CN106008685A - Trxc抗体识别的抗原多肽及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了Trxc抗体识别的抗原多肽及其用途，其中该抗原多肽的多肽活性片段为下列至少之一：1)SEQ ID NO:1所示序列：SFATDVLSSNKPVLV；2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经氨基酸残基修饰、取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。利用本发明的Trxc抗体识别的抗原多肽，能够有效地检测样品，例如结核病或疑似结核病患者的血液样品(例如血清样品)中的Trxc抗体水平。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域。具体地，本发明涉及Trxc抗体识别的抗原多肽及其用途。更具体地，本发明涉及Trxc抗体识别的抗原多肽、该抗原多肽在制备检测血清中Trxc抗体水平的试剂盒中的用途、用于检测样品中Trxc抗体水平的试剂盒。
背景技术
结核病是全球三大传染性疾病之一，世界卫生组织(WTO)发布的流行病调查报告显示，我国结核病分支杆菌感染病理占全球总病例数的12％，仅次于印度，位居全球第二。结核病的高发和流行严重影响了我国的社会和经济发展。目前临床上使用的结核病诊断方法主要以结核菌的检出作为金标准，如痰涂片、痰集菌和痰培养的方法，其诊断方法耗时长，特异性或者敏感性低。
基于血清免疫学的检测方法是现阶段结核病诊断的重要辅助手段之一，其中广泛使用的抗原特异性r－干扰素释放实验(IGRA)有商业试剂盒T-spot.TB和QFT-IT。
IGRA使用的抗原是结核分支杆菌RD(region of difference)区基因编码的全蛋白，生产成本高，价格昂贵，世界卫生组织不推荐中低收入国家作为筛查检测手段广泛使用。并且也有研究表明，在结核病高度流行的国家，IGRA的诊断受到环境因素干扰特异性降低，假阳性升高，不适用于我国国情，需要寻找更好的血清免疫学诊断标志物。
因而，目前的结核病血清免疫学诊断、检测方面的研究仍有待加强。
发明内容
本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
结核分枝杆菌膜蛋白Trxc能引起人体免疫反应，产生相应抗体，血清抗Trxc多克隆抗体的表达水平能反映出个体的结核分枝杆菌感染状态。目前利用ELISA等免疫印迹杂交技术检测血清抗Trxc抗体的方法均需要Trxc纯蛋白作为识别抗原。此外，纯化蛋白制备过程繁琐，费时耗力，成本较高。
本发明旨在解决现有技术的上述缺陷至少之一，而提供一种有用的商业选择。
从而，本发明利用多肽微阵列的技术筛选获得了Trxc蛋白抗原识别高频表位，并提供了包含血清抗体识别Trxc蛋白的核心氨基酸序列和保护氨基酸序列并偶联载体蛋白如KLH等的TRXC抗体识别的抗原多肽，基于结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高，利用这些抗原多肽通过免疫印迹检测手段可有效检测待测者血清中的Trxc抗体水平，进而能够用于结核病诊断。
为此，在本发明的第一方面，本发明提供了一种Trxc抗体识别的抗原多肽。根据本发明的实施例，其多肽活性片段为下列至少之一：
1)SEQ ID NO:1所示序列：SFATDVLSSNKPVLV；
2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经氨基酸残基修饰、取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
发明人惊奇地发现，利用本发明的上述Trxc抗体识别的抗原多肽，通过免疫印迹检测手段可有效检测待测者血清中的Trxc抗体水平，进而基于待测者血清Trxc抗体表达水平是否较健康人显著升高，能够有效进行结核病诊断，确定待测者是否为疑似结核病患者。其中，结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高。本技术方案以一段人工合成的多肽序列替代传统使用纯蛋白，能达到相同的诊断价值，具有更高的经济效益。并且，根据本发明的实施例，本发明的上述抗原多肽Trxc抗体识别特异性好，Trxc抗体水平检测效率高，且制备简单，成本低，易于进行工业化生产，利于大量推广应用。
进一步，基于利用上述Trxc抗体识别的抗原多肽，通过免疫印迹检测手段可有效检测待测者血清中的Trxc抗体水平，在本发明的第二方面，本发明提供了前面所述的Trxc抗体识别的抗原多肽在制备检测血清中Trxc抗体水平的试剂盒中的用途。
根据本发明的实施例，该试剂盒用于结核病诊断。其中，基于结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高，能够有效对待测者进行结核病诊断。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种用于检测样品中Trxc抗体水平的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：前面所述的Trxc抗体识别的抗原多肽。根据本发明的实施例，利用该试剂盒能够有效检测样品中Trxc抗体水平，进而基于结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高，能够有效对待测者进行结核病诊断。
具体地，根据本发明的实施例，所述Trxc抗体识别的抗原多肽以下列的至少一种形式提供：
1)96孔板，所述96孔板的孔中包被所述Trxc抗体识别的抗原多肽；
2)微球，所述微球偶联所述Trxc抗体识别的抗原多肽。
进一步，根据本发明的一些具体示例，该试剂盒进一步包括：阳性对照样品，所述阳性对照样品为抗Trxc蛋白的抗体。由此，利用该试剂盒进行Trxc抗体水平检测和结核病诊断时，结果更加可靠。
根据本发明的实施例，进一步包括：标准样品，所述标准样品为多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物。由此，利用该试剂盒进行Trxc抗体水平检测和结核病诊断时结果更加真实可靠。
根据本发明的一些具体示例，所述标准样品为所述多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物的梯度稀释产物，所述梯度稀释的比例从1:50起至1:2000止。由此，利用该试剂盒进行Trxc抗体水平检测和结核病诊断时结果可靠度高。
根据本发明的实施例，所述Trxc抗体识别的抗原多肽的浓度为1μg/ml。
根据本发明的实施例，所述样品为血清。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
Trxc抗体识别的抗原多肽
在本发明的第一方面，本发明提出了一种Trxc抗体识别的抗原多肽。根据本发明的实施例，其多肽活性片段为下列至少之一：
1)SEQ ID NO:1所示序列：SFATDVLSSNKPVLV；
2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经氨基酸残基修饰、取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
发明人惊奇地发现，利用本发明的上述Trxc抗体识别的抗原多肽，通过免疫印迹检测手段可有效检测待测者血清中的Trxc抗体水平，进而基于待测者血清Trxc抗体表达水平是否较健康人显著升高，能够有效进行结核病诊断，确定待测者是否为疑似结核病患者。其中，结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高。并且，根据本发明的实施例，本发明的上述抗原多肽Trxc抗体识别特异性好，Trxc抗体水平检测效率高，且制备简单，成本低，易于进行工业化生产，利于大量推广应用。
需要说明的是，上述多肽均来自于Trxc蛋白的全长序列(例如来源于蛋白质公共资源数据库uni-prot)所对应的位置。另外，在本文中所使用的术语“多肽”是指至少两个氨基酸通过肽键连接而得到的寡聚物，其中，多肽中所包含的氨基酸残基的数目并不受特别限制。根据本发明的一些实施例，多肽可以含有15个氨基酸。当然，本领域技术人员可以理解的是，还可以对上述多肽进行化学修饰，以便增加多肽的抗原性，有助于多肽包被到ELISA板底。根据本发明的实施例，利用具有上述氨基酸序列的多肽，能够有效地检测样品，例如结核病或疑似结核病患者的血液样品(例如血清样品)中的TRXC抗体水平。发明人发现从Trxc蛋白完整序列得到的上述多肽可以模拟Trxc的抗原表位，能够与血液样本中TRXC抗体特异性的反应，因而，可以有效地用于检测对象血液样本中的TRXC抗体水平，由此，可以有效地用于筛查结核病疑似患者血清，为结核病的诊断提供了一个新的检测手段。
上述抗原多肽可通过化学合成得到，也可以通过基因工程技术得到，此技术为行业内所熟悉。本领域技术人员可以理解的是，可以有效地通过常规合成方法，合成上述多肽，从而代替重组表达的生物合成方式。
根据本发明的实施例，可以用上述多肽进行检测的样品的类型并不受特别限制。根据本发明的实施例，优选的样品为来自结核病或疑似结核病患者的血液样本。由此，可以利用多肽检测结核病或疑似结核病患者的血液样本中的TRXC抗体水平，由此可以确定患者是否患有结核病，为结核病检测提供辅助手段，或者提供结核病的早期筛查。另外，还可以通过检测对象血液中的Trxc抗体水平，而对患者进行治疗的疗效评估监测分析。
利用本发明的多肽检测样品中Trxc抗体水平的方法并不受特别限制，包括但不限于ELISA、液相芯片、固相芯片及其它免疫杂交技术等。根据本发明的实施例，可以通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法，借助本发明的多肽检测样品中的Trxc抗体水平。由此，可以进一步提高利用多肽检测结核病或疑似结核病患者的血液样品中的Trxc抗体水平的效率。作为示例，可以采用下列方法利用多肽检测结核病或疑似结核病患者的血液样品中的Trxc抗体水平：
首先，用pH9.6的碳酸盐缓冲液(NaCO3 0.159g，NaHCO3 0.293g，加水至100ml，pH值为9.6)稀释多肽至1μg/ml，以100μl/孔的量加入到96孔酶标板的孔中，封板膜密封后4℃过夜。
接下来，弃去孔中的液体，0.1％TBS-T洗涤缓冲液(含0.1％Tween-20的TBS-T溶液配制为NaCl 8.7g，Tris 1.21g，加去离子水至1000ml，pH 7.5，再加入Tween-20 1ml)洗涤酶标板5次，每次3min。
接着，向孔中添加含5％BSA和0.05％Tween-20的TBS-T封闭缓冲液(其配制方法为：NaCl 0.87g，Tris 0.121g，加去离子水至100ml，pH 7.5，再加入Tween-20 0.5ml，BSA5g)，每孔300μl，封板膜密封后37℃孵育1h。
接着，添加标准品和待测样品。用上述含5％BSA和0.05％Tween-20的TBS-T封闭缓冲液稀释待测血清，稀释比例为1:100。梯度稀释作为标准品的血清，稀释比例从1:50起至1:2000止。完全弃去孔中液体，每孔加待测样品的血清稀释液100μl，每例待测样品的血清样本3个复孔，每板设立2个阳性对照孔，加入已知阳性血清，且每板设立2个空白对照孔，加入0.1％TBS-T洗涤缓冲液。封板膜密封后37℃孵育2h。弃去孔中液体，洗涤酶标板5次，每次3min。
接着，进行第二抗体免疫反应。利用上述含5％BSA和0.05％Tween-20的TBS-T封闭缓冲液稀释辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG，稀释比例1:5000，每孔加100μl，封板膜密封后37℃孵育1h。弃去孔中液体，洗涤酶标板5次，每次3min。
接着，加底物显色。按照常规ELISA试剂盒说明书(例如康为世纪TMB显色试剂盒)，加入显色底物，每孔加入100μl，室温避光条件下显色10min，每孔加入50μl 2M H2SO4终止反应。
接着，酶标仪492nm波长条件下测定光密度OD值。
最后，基于所得的光密度OD值与标准品浓度拟合的标准曲线，获得对应检测样品的相对浓度，然后与预定参考值进行比较，确定待测样本是否来源于患有结核病患者。
根据本发明的实施例，可以利用确诊癌症患者和健康人(健康志愿者)的血液样品进行平行试验所得到的数值作为预定的参考值。
设当待测样本中的Trxc抗体相对浓度高于X，则待测血清为疑似结核病患者血清。X是发明人通过实验计算获得，具体方法为检测人群中结核患者和健康人血清抗体相对浓度的受试者工作曲线(ROC曲线)最优点下的相对浓度。根据本发明实施例，采用40例结核患者血清样本和80例健康人血清样本，计算得序列SEQ ID NO:1所示抗原多肽的X值为5.3。
TRXC抗体识别的抗原多肽的应用
在本发明的第二方面，本发明提供了前面所述的Trxc抗体识别的抗原多肽在制备检测血清中Trxc抗体水平的试剂盒中的用途。
如前所述，采用制备的试剂盒，利用其包含的Trxc抗体识别的抗原多肽，通过免疫印迹检测手段可有效检测待测者血清中的Trxc抗体水平，进而能够有效进行结核病诊断。从而，根据本发明的实施例，该试剂盒用于结核病诊断。其中，基于结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高，能够有效对待测者进行结核病诊断。
为此，在本发明的第三方面，本发明提供了一种用于检测样品中Trxc抗体水平的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：前面所述的Trxc抗体识别的抗原多肽。根据本发明的实施例，利用该试剂盒能够有效检测样品中Trxc抗体水平，进而基于结核病患者血清Trxc抗体表达水平较健康人显著升高，能够有效对待测者进行结核病诊断。
具体地，根据本发明的实施例，所述Trxc抗体识别的抗原多肽以下列的至少一种形式提供：
1)96孔板，所述96孔板的孔中包被所述Trxc抗体识别的抗原多肽；
2)微球，所述微球偶联所述Trxc抗体识别的抗原多肽。
进一步，根据本发明的一些具体示例，该试剂盒进一步包括：阳性对照样品，所述阳性对照样品为抗Trxc蛋白的抗体。由此，利用该试剂盒进行Trxc抗体水平检测和结核病诊断时，结果更加可靠。
根据本发明的实施例，进一步包括：标准样品，所述标准样品为多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物。由此，利用该试剂盒进行Trxc抗体水平检测和结核病诊断时结果更加真实可靠。其中阳性血清的例数也即血清的患者来源数并不受特别限制，所述“多例”也可以为1例。根据本发明的一些具体示例，所述标准样品为Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物。
根据本发明的一些具体示例，所述标准样品为所述多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物的梯度稀释产物，所述梯度稀释的比例从1:50起至1:2000止。其中，经梯度稀释是为了方便后续绘制标准曲线。由此，利用该试剂盒进行Trxc抗体水平检测和结核病诊断时结果可靠度高。
根据本发明的实施例，所述Trxc抗体识别的抗原多肽的浓度为1μg/ml。
根据本发明的实施例，所述样品为血清。
根据本发明的一些实施例，该试剂盒可以包括：96孔板，所述96孔板的孔中包被前面所述的TRXC抗体识别的抗原多肽。进一步，该试剂盒可以进一步包括：阳性对照样品，所述阳性对照样品为抗Trxc蛋白的抗体，或者/额外地可以进一步包括：标准样品，所述标准样品为Trxc抗体表达为阳性的血清经梯度稀释后的组合。根据本发明的一些具体示例，所述标准样品为所述多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物的梯度稀释产物，所述梯度稀释的比例从1:50起至1:2000止。根据本发明的实施例，所述Trxc抗体识别的抗原多肽的浓度为1μg/ml。根据本发明的实施例，所述样品为血清。
根据本发明的实施例，所述样品为来自结核病或疑似结核病患者的血液样品。由此，可以利用多肽检测结核病或疑似结核病患者的血液样品中的Trxc抗体水平，由此可以确定患者是否患有结核病，为结核病检测提供辅助手段，或者监控结核病的进展。另外，利用该试剂盒还可以通过检测对象血液中的Trxc抗体水平，而对患者对治疗方法的反应进行预后。
在本发明的又一方面，本发明还提出了一种用于检测样品中TRXC抗体水平的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：前面所述的Trxc抗体识别的抗原多肽。由此，利用根据本发明的实施例，可以有效地借助根据本发明的Trxc抗体识别的抗原多肽对样品中的Trxc抗体水平进行检测。根据本发明的实施例，该试剂盒可以进一步包括：适于进行ELISA检测的试剂。由此，可以通过ELISA检测方法，利用根据本发明的多肽对样品中的Trxc抗体进行检测，从而可以进一步提高利用多肽检测结核病或疑似结核病患者的血液样品中的Trxc抗体水平的效率。根据本发明的实施例，所述多肽设置于96孔板中，例如可以包被96孔板的孔，例如可以通过常规处理如借助包被液和阻滞液进行。由此，可以方便地高通量地进行检测。可以进一步提高利用多肽检测结核病或疑似结核病患者的血液样品中的Trxc抗体水平的效率。试剂盒中还可以包含其他试剂，例如洗涤缓冲液，样品稀释缓冲液，TMB底物溶液，反应终止液，辣根过氧化物酶标记的二抗，阳性对照样品，标准样品。其中，阳性对照样品为抗Trxc蛋白的抗体，标准样品为Trxc抗体表达为阳性的血清经梯度稀释后的组合。或者，所述标准样品为所述多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物的梯度稀释产物。
根据本发明的实施例，所述样品为来自结核病或疑似结核病患者以及健康志愿者的血液样品。
另外，利用该试剂盒还可以通过检测对象血液中的Trxc抗体水平，而对患者对治疗方法的反应进行预后。
下面通过具体实施例，对本发明进行解释。需要说明的是，下列实施例仅仅是说明性的，并不以任何方式限制本发明。另外，下列实施例中所采用的所有仪器、材料等均为市售可得的，如在下列实施例中没有明确指出的操作，可以通过本领域技术人员常规的操作方法进行。
实施例1
一、多肽的制备
1.肽库的制备
Trxc的氨基酸序列从蛋白质公共资源数据库uni-prot获得。
2.原位合成Trxc蛋白肽库制备多肽芯片(peptide array)
根据蛋白及多肽氨基酸残基长度、重叠序列长度进行多肽合成仪ASP SL(德国，intavis公司)MutilPep合成控制程序设定，依据程序控制在每个合成周期添加一种特定氨基酸到活化的硝酸纤维素膜表面合成位点，并催化氨基酸之间肽键形成。多肽芯片合成后于－20℃密封保存备用。
二、筛选与结核病相关的多肽(抗原表位的筛选)
1.多肽芯片的水化和免疫印迹
将前述步骤一制备的多肽芯片(这里称为“多肽芯片1”)浸入40ml 100％乙醇中，摇床上摇5分钟。然后，将该多肽芯片浸入40ml 75％乙醇中，摇床上摇5分钟。接下来，将多肽芯片浸入40ml 50％乙醇中，摇床上摇5分钟。接着，加入150ml PBS浸泡30分钟。最后，将将多肽芯片浸入40ml 5％脱脂奶粉/PBS-T溶液中，室温下孵育3小时进行封闭。
将下述初筛和鉴定实验中涉及的血清样本用5％脱脂奶粉/PBS-T溶液1:1000稀释制备成免疫反应液，将多肽芯片放入杂交袋内，按0.1ml/cm2加反应液,去除袋内所有气泡，封膜机封口，4℃轻轻振荡过夜。
血清免疫反应结束后，剪开杂交袋，弃去反应液，PBS-T 40ml洗多肽芯片3次，每次15分钟，将多肽芯片放入杂交袋内，加1：2000稀释的山羊抗人IgG溶液，按0.1ml/cm2加二抗反应液，封好杂交袋，室温下轻轻振荡2小时，40ml PBS-T洗膜3次，每次15分钟。
接下来，进行ECL显影，曝光，曝光结果用AlphaView软件系统分析图像。
2.抗原表位的初筛
将10例结核病患者外周血血清等量混合制备成结核混合血清池，10例PPD检测阴性志愿者外周血血清等量混合制备成健康混合血清池。上述血清池与多肽芯片按照上述方法进行免疫杂交，根据免疫反应结果，挑选与结核病患者血清反映阳性且健康志愿者血清反映阴性的差异多肽位点，共计2个，即为Trxc蛋白在结核血清中的抗原识别表位。
3.具有结核病诊断价值的抗原多肽筛选
按照实施例1所述的制备方法，制备包含上述2条差异多肽及对照在内的多肽芯片(这里称为“多肽芯片2”)，通过与100例结核病患者血清和90例健康人血清进行免疫反应，筛选出Trxc抗原表位高频位点1个(SEQ ID NO:1所示序列：SFATDVLSSNKPVLV)，其具有区分结核病患者和健康人的价值。
三、ELISA检验
以步骤二中筛选获得的多肽(序列如SEQ ID NO:1所示)为抗原包被96孔板，运用ELISA方法对下列样本进行Trxc抗体的检测：82例结核患者血清和38例健康对照血清。
具体检测方法如下：
首先，用多肽合成仪MultiPep RS按照序列表中氨基酸残基顺序合成所述抗原多肽。
接着，用pH 9.6的碳酸盐缓冲液(NaCO3 0.159g，NaHCO3 0.293g，加水至100ml，pH值为9.6)稀释多肽至1μg/ml，以100μl/孔的量加入到96孔酶标板的孔中，封板膜密封后4℃过夜。
接下来，弃去孔中的液体，0.1％TBS-T洗涤缓冲液(含0.1％Tween-20的TBS-T溶液配制为NaCl 8.7g，Tris 1.21g，加去离子水至1000ml，pH 7.5，再加入Tween-20 1ml)洗涤酶标板5次，每次3min。
接着，向孔中添加含5％BSA和0.05％Tween-20的TBS-T封闭缓冲液(其配制方法为：NaCl 0.87g，Tris 0.121g，加去离子水至100ml，pH 7.5，再加入Tween-20 0.5ml，BSA5g)，每孔300μl，封板膜密封后37℃孵育1h。
接着，添加标准品和待测样品。所述标准品为随机选取的其中10例结核病患者的外周血血清的等体积混合物。用上述含5％BSA和0.05％Tween-20的TBS-T封闭缓冲液稀释待测血清，稀释比例为1:100。梯度稀释作为标准品的血清混合物，稀释比例从1:50起至1:2000止。完全弃去孔中液体，每孔加待测样品的血清稀释液100μl，每例待测样品的血清样本3个复孔，每板设立2个阳性对照孔，加入已知阳性血清，且每板设立2个空白对照孔，加入0.1％TBS-T洗涤缓冲液。封板膜密封后37℃孵育2h。弃去孔中液体，洗涤酶标板5次，每次3min。
接着，进行第二抗体免疫反应。利用上述含5％BSA和0.05％Tween-20的TBS-T封闭缓冲液稀释辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG，稀释比例1:5000，每孔加100μl，封板膜密封后37℃孵育1h。弃去孔中液体，洗涤酶标板5次，每次3min。
接着，加底物显色。按照常规ELISA试剂盒说明书(康为世纪TMB显色试剂盒)，加入显色底物，每孔加入100μl，室温避光条件下显色10min，每孔加入50μl 2M H2SO4终止反应。
接着，酶标仪492nm波长条件下测定光密度OD值。
最后，基于所得的光密度OD值与标准品浓度拟合的标准曲线，获得对应检测样品的相对浓度，然后与预定参考值进行比较，确定待测样本是否来源于患有结核病患者。
设当待测样本中的Trxc抗体相对浓度高于X，则待测血清为疑似结核病患者血清。X为检测人群中结核患者和健康人血清抗体相对浓度的受试者工作曲线(ROC曲线)最优点下的相对浓度。基于40例结核患者血清样本和40例健康人血清样本，计算得到各抗原多肽对应的X值，其中序列SEQ ID NO:1所示抗原多肽的X值为5.3。
以此为cutoff值(预定参考值)，检测结果如下：
| 样本类型 | 例数 | 抗体阳性率 |
| 结核 | 40 | 26/40(65.0％) |
| 健康对照 | 80 | 33/80(41.3％) |
阳性和阴性例数的比较结果如下：
| 抗体水平 | 结核患者数 | 健康志愿者数 |
| 阳性(>5.3) | 26(a,即真阳性) | 33(b,即假阳性) |
| 阴性(<5.3) | 14(c,即假阴性) | 47(d,即真阴性) |
敏感性、特异性及阴性阳性预测值总结如下：
用Trxc纯化蛋白作为抗原，检测血清抗体浓度，检测结果如下：
| 样本类型 | 例数 | 抗体阳性率 |
| 结核 | 40 | 34/40(85.0％) |
| 健康对照 | 80 | 48/80(60.0％) |
阳性和阴性例数的比较结果如下：
| 抗体水平 | 结核患者数 | 健康志愿者数 |
| 阳性(>5.3) | 34(a,即真阳性) | 48(b,即假阳性) |
| 阴性(<5.3) | 6(c,即假阴性) | 32(d,即真阴性) |
敏感性、特异性及阴性阳性预测值总结如下：
| 敏感性 | 特异性 | 阳性预测值 | 阴性预测值 | |
| 纯化蛋白 | 85.0％ | 40.0％ | 41.5％ | 84.2％ |
结果证明，相比之下，多肽抗原相比全蛋白抗原具有相同的诊断价值。
由此，证明了本发明的Trxc抗体识别的抗原多肽，可有效用于结核病的辅助诊断。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (10)
1.一种Trxc抗体识别的抗原多肽，其特征在于，其多肽活性片段为下列至少之一：
1)SEQ ID NO:1所示序列：SFATDVLSSNKPVLV；
2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经氨基酸残基修饰、取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
2.权利要求1所述的Trxc抗体识别的抗原多肽在制备检测血清中Trxc抗体水平的试剂盒中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述试剂盒用于结核病诊断。
4.一种用于检测样品中Trxc抗体水平的试剂盒，其特征在于，包括：
权利要求1所述的Trxc抗体识别的抗原多肽。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述Trxc抗体识别的抗原多肽以下列的至少一种形式提供：
1)96孔板，所述96孔板的孔中包被所述Trxc抗体识别的抗原多肽；
2)微球，所述微球偶联所述Trxc抗体识别的抗原多肽。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括：阳性对照样品，所述阳性对照样品为抗Trxc蛋白的抗体。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括：标准样品，所述标准样品为多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述标准样品为所述多例Trxc抗体表达为阳性的血清的等体积混合物的梯度稀释产物，所述梯度稀释的比例从1:50起至1:2000止。
9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述Trxc抗体识别的抗原多肽的浓度为1μg/ml。
10.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述样品为血清。
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