CN105999253A

CN105999253A - 无针注射布鲁氏菌病疫苗系统与应用

Info

Publication number: CN105999253A
Application number: CN201610313308.0A
Authority: CN
Inventors: 温丽娟; 任天宇; 王林叶; 王欢; 孙治华; 连梦瑶; 王鋮; 李敏; 杨晓岚; 木其尔
Original assignee: INNER MONGOLIA HUAXI BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: INNER MONGOLIA HUAXI BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2016-05-11
Filing date: 2016-05-11
Publication date: 2016-10-12

Abstract

本发明公开了无针注射布鲁氏菌病疫苗系统与应用，本发明提供了无针注射布鲁氏菌病疫苗系统，包括灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器和可读载体；所述可读载体记载内容包括：所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量不大于该布鲁氏菌病疫苗标准剂量。本发明实验证明了无针注射安瓿与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用量只需传统肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的免疫效果。进一步说明无针免疫途径方式为免疫布鲁氏菌病疫苗可供选择的理想策略。

Description

无针注射布鲁氏菌病疫苗系统与应用

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其是人兽共患传染性疾病领域。具体地，涉及无针注射布鲁氏菌病疫苗系统与应用，适用于人用或兽用布鲁氏菌病疫苗的免疫预防接种。

背景技术

目前，国内外普遍采用不锈钢注射针头对人或动物进行药物或疫苗的注射，众所周知，针头的注射会带来诸多不便，注射的安全性已成为临床操作的热点关注问题。因此，一种可替代传统有针注射方式的药物或疫苗接种方式诞生——无针注射。近年来，无针注射技术处在飞速发展阶段，由传统的高压无针注射创伤大，发展到今天低压无针注射创伤小，推动了无针注射技术发展与应用，因其突出的优势在医疗卫生事业将会拥有广泛的应用领域与无限前景。

布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人兽共患传染病，传染性强，严重地威胁着人或动物的生命健康。布病在我国流行范围广泛，危害严重，虽然自新中国成立后对布病开展了全面性的系统防御，但近些年来，布病的的疫情呈明显上升趋势，被列为再度肆虐的传染病，引起国内各地区的高度关注。疫苗接种是防控布鲁氏菌病的主要措施，目前，布鲁氏菌病疫苗的接种主要通过肌肉注射、皮下注射、或口服等方式进行，但这往往存在一些危险，诸如存在接种人员被针头刺伤而感染布鲁氏菌的危险。尤其在给动物接种时，传统的有针注射带来的接种操作繁琐、环境污染、易交叉污染等问题尤为突出。传统注射技术需要专业人员操作,增加了人力成本,且针头刺入动物体加大了出血与感染的风险，及针头折断在动物体内严重影响肉品食用安全。

与之相比，无针免疫避免针头的使用具有更高的安全性，例如降低针头刺伤风险，消除针刺带来的感染与交叉污染。因该技术操作简便、易于掌握，无需专业人员也可进行免疫，且无针连续注射在提高免疫速度的同时更加适合大规模免疫接种。同时，无针免疫使得疫苗在注射部位呈现网状分散状态分布，增加了与抗原提呈细胞的接触，提高免疫应答反应。与有针注射相比，无针注射在仅需较低抗原的情况下即能引起免疫保护，这不仅节约疫苗用量与成本，免于受到疫苗短缺的限制，在经济上降低了公共健康的费用，并可降低不良反应发生率。

发明内容

本发明的一个目的是提供无针注射布鲁氏菌病疫苗系统。

本发明提供的无针注射布鲁氏菌病疫苗系统，为如下1)或2)：

1)所示的系统包括灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器，所述布鲁氏菌病疫苗的灌装剂量小于等于该布鲁氏菌病疫苗的标准剂量；其中，灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器为一次性使用的装有布鲁氏菌病疫苗的容器；

2)所示的系统包括灌装布鲁氏菌病疫苗的容器和可读载体；所述可读载体记载内容包括：所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量小于等于该布鲁氏菌病疫苗标准剂量。其中，灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器为可多次连续使用的装有布鲁氏菌病疫苗的容器；

上述系统中，布鲁氏菌病疫苗标准剂量为1头份肌肉注射或皮下注射布鲁氏菌病疫苗剂量，1头份肌肉注射或皮下注射布鲁氏菌病疫苗剂量通过布鲁氏菌活菌数来体现。

不同的动物接种不同的布鲁氏菌病疫苗时，1头份肌肉注射或皮下注射布鲁氏菌病疫苗剂量不同，具体如下：

牛1头份肌肉注射或皮下注射布鲁氏菌病疫苗活菌数应不少于500亿CFU。

羊1头份肌肉注射或皮下注射布鲁氏菌病疫苗活菌数应不少于25亿CFU。

猪1头份肌肉注射或皮下注射布鲁氏菌病疫苗活菌数应不少于200亿CFU。

上述系统中，所述布鲁氏菌病疫苗的灌装剂量为1/5倍-1倍该布鲁氏菌病疫苗的标准剂量；

所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1倍该布鲁氏菌病疫苗标准剂量；

上述系统中，所述布鲁氏菌病疫苗的灌装剂量为1/5倍-1/2倍该布鲁氏菌病疫苗的标准剂量。

所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1/2倍该布鲁氏菌病疫苗标准剂量。

所述的1/5倍或1/2倍布鲁氏菌病疫苗的标准剂量是指布鲁氏菌病疫苗肌肉注射或皮下注射剂量的或活菌数的1/5或1/2。

上述系统中，所述布鲁氏菌病疫苗为人用布鲁氏菌病疫苗或兽用布鲁氏菌病疫苗；

和/或，所述布鲁氏菌病疫苗为各种形式的布鲁氏菌病疫苗，通常包括布鲁氏菌死菌苗、布鲁氏菌减毒活疫苗、组分苗、DNA疫苗、重组亚单位疫苗、基因缺失疫苗等，但不限于此。

上述疫苗中，1)所示的系统或2)所示的系统均还包括与所述灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器配套使用的无针注射装置；

和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。上述无针注射器为江苏米特公司无针注射器(例如：MG-0.1；MP-0.1)，本实施例中用的是MP-0.1。

上述布鲁氏菌病疫苗的剂型为液体、冻干剂、粉末、乳脂或利用生物降解材料包埋的疫苗制剂等，但不限于此。

上述系统中，所述灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器为灌装有疫苗的一次性无针注射安瓿，其包括：

预灌装疫苗的一管体，

一体设置于所述管体一端的一无针注射器接头，

由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆，

设置在所述无针注射器接头内的一喷射口，

易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆，

可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和

可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块；

其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相连通；所述止动杆与所述止动槽相配合。

上述系统中，所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致；所述止动杆和止动槽为锥形；所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上；

所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在所述动力推杆上；

所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上；所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在所述动力推杆上；

所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。

所述管体、无针注射器接头、动力推杆、喷射口和止动杆均采用优质医用级材料制成，如玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、COP或者环状聚烯烃等中的一种或几种混合制造而成，或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物理改性进行优化的材料，但不限于此。

上述管体的长度为1.5-4cm，所述无针注射器接头的长度为0.5-2cm，所述动力推杆的长度为1.5-6cm，整个无针注射安瓿的长度为2-6cm；所述喷射口的直径为0.05-0.25mm。

上述系统中，所述布鲁氏菌病疫苗的灌装体积为0.1ml-5ml；所述布鲁氏菌病疫苗的灌装体积具体为0.2ml、0.5或1ml；

2)所示的系统中，所述可读载体记载内容还包括所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射部位和所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射方式；

所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉，但不限于此；

所述无针注射方式为连续多次免疫或单次免疫。其中，连续多次免疫为一管疫苗多次免疫，可设定相同剂量多次免疫，或设定不同剂量多次免疫。

上述系统在制备免疫动物或人产品中的应用也是本发明保护的范围。

上述应用中，所述动物具体为家畜，所述家畜尤其具体为牛或羊或猪，但不限于此。

本发明还保护一种对动物或人免疫布鲁氏菌病疫苗的方法，为用上述系统进行免疫，免疫剂量为上述系统中的无针注射剂量。

上述方法中，免疫方式具体为多次连续免疫或单次免疫；免疫部位具体为皮内、皮下或肌肉。

本发明提供的无针注射疫苗是利用无针注射安瓿联合无针注射器的一种新型免疫策略，不经过传统有针注射免疫途径，能够准确、快速、无痛地将疫苗通过无针注射器注入靶向区域；同时，无针注射疫苗在不需要大剂量抗原的情况下即能产生免疫保护应答，有效地降低了环境污染的风险或经济成本。

本发明提供的无针注射疫苗具有以下优势：1)使用安全、简便、快捷，并可适用于大规模免疫接种；2)避免了有针注射的恐针感，降低了注射疼痛，提高了注射的依从性；3)避免针头滥用带来的交叉污染；4)降低抗原用量，降低生产成本。此外，本发明无针注射疫苗在免疫前进行疫苗预灌装，精确了免疫剂量，而且可以连续注射，提高免疫接种效率，为大规模快速免疫接种提供可能，为布鲁氏菌病疫苗的免疫提供了一种理想策略。

附图说明

图1为无针注射安瓿结构示意图。

图2为应用系统中的灌装有墨汁的无针注射系统，在小鼠、大鼠、兔子皮肤内注射墨汁分布的照片。

图3为布鲁氏菌病疫苗无针和有针接种巴马猪后的DRAIZE评分结果。

图4为布鲁氏菌病疫苗无针和有针接种小尾寒羊后的DRAIZE评分结果。

图5为布鲁氏菌病疫苗无针和有针接种黄牛后的DRAIZE评分结果。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述内容为本发明的示例及时说明，但不意味着因此受此限制，凡是本发明在应用过程中可能对结构的简单变换、和/或一些实施方式中实现的优点的其中一个或多个均在本申请的保护范围内。

实施例1、无针注射安瓿的制备

下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。

如图1A、图1B所示，本发明提供的预装疫苗或药品的无针注射安瓿，其包括一管体1、一无针注射器接头2、一动力推杆3、一喷射口4、一止动杆5、一密封帽6和一密封锁块7；其中，管体1用于预灌装固定精确剂量的疫苗或药品，无针注射器接头2一体设置于管体1的一端，动力推杆3由管体1的另一端滑动设置在管体1内，并封闭管体1；喷射口4设置在无针注射器接头2内，其具有一止动槽8，喷射口4通过止动槽8与管体1内腔相连通；止动杆5易断地连接于动力推杆3的前端，且止动杆5与止动槽8相配合。当动力推杆3向前运动至管体1底部，将疫苗从喷射口4释放时，止动杆5与止动槽8吻合，止动杆5与动力推杆3断开连接，并停留在止动槽8内，从而防止无针注射安瓿的重复利用。密封帽6可拆卸地设置在无针注射器接头2上，并封闭喷射口4，密封锁块7可拆卸地设置在动力推杆3上，并且与管体1的入口相嵌合；在向管体1灌装精确剂量的疫苗或药品后，将密封锁块7安装于动力推杆3的密封锁块凹槽9中，同时在无针注射器接头2上安装密封帽6，可以避免空气、细菌等与疫苗或药品接触，达到无菌要求，还可以防止意外碰触导致动力推杆移动带来的药品溢出，有利于疫苗或药品的长时间储存和运输。

上述实施例中，密封帽6采用嵌合结构可拆卸地设置在无针注射器接头2上；动力推杆3上设置有密封锁块凹槽9，密封锁块7嵌合在密封锁块凹槽9中，从而可拆卸地安装在动力推杆3上。

上述实施例中，动力推杆3的直径与管体1的内径一致。

上述实施例中，止动杆5和止动槽8为锥形。

上述实施例中，管体1的长度为1.5-4cm，无针注射器接头2的长度为0.5-2cm，动力推杆3的长度为1.5-6cm，整个无针注射安瓿的长度为2-6cm；喷射口4的直径为0.05-0.25mm。

上述实施例中，管体1内预灌装的疫苗剂量为0.02-1.0ml。

上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、动力推杆3、喷射口4和止动杆5均采用具有良好透明性、较高韧性与刚性、耐高温、阻湿、与疫苗或药品相容性良好的优质医用级材料制成，例如玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、COP(Cycloolefin polymer，环烯烃聚合物，一种光学塑料材料)、环状聚烯烃或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物理改性进行优化的材料。

上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、喷射口4及止动槽8一体制造而成，强度高，制造简单方便。

上述实施例中，在疫苗或药品预灌装和无针注射安瓿的组装过程中需进行灭菌，预装疫苗或药品的无针注射安瓿的组装和包装均在无菌生产环境下进行，同时检测物理、化学和生物性能，且需经过不溶性微粒等检查。

无针注射安瓿应用时，如图1B所示，首先将未使用过的预装疫苗或药品的无针注射安瓿的密封锁块7从动力推杆3上拆卸分离，通过无针注射器接头2与无针注射器连接，再将密封帽6取下，然后将组合后的无针注射系统抵靠在患者皮肤上定位；启动无针注射器，无针注射器的动力装置驱动无针注射安瓿的动力推杆3相对于管体1运动至管体1底部，推动管体1内的疫苗从喷射口4释放，将抗原(即为疫苗)准确、快速、无痛地分布于靶向的皮内、皮下、肌肉和粘膜等部位，可引起相当于传统针头注射免疫全剂量抗原所达到的机体免疫保护效果。此时，与动力推杆3连接的止动杆5插入止动槽6中，顶端堵住喷射口4，并与动力推杆3断开连接；止动杆5停留在止动槽8内，防止二次抽药，二次接种必须更换新的安瓿，从而防止无针注射安瓿的重复利用。

上述各实施例仅用于说明本发明，其中各部件的结构、设置位置及其连接方式等都是可以有所变化的，凡是在本发明技术方案的基础上进行的等同变换和改进，均不应排除在本发明的保护范围之外。

实施例2、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统上与应用

下述实施例中的MIT无针注射器为江苏丞宇米特医疗科技有限公司产品，产品型号：MP-0.1和MG-0.1，具体使用MP-0.1。

本实施例的无针注射布鲁氏菌病疫苗系统包括灌装有1/5-1倍布鲁氏菌病疫苗标准剂量的无针注射安瓿和配套使用的无针注射器。

一、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统的注射深度摸索

将墨汁水溶液替换疫苗灌装到实施例1制备的无针注射安瓿，得到灌装有墨汁水溶液的无针注射安瓿。

墨汁水溶液为将普通用蓝黑色墨水用孔径为0.22um的滤膜过滤，收集过滤液再用注射用水稀释得到浓度为1％的墨汁水溶液。

将灌装有0.1ml墨汁水溶液的无针注射安瓿与MIT无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号：MP-0.1)连接，得到无针注射装置；将无针注射装置分别施用于体重16-18g之间的Balb/c小鼠和200-250g之间的SD大鼠以及2.5kg的家兔，将待注射部位剃毛，每只注射0.1ml墨汁水溶液。注射施用位置为小鼠的背部和大鼠、家兔的大腿外侧。

注射后30分钟，处死Balb/c小鼠、SD大鼠和家兔，用手术刀在注射部位皮肤划开2cm²并将皮肤与肌肉分离，进行液体分布位置及深度观察。

结果如图2所示，A、B为Balb/c小鼠经无针皮内注射，C、D为SD大鼠经无针皮内注射，E、F为家兔经无针皮内注射；可以看出，只在真皮区域发现墨汁，未在皮下区域中发现墨汁，未在肌肉区域内发现墨汁。因此本发明采用的无针注射安瓿及其配套待注射液体套盒可以将液体注射于表皮内，且无液体注射于肌肉部位。

二、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统的制备

无针注射布鲁氏菌病疫苗系统包括灌装有不同量的布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿、MIT无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号：MP-0.1)和说明书。

说明书记载布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量为5-500亿CFU的布鲁氏菌活菌，无针注射部位具体为皮内，无针注射方式为单次注射。

1、布鲁氏菌病疫苗的获得

布鲁氏菌病疫苗为金宇保灵生物制品有限公司产品，具体为布鲁氏菌活疫苗S2株，用于预防山羊、绵羊、猪和牛的布鲁氏菌病，批号为5393035，规格为40只份/瓶，注射免疫皮下或肌肉均可，具体为山羊注射25亿活菌、绵羊50亿活菌、猪注射2次，每次200亿活菌，间隔一个月，牛注射500亿活菌。

2、灌装有不同量的布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿

灌装有不同量的布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿为以下三种：

灌装有剂量为10亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为0.2ml；

灌装有剂量为25亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为0.2ml；

灌装有剂量为50亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为0.2ml；

灌装有剂量为40亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为0.5ml；

灌装有剂量为100亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为0.5ml；

灌装有剂量为200亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为0.5ml；

灌装有剂量为100亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为1ml；

灌装有剂量为250亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为1ml；

灌装有剂量为500亿CFU布鲁氏菌活菌的无针注射安瓿，灌装总体积为1ml；

其中，灌装体积为0.2ml的无针注射疫苗系统用于免疫小尾寒羊，灌装体积为0.5ml的无针注射疫苗系统用于免疫巴马猪，灌装体积为1ml的无针注射疫苗系统用于免疫黄牛。

使用时将上述3种灌装有布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号：MP-0.1)连接。

三、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统的应用

1、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统免疫巴马猪效果检测

1)动物免疫

35头体重在20～25kg的雌性小型巴马猪(购自中科院实验动物中心)随机分为7组，标记为A、B、C、D、E、F、G组，每组5只，其中：A、B、C组为无针注射组，D、E、F组为有针注射组、G组为空白对照组。

无针注射组：A、B、C组分别以上述二制备的灌装有40亿CFU、100亿CFU、200亿CFU的无针注射安瓿与无针注射器进行皮内免疫，间隔1月，共免疫2次，每次0.5ml。

有针注射组：D、E、F组采用传统规格为0.5mm*20mm的有针注射器进行皮下注射免疫，免疫剂量分别为40亿CFU、100亿CFU、200亿CFU，间隔1月，共免疫2次，每次1ml。

2)免疫安全性评价——DRAIZE评分

在应用灌装布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿及无针注射器免疫小型猪后的5天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况，并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准为：0分：没有红斑，未见水肿；1分：轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难以察觉；2分：清晰红斑，可看到明显的隆起；3分：中度红斑，隆起可见明显边缘；4分：重度红斑，且有结痂及深度损伤。图3表示免疫后不同时间点，各注射方式对注射部位皮肤的损伤情况评分结果，无针皮内注射与有针皮下注射DRAIZE评分结果相似，均在注射后第1天和第2天出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑。在注射后第3天，表皮擦伤症状逐渐减轻，注射后第5天不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的安全性。

3)免疫效果评价——布鲁氏菌试管凝集抗原检测

于最后一次免疫后30d采集各组巴马猪血液，分离血清，按试管凝集抗原检测方法测定各组巴马猪血清的抗体水平，结果如表1所示。

布鲁氏菌试管凝集抗原检测步骤：

用含0.5％苯酚生理盐水作为抗原和血清的稀释液，将布鲁氏菌试管凝集抗原(购自中国兽医药品监察所，批号201202)作1：20稀释(即为抗原应用液)，被检动物血清作1:12.5、l:25、l:50、1:100和1:200稀释。每管加抗原0.5ml与各稀释度血清等量混合(同时设阴阳性血清对照)，振荡摇匀，置37℃±l℃温箱反应24小时，当血清于1：50稀释时，出现50％以上凝集判为阳性；当血清于1：25稀释时，出现50％以上凝集判为可疑。

表1.布鲁氏菌病疫苗无针和有针接种巴马猪后的血清学检测结果

注：“+”表示25％凝集，“++”表示50％凝集，“+++”表示75％凝集，“++++”表示100％凝集，“—”表示不凝集

从表1可以看出，无针注射组免疫剂量为40亿CFU的抗体效价明显高于有针注射组免疫40亿CFU的效果，与有针注射组100亿CFU的抗体效价相当，但无针注射组免疫剂量100亿CFU和200亿CFU的抗体效价明显高于有针注射组相应剂量的效价。

2、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统免疫小尾寒羊效果检测

1)动物免疫

35只小尾寒羊随机分为7组，标记为A、B、C、D、E、F、G组，每组5只，其中：A、B、C组为无针注射组，D、E、F组为有针注射组、G组为空白对照组。

无针注射组：A、B、C组分别以上述二制备的灌装有10亿CFU、25亿CFU、50亿CFU的无针注射安瓿与无针注射器进行皮内免疫，每剂0.2ml。

有针注射组：D、E、F组采用传统规格为0.5mm*20mm的有针注射器进行皮下注射免疫，免疫剂量分别为10亿CFU、25亿CFU、50亿CFU，每剂1ml。

2)免疫安全性评价——DRAIZE评分

在应用灌装布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿及无针注射器免疫小尾寒羊后的7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准为：0分：没有红斑，未见水肿；1分：轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难以察觉；2分：清晰红斑，可看到明显的隆起；3分：中度红斑，隆起可见明显边缘；4分：重度红斑，且有结痂及深度损伤。图4表示免疫后不同时间点，各注射方式对注射部位皮肤的损伤情况评分结果，无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均在注射后第1天出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑，于注射后第2天症状最明显，注射后第3天开始症状减轻，5天内不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的安全性。

3)免疫效果评价——试管凝集抗原检测

于免疫后30d采集各组小尾寒羊血液，分离血清，按试管凝集抗原检测方法测定各组小尾寒羊血清的抗体水平。结果如表2所示。

布鲁氏菌试管凝集抗原检测步骤：

用含0.5％苯酚生理盐水作为抗原和血清的稀释液，将布鲁氏菌试管凝集抗原作1：20稀释(即为抗原应用液)，被检动物血清作1:12.5、l:25、l:50、1:100和1:200稀释。每管加抗原0.5ml与各稀释度血清等量混合(同时设阴阳性血清对照)，振荡摇匀，置37℃±l℃温箱反应24小时，当血清于1：50稀释时，出现50％以上凝集判为阳性；当血清于1：25稀释时，出现50％以上凝集判为可疑。

表2.布鲁氏菌病疫苗无针和有针接种小尾寒羊后的血清学检测结果

血清学检测结果如表2所示：无针注射组免疫剂量为10亿CFU的抗体效价与有针注射组免疫50亿CFU的效价相当，无针注射组免疫剂量25亿CFU和50亿CFU的抗体效价明显高于相应剂量的有针注射组抗体效价。

3、无针注射布鲁氏菌病疫苗系统免疫黄牛效果检测

1)动物免疫

21头黄牛随机分为7组，标记为A、B、C、D、E、F、G组，每组3头，其中：A、B、C组为无针注射组，D、E、F组为有针注射组、G组为空白对照组。

无针注射组：A、B、C组分别以上述二制备的灌装有100亿CFU、250亿CFU、500亿CFU的无针注射安瓿与无针注射器进行皮内免疫，每剂1ml。

有针注射组：D、E、F组采用传统规格为0.5mm*20mm的有针注射器进行皮下注射免疫，免疫剂量分别为100亿CFU、250亿CFU、500亿CFU，每剂5ml。

2)免疫安全性评价——DRAIZE评分

在应用灌装布鲁氏菌病疫苗的无针注射安瓿及无针注射器免疫黄牛后的7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准为：0分：没有红斑，未见水肿；1分：轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难以察觉；2分：清晰红斑，可看到明显的隆起；3分：中度红斑，隆起可见明显边缘；4分：重度红斑，且有结痂及深度损伤。图5表示免疫后不同时间点，各注射方式对注射部位皮肤的损伤情况评分结果，无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均未出现注射不良反应，只于注射2天内出现轻微的红斑与皮肤擦伤情况。由此表明，无针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的安全性。

3)免疫效果评价——试管凝集抗原检测

于免疫后30d采集各组黄牛血液，分离血清，按试管凝集抗原检测方法测定各组黄牛血清的抗体水平。结果如表3所示。

布鲁氏菌试管凝集抗原检测步骤：

用含0.5％苯酚生理盐水作为抗原和血清的稀释液。将布鲁氏菌试管凝集抗原作1：20稀释(即为抗原应用液)，被检动物血清作1:12.5、l:25、l:50、1:100和1:200稀释。每管加抗原0.5ml与各稀释度血清等量混合(同时设阴阳性血清对照)，振荡摇匀，置37℃±l℃温箱反应24小时，当血清于1:100稀释时，出现50％以上凝集判为阳性；当血清于1:50稀释时，出现50％以上凝集判为可疑。

表3.布鲁氏菌病疫苗无针和有针接种黄牛后的血清学检测结果

血清学检测结果如表3所示：无针注射组免疫剂量为100亿CFU的抗体效价与有针注射组免疫250亿CFU的效价相当，而无针注射组免疫剂量250亿CFU和500亿CFU的抗体效价明显高于有针注射组相应剂量组的抗体效价。

Claims

1.无针注射布鲁氏菌病疫苗系统，为如下1)或2)：

1)所示的系统包括灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器，所述布鲁氏菌病疫苗的灌装剂量小于等于该布鲁氏菌病疫苗的标准剂量；

2)所示的系统包括灌装布鲁氏菌病疫苗的容器和可读载体；所述可读载体记载内容包括：所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量小于等于该布鲁氏菌病疫苗标准剂量。

2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于：

所述布鲁氏菌病疫苗的灌装剂量为1/5倍-1倍该布鲁氏菌病疫苗的标准剂量；

所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1倍该布鲁氏菌病疫苗标准剂量。

3.根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于：

所述布鲁氏菌病疫苗的灌装剂量为1/5倍-1/,2倍该布鲁氏菌病疫苗的标准剂量；

4.根据权利要求1-3中任一所述的系统，其特征在于：

所述布鲁氏菌病疫苗为人用布鲁氏菌病疫苗或兽用布鲁氏菌病疫苗。

5.根据权利要求1-4中任一所述的系统，其特征在于：所述布鲁氏菌病疫苗为布鲁氏菌死菌苗、布鲁氏菌减毒活疫苗、组分苗、DNA疫苗、重组亚单位疫苗或基因缺失疫苗等。

6.根据权利要求1-5中任一所述的系统，其特征在于：1)所示的系统或2)所示的系统均还包括与所述灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器配套使用的无针注射装置；

和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。

7.根据权利要求1-6所述的系统，其特征在于：

所述灌装有布鲁氏菌病疫苗的容器为灌装有疫苗的一次性无针注射安瓿，其包括：

预灌装疫苗的一管体，

一体设置于所述管体一端的一无针注射器接头，

设置在所述无针注射器接头内的一喷射口，

易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆，

8.根据权利要求7所述的系统，其特征在于：

所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致；所述止动杆和止动槽为锥形；所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上；

9.根据权利要求1-8中任一所述的系统，其特征在于：

所述布鲁氏菌病疫苗的灌装体积为0.1ml-5ml；

和/或，所述布鲁氏菌病疫苗的灌装体积具体为0.2ml、0.5ml或1ml；

所述可读载体记载内容还包括所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射部位和所述布鲁氏菌病疫苗的无针注射方式；

所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉；

所述无针注射方式为多次连续免疫或单次免疫。

10.权利要求1-9中任一所述系统在制备免疫人或动物产品中的应用；

所述动物具体为猪或羊或牛；

或，一种对动物或人免疫布鲁氏菌病疫苗的方法，为用权利要求1-9中任一所述系统进行免疫，免疫剂量为权利要求1-9中任一所述系统中的无针注射剂量；免疫方式具体为多次连续免疫或单次免疫；免疫部位具体为皮内、皮下或肌肉。