CN106226275A - 一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法及其应用 - Google Patents
一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及检测脑卒中发病的生物自荧光物质,具体是基于检测指甲自荧光强度,作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法及其应用。包括以下步骤:(1)将指甲样本置于波长在400‑700nm范围内的激光下,以激发出指甲的自荧光;(2)检测指甲样本发出的波长在420‑800nm范围内的自荧光强度;(3)将步骤(1)和(2)的自荧光强度与已知的脑卒中患者、健康人群的指甲自荧光强度结果进行对比;(4)根据上述对比结果,完成基于指甲自荧光强度作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法。通过检测脑卒中患者指甲自荧光强度,从而检测脑卒中发病情况。指甲自荧光强度,与脑卒中发病呈正相关。
Description
技术领域
本发明涉及检测脑卒中发病的生物自荧光物质,具体是基于检测指甲自荧光强度,作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法及其应用。
背景技术
在我国以及世界各国,脑卒中是造成死亡和终生残疾的最重大疾病之一。缺血性脑卒中是脑卒中中发病率最高的一类疾病。目前诊断的主要手段是通过核磁共振技术,进行影像学分析。这种方法,只能去医院通过核磁共振等方法检测,对于患者很不方便,耗时相对较长而且价格较昂贵。因此,发明一种新型、简便、无创、可以家庭使用的脑卒中检测方法,具有重大的社会经济意义以及临床价值。
发明内容
本发明的目的是突破现有技术的难题,提出一种可以用于检测脑卒中并且对人体无损伤的新型检测方法和应用。
本发明以脑卒中患者的指甲自荧光,检测后显著高于正常人群,以此作为检测脑卒中发病风险以及发病的生物标志物的检测方法和应用。
本发明的具体技术方案是:
一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,包括以下步骤:
(1)将指甲样本置于波长在400-700nm范围内的激光下,以激发出指甲的自荧光;
(2)检测指甲样本发出的波长在420-800nm范围内的自荧光强度;
(3)将步骤(1)和(2)的自荧光强度与已知的脑卒中患者、健康人群的指甲自荧光强度结果进行对比;
(4)根据上述对比结果,完成基于指甲自荧光强度作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法。
进一步的,所述指甲样本包括各个手指或脚趾的指甲。
进一步的,所述指甲样本可以剪下检测,也可在体检测。
进一步的,本发明的检测方法中,激发光的波长优选为420-680 nm的范围内,更优选为460-643 nm的范围内。
进一步的本发明的检测方法中,所检测的自发荧光的波长优选为440-750 nm的范围内,更优选为450-741nm的范围内。
本发明还提供了一种基于指甲自荧光水平作为检测脑卒中发病的生物标志物的应用。
本发明利用指甲自荧光强度,检测脑卒中患者脑卒中,为临床检测脑卒中疾病建立基础,可以极大的降低脑卒中检测的时间,使患者可以在家里自行检测,得到及时治疗。同时,本发明提供了检测方法,作为一种简化脑卒中检测方法。
附图说明
图1:激发光488nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围500-530nm的接受光。自荧光增加图。
图2:激发光488nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围500-530nm的接受光。自荧光柱状图。
图3:激发光543.5nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围553-618nm的接受光。自荧光增加图。
图4:激发光543.5nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围553-618nm的接受光。自荧光柱状图。
图5:激发光638nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围663-738nm的接受光。自荧光增加图。
图6:激发光638nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围663-738nm的接受光。自荧光柱状图。
具体实施方式
下面将通过具体描述,对本发明作进一步的说明。
除非另有限定,本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。
本发明中使用的术语“自荧光”,其含义为生物分子在受到适当波长的激发光照射时,吸收激发光的能量进入激发态,再退出激发态从而发射出比激发光波长更长的光的现象中,所述波长比激发光波长更长的光。
本发明中使用的术语“激发光”,其含义为能够激发生物分子发生自发荧光现象的光,其波长应比自发荧光短
发明人进行了大量的实验,确定了指甲自荧光与脑卒中发病之间的关系。
一、实验方法:
取脑卒中病人或者非脑卒中病人指甲,使用激光共聚焦显微镜对指甲样本进行无创成像。
二、实验结果和讨论
图1:激发光488nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围500-530nm的接受光。脑卒中患者的自荧光强度高于非脑卒中患者。
图2:对图1自荧光的量化。*代表P值小于0.05。
图3:激发光543.5nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围553-618nm的接受光。脑卒中患者的自荧光强度高于非脑卒中患者。
图4:对图3自荧光的量化。*代表P值小于0.05。
图5:激发光638nm激发样本指甲自荧光,接受波长范围663-738nm的接受光。脑卒中患者的自荧光强度高于非脑卒中患者。
图6:对图5自荧光的量化。*代表P值小于0.05。
由以上实验可以得出,脑卒中患者的指甲自荧光强于非脑卒中患者的指甲自荧光。
本发明基于这一发现,建立了一种活体无创检测脑卒中的方法。方法包括以下步骤:
(1)将指甲样本置于波长在400-700nm范围内的激光下,以激发出指甲的自荧光;
(2)检测指甲样本发出的波长在420-800nm范围内的自荧光强度;
(3)将步骤(1)和(2)的自荧光强度与已知的脑卒中患者、健康人群的指甲自荧光强度结果进行对比;
(4)根据上述对比结果,完成基于指甲自荧光强度作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法。
本发明的利用激发光激发皮下自发荧光的方式包括使用普通的连续光输出进行激发的方式、使用电调制进行调制激发的方式或者使用脉冲激光进行激发的方式中的至少一种。
本发明的检测方法中,激发光的波长优选为420-680 nm的范围内,更优选为460-643 nm的范围内。
本发明的检测方法中,所检测的自发荧光的波长优选为440-750 nm的范围内,更优选为450-741nm的范围内。
本发明的活体无创检脑卒中的方法,根据指甲自荧光的变化程度与脑卒中发病呈正比的规律,检测被实验对象的脑卒中情况。
应该理解的是,本发明的活体无创检测脑卒中的方法的实施并不依赖于检测设备。可以使用任何能够发出激发光并且能够对自荧光进行检测的设备来实施本发明的活体无创检测脑卒中的方法。
本领域的技术人员应当明了,尽管为了举例说明的目的,本文描述了本发明的具体实施方式,但可以对其进行各种修改而不偏离本发明的精神和范围。因此,本发明的具体实施方式和实施例不应当视为限制本发明的范围。本发明仅受所附权利要求的限制。本申请中引用的所有文献均完整地并入本文作为参考。
本发明公开了一种基于检测指甲自荧光水平作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法及其应用。脑卒中人群相较于非脑卒中人群,脑卒中人群指甲自荧光强度显著高于非脑卒中人群。本发明首次提出用指甲自荧光强度来检测脑卒中的方法和应用,该检测脑卒中发病的方法简便、无创、可以家庭使用,解决了目前检测脑卒中只能在医院用影像手段的局限性。为家庭用脑卒中检测提供了很大的便利。
Claims (10)
1.一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,包括以下步骤:
(1)将指甲样本置于波长在400-700nm范围内的激光下,以激发出指甲的自荧光;
(2)检测指甲样本发出的波长在420-800nm范围内的自荧光强度;
(3)将步骤(1)和(2)的自荧光强度与已知的脑卒中患者、健康人群的指甲自荧光强度结果进行对比;
(4)根据上述对比结果,完成基于指甲自荧光强度作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法。
2.根据权利要求1所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述指甲样本包括各个手指或脚趾的指甲。
3.根据权利要求1所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述指甲样本是剪下检测。
4.根据权利要求1所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述指甲样本是在体检测。
5.根据权利要求1所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述激发光的波长为420-680 nm的范围内。
6.根据权利要求5所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述激发光的波长为460-643 nm的范围内。
7.根据权利要求1所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述检测的自发荧光的波长为440-750 nm的范围内。
8.根据权利要求7所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述检测的自发荧光的波长为450-741nm的范围内。
9.根据权利要求1所述的一种基于指甲自荧光作为检测脑卒中发病的生物标志物的检测方法,其特征在于,所述利用激发光激发指甲自荧光的方法包括使用普通的连续光输出进行激发的方法、使用电调制进行调制激发的方法或者使用脉冲激光进行激发的方法中的至少一种。
10.一种基于指甲自荧光水平作为检测脑卒中发病的生物标志物的应用。
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Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110089999A (zh) * | 2018-01-31 | 2019-08-06 | 上海交通大学 | 基于角蛋白片段和角蛋白水平及左右对称性的检测判断心脑血管疾病的应用和方法 |
CN110151125A (zh) * | 2018-02-12 | 2019-08-23 | 上海交通大学 | 一种基于指甲自发荧光强度作为生物标记物在制备用于诊断肺癌发生的产品中的应用及方法 |
CN110313892A (zh) * | 2018-03-28 | 2019-10-11 | 上海交通大学 | 基于体表自发荧光判断帕金森病发生的方法及其应用 |
CN110403569A (zh) * | 2018-04-28 | 2019-11-05 | 上海交通大学 | 基于多处体表位置自发荧光左右不对称性和强度上升综合判断脑卒中的方法及其应用 |
CN110403570A (zh) * | 2018-04-28 | 2019-11-05 | 上海交通大学 | 一种基于综合体表多个部位自发荧光的检测和预测脑卒中发病及其预后的应用及其检测方法 |
CN110432862A (zh) * | 2018-05-04 | 2019-11-12 | 上海交通大学 | 基于多处体表位置自发荧光强度变化的综合分析以判断区分肺癌和脑卒中的方法及其应用 |
CN113261918A (zh) * | 2020-02-14 | 2021-08-17 | 上海交通大学 | 筛查和检测肺部感染的仪器设计的方法 |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999065394A1 (en) * | 1998-06-16 | 1999-12-23 | Bhaskar Banerjee | Detection of cancer using cellular autofluorescence |
WO2001060246A2 (en) * | 2000-02-18 | 2001-08-23 | Argose, Inc. | Multivariate analysis of green to ultraviolet spectra of cell and tissue samples |
CN1360211A (zh) * | 2000-12-18 | 2002-07-24 | 拜尔公司 | 通过同时测量至少两种不同分子标记物来提高检测肿瘤及其前体阶段时的临床特异性的方法 |
CN1410761A (zh) * | 2002-11-12 | 2003-04-16 | 浙江大学医学院附属第二医院 | 实时荧光定量rt-pcr检测人细胞角蛋白19试剂盒 |
US20030206301A1 (en) * | 1999-12-22 | 2003-11-06 | Xillix Technologies Corporation | Portable system for detecting skin abnormalities based on characteristic autofluorescence |
CN1677109A (zh) * | 2004-03-30 | 2005-10-05 | 希森美康株式会社 | 子宫颈癌的筛选方法 |
CN1795383A (zh) * | 2003-04-21 | 2006-06-28 | 株式会社资生堂 | 角质层的氧化蛋白质的评价方法 |
WO2007046774A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-04-26 | Agency For Science, Technology And Research | In vivo fluorescence imaging |
CN102099671A (zh) * | 2008-05-20 | 2011-06-15 | 大学健康网络 | 用于基于荧光的成像和监测的装置和方法 |
CN102648416A (zh) * | 2009-12-07 | 2012-08-22 | 宝洁公司 | 用于评估角蛋白纤维损伤的方法 |
CN103536275A (zh) * | 2012-07-09 | 2014-01-29 | 韩国电气研究院 | 用于皮肤自发荧光的反射探测式测量设备 |
CN103565410A (zh) * | 2012-07-09 | 2014-02-12 | 韩国电气研究院 | 用于皮肤自发体荧光的透射光检测型测量设备 |
-
2016
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Patent Citations (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999065394A1 (en) * | 1998-06-16 | 1999-12-23 | Bhaskar Banerjee | Detection of cancer using cellular autofluorescence |
US20030206301A1 (en) * | 1999-12-22 | 2003-11-06 | Xillix Technologies Corporation | Portable system for detecting skin abnormalities based on characteristic autofluorescence |
WO2001060246A2 (en) * | 2000-02-18 | 2001-08-23 | Argose, Inc. | Multivariate analysis of green to ultraviolet spectra of cell and tissue samples |
CN1360211A (zh) * | 2000-12-18 | 2002-07-24 | 拜尔公司 | 通过同时测量至少两种不同分子标记物来提高检测肿瘤及其前体阶段时的临床特异性的方法 |
CN1410761A (zh) * | 2002-11-12 | 2003-04-16 | 浙江大学医学院附属第二医院 | 实时荧光定量rt-pcr检测人细胞角蛋白19试剂盒 |
CN1795383A (zh) * | 2003-04-21 | 2006-06-28 | 株式会社资生堂 | 角质层的氧化蛋白质的评价方法 |
CN1677109A (zh) * | 2004-03-30 | 2005-10-05 | 希森美康株式会社 | 子宫颈癌的筛选方法 |
WO2007046774A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-04-26 | Agency For Science, Technology And Research | In vivo fluorescence imaging |
CN102099671A (zh) * | 2008-05-20 | 2011-06-15 | 大学健康网络 | 用于基于荧光的成像和监测的装置和方法 |
JP2015057600A (ja) * | 2008-05-20 | 2015-03-26 | ユニバーシティー ヘルス ネットワーク | 螢光に基づく画像化およびモニタリング用装置ならびにその方法 |
CN104939806A (zh) * | 2008-05-20 | 2015-09-30 | 大学健康网络 | 用于基于荧光的成像和监测的装置和方法 |
CN102648416A (zh) * | 2009-12-07 | 2012-08-22 | 宝洁公司 | 用于评估角蛋白纤维损伤的方法 |
CN103536275A (zh) * | 2012-07-09 | 2014-01-29 | 韩国电气研究院 | 用于皮肤自发荧光的反射探测式测量设备 |
CN103565410A (zh) * | 2012-07-09 | 2014-02-12 | 韩国电气研究院 | 用于皮肤自发体荧光的透射光检测型测量设备 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
AKIHIRO TAKITA等: "Fluorescence from structure in human fingernail formed by use of a focused near-infrared femtosecond laser pulse", 《FIFTH INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON LASER PRECISION MICROFABRICATION》 * |
C PERRIN 等: "Expression of hair keratins in the adult nail unit: an immunohistochemical analysis of the onychogenesis in the proximal nail fold, matrix and nail bed", 《BR J DERMATOL》 * |
CAIXIA WANG等: "Malate-aspartate shuttle inhibitor aminooxyacetic acid leads to decreased intracellular ATP levels and altered cell cycle of C6 glioma cells by inhibiting glycolysis", 《CANCE LETTERS》 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110089999A (zh) * | 2018-01-31 | 2019-08-06 | 上海交通大学 | 基于角蛋白片段和角蛋白水平及左右对称性的检测判断心脑血管疾病的应用和方法 |
CN110151125A (zh) * | 2018-02-12 | 2019-08-23 | 上海交通大学 | 一种基于指甲自发荧光强度作为生物标记物在制备用于诊断肺癌发生的产品中的应用及方法 |
CN110313892A (zh) * | 2018-03-28 | 2019-10-11 | 上海交通大学 | 基于体表自发荧光判断帕金森病发生的方法及其应用 |
CN110403569A (zh) * | 2018-04-28 | 2019-11-05 | 上海交通大学 | 基于多处体表位置自发荧光左右不对称性和强度上升综合判断脑卒中的方法及其应用 |
CN110403570A (zh) * | 2018-04-28 | 2019-11-05 | 上海交通大学 | 一种基于综合体表多个部位自发荧光的检测和预测脑卒中发病及其预后的应用及其检测方法 |
CN110432862A (zh) * | 2018-05-04 | 2019-11-12 | 上海交通大学 | 基于多处体表位置自发荧光强度变化的综合分析以判断区分肺癌和脑卒中的方法及其应用 |
CN113261918A (zh) * | 2020-02-14 | 2021-08-17 | 上海交通大学 | 筛查和检测肺部感染的仪器设计的方法 |
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JP2010539490A5 (zh) | ||
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