
增加作物植物生长以获得更高产量是植物育种和植物生物技术的主要目标。作为一种极复杂的性状，产量潜力通过正反馈和负反馈同时控制，并且通过多个代谢通路中的许多不同基因调节。因此，这种性状的成功操作需要同时操作许多不同基因的表达。同时操作许多基因的表达的理想方法是改变调节与感兴趣性状(即，升高的作物生长和产量)相关的多个基因的表达的一个或多个转录因子(TF)的表达。本发明描述了改变植物中TF表达的方法，其导致改善的植物生长和产量。提供了编码TF的重组核苷酸序列。描述了改变所述TF的表达水平和/或概况以改善植物生长的方法。另外，提供了已经修饰以调节至少一种本发明的TF的表达的植物、种子和植物部分。
“产量”或“作物产量”是每单位耕地面积收获的作物的量的量度。作物产量是通常用于谷物或谷类的量度，并且通常测量为给定时间内单位面积收获的植物的量，即吨/公顷或千克/公顷的度量。作物产量也指由植物产生或生成的实际种子或生物质。
“耐受”或“耐受性”是指植物在特定组的环境条件下生长的能力，该环境条件一般被视为不利于植物生长，并且对照植物在该环境条件下无法正常生长。当在这类环境条件下生长时，耐受植物可相对于对照植物显示出改善的产量。
“重组多核苷酸”包含两个或更多个化学连接的核酸区段的组合，未发现这些区段在自然中直接接合。“直接接合”指2个核酸区段紧邻并且通过化学键互相连接。在具体实施方式中，重组多核苷酸包含感兴趣多核苷酸或其活性变体或片段，使得其他化学连接的核酸区段位于感兴趣多核苷酸的5’、3’或内部。或者，可通过删除序列来形成重组多核苷酸的化学连接的核酸区段。其他化学连接的核酸区段或删除以接合连接的核酸区段的序列可以是任意长度，包括，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多核苷酸。本文公开了用于制备这种重组多核苷酸的各种方法，例如，通过化学合成或通过遗传工程技术对多核苷酸的分离区段进行操作。在具体实施方式中，重组多核苷酸可包含重组DNA序列或重组RNA序列。“重组多核苷酸的片段”包含两个或更多个化学连接的氨基酸区段的组合中的至少一个，未发现这些区段在自然中直接接合。
“重组多核苷酸构建体”包含两个或更多个可操作连接的核酸区段，未发现这些区段在自然中可操作连接。重组多核苷酸构建体的非限制性示例包括可操作连接至异源序列的感兴趣多核苷酸或其活性变体或片段，该异源序列辅助感兴趣序列的表达、自体复制和/或基因组插入。这类异源且可操作连接的序列包括，例如，启动子、终止序列、增强子等，或表达盒的任意组分；质粒、粘粒、病毒、自体复制序列、噬菌体、或者线性或环状单链或双链DNA或RNA核苷酸序列；和/或编码异源多肽的序列。
“重组多肽”包含两个或更多个化学连接的氨基酸区段的组合，未发现这些区段在自然中直接接合。在具体实施方式中，重组多肽包含额外的化学连接的氨基酸区段，其位于重组多肽的N-端、C-端或内部。或者，可通过删除至少一个氨基酸来形成重组多肽的化学连接的氨基酸区段。其他化学连接的氨基酸区段或删除的化学连接的氨基酸区段的序列可以是任意长度，包括，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多氨基酸。
本发明包括合成寡核苷酸或核苷酸序列。合成序列是在实验室条件中产生或再生成的序列。虽然，核苷酸序列可具有相对于母序列改变的核苷酸序列，合成序列可与天然产生的序列相同。然而，在两种情况中，合成序列的结构改变或者与从其自然条件中直接分离的序列中所见的不同。
“改变”或“调节”TF的表达是指表达相对于野生型或对照植物中所述TF的表达水平上调或下调。认识到在一些情况中，通过增加一种或多种本发明的TF的表达水平(即上调表达)来增加植物生长和产量。类似地，在一些情况中，通过降低一种或多种本发明的TF的表达水平，即下调表达来增加植物生长和产量。因此，本发明包括上调或下调一种或多种本发明的TF。另外，该方法包括在感兴趣植物中上调至少一种TF并下调至少一种TF。调节转基因植物中本发明的TF中的至少一种的浓度和/或活性是指相对于天然对照植物、植物部分或没有导入本发明序列的细胞，浓度和/或活性增加或降低至少1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％。认识到可通过选择本发明的启动子或使用本发明的增强子来控制TF的表达水平。例如，如果需要30％增加，可选择启动子来提供合适的表达水平。例如，可通过测定植物中TF的水平来直接测量TF的表达水平。
使用本发明的组合物来改变植物中感兴趣基因，尤其是参与光合作用的基因的表达。因此，可与对照植物相比调节TF的表达。“对象植物或植物细胞”是其中已经实现感兴趣基因的遗传改变如转化，或者是源自如此改变的植物或细胞并包含改变的植物或植物细胞。“对照”或“对照植物”或“对照植物细胞”提供了测量对象植物或植物细胞的表型变化的参照点。因此，根据本发明的方法，表达水平高于或低于对照植物中的表达水平。
一种对照植物或植物细胞可包含，例如：(a)野生型植物或细胞，即具有与用于产生对象植物或细胞的遗传改变的起始材料相同的基因型；(b)与起始材料有相同基因型的植物或植物细胞，但其已经用无效构建体(即，用对感兴趣性状没有已知影响的构建体，如包含标记基因的构建体)转化；(c)植物或植物细胞，其是对象植物或植物细胞的后代中的非转化分离体；(d)与对象植物或植物细胞在遗传上相同但没有接触会诱导感兴趣基因表达的条件或刺激的植物或植物细胞；或(e)在不表达感兴趣基因的条件下的对象植物或植物细胞本身。
虽然本发明以转化的植物描述，应认识到本发明的转化的生物体可包括植物细胞、植物原生质体、植物可再生的植物组织培养物、植物愈伤组织、植物块、和在植物或植物部分中完整的植物细胞如胚胎、花粉、胚珠、种子、叶、花、枝条、果实、仁、谷穗、穗轴、外壳、柄、根、根尖、花粉囊、种子等。谷粒是指由种植户处于生长或繁殖物种以外的目的产生的成熟种子。再生植物的后代、变体和突变体也包括在本发明的范围内，只要这些部分包含导入的多核苷酸。
本发明包括分离的或基本纯化的转录因子或增强子多核苷酸或氨基酸组合物。“分离的”或“纯化的”多核苷酸或蛋白或其生物活性部分基本或本质上不含其天然产生环境中通常伴随多核苷酸或蛋白或与之相互作用的组分。因此，通过重组技术产生时，分离或纯化的多核苷酸或蛋白基本不含其它细胞物质或培养基，或者通过化学方法合成时基本不含化学物质前体或其他化学物质。任选地，“分离的”多核苷酸不含该多核苷酸源自的生物体基因组DNA中天然侧接所述多核苷酸(即位于多核苷酸5′和3′末端处的序列)的序列(任选蛋白编码序列)。
本发明也包括本文公开的多核苷酸和由其编码的氨基酸序列的片段和变体。“片段”是指多核苷酸的部分或氨基酸序列的部分。“变体”是指基本相似的序列。对于多核苷酸，变体包括具有以下的多核苷酸：在5′和/或3′端处的删除(即，截短)；在天然多核苷酸中一个或多个内部位点处的删除和/或添加；和/或在天然多核苷酸中一个或多个位点处一个或多个核苷酸的取代。本文所用的“天然”多核苷酸或多肽分别包含天然产生的核苷酸序列或氨基酸序列。一般而言，本发明的特定多核苷酸的变体将与由本文他处所述的序列比对程序和参数确定的特定核苷酸有至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大的序列相同性。
“变体”氨基酸或蛋白是指通过在天然蛋白质的N-末端和/或C-末端处删除(也称为截短)一个或多个氨基酸；在天然蛋白质的一个或多个内部位点处删除和/或添加一个或多个氨基酸；或在天然蛋白质的一个或多个位点处取代一个或多个氨基酸衍生的氨基酸或蛋白质。本发明包括的变体蛋白质有生物活性，即它们继续具有天然TF或增强子的所需生物活性。本发明的天然TF或增强子序列的生物活性变体将与由本文所述的序列比对程序和参数确定的天然蛋白质的氨基酸序列有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大的序列相同性。本发明的蛋白质的生物活性变体与该蛋白质可相差少至1-15个氨基酸残基，少至1-10个，如6-10个，少至4、3、2或甚至1个氨基酸残基。
如图所示，本发明的TF因子在感兴趣植物中调整，即上调或下调。可能需要上调至少一种TF，同时下调至少一种不同的TF。增加表达或上调TF的方法是本领域已知的并且可用于本发明的方法中。在一个实施方式中，可通过用包含可操作地连接至至少一种本发明的TF的在植物中驱动表达的启动子的表达盒来稳定或瞬时转化植物或植物细胞以实现上调。可通过使用精确基因组编辑技术来实现一种或多种本发明的TF的表达以调节内源性TF序列的表达。通过这种方式，通过使用本领域已知的方法将核酸插入编码感兴趣TF的天然植物序列附近。这类方法包括但不限于针对感兴趣植物基因组序列设计的大范围核酸酶(D’Halluin等，(2013)Plant Biotechnol J 11：933-941)；CRISPR-Cas9，TALEN，和其他精确编辑基因组的技术(Feng等，(2013)Cell Research 23：1229-1232，Podevin等，(2013)Trends Biotechnology 31：375-383，Wei等，(2013)J Gen Genomics 40：281-289，Zhang等，(2013)WO 2013/026740)；Cre-lox位点-特异性重组(Dale等，(1995)Plant J 7：649-659；Lyznik等，(2007)Transgenic Plant J 1：1-9；FLP-FRT重组(Li等，(2009)PlantPhysiol 151：1087-1095)；Bxb1-介导的整合(Yau等，Plant J(2011)701：147-166)；锌指介导的整合(Wright等，(2005)Plant J 44：693-705)；Cai等，(2009)Plant Mol Biol 69：699-709)；和同源重组(Lieberman-Lazarovich和Levy(2011)Methods Mol Biol 701：51-65)；Puchta，H.(2002)Plant Mol Biol 48：173-182)。使用所述核酸序列的插入来实现本发明的一种或多种TF的过表达的所需结果。
增强子包括能够在插入植物的基因组时增强基因表达的任何分子。因此，可将增强子插入至少一个感兴趣TF序列的上游或下游基因组区中以增强表达。相对于将增强表达的基因，增强子可以起顺式作用，并且可位于基因组内的任何位置。例如，增强子可位于增强表达的编码序列的约1Mbp以内、约100kbp以内、约50kbp、约30kbp、约20kbp、约10kbp、约5kbp、约3kbp、或约1kbp以内。增强子也可位于其增强表达的基因的约1500bp以内，或者可紧邻或位于其增强表达的基因的内含子以内。本发明的用于调节内源性TF或同源物表达的增强子包括经典增强子元件，如CaMV 35S增强子元件、巨细胞病毒(CMV)早期启动子增强子元件、和SV40增强子元件，还包括增强基因表达的内含子-介导的增强子元件如玉米shrunken-1增强子元件(Clancy，M.和Hannah，L.C.(2002)Plant Physiol.130(2)：918-29)。可导入植物基因组以调节表达的增强子的其他示例包括PetE增强子(Chua等，(2003)Plant Cell 15：11468-1479)，或水稻α-淀粉酶增强子(Chen等，(2002)J.Biol.Chem.277：13641-13649)，或本领域已知的任何增强子(Chudalayandi，S.(2011)MethodsMol.Biol.701：285-300)。在一些实施方式中，本发明包括亚结构域、片段、或重复增强子元件(Benfrey等，(1990)EMBO J 9：1677-1684)。
本发明还提供通过将启动子或增强子插入植物基因组使其调节内源或外源序列的表达来调节植物中TF表达的方法。如上所述，使用本文提供的序列确定启动子或增强子的插入位点的方法和在给定插入位点处将启动子或增强子序列插入植物基因组的方法是本领域已知的。
本发明的方法也包括TF的下调或活性降低(也称为基因沉默或基因抑制)。许多基因沉默的技术是本领域技术人员所知的，包括但不限于，反义技术(参见，例如，Sheehy等，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：8805-8809；和美国专利号5,107,065；5,453,566；和5,759,829)；共抑制(例如，Taylor(1997)Plant Cell 9：1245；Jorgensen(1990)TrendsBiotech.8(12)：340-344；Flavell(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：3490-3496；Finnegan等，(1994)Bio/Technology 12：883-888；和Neuhuber等，(1994)Mol.Gen.Genet.244：230-241)；RNA干扰(Napoli等，(1990)Plant Cell 2：279-289；美国专利号5,034,323；Sharp(1999)Genes Dev.13：139-141；Zamore等，(2000)Cell 101：25-33；和Montgomery等，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：15502-15507)，病毒诱导的基因沉默(Burton等，(2000)Plant Cell 12：691-705；和Baulcombe(1999)Curr.Op.Plant Bio.2：109-113)；靶-RNA-特异性核酶(Haseloff等，(1988)Nature 334：585-591)；发夹结构(Smith 等，(2000)Nature 407：319-320；WO 99/53050；WO 02/00904；WO 98/53083；Chuang和Meyerowitz(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：4985-4990；Stoutjesdijk等，(2002)Plant Physiol.129：1723-1731；Waterhouse和Helliwell(2003)Nat.Rev.Genet.4：29-38；Pandolfini等，BMC Biotechnology 3：7，美国专利公开号20030175965；Panstruga等，(2003)Mol.Biol.Rep.30：135-140；Wesley等，(2001)Plant J.27：581-590；Wang和Waterhouse(2001)Curr.Opin.Plant Biol.5：146-150；美国专利公开号20030180945；和WO02/00904，其全部通过引用纳入本文)；核酶(Steinecke等，(1992)EMBO J.11：1525；和Perriman等，(1993)Antisense Res.Dev.3：253)；寡核苷酸-介导的靶向修饰(例如，WO 03/076574和WO 99/25853)；Zn-指靶向的分子(例如，WO 01/52620；WO 03/048345；和WO 00/42219)；转座子标签(Maes等，(1999)Trends Plant Sci.4：90-96；Dharmapuri和Sonti(1999)FEMS Microbiol.Lett.179：53-59；Meissner等，(2000)Plant J.22：265-274；Phogat等，(2000)J.Biosci.25：57-63；Walbot(2000)Curr.Opin.Plant Biol.2：103-107；Gai等，(2000)Nucleic Acids Res.28：94-96；Fitzmaurice等，(1999)Genetics 153：1919-1928；Bensen等，(1995)Plant Cell 7：75-84；Mena等，(1996)Science 274：1537-1540；和美国专利号5,962,764)；dCas9-基转录因子(Piatek等，(2015)Plant Biotechnol J 13：578-589)；其各自通过引用纳入本文；和本领域技术人员已知的其他方法或上述方法的组合。
也可通过使用衍生自植物病毒的自复制DNA序列而不是通过将一种或多种感兴趣基因稳定插入植物核基因组来调节一种或多种本发明的TF的表达。已经成功使用衍生自植物病毒如双粒病毒的序列来实现在植物中表达多种感兴趣基因(Mozes-Koch等，(2012)Plant Physiol 158：1883-1892)。通过将编码一种或多种本发明的TF的一种或多种基因插入衍生自植物病毒的自复制构建体，可通过将病毒衍生的构建体转化到植物细胞中并选择转化的细胞来实现所述TF在感兴趣植物物种中的上调。
认识到使用本发明的多核苷酸，可构建与TF序列的信使RNA(mRNA)的至少一部分互补的反义构建体。构建反义核苷酸以与相应mRNA杂交。可进行反义序列的修饰，至少该序列杂交并干扰相应mRNA的表达。在这种方式中，可使用与待沉默的相应序列有70％，较佳80％，更佳85％或更大的序列相同性的反义构建体。此外，可使用反义核苷酸的部分来破坏编码TF的靶基因的表达。
也可以正义取向使用本发明的多核苷酸以抑制植物中内源性基因的表达。方法一般包括用包含启动子的DNA构建体转化植物，所述启动子驱动植物中可操作连接至对应于内源性基因的转录本的多核苷酸的至少一部分的表达。一般而言，这种核苷酸序列与内源性基因的转录本有明显序列相同性，较佳超过约65％序列相同性，更佳超过约85％序列相同性，最佳超过约95％序列相同性。参见美国专利号5,283,184和5,034,323，其通过引用纳入本文。可使用这类方法来降低至少一种TF的表达。
可使用本发明的多核苷酸来从其他植物中分离相应序列。在这种方式中，PCR、杂交和其他类似方法可用于根据此类序列与本文所示序列的序列同源性来鉴定该序列。根据该序列与本文所示完整序列或其变体和片段的序列相同性而分离的序列涵盖在本发明中。此类序列包括公开序列的直向同源物序列。“直向同源物”是指源自共同祖先基因且由于物种形成而在不同物种中发现的基因。在不同物种中发现的基因当它们的核苷酸序列和/或它们的编码蛋白质序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大的序列相同性时被认为是直向同源物。直向同源物的功能通常在物种之间高度保守。因此，本发明包括转录活化或增强子激活并在严格条件下与本文公开的序列或其变体或片段杂交的分离的多核苷酸。
可通过PCR分离变体序列。设计PCR引物和PCR克隆的方法是本领域熟知的并且公开于Sambrook等，(1989)《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：A LaboratoryManual)(第2版，纽约州普莱恩维尤的冷泉港出版社)。还参见Innis等编，(1990)《PCR方案：方法和应用指南》(PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications)(纽约学术出版社)；Innis和Gelfand编，(1995)《PCR策略》(PCR Strategies)(纽约学术出版社)；以及Innis和Gelfand编，(1999)《PCR方法手册》(PCR Methods Manual)(纽约学术出版社)。
也可通过分析测序的基因组的现有数据库来鉴定变体序列。在这种方式中，可鉴定相应TF或启动子序列并用于本发明的方法中。
比对序列的比较方法是本领域熟知的。因此，可采用数学算法确定两个序列的序列相同性百分数。该数学算法的非限制性示例是Myers和Miller(1988)CABIOS 4：11-17的算法；Smith等(1981)Adv.Appl.Math.2：482的局部比对算法；Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48：443-453的全局比对算法；Pearson和Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85：2444-2448的搜索局部比对方法；Karlin和Altschul(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 872264的算法，由Karlin和Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877改良。
这些数学算法的计算机实施可用于比较序列来确定序列相同性。这类实施包括但不限于：PC/Gene程序中的CLUSTAL(购自美国加利福尼亚州芒廷维尤的智慧遗传公司(Intelligenetics，Mountain View，California)；ALIGN程序(2.0版)和GCG Wisconsin遗传软件包中的GAP，BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA，10版(购自阿克赛勒里公司(AccelrysInc.)，美国加利福尼亚州圣地亚哥Scranton路9685号)。可用默认参数来进行使用这些程序的比对。CLUSTAL程序由以下详细描述：Higgins等，(1988)Gene 73：237-244(1988)；Higgins等，(1989)CABIOS 5：151-153；Corpet等，(1988)Nucleic Acids Res.16：10881-90；Huang等，(1992)CABIOS 8：155-65；和Pearson等，(1994)Meth.Mol.Biol.24：307-331。ALIGN程序基于Myers和Miller(1988)同上的算法。比较氨基酸序列时，PAM120权重残基表、缺口长度罚分12、和缺口罚分4可与ALIGN程序联用。Altschul等，(1990)J.Mol.Biol.215：403的BLAST程序基于Karlin和Altschul(1990)同上的算法。可利用BLASTN程序进行BLAST核苷酸搜索(评分＝100，字长＝12)，以获得与编码本发明蛋白质的核苷酸序列同源的核苷酸序列。可利用BLASTX程序进行BLAST蛋白质搜索(评分＝50，字长＝3)，以获得与本发明蛋白质或多肽同源的氨基酸序列。为了获得缺口比对(出于比较目的)，可如Altschul等，(1997)Nucleic Acids Res.，25：33893402所述利用缺口BLAST(在BLAST 2.0中)。或者，可利用PSI-BLAST(在BLAST 2.0中)进行迭代搜索，其用来检测分子之间的远近关系。参见Altschul等，(1997)同上。利用BLAST、缺口BLAST和PSI-BLAST程序时，可使用各程序(例如针对蛋白质的BLASTX，针对核苷酸的BLASTN)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov。也可通过检查来人工进行比对。
可在表达盒中提供本发明的多核苷酸用于在感兴趣植物中表达。该盒将包括与可操作连接至本发明的TF多核苷酸的5′和3′调节序列。“可操作地连接”是指2个或更多个元件之间的功能性连接。盒还可含有至少一种待共转化到生物体中的额外基因。或者，可在多个表达盒上提供额外基因。这种表达盒可提供多个限制位点和/或重组位点用于在调节区的转录条件下插入TF多核苷酸。表达盒还可含有选择性标记基因。
表达盒将包括5′-3′方向的转录，转录和翻译起始区(即，启动子)，本发明的TF多核苷酸，和在植物中有功能的转录和翻译终止区(即，终止区)。
本发明的实践中可使用多种启动子。组成型启动子包括CaMV 35S启动子(Odell等，(1985)Nature 313：810-812)；水稻肌动蛋白(McElroy等，(1990)Plant Cell 2：163-171)；泛素(Christensen等，(1989)Plant Mol.Biol.12：619-632和Christensen等，(1992)Plant Mol.Biol.18：675-689)；pEMU(Last等，(1991)Theor.Appl.Genet.81：581-588)；MAS(Velten等，(1984)EMBO J.3：2723-2730)；ALS启动子(美国专利号5,659,026)等。
组织优选的启动子包括Yamamoto等，(1997)Plant J.12(2)：255-265；Kawamata等，(1997)Plant Cell Physiol.38(7)：792-803；Hansen等，(1997)Mol.Gen Genet.254(3)：337-343；Russell等，(1997)Transgenic Res.6(2)：157-168；Rinehart等，(1996)Plant Physiol.112(3)：1331-1341；Van Camp等，(1996)Plant Physiol.112(2)：525-535；Canevascini等，(1996)Plant Physiol.112(2)：513-524；Yamamoto等，(1994)Plant CellPhysiol.35(5)：773-778；Lam(1994)Results Probl.Cell Differ.20：181-196；Orozco等，(1993)Plant Mol Biol.23(6)：1129-1138；Matsuoka等，(1993)Proc Natl.Acad.Sci.USA90(20)：9586-9590；和Guevara-Garcia等，(1993)Plant J.4(3)：495-505。叶优选启动子也是本领域已知的。参见，例如，Yamamoto等，(1997)Plant J.12(2)：255-265；Kwon等，(1994)Plant Physiol.105：357-67；Yamamoto等，(1994)Plant Cell Physiol.35(5)：773-778；Gotor等，(1993)Plant J.3：509-18；Orozco等，(1993)Plant Mol.Biol.23(6)：1129-1138；和Matsuoka等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(20)：9586-9590。
认识到特异性非组成型表达概况可相对于一种或多种感兴趣基因的组成型表达提供改善的植物表型。例如，通过光条件、施加特定应力、昼夜循环、或植物发育阶段来调节许多植物基因。这些表达概况对于植物中基因或基因产物的功能而言是非常重要的。可用于提供所需的表达概况的一个策略是使用含有在植物中所需的时间和位置处驱动所需的表达水平的顺式调节元件的合成启动子。多名研究人员已经鉴定了可用于改变植物中基因表达的顺式调节元件(Vandepoele等，(2009)Plant Physiol 150：535-546；Rushton等，(2002)Plant Cell 14：749-762)。已经对使用顺式调节元件来改变启动子表达概况进行了综述(Venter(2007)Trends Plant Sci.12：118-124)。转录组研究的新技术和分析这类数据库的新方法的快速开发使得能够发现新的顺式调节元件。已知之前使用的微阵列数据库没有与使用RNA-Seq生成的转录组数据相同的分辨率。使用这些更新的技术来生成转录组数据和开发用于分析转录组数据的新软件算法使得能够发现包括本文所述的那些的新顺式调节元件。
本领域已知植物终止子并且包括来自根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)的Ti-质粒的那些，如真蛸碱合酶和胆脂碱合酶终止区。还参见Guerineau等，(1991)Mol.Gen.Genet.262：141-144；Proudfoot(1991)Cell 64：671-674；Sanfacon等.(1991)Genes Dev.5：141-149；Mogen等，(1990)Plant Cell 2：1261-1272；Munroe等，(1990)Gene91：151-158；Ballas等，(1989)Nucleic Acids Res.17：7891-7903；和Joshi等，(1987)Nucleic Acids Res.15：9627-9639。
如上所述，TF可用于表达盒来转化感兴趣植物。转化方案以及向植物中导入多肽或多核苷酸序列的方案可根据转化靶向的植物或植物细胞的类型变化，即，单子叶或双子叶。向植物细胞中导入多肽和多核苷酸的合适方法包括微注射(Crossway等，(1986)Biotechniques 4：320-334)、电穿孔(Riggs等，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：5602-5606)，农杆菌-介导的转化(美国专利号5,563,055和美国专利号5,981,840)，直接基因转化(Paszkowski等，(1984)EMBO J.3：2717-2722)，和弹道颗粒加速(参见例如，美国专利号4,945,050；美国专利号5,879,918；美国专利号5,886,244；和5,932,782；Tomes等，(1995)《植物细胞、组织和器官培养中的基础方法》(Plant Cell，Tissue，and Organ Culture：Fundamental Methods)，Gamborg和Phillips编(Springer-Verlag，Berlin)；McCabe等，(1988)Biotechnology 6：923-926)；和Lec1转化(WO 00/28058)。还参见Weissinger等，(1988)Ann.Rev.Genet.22：421-477；Sanford等，(1987)Particulate Science andTechnology 5：2737(洋葱)；Christou等，(1988)Plant Physiol.87：671-674(大豆)；McCabe等，(1988)Bio/Technology 6：923-926(大豆)；Finer和McMullen(1991)In VitroCell Dev.Biol.27P：175-182(大豆)；Singh等，(1998)Theor.Appl.Genet.96：319-324(大豆)；Datta等，(1990)Biotechnology 8：736(水稻)；Klein等，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：4305-4309(玉米)；Klein等，(1988)Biotechnology 6：559-563(玉米)；美国专利号5,240,855；5,322,783；和5,324,646；Klein等，(1988)PlantPhysiol.91：440-444(玉米)；Fromm等，(1990)Biotechnology 8：833-839(玉米)；Hooykaas-Van Slogteren等，(1984)Nature (伦敦)311：763-764；美国专利号5,736,369(谷类)；Bytebier等，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：5345-5349(百合)；De Wet等，(1985)《胚珠组织实验操作》(The Experimental Manipulation of Ovule Tissues)，Chapman等编，(纽约朗文出版社(Longman，New York)，第197-209页(花粉)；Kaeppler等，(1990)Plant Cell Reports 9：415-418和Kaeppler等，(1992)Theor.Appl.Genet.84：560-566(须-介导的转化)；D′Halluin等，(1992)Plant Cell 4：1495-1505(电穿孔)；Li等，(1993)Plant Cell Reports 12：250-255以及Christou和Ford(1995)Annals of Botany75：407-413(水稻)；Osjoda等，(1996)Nature Biotechnology 14：745-750(玉米，通过根癌农杆菌)；其全部通过引用纳入本文。“稳定转化”是指导入植物的核苷酸构建体整合到植物的基因组中并且能够被其后代遗传。“顺式转化”是指导入植物的核苷酸构建体并不稳定整合到植物的基因组中，但是在植物细胞中保持足够的时间以允许导入基因的表达。
按照常规方式，已经转化的细胞可长成植物。参见，例如，McCormick等，(1986)Plant Cell Reports 5：81-84。在这种方式中，本发明提供了具有稳定整合到其基因组中的本发明的多核苷酸，例如，本发明的表达盒的转化的种子(也称为“转基因种子”)。
本发明可用于任何植物物种的转化，包括但不限于单子叶和双子叶。感兴趣植物物种的示例包括但不限于，玉米(Zea mays)，油菜种(例如，甘蓝型油菜(B.napus)、白菜型油菜(B.rapa)、芥菜型油菜(B.juncea))，尤其是用作菜籽油来源的那些油菜物种，苜蓿(Medicago sativa)，水稻(Oryza sativa)，黑麦(Secale cereale)，高粱(Sorghumbicolor，Sorghum vulgare)，粟(例如，珍珠粟(Pennisetum glaucum)，黍(Panicummiliaceum)，小米(Setaria italica)，穇子(Eleusine coracana))，向日葵(Helianthusannuus)，红花(Carthamus tinctorius)，小麦(Triticum aestivum)，大豆(Glycine max)，烟草(Nicotiana tabacum)，马铃薯(Solanum tuberosum)，花生(Arachis hypogaea)，棉花(Gossypium barbadense，Gossypium hirsutum)，甘薯(Ipomoea batatas)，木薯(Manihotesculenta)，咖啡(Coffea spp.)，椰子(Cocos nucifera)，菠萝(Ananas comosus)，柠檬树(Citrus spp.)，可可(Theobroma cacao)，茶(Camellia sinensis)，香蕉(Musa spp.)，鳄梨(Persea americana)，无花果(Ficus casica)，番石榴(Psidium guajava)，芒果(Mangifera indica)，橄榄(Olea europaea)，番木瓜(Carica papaya)，腰果(Anacardiumoccidentale)，澳洲坚果(Macadamia integrifolia)，杏(Prunus amygdalus)、甜菜(Betavulgaris)、甘蔗(Saccharum spp.)、油棕榈(Elaeis guineensis)、杨树(Populus sp.)、桉树(Eucalyptus sp.)、燕麦、大麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。
通过说明的方式，而非限制性方式提供以下实施例。本说明书中涉及的所有专利申请和出版物指示本发明涉及领域技术人员的水平。所有发表物和专利申请通过引用纳入本文，就好像将各篇单独的发表物或专利申请具体和单独地通过引用纳入本文那样。
虽然出于方便理解的目的，通过阐述和举例的方式详细描述了上述发明，但可明显看出，某些改变和修改应属于所附权利要求书的范围。
实验部分
实施例1-二穗短柄草(Brachypodium distachyon)中的GRMZM2G143718表达
对GRMZM2G143718编码序列进行密码子优化，用于在二穗短柄草中表达(SEQ IDNO：1)。将所得的编码序列克隆到4个分开的二元载体中，各自具有不同的启动子和5’UTR。这些二元载体描述于表1。
表1：GRMZM2G143718构建体
使用表1所述的载体来转化二穗短柄草细胞。使用植物组织培养技术来再生转化的二穗短柄草细胞以产生含有这些载体中的GRMZM2G143718转基因盒的转基因二穗短柄草植物。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。在这些转化过程期间，发现不可能从用载体130020转化的细胞中再生植物，该载体含有由ZmUbi启动子和5’UTR驱动的GRMZM2G143718编码序列。这表明预期由该启动子产生的高水平组成型基因表达对于组织培养过程期间的植物细胞而言是不利的。相反，可从用130028、130036、和130044载体转化的二穗短柄草细胞再生植物。
用130028、130036、和130044载体转化的转基因二穗短柄草植物培养并生长至成熟。这些植物自花授粉以产生种子，然后收获这些种子并种植以使T1-代植物生长。T1-代植物和野生型二穗短柄草植物一起在生长室中以20小时光/4小时黑暗循环生长。植物在单独盆中生长。在用给定构建体转化的个体事件中观察生长差异。这三种构建体的选择事件的生物质产量数据与野生型二穗短柄草植物的类似数据一起示于表2。
表2：来自GRMZM2G143718二穗短柄草植物的T1-代生物质和种子数据
| <u>构建体</u> | <u>事件</u> | <u>n</u> | <u>生物质产量(g)</u> |
| 130028 | B5 | 13 | 5.01±2.06 |
| 130036 | F9-1 | 4 | 4.66±0.88 |
| 130044 | B6-1 | 10 | 4.98±1.21 |
| 野生型 | n/a | 56 | 1.70±0.85 |
从130028二穗短柄草植物的叶中提取RNA。进行定量RT-PCR实验，并且发现GRMZM2G143718转录本以比二穗短柄草中存在的组成型表达的天然Ubi10基因高约0.252倍的转录本水平存在。
实施例2-二穗短柄草中的GRMZM2G117497表达
对GRMZM2G117497编码序列进行密码子优化，用于在二穗短柄草中表达(SEQ IDNO：3)。将所得的编码序列克隆到4个分开的二元载体中，各自具有不同的启动子和5’UTR。这些二元载体描述于表3。
表3：GRMZM2G117497构建体
使用表3所述的载体来转化二穗短柄草细胞。使用植物组织培养技术来再生转化的二穗短柄草细胞以产生含有这些载体中的GRMZM2G117497转基因盒的转基因二穗短柄草植物。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。
含GRMZM2G117497基因的T0-代植物生长至成熟并且允许自花授粉以产生T1-代种子。种植所得的T1-代种子，T1-代植物与野生型二穗短柄草植物在20小时光/4小时黑暗的光周期下一起培养。植物在单个盆中生长。来自130032和130040构建体的选择事件的生物质产量数据与野生型二穗短柄草植物的类似数据一起示于表4。
表4：来自GRMZM2G117497二穗短柄草植物的T1-代生物质和种子数据
| <u>构建体</u> | <u>事件</u> | <u>n</u> | <u>生物质产量(g)</u> |
| 130032 | E14-2 | 4 | 2.17±0.66 |
| 130040 | I4-3 | 2 | 4.61±0.31 |
| 野生型 | n/a | 56 | 1.70±0.85 |
实施例3-二穗短柄草中的GRMZM2G158117表达
对GRMZM2G158117编码序列进行密码子优化，用于在二穗短柄草中表达(SEQ IDNO：5)。将所得的编码序列克隆到4个分开的二元载体中，各自具有不同的启动子和5’UTR。这些二元载体描述于表5。
表5：GRMZM2G158117构建体
使用表5所述的载体来转化二穗短柄草细胞。使用植物组织培养技术来再生转化的二穗短柄草细胞以产生含有GRMZM2G158117转基因盒的转基因二穗短柄草植物。用130018构建体的转化尝试都是不成功的，而表5所列的其他三种构建体都产生转基因植物。这表明来自构建体130018中ZmUbi启动子的强烈组成型表达产生不利的表型。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。
T0-代植物生长至成熟并且自花授粉以产生T1-代种子。所得的T1-代种子与同龄的野生型二穗短柄草植物在20小时光/4小时黑暗的光周期下一起种植。植物在单个盆中生长。来自130026和130034构建体的选择事件的生物质产量数据与野生型二穗短柄草植物的类似数据一起示于表6。
表6：来自GRMZM2G158117二穗短柄草植物的T1-代生物质和种子数据
出乎意料，当由玉米PepC启动子和5’UTR(SEQ ID NO：17)驱动时，GRMZM2G158117开放阅读框在二穗短柄草中的表达导致不利的表型。在载体130042中，玉米PepC启动子和5’UTR刚好位于GRMZM158117编码序列(SEQ ID NO：5)的上游。在这些130042植物中，T0-代植物没有在移植到土壤中之后存活或者生长不良并且不产生任何种子。这些130042植物中的许多无法产生任何花。
从130026和130034二穗短柄草植物的叶中提取RNA。进行定量RT-PCR实验，并且发现GRMZM2G158117转录本以比二穗短柄草中存在的组成型表达的天然Ubi10基因的转录本水平分别高约0.027倍和0.072倍的水平存在。
实施例4-二穗短柄草中的GRMZM2G150260表达
对GRMZM2G150260编码序列进行密码子优化，用于在二穗短柄草中表达(SEQ IDNO：7)。将所得的编码序列克隆到3个分开的二元载体中，各自具有不同的启动子和5’UTR。这些二元载体描述于表7。
表7：GRMZM2G150260构建体
使用植物组织培养技术来再生转化的二穗短柄草细胞，以产生含有表7所述的GRMZM2G150260转基因盒的转基因二穗短柄草植物。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。
T0-代植物生长至成熟并且自花授粉以产生T1-代种子。所得的T1-代种子与同龄的野生型二穗短柄草植物在20小时光/4小时黑暗的光周期下一起种植。植物在单个盆中生长。这些构建体的选择事件的生物质产量数据与野生型二穗短柄草植物的类似数据一起示于表8，并且其中有无效分离子(null segregant)植物。
表8：来自GRMZM2G150260二穗短柄草植物的T1-代生物质和种子数据
从130027二穗短柄草植物的叶中提取RNA。进行定量RT-PCR实验，并且发现GRMZM2G150260转录本以比二穗短柄草中存在的组成型表达的天然Ubi10基因高约0.006倍的转录本水平存在。
实施例5-二穗短柄草中的GRMZM2G165042表达
对GRMZM2G165042编码序列进行密码子优化，用于在二穗短柄草中表达(SEQ IDNO：9)。将所得的编码序列克隆到4个分开的二元载体中，各自具有不同的启动子和5’UTR。这些二元载体描述于表9。
表9：GRMZM2G165042构建体
使用植物组织培养技术来再生转化的二穗短柄草细胞以产生含有表9所述的GRMZM2G165042转基因盒的转基因二穗短柄草植物。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。含有GRMZM2G165042转基因的转基因植物生长并允许自花授粉以产生T1种子。转基因130041二穗短柄草植物显示不利的生长表型。24个产生的130041植物中的11个没有在移植到土壤之后存活。24个130041植物中的8个显示非常弱的生长，其生物质累积较低。24个130041植物中的5个显示良好生长，但是在其叶上有棕色病变。来自构建体130017、130025、和130033的T1-代植物与野生型二穗短柄草植物一起在生长室中以20小时光/4小时黑暗的光周期生长。植物在单个盆中生长。这些构建体的选择事件的生物质产量数据与野生型二穗短柄草植物的类似数据一起示于表10。
表10：来自GRMZM2G165042二穗短柄草植物的T1-代生物质和种子数据
| <u>构建体</u> | <u>事件</u> | <u>n</u> | <u>生物质产量(g)</u> |
| 130017 | C3-2 | 2 | 1.50±0.58 |
| 130033 | C1 | 3 | 2.41±0.85 |
| 130033 | D7 | 4 | 1.54±0.43 |
| 野生型 | n/a | 56 | 1.70±0.85 |
实施例6-二穗短柄草中的GRMZM2G162749表达
对GRMZM2G162749编码序列进行密码子优化，用于在二穗短柄草中表达(SEQ IDNO：11)。将所得的编码序列克隆到4个分开的二元载体中，各自具有不同的启动子和5’UTR。这些二元载体描述于表11。
表11：GRMZM2G162749构建体
使用植物组织培养技术来再生转化的二穗短柄草细胞以产生含有表11所述的GRMZM2G162749转基因盒的转基因二穗短柄草植物。通过使用从再生植物的叶中提取的DNA作为模板的PCR来确认转基因盒的导入。在使用其中ZmUbi启动子驱动GRMZM2G162749序列的130021构建体转化的重复尝试之后，不可能生成任何转基因事件。这强烈表明由ZmUbi启动子赋予的强组成型表达对于植物再生而言是不利的。从130029、130037、和130045载体中回收转基因植物。这些植物生长至成熟并且允许自花授粉以产生T1-代种子。
种植T1-代种子，并且所得的植物与野生型二穗短柄草植物在20小时光/4小时黑暗的光周期下一起生长。植物在单独盆中生长。这些构建体的选择事件的生物质产量数据与野生型二穗短柄草植物的类似数据一起示于表12。
表12：来自GRMZM2G162749二穗短柄草植物的T1-代生物质和种子数据
从130037二穗短柄草植物的叶中提取RNA。进行定量RT-PCR实验，并且发现GRMZM2G162749转录本以比二穗短柄草中存在的组成型表达的天然Ubi10基因高约0.260倍的转录本水平存在。
实施例7-操作天然植物转录因子的表达用于改善的生长
表15所列的玉米TF克隆到植物转化载体中用于在转基因植物中表达。本领域技术人员预期天然玉米TF在玉米中的表达将导致增加的生长、生物质积累、种子产量、和/或其他改善的植物特性，包括但不限于干旱耐受性、热胁迫耐受性、和耐受盐胁迫的能力。本领域技术人员还将充分理解这些TF的直向同源物在感兴趣植物物种中的表达也可到配制改善的植物特性，包括但不限于，改善的生长、生物质积累、种子产量、和/或对生物或非生物胁迫的抵抗。由于预期改变表15所列的玉米TF的直向同源物的表达水平和/或表达概况可改善植物特性，在感兴趣植物物种中鉴定这些TF的直向同源物。鉴定的直向同源物的表达水平和/或表达概况然后在感兴趣植物物种中处理以改善所述植物的农业性质。例如，本文所述的玉米TF的水稻(O.sativa)和二穗短柄草直向同源物示于表15。
表15：玉米TF及其在水稻(Oryza sativa)和二穗短柄草中的直向同源物
除了表15所列的玉米TF的水稻(Oryza sativa)和二穗短柄草直向同源物以外，通过使用生物信息学工具鉴定到其他直向同源物。用于鉴定直向同源基因的方法已经描述于科学文献中并且可用于鉴定对于表15中所列的TF而言直向同源的TF(Li等，(2003)GenomeRes 13：2178-2189；Fulton等，(2002)Plant Cell 14：1457-1467)。在感兴趣植物中改变这类直向同源基因的表达以实现植物生长或产量的所需增加或增加的对生物或非生物胁迫的抵抗。
实施例8-确定TF结合位点
通过酵母单杂交试验方法来确定感兴趣TF的结合序列。在该方法中，表15中所列的TF被克隆到适于在微生物系统中产生蛋白质的载体(例如，pET-系列载体；生命技术公司)。TF在含有蛋白质产生质粒的合适微生物中产生并纯化。纯化的TF针对酵母单杂交试验中的合成启动子文库进行筛选。这种启动子文库在至少2种不同情况中含有全部8聚体DNA序列。这些酵母单杂交试验的结果是测试TF的结合位点。已经在科学文献中描述了类似的策略用于基于酵母单杂交试验筛选来确定TF结合位点(Pruneda-Paz等，(2009)Science323：481-485)。
实施例9-狗尾草(Setaria viridis)和水稻(Oryza sativa)中的TF表达
使用表16所列构建体来转化狗尾草组织。在共培养含有表16中所示的转化构建体的根癌农杆菌(A.tumefaciens)细胞和狗尾草愈伤组织之后，狗尾草细胞被转移到组织培养基中用于植物再生。使用PCR试验确认感兴趣基因的存在以检测所述基因存在与否。这些转化产生的原代转化体生长至成熟并且允许自花授粉以产生T1-代种子。
表16：用于狗尾草转化的构建体
将用表16所列构建体转化的狗尾草植物的T1-代种子种植在土壤中并且所得的T1植物与野生型狗尾草植物一起在温室中在单独盆中生长。表17显示了来自用载体130027和130044转化的可用狗尾草品系的收获的生物质以及与这些130027和130044植物一起生长的野生型狗尾草的生物质的干重。
表17：选择的130027和130044狗尾草事件的干重
表18显示了来自用载体130026、130034、130037、和130045转化的可用狗尾草品系的收获的生物质以及与这些植物一起生长的野生型狗尾草的生物质的干重。
表18：选择的130026、130034、130037、和130045狗尾草事件的干重
也使用表16所列构建体来转化水稻(Oryza sativa cv.Kitaake)细胞。在与含有表16所述转化构建体的根癌农杆菌(A.tumefaciens)细胞共培养之后，使用组织培养技术再生转化的水稻细胞以产生转基因植物。通过使用从植物的叶提取的DNA和对感兴趣基因特异性的引物来确认再生的水稻植物中感兴趣基因的存在。这些转化产生的原代转化体生长至成熟并且允许自花授粉以产生T1-代种子。在收获T1-代种子之后，将这些种子种植在土壤中并且允许与野生型和/或空分离子植物作为阴性对照一起发芽。通过PCR或另一种合适的分子试验来对T1-代植物进行基因分型以检测感兴趣TF基因是否存在。T1植物生长至成熟并且自花授粉以产生T2-代种子。收获地上总生物质并在37℃烘箱中干燥。这些种子被单独收获、干燥、并称重，并计数。用一种或多种表16所列构建体转化的水稻植物产生的生物质的干重与由野生型和/或空分离子水稻植物产生的生物质的干重进行比较。用一种或多种表16所列构建体转化的水稻植物产生的种子的干重和总数也与由野生型和/或空分离子水稻植物产生的种子的干重和总数进行比较。进行合适的统计学分析以确定转基因水稻植物是否产生比阴性对照植物明显更多的生物质和/或种子。
实施例10-测试盐和高pH耐受性
如实施例11所述，使用表16所列载体来转化水稻(Oryza sativa cv.Kitaake)。所得的水稻植物在温室环境中生长。这些水稻植物用水刺激，如表19所述。该表显示了其水稻植物培养区间所列的各种离子的平均浓度以及这段时间上的平均pH。该水中的高pH、高Na+、高S、高SO4 2-、和高Cl-含量明显在一般用于对植物进行浇水的范围以外。
表19-用于TF-表达水稻植物的水的离子含量
用表16所列载体转化的所有水稻植物在营养生长期间显示表型正常。然而，在到达繁殖阶段之后，许多植物无法产生有活力的种子。表20总结了用表16所述的载体转化的水稻植物的种子产生。
表20-转基因水稻植物的种子产生
如表20所示，这些转基因水稻品系中的大部分在用表19所示的水刺激时不能产生有活力的种子。用130024、130026、和130028构建体转化的转基因水稻品系则是例外。这些植物中的许多都成功自花授粉并且产生有活力的种子。
将由表达感兴趣TF的水稻植物产生的种子种植到土壤中以培养T1-代水稻。T1-代水稻植物在正常条件以及高盐和/或高pH条件下与空分离子和/或野生型阴性对照植物一起生长。在成熟之后，植物进行自花授粉以产生种子。由水稻植物产生的生物质与种子一起收获并干燥。测量有水稻植物产生的生物质的重量、产生的种子的数量、和产生的种子的重量，并且进行合适的统计学分析以比较由TF-表达水稻植物的生物质和种子产生与阴性对照植物的生物质和种子产生。
序列表
<110> T·P·布鲁特内尔（Brutnell, Thomas P.）
B·N·格雷（Gray, Benjamin N.）
T·C·莫克勒（Mockler, Todd Christopher）
王林（Wang, Lin）
<120> 用于增加植物生长和产量的方法和组合物
<130> 061808/464578
<150> 62/022,925
<151> 2014-07-10
<160> 52
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 621
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(641)
<223> 基因标识符: GRMZM2G143718
<400> 1
atgaggacca tctgcgacgt gtgcgagtcc gccccggccg tgctcttctg cgccgccgac 60
gaggccgccc tctgcaggcc gtgcgacgag aaggtgcaca tgtgcaacaa gctcgcctcc 120
aggcacgtga gggtgggcct cgccgacccg aacaagctcg tgaggtgcga catctgcgag 180
aactccccgg ccttcttcta ctgcgagatc gacggcacct ccctctgcct ctcctgcgac 240
atgaccgtgc acgtgggcgg caagaggacc cacggcaggt acctcctcct caggcagagg 300
gtggagttcc cgggcgacaa gccgggccac atggacgacg tgccgatgga gatccaggac 360
ccggagaacc agagggacca gaagaagccg ccgaaggagc agaccgccaa ccaccacaac 420
ggcgacgacc cggccaccga cggcaactgc gacgaccagg gcaacatcga ctccaagatg 480
atcgacctca acatgaggcc ggtgaggacc cacggccagg agtccaactc ccagacccag 540
ggcgtgggcc tctccgtgaa caaccacgac tccccgggcg tggtgccgac ctccaactcc 600
gagagggaca cctccaagtg a 621
<210> 2
<211> 206
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(206)
<223> 基因标识符: GRMZM2G143718
<400> 2
Met Arg Thr Ile Cys Asp Val Cys Glu Ser Ala Pro Ala Val Leu Phe
1 5 10 15
Cys Ala Ala Asp Glu Ala Ala Leu Cys Arg Pro Cys Asp Glu Lys Val
20 25 30
His Met Cys Asn Lys Leu Ala Ser Arg His Val Arg Val Gly Leu Ala
35 40 45
Asp Pro Asn Lys Leu Val Arg Cys Asp Ile Cys Glu Asn Ser Pro Ala
50 55 60
Phe Phe Tyr Cys Glu Ile Asp Gly Thr Ser Leu Cys Leu Ser Cys Asp
65 70 75 80
Met Thr Val His Val Gly Gly Lys Arg Thr His Gly Arg Tyr Leu Leu
85 90 95
Leu Arg Gln Arg Val Glu Phe Pro Gly Asp Lys Pro Gly His Met Asp
100 105 110
Asp Val Pro Met Glu Ile Gln Asp Pro Glu Asn Gln Arg Asp Gln Lys
115 120 125
Lys Pro Pro Lys Glu Gln Thr Ala Asn His His Asn Gly Asp Asp Pro
130 135 140
Ala Thr Asp Gly Asn Cys Asp Asp Gln Gly Asn Ile Asp Ser Lys Met
145 150 155 160
Ile Asp Leu Asn Met Arg Pro Val Arg Thr His Gly Gln Glu Ser Asn
165 170 175
Ser Gln Thr Gln Gly Val Gly Leu Ser Val Asn Asn His Asp Ser Pro
180 185 190
Gly Val Val Pro Thr Ser Asn Ser Glu Arg Asp Thr Ser Lys
195 200 205
<210> 3
<211> 258
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(258)
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<400> 3
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cttgactatg acgtcaagat gattgaatca ggccacgtgc cgtaccccaa gtacaagaca 240
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<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(85)
<223> 基因标识符: GRMZM2G117497
<400> 4
Met Ser Ala Ser Arg Ser Ser Ser Pro Asn Ser Ile Ser Gln Trp Ser
1 5 10 15
Gln Lys Glu Asn Lys Met Phe Glu Glu Ala Leu Ala Tyr Tyr Gly Glu
20 25 30
Gly Thr Ser Asn Arg Trp Asp Lys Val Ser Arg Ala Met Gly Gly Ile
35 40 45
Lys Ser Ala Glu Glu Val Arg Cys His Tyr Glu Asp Leu Asp Tyr Asp
50 55 60
Val Lys Met Ile Glu Ser Gly His Val Pro Tyr Pro Lys Tyr Lys Thr
65 70 75 80
His Gly Phe Trp Thr
85
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<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
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<400> 5
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gtgtccagcg ccatgggagg catcaagtct gccgaggagg tgcgctgcca ctatgaaaat 180
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<211> 87
<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(87)
<223> 基因标识符: GRMZM2G158117
<400> 6
Met Ser Ala Ser Arg Ser Ser Ser Pro Asn Ser Met Ser Gln Trp Ser
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Gln Lys Glu Asn Lys Met Phe Glu Glu Ala Leu Ala Tyr Tyr Gly Glu
20 25 30
Gly Thr Pro Asn Arg Trp Asp Lys Val Ser Ser Ala Met Gly Gly Ile
35 40 45
Lys Ser Ala Glu Glu Val Arg Cys His Tyr Glu Asn Leu Asp Tyr Asp
50 55 60
Val Lys Met Ile Glu Ser Gly Asn Val Pro Tyr Pro Lys Tyr Lys Thr
65 70 75 80
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85
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<211> 282
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(282)
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<400> 7
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gacttggagc acatcgaggc cggcaaggtg gccttccccg cgtacaggtg ccccggcggc 240
tacgacgacg ccgacagcga caggctgaag cacctgacct ga 282
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<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(93)
<223> 基因标识符: GRMZM2G150260
<400> 8
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1 5 10 15
Gln Asn Lys Leu Phe Glu Gln Ala Leu Ala Val Tyr Asp Arg Asp Thr
20 25 30
Pro Asp Arg Trp His Asn Ile Ala Arg Ala Val Gly Gly Lys Ser Ala
35 40 45
Asp Glu Val Arg Arg Tyr Tyr Glu Leu Leu Val Lys Asp Leu Glu His
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Ile Glu Ala Gly Lys Val Ala Phe Pro Ala Tyr Arg Cys Pro Gly Gly
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Tyr Asp Asp Ala Asp Ser Asp Arg Leu Lys His Leu Thr
85 90
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<211> 1689
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1689)
<223> 基因标识符: GRMZM2G165042
<400> 9
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gaagacgacc tcatcgagct gctatggtgc aacggccatg tcgtcatgca gagccagagc 120
caccggaagg tgccgccgag gccggagaag gcggcggcag tggcggctcc accagccccc 180
gcgtccgtgc cgcaggaaga cgagggcggc ctgtggttcc ccttcgcgct ggccgactcg 240
ctggacaagg acatcttctc ggagttcttc tgcgaggcac cgacgccggc accggcggcg 300
gcggatgcgg cgccggcggc ctctggtggt ggaaccggca ccgaagccgg cggcaagtcg 360
tgcggcgggg acgtcccagt cccagcagag gacgacaggc gcggcggcgg cggggcgtgc 420
gcggtgtcgg cgggggaccc gtgcgacctg atgccgcctc ccaagtcgac gcccgcgtcc 480
tgctccaggc agcagacgac gatgagcctg gccaacggcg gcgacaatgc cggaggggac 540
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tcctcgtcgg ggcggtccaa ctactgctgc ttcggcgccg ccaccaccac aaccacaacc 840
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tcggagcgga ggagacgaga caggataaac gagaagatga gagccctgca agagctcata 1080
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<220>
<221> 结构域
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225 230 235 240
Pro Ser Ala Val Gly Ser Ala Asn Ala Asn Ala Val Gly Gly Gly Arg
245 250 255
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260 265 270
Ala Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Pro Ala Ser Thr
275 280 285
Ser Asn Arg Ser Ser Lys Arg Lys Arg Leu Asp Thr Glu Asp Ser Glu
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Ser Pro Ser Glu Asp Ala Glu Ser Gly Ser Ala Ala Met Leu Ala Arg
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Lys Pro Pro Gln Lys Met Thr Thr Ala Arg Arg Ser Arg Ala Ala Glu
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ccgcagcagg aggtcgcgga caccgaagac tcgtcggcag acaaacagca gggcgaggcg 240
ggcaacccaa aggagaagct caagaagccc gacaagatcc tgccgtgccc gcggtgcaac 300
agcatggaca ccaagttctg ctactacaac aactacaaca tcaaccagcc gcgccacttc 360
tgcaagaact gccagaggta ctggactgcc ggcggtgcca tgcgcaacgt gcccgtgggc 420
gcaggccggc gcaagagcaa gagcgcgtcg gccacttccc acttcctcca gagggtcagg 480
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<212> PRT
<213> 玉米（Zea mays）
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<221> 结构域
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Met Gln Gln Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Thr Asp Pro Lys Gly
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Thr Ile Arg Ile Asp Asp Val Asp Glu Val Ala Arg Ser Ser Ile Leu
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Ser Leu Ile Gly Ile Gly Gly Asp Lys Ala Gly Lys Asp Gly Gly Arg
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Gly Cys Lys Leu Ala Arg Val Phe Glu Gln Asn Glu Glu Ala Ala Arg
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Gly Asn Pro Ala Ala Leu Ser Arg Ser Leu Thr Phe Gln Glu Gly Ser
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agcagcggcg ggcccggcgc cggcgggagg aacgggtcct ccgctgctgc tgctgctgcc 360
gccgccgccg ccgccgtcac gtcctcctcg gcgccgtcga cgctgtccct cccgctgcat 420
acggggtccc tgccgtcgtt gtcctcggcg ctggggctgc ccgggggcgc ctcgctcgcg 480
tcgctcctcc tcgggaccgc tggctctggc ggtgaccacc tcggcctctt ccaggccgcc 540
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tag 1083
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Ser Phe Tyr Ala Pro Leu Leu Ser Ser Ser Leu Val Pro Gly Leu Glu
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Glu Leu His Val Lys Ala Glu Val Ala Gly Ala Gly Asp His Gln Gln
260 265 270
Lys Pro Ala Pro Gly Asp Gln Gln Ser Ala Ser Trp Glu Leu Pro Thr
275 280 285
Pro Ser Ser Ser Asn Val Asp Ala Asn Val Ile Ala Ser Asp Ala Leu
290 295 300
Met Ala Ala Ala Ala Ala Ser Met Asn Pro Gly Val Ser Ser Ala Thr
305 310 315 320
Ala Ala Thr Ala Pro Thr Val Pro Ser Ser Phe Met Tyr Trp Gly Asn
325 330 335
Gly Gly Ile Gly Gly Ala Ala Ala Ala Trp Pro Asp Leu Thr Asn Cys
340 345 350
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355 360
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<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
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<213> 玉米（Zea mays）
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<221> 结构域
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<213> 玉米（Zea mays）
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<221> misc_feature
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<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1814)
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ccacctcgtg tacgtgctgc cttgccagtt gccactgggc actgctggcc cagtgaccaa 240
ccatgcgtta gatctgacag caccaccgaa ccatcctccc cggtgatcaa caaacgacgg 300
cagccacatc ttgcacccaa cgtgatgatg aatgatgcct agaacttttg acaacaaaac 360
gcagcacagg tagcaggttt aattcaacaa gactttctac tatatagagc cacaccatag 420
agataactaa tctgtgcgca aagccaaagt gctgacggca actgtggtgc agccttttca 480
tctccgtttt taagtttttt gcccctcctt ttgttttctg tttttctggg aactctttaa 540
accgccgtgg cgccgtgtaa actttgctgt agccttttcg cgtgcaatgg cagagcgccc 600
tgttcttttc ctgctaaaga aaaaaaaaaa ggagcacctg atcgctggca ggcccacggc 660
ccacccaact gtgtctgtaa cgctcggcgt ccctgcattg catgccaagt gccaaccacc 720
agtccatagc agggtcaggg agaccgcaga tgaggccggg gcaacggtga tgccgcaaag 780
aggattcaga atcctttttc ttttcttttc ttttaccacc gggctggcat cacagattac 840
acgcgcagta gagtaagcac gtctctctcg tagccaagaa caacagtcta cacagctcgc 900
tttctccgcc cttgtctggg cgttacggca ggcaagcccc ctcgttttct tctgctcgcg 960
ttctccttcc atgtccacat ctcctgtgcc accgcacgca aggtgccaac gctccctcgc 1020
cgcagtagca tcgcgtccac acaaactgca cctccactag atacggcggt gatccggcga 1080
gagagcgcga cacgcacagg ccagctagcg tttctccgac gccgcgcgtt tcatcatttc 1140
ccgcttcccc tgcccccggc cgcgcgcgcg cgcccgtgtg gtccagacca ggacgcgcgc 1200
ggatgtgcat ccggcgcgcg cccgtcggcc acacggtgcc gccgcgcgtt atcccgagcc 1260
ctgtcctgtc ctgtcctgtt ccatctcgcg cgcgaggggg ggaggggagg gcagcgagtg 1320
gcgcgctggc ggatgaggcg ccgagtggcc cgcatccacc ggcgcaggcg agccgcacga 1380
cgccgccgcg ctcgcggacc gccgccgcca cacatgcgca cccccggccc gcggggctgt 1440
aacggccttg tcgccacgcg tgcgccccgt gtgtataagg aggcagcgcg tacagggggc 1500
gacaacgata agcggcactc gcacgatcaa tgtacacatt gcccgtccgc gccaccacat 1560
ccagcatcgt cgccagcctc gccacccccg cgccgtcctc ctcctccggc tccggctccg 1620
gccgccccag gcccaggctc atccggaacg cccccgtctt cgccgccccc gccaccgtcg 1680
tgtaaacggg acggcgggca gctgaggagt caaacgagag agatcgagag aaagaaaggg 1740
agggcatcca ccagccgccg gcgataagag gggaggagag agaggccaga gaagaggagg 1800
agaagaagaa gaaa 1814
<210> 19
<211> 737
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(737)
<223> 4xRGCGR启动子和玉米CA1 5'UTR
<220>
<223> 高粱(启动子)和玉米 (5'UTR)
<400> 19
gaagcgagtg gcgcgctggc ggatgaggcg gcgagtggcc cggatgcacc ggcgcaggcg 60
agcgaagcga gtggcgcgct ggcggatgag gcggcgagtg gcccggatgc accggcgcag 120
gcgagcgaag cgagtggcgc gctggcggat gaggcggcga gtggcccgga tgcaccggcg 180
caggcgagcg aagcgagtgg cgcgctggcg gatgaggcgg cgagtggccc ggatgcaccg 240
gcgcaggcga gccgcacgcc gccgcccgcc gcggcgctcg cgcgcggacc gctgccgcct 300
gccgccacac aatgcgagcg cgcgcgcaca cacacacaca ccacccgggc gggggggctg 360
tagtagtaac ggccttgtct tgtcggcacg cgcgcgtccg tgtgtataag gaggcaggcc 420
cgcgacaacg ataagcggca ctcgcacgat caatgtacac attgcccgtc cgcgccacca 480
catccagcat cgtcgccagc ctcgccaccc ccgcgccgtc ctcctcctcc ggctccggct 540
ccggccgccc caggcccagg ctcatccgga acgcccccgt cttcgccgcc cccgccaccg 600
tcgtgtaaac gggacggcgg gcagctgagg agtcaaacga gagagatcga gagaaagaaa 660
gggagggcat ccaccagccg ccggcgataa gaggggagga gagagaggcc agagaagagg 720
aggagaagaa gaagaaa 737
<210> 20
<211> 258
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(258)
<223> 基因标识符: LOC_Os05g49240
<400> 20
atgtctgggt cccggagctc ctcccccaac tcgaagtctg agtggagcag gaaggagaac 60
aagatgttcg aggaggcgct cgcctactac ggcgaggaca cgcccaaccg gtgggacaag 120
gtggccagcg ccatgggagg catcaagtcc gctgaggaga tccgctgcca ctacgaagac 180
ctcaccgatg acgtcaagac gatcgagtcc gggcgagtgc agttccccaa gtacaagacg 240
cagggatact ggacctga 258
<210> 21
<211> 85
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(85)
<223> 基因标识符: LOC_Os05g49240
<400> 21
Met Ser Gly Ser Arg Ser Ser Ser Pro Asn Ser Lys Ser Glu Trp Ser
1 5 10 15
Arg Lys Glu Asn Lys Met Phe Glu Glu Ala Leu Ala Tyr Tyr Gly Glu
20 25 30
Asp Thr Pro Asn Arg Trp Asp Lys Val Ala Ser Ala Met Gly Gly Ile
35 40 45
Lys Ser Ala Glu Glu Ile Arg Cys His Tyr Glu Asp Leu Thr Asp Asp
50 55 60
Val Lys Thr Ile Glu Ser Gly Arg Val Gln Phe Pro Lys Tyr Lys Thr
65 70 75 80
Gln Gly Tyr Trp Thr
85
<210> 22
<211> 636
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(636)
<223> 基因标识符: LOC_Os09g35880
<400> 22
atgcggacga tctgcgacgt gtgcgagagc gcgccggcgg tgctcttctg cgtggccgac 60
gaggccgcgc tctgccggtc ctgcgacgag aaggtgcata tgtgtaacaa gcttgctagg 120
cggcacgtga gagttgggct tgcagaccct aataaagttc aacgctgtga tatatgtgaa 180
aatgcccccg ccttcttcta ttgcgagata gatggtacat cactttgcct tagttgtgat 240
atgactgttc atgttggtgg gaaacgaacc catggaagat acctgctcct aaggcaacgg 300
gttgaatttc caggagataa accaggtcat atggatgatg ttgctatgca acagaaagat 360
cctgaaaacc ggacggatca aaagaaggcc cctcactcag taacaaagga gcaaatggca 420
aaccatcata atgtgtctga tgatccagcc tcagatggca actgcgatga ccagggtaac 480
atcgattcca aaatgattga tcttaatatg agacccgtcc gtactcatgg acaaggttca 540
aactcacaga ctcagggcgt ggatgttagc gtcaacaatc atgattctcc aggagtggtg 600
ccaacatgta atttcgaacg agaagccaac aaataa 636
<210> 23
<211> 211
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (10)...(211)
<223> 基因标识符: LOC_Os09g35880
<400> 23
Met Arg Thr Ile Cys Asp Val Cys Glu Ser Ala Pro Ala Val Leu Phe
1 5 10 15
Cys Val Ala Asp Glu Ala Ala Leu Cys Arg Ser Cys Asp Glu Lys Val
20 25 30
His Met Cys Asn Lys Leu Ala Arg Arg His Val Arg Val Gly Leu Ala
35 40 45
Asp Pro Asn Lys Val Gln Arg Cys Asp Ile Cys Glu Asn Ala Pro Ala
50 55 60
Phe Phe Tyr Cys Glu Ile Asp Gly Thr Ser Leu Cys Leu Ser Cys Asp
65 70 75 80
Met Thr Val His Val Gly Gly Lys Arg Thr His Gly Arg Tyr Leu Leu
85 90 95
Leu Arg Gln Arg Val Glu Phe Pro Gly Asp Lys Pro Gly His Met Asp
100 105 110
Asp Val Ala Met Gln Gln Lys Asp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Gln Lys
115 120 125
Lys Ala Pro His Ser Val Thr Lys Glu Gln Met Ala Asn His His Asn
130 135 140
Val Ser Asp Asp Pro Ala Ser Asp Gly Asn Cys Asp Asp Gln Gly Asn
145 150 155 160
Ile Asp Ser Lys Met Ile Asp Leu Asn Met Arg Pro Val Arg Thr His
165 170 175
Gly Gln Gly Ser Asn Ser Gln Thr Gln Gly Val Asp Val Ser Val Asn
180 185 190
Asn His Asp Ser Pro Gly Val Val Pro Thr Cys Asn Phe Glu Arg Glu
195 200 205
Ala Asn Lys
210
<210> 24
<211> 258
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(258)
<223> 基因标识符: LOC_Os05g49240
<400> 24
atgtctgggt cccggagctc ctcccccaac tcgaagtctg agtggagcag gaaggagaac 60
aagatgttcg aggaggcgct cgcctactac ggcgaggaca cgcccaaccg gtgggacaag 120
gtggccagcg ccatgggagg catcaagtcc gctgaggaga tccgctgcca ctacgaagac 180
ctcaccgatg acgtcaagac gatcgagtcc gggcgagtgc agttccccaa gtacaagacg 240
cagggatact ggacctga 258
<210> 25
<211> 85
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(85)
<223> 基因标识符: LOC_Os05g49240
<400> 25
Met Ser Gly Ser Arg Ser Ser Ser Pro Asn Ser Lys Ser Glu Trp Ser
1 5 10 15
Arg Lys Glu Asn Lys Met Phe Glu Glu Ala Leu Ala Tyr Tyr Gly Glu
20 25 30
Asp Thr Pro Asn Arg Trp Asp Lys Val Ala Ser Ala Met Gly Gly Ile
35 40 45
Lys Ser Ala Glu Glu Ile Arg Cys His Tyr Glu Asp Leu Thr Asp Asp
50 55 60
Val Lys Thr Ile Glu Ser Gly Arg Val Gln Phe Pro Lys Tyr Lys Thr
65 70 75 80
Gln Gly Tyr Trp Thr
85
<210> 26
<211> 327
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(327)
<223> 基因标识符: LOC_Os01g44390
<400> 26
atggcgtcga tgtcggtgag ctcgtcgagg gcgccgcagt ggacggcgag gcagaacgag 60
cagttcgagc gggcgctggc ggtgtacgac agggacacgc cggagcggtg gcacaacatc 120
gcgcgcgccg ttgcggggaa gtccgccgac gaggtgaagc tctactacga cctgctcgtg 180
gaggacgtca agcgcatcga gaccgggaag gtgcccttcc ccgcgtacag gtgcccccag 240
cccgcgattg caggtcagtg catcggaaag aaggccaccg cgcgcggccg cttaatttcg 300
atcgtgttgt tcaccggagt ttactaa 327
<210> 27
<211> 108
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(108)
<223> 基因标识符: LOC_Os01g44390
<400> 27
Met Ala Ser Met Ser Val Ser Ser Ser Arg Ala Pro Gln Trp Thr Ala
1 5 10 15
Arg Gln Asn Glu Gln Phe Glu Arg Ala Leu Ala Val Tyr Asp Arg Asp
20 25 30
Thr Pro Glu Arg Trp His Asn Ile Ala Arg Ala Val Ala Gly Lys Ser
35 40 45
Ala Asp Glu Val Lys Leu Tyr Tyr Asp Leu Leu Val Glu Asp Val Lys
50 55 60
Arg Ile Glu Thr Gly Lys Val Pro Phe Pro Ala Tyr Arg Cys Pro Gln
65 70 75 80
Pro Ala Ile Ala Gly Gln Cys Ile Gly Lys Lys Ala Thr Ala Arg Gly
85 90 95
Arg Leu Ile Ser Ile Val Leu Phe Thr Gly Val Tyr
100 105
<210> 28
<211> 1485
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1485)
<223> 基因标识符: LOC_Os03g43810
<400> 28
atgaaccagt tcgtccctga ttggagcaac atgggtgacg catccaggac actcggcgaa 60
gatgacaacc tcattgagct gctctggtgc aacggccatg tcgtcatgca gagccagaat 120
caccaccgga agctgccgcc gaggccgccg gagaaggcgg cggcggcggc ggtgcaagaa 180
gacgaggccg gcctgtggtt cccgttcgcg ctcgccgact cgctggagaa ggacatcttc 240
tcggacctct tctacgaggc gcccgtcgcg gcgacggcgg aggcggcgcc tgctggcccg 300
ggcgcgggcg ccgacggcga aggaaagact tgcaagggcg acgcggcaat ggcggaggag 360
gagcgtggcg ggccgggcgc ggcgtccgag gcgccgcgcg agctgatgcc gccgcccaag 420
tcgacgaacg cgtcctgctc gaggcagcag acgatgagcc tggcggacgg cggcgacaac 480
gccggggacc tgtcggagct cgtccgggcg aggaggtcgt ccggcggcgc ggctcggcgg 540
aaggcggagg ccggcggcgg cggcggcggc gcgtcgtcgt cgatgctgag cgcgatcggg 600
tcgagcatct gcgggagcaa ccaggtgcag gtgcagcagc gcacggcgag cgagcccggg 660
cgccgcggcg cgccgccctc ggcggtgggg agcgcgaacg ccatcccctg cggcgggcgc 720
gaccacggcc acggccacga ggcgaccacc gtggcgtcgt cgtcggggcg gtccaactgc 780
tgcttcggca ccaccaccac cacggagccg acgagcacca gcaaccggag cagcaagcgc 840
aagcggctcg acaccaccga ggactccgag agccccagcg aggacgcgga gtcggagtcg 900
gcggcgctgg cgcgcaagcc gccggcgaag atgacgacgg cgcggaggag ccgcgccgcc 960
gaggtgcaca acctctccga gaggaggaga cgggacagga tcaacgagaa gatgagagcc 1020
ctgcaggagc tcataccaca ctgcaacaag actgacaagg cgtcgatgct ggacgaggcg 1080
atcgagtacc tcaagtctct gcagctgcag ctgcagatga tgtggatggg gagcgggatg 1140
gcgccgccgg tgatgttccc gggggtgcac cagtatctgc cgaggatggg cgtcgggatg 1200
ggggcggcgg cggcggcgat gccgaggatg ccgttcatgg cggcgccgca gccggtggtg 1260
cccacaccgc cggtgaacca ccttgacctg ggcgtcaacc acctgcagcc gccgccgacc 1320
cagggagtgg ggtattatcc gttgggggcc aaggccgtgc agcagcagca aaatccacca 1380
cttcacgtgc caaatggaag cattatgcct cctcctgaaa atgcacccaa cacaggatca 1440
ggtatgggat ccttctactt ctacttctac ttctcttccg attaa 1485
<210> 29
<211> 494
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(494)
<223> 基因标识符: LOC_Os03g43810
<400> 29
Met Asn Gln Phe Val Pro Asp Trp Ser Asn Met Gly Asp Ala Ser Arg
1 5 10 15
Thr Leu Gly Glu Asp Asp Asn Leu Ile Glu Leu Leu Trp Cys Asn Gly
20 25 30
His Val Val Met Gln Ser Gln Asn His His Arg Lys Leu Pro Pro Arg
35 40 45
Pro Pro Glu Lys Ala Ala Ala Ala Ala Val Gln Glu Asp Glu Ala Gly
50 55 60
Leu Trp Phe Pro Phe Ala Leu Ala Asp Ser Leu Glu Lys Asp Ile Phe
65 70 75 80
Ser Asp Leu Phe Tyr Glu Ala Pro Val Ala Ala Thr Ala Glu Ala Ala
85 90 95
Pro Ala Gly Pro Gly Ala Gly Ala Asp Gly Glu Gly Lys Thr Cys Lys
100 105 110
Gly Asp Ala Ala Met Ala Glu Glu Glu Arg Gly Gly Pro Gly Ala Ala
115 120 125
Ser Glu Ala Pro Arg Glu Leu Met Pro Pro Pro Lys Ser Thr Asn Ala
130 135 140
Ser Cys Ser Arg Gln Gln Thr Met Ser Leu Ala Asp Gly Gly Asp Asn
145 150 155 160
Ala Gly Asp Leu Ser Glu Leu Val Arg Ala Arg Arg Ser Ser Gly Gly
165 170 175
Ala Ala Arg Arg Lys Ala Glu Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ser
180 185 190
Ser Ser Met Leu Ser Ala Ile Gly Ser Ser Ile Cys Gly Ser Asn Gln
195 200 205
Val Gln Val Gln Gln Arg Thr Ala Ser Glu Pro Gly Arg Arg Gly Ala
210 215 220
Pro Pro Ser Ala Val Gly Ser Ala Asn Ala Ile Pro Cys Gly Gly Arg
225 230 235 240
Asp His Gly His Gly His Glu Ala Thr Thr Val Ala Ser Ser Ser Gly
245 250 255
Arg Ser Asn Cys Cys Phe Gly Thr Thr Thr Thr Thr Glu Pro Thr Ser
260 265 270
Thr Ser Asn Arg Ser Ser Lys Arg Lys Arg Leu Asp Thr Thr Glu Asp
275 280 285
Ser Glu Ser Pro Ser Glu Asp Ala Glu Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ala
290 295 300
Arg Lys Pro Pro Ala Lys Met Thr Thr Ala Arg Arg Ser Arg Ala Ala
305 310 315 320
Glu Val His Asn Leu Ser Glu Arg Arg Arg Arg Asp Arg Ile Asn Glu
325 330 335
Lys Met Arg Ala Leu Gln Glu Leu Ile Pro His Cys Asn Lys Thr Asp
340 345 350
Lys Ala Ser Met Leu Asp Glu Ala Ile Glu Tyr Leu Lys Ser Leu Gln
355 360 365
Leu Gln Leu Gln Met Met Trp Met Gly Ser Gly Met Ala Pro Pro Val
370 375 380
Met Phe Pro Gly Val His Gln Tyr Leu Pro Arg Met Gly Val Gly Met
385 390 395 400
Gly Ala Ala Ala Ala Ala Met Pro Arg Met Pro Phe Met Ala Ala Pro
405 410 415
Gln Pro Val Val Pro Thr Pro Pro Val Asn His Leu Asp Leu Gly Val
420 425 430
Asn His Leu Gln Pro Pro Pro Thr Gln Gly Val Gly Tyr Tyr Pro Leu
435 440 445
Gly Ala Lys Ala Val Gln Gln Gln Gln Asn Pro Pro Leu His Val Pro
450 455 460
Asn Gly Ser Ile Met Pro Pro Pro Glu Asn Ala Pro Asn Thr Gly Ser
465 470 475 480
Gly Met Gly Ser Phe Tyr Phe Tyr Phe Tyr Phe Ser Ser Asp
485 490
<210> 30
<211> 1323
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1323)
<223> 基因标识符: LOC_Os03g07360
<400> 30
atgggggagt gcaaggtggg aggaggaggc ggaggcggag actgcttgat caagctgttc 60
gggaagacca tccccgtgcc agagcccggc gcctgcgccg ccggcgatgt tgataaggac 120
cttcaacaca gtggcagcag cacgactgaa ccgaaaactc aagagaacac cgttcaagac 180
tccacaagtc cacctccgca gccagaggtc gtcgacaccg aggactcttc agctgataag 240
aactcatcag agaatcagca gcagcagggc gatacggcca accagaagga gaagctgaag 300
aagcctgaca agatcctgcc gtgcccccgg tgtagcagca tggacaccaa gttctgctac 360
tacaacaact acaacatcaa ccagccgcgc cacttctgca agaactgcca gaggtactgg 420
acagcgggtg gtgccatgcg caacgtgcct gtgggtgcag gccgacgcaa gagcaagagc 480
gtatcggccg cttcccattt cctccagagg gtcagggctg ctctgcccgg tgatcctcct 540
ctctatgccc cagtgaagac taatggcacc gttctcagct tcggctccga cctgtccacc 600
ttagacctca cagaacaaat gaagcatcta aaagataagt ttatcccaac aaccggtatc 660
aagaacaccg acgagatgcc agtcggtttg tgtgctgaag gattgtcgaa aacagaagaa 720
tcgaaccaaa cgaacctaaa ggagaaagtt tcagcagata gatctccaaa tgttgcacaa 780
cacccatgca tgaacggagg agccatgtgg ccatttggcg tggcaccacc acctgcttat 840
tacacttcaa gcattgcaat tccattctat ccagctgcag cagctgctgt tgctgcatac 900
tggggctgca tggttccagg agcttggaac gctccatggc caccgcagtc ccaatcccaa 960
tcggtttcat catcaagtgc tgcttctcca gtatccacaa tgaccaactg cttcagatta 1020
ggaaagcacc ctagagatgg tgatgaggaa ctggatagca agggtaatgg caaggtgtgg 1080
gtgccgaaga cggttcggat cgacgatgtc gacgaggtgg ccaggagctc tatctggtcg 1140
cttattggga tcaagggtga caaggtggga gcagatcatg gcagaggatg caagcttgca 1200
aaggtttttg agtcaaagga tgaggcaaag gcatcaactc acacagcgat cagcagcttg 1260
ccattcatgc aggggaaccc ggctgcccta acacgctcgg tgaccttcca agagggatct 1320
tga 1323
<210> 31
<211> 440
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(440)
<223> 基因标识符: LOC_Os03g07360
<400> 31
Met Gly Glu Cys Lys Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ile Lys Leu Phe Gly Lys Thr Ile Pro Val Pro Glu Pro Gly Ala Cys
20 25 30
Ala Ala Gly Asp Val Asp Lys Asp Leu Gln His Ser Gly Ser Ser Thr
35 40 45
Thr Glu Pro Lys Thr Gln Glu Asn Thr Val Gln Asp Ser Thr Ser Pro
50 55 60
Pro Pro Gln Pro Glu Val Val Asp Thr Glu Asp Ser Ser Ala Asp Lys
65 70 75 80
Asn Ser Ser Glu Asn Gln Gln Gln Gln Gly Asp Thr Ala Asn Gln Lys
85 90 95
Glu Lys Leu Lys Lys Pro Asp Lys Ile Leu Pro Cys Pro Arg Cys Ser
100 105 110
Ser Met Asp Thr Lys Phe Cys Tyr Tyr Asn Asn Tyr Asn Ile Asn Gln
115 120 125
Pro Arg His Phe Cys Lys Asn Cys Gln Arg Tyr Trp Thr Ala Gly Gly
130 135 140
Ala Met Arg Asn Val Pro Val Gly Ala Gly Arg Arg Lys Ser Lys Ser
145 150 155 160
Val Ser Ala Ala Ser His Phe Leu Gln Arg Val Arg Ala Ala Leu Pro
165 170 175
Gly Asp Pro Pro Leu Tyr Ala Pro Val Lys Thr Asn Gly Thr Val Leu
180 185 190
Ser Phe Gly Ser Asp Leu Ser Thr Leu Asp Leu Thr Glu Gln Met Lys
195 200 205
His Leu Lys Asp Lys Phe Ile Pro Thr Thr Gly Ile Lys Asn Thr Asp
210 215 220
Glu Met Pro Val Gly Leu Cys Ala Glu Gly Leu Ser Lys Thr Glu Glu
225 230 235 240
Ser Asn Gln Thr Asn Leu Lys Glu Lys Val Ser Ala Asp Arg Ser Pro
245 250 255
Asn Val Ala Gln His Pro Cys Met Asn Gly Gly Ala Met Trp Pro Phe
260 265 270
Gly Val Ala Pro Pro Pro Ala Tyr Tyr Thr Ser Ser Ile Ala Ile Pro
275 280 285
Phe Tyr Pro Ala Ala Ala Ala Ala Val Ala Ala Tyr Trp Gly Cys Met
290 295 300
Val Pro Gly Ala Trp Asn Ala Pro Trp Pro Pro Gln Ser Gln Ser Gln
305 310 315 320
Ser Val Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ser Pro Val Ser Thr Met Thr Asn
325 330 335
Cys Phe Arg Leu Gly Lys His Pro Arg Asp Gly Asp Glu Glu Leu Asp
340 345 350
Ser Lys Gly Asn Gly Lys Val Trp Val Pro Lys Thr Val Arg Ile Asp
355 360 365
Asp Val Asp Glu Val Ala Arg Ser Ser Ile Trp Ser Leu Ile Gly Ile
370 375 380
Lys Gly Asp Lys Val Gly Ala Asp His Gly Arg Gly Cys Lys Leu Ala
385 390 395 400
Lys Val Phe Glu Ser Lys Asp Glu Ala Lys Ala Ser Thr His Thr Ala
405 410 415
Ile Ser Ser Leu Pro Phe Met Gln Gly Asn Pro Ala Ala Leu Thr Arg
420 425 430
Ser Val Thr Phe Gln Glu Gly Ser
435 440
<210> 32
<211> 1080
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1080)
<223> 基因标识符: LOC_Os07g32510
<400> 32
atggctggag cggggggtgc ggctacggct gcagcgggag gaggaggtgg gggaggggtg 60
gcggcgggga ggagtggagg tggtggtggt ggtggcgcgg cggcggcggc gggggcgggg 120
gcgccggacc cgagggcgga ggcgctgcgg tgcccgcggt gcgactcggc gaacaccaag 180
ttctgctact acaacaacta ctcgctgtcg cagccgcggc acttctgcaa ggcgtgcaag 240
cgctactgga cgcgcggcgg cacgctgcgg aacgtccccg tcggcggcgg gtgccggaag 300
aacaagcggt cgaggagcgg cggcgcggcg cctggtggcg gcgtggggag gggcgggcct 360
ggaggcgggg cggcggcggc cgtctcgtcg gctggcggcg gtgcagctgg gacttcgccc 420
gcgtcgtcgc tggcgctgcc gcagccaggg tcgctgccgt cgctgtcgtc ggcgctgggg 480
ctcaccgggg gaacctcgct ggcgtcgctg ctgctcggga gcggcggctc cgggggtgac 540
cacctcgggc tcttccaggc catgcagtcg gtggtgtccg acgcggccgc gttcgagatg 600
caccagcagc atcagtcgca ggtggatcac ctgctcggcc tcggctacgg cgccgcgggg 660
gcgcagatcc aggcggccaa gccgtggctg catgacggcg gcgccaccgg tggcctcctc 720
gacggcttct acgcgccgct cctgtccggc tccatcgtgc cggggctcga ggagctccaa 780
gtcaaggcgg aggccaccac cggcgaccac cagcagaagt catcggcggc ggcggccggt 840
gagcagagct gggacctgcc gacgccgtcg tcgtccaacg tcgaggcgag catcatcgcg 900
tcggacgcgc tcatggccgc cgcggccgcg tcgatgaacc cggcggtcag cgccgccgcc 960
gcctccacgg cgccgtccgc gcagtcgctc ctctactggg gcaacggcgg cattggcgcc 1020
gccgccgcgg catggccgga cctcgccaac tgcggatcct ccatagcgac gctcttctag 1080
<210> 33
<211> 359
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(359)
<223> 基因标识符: LOC_Os07g32510
<400> 33
Met Ala Gly Ala Gly Gly Ala Ala Thr Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Val Ala Ala Gly Arg Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Pro Asp Pro Arg Ala Glu Ala
35 40 45
Leu Arg Cys Pro Arg Cys Asp Ser Ala Asn Thr Lys Phe Cys Tyr Tyr
50 55 60
Asn Asn Tyr Ser Leu Ser Gln Pro Arg His Phe Cys Lys Ala Cys Lys
65 70 75 80
Arg Tyr Trp Thr Arg Gly Gly Thr Leu Arg Asn Val Pro Val Gly Gly
85 90 95
Gly Cys Arg Lys Asn Lys Arg Ser Arg Ser Gly Gly Ala Ala Pro Gly
100 105 110
Gly Gly Val Gly Arg Gly Gly Pro Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Val
115 120 125
Ser Ser Ala Gly Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Pro Ala Ser Ser Leu
130 135 140
Ala Leu Pro Gln Pro Gly Ser Leu Pro Ser Leu Ser Ser Ala Leu Gly
145 150 155 160
Leu Thr Gly Gly Thr Ser Leu Ala Ser Leu Leu Leu Gly Ser Gly Gly
165 170 175
Ser Gly Gly Asp His Leu Gly Leu Phe Gln Ala Met Gln Ser Val Val
180 185 190
Ser Asp Ala Ala Ala Phe Glu Met His Gln Gln His Gln Ser Gln Val
195 200 205
Asp His Leu Leu Gly Leu Gly Tyr Gly Ala Ala Gly Ala Gln Ile Gln
210 215 220
Ala Ala Lys Pro Trp Leu His Asp Gly Gly Ala Thr Gly Gly Leu Leu
225 230 235 240
Asp Gly Phe Tyr Ala Pro Leu Leu Ser Gly Ser Ile Val Pro Gly Leu
245 250 255
Glu Glu Leu Gln Val Lys Ala Glu Ala Thr Thr Gly Asp His Gln Gln
260 265 270
Lys Ser Ser Ala Ala Ala Ala Gly Glu Gln Ser Trp Asp Leu Pro Thr
275 280 285
Pro Ser Ser Ser Asn Val Glu Ala Ser Ile Ile Ala Ser Asp Ala Leu
290 295 300
Met Ala Ala Ala Ala Ala Ser Met Asn Pro Ala Val Ser Ala Ala Ala
305 310 315 320
Ala Ser Thr Ala Pro Ser Ala Gln Ser Leu Leu Tyr Trp Gly Asn Gly
325 330 335
Gly Ile Gly Ala Ala Ala Ala Ala Trp Pro Asp Leu Ala Asn Cys Gly
340 345 350
Ser Ser Ile Ala Thr Leu Phe
355
<210> 34
<211> 738
<212> DNA
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(738)
<223> 基因标识符: LOC_Os03g51110
<400> 34
atgtgcacca ggggccactg gaggccgtcg gaggacgaga agctgaagga gctcgtcgcg 60
cggtacgggc cgcataactg gaacgccata gccgagaagc tccaagggcg atcaggcaaa 120
agctgcaggc ttaggtggtt caaccagctc gacccaagaa tcaaccggag ccccttcacc 180
gaggaggagg aggagctcct cctcgcgtcg caccgcgccc acggcaaccg gtgggcggtg 240
atcgcgaggc tcttcccggg ccgcacggac aacgccgtca agaaccactg gcatgtgatc 300
atggcgcggc ggtgcaggga gcggatgcgg ctgtcgaatc gccggggcgg cgccgccgcc 360
gccggtgctg cgaaaggcga cgagagccca gctaggatta gcaacggcga gaagacggcg 420
acgaggcctc ctgccacgaa tggcagcggc atggccatgg cctccttgct cgacaagtac 480
cgaagagaat gcggcgccgc tggcctgttt gcaattggca gacaccataa cagcaaggag 540
gattattgtt catctactaa tgaagatacg agtaaatcgg tggagtttta cgacttcctc 600
caggtgaatg cgagctcgag cgacaccaag tgcggctcga gcattgagga gcaagaggat 660
aaccgggatg atgatcaagc tgaagggcag gtgcagctca tagatttcat ggaggttggg 720
actacttctc gtcaatga 738
<210> 35
<211> 245
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(245)
<223> 基因标识符: LOC_Os03g51110
<400> 35
Met Cys Thr Arg Gly His Trp Arg Pro Ser Glu Asp Glu Lys Leu Lys
1 5 10 15
Glu Leu Val Ala Arg Tyr Gly Pro His Asn Trp Asn Ala Ile Ala Glu
20 25 30
Lys Leu Gln Gly Arg Ser Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Phe Asn
35 40 45
Gln Leu Asp Pro Arg Ile Asn Arg Ser Pro Phe Thr Glu Glu Glu Glu
50 55 60
Glu Leu Leu Leu Ala Ser His Arg Ala His Gly Asn Arg Trp Ala Val
65 70 75 80
Ile Ala Arg Leu Phe Pro Gly Arg Thr Asp Asn Ala Val Lys Asn His
85 90 95
Trp His Val Ile Met Ala Arg Arg Cys Arg Glu Arg Met Arg Leu Ser
100 105 110
Asn Arg Arg Gly Gly Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Lys Gly Asp Glu
115 120 125
Ser Pro Ala Arg Ile Ser Asn Gly Glu Lys Thr Ala Thr Arg Pro Pro
130 135 140
Ala Thr Asn Gly Ser Gly Met Ala Met Ala Ser Leu Leu Asp Lys Tyr
145 150 155 160
Arg Arg Glu Cys Gly Ala Ala Gly Leu Phe Ala Ile Gly Arg His His
165 170 175
Asn Ser Lys Glu Asp Tyr Cys Ser Ser Thr Asn Glu Asp Thr Ser Lys
180 185 190
Ser Val Glu Phe Tyr Asp Phe Leu Gln Val Asn Ala Ser Ser Ser Asp
195 200 205
Thr Lys Cys Gly Ser Ser Ile Glu Glu Gln Glu Asp Asn Arg Asp Asp
210 215 220
Asp Gln Ala Glu Gly Gln Val Gln Leu Ile Asp Phe Met Glu Val Gly
225 230 235 240
Thr Thr Ser Arg Gln
245
<210> 36
<211> 264
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(264)
<223> 基因标识符: Bradi2g16120
<400> 36
atgtcttctg ggtcatctcg cagctcctcc ccaggctcaa actcggcatg gagcaagaag 60
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gaggaccttt acgatgacgt gaagttgatc gagtccgggc gggtgccatt tcccaagtac 240
aggacgcagg ggttctggac ctga 264
<210> 37
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<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(87)
<223> 基因标识符: Bradi2g16120
<400> 37
Met Ser Ser Gly Ser Ser Arg Ser Ser Ser Pro Gly Ser Asn Ser Ala
1 5 10 15
Trp Ser Lys Lys Glu Asp Lys Met Phe Glu Asp Ala Leu Ala Tyr Tyr
20 25 30
Gly Val Gly Thr Pro Asn Leu Trp Asp Lys Val Ala Ser Ala Met Gly
35 40 45
Gly Ser Lys Ser Ala Glu Glu Val Arg Cys His Tyr Glu Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Asp Val Lys Leu Ile Glu Ser Gly Arg Val Pro Phe Pro Lys Tyr
65 70 75 80
Arg Thr Gln Gly Phe Trp Thr
85
<210> 38
<211> 636
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(636)
<223> 基因标识符: Bradi4g35950
<400> 38
atgaggacga tctgcgatgt gtgcgagagc gcggtggcgg tgctcttctg cgcggccgac 60
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aattctcctg ctttcttcta ctgtgatata gatggtacat cactttgcct gagttgtgat 240
atggctgttc atgttggtgg gaaacgaacc catggaagat atttgctgct aagacaaagg 300
gtcgaatttc caggagataa accagggaat atggatgacg tacctatgca gcagatagaa 360
tctgaaaacc agagggacca aaataaggct cctcattcag taccgaagga gcaaatggtg 420
agccatcatc atgcctatga taatcatgcc tcagatggca attgcaatgg gcagggtaac 480
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agttcacaga ctcaggcagt tgatcatagt gccaacaacc atgactcttc aggagtggtg 600
ccaacatgca atttggaacg agacaccaac aaataa 636
<210> 39
<211> 211
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(211)
<223> 基因标识符: Bradi4g35950
<400> 39
Met Arg Thr Ile Cys Asp Val Cys Glu Ser Ala Val Ala Val Leu Phe
1 5 10 15
Cys Ala Ala Asp Glu Ala Ala Leu Cys Arg Ser Cys Asp Glu Lys Val
20 25 30
His Leu Cys Asn Lys Leu Ala Ser Arg His Val Arg Val Gly Leu Ala
35 40 45
Asp Pro Asn Lys Leu Val Arg Cys Asp Ile Cys Glu Asn Ser Pro Ala
50 55 60
Phe Phe Tyr Cys Asp Ile Asp Gly Thr Ser Leu Cys Leu Ser Cys Asp
65 70 75 80
Met Ala Val His Val Gly Gly Lys Arg Thr His Gly Arg Tyr Leu Leu
85 90 95
Leu Arg Gln Arg Val Glu Phe Pro Gly Asp Lys Pro Gly Asn Met Asp
100 105 110
Asp Val Pro Met Gln Gln Ile Glu Ser Glu Asn Gln Arg Asp Gln Asn
115 120 125
Lys Ala Pro His Ser Val Pro Lys Glu Gln Met Val Ser His His His
130 135 140
Ala Tyr Asp Asn His Ala Ser Asp Gly Asn Cys Asn Gly Gln Gly Asn
145 150 155 160
Ile Asp Ser Lys Met Phe Asp Leu Asn Met Arg Pro Ala Arg Asn His
165 170 175
Gly Gln Gly Ser Ser Ser Gln Thr Gln Ala Val Asp His Ser Ala Asn
180 185 190
Asn His Asp Ser Ser Gly Val Val Pro Thr Cys Asn Leu Glu Arg Asp
195 200 205
Thr Asn Lys
210
<210> 40
<211> 264
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(264)
<223> 基因标识符: Bradi2g16120
<400> 40
atgtcttctg ggtcatctcg cagctcctcc ccaggctcaa actcggcatg gagcaagaag 60
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<210> 41
<211> 87
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(87)
<223> 基因标识符: Bradi2g16120
<400> 41
Met Ser Ser Gly Ser Ser Arg Ser Ser Ser Pro Gly Ser Asn Ser Ala
1 5 10 15
Trp Ser Lys Lys Glu Asp Lys Met Phe Glu Asp Ala Leu Ala Tyr Tyr
20 25 30
Gly Val Gly Thr Pro Asn Leu Trp Asp Lys Val Ala Ser Ala Met Gly
35 40 45
Gly Ser Lys Ser Ala Glu Glu Val Arg Cys His Tyr Glu Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Asp Val Lys Leu Ile Glu Ser Gly Arg Val Pro Phe Pro Lys Tyr
65 70 75 80
Arg Thr Gln Gly Phe Trp Thr
85
<210> 42
<211> 291
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(291)
<223> 基因标识符: Bradi2g44520
<400> 42
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<210> 43
<211> 96
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(96)
<223> 基因标识符: Bradi2g44520
<400> 43
Met Ala Ser Met Ser Met Asn Ser Ser Met Pro Gln Trp Thr Ala Lys
1 5 10 15
Gln Asn Lys Gln Phe Glu Gln Ala Leu Ala Val Tyr Asp Lys Glu Thr
20 25 30
Pro Asp Arg Trp His Asn Ile Ala Arg Ser Val Gly Gly Lys Thr Ala
35 40 45
Asp Glu Val Lys Arg Tyr Tyr Glu Leu Leu Val Arg Asp Val Lys His
50 55 60
Ile Glu Ala Gly Lys Val Pro Phe Pro Ala Tyr Arg Cys Pro Pro Ala
65 70 75 80
Gly Ala Met Ala Asp Tyr Glu Ala Asp Arg Leu Arg His Leu Lys Ile
85 90 95
<210> 44
<211> 1338
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1338)
<223> 基因标识符: Bradi1g13980
<400> 44
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aacggccatg tggtcatgca gagccagact caccggaagc tgccgccgag gcccgaaaag 120
gcggcggcgg cggcggcggt gatgcaagaa gacgaggccg ggctgtggtt ccctttctcg 180
cacgccgact cgctcgacaa ggacatcttc tcggacctct tctgcgaagc cgtgcctcag 240
gcagtgggga tcaagccgga ctgctacgga gacggcaacg gcagcaagtc gtccgacgcg 300
ccgagcgagc tgatgccgcc gcccaagtcg accatggcgg acggcggcga gctgtcggac 360
ctcgtgcagg cccggtccac ggggaaggcg gcggcggcgg ccatggagca ggagggcgcg 420
tcggcgtcgt cgttctgcgg gagcagcaac caggtgcagg tgcagcacgc cggccgcgtg 480
cagtccgcgg gcaccgctgc ctacggcagc agcgcccggc tgcagtcggc ggtgggcagc 540
gggattaatg caaacggcag aggccgtgag gccacggtgg cgtcgtcgtc ggggcgctcc 600
aacggctgct tcacgaacac gacgacgacg tccacggagc cgacgagcgc gagcctccgg 660
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gaggacgcgg agtcggagtc cttggcgctc atcgagcgca agcctccgct gaagctcccc 780
acggccagga ggagccgcgc agccgaggtg cacaacctct ccgagcggag gagacgagac 840
aggatcaacg agaagatgaa ggccttgcaa gaactcatac ctcactgcaa caagacggac 900
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cagagcctgc cggaccacta cgcgcacttc ctcggcgtca accaccacct gcagccgccg 1140
tcccaccacc atcagcatta tgcggcgcag gggatgggat actacccgtt gggggccaag 1200
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acgcctgccc ctgctgccgc cgccgccgct accaacagta acacgccggg aaacgggatg 1320
catccaaaca gaatatga 1338
<210> 45
<211> 445
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(445)
<223> 基因标识符: Bradi1g13980
<400> 45
Met Gly Asp Ala Ser Arg Pro Leu Gly Val Asp Asp Asp Leu Met Glu
1 5 10 15
Leu Leu Trp Cys Asn Gly His Val Val Met Gln Ser Gln Thr His Arg
20 25 30
Lys Leu Pro Pro Arg Pro Glu Lys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Met
35 40 45
Gln Glu Asp Glu Ala Gly Leu Trp Phe Pro Phe Ser His Ala Asp Ser
50 55 60
Leu Asp Lys Asp Ile Phe Ser Asp Leu Phe Cys Glu Ala Val Pro Gln
65 70 75 80
Ala Val Gly Ile Lys Pro Asp Cys Tyr Gly Asp Gly Asn Gly Ser Lys
85 90 95
Ser Ser Asp Ala Pro Ser Glu Leu Met Pro Pro Pro Lys Ser Thr Met
100 105 110
Ala Asp Gly Gly Glu Leu Ser Asp Leu Val Gln Ala Arg Ser Thr Gly
115 120 125
Lys Ala Ala Ala Ala Ala Met Glu Gln Glu Gly Ala Ser Ala Ser Ser
130 135 140
Phe Cys Gly Ser Ser Asn Gln Val Gln Val Gln His Ala Gly Arg Val
145 150 155 160
Gln Ser Ala Gly Thr Ala Ala Tyr Gly Ser Ser Ala Arg Leu Gln Ser
165 170 175
Ala Val Gly Ser Gly Ile Asn Ala Asn Gly Arg Gly Arg Glu Ala Thr
180 185 190
Val Ala Ser Ser Ser Gly Arg Ser Asn Gly Cys Phe Thr Asn Thr Thr
195 200 205
Thr Thr Ser Thr Glu Pro Thr Ser Ala Ser Leu Arg Ser Ser Ser Lys
210 215 220
Arg Lys Arg Leu Asp Ser Arg Thr Glu Asp Tyr Ser Glu Ser Pro Ser
225 230 235 240
Glu Asp Ala Glu Ser Glu Ser Leu Ala Leu Ile Glu Arg Lys Pro Pro
245 250 255
Leu Lys Leu Pro Thr Ala Arg Arg Ser Arg Ala Ala Glu Val His Asn
260 265 270
Leu Ser Glu Arg Arg Arg Arg Asp Arg Ile Asn Glu Lys Met Lys Ala
275 280 285
Leu Gln Glu Leu Ile Pro His Cys Asn Lys Thr Asp Lys Ala Ser Met
290 295 300
Leu Asp Glu Ala Ile Glu Tyr Leu Lys Thr Leu Gln Met Gln Val Gln
305 310 315 320
Met Met Trp Met Gly Ser Gly Met Ala Pro Pro Ala Val Met Phe Pro
325 330 335
Gly Met His Gln Tyr Leu Pro Arg Arg Met Pro Ser Phe Met Ala Pro
340 345 350
Pro Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Ser Leu Pro Asp His Tyr Ala
355 360 365
His Phe Leu Gly Val Asn His His Leu Gln Pro Pro Ser His His His
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Ala Val Gln Gln Ser Pro Ala Leu Pro Ile His His Val His Ser Thr
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<210> 46
<211> 1305
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1305)
<223> 基因标识符: Bradi1g73710
<400> 46
atggggcagt gcagagcggc ggcaggagga ggagactgcc tgttcaagct gttcgggaag 60
accatccctg tgccggcgga ctcctccgga agcgtcgtcg ataaggacca acagcacagt 120
ggcagcagca cggctgaacc aaaagtacag gaaaatatcc ctggggactc cacaggttca 180
cctacactgc cagaggtcgt ggacaccgac gactcgtgtg ctgtcaagaa gtcatcagcg 240
gatcaagaag aagaacagag tgacacggcc aaccagaagg agaagctgaa gaagcctgac 300
aagatcctgc cctgtcctcg gtgtaacagc atggacacca agttctgcta ctacaacaac 360
tacaacatca accagccacg ccacttctgc aagaaatgtc agaggtactg gacggctggt 420
ggtgccatgc gcaatgtccc cgtgggtgca ggccgccgaa agagcaagag tatatcagct 480
gcttcccact tccttcagag gatcagggcc accctgcccg gtgatcctct ctgcacccca 540
attaagacca acgccacggt tctcagcttt ggctccgaca catccacctt agatctcaca 600
gaacaaatga agcacctaaa ggacaagctc attccagtaa cccagatcaa gaacaccgat 660
gacccatcag tagggtcttg tgctgaagga tgggcaaaag gagaagagca gaaccaaatg 720
aactcaaggg aggaagttac agcagataaa tccacaaatg ttgcgcagca tccatgcatg 780
aacgggggaa ccatgtggcc attcagctgc gcaccttcac ctgcctattt cacctcaagt 840
gtagcaattc cgttctatcc agctgctgct gctgctgctt attggggcta catggttcct 900
ggagcttgga acactccatg gccaccgcag tctcaatctc aatctagctc atcacctaat 960
gctgcttctc cagtatccac aatgtccagt tgcttccaat cacgaaagca ccctagagat 1020
ggtgatgagg aaagagatac caataggaat ggcaaggtgt gggtgccaaa gacgatccgg 1080
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<210> 47
<211> 434
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(434)
<223> 基因标识符: Bradi1g73710
<400> 47
Met Gly Gln Cys Arg Ala Ala Ala Gly Gly Gly Asp Cys Leu Phe Lys
1 5 10 15
Leu Phe Gly Lys Thr Ile Pro Val Pro Ala Asp Ser Ser Gly Ser Val
20 25 30
Val Asp Lys Asp Gln Gln His Ser Gly Ser Ser Thr Ala Glu Pro Lys
35 40 45
Val Gln Glu Asn Ile Pro Gly Asp Ser Thr Gly Ser Pro Thr Leu Pro
50 55 60
Glu Val Val Asp Thr Asp Asp Ser Cys Ala Val Lys Lys Ser Ser Ala
65 70 75 80
Asp Gln Glu Glu Glu Gln Ser Asp Thr Ala Asn Gln Lys Glu Lys Leu
85 90 95
Lys Lys Pro Asp Lys Ile Leu Pro Cys Pro Arg Cys Asn Ser Met Asp
100 105 110
Thr Lys Phe Cys Tyr Tyr Asn Asn Tyr Asn Ile Asn Gln Pro Arg His
115 120 125
Phe Cys Lys Lys Cys Gln Arg Tyr Trp Thr Ala Gly Gly Ala Met Arg
130 135 140
Asn Val Pro Val Gly Ala Gly Arg Arg Lys Ser Lys Ser Ile Ser Ala
145 150 155 160
Ala Ser His Phe Leu Gln Arg Ile Arg Ala Thr Leu Pro Gly Asp Pro
165 170 175
Leu Cys Thr Pro Ile Lys Thr Asn Ala Thr Val Leu Ser Phe Gly Ser
180 185 190
Asp Thr Ser Thr Leu Asp Leu Thr Glu Gln Met Lys His Leu Lys Asp
195 200 205
Lys Leu Ile Pro Val Thr Gln Ile Lys Asn Thr Asp Asp Pro Ser Val
210 215 220
Gly Ser Cys Ala Glu Gly Trp Ala Lys Gly Glu Glu Gln Asn Gln Met
225 230 235 240
Asn Ser Arg Glu Glu Val Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn Val Ala Gln
245 250 255
His Pro Cys Met Asn Gly Gly Thr Met Trp Pro Phe Ser Cys Ala Pro
260 265 270
Ser Pro Ala Tyr Phe Thr Ser Ser Val Ala Ile Pro Phe Tyr Pro Ala
275 280 285
Ala Ala Ala Ala Ala Tyr Trp Gly Tyr Met Val Pro Gly Ala Trp Asn
290 295 300
Thr Pro Trp Pro Pro Gln Ser Gln Ser Gln Ser Ser Ser Ser Pro Asn
305 310 315 320
Ala Ala Ser Pro Val Ser Thr Met Ser Ser Cys Phe Gln Ser Arg Lys
325 330 335
His Pro Arg Asp Gly Asp Glu Glu Arg Asp Thr Asn Arg Asn Gly Lys
340 345 350
Val Trp Val Pro Lys Thr Ile Arg Ile Asp Asp Ala Asp Glu Val Ala
355 360 365
Arg Ser Ser Ile Trp Ser Leu Ile Gly Ile Asn Gly Asp Lys Val Gly
370 375 380
Thr Asp Asp Gly Arg Gly Cys Lys Ile Thr Arg Val Phe Tyr Pro Lys
385 390 395 400
Asp Glu Ala Lys Thr Thr Thr His Arg Val Asn Asn Ser Leu Pro Phe
405 410 415
Leu Lys Gly Asn Pro Ala Ala Leu Ser Arg Ser Val Thr Phe Gln Glu
420 425 430
Arg Ser
<210> 48
<211> 1071
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1071)
<223> 基因标识符: Bradi1g26570
<400> 48
atggccgccg gtgcgggggg tgcggcagcg gccgcggcgg cggtgcaaca cgccggaccg 60
gcggggaggg ttggcggagg cggatcttcg tcggcgggag gaggagcggc ggcgccggac 120
ccgcgggcgg aggcgctgcg gtgcccgcgg tgcgactcgg caaacaccaa gttctgctac 180
tacaacaact actccctctc gcagccgcgg cacttctgca aggcgtgcaa gcgctactgg 240
acacgcgggg gcaccctccg caacgtcccc gtcggcggcg gctgccgcaa gaacaaacgc 300
tccaggagtt ccagcggggg cggcggcagg gtcgtctcgt caagctctgc cgccgctgcc 360
gctgctggtg gcggcacggc ttcgtcctcg ctgccgctac cgccgcacgg gtcggcgtct 420
tcggcgctgc aggggctcca ccacgggagc agctcgctcg cgtcgctgct gctcgggacc 480
ggcgggggag gcgaccacct cgggctgttc catcaggcca tgcagtccgt ggtctccgac 540
aacgccgccg cctacgagat gcacaaccag cagcagcagc atcaggcgca ggtggatcag 600
ctgctggggc tcggctacgg gtcgcactcg cagatccaaa tgaataagcc gtggctcggc 660
catgacggcg cgggggggct cttcgacggc ttctacgcgc cgctgctgtc gggctgctcc 720
atcgtgccgg ggctggagga gctgcacgtc aaggcggagg ccaccgccgg ggaaaatcac 780
catcagcaca agaaggacgg ggagcagcag cagcagcaga gcggcggcag ctgggagcag 840
cacccgaatt cctcctcctc caacgtggag gcctgcaaca acaacatcat ggcgtctgaa 900
gcgctcatgg ccgccatgaa cccggcggcg gcggtcagca gcaacgcggc cacggcgccg 960
actactgtgt cctcctccca gctcatgtac tggggcaacg gcggcggcgc ccccgcggcg 1020
tggccggaca tcggcgccaa ctgcggatcg tccatcgcca ccttcttcta g 1071
<210> 49
<211> 356
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (1)...(356)
<223> 基因标识符: Bradi1g26570
<400> 49
Met Ala Ala Gly Ala Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Gln
1 5 10 15
His Ala Gly Pro Ala Gly Arg Val Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ala
20 25 30
Gly Gly Gly Ala Ala Ala Pro Asp Pro Arg Ala Glu Ala Leu Arg Cys
35 40 45
Pro Arg Cys Asp Ser Ala Asn Thr Lys Phe Cys Tyr Tyr Asn Asn Tyr
50 55 60
Ser Leu Ser Gln Pro Arg His Phe Cys Lys Ala Cys Lys Arg Tyr Trp
65 70 75 80
Thr Arg Gly Gly Thr Leu Arg Asn Val Pro Val Gly Gly Gly Cys Arg
85 90 95
Lys Asn Lys Arg Ser Arg Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Arg Val Val
100 105 110
Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Ser Ser Leu Pro Leu Pro Pro His Gly Ser Ala Ser Ser Ala Leu Gln
130 135 140
Gly Leu His His Gly Ser Ser Ser Leu Ala Ser Leu Leu Leu Gly Thr
145 150 155 160
Gly Gly Gly Gly Asp His Leu Gly Leu Phe His Gln Ala Met Gln Ser
165 170 175
Val Val Ser Asp Asn Ala Ala Ala Tyr Glu Met His Asn Gln Gln Gln
180 185 190
Gln His Gln Ala Gln Val Asp Gln Leu Leu Gly Leu Gly Tyr Gly Ser
195 200 205
His Ser Gln Ile Gln Met Asn Lys Pro Trp Leu Gly His Asp Gly Ala
210 215 220
Gly Gly Leu Phe Asp Gly Phe Tyr Ala Pro Leu Leu Ser Gly Cys Ser
225 230 235 240
Ile Val Pro Gly Leu Glu Glu Leu His Val Lys Ala Glu Ala Thr Ala
245 250 255
Gly Glu Asn His His Gln His Lys Lys Asp Gly Glu Gln Gln Gln Gln
260 265 270
Gln Ser Gly Gly Ser Trp Glu Gln His Pro Asn Ser Ser Ser Ser Asn
275 280 285
Val Glu Ala Cys Asn Asn Asn Ile Met Ala Ser Glu Ala Leu Met Ala
290 295 300
Ala Met Asn Pro Ala Ala Ala Val Ser Ser Asn Ala Ala Thr Ala Pro
305 310 315 320
Thr Thr Val Ser Ser Ser Gln Leu Met Tyr Trp Gly Asn Gly Gly Gly
325 330 335
Ala Pro Ala Ala Trp Pro Asp Ile Gly Ala Asn Cys Gly Ser Ser Ile
340 345 350
Ala Thr Phe Phe
355
<210> 50
<211> 714
<212> DNA
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(714)
<223> 基因标识符: Bradi1g10470
<400> 50
atgtgcacaa ggggtcactg gaggccgtca gaggacgaga agctcaagga gctcgtcgtg 60
cgatacgggc cgcacaactg gaacgccatc gccgagaagc tccagggccg atcagggaag 120
agctgcaggc tgaggtggtt caaccagctg gacccccgga tcaaccggag ccccttctcg 180
gaggaagagg aggagctgct cctggcctcg caccgcgtcc acggcaaccg gtgggccgtc 240
atcgccaggc tcttcccggg ccgcaccgac aacgccgtca agaaccactg gcatgtgatc 300
atggcgcgcc gctgcaggga gcggatgagg atatcctcca gcaagcgggc aggtcccggt 360
aaagacgaga tcagcccaag gaaccacgac gccgctgccg gcgagaagcc gagacccgca 420
gccgacgcga gtcgcatggc cgccttgctt gacaagtaca gaagggaatt tgctgggccc 480
tttgcgatca gccatcacag cagcaaggag ggttactgct cgtctacgaa tgaagatacg 540
aatagatcgg tggagttcta cgatttcctc caggtgaacg tgagctcgag cgacaccaag 600
tgcagctcga gcatcgagga gcaggaagac aacggccgag acgacgacga tcaacaagcg 660
gaagggcaag tggcgctcat agatttcatg gaggttggga cttctcatca gtga 714
<210> 51
<211> 237
<212> PRT
<213> 二穗短柄草（Brachypodium distachyon）
<220>
<221> 结构域
<222> (10)...(237)
<223> 基因标识符: Bradi1g10470
<400> 51
Met Cys Thr Arg Gly His Trp Arg Pro Ser Glu Asp Glu Lys Leu Lys
1 5 10 15
Glu Leu Val Val Arg Tyr Gly Pro His Asn Trp Asn Ala Ile Ala Glu
20 25 30
Lys Leu Gln Gly Arg Ser Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Phe Asn
35 40 45
Gln Leu Asp Pro Arg Ile Asn Arg Ser Pro Phe Ser Glu Glu Glu Glu
50 55 60
Glu Leu Leu Leu Ala Ser His Arg Val His Gly Asn Arg Trp Ala Val
65 70 75 80
Ile Ala Arg Leu Phe Pro Gly Arg Thr Asp Asn Ala Val Lys Asn His
85 90 95
Trp His Val Ile Met Ala Arg Arg Cys Arg Glu Arg Met Arg Ile Ser
100 105 110
Ser Ser Lys Arg Ala Gly Pro Gly Lys Asp Glu Ile Ser Pro Arg Asn
115 120 125
His Asp Ala Ala Ala Gly Glu Lys Pro Arg Pro Ala Ala Asp Ala Ser
130 135 140
Arg Met Ala Ala Leu Leu Asp Lys Tyr Arg Arg Glu Phe Ala Gly Pro
145 150 155 160
Phe Ala Ile Ser His His Ser Ser Lys Glu Gly Tyr Cys Ser Ser Thr
165 170 175
Asn Glu Asp Thr Asn Arg Ser Val Glu Phe Tyr Asp Phe Leu Gln Val
180 185 190
Asn Val Ser Ser Ser Asp Thr Lys Cys Ser Ser Ser Ile Glu Glu Gln
195 200 205
Glu Asp Asn Gly Arg Asp Asp Asp Asp Gln Gln Ala Glu Gly Gln Val
210 215 220
Ala Leu Ile Asp Phe Met Glu Val Gly Thr Ser His Gln
225 230 235
<210> 52
<211> 1992
<212> DNA
<213> 玉米（Zea mays）
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(1992)
<223> 基因标识符: 泛素启动子和5'UTR
<400> 52
ctgcagtgca gcgtgacccg gtcgtgcccc tctctagaga taatgagcat tgcatgtcta 60
agttataaaa aattaccaca tatttttttt gtcacacttg tttgaagtgc agtttatcta 120
tctttataca tatatttaaa ctttactcta cgaataatat aatctatact actacaataa 180
tatcagtgtt ttagagaatc atataaatga acagttagac atggtctaaa ggacaattga 240
gtattttgac aacaggactc tacagtttta tctttttagt gtgcatgtgt tctccttttt 300
ttttgcaaat agcttcacct atataatact tcatccattt tattagtaca tccatttagg 360
gtttagggtt aatggttttt atagactaat ttttttagta catctatttt attctatttt 420
agcctctaaa ttaagaaaac taaaactcta ttttagtttt tttatttaat aatttagata 480
taaaatagaa taaaataaag tgactaaaaa ttaaacaaat accctttaag aaattaaaaa 540
aactaaggaa acatttttct tgtttcgagt agataatgcc agcctgttaa acgccgtcga 600
cgagtctaac ggacaccaac cagcgaacca gcagcgtcgc gtcgggccaa gcgaagcaga 660
cggcacggca tctctgtcgc tgcctctgga cccctctcga gagttccgct ccaccgttgg 720
acttgctccg ctgtcggcat ccagaaattg cgtggcggag cggcagacgt gagccggcac 780
ggcaggcggc ctcctcctcc tctcacggca cggcagctac gggggattcc tttcccaccg 840
ctccttcgct ttcccttcct cgcccgccgt aataaataga caccccctcc acaccctctt 900
tccccaacct cgtgttgttc ggagcgcaca cacacacaac cagatctccc ccaaatccac 960
ccgtcggcac ctccgcttca aggtacgccg ctcgtcctcc cccccccccc ctctctacct 1020
tctctagatc ggcgttccgg tccatggtta gggcccggta gttctacttc tgttcatgtt 1080
tgtgttagat ccgtgtttgt gttagatccg tgctgctagc gttcgtacac ggatgcgacc 1140
tgtacgtcag acacgttctg attgctaact tgccagtgtt tctctttggg gaatcctggg 1200
atggctctag ccgttccgca gacgggatcg atttcatgat tttttttgtt tcgttgcata 1260
gggtttggtt tgcccttttc ctttatttca atatatgccg tgcacttgtt tgtcgggtca 1320
tcttttcatg cttttttttg tcttggttgt gatgatgtgg tctggttggg cggtcgttct 1380
agatcggagt agaattctgt ttcaaactac ctggtggatt tattaatttt ggatctgtat 1440
gtgtgtgcca tacatattca tagttacgaa ttgaagatga tggatggaaa tatcgatcta 1500
ggataggtat acatgttgat gcgggtttta ctgatgcata tacagagatg ctttttgttc 1560
gcttggttgt gatgatgtgg tgtggttggg cggtcgttca ttcgttctag atcggagtag 1620
aatactgttt caaactacct ggtgtattta ttaattttgg aactgtatgt gtgtgtcata 1680
catcttcata gttacgagtt taagatggat ggaaatatcg atctaggata ggtatacatg 1740
ttgatgtggg ttttactgat gcatatacat gatggcatat gcagcatcta ttcatatgct 1800
ctaaccttga gtacctatct attataataa acaagtatgt tttataatta ttttgatctt 1860
gatatacttg gatgatggca tatgcagcag ctatatgtgg atttttttag ccctgccttc 1920
atacgctatt tatttgcttg gtactgtttc ttttgtcgat gctcaccctg ttgtttggtg 1980
ttacttctgc ag 1992
Claims (4)
1.一种通过上调编码转录因子多肽的至少一种核苷酸序列的表达来相对于对照植物改善感兴趣植物中的植物生长的方法，所述上调通过稳定插入至少一种表达构建体来实现，所述表达构建体包含在植物细胞中可操作的启动子，所述启动子可操作地连接至所述编码转录因子多肽的核苷酸序列，其中所述转录因子多肽由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成，并且其中所述在植物细胞中可操作的启动子由选自SEQ ID NO：17-19的序列组成。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述感兴趣植物是单子叶植物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述感兴趣植物是双子叶植物。
4.一种包含启动子的表达构建体，所述启动子驱动植物中的表达，其可操作地连接至编码转录因子多肽的核苷酸序列，所述转录因子多肽由SEQ ID NO：2所示的序列组成，其中所述启动子由选自SEQ ID NO：17-19的序列组成。
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