CN105884755A - 氘修饰的碳甙衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物化学领域，涉及氘修饰的碳甙衍生物，具体涉及一种如式I所示的化合物。本发明还涉及氘修饰的碳甙衍生物的制备方法、含有氘修饰的碳甙衍生物的药物组合物以及氘修饰的碳甙衍生物或其药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途。

Description

氘修饰的碳甙衍生物

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及氘修饰的碳甙衍生物。本发明还涉及其制备方法、含氘代修饰的碳甙衍生物的药物组合物、氘代修饰的碳甙衍生物及其药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途。

背景技术

SGLT2是近年来发现的治疗糖尿病的新靶点。血浆中的葡萄糖在肾小球中被过滤，并在肾近端小管再被主动吸收回到血液中，研究表明，SGLT2是控制这一重吸收过程的主要蛋白。因此，抑制SGLT2的活性就能增加尿中葡萄糖的排泄从而降低血糖浓度。Canagliflozin(卡格列净，(1S)-1,5-脱氢-1-C-[3-[[5-(4-氟苯基)-2-噻吩基]甲基]-4-甲基苯基]-D-葡萄糖醇)是目前首个获得FDA批准的SGLT2抑制剂类药物。canagliflozin通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。目前，canagliflozin单药治疗以及与其它降糖药(包括二甲双胍、磺酰脲类、吡格列酮及胰岛素)联合用药的相关研究已经完成。canagliflozin不宜用于1型糖尿病患者、糖尿病酮症酸中毒患者、严重肾损伤、终末期肾脏病患者或透析患者。

FDA要求canagliflozin完善五项上市后研究：心血管转归试验、药物警戒方面的研究(加强对恶性肿瘤、严重胰腺炎、严重过敏反应、光敏性反应、肝异常和不良妊娠结果的监测)、骨安全研究以及两项针对儿童患者的研究(包括药代动力学、药效学研究以及安全有效性研究)。canagliflozin常见的副作用有阴道真菌感染(外阴阴道念珠菌病)及尿路感染。由于canagliflozin与利尿作用相关，所以该药可造成血容量降低，进而引起直立性或体位性低血压(当站立时，血压突然降低)，或因此导致头晕或昏厥症状。这些症状在治疗头三个月较常见。尽管canagliflozin临床疗效显著，但临床上仍继续需要副作用少且作用时间长的高效安全降糖药。

发明内容

本发明一方面提供一种式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R₁、R₂独立地选自H(氢)、D(氘)或OH；R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅分别独立地选自H(氢)或D(氘)，R₃独立地选自C₁-C₄烷基或氘代C₁-C₄烷基，条件是R₁～R₁₅中至少包含一个氘原子。

在本发明的一些优选实施方案中，R₃独立地选自CH₃、CH₂D、CHD₂或CD₃。

在本发明的一些优选实施方案中，式I所示化合物的实例如下：

在本发明的进一步优选的实施方案中，式I所示的化合物的实例如下：

术语“药学上可接受的盐”指保留了特定化合物的游离酸和碱的生物学效力而没有生物学不良作用的盐。药学上可接受的盐的例子包括但不限于：(1)酸加成盐，和无机酸例如盐酸、硫酸、氢溴酸、硝酸、磷酸等形成的盐；或和有机酸例如苹果酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、苯乙酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙酸、肉桂酸、丙酮酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、丙烯酸、扁桃酸等形成的盐；或者(2)碱加成盐，和碱金属例如锂、钠、钾等形成的盐；和碱土金属例如钙、镁等形成的盐；和有机碱例如铵、胆碱、二乙醇胺、赖氨酸、乙二胺、叔丁胺、叔辛胺、三(羟甲基)氨基甲烷、N-甲基葡萄糖胺、三乙醇胺、脱氢松香胺等形成的盐。

本发明中所标记合成的化合物的任何原子若没有特别指定，可代表该原子的任何一种稳定的同位素。除非特别说明，当结构中某一位置被定义为H即氢(H-1)时，该位置仅含天然存在的同位素量。同样，除非特别说明，当结构中某一位置被定义为D即氘(H-2)时，该位置含同位素量至少比天然存在的同位素量(0.015％)大3340倍(即至少会50.1％氘同位素)。

本发明中所标记合成的化合物的氘代率是指标记合成的同位素含量与天然存在的同位素量的比值。本发明中所标记合成的化合物的每个指定氘原子的氘代率可至少为3500倍(52.5％)、至少为4000倍(60％)、至少为4500倍(67.5％)、至少为5000倍(75％)、至少为5500倍(82.5％)、至少为6000倍(90％)、至少为6333.3倍(95％)、至少为6466.7倍(97％)、至少为6566.7倍(98.5％)、至少为6600倍(99％)、至少为6633.3倍(99.5％)。

本发明中的同位素体(isotopologues)是指在化学结构方面仅有同位素组成上不同的化合物。本发明中所标记合成的化合物具有相同的化学结构、仅在其分子的原子组成中同位素的变化。因此，本发明中所标记合成的在特定位置含氘化合物也同样会含非常少的该位置的氢同位素体，本发明中所标记合成的化合物中的某位置的氢同位素体的量取决许多因素，其中包括氘代试剂(D₂O、D₂、NaBD₄、LiAlD₄等)的氘同位素纯度以及引入氘同位素合成方法的有效性。然而，如前所述这种某位置的氢同位素体的量总数将少于49.9％。本发明中所标记合成的化合物中的某位置的氢同位素体的量总数将少于47.5％、40％、32.5％、25％、17.5％、10％、5％、3％、1％或0.5％。

本发明中所标记合成的化合物会有不对称手性中心，包括由氘取代引起的不对称手性中心。本发明中所标记合成的化合物可以是单一的对映体，也可以是对映体混合物。因此，本发明中所标记合成的化合物可能会以消旋体的形式或单一的相应异构体的形式被分离出来。单一的相应异构体含有非常少量的其它异构体，例如小于25％、10％、2％或1％。

本文中，任何未指定为氘的各原子以其天然同位素丰度存在。

本发明再一方面提供了一种制备如I所示的化合物的方法，包括：

a)在还原剂(例如LiAlH₄、Et₃SiH、NaBH₄/AlCl₃、NaBD₄/AlCl₃)存在下，式II化合物被还原成式III化合物；

b)在碱(例如正丁基锂)存在下，式III化合物与式IV化合物反应，得到式V化合物；

c)在还原剂(例如Et₃SiH/BF₃-Et₂O、Et₃SiD/BF₃-Et₂O)存在下，式V化合物被还原成式I化合物。

式II化合物可通过下述方法进行制备：

其中，氘代的2-溴噻吩可从Aldrich等公司购买；也可通过Pd-Pt-NaBH₄组合催化剂或磷酸催化的H-D交换反应制备；也可在溴化试剂NBS存在下，将氘代噻吩转化成2-溴氘代噻吩。在钯催化试剂存在下，式VI化合物与式VII化合物发生C-C偶联反应制得式VIII化合物，其中氘代或非氘代的4-氟苯硼酸VII可从Combiphos等公司购买；氘代4-氟苯硼酸VII也可按文献方法制备(Butters,Mike et al,Angewandte Chemie,InternationalEdition,49(30),5156-5160,S5156/1-S5156/68；2010)。在Lews酸如AlCl₃、ZnO、ZnCl₂等试剂存在下，式VIII化合物与式IX化合物发生胡克酰化反应制得式II化合物。

本发明如式I所示的化合物亦可按下述方法进行制备，

式X化合物可在金属镁存在下反应生成格式试剂，再与式XI化合物按文献报道的方法(例如Good,James A.D.et al,Journal of Medicinal Chemistry,56(5),1878-1893；2013)反应得到式II化合物，其可进一步在还原剂(例如NaBH₄或NaBD₄)存在下，反应得到式XII化合物，然后用三甲基氯硅烷取代得到式XIII化合物。在n-BuLi存在下，将式XIII化合物转变成锂试剂后，与式IV化合物缩合形成式XIV化合物，最后在还原试剂(例如Et₃SiH(D)/BF₃-Et₂O)存在下，反应得到式I化合物。

本发明再一方面提供一种药物组合物，其含有式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或介质。

“药物组合物”是指一种或多种本发明的化合物或其盐与在本领域中通常接受的用于将生物活性化合物输送至有机体，例如人，的载体、赋形剂和/或介质的制剂。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本发明的化合物。

术语“药学上可接受的载体”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些载体和稀释剂。“药学上可接受的赋形剂和/或介质”是指与活性成分一同给药的、有利于活性成分的给药的惰性物质。“药学上可接受的载体、赋形剂和/或介质”包括但不限于可用于人或家畜动物的任何载体、赋形剂、介质、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、崩解剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。所述赋形剂的非限制性实例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇等等。

以纯的形式或以适宜的药物组合物形式的本发明化合物或其药学上可接受的盐的给药可通过提供类似用途的药剂的任何可接受给药模式来进行。本发明的药物组合物可通过将本发明的化合物与适宜的药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂组合而制备，且可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等等。

给予本发明化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。优选的给药途径是口服给药。

本发明的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等等。

在优选的实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药物可接受的载体、赋形剂和/或介质混合，来配制该药物组合物。这些载体、赋形剂和介质能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体赋形剂混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅剂，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的赋形剂包括但不限于：填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉和马铃薯淀粉；以及其它物质，如明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸，也可以使用盐，如藻酸钠。可以根据通常药物实践中公知的方法任选地对糖衣剂的核心进行包衣，尤其使用肠溶包衣。

药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。能够使用适当的赋形剂，例如填充剂、缓冲剂或表面活性剂。

本发明式I所示的化合物的剂量可根据患者的身体状况(例如年龄、体重、待治疗疾病的类型和严重性)和给药途径而变化，并通常在约0.01-300mg/kg/天，临床医生可根据实际情况合宜地选择。

本发明再一方面提供式I所示的化合物或其药学上接受的盐在制备治疗受益于SGLT-2抑制的疾病的药物中的用途，所述受益于SGLT-2抑制的疾病选自糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病变、糖尿病性肾病变、伤口愈合延迟、胰岛素抵抗、高血糖症、高胰岛素血症、脂肪酸血浓度升高、甘油血浓度升高、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合征、动脉粥样硬化或高血压等疾病。

本发明再一方面提供式I所示的化合物或其药学上接受的盐在制备治疗糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、饭后高血糖症等疾病的药物中的用途。所述糖尿病并发症包括但不限于例如糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病变、糖尿病性肾病变等。

本发明式I所示的化合物亦可与其他抗糖尿病剂联用治疗上述疾病或者延缓所述疾病的进展或发病，其他抗糖尿病剂的实例包括但不限于：双胍类(例如，二甲双胍或苯乙双胍)、葡萄糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖、米格列醇)、胰岛素(例如，赖脯胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素、门冬胰岛素、德谷胰岛素)、氯茴苯酸类(例如，瑞格列奈)、磺酰脲类(例如，格列美脲、格列本脲、格列齐特、氯磺丙脲、格列吡嗪)、噻唑烷二酮类(例如，曲格列酮、罗格列酮、吡格列酮)、PPAR-α/γ双重激动剂(例如，莫格列他)、GLP-1受体激动剂(例如，艾塞那肽、利拉鲁肽)和DPP4抑制剂(例如西格列汀、沙格列汀、阿格列汀)。

与原药卡格列净相比，式I所示的化合物具有更优异的药代动力学性质(体内半衰期更长)，有望降低临床的使用剂量，从而降低治疗成本以让更多患者受益。

具体实施方式:

下面的实施例可以更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1化合物3的制备

步骤1)：[2,3,4,5-D₄]噻吩I-2的制备:

在耐压管中称量噻吩I-1(5.0g，59.4mmol)，加入氘代水14ml(700mmol)，冷却到0℃后缓慢加入P₂O₅(28.4g，200mmol)，室温下搅拌5min，再加热到120℃搅拌24小时。冷却到0℃后加入水(80ml)，用CH₂Cl₂提取反应液(3×60ml)。MgSO₄干燥后，滤液在常压下蒸馏除去溶剂后得到油状残留物(5.0g)，常压下蒸馏得到化合物I-24.0g，收率80％。

LCMS测氘含量为98.5％。

HRMS(ESI)m/z：88.0281。

步骤2)：2-溴-[3,4,5-D₃]噻吩I-3的制备

0℃下，将N-溴代丁二酰亚胺NBS(2.1g，11.8mmol)加到式I-2化合物(0.986g，11.2mmol)的AcOD(25ml)和CHCl₃(25ml)的溶液中，在50℃下搅拌反应混合物2小时(直到TLC检测无原料剩余)。冷却到5-10℃，加水(80ml)，分离有机层，将水层再用CH₂Cl₂提取(3×50ml)。无水MgSO₄干燥后，滤液在减压下室温蒸馏除去溶剂后得到残留物，将残留物用硅胶柱层析(EtOac/hexane 6:94)分离提纯产物I-3，收率80％。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ无芳香氢峰。

HRMS(ESI)m/z：164.9321。

步骤3)：4-对氟苯基[3,4,5-D₃]噻吩I-4的制备

1000ml茄形瓶中加入式I-3化合物(13.98g，85.8mmol)，4-氟苯硼酸(12.0g，85.8mmol)，Pd(PPh₃)₄(0.96g，0.85mmol)，乙二醇二甲醚150ml，Na₂CO₃(27.3g，258mmol)的水溶液150ml，加热到80℃反应3h。反应混合物降至室温，倒入冰水中，CH₂Cl₂萃取(2×100ml)，分离出有机层，无水MgSO₄干燥。蒸出溶剂，粗产物柱层析分离得到白色固体I-413.68g，收率90.8％。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.67～7.71(m，2H)，7.22～7.28(m，2H)。

HRMS(ESI)m/z：181.0437。

LCMS测氘含量为98.5％。

步骤4)：2-(5-溴-2甲基苄基)-5-(4-氟苯基)[3,4-D₂]噻吩I-7的制备

(5-溴-2甲基苯基)(5-(4-氟苯基)[3，4-D₂]噻吩-2-基酮I-6:500ml茄形瓶中加入I-4(13.86g，77.8mmol)，2-甲基-5-溴苯甲酰氯I-5(19.08g，81.7mmol)，CH₂Cl₂250ml溶解，0℃下加入AlCl₃(11.4g，85.6mmol)，30min后升至室温反应过夜。反应混合物倒入冰水中，CH₂Cl₂萃取(2×100ml)，有机层无水MgSO₄干燥。蒸出溶剂，向混合物中加入正己烷，过滤，滤饼用正己烷洗，干燥得淡黄色固体I-624.3g，收率83.2％。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.62～7.66(2H,m),7.57(1H,s),7.49～7.52(1H,dd,J₁＝8.2Hz,J₂＝1.8Hz),7.09～7.18(3H,m)，2.33(3H,s)。

¹³C-NMR(300MHz，CDCl₃)：δ188.32,164.99,161.68,153.23,142.62,140.06,135.36,133.14,132.71,130.47,129.48,129.43,128.26,128.15,124.00,118.80,116.41,116.12,19.15。

HRMS(ESI)m/z：375.9908。

2-(5-溴-2甲基苄基)-5-(4-氟苯基)[3，4-D₂]噻吩I-7：

方法一：500ml三颈瓶中加入I-6(10.0g，26.5mmol)，三乙基硅烷(18.5ml，106.5mmol)，CH₂Cl₂50ml，乙腈50ml，降至0℃。向反应混合物中缓慢滴加三氟化硼乙醚溶液(12.5ml，100.5mmol)，加毕，升至室温反应过夜。冰浴下向反应物中加入饱和NaHCO₃溶液50ml，CH₂Cl₂萃取，有机层无水MgSO₄干燥。蒸出溶剂，得到黄色固体I-78.9g，收率93.6％。

方法二：100ml瓶中加入I-6(2.0g，5.3mmol)，四氢呋喃20ml，NaBH₄(0.2g，5.3mmol)，降至0℃，加入AlCl₃(0.77g，5.8mmol)，升至70℃反应5h。将反应混合物倒入冰水中，EA萃取，蒸出溶剂，得到白色固体I-7(1.85g)，收率96％。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.47(2H,dd,J₁＝5.4Hz,J₂＝8.4Hz,Ph),7.33(1H,s,Ph),7.29(1H,d,J＝8.1Hz,Ph),6.99～7.04(3H,m,Ph),4.06(2H,s,Ph-CH₂-thio),2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(300MHz，CDCl₃)：δ163.71,160.51,142.10,140.33,135.28,132.16,130.74,130.69,129.89,127.20,127.10,122.64,119.65,115.87,115.58,33.78,18.98。

HRMS(ESI)m/z：362.0113。

步骤5)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D₂]噻吩-2-基)甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇I-9的制备

(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(三甲基硅烷氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-酮I-8：将葡萄糖酸内酯(30g，168.5mmol)、无水四氢呋喃(250ml)依次加入到1L三口烧瓶中，加入N-甲基吗啉(150ml，1.35mol)。将反应瓶转移至-20度低温浴中，氮气保护下将三甲基氯硅烷(129ml，1.01mol)于恒压漏斗中缓慢滴加到反应液中，整个滴加过程持续30分钟。加毕，继续低温反应15分钟后将反应瓶转移至油浴锅内，开启加热至反应液回流。2小时后TLC检测显示原料完全无剩余，基本均为目的产物。反应瓶降至室温后，加入600ml石油醚，400ml水，充分搅拌后分液，TLC显示水层无明显产物，有机层含目的产物及少量N-甲基吗啉。有机层加入300ml水、25g磷酸二氢钾，充分搅拌后分液。有机层仍有微量N-甲基吗啉，再次加入200ml水、15g磷酸二氢钾，充分搅拌后分液，TLC显示无明显N-甲基吗啉及其它杂质。有机层用无水硫酸钠(100g)干燥后旋蒸得淡黄色油状液体，硅胶柱层析纯化，石油醚-乙酸乙酯(20:1，V/V)，得无色油状液体I-8(65.5g，140.2mmol)，收率83.2％。

(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D₂]噻吩-2-基)甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇I-9：100ml三颈瓶中加入I-7(1.85g，5mmol)、THF(无水处理)15ml、甲苯(无水处理)15ml，N₂保护下，-78℃下缓慢滴加正丁基锂的正己烷溶液(2.13ml，5.4mmol)，反应20min。向反应混合物中滴加溶于5ml甲苯(无水处理)的式I-8化合物(2.12g，4.5mmol)，5min加完。反应30min，加入溶于10ml无水甲醇的甲基磺酸溶液(1.29g，13.5mmol)，5min加完。升至室温反应过夜。冰浴下向反应物中加入饱和NaHCO₃溶液20ml，乙酸乙酯萃取，有机层无水MgSO₄干燥。蒸出溶剂，柱层析分离得到白色固体I-9(0.8g)，收率38％。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.55～7.60(2H,m,Ph),7.43(1H,s,Ph),7.33(1H,d,J＝7.9Hz,Ph),7.13～7.22(3H,m,Ph),4.93(1H,d,J＝5.3Hz,OH),4.68(1H,d,J＝4.9Hz,OH),4.63(1H,d,J＝7.3Hz,OH),4.50(1H,t,J＝5.8Hz,OH),4.11～4.16(2H,dd,J₁＝15.7Hz,J₂＝29.2Hz,Ph-CH₂-thio),3.73～3.79(1H,m,sugar),3.51～3.64(2H,m,sugar),3.37～3.41(1H,m,sugar),3.22～3.26(1H,m,sugar),2.96(3H,s,OMe),2.90～2.92(1H,m,sugar),2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ162.94,159.70,143.69,140.05,137.22,136.90,135.09,130.54,129.37,128.74,126.94,126.83,126.04,115.97,115.68,100.83,77.03,74.33,73.80,70.21,60.94,48.18,33.59,18.66。

HRMS(ESI)m/z：476.1638。

步骤6)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D₂]噻吩-2-基)甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇3的制备

25ml三颈瓶中加入I-9(0.5g，1.05mmol)，三乙基硅烷(0.72ml，4.18mmol)，8mlCHCl₂，N₂保护，降至-70℃。向反应混合物中缓慢滴加三氟化硼乙醚溶液(0.5ml，3.99mmol)。升至0℃反应2h。向反应混合物中加入饱和NaHCO₃溶液10ml，乙酸乙酯萃取，有机层无水MgSO₄干燥。蒸出溶剂，柱层析分离得到白色固体3(0.3g)，收率65％。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56～7.60(2H,dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝5.5Hz,Ph),7.10～7.25(5H,m,Ph),4.83(2H,s,OH),4.65(1H,s,OH),4.35(1H,s,OH),4.12(2H,s,Ph-CH₂-thio),3.98(1H,d,J＝9.2Hz,sugar),3.69～3.73(1H,m,sugar),3.47(1H,m,sugar),3.18～3.28(4H,m,sugar),2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ162.92,159.68,143.47,140.16,138.15,137.26,134.83,130.49,129.56,128.98,126.93,126.82,126.15,123.32,115.91,115.62,81.24,81.10,78.44,74.62,70.41,61.41,33.33,18.70。

HRMS(ESI)m/z：446.1536。

实施例2化合物1的制备

步骤1)：(5-溴-2-甲基苯基)(5-(4-氟苯基)噻吩-2-基酮II-4的制备

2-溴-5-(4-氟苯基)噻吩II-2：将化合物II-1(4.0g，22.47mmol)加入到100ml单口烧瓶中，加入二氯甲烷(40ml)，开启磁力搅拌，冰浴条件下加入N-溴代琥珀酰亚胺(4.0g，22.47mmol)。继续搅拌20分钟后于室温条件下搅拌过夜。TLC显示无明显原料剩余及杂质。反应液减压浓缩除去大部分溶剂二氯甲烷，然后加入80ml石油醚充分搅拌20分钟，减压抽滤，滤液浓缩后得约6.9g白色固体(含部分琥珀酰亚胺)。固体重新加入到50ml石油醚中充分搅拌20分钟后再次减压抽滤，滤液减压浓缩后干燥得5.70g雪白色固体II-2，收率95.3％。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.44-7.48(m，2H)，7.00-7.09(m，3H)，6.95-6.97(m，1H)。

¹³C-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ164.14，160.85，144.75，130.84，127.40，127.30，123.24，116.12，115.83，111.33。

5-溴-N-甲氧基-N,2-二甲基苯酰胺II-3：将2-甲基-5-溴苯甲酸(2.15g，10mmol)加入到50ml单口烧瓶中，依次加入二氯甲烷(25ml)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.07g，11mmol)、二环己基碳二亚胺(2.26g，11mmol)、1-羟基苯并三唑一水物(1.48g，11mmol)。氮气保护下加入三乙胺(1.67ml，12mmol)。室温搅拌过夜，TLC显示原料2-甲基-5-溴苯甲酸仍有较多剩余，补加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.07g，11mmol)、二环己基碳二亚胺(1.50g，7.3mmol)、三乙胺(1.0ml，7.2mmol)。室温搅拌5小时后TLC显示原料无明显剩余。反应液减压抽滤，滤饼用二氯甲烷洗涤两次(5ml×2)。滤液依次加入20ml二氯甲烷和20ml水，分液后水层加入10ml二氯甲烷萃取。合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压蒸馏得产物粗品。粗品用硅胶柱层析纯化，石油醚-乙酸乙酯(20:1，V/V)洗脱，得淡黄色粘稠液体II-3(1.42g，5.48mmol)，收率54.8％。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.39-7.41(m，2H)，7.06-7.09(m，1H)，3.51(s，3H)，3.30(s，3H)，2.27(s，3H)。

¹³C-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ136.99，134.82，133.88，132.05，131.77，128.95，118.78，61.14，26.85，18.58。

(5-溴-2甲基苯基)(5-(4-氟苯基)噻吩-2-基酮II-4:将化合物II-2(0.386g，1.5mmol)加入到干燥15ml三口烧瓶中，加入稀盐酸活化过的镁屑(0.096g，6.0mmol)，氮气置换反应瓶内空气。将无水乙醚(3ml)用注射器注入反应瓶内，开启加热至溶剂回流。将少许碘粒(5粒)快速加入到反应液中，反应液呈深棕色，继续加热搅拌约5分钟后反应液颜色逐渐变浅至无色。继续在回流状态下反应15分钟后直接用于格氏加成反应。将化合物II-3(0.39g，1.5mmol)溶于无水四氢呋喃(2ml)，氮气置换反应瓶内空气。冰浴条件下将自制格氏试剂(3ml，0.5M in Ether)缓慢滴加到反应瓶中。5分钟后撤掉冰浴常温搅拌，2小时后TLC显示有大量产物生成(标准样对照)，将反应液加入到冰水(6g)中，充分搅拌后静置分液，水层用二氯甲烷萃取(2×15ml)。合并有机层，饱和食盐水洗涤(3×10ml)，无水硫酸钠干燥后旋蒸得灰白色固体。将上述固体加入到50ml石油醚中打浆搅拌30分钟，减压抽滤，滤饼烘干后得类白色固体II-4(0.402g)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.62-7.66(m，2H)，7.57(d，J＝1.5Hz，1H)，7.49-7.52(dd，J₁＝1.9Hz，J₂＝5.2Hz，1H)，7.37(d，J＝3.9Hz，1H)，7.25(d，J＝3.8Hz，1H)，7.09-7.18(m，3H)，2.33(s，3H)。

¹³C-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ118.29，164.99，153.27，140.08，136.68，135.33，133.12，132.07，130.46，128.25，128.14，124.09，118.80，116.39，116.10，19.13。

步骤2)：2-(5-溴-2甲基[1,1-D₂]苄基)-5-(4-氟苯基)噻吩II-5的制备:

将化合物II-4(2.06g，5.51mmol)加入到50ml三口烧瓶中，加入乙腈(20ml)，氮气置换反应瓶中空气，快速加入氘代硼氢化钠(0.56g，13.78mmol)、三氯化铝(1.10g，8.26mmol)，将反应瓶转移至55度油浴锅内，有大量气泡逸出，10分钟后TLC显示原料已反应完全。反应瓶冷却至室温，搅拌状态下将反应液缓慢加入到30ml冰水混合液中，大量白色固体析出，减压抽滤，滤饼用10ml水洗涤两次。滤饼干燥后得类白色固体II-5(1.64g，4.52mmol，收率82.0％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.45～7.49(2H,m,Ph)，7.24～7.28(1H,m,thio),7.30～7.34(1H,m,Ph)，6.99～7.05(4H,m,Ph)，6.66～6.67(1H,d,J＝3.3Hz,thio)，2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(CDCl₃,300MHz)：δ163.79,160.52,142.12,141.86,140.24,135.26,132.15,132.02,129.89,127.21,127.11,126.22,122.72,119.65,115.85,115.56,18.94,15.07。

HRMS(ESI)m/z：362.0111。

步骤3)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)[1,1-D₂]甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3，4，5-三醇II-6的制备

将化合物II-5(1.41g，3.88mmol)加入到100ml干燥三口烧瓶中，氮气置换反应瓶中空气。氮气保护下依次将无水甲苯(12ml)、无水四氢呋喃(18ml)用注射器注入反应瓶。将反应瓶置于-78℃低温浴中，待反应液内温降至-78℃后，将正丁基锂溶液(1.71ml，4.27mmol，2.5M)缓慢注入反应液中，反应液很快变为深蓝色，整个滴加过程持续3分钟，反应液内温低于-66℃。30分钟后，将溶于6ml无水甲苯的TMS-葡萄糖酸内酯(1.81g，3.88mmol)溶液缓慢注入反应液中，整个滴加过程持续3分钟，保持反应液内温低于-66℃。反应液继续在-78℃低温浴中搅拌2小时。将甲基磺酸(1.49g，15.52mmol)的无水甲醇(12ml)溶液缓慢注入反应瓶中，保持反应液内温低于-60℃。滴加完毕，将反应瓶置于室外条件下继续搅拌反应3小时。冰浴条件下将80ml饱和碳酸氢钠溶液缓慢加入到反应液中，充分搅拌后分液，水层用80ml乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，饱和氯化钠溶液(3×15ml)洗涤，无水硫酸钠干燥后旋蒸得类白色固体。粗品用硅胶柱层析纯化，乙酸乙酯-甲醇洗脱(10:1，V/V)，得白色固体II-6(1.40g，2.94mmol，收率75.8％)。

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ7.55～7.60(2H,m,Ph),7.44(1H,s,Ph),7.33～7.35(1H,d,J＝7.8Hz,Ph),7.26～7.27(1H,d,J＝3.3Hz,thio),7.13～7.22(3H,m,Ph),,6.76～6.77(1H,d,J＝3.4Hz,thio),4.95(1H,d,5.3Hz,OH),4.71(1H,d,4.9Hz,OH),4.65(1H,d,7.2Hz,OH),4.53(1H,t,5.8Hz,OH),3.75～3.80(1H,m,sugar),3.52～3.65(2H,m,sugar),3.39～3.44(1H,m,sugar),3.20～3.28(1H,m,sugar),2.99(3H,s,OMe),2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ162.94,159.70,143.68,140.13,137.20,136.81,135.05,130.53,129.34,128.70,126.94,126.83,126.12,126.01,123.33,115.95,115.66,100.81,77.03,74.32,73.78,70.22,60.94,48.16,18.63。

HRMS(ESI)m/z：476.1638。

步骤4)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)[1,1-D₂]甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇1的制备

将化合物II-6(1.20g，2.52mmol)加入到50ml三口反应瓶中，依次加入二氯甲烷(20ml)、三乙基硅烷(1.20ml，7.56mmol)。将反应瓶置于-50℃低温浴中。将三氟化硼乙醚(0.96ml，7.56mmol)溶液缓慢注入反应瓶中。待三氟化硼乙醚溶液加毕，将反应瓶置于室温条件下搅拌过夜。将30ml饱和碳酸氢钠溶液缓慢加入到反应液中，充分搅拌后分液，水层用30ml乙酸乙酯萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥后旋蒸得到类白色固体。粗品硅胶柱层析纯化，乙酸乙酯-甲醇洗脱(10:1，V/V)，得白色固体1(900mg)。

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ7.59(2H,dd,J₁＝5.4Hz,J₂＝8.7Hz,Ph),7.27(1H,d,J＝3.5Hz,thio),7.13～7.22(5H,m),6.80(1H,d,J＝3.5Hz,thio),4.90(2H,d,J＝4.4Hz,OH),4.71(1H,d,J＝5.5Hz,OH),4.42(1H,t,J＝5.7Hz,OH),3.97(1H,d,J＝9.2Hz,sugar),3.67～3.73(1H,m,sugar),3.40～3.48(1H,m,sugar),3.12～3.27(4H,m,sugar),2.26(s,3H)。

¹³C-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ162.94,159.70,143.49,140.18,138.16,137.22,134.85,130.51,129.57,128.98,126.96,126.85,126.27,126.17,123.32,115.94,115.65,81.26,81.13,78.45,74.63,70.42,61.42,18.71。

HRMS(ESI)m/z：446.1536。

实施例3化合物4的制备

步骤1)：2-[D₃]甲基5-溴苯甲酸III-2的制备:

在微波耐压管中称量2-甲基5-溴苯甲酸III-1(5.0g，23.3mmol)，NaOD(40％，28.0mmol)，加入氘代水24ml(24g，1.2mol)，室温下搅拌30分钟，加热到160℃搅拌4小时。除去重水，再加入氘代水24ml。加热到160℃搅拌2小时。冷却到0℃后加DCl调pH＝3左右，用CH₂Cl₂提取反应液(3×30ml)。MgSO₄干燥后，滤液在减压下蒸馏除去溶剂后得到油状残留物III-2(4.6g，收率90％)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.70(m，2H)，7.25(m，2H)。

HRMS(ESI)m/z：181.0439。

步骤2)：(5-溴-2-[D₃]甲基苯基)(5-(4-氟苯基)噻吩-2-基酮III-3的制备

方法一

参照实施例1步骤4)制备化合物III-3。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.62～7.66(2H，m)，7.57(1H，m)，7.49～7.52(1H，dd，J₁＝8.2Hz，J₂＝1.8Hz)，7.36～7.38(1H，d，J＝3.8Hz)，7.24～7.25(1H，d，J＝3.8Hz)，7.09～7.18(3H，m)。

HRMS(ESI)m/z：376.9961。

方法二

在微波耐压管中加入化合物II-4(5.0g，13.3mmol)，NaOD(3.0mmol)，加入氘代水24ml(24g，1.2mol)，加热到160℃搅拌4小时。除去重水，再加入新鲜氘代水12ml及THF(12ml)。加热到160℃搅拌4小时。冷却到室温，用CH₂Cl₂提取反应液(3×30ml)。MgSO₄干燥后，滤液在减压下蒸馏除去溶剂后得到油状残留物III-3(4.3g，收率84％)。

步骤3)：2-(5-溴-2-[D₃]甲基苄基)-5-(4-氟苯基)噻吩III-4的制备

将化合物III-3(2.0g，5.31mmol)加入到三口烧瓶中，加入THF(20ml)，氮气置换反应瓶中空气，快速加入铝氢化锂(0.50g，13.3mmol)，将反应瓶转移至55度油浴锅内，有大量气泡逸出，10分钟后TLC显示原料已反应完全。反应瓶冷却至0℃，搅拌状态下加入到0.5ml冰水，0.5ml 15％NaOH及1.5ml冰水到反应混合液中，搅拌2小时后，大量白色固体析出，减压抽滤，滤饼用10ml THF洗涤两次。滤液干燥后蒸馏除去THF，得类白色固体III-4(1.64g，4.52mmol，收率82.0％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.45～7.49(2H，m)，7.24～7.34(2H，m)，6.99～7.05(4H，m)，6.66～6.67(1H，d，J＝3.3Hz)，4.04(2H，s)。

HRMS(ESI)m/z：363.0112。

步骤4)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)甲基)-4-[D₃]甲苯基)-6-羟甲基-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇III-5的制备

参照实施例1步骤5)制备化合物III-5。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.55～7.60(2H，m，Ph)，7.42(1H，s，Ph)，7.32～7.34(1H，d，J＝7.0Hz，Ph)，7.26～7.27(1H，d，J＝3.4Hz，thio)，7.13～7.22(3H，m，Ph)，6.76～6.77(1H，d，J＝3.3Hz，thio)，4.92(1H，s，OH)，4.50～4.64(3H，m，OH)，4.11，4.16(each 1H，s，Ph-CH₂-thio)，3.74～3.77(1H，m，sugar)，3.51～3.62(2H，m，sugar)，3.37(1H，m，sugar)，3.17～3.25(1H，m，sugar)，2.96(3H，s，OMe)，2.90(1H，s，sugar)。

HRMS(ESI)m/z：477.1705。

步骤5)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)甲基)-4-[D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇4的制备

参照实施例1步骤6)制备化合物4。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56～7.61(2H，dd，J₁＝8.6Hz，J₂＝5.5Hz，Ph)，7.26～7.27(1H，d，J＝3.5Hz，thio)，7.10～7.22(5H，m，Ph)，6.78～6.80(1H，d，J＝3.4Hz，thio)，4.89～4.90(2H，d，J＝4.4Hz，OH)，4.69～4.71(1H，d，J＝5.6Hz，OH)，4.39～4.43(1H，t，J＝5.7Hz，OH)，4.11，4.12(each 1H，s，Ph-CH₂-thio)，3.94～3.98(1H，d，J＝9.3Hz，sugar)，3.67～3.72(1H，m，sugar)，3.40～3.47(1H，m，sugar)，3.12～3.27(4H，m，sugar)。

HRMS(ESI)m/z：447.1591。

实施例4化合物5的制备

步骤1)：2-(5-溴-2[D₃]甲基[1’,1’-D₂]苄基)-5-(4-氟苯基)噻吩IV-1的制备

参照实施例2步骤2)制备化合物IV-1。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.44～7.47(2H，m)，7.23～7.34(2H，m)，6.97～7.05(4H，m)，6.64～6.67(1H，d，J＝3.3Hz)。

HRMS(ESI)m/z：365.0237。

步骤2)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)[1,1-D₂]甲基)-4-[1,1,1-D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇IV-2的制备

参照实施例1步骤5)制备化合物IV-2。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.54～7.61(2H，m，Ph)，7.42(1H，s，Ph)，7.32～7.34(1H，d，J＝7.0Hz，Ph)，7.26～7.27(1H，d，J＝3.4Hz，thio)，7.13～7.22(3H，m，Ph)，6.76～6.77(1H，d，J＝3.3Hz，thio)，4.92(1H，s，OH)，4.50～4.64(3H，m，OH)，3.74～3.77(1H，m，sugar)，3.51～3.62(2H，m，sugar)，3.37(1H，m，sugar)，3.17～3.25(1H，m，sugar)，2.96(3H，s，OMe)，2.90(1H，s，sugar)。

HRMS(ESI)m/z：479.1804。

步骤3)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)[1,1-D₂]甲基)-4-[1,1,1-D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇5的制备

参照实施例1步骤6)制备化合物5。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.55～7.60(2H，dd，J₁＝8.6Hz，J₂＝5.5Hz，Ph)，7.26～7.27(1H，d，J＝3.5Hz，thio)，7.10～7.22(5H，m，Ph)，6.78～6.80(1H，d，J＝3.4Hz，thio)，4.89～4.90(2H，d，J＝4.4Hz，OH)，4.69～4.71(1H，d，J＝5.6Hz，OH)，4.39～4.43(1H，t，J＝5.7Hz，OH)，3.94～3.98(1H，d，J＝9.3Hz，sugar)，3.67～3.72(1H，m，sugar)，3.40～3.47(1H，m，sugar)，3.12～3.27(4H，m，sugar)。

HRMS(ESI)m/z：449.1771。

实施例5化合物13的制备

步骤1)：2-(5-溴-2-[D₃]甲基苄基)-5-(4-氟苯基)[3,4-D₂]噻吩V-2:

(5-溴-2-[D₃]甲基苯基)(5-(4-氟苯基)[3,4-D₂]噻吩-2-基酮V-1:参照实施例1步骤4)的方法制备化合物V-1。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.61～7.65(2H，m)，7.57(1H，m)，7.49～7.52(1H，dd，J₁＝8.2Hz，J₂＝1.8Hz)，7.09～7.18(3H，m)。

HRMS(ESI)m/z：379.0040。

2-(5-溴-2-[D₃]甲基苄基)-5-(4-氟苯基)[3,4-D₂]噻吩V-2:参照实施例3步骤3)的方法制备化合物V-2。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.45～7.49(2H，m)，7.24～7.34(2H，m)，6.99～7.05(4H，m)，6.66～6.67(1H，d，J＝3.3Hz)，4.06(2H，s)。

HRMS(ESI)m/z：365.0247。

步骤2)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D2]噻吩-2-基)甲基)-4-[D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇V-3

参照实施例1步骤5)的方法制备化合物V-3。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.55～7.60(2H，m，Ph)，7.42(1H，s，Ph)，7.32～7.34(1H，d，J＝7.0Hz，Ph)，7.13～7.22(3H，m，Ph)，4.92(1H，s，OH)，4.50～4.64(3H，m，OH)，4.11，4.16(each 1H，s，Ph-CH₂-thio)，3.74～3.77(1H，m，sugar)，3.51～3.62(2H，m，sugar)，3.37(1H，m，sugar)，3.17～3.25(1H，m，sugar)，2.96(3H，s，OMe)，2.90(1H，s，sugar)。

¹³C-NMR(DMSO，300MHz)：δ162.97，159.73，143.80，140.16，137.23，136.90，135.10，130.55，129.38，128.76，126.96，126.86，126.14，126.05，123.35，115.59，115.69，100.84，77.06，74.36，73.81，70.25，60.98，48.20，33.63。

HRMS(ESI)m/z：476.1638。

步骤3)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’D₂]噻吩-2-基)甲基)-4-[1,1,1-D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇13。

参照实施例1步骤6)的方法制备化合物13。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56～7.61(2H，dd，J₁＝8.6Hz，J₂＝5.5Hz，Ph)，7.10～7.22(5H，m，Ph)，4.89～4.90(2H，d，J＝4.4Hz，OH)，4.69～4.71(1H，d，J＝5.6Hz，OH)，4.39～4.43(1H，t，J＝5.7Hz，OH)，4.11，4.12(each 1H，s，Ph-CH₂-thio)，3.94～3.98(1H，d，J＝9.3Hz，sugar)，3.67～3.72(1H，m，sugar)，3.40～3.47(1H，m，sugar)，3.12～3.27(4H，m，sugar)。

HRMS(ESI)m/z：449.1701。

实施例6化合物10的制备

步骤1)：2-(5-溴-2-[D₃]甲基[D₂]苄基)-5-(4-氟苯基)[3,4-D₂]噻吩VI-1

参照实施例2步骤2)的方法制备化合物VI-1。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.45～7.49(2H，m)，7.23～7.34(2H，m)，6.97～7.05(3H，m)。

HRMS(ESI)m/z：367.0411。

步骤2)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D₂]噻吩-2-基)[D₂]甲基)-4-[D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇VI-2。

参照实施例2步骤3)制备化合物VI-2。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.53～7.60(2H，m，Ph)，7.42(1H，s，Ph)，7.32～7.34(1H，d，J＝7.0Hz，Ph)，7.13～7.22(3H，m，Ph)，4.92(1H，s，OH)，4.50～4.64(3H，m，OH)，3.74～3.77(1H，m，sugar)，3.51～3.62(2H，m，sugar)，3.37(1H，m，sugar)，3.17～3.25(1H，m，sugar)，2.95(3H，s，OMe)。

HRMS(ESI)m/z：481.1912。

步骤3)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’D₂]噻吩-2-基)[D₂]甲基)-4-[1,1,1-D₃]甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇10

参照实施1步骤6)的方法制备化合物10。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56～7.61(2H，dd，J₁＝8.6Hz，J₂＝5.5Hz，Ph)，7.10～7.22(5H，m，Ph)，4.89～4.90(2H，d，J＝4.4Hz，OH)，4.69～4.71(1H，d，J＝5.6Hz，OH)，4.39～4.43(1H，t，J＝5.7Hz，OH)，3.94～3.98(1H，d，J＝9.3Hz，sugar)，3.67～3.72(1H，m，sugar)，3.40～3.47(1H，m，sugar)，3.12～3.27(4H，m，sugar)。

HRMS(ESI)m/z：451.1814。

实施例7化合物7的制备:

步骤1)：2-(5-溴-2-甲基苯[1’,1’-D₂]苄基5-(4-氟苯基)[2’,3’-D₂]噻吩VII-1

参照实施例1步骤4)的方法制备化合物VII-1。

¹H-NMR(CDCl₃,300MHz)：δ7.47(2H,dd,J₁＝5.4Hz,J₂＝8.4Hz,Ph),7.34(1H,s,Ph),7.29(1H,d,J＝8.1Hz,Ph),6.99-7.04(3H,m,Ph),2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ163.78,160.51,142.05,141.83,140.25,135.27,132.16,132.03,130.74,130.70,129.90,127.21,127.10,119.65,115.87,115.58,18.97。

步骤2)：(3R,4S,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D₂]噻吩-2-基)[D₂]甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇VII-2

参照实施例2步骤3)的方法制备化合物VII-2。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.55-7.60(2H,m,Ph),7.43(1H,s,Ph),7.33(1H,d,J＝7.0Hz,Ph),7.13-7.22(3H,m,Ph),4.88(1H,d,J＝5.3Hz,OH),4.63(1H,d,J＝4.9Hz,OH),4.57(1H,d,J＝7.3Hz,OH),4.46(1H,d,J＝6.0Hz,OH),3.73-3.79(1H,m,sugar),3.52-3.64(2H,m,sugar),3.39-3.42(1H,m,sugar),3.19-3.24(1H,m,sugar),2.96(3H,s,OMe),2.90-2.93(1H,m,sugar),2.26(3H,s,Me)；

¹³C-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ162.92,159.68,143.66,140.04,137.19,136.79,135.03,130.51,129.32,128.68,126.91,126.81,125.99,123.33,115.92,115.64,100.79,77.02,74.32,73.77,70.22,60.94,48.15,18.60。

HRMS(ESI)m/z：478.1713。

步骤3)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’D₂]噻吩-2-基)[D₂]甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇7

参照实施例1步骤6)的方法制备化合物7。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56-7.60(m,2H,dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝5.5Hz,Ph),7.10-7.25(5H,m,Ph),4.86(2H,d,J＝4.4Hz,OH),4.66(1H,d,J＝5.0Hz,OH),4.37(1H,t,J＝5.7Hz,OH),3.98(1H,d,J＝9.1Hz,sugar),3.69-3.74(1H,m,sugar),3.45-3.48(1H,m,sugar),3.15-3.29(4H,m,sugar),2.26(s,3H)。

¹³C-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ162.94,159.69,143.39,140.18,138.16,137.21,134.83,130.47,129.57,128.98,126.94,126.83,126.16,123.22,115.92,115.63,81.26,81.11,78.46,74.64,70.43,61.43,33.33,18.70。

HRMS(ESI)m/z：448.1618。

实施例8化合物6的制备:

(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)[D₂]甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2D-吡喃-3,4,5-三醇6

参照实施例1步骤6)的方法制备化合物6。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56～7.61(2H，dd，J₁＝8.6Hz，J₂＝5.5Hz，Ph)，7.10～7.22(5H，m，Ph)，4.89～4.90(2H，d，J＝4.4Hz)，4.69～4.71(1H，d，J＝5.6Hz)，4.39～4.43(1H，t，J＝5.7Hz)，3.67～3.72(1H，m，sugar)，3.40～3.47(1H，m，sugar)，3.12～3.27(4H，m，sugar)，2.25(s，3H)。

HRMS(ESI)m/z：448.1618。

实施例9化合物28的制备

歩骤1)：2-溴-5-(4-氟苯基)[2,3-D₂]噻酚IX-1

在耐压管中称量式II-1化合物(5.0g，28.1mmol)，加入氘代水14ml(700mmol)，冷却到0℃后缓慢加入P₂O₅(28.4g，200mmol)，室温下搅拌5min，再加热到120℃搅拌24小时。冷却到0℃后加入水(80ml)，用CH₂Cl₂提取反应液(3×60ml)。MgSO₄干燥后，滤液在常压下蒸馏除去溶剂后得到油状残留物式I-4化合物(5.0g)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ7.71-7.67(m,2H),7.22-7.28(t,2H)。

HRMS(ESI)m/z：181.0494。

用式I-4化合物代替式II-1化合物，并参照实施例2步骤1)所述的方法制备式IX-1化合物。

¹H-NMR(CDCl3，300MHz)：δ7.51(m，2H)，7.02(m，2H)。

HRMS(ESI)m/z：257.9481。

歩骤2)：(5-溴-2甲基苯基)(5-(4-氟苯基)[2,3-D₂]噻酚-2-基酮IX-2

用式IX-1化合物代替式II-2化合物，并参照实施例2步骤1)所述的方法制备式IX-2化合物。

¹HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.62～7.66(2H,m),7.57(1H,s),7.49～7.52(1H,dd,J1＝8.2Hz,J2＝1.8Hz),7.09～7.18(3H,m)，2.33(3H,s)。

HRMS(ESI)m/z：375.9906。

歩骤3)：(5-溴-2-甲基苯基)(5-(-4-氟苯基)-[2,3-D₂]噻吩)[D]-甲醇IX-3

将式IX-2化合物(2.65g，7.06mmol)加入到100mL单口烧瓶中，依次加入乙腈(25mL)、[D₄]硼氢化钠(0.40g，10.87mmol)。开启加热至反应液回流，3小时后TLC显示原料反应完全。反应液降温至室温后搅拌状态下加入到20mL重水中，有较多固体析出。混合液减压抽滤。滤饼干燥后得淡黄色固体IX-3(2.51g)。

¹HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.79(s,1H),7.52-7.47(m,2H),7.33(d,1H),7.06-6.98(m,3H),6.66(d,1H),2.25(s,3H)。

HRMS(ESI)m/z：379..0123。

步骤4)：((5-溴-2-甲基苯基)(5-(-4-氟苯基)-[2,3-D₂]噻吩)[D]甲氧基)三甲基硅烷IX-4

将化合物IX-3(1.5g，3.95mmol)加入到25mL三口烧瓶中，依次加入四氢呋喃(15mL)、N-甲基吗啉(0.61mL，5.13mmol)。将反应瓶转移到-20℃低温反应浴中，待反应液温度降至-20℃后缓慢加入三甲基氯硅烷(0.61mL，4.74mmol)。低温下继续搅拌5分钟后反应瓶转移至室温搅拌，三小时后TLC显示原料剩余较少。将30mL石油醚、20mL水依次加入到反应液中，充分搅拌后分液，水相用20mL石油醚再萃取一次，分液，合并有机相，有机相用15mL饱和磷酸二氢钾溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后旋蒸得淡黄色粘稠液体。粗品柱层析纯化，石油醚-乙酸乙酯(10:1，V/V)系统洗脱，得淡黄色粘稠液体式IX-4化合物(1.5g，3.32mmol，收率84.1％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.79(s,1H),7.52-7.47(m,2H),7.32(d,1H),7.06-6.98(m,2H),2.25,(s,3H),0.14(s,9H)。

HRMS(ESI)m/z：451.0514。

步骤5)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[2,3-D₂]噻吩-2-基)羟基[D]甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-2-甲氧基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇IX-5

将化合物IX-4(1.61g,3.55mmol)加入到100mL干燥三口烧瓶中，氮气置换反应瓶中空气。氮气保护下依次将无水甲苯(10mL)、无水四氢呋喃(15mL)用注射器注入反应瓶。将反应瓶置于-78℃低温浴中，待反应液内温降至-78℃后，将正丁基锂溶液(1.56mL,3.9mmol,2.5M)缓慢注入反应液中，反应液很快变为深蓝色，整个滴加过程持续10分钟，保持反应液内温低于-65℃。30分钟后，将溶于50mL无水甲苯的TMS-葡萄糖酸内酯I-8(1.66g,3.55mmol)溶液缓慢注入反应液中，整个滴加过程持续10分钟，保持反应液内温低于-61℃。反应液继续在-78℃低温浴中搅拌2小时。将甲基磺酸(1.36g,14.2mmol)的无水甲醇(15mL)溶液缓慢注入反应瓶中，保持反应液内温低于-60℃。滴加完毕，将反应瓶置于室外条件下继续搅拌反应3小时。冰浴条件下将30mL饱和碳酸氢钠溶液缓慢加入到反应液中，充分搅拌后分液，水层用20mL乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，饱和氯化钠溶液(3×10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后旋蒸得类白色固体。粗品用硅胶柱层析纯化，乙酸乙酯-甲醇洗脱(10:1,V/V)，得白色固体式IX-5化合物(1.12g,收率63.9％)。

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ7.57～7.65(3H,m,Ph),7.36～7.38(1H,m,thio),7.11～7.29(m,3H,Ph),4.93(1H,d,5.3Hz,OH),4.64～4.69(2H,m,OH),4.49～4.51(1H,m,OH),3.73～3.76(1H,m,sugar),3.54～3.61(2H,m,sugar),3.38～3.43(1H,m,sugar),3.20～3.30(1H,m,sugar),2.99(3H,s,OMe),2.25(3H,s,Me)。

HRMS(ESI)m/z：493.1652。

步骤6)：(2S,3R,4R,5S,6R)-2-3-((5-(4-氟苯基)[3’,4’-D₂]噻吩-2-基)甲基)-4-甲苯基)-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇28

25ml三颈瓶中加入式IX-5化合物(0.5g，1.03mmol)，三乙基硅烷(0.72ml，4.18mmol)，8ml CHCl₂，N₂保护，降至-70℃。向反应混合物中缓慢滴加三氟化硼乙醚溶液(0.5ml，3.99mmol)。升至0℃反应2h。向反应混合物中加入饱和NaHCO₃溶液10ml，乙酸乙酯萃取，有机层无水MgSO₄干燥。蒸出溶剂，柱层析分离得到白色固体式28化合物(0.3g)，收率65％。

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.56～7.60(2H,dd,J1＝8.6Hz,J2＝5.5Hz,Ph),7.10～7.25(5H,m,Ph),4.83(2H,s,OH),4.65(1H,s,OH),4.35(1H,s,OH),4.12(1H,s,Ph-CHD-thio),3.98(1H,d,J＝9.2Hz,sugar),3.69～3.73(1H,m,sugar),3.47(1H,m,sugar),3.18～3.28(4H,m,sugar),2.26(3H,s,Me)。

¹³C-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ162.92,159.68,143.47,140.16,138.15,137.26,134.83,130.49,129.56,128.98,126.93,126.82,126.15,123.32,115.91,115.62,81.24,81.10,78.44,74.62,70.41,61.41,33.33(m),18.70。

HRMS(ESI)m/z：447.1593。

实施例9卡格列净、化合物1、化合物3和化合物7对正常SD大鼠糖耐量和尿糖排泄量的影响

一)试验方法

大鼠[CD(SD)体重160-180克]20只，禁食18h不禁水，按血糖和体重随机分为5组：正常对照组、卡格列净(1.0mg/kg)组、化合物1(1.0mg/kg)组、化合物3(1.0mg/kg)组、化合物7(1.0mg/kg)组，灌胃给予相应药物(1.0mg/kg)，正常组给予等体积注射用水。给药后30min，ig给予大鼠葡萄糖3g/kg，给药体积为1.5ml/100g，大鼠禁食至实验结束，尾尖采血测定给药前及给GLU后0.5h、1、2、4、6、8、24h的血糖，收集给予葡萄糖后0–2、2–4、4-6、6-10、10–24h大鼠尿液，(4、6h收集尿液后每只大鼠补充水，ig 5mL注射用水)，测定尿量并且取1ml，1000r/min*5min离心后，测定尿糖。检测指标及计算方法如下：

(1)AUC(0～t_n)＝(给药前+给药后t₀)*t₀/2+(给药后t₀+给药后t₁)*(t₁-t₀)/2+(给药后t₁+给药后t₂)*(t₂-t₁)/2+......+(给药后t_n-1+给药后t_n)*(t_n-t_n-1)/2

(2)血糖下降率(％)＝(正常组－给药组)/正常组×100％

(3)血糖AUC下降率(％)＝(正常组血糖AUC－给药组血糖AUC)/正常组血糖AUC×100％

(4)糖排泄量＝尿糖*尿液体积

(5)糖排泄率＝糖排泄量/给糖量

二)数据统计处理方法

数据按统计要求，用平均值±标准差(x±s)表示，所有数据使用Microsoft Excel软件进行t检验，并分析结果。

三)实验结果

(1)对正常大鼠糖耐量的影响

正常对照组大鼠灌胃给予葡萄糖后，30min血糖值显著升高，60min血糖达最高，120min血糖值出现下降。与正常对照组比较，除化合物1组动物给糖后大鼠血糖时间曲线下面积AUC(0-24)显著性减少(p<0.05)以外，各组大鼠在糖负荷0.5h、1、2、4、6、8、24h血糖与不同时段血糖AUC无显著差异。给糖后2h对大鼠血糖下降率分别为：15％、-13％、-8％、-4％，大鼠血糖AUC(0-2h)下降率分别为：5％、3％、0％、0％；给糖后24h对大鼠血糖下降率分别为：15％、18％、6％、13％，大鼠血糖AUC(0-24h)下降率分别为：13％、12％、4％、7％。结果见表1-4。

表1.对糖负荷大鼠血糖的影响(n＝4)

表2.对糖负荷大鼠血糖-AUC的影响(n＝4)

表3.对糖负荷大鼠血糖AUC下降的影响

表4.对糖负荷大鼠血糖下降的影响

(2)对正常大鼠尿糖排泄量的影响

与正常组比较，各组均能增加糖负荷大鼠24h内的葡萄糖排泄量，由大到小依次为化合物1(1mg/kg)组≈卡格列净(1mg/kg)组＞化合物7(1mg/kg)组≈化合物3(1mg/kg)组。卡格列净、化合物1、化合物3、化合物7(1mg/kg)组大鼠0–10h尿糖排泄率分别为：11.6％、14.7％、10.5％、11.2％，与正常对照组相比差异极显著(P＜0.01)；各组大鼠10-24h尿糖排泄率分别为：2.4％、1.5％、2.2％、1.6％。表明排糖主要集中在0～10h，10～24h时段排糖量较少。各实验组大鼠在0-2、2-4、4-6、6-10、10-24h的排糖量相差不大，降尿糖作用比较缓和，且与其降血糖作用趋势相应。结果见表5-10。

表5.对糖负荷大鼠不同时间段尿排糖量影响(n＝4)

注：与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01

表6.对糖负荷大鼠不同时间段尿量影响(n＝4)

注：与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表7.对糖负荷大鼠不同时间段尿糖排泄率的影响(n＝4)

注：与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表8.对糖负荷大鼠累积尿排糖量影响(n＝4)

注：与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表9.对糖负荷大鼠累积尿量影响(n＝4)

注：与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表10.对糖负荷大鼠累积尿糖排泄率的影响(n＝4)

注：与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

四)小结

对正常SD大鼠降血糖作用由大到小依次为：化合物1(1mg/kg)组≈卡格列净(1mg/kg)组＞化合物7(1mg/kg)组≈化合物3(1mg/kg)组。

对尿糖的排泄作用由大到小为：化合物1(1mg/kg)组＞卡格列净(1mg/kg)组＞化合物7(1mg/kg)组≈化合物3(1mg/kg)组。

实施例10卡格列净与化合物1在人肝微粒体中代谢稳定性研究

(1)体外温孵操作

1)拿出人肝微粒体3管(每管50μL，20mg/mL)，每管肝微粒体温孵溶液体系：395μLPBS，加入50μL肝微粒体溶液(5.0mg/mL)，5μL底物，混匀即得。

2)称取约8.4mg NADPH加入500μL PBS溶解，加入500μL MgCl₂混匀。

3)分取450μL(n＝2)温孵溶液用恒温摇床温孵，于37℃预温孵5min。NADPH混合溶液(含MgCl₂)亦于37℃预温孵5min待用。

4)吸取54μL温孵溶液至1.5mL Eppendorf管中，加入6μL pH7.4PBS缓冲液，涡旋混匀，即为0min样品。

5)剩余温孵溶液中每份加入44μL NADPH混合溶液(含MgCl₂)启动反应(其中有机溶剂的比例为1％)，37℃温孵并计时。到达设定时间后，转移60μL样品至已加入120μL反应终止液的1.5mL Eppendorf管中终止反应。

6)涡旋混匀3min，于4℃、12000rpm离心3min，取80μL上清夜，加入80μL纯水，混匀，进行LC-MS/MS分析。

7)如有异常现象及操作，及时记录。

(2)微粒体样品处理

吸取60μL微粒体样品，加入200μL含内标的冰乙腈沉淀，涡旋震荡5min后，离心(13800rpm，4℃)10min。TQ1501-754a、TQ1501-001a、DEX吸取上清液80μL，在96孔板中加入80μL的1:1的乙腈：水，涡旋混匀，1μL进样分析。

(3)数据采集和处理方法

此次试验主要看化合物在体外的消除情况，以0点作为参照，以与内标峰面积的比值作为数据进行比较。因此没有做每个化合物的相应的标准曲线及质控。

(4)药动学参数的估算

清除率计算公式：V/M＝1/protein concentration

(5)实测数据结果

i.阳性对照右美莎芬(DEX)结果

体外1μM DEX温孵120min，相对于0min变化数值参见表11。

表11体外1μM DEX温孵相对0min剩余百分比

ii.体外卡格列净及化合物1温孵结果

将卡格列净、化合物1温孵90min，相对于0min变化数值参见表12。

表12卡格列净、化合物1温孵90min内，相对于0min剩余百分比

iii.体外温孵参数拟合结果

阳性药物、卡格列净、化合物1参数拟合结果见表13。

表13阳性药物、卡格列净、化合物1参数拟合结果

(6)小结

1)阳性药物右美沙芬的半衰期为34.79min，介于30～50min，符合要求，提示实验结果可靠。

2)卡格列净与化合物1在人肝微粒体中90min内有一定代谢，但半衰期均>200min，提示代谢非常缓慢。

3)相同浓度的化合物1比卡格列净在人肝微粒体体系中的半衰期更长，稳定性更好。

Claims (8)

1.一种式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R₁、R₂独立地选自H、D或OH；R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅分别独立地选自H或D，R₃独立地选自C₁-C₄烷基或氘代C₁-C₄烷基，条件是R₁～R₁₅中至少包含一个氘原子。

2.权利要求1的化合物，其中R₃独立地选自CH₃、CH₂D、CHD₂或CD₃。

3.权利要求1的化合物，其选自以下化合物：

4.权利要求1的化合物，其选自以下化合物：

5.一种药物组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或介质。

6.权利要求1-4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、权利要求5的药物组合物在制备治疗受益于SGLT-2抑制的疾病的药物中的用途。

7.权利要求6的用途，其中所述受益于SGLT-2抑制的疾病选自糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病变、糖尿病性肾病变、伤口愈合延迟、胰岛素抵抗、高血糖症、高胰岛素血症、脂肪酸血浓度升高、甘油血浓度升高、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合征、动脉粥样硬化或高血压。

8.权利要求7的用途，其中所述受益于SGLT-2抑制的疾病选自糖尿病。