CN106581027B - 一种化合物及其药物用途、组合物与制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及化合物comanthoside B及其在抗肝纤维化药物中的用途、药物组合物与制剂。本发明化合物comanthoside B具有式I所示结构。体外实验表明，comanthoside B对NIH 3T3成纤维细胞的增殖有显著的抑制作用；体内实验表明，comanthoside B能显著降低肝纤维化大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT、AST、PC‑Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp、TIMP‑1的含量水平，对大鼠肝纤维化具有良好的治疗效果。与现有技术相比，本发明药物具有高效、低毒、安全的特点，能更好地满足临床用药的需要，具有良好的市场前景。

Description

一种化合物及其药物用途、组合物与制剂

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种化合物及其药物用途、组合物与制剂。

背景技术

肝纤维化(Hepatic fibrosis,HF)是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，是一种由各种致病原所引起的可逆性创伤修复反应,其主要特征是细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)的异常沉积，具体表现为ECM大量合成、分泌，而降解绝对或相对不足，使ECM在肝脏内弥漫沉积。

防治肝纤维化的关键，是针对与肝星状细胞(FSC)激活相关的环节采取相应的技术措施，如：减轻肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因子紊乱，促进活化肝星状细胞凋亡等。近年来，防治肝纤维化的研究取得了长足进展，证实肝纤维化是可逆的，陆续出现了一些抗肝纤维化的方法和药物，如化学药、中药、天然药物、生物药与基因药物等，其中，尤以天然药物体现出极大优势，在肝纤维化治疗方面展示了广阔的应用前景。近年来，国内外报道的具有抗肝纤维化的天然药物主要包括如下几类：⑴生物碱类，如黄连素、氧化苦参碱、苦参碱、白屈菜红碱、汉防己甲素、甜菜碱等；②黄酮类，如豹皮樟总黄酮、鬼针草总黄酮、穿破石总黄酮、灯盏花素、黄芩苷、黄芩素、槲皮素等；③酚酸类，如水芹总酚酸、姜黄素、白藜芦醇、水飞蓟素、丹酚酸等；④其它类，如五味子醇甲、川芎嗪、水蛭素、熊果酸等(参考文献：高鹏飞，等.国内外应用天然药物的有效部位、单体防治肝纤维化的研究进展〔J〕.大理学院学报,2012,11(6):5-11)。从天然单体化合物中筛选、寻找具有低毒、高效、安全的抗肝纤维化药物，已经成为国内外新药研发的热点课题。

化合物comanthoside B是一种新的葡糖醛酸酯苷类化合物，结构如下式Ⅰ所示：

comanthoside B最早由Arisawa M等人从唇形科植物无人草(ComanthosphacejaponiCB S.MOORE)的叶子中分离得到(Arisawa M,Fukuta M,Shimizu M,Morita N.Theconstituents of the leaves of Comanthosphace japoniCB S.Moore(Labiatae):isolation of two new flavones glycosides,comanthoside Bs A and B.Chem PharmBull,1979,27(5):1252–1254)。此后，也有科学家从唇形科植物地笋Lycopus lucidusTurcz.的地上部分提取、分离得到了该化合物(Toshihiro MURATA,Mai WATAHIKI,YuTANAKA,Toshio MIYASE,Fumihiko YOSHIZAKI.Hyaluronidase Inhibitors fromTakuran,Lycopus lucidus.Chem.Pharm.Bull.2010,58(3)394-397)。但是，关于comanthoside B的药理活性及药物用途方面的研究报道很少。迄今为止，现有技术中未见有comanthoside B用于抗肝纤维化的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了comanthoside B在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了结构如式I所示化合物在制备抑制TGF信号通路的药物和/或制剂中的应用

本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备抑制成纤维细胞增殖的药物和/或制剂中的应用

本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备降低TBIL、DBIL、ALT和/或AST水平的药物和/或制剂中的应用

本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备降低黄疸水平和/或肝损伤程度的药物和/或制剂中的应用。具体的，本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备降低胆总管结扎所致肝纤维化的黄疸水平和/或肝损伤程度的药物和/或制剂中的应用

本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备降低PC-Ⅲ、HA、LN和/或Hyp水平的药物和/或制剂中的应用

本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备降低TIMP-1蛋白表达水平的药物和/或制剂中的应用

本发明还提供了结构如式I所示化合物在制备治疗肝纤维化的药物和/或制剂中的应用

在本发明的一些具体实施方案中，所述结构如式I所示化合物的有效剂量为10μg/(1×10³cell)～40μg/(1×10³cell)。

在本发明的另一些具体实施方案中，所述结构如式I所示化合物的有效剂量为0.1～1000mg/kg动物体重或0.01～200mg/kg人体体重。

在本发明的一些具体实施方案中，所述化合物占所述药物和/或制剂中的质量百分含量为1.0％～92.5％。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药物和/或制剂的剂型选自片剂、口服液、贴剂、栓剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、注射剂、粉针剂。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药物和/或制剂为常规制剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药物和/或制剂由所述结构如式I所示化合物和药学上可接受的辅料或助剂制得；所述药学上可接受的辅料或助剂为溶剂、等渗剂、pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、缓释剂、润滑剂或矫味剂中的一种或两者以上的混合物。

本发明进行了化合物comanthoside B对10％小牛血清(FCS)刺激下的NIH 3T3成纤维细胞增殖的抑制作用实验。实验分comanthoside B低浓度组(10μg/mL)、中浓度组(20μg/mL)、高浓度组(40μg/mL)、Sc对照组(40μg/mL)和空白对照组(不含comanthoside B或Sc)进行。实验结果显示，comanthoside B对10％小牛血清(FCS)刺激下的NIH3T3成纤维细胞的增殖有显著的抑制作用，其抑制作用明显强于对照药物灯盏花乙素。

本发明还进行了化合物comanthoside B对转化生长因子TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的抑制作用实验。实验分为comanthoside B低浓度组(TGF10ng/ml+CB 10μg/mL)、中浓度组(TGF10ng/ml+CB 20μg/mL)、高浓度组(TGF10ng/ml+CB 40μg/mL)、Sc对照组(TGF10ng/ml+Sc 40μg/mL)和空白对照组(TGF10ng/ml，不含CB或Sc)共5个组进行。实验结果显示，化合物comanthoside B对TGF-β1诱导下的NIH 3T3成纤维细胞的增殖有显著抑制作用，其抑制作用明显强于对照药物灯盏花乙素。本实验提示，这种抑制作用可能是通过干预TGF信号通路来实现的。

本发明还进行了化合物comanthoside B对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化治疗作用的体内实验。实验结果表明，化合物comanthoside B能显著降低大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT和AST的水平，降低胆总管结扎所致肝纤维化大鼠的黄疸水平及肝损伤程度；能显著降低大鼠血清中PC-Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp的含量水平，对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化具有显著抑制作用；能显著降低大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达水平，显著促进肝脏中细胞外基质的分解。以上实验结果证明，comanthoside B对肝纤维化具有显著的治疗效果。

本发明还进行了化合物comanthoside B的急性毒性和慢性毒性实验。实验结果表明，comanthoside B具有低毒性和高安全性的特点，适宜于作为药物应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示正常组肝组织HE染色结果；

图2示模型组肝组织HE染色结果；

图3示Sc组肝组织HE染色结果；

图4示CB组肝组织HE染色结果。

具体实施方式

本发明公开了一种化合物及其药物用途、组合物与制剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明化合物comanthoside B的结构式如式I所示：

本发明经体外和体内药理试验证明，化合物comanthoside B具有显著的抗肝纤维化作用。

首先，本发明进行了化合物comanthoside B对10％小牛血清(FCS)刺激下的NIH3T3成纤维细胞增殖的抑制作用实验。实验分comanthoside B低浓度组(10μg/mL)、中浓度组(20μg/mL)、高浓度组(40μg/mL)、Sc对照组(40μg/mL)和空白对照组(不含comanthosideB或Sc)进行。实验结果显示，comanthoside B对10％小牛血清(FCS)刺激下的NIH3T3成纤维细胞的增殖有显著的抑制作用，其抑制作用明显强于对照药物灯盏花乙素。

其次，本发明还进行了化合物comanthoside B对转化生长因子TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的抑制作用实验。实验分为comanthoside B低浓度组(TGF10ng/ml+CB 10μg/mL)、中浓度组(TGF10ng/ml+CB 20μg/mL)、高浓度组(TGF10ng/ml+CB 40μg/mL)、Sc对照组(TGF10ng/ml+Sc40μg/mL)和空白对照组(TGF10ng/ml，不含CB或Sc)共5个组进行。实验结果显示，化合物comanthoside B对TGF-β1诱导下的NIH 3T3成纤维细胞的增殖有显著抑制作用，其抑制作用明显强于对照药物灯盏花乙素。本实验提示，这种抑制作用可能是通过干预TGF信号通路来实现的。

另外，本发明还进行了化合物comanthoside B对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化治疗作用的体内实验。实验结果表明，化合物comanthoside B能显著降低大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT和AST的水平，降低胆总管结扎所致肝纤维化大鼠的黄疸水平及肝损伤程度；能显著降低大鼠血清中PC-Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp的含量水平，对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化具有显著抑制作用；能显著降低大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达水平，显著促进肝脏中细胞外基质的分解。以上实验结果证明，comanthoside B对肝纤维化具有显著的治疗效果。

本发明还提供了一种含有comanthoside B的药物组合物，由comanthoside B与药学上可接受的辅料和/或助剂所组成。所述的药学上可接受的辅料或助剂包括药学上可接受的溶剂、等渗剂、pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、缓释剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种组合。

本发明还提供了一种含有comanthoside B的药物制剂，所述制剂由comanthosideB与药学上可接受的辅料和/或助剂所制成，所述制剂的剂型包括片剂、口服液、贴剂、栓剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、注射剂、粉针剂等，可以是常规制剂，也可以是缓释剂、控释剂或靶向制剂等。

本发明所涉及化合物comanthoside B的制备方法参见文献(Arisawa M,FukutaM,Shimizu M,Morita N.The constituents of the leaves of ComanthosphacejaponiCB S.Moore(Labiatae):isolation of two new flavones glycosides,comanthoside Bs A and B.Chem Pharm Bull,1979,27(5):1252–1254))。

本发明提供的化合物及其药物用途、组合物与制剂中所用原料及试剂均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1：本发明化合物comanthoside B对FCS刺激下的NIH 3T3成纤维细胞增殖的抑制作用

1.实验样品与试剂

comanthoside B：以下简称CB，由中国药学科学院药物研究所按照文献方法制备(Arisawa M,Fukuta M,Shimizu M,Morita N.The constituents of the leaves ofComanthosphace japoniCB S.Moore(Labiatae):isolation of two new flavonesglycosides,comanthoside Bs A and B.Chem Pharm Bull,1979,27(5):1252–1254)，经HPLC检测，纯度96.72％；

对照药物灯盏花乙素:简称Sc，昆药集团药物研究院制备，经HPLC检测，纯度98.27％。

DMEM培养基：BR，99％，上海一研生物科技有限公司公司提供；

胰蛋白酶：TPCK-Trypsin，EP001，上海国源生物技术有限公司提供；

台盼兰：AR，北京赛因坦科技有限公司提供；

噻唑蓝(MTT)：BR，上海源叶生物技术有限公司提供。

2.实验细胞株

NIH 3T3小鼠成纤维细胞细胞株：购自中科院上海细胞所细胞库。

3.实验方法

3.1药物分组：分别设立comanthoside B低浓度组(10μg/mL)、中浓度组(20μg/mL)、高浓度组(40μg/mL)、Sc对照组(40μg/mL)和空白对照组(不含comanthoside B或Sc)。用DMEM培养液稀释comanthoside B和Sc至各浓度。

3.2实验方法：将对数生长期的亚融合的NIH 3T3细胞用0.25％胰酶消化，洗涤，离心后，用DMEM培养液(含10％FCS)制成1×10⁴cell/ml的细胞悬液。台盼蓝染色鉴定存活率大于95％，按每孔100ul加入96孔板中，在37℃、5％CO₂培养24h。弃上清，加入含有不同稀释浓度药物的DMEM培养液(含10％FCS)200ul，培养48h，显微镜观察细胞形态变化。然后，每孔加入20μL 的MTT磷酸盐缓冲液(5mg/mL)，在5％CO₂，37℃条件下继续培养细胞4h，取出离心5min(1500r/min)，以沉淀细胞和MTT结晶物。离心后，从每孔取出悬浮液150μL，加入150μL二甲基亚砜(DMSO)以溶解MTT结晶物。平板置于微型振荡器上混合10min，然后置于酶标仪上在490nm测定。从酶标仪读出每孔的OD值，按下式计算各药物组的抑制率。数据为3次实验的平均值，每次实验同组做3个平板。

药物组抑制率(％)＝(空白对照组OD值-药物组OD值)/空白对照组OD值×100％。

4.实验结果

4.1形态学观察

空白组：细胞伸展良好，折光性较弱，有方向性，呈放射状，细胞增殖的速度快；药物组：细胞突起变短，形状变得不规则，排列较混乱，细胞内代谢产物增多，成纤维细胞数目减少。结果表明，从外观形态学观察，comanthoside B对NIH 3T3细胞增殖有明显抑制作用。

4.2化合物comanthoside B对NIH 3T3细胞增殖的抑作用

化合物comanthoside B对NIH 3T3细胞增殖的抑制作用见表1.

表1：化合物comanthoside B对NIH 3T3细胞增殖的抑制作用

药物组	药物浓度	OD值	成纤细胞抑制率(％)
				CB高浓度组	40μg/mL	0.331±0.024	62.6**
CB中浓度组	20μg/mL	0.429±0.031	51.5**
				CB低浓度组	10μg/mL	0.607±0.048	31.4*
Sc对照组	40μg/mL	0.682±0.052	22.9
				空白对照组	0	0.885±0.059	——

与Sc对照组相比，*示P＜0.05，**示P＜0.01。

上述实验结果表明，comanthoside B对10％小牛血清(FCS)刺激下的NIH3T3成纤维细胞的增殖有显著的抑制作用，其抑制作用明显强于对照药物灯盏花乙素。

实验例2：本发明化合物comanthoside B对转化生长因子TGF-β1诱导下的成纤维细胞增殖的抑制作用

1.实验药物及细胞株：

同实施例1。

2.实验方法：

转化生长因子TGF-β1是促进细胞增殖和胶原生成的强活性因子。在实验例1方法的基础上，在细胞中加入TGF-β1(10ng/ml)诱导细胞增殖，检测药物对TGF-β1诱导下的细胞增殖的抑制作用，以分析判断本发明药物的作用机理。实验分为comanthoside B低浓度组(TGF10ng/ml+CB 10μg/mL)、中浓度组(TGF10ng/ml+CB 20μg/mL)、高浓度组(TGF10ng/ml+CB40μg/mL)、Sc对照组(TGF10ng/ml+Sc 40μg/mL)和空白对照组(TGF10ng/ml，不含CB或Sc)共5个组进行。药物组抑制率(％)＝(空白对照组OD值-药物组OD值)/空白对照组OD值×100％。其余同实施例1。

3.实验结果

实验结果见表2。

表2：comanthoside B对TGF-β1诱导下的NIH 3T3成纤细胞增殖的抑制作用

与Sc对照组相比，*示P＜0.05，**示P＜0.01。

上述实验结果表明，化合物comanthoside B对TGF-β1诱导下的NIH3T3成纤维细胞的增殖有显著抑制作用，其抑制作用明显强于对照药物灯盏花乙素。本实验提示，这种抑制作用可能是通过干预TGF信号通路来实现的。

小结：实施例1和实施例2的结果表明，本发明化合物comanthoside B体外对成纤维细胞增殖有显著的抑制作用，可以用来制备抗肝纤维化药物。

实施例3：本发明化合物comanthoside B对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化的治疗作用

1.实验药物

comanthoside B:简称CB，同实施例1。

对照药物灯盏花乙素:简称Sc，昆药集团药物研究院制备，经HPLC检测，纯度98.27％。

2.实验动物

健康SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体重225-250g，昆明医科大学实验动物中心提供。

3.实验方法

取SD大鼠随机分为4组，即正常对照组、模型对照组、comanthoside B组(10mg/kg)、对照药物灯盏花乙素组(10mg/kg)，每组10只。造模各组大鼠按4ml/kg的剂量腹腔注射浓度为10％的水合氯醛溶液进行麻醉，暴露肝脏下胆管，结扎肝脏与胆管交界处和胆管与胰腺交界处，将两处中间的胆管剪除以造成完全胆管阻塞大鼠模型；正常对照组不作手术处理。从造模当天起，各药物组每天按剂量灌胃给药，1次/天，连续14天。正常对照组和模型对照组灌胃给予等量蒸馏水。末次给药1h后，各组大鼠用乙醚轻度麻醉，心脏采血，取血清采用试剂盒检测TBIL、DBIL、ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ水平；然后打开腹腔迅速取出肝组织并在生理盐水下清洗，匀浆后采用试剂盒检测Hyp，采用ELISA法检测MMP-1和TIMP-1蛋白的表达；另切取大鼠肝脏，用中性10％福尔马林固定，HE染色，观察肝细胞结构和肝纤维化程度。

4.实验结果

4.1.肝组织病理变化观察

表3肝组织病理变化观察结果

4.2.comanthoside B对血清中肝功能指标TBIL、DBIL、ALT、AST的影响

表4 comanthoside B对血清中肝功能指标TBIL、DBIL、ALT、AST的影响

与模型组相比，*示P＜0.05，**示P＜0.01；

与Sc对照组相比，#示P＜0.05，##示P＜0.01。

由表4可见，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT和AST水平均显著升高，提示该模型大鼠的胆道梗阻明显，且肝细胞明显破坏。

与模型对照组相比，comanthoside B组大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT和AST的水平显著降低，表明comanthoside B能显著降低胆总管结扎所致肝纤维化大鼠的黄疸水平及肝损伤程度。

与Sc对照组相比，comanthoside B组大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT和AST的水平显著降低，表明comanthoside B与阳性药物相比能显著降低胆总管结扎所致肝纤维化大鼠的黄疸水平及肝损伤程度。

4.3.comanthoside B对肝纤维化指标PC-Ⅲ、HA、LN、Hyp的影响

表5 comanthoside B对肝纤维化指标PC-Ⅲ、HA、LN、Hyp的影响

与模型组相比，*示P＜0.05，**示P＜0.01；

与Sc对照组相比，#示P＜0.05，##示P＜0.01。

由表5可见，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中PC-Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp含量均显著升高，提示该模型大鼠具有明显的肝纤维化病理改变。

与模型对照组相比，comanthoside B组大鼠血清中PC-Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp的含量水平显著降低，提示comanthoside B对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化具有显著抑制作用。

与Sc对照组相比，comanthoside B组大鼠血清中PC-Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp的含量水平显著降低，提示comanthoside B与阳性药物相比对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化具有显著抑制作用。

4.4.comanthoside B对肝组织MMP-1和TIMP-1蛋白表达的影响

表6 comanthoside B对肝组织MMP-1和TIMP-1蛋白表达的影响

与模型组相比，*示P＜0.05，**示P＜0.01；

与Sc对照组相比，#示P＜0.05，##示P＜0.01。

由表6可见，与正常对照组比较，模型对照组大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达显著增加，而肝组织MMP-1无明显变化。肝纤维化模型大鼠肝脏的TIMP-1蛋白表达增加，提示肝脏中细胞外基质分解减少。

与模型对照组相比，comanthoside B组大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达水平显著降低，提示comanthoside B能显著促进肝脏中细胞外基质的分解。

与Sc对照组相比，comanthoside B组大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达水平显著降低，提示comanthoside B与阳性药物相比能显著促进肝脏中细胞外基质的分解。

结论：对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化治疗作用的体内实验结果表明，化合物comanthoside B能显著降低大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT和AST的水平，降低胆总管结扎所致肝纤维化大鼠的黄疸水平及肝损伤程度；能显著降低大鼠血清中PC-Ⅲ、HA、LN和肝组织中Hyp的含量水平，对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化具有显著抑制作用；能显著降低大鼠肝组织TIMP-1蛋白表达水平，提示其能显著促进肝脏中细胞外基质的分解。以上实验结果证明，comanthoside B对肝纤维化具有显著的治疗效果。

实施例4：本发明化合物comanthoside B对小鼠的急性毒性实验

受试药物：comanthoside B，同实施例1。临用前用0.5％羧甲基纤维素钠碾磨均匀，配成浓度为0.1g/ml的悬浮液。

试验动物：ICR小鼠18-22g，20只，雌雄各半，昆明医科大学实验动物中心提供。

试验方法与结果：选取健康ICR小鼠，体重20±2g，20只，雌雄各半，随机分为药物组(4g/kg)和空白对照组，每组10只。药物组小鼠一次性灌胃comanthoside B浓度为0.1g/ml的悬浮液0.8ml/20g体重；空白对照组一次性灌胃等量的0.5％羧甲基纤维素钠悬浮液。给药后，连续观察7d。结果显示：药物组和空白对照组小鼠活动正常、敏捷，组间无明显差异，均未引起死亡或异常反应。

实施例5：本发明化合物comanthoside B对大鼠的慢性毒性试验实验

受试药物：comanthoside B，同实施例1。临用前用0.5％羧甲基纤维素钠碾磨均匀，配成浓度为0.1g/ml的悬浮液。

试验动物：SD雄性大鼠，体重200-250g，昆明医科大学实验动物中心提供。

试验方法与结果：SD雄性大鼠40只，体重200-250g，随机分为4组：高剂量药物组(1g/kg)、中剂量药物组(0.5g/kg)、低剂量药物组(0.1g/kg)和空白对照组，每组10只。各药物组按comanthoside B 1g/kg、0.5g/kg、0.1g/kg的剂量分别灌胃给药，空白对照组灌胃等量的0.5％羧甲基纤维素钠悬浮液。3个月后，对肝肾功能、周围血象、行为、大小便常规等进行检测，对心、肝、肺等重要器官进行病理学检查。结果显示：各药物组和空白对照组在肝肾功能、周围血象、行为、大小便常规等方面均无明显差异，心、肝、肺病理学检查均未发现异常。

上述实施例4和本实施例5进行的急性毒性和慢性毒性试验表明，comanthoside B具有低毒性和高安全性的特点，适宜于作为药物应用。

实施例6药物组合物

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 1.0-92.5％

淀粉 4.5-96.0％

羧甲基淀粉钠 3-94.5％

制备方法：称取上述重量百分配比的comanthoside B、淀粉和羧甲基淀粉钠，混匀即得。

实施例7药物组合物

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 1.0-83％

淀粉 15-97％

硬脂酸镁 2-84％

制备方法：称取上述重量百分配比的comanthoside B、淀粉和硬脂酸镁，混匀即得。

实施例8片剂

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 1％

淀粉 85％

微晶纤维素 14％

制备方法：称取上述重量百分配比的comanthoside B、淀粉、微晶纤维素，混合后于压片机上压片，即得。

实施例9胶囊

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 5％

淀粉 83％

硬脂酸镁 12％

制备方法：称取上述重量百分配比的comanthoside B、淀粉和硬脂酸镁，混合后填充入硬明胶胶囊中，即得。

实施例10口服液

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 2.5％

葡萄糖 21％

蒸馏水 76.5％

制备方法：称取上述重量百分配比的comanthoside B、葡萄糖和蒸馏水，搅拌溶解后，装入口服液瓶中，即得。

实施例11颗粒剂

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 3.5％

蔗糖 29.3％

淀粉 67.2％

制备方法：称取上述重量百分配比的comanthoside B、蔗糖和淀粉，混匀，造粒后，装入袋中即得。

实施例12注射液

配方组成(按重量百分比计)：

comanthoside B 3.0％

氯化钠 0.9％

注射用水 96.1％

制备方法：将comanthoside B，加氯化钠及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1％针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按1mL/支灌封，100℃湿热灭菌30min，经灯检合格，即得。

施例13冻干粉针剂

配方组成(按重量百分比计)：

制备方法：将comanthoside B、氯化钠、甘露醇加适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1％针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按10mL/支分装，冷冻干燥，封装，经检验合格，即得。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.结构如式Ⅰ所示化合物在制备抑制TGF信号通路治疗肝纤维化的药物和/或制剂中的应用

2.结构如式Ⅰ所示化合物在制备抑制肝纤维化引起的成纤维细胞增殖的药物和/或制剂中的应用

3.结构如式Ⅰ所示化合物在制备降低肝纤维化引起的TBIL、DBIL、ALT和/或AST水平的药物和/或制剂中的应用

4.结构如式Ⅰ所示化合物在制备降低黄疸水平和/或肝损伤程度的药物和/或制剂中的应用

5.结构如式Ⅰ所示化合物在制备降低肝纤维化引起的PC-Ⅲ、HA、LN和/或Hyp水平的药物和/或制剂中的应用

6.结构如式Ⅰ所示化合物在制备降低肝纤维化引起的TIMP-1蛋白表达水平的药物和/或制剂中的应用

7.结构如式Ⅰ所示化合物在制备治疗肝纤维化的药物和/或制剂中的应用

8.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述结构如式Ⅰ所示化合物的有效剂量为10μg/(1×10³cell)～40μg/(1×10³cell)。

9.根据权利要求5至7任一项所述的应用，其特征在于，所述结构如式Ⅰ所示化合物的有效剂量为0.1～1000mg/kg动物体重或0.01～200mg/kg人体体重。

10.根据权利要求1至7任一项所述的应用，其特征在于，所述化合物占所述药物和/或制剂中的质量百分含量为1.0％～92.5％；

所述药物和/或制剂的剂型选自片剂、口服液、贴剂、栓剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、注射剂、粉针剂；

所述药物和/或制剂为、缓释剂、控释剂或靶向制剂；

所述药物和/或制剂由所述结构如式Ⅰ所示化合物和药学上可接受的辅料或助剂制得；所述药学上可接受的辅料或助剂为溶剂、等渗剂、pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、缓释剂、润滑剂或矫味剂中的一种或两者以上的混合物。

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