CN106467904A - 小麦赤霉病菌固体培养基产孢方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小麦赤霉病菌在固体培养基上产生分生孢子的方法。利用该方法可使小麦赤霉菌在固体培养基上产生分生孢子。
Description
技术领域
本发明要解决的技术问题是提供一种小麦赤霉病菌在固体培养基上产生分生孢子的方法，用于使小麦赤霉病菌在固体培养基上产生分生孢子。
背景技术
小麦赤霉病是一种世界性病害，在各小麦生产国家普遍发生，尤其是在气候潮湿多雨的地区严重危害。中国是小麦赤霉病发生频率最高和受危害最严重的国家之一，小麦赤霉病造成的小麦产量损失已经成为了小麦产量的主要损失之一，在一般发病年份造成10%-15%的减产，严重发病损失可达20%-40%。小麦赤霉病在小麦各个生育期均可危害，以穗部危害为主；在其危害过程中会产生DON毒素残留于籽粒中降低小麦品质，食用后会引起人畜中毒。目前，小麦赤霉病菌在一般培养基上，如PDA培养基，还不能产生分生孢子或产生量极少，而常见的用于使小麦赤霉菌产生分生孢子的培养基主要是液体培养基，如CMC液体培养基与绿豆汤培养基，在培养时需要振荡培养5天至一周，所以加强小麦赤霉病菌产孢培养基的开发对小麦赤霉病菌其它方面的研究有重要意义。
目前，随着对小麦赤霉病菌了解的深入，在很多时候都需要其产孢，以进行相关的研究，但目前用于促进小麦赤霉病菌产孢的培养基种类还很少，类型也比较单一，所以需要开发一种新的较为简便、效果较好的可促进小麦赤霉病菌产孢的培养基。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明所述小麦赤霉病菌培养方法是将小麦赤霉病菌接种到小麦秸秆有节部位，以PDA为载体进行培养，使其产生分生孢子。
本发明应用的具体方法为：采集带节的小麦秸秆，制备PDA培养基平板，在培养基平板上放置灭菌带节小麦秸秆，在小麦秸秆带节部位接种小麦赤霉病菌，培养一周后在光学显微镜下观察有无分生孢子产生。
本发明应用中所述小麦秸秆的采集：
在田间采集小麦秸秆，将秸秆剪成6-7cm的小段，每段中间需有节，湿热灭菌后用于后续的接种。
本发明应用中所述的培养基的制备：采用常规的PDA培养基制做方法，并121℃湿热灭菌20min；在超净工作台中倒PDA培养基平板，待培养基凝固后在每皿平板上放置三到四段经上述处理的小麦秸秆，每段间隔1-2cm。
本发明应用中所述的小麦赤霉病菌接种：在超净工作台中将小麦赤霉病菌的分生孢子或菌丝组织制成悬浮液，用移液器吸取10µL悬浮液接种于小麦秸秆的带节部位，倒置在28℃培养箱内培养。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明提供了一种小麦赤霉病菌在固体培养基上产生分生孢子的方法，应用于使小麦赤霉病菌在固体培养基上产孢，为小麦赤霉病菌更深入的研究提供病原菌材料。
具体实施方式
采集小麦秸秆，剪成6-7cm小段进行湿热灭菌；制备PDA培养基平板，在培养基平板上放置灭菌带节小麦秸秆；在小麦秸秆节部接种小麦赤霉病菌，培养一周后在光学显微镜下观察有无分生孢子产生。
应用该方法使小麦赤霉病菌在固体PDA培养基上产生分生孢子的具体方法如下：
1、小麦秸秆的采集与灭菌
在田间采集小麦秸秆，并将秸秆剪成6-7cm的小段，每段中间需有节，湿热灭菌后用于后续的接种；
2、培养基的制备
1）采用常规PDA培养基制作方法；
2）分装锥形瓶，封口， 121℃灭菌20min；
3）在超净工作台中倒PDA培养基平板；
4）培养基凝固后，每皿平板上放置三到四段上述处理的小麦秸秆，每段间隔1-2cm；
3、小麦赤霉病菌接种
在超净工作台中将小麦赤霉病菌的分生孢子或菌丝组织制成悬浮液，用移液器吸取10µL悬浮液接种于培养基平板上小麦秸秆的带节部位，倒置在28℃培养箱内培养。
4、产孢情况观察
接种培养一周后，挑取培养基内小麦秸秆有节处、无节秸秆处与秸秆附近1-1.5cm处培养基上的菌丝组织制作临时切片或用打孔器打菌饼制作悬浮液，光学显微镜下观察小麦赤霉病菌产孢情况。
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实验例：
在田间采集小麦秸秆，并将秸秆剪成6-7cm的小段，每段中间需有节，湿热灭菌后用于后续的接种；制备PDA培养基，分装封口后121℃湿热灭菌20min；在超净工作台中倒PDA培养基平板；待培养基凝固后在每皿平板上放入三到四段6-7cm灭过菌的带节小麦秸秆，每段间隔1-2cm。
在超净工作台中将小麦赤霉病菌的分生孢子或菌丝组织制成悬浮液，用移液器吸取10µL悬浮液接种于培养基平板上小麦秸秆的带节部位，倒置在28℃培养箱内培养。
最后在接种培养一周后，挑取培养基内小麦秸秆有节处、无节秸秆处与秸秆附近1-1.5cm处培养基上的菌丝组织制成临时切片，在光学显微镜下观察小麦赤霉病菌有无分生孢子产生，用血球计数板法测定产孢量达6.05×106 个/mL。
实施例1：
1、小麦秸秆采集、灭菌与培养基制备。在田间采集小麦秸秆，并将秸秆剪成约7cm的小段，每段中间需有节，湿热灭菌后用于后续的接种；制备PDA培养基，分装封口后121℃湿热灭菌20min；在超净工作台中倒PDA培养基平板；待培养基凝固后在每皿平板上放入三到四段6-7cm灭过菌的带节小麦秸秆，每段间隔1-2cm。
2、小麦赤霉病菌接种。在超净工作台中将小麦赤霉病菌的分生孢子或菌丝组织制成悬浮液，用移液器吸取10µL悬浮液接种于培养基平板上小麦秸秆的带节部位，倒置在28℃培养箱内培养。
3、产孢情况观察。在接种培养一周后，挑取培养基内小麦秸秆有节处、无节秸秆处与秸秆附近1-1.5cm处培养基上的菌丝组织制作临时切片或用打孔器打菌饼制作悬浮液，在光学显微镜下观察小麦赤霉病菌有无分生孢子产生，用血球计数板法测定产孢量达6.05×106 个/mL。
Claims (5)
1.一种使小麦赤霉病菌在固体培养基上产生分生孢子的方法，是由小麦秸秆的采集、培养基的制备和小麦赤霉菌的接种组成。
2. 权利要求1所述的小麦秸秆的采集、培养基的制备和小麦赤霉菌的接种在使小麦赤霉菌在固体培养基上产孢的应用。
3.根据权利要求2所述的小麦秸秆的采集、培养基的制备和小麦赤霉菌的接种在使小麦赤霉菌在固体培养基上产孢的应用，其特征在于：采集小麦赤霉病菌接种所需的小麦秸秆并湿热灭菌，制备PDA培养基并倒平板，在培养基平板上放入灭过菌的小麦秸秆，在小麦秸秆有节部位接种小麦赤霉菌，培养一周后在光学显微镜下观察有无产生分生孢子。
4.根据权利要求3所述的小麦秸秆的采集、培养基的制备和小麦赤霉菌的接种在使小麦赤霉菌在固体培养基上产孢的应用，其特征在于，所述的小麦秸秆的采集、培养基的制备和小麦赤霉菌的接种：
小麦秸秆的采集：从田间采集有节的小麦秸秆用于小麦赤霉菌的接种；
培养基的制备：PDA培养基的配制，称取200g去皮马铃薯切成小块，加水1L煮20-30分钟，能被玻璃棒戳破即可，用三层纱布过滤，再加15-20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完全后，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却补足水分至1000mL，分装锥形瓶，封口， 121℃灭菌20min；在超净工作台中倒PDA培养基平板，待培养基凝固后在每皿平板上放置三到四段6-7cm灭菌带节小麦秸秆，每段间隔1-2cm；
小麦赤霉病菌接种： 在超净工作台中将小麦赤霉菌的分生孢子或菌丝组织制成悬浮液，用移液器吸取10µL悬浮液接种于培养基平板上小麦秸秆的带节部位，倒置在28℃培养箱内培养。
5.根据权利要求3或4所述的小麦秸秆的采集、培养基的制备和小麦赤霉菌的接种在使小麦赤霉菌在固体培养基上产孢中的应用，其特征在于，所述的首先采集带节的小麦秸秆，然后制备PDA培养基并倒平板，在培养基平板上放入灭过菌的带节小麦秸秆，最后在小麦秸秆带节部位接种小麦赤霉菌，培养一段时间后在光学显微镜下观察有无分生孢子产生。
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