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CN106093422A - 一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒 - Google Patents

一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒 Download PDF

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CN106093422A
CN106093422A CN201610376083.3A CN201610376083A CN106093422A CN 106093422 A CN106093422 A CN 106093422A CN 201610376083 A CN201610376083 A CN 201610376083A CN 106093422 A CN106093422 A CN 106093422A
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CN
China
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reagent
associated lipocalin
buffer
neutrophil gelatinase
mmol
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Application number
CN201610376083.3A
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蔡晓辉
庄庆华
吴铮
徐运
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Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd
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Publication date
Application filed by Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd filed Critical Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd
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Publication of CN106093422A publication Critical patent/CN106093422A/zh
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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Abstract

本发明公开了一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒：试剂R1：缓冲液、无机盐离子、加速剂、螯合剂、稳定剂、防腐剂、抗人类风湿因子抗体，试剂R2：缓冲液、稳定剂、助悬剂、表面活性剂、防腐剂、胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度。本发明具有准确度高等优点。

Description

一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒。
背景技术
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）是lipocalin的一种，最初是在激活中性粒细胞中被发现的一种小分子量分泌性蛋白，现代研究表明，NGAL是诊断急性肾损伤的最有效生物学标志之一，也是早期糖尿病肾病的有效标志物之一。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）具有强大的功能，除了作为载脂家族成员具有结合并运输疏水性小分子的功能外，还与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展过程相关。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）可消炎、抗炎，可促进肾脏祖细胞向早期肾小管上皮细胞分化，可修复N-钙黏蛋白，上调保护酶血红素加氧酶和抑制细胞死亡。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）可作为急性肾脏病变的早期标志物，在缺血肾脏发生的极早期（2h内）即可在血、尿中检测到NGAL明显上调。研究发现心脏术后患者在急性肾脏病发生的2h内，血、尿NGAL显著升高，据此，研究者推测NGAL可作为心脏术后急性肾脏病的早期标志物。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）还可作为慢性肾脏病的早期标志物,随着对多囊肾、IgA肾病、原发性肾小球肾炎等病理类型的研究，发现尿NGAL能评估疾病的严重程度及疗效，可预测早期慢性肾脏病的发生并准确预估疾病严重程度，有可能作为慢性肾脏病的早期标志物。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）还可用于糖尿病肾病的早期标志物,人体检测中，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）与肥胖、高脂血症、高血糖、胰岛素抵抗呈正相关，与高密度脂蛋白的水平呈负相关。
目前检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的方法主要有放射免疫法、酶联免疫法、化学发光等,其中，放射免疫法有放射性污染，酶联免疫法操作复杂、耗时长、对操作人员有一定的专业技能要求，临床大量普及有一定的难度，化学发光成本较高，所需检测仪器较为昂贵，另外其它的检测方法也存在准确性差的缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术存在放射性污染、稳定性差以及测定准确度低的缺陷，而提供一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 20~80 mmol/L
无机盐离子 50~150 mmol/L
加速剂 10~30 g/L
螯合剂 25~65 mmol/L
稳定剂 10~30 g/L
防腐剂 0.4~1.2 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.4 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 20~80 mmol/L
稳定剂 12~22 g/L
助悬剂 5~35 mmol/L
表面活性剂 0.5~1.8 mL/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 0.2~2.0 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 50 mmol/L
无机盐离子 100mmol/L
加速剂 20g/L
螯合剂 45mmol/L
稳定剂 20 g/L
防腐剂 0.8g/L
抗人类风湿因子抗体 0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50 mmol/L
稳定剂 17 g/L
助悬剂 20 mmol/L
表面活性剂 1.0mL/L
防腐剂 0.7g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钾、氯化钠、氯化镁、硫酸钠中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的螯合剂采用双硫腙、8-羟基喹啉、酒石酸钾钠、EDTA中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合，所述的抗人类风湿因子抗体采用兔抗人多克隆抗体、羊抗人多克隆抗体、兔抗人单克隆抗体、羊抗人单克隆抗体中的一种。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合，所述的助悬剂采用阿拉伯胶、海藻酸钠、胶体二氧化硅、甘油中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用曲拉通-100，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
作为优选，所述的胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的制备方法为：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为50~500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5 mg 1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20~37℃的条件下反应2小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的MES稀释液，混合搅拌，在20~37℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球的最终浓度为1%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L,4℃的条件下封闭24小时，即可制备得到胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白。
作为优选，所述的抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体为含有能与人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。
作为优选，本发明还公开了上述测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 20~80 mmol/L
无机盐离子 50~150 mmol/L
加速剂 10~30 g/L
螯合剂 25~65 mmol/L
稳定剂 10~30 g/L
防腐剂 0.4~1.2 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.4 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 20~80 mmol/L
稳定剂 12~22 g/L
助悬剂 5~35 mmol/L
表面活性剂 0.5~1.8 mL/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 0.2~2.0 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度。
作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为4:1。
作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1与试剂R2的总体积的体积比在1:5到1:70之间。
本发明的检测原理是：在胶乳颗粒上包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白特异性抗体，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳抗体和样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白发生凝集反应，形成了抗原抗体复合物并产生浊度，该浊度的高低与样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白浓度成正相关，测定其吸光度值并根据校准曲线计算出中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。
样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）
式中：ΔAT 以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS 以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS 校准液中NGAL的浓度
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明在试剂R1中添加了螯合剂，去除了金属离子对检测的干扰，添加的抗人类风湿因子抗体，可特异性的去除风湿因子的干扰，在试剂R2中的助悬剂的作用下，胶乳可以均匀的悬浮于试剂中，在试剂R1中的加速剂的作用下，可迅速的和样本中的检测物质发生反应，使得检测结果更加灵敏和准确。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
试剂R1：
Tris缓冲液 50 mmol/L
氯化钾 100mmol/L
聚乙二醇-8000 20g/L
酒石酸钾钠 45mmol/L
牛血清白蛋白 20 g/L
苯甲酸钠 0.8g/L
羊抗人多克隆抗体 0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 50 mmol/L
牛血清白蛋白 17 g/L
甘油 20 mmol/L
曲拉通-100 1.0mL/L
苯酚 0.7g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
MOPS缓冲液 80 mmol/L
氯化镁 50mmol/L
聚乙二醇-2000 30 g/L
酒石酸钾钠 25 mmol/L
海藻糖 30 g/L
叠氮钠 0.4 g/L
羊抗人单克隆抗体 1.4 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MOPS缓冲液 80 mmol/L
海藻糖 12 g/L
海藻酸钠 35 mmol/L
曲拉通-100 0.5 mL/L
叠氮钠 0.9 g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 0.2 g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的制备：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5 mg 1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在28℃的条件下反应2小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的MES稀释液，混合搅拌，在26℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球的最终浓度为1%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L,4℃的条件下封闭24小时，即可制备得到胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 50 mmol/L
氯化钾 100mmol/L
聚乙二醇-8000 20g/L
酒石酸钾钠 45mmol/L
牛血清白蛋白 20 g/L
苯甲酸钠 0.8g/L
羊抗人多克隆抗体 0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 50 mmol/L
牛血清白蛋白 17 g/L
甘油 20 mmol/L
曲拉通-100 1.0mL/L
苯酚 0.7g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 1.0 g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长570nm，副波长800nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取200μl试剂R1与4μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入50μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d)根据样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）计算出样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的制备：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5 mg 1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在28℃的条件下反应2小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的MES稀释液，混合搅拌，在26℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球的最终浓度为1%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L,4℃的条件下封闭24小时，即可制备得到胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
MOPS缓冲液 80 mmol/L
氯化镁 50mmol/L
聚乙二醇-2000 30 g/L
酒石酸钾钠 25 mmol/L
海藻糖 30 g/L
叠氮钠 0.4 g/L
羊抗人单克隆抗体 1.4 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MOPS缓冲液 80 mmol/L
海藻糖 12 g/L
海藻酸钠 35 mmol/L
曲拉通-100 0.5 mL/L
叠氮钠 0.9 g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 0.2 g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长570nm，副波长800nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取200μl试剂R1与4μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入50μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 根据样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）计算出样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度。
表1为实施例1所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度为 150 ng/mL，测定结果见表1：
表1
第1次（ng/mL） 第2次（ng/mL） 第3次（ng/mL） 均值（ng/mL） 偏差（%）
实施例1 152 149 152 151 0.67
实施例2 147 143 145 145 3.33
由表1可知，本发明所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度为 500 ng/mL，测定结果见表2：
表2
第1次（ng/mL） 第2次（ng/mL） 第3次（ng/mL） 均值（ng/mL） 偏差（%）
实施例1 498 501 497 498.7 0.26
实施例2 495 491 489 491.7 1.66
由表2可知，本发明所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (9)

1.一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 20~80 mmol/L
无机盐离子 50~150 mmol/L
加速剂 10~30 g/L
螯合剂 25~65 mmol/L
稳定剂 10~30 g/L
防腐剂 0.4~1.2 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.4 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 20~80 mmol/L
稳定剂 12~22 g/L
助悬剂 5~35 mmol/L
表面活性剂 0.5~1.8 mL/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 0.2~2.0 g/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 50 mmol/L
无机盐离子 100mmol/L
加速剂 20g/L
螯合剂 45mmol/L
稳定剂 20 g/L
防腐剂 0.8g/L
抗人类风湿因子抗体 0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50 mmol/L
稳定剂 17 g/L
助悬剂 20 mmol/L
表面活性剂 1.0mL/L
防腐剂 0.7g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钾、氯化钠、氯化镁、硫酸钠中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的螯合剂采用双硫腙、8-羟基喹啉、酒石酸钾钠、EDTA中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合，所述的抗人类风湿因子抗体采用兔抗人多克隆抗体、羊抗人多克隆抗体、兔抗人单克隆抗体、羊抗人单克隆抗体中的一种。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合，所述的助悬剂采用阿拉伯胶、海藻酸钠、胶体二氧化硅、甘油中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用曲拉通-100，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的制备方法为：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为50~500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5 mg 1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20~37℃的条件下反应2小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的MES稀释液，混合搅拌，在20~37℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球的最终浓度为1%，然后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L,4℃的条件下封闭24小时，即可制备得到胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白。
6.根据权利要求5所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体为含有能与人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。
7.根据权利要求1或2所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 20~80 mmol/L
无机盐离子 50~150 mmol/L
加速剂 10~30 g/L
螯合剂 25~65 mmol/L
稳定剂 10~30 g/L
防腐剂 0.4~1.2 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.4 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 20~80 mmol/L
稳定剂 12~22 g/L
助悬剂 5~35 mmol/L
表面活性剂 0.5~1.8 mL/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 0.2~2.0 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度。
8.根据权利要求7所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为4:1。
9.根据权利要求7所述的一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1与试剂R2的总体积的体积比在1:5到1:70之间。
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