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CN106333761B - 一种裸鼹鼠的超数排卵方法 - Google Patents

一种裸鼹鼠的超数排卵方法 Download PDF

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CN106333761B CN201610826221.3A CN201610826221A CN106333761B CN 106333761 B CN106333761 B CN 106333761B CN 201610826221 A CN201610826221 A CN 201610826221A CN 106333761 B CN106333761 B CN 106333761B
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Second Military Medical University SMMU
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Abstract

本发明涉及实验动物生产领域，具体是一种裸鼹鼠的超数排卵方法，包括以下步骤：在发情结束后第1、3、5、7天，为雌性裸鼹鼠腹腔注射PMSG；第7天对裸鼹鼠以0.12IU/g体重的剂量腹腔注射HCG；在注射HCG后1h，将雌性裸鼹鼠与群落中具有繁殖能力的雄鼠开始合笼，自由交配。本发明通过大量试验验证，确定了技术方案的实施日程、用药成分和剂量。本发明制订了一套裸鼹鼠超数排卵程序，填补了国内裸鼹鼠引种之后暂没有制定超排程序的空白，每只实验动物都对超排程序有反应，且可形成51‑55个卵泡。本发明所采用的药物和程序更适合裸鼹鼠，超排程序较为经济。

Description

一种裸鼹鼠的超数排卵方法
技术领域
本发明涉及实验动物生产技术领域，具体地说，是一种裸鼹鼠的超数排卵方法。
背景技术
超数排卵就是在在雌性动物发情周期的一段时间内，利用外源性激素诱发诱导其卵巢内多个卵泡同时发育，降低卵泡发育周期，提高成熟卵泡的数量，以达到提高繁殖率的效果。目前大鼠、小鼠的超排技术已经非常成熟，并且已经具有相应的操作标准，并在大鼠、小鼠的净化和基因修饰动物生产中被大规模应用。
裸鼹鼠是一种原产自非洲东部地下的动物，包括肯尼亚、埃塞俄比亚和索马里等地区，营真社会性生活。一个裸鼹鼠群落内一般会有40-90个个体，最多能达到300个以上。在裸鼹鼠群落内部，通常只有一只母鼠(鼠王)和1-3只雄鼠具有生殖能力。除了在野生环境中有这种情况，实验室饲养的裸鼹鼠群落也存在同样的情况。此外裸鼹鼠具有其特殊的生理特点，现有的大鼠或小鼠的超排程序并不适用于裸鼹鼠。因此，制定裸鼹鼠的超排程序，提高人为控制的裸鼹鼠繁殖率，从而扩大种群，具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于填补目前我国裸鼹鼠超数排卵程序的空白，结合裸鼹鼠生理特点和超排成本等多种因素，提供一套裸鼹鼠超数排卵的日程安排及使用药品及用量。
本发明的第一方面，提供一种裸鼹鼠的超数排卵方法，包括以下步骤：
A)在发情结束后第1、3、5、7天，为雌性裸鼹鼠腹腔注射PMSG(孕马血清，PregnantMare Serum Gonadotropin,PMSG)；所述的PMSG的注射剂量为0.06～0.24IU PMSG/g体重；
B)第7天对裸鼹鼠以0.12IU/g体重的剂量腹腔注射HCG(人绒毛膜促性腺激素，human chorionic gonadotrophin,HCG)；
C)在注射HCG后1h，将雌性裸鼹鼠与群落中具有繁殖能力的雄鼠开始合笼，自由交配。
所述的步骤B中，第7天对裸鼹鼠腹腔注射HCG目的是促进卵泡细胞增殖和卵泡生长，促进卵巢分泌雌激素，抑制优势卵泡的发育，人为制造大量卵泡，诱导排卵前LH高峰出现。
优选的，所述的步骤A中PMSG注射时间为注射当日的16:00。所述的PMSG注射时间是根据裸鼹鼠体内激素水平的波动规律选择的，裸鼹鼠一般从16:00至次日清晨指间大量进行交配活动，体内激素水平相应升高，因此选择16:00。
优选的，所述的步骤B中HCG注射时间为第7日20:00。所述HCG注射时间一方面与裸鼹鼠体内激素含量波动一致，同时结合HCG的发挥效力的有效期(一般为12小时左右效力达到峰值)进行选择的，20:00注射之后便于1小时后合笼并提高裸鼹鼠在次日清晨到来之前(HCG仍未完全代谢)这段时间的发生交配几率。
优选的，所述的步骤A中PMSG注射剂量为平均每g体重0.06、0.12、0.24IU，在实际生产中根据裸鼹鼠体重进行适度调整用量。更优选为0.12IU/g体重(筛选过程见表1)。
表1PMSG剂量筛选
Figure BDA0001115360530000021
注：与0.06IU/g体重相比：*P＜0.05，***P＜0.001；与0.24IU/g体重相比：##P＜0.01。
优选的，所述雌性裸鼹鼠为健康的18-30月龄，体重45-55g，在处理期间为单独饲养状态。
本发明优点在于：
本发明通过大量试验验证，确定了技术方案的实施日程、用药成分和剂量。本发明制订了一套裸鼹鼠超数排卵程序，填补了国内裸鼹鼠引种之后暂没有制定超排程序的空白，每只实验动物都对超排程序有反应，且可形成51-55个卵泡。本发明所采用的药物和程序更适合裸鼹鼠，超排程序较为经济。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1裸鼹鼠超数排卵
1.药剂：
孕马血清(Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG)：中国宁波第二激素厂；
人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)：中国宁波三生药业有限公司。
2.适龄健康动物的选择
在裸鼹鼠繁殖最佳季节(每年3-6月)选取健康的18-30月龄的裸鼹鼠40只，体重50±0.2g，在处理期间为单独饲养状态。因为裸鼹鼠属于季节性繁殖的物种，在非繁殖季节整体性腺功能退化，对超数排卵相关药物无反应，因此必须在繁殖季节开展这一工作。裸鼹鼠在8月龄完成性成熟，14月龄完成体成熟，18-30月龄是最佳繁育时期，从体况看体重45-55g为膘情适中，适合进行超数排卵处理。
3.超排程序
于16:00对每只雌性裸鼹鼠腹腔注射0.06IU、0.12IU、0.24IU PMSG/g体重，注射当日记为第1天，注射次日记为第2天，以此类推。第3、5、7天注射同等剂量的PMSG。
第7天20:00对裸鼹鼠以0.12IU/g的剂量腹腔注射HCG，以是促进卵泡细胞增殖和卵泡生长，促进卵巢分泌雌激素，人为制造大量卵泡。
在注射HCG后1h，将雌性裸鼹鼠与群落中具有繁殖能力的雄鼠开始合笼，自由交配。
在首次交配后第7-9天开始手术收集胚胎。
裸鼹鼠发情周期是30-35天，属于交配刺激排卵。但人为注射PMSG和HCG可以刺激优势卵泡排卵进而形成功能性黄体使雌性裸鼹鼠顺利进入下一个情期，便于人为控制裸鼹鼠卵子形成。PMSG可以诱发发情、超数排卵或增加排卵率，在实际实验中裸鼹鼠对PMSG反应敏感，注射PMSG对超排效果影响显著。
4.超排效果
此处对比了3种PMSG剂量对裸鼹鼠超数排卵的效果，具体实验数据见表1，平均排卵率＝黄体数×100/(黄体数+卵泡数)，可以看出剂量为0.12IU/g体重的效果最好。
表2不同PMSG剂量的超排效果
Figure BDA0001115360530000041
注：与0.06IU/g体重相比：*P＜0.05，***P＜0.001；与0.24IU/g体重相比：##P＜0.01。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (1)

1.一种裸鼹鼠的超数排卵方法，其特征在于，包括以下步骤：
A）在发情结束后第1、3、5、7天，为雌性裸鼹鼠腹腔注射孕马血清；所述雌性裸鼹鼠为健康的18-30月龄，体重45-55g，在处理期间为单独饲养状态；所述的孕马血清的注射剂量为0.12 IU孕马血清/g体重；孕马血清注射时间为注射当日的16:00；
B）第7天对裸鼹鼠以0.12IU/g体重的剂量腹腔注射人绒毛膜促性腺激素；人绒毛膜促性腺激素注射时间为第7日20:00；
C）在注射人绒毛膜促性腺激素后1h，将雌性裸鼹鼠与群落中具有繁殖能力的雄鼠开始合笼，自由交配。
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