CN105873440B

CN105873440B - 抑制tie2激酶的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途

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Publication number: CN105873440B
Application number: CN201380081931.2A
Authority: CN
Inventors: D·L·弗林; M·D·考夫曼; B·史密斯; M·S·鲁道兹
Original assignee: Deciphera Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Deciphera Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2013-11-07
Filing date: 2013-11-07
Publication date: 2018-06-01
Anticipated expiration: 2033-11-07
Also published as: JP2017500371A; EP3065549A1; WO2015069266A1; KR20210063475A; KR20160070188A; AU2013404949B2; AU2013404949A1; JP6568093B2; EP3065549A4; CN108464981A; CA2929715A1; CN108464981B; CN105873440A; AU2021200113A1; AU2019200261A1

Abstract

本发明涉及抑制TIE2激酶的方法，其适用于治疗肿瘤生长、侵袭性、内渗、扩散、癌转移和免疫抑制。具体来说，本发明涉及使用式I的1‑(3‑叔丁基‑1‑(喹啉‑6‑基)‑1H吡唑‑5‑基)‑3‑(2‑氟‑4‑(2‑(甲基氨甲酰基)吡啶‑4‑基氧基)苯基)脲和其盐的方法。

Description

抑制TIE2激酶的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途

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技术领域

本发明涉及抑制TIE2激酶的方法，其适用于治疗肿瘤生长、肿瘤侵袭性、肿瘤内渗、肿瘤扩散、肿瘤癌转移和肿瘤免疫耐受性。具体来说，本发明涉及使用式I组合物的方法，所述式I组合物在本文中描述为TIE2的强力抑制剂，用于治疗乳癌生长、侵袭性、内渗扩散、癌转移和免疫耐受性。

背景技术

内膜内皮细胞激酶-2(TIE2)基本上限于在血管的内皮细胞中和在骨髓衍生的TIE2 表达单核细胞(TEM)的子集中表达。TIE2为血管生成素1(ANG1)、血管生成素2(ANG2)和血管生成素4(ANG4)的受体，且这一信号传导系统在血管新生(新血管从现有血管出芽)和血小管生成(新血管从头形成)两者中起到重要作用。TEM为循环单核细胞和组织巨噬细胞的子集，其在肿瘤模型中具有促血管生成和促血管发生活性(De Palma MD 等人，《癌细胞》(Cancer Cell)2005；8：211-226)。TIE2抑制会降低TEM与血管缔合的能力(Mazzieri R，《癌细胞》2011；19：512-526)且显著减小这一巨噬细胞子集的促血管生成活性(De PalmaM，《临床癌症研究》(Clin Cancer Res)2011； 17(16)：5226-5232)。

细胞毒性化学疗法、放射疗法和抗血管生成治疗会损坏肿瘤相关的血管，由此产生低氧肿瘤环境。低氧肿瘤环境通过活化血管内皮细胞中从血管内皮生长因子(VEGF) /VEGFR2路径到ANG/TIE2路径的血管生成开关来引起反弹的肿瘤血管形成。促血管发生TEM从骨髓募集到这些低氧肿瘤部位通过将肿瘤微环境中的TEM与内皮细胞缔合而促进这种血管再形成。TEM和TIE2表达内皮细胞由此被认为在这些治疗之后在肿瘤的血管再形成中起到重要作用，由于残余肿瘤细胞的生长而引起进展(De Palma M等人 Trends Immunol2007；28：519-524)。

TIE2还为破骨细胞分化的介体，且TIE2抑制在4T1小鼠乳癌模型中引起溶骨侵袭减少且减少肿瘤生长(Dales JP等人Int J Oncol 2003；22：391-397)。除TIE2在肿瘤微环境的内皮细胞、单核细胞/巨噬细胞和破骨细胞上的生理表达以外，TIE2还展示出存在于乳癌细胞上。TIE2的肿瘤细胞表达与转移性疾病的风险提高和对多变量分析的预后的独立预测因子相关联(Min Y等人《癌症研究》(Cancer Res)2010；70：2918-2828)。

值得注目地，TIE2表达组织巨噬细胞的子集位于被称为癌转移的肿瘤微环境(TMEM)的特殊血管结构中。近来的观察结果已将TMEM结构中的TIE2表达巨噬细胞联系为乳癌细胞外渗到血管循环中以及后续扩散到远端转移性部位所必需的 (Condeelis J，Pollard JW.《细胞》(Cell)2006；124：263-6；Ginter PS等人《癌症研究》 2012；72(24增刊)：摘要#P6-02-04)。因此，对TMEM结构中的TIE2和巨噬细胞的抑制可能引起新的癌转移减少。

TIE2表达组织巨噬细胞(TEM)近来已展示出在乳癌免疫耐受性中起作用。来自乳房肿瘤的TEM能够抑制肿瘤特异性免疫反应。具体来说，TEM的抑制功能类似地由TIE2 和VEGFR激酶活性驱动。从乳癌组织分离的TEM可充当抗原呈现细胞，其仅引发T 细胞的微弱增殖。阻断TIE2和VEGFR激酶活性诱导TEM将其表型变成具有骨髓树突状细胞特征具有稳固抗原呈现的细胞。TEM的免疫抑制活性也与乳房肿瘤中的T调节细胞的高CD86表面表达和广泛参与相关联。TIE2和VEGFR激酶活性为维持高CD86 表面表达水平以及将T细胞转化成免疫抑制性调节细胞所需要的(Ibberson M等人《临床癌症研究》2013；19：3439-3449)。

多瘤病毒中T抗原(PyMT)同基因型小鼠乳癌模型使用小鼠乳房肿瘤病毒(MMTV)启动子、乳房特异性启动子以在小鼠乳房组织中表达PyMT。在这一模型中，将PyMT 乳癌细胞植入小鼠乳房脂肪垫，且这些癌症转移且引起小鼠死亡。不同于异种移植模型， PyMT模型使用完全具有免疫能力的小鼠。已知这一模型中的癌转移通过TMEM血管结构中的TIE2表达巨噬细胞来调节。因此，需要与TIE2相关的疾病的新颖的治疗。

发明内容

本发明的方法用于抑制TIE2激酶。由于这种抑制，本发明适用于针对肿瘤生长、侵袭性、内渗、扩散、癌转移和肿瘤免疫耐受性的治疗或预防。具体来说，本发明涉及使用式I组合物的方法，所述式I组合物如下所述为TIE2的强力抑制剂，用于治疗乳癌生长、侵袭性、内渗、扩散、癌转移和免疫耐受性：

其中

n为0到7的整数；

X为医药学上可接受的盐的碱性基团；

其限制条件为当n为0时，所述式I组合物为母体游离碱。在一些实施例中，HX 不存在，借此式I的结构为母体游离碱。

式I组合物还用于其它癌症，其中肿瘤细胞中或肿瘤微环境中的TIE2表达通过介导原发性肿瘤生长、原发性肿瘤侵袭性、肿瘤内渗到血流中、肿瘤细胞扩散、肿瘤癌转移到远端组织或肿瘤免疫耐受性的机制来引起肿瘤进展。因此，式I组合物对TIE2激酶的抑制用于通过抑制包括原发性肿瘤生长、原发性肿瘤侵袭性、肿瘤内渗到血流中、肿瘤细胞扩散、肿瘤癌转移到远端组织或肿瘤免疫耐受性的过程来用于治疗癌症。

TIE2激酶已展示出会成为以下各者的癌症进展的原因：神经胶质瘤(Liu等人，Oncotarget(2010)1：700-709；Brunckhorst等人，《癌症研究》(2010)70：7283-7293)、黑素瘤(Helfrich等人，《临床癌症研究》(2009)15：1384-1392)、卵巢癌(Karlan等人，《临床肿瘤学杂志》(J.Clinical Oncology)(2012)30：362-370)、结肠直肠癌(Ahmad 等人，《癌症》(Cancer)(2001)92：1138-1143；Hashizume等人，《癌症研究》(2010) 70：2213-2223)、肝细胞癌(Matsubara等人，《肝脏病学》(Hepatology)(2013)57： 1416-1425；Mitsuhashi等人，《肝脏病学》(2003)37：1105-1113；Tanaka等人，《临床研究杂志》(J.Clin Invest)(1999)103：341-345)以及血液癌症(Muller等人，《白血病研究》(Leukemia Research)(2002)26：163-168；Hou等人，《白血病研究》(2008)32： 904-912)。

附图说明

图1展示出使用式II组合物、太平洋紫杉醇或其组合抑制原发性PyMT肿瘤生长。

图2展示出使用式II组合物、太平洋紫杉醇或其组合抑制PyMT肿瘤巨噬细胞聚积。

图3展示出使用式II组合物、太平洋紫杉醇或其组合抑制PyMT肿瘤TIE2表达细胞聚积。

图4展示出使用式II组合物、太平洋紫杉醇或其组合抑制PyMT乳癌模型中的肺癌转移。

图5展示出比较太平洋紫杉醇与太平洋紫杉醇和式II组合物的组合的活性的PyMT乳癌模型中的肺癌转移的抑制。

图6展示出使用艾日布林作为单一药剂或与式II组合物组合抑制PyMT乳癌模型中的肺癌转移。

图7展示出艾日布林作为单一药剂或与式II组合物组合的酶促和体内活性。

具体实施方式

定义：

术语“式I组合物中的医药学上可接受的盐的碱性基团”包括(但不限于)水溶性和水不溶性盐，如经取代或未经取代的苯磺酸盐、乙酸盐、氨芪磺酸盐(4，4-二氨基芪 -2，2-二磺酸盐)、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、钙、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、克拉维酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙内酰胺苯胂酸盐、六氟磷酸盐、己基间苯二酚酸盐、海卓胺、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、镁、苹果酸盐、马来酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、甲基溴、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、半乳糖二酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(1，1-亚甲基-双-2-羟基-3-萘甲酸盐，恩波酸盐)、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、苦味酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸酯、硫酸盐、磺基水杨酸盐、苏拉酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘和戊酸盐。碱性基团的特定实例包括对甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐和甲磺酸盐。

术语“盐”是指医药学上可接受之盐

术语“医药学上可接受的盐”也是指具有酸性官能团(如羧酸官能团)和碱的本发明的组合物的盐。

关于个体的术语“治疗”是指改善个体的病症的至少一种症状。治疗可为治愈、改善或至少部分减轻病症。

如本发明中所使用的术语“投与(administer)”、“投与(administering)”或“投与(administration)”是指向个体直接投与组合物或化合物的医药学上可接受的盐或组合物，或向个体投与组合物或化合物的医药学上可接受的盐或组合物的前药衍生物或类似物，其可在个体身体内形成等效量的活性化合物。

“有效量”当与医学用途结合使用时为有效提供相关疾病的致病率的可测量的治疗、预防或减小的量。

本发明涉及针对肿瘤生长、侵袭性、内渗、扩散、癌转移和肿瘤免疫耐受性的治疗(阻断)或预防的方法。所述方法包含向需要对这些病况的预防作用的治疗或减少的患者投与有效量的本文中在调节TIE2抑制的给药方案中描述的式I组合物。

本文所述的实现治疗作用所需的组合物的量可根据用于具体目的的常规程序凭经验确定。通常，出于治疗性目的投与治疗剂(例如本文所述的式I或II组合物(和/或额外药剂))，治疗剂以药理学有效剂量给予。“药理学有效量”、“药理学有效剂量”、“治疗有效量”或“有效量”是指足以产生所需生理作用的量或能够实现所需结果的量，尤其对于治疗病症或疾病来说。如本文所用的有效量将包括足以例如延迟病症或疾病的症状的发展、改变病症或疾病的症状的过程(例如减慢疾病的症状的进展)、减少或消除病症或疾病的一种或多种症状或表现、和逆转病症或疾病的症状的量。举例来说，向罹患癌症的患者投与治疗剂不仅在根除或改善潜在病况时，而且在患者报导与疾病相关的症状的严重度或持续时间减少(例如肿瘤负荷减少、循环肿瘤细胞减少、无进展存活率提高)时提供治疗益处。治疗益处还包括暂停或减缓潜在疾病或病症的进展，与是否实现改善无关。

在本发明的一个实施例中，式I组合物为式II的1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑 -5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐，其为TIE2(血管生成素配体的受体酪氨酸激酶)的强力抑制剂。

式I组合物用于癌症，其中肿瘤细胞中或肿瘤微环境中的TIE2表达通过介导原发性肿瘤生长、原发性肿瘤侵袭性、肿瘤内渗到血流中、肿瘤细胞扩散、肿瘤癌转移到远端组织或肿瘤免疫耐受性的机制来引起肿瘤进展。因此，式I组合物对TIE2激酶的抑制用于通过抑制包括原发性肿瘤生长、原发性肿瘤侵袭性、肿瘤内渗到血流中、肿瘤细胞扩散、肿瘤癌转移到远端组织或肿瘤免疫耐受性的过程来用于治疗癌症。

式I组合物的治疗浓度阻断肿瘤微环境中已知会引起肿瘤生长、侵袭、内渗、扩散、癌转移或肿瘤诱导的免疫耐受性的细胞。肿瘤微环境中的所述细胞类型包括TIE2表达单核细胞、TIE2表达巨噬细胞和TIE2表达内皮细胞。

对血管生成素/TIE2信号传导起反应的肿瘤包括(但不限于)乳癌、卵巢癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、结肠直肠癌和血液恶性疾病。

在另一实施例中，当HX不存在时式I组合物为游离碱化合物1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，具有结构：

式I组合物可以单一药剂形式或与已知治疗癌症的其它治疗剂组合投与。所述其它治疗剂包括放射疗法、抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗雄激素、类固醇、抗EGFR剂、激酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂、DNA甲基化抑制剂、抗HER2剂、抗血管生成剂、蛋白酶体抑制剂、沙立度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)、抗体-药物结合物 (ADC)、免疫调节剂或癌症疫苗。

有效量、毒性和治疗效果可以通过细胞培养或实验动物中的标准制药程序，例如通过测定LD50(群体中约50％死亡的剂量)和ED50(群体中约50％治疗有效的剂量)来测定。剂量可以视所采用的剂型和所利用的投药途径而变化。毒性与治疗作用之间的剂量比为治疗指数且其可表示为比率LD50/ED50。在一些实施例中，展现较大治疗指数的组合物和方法为优选的。治疗有效剂量可最初从体外分析估计，包括例如细胞培养分析。此外，剂量可在动物模型中调配以实现循环血浆浓度范围，其包括如在细胞培养中或在适当动物模型中所测定的IC50。血浆中所描述组合物的水平可例如通过高效液相色谱测量。任何特定剂量的作用可通过合适的生物分析来监测。剂量可由医师确定且根据需要调整以适合所观测的治疗作用。

在某些实施例中，预防作用将引起至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约70％、或至少约90％的可定量变化。在一些实施例中，所述作用将引起约10％、约20％、约30％、约50％、约70％、或甚至约90％或更多的可定量变化。治疗益处还包括暂停或减缓潜在疾病或病症的进展，与是否实现改善无关。

当式I或II的组合物与其它抗癌剂组合使用时，其它抗癌剂可与式I或II的组合物的给药时程无关地给药。其它抗癌剂可以其先前确定的治疗剂量和给药时程给药，或其剂量且给药时程可在与式I或II的组合物组合使用时经改动以优化功效、安全性或耐受性。

另外，本文所述的任何式I或II的组合物(和/或额外药剂)可以包含医药学上可接受的载剂或媒剂的组合物的组分形式投与个体。所述组合物可任选地包含合适量的医药学上可接受的赋形剂以便提供用于适当投与的形式。

药物赋形剂可为液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。药物赋形剂可为例如盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶态二氧化硅、尿素等。另外，可使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一个实施例中，医药学上可接受的赋形剂当投与个体时为无菌的。当本文所述的任何药剂静脉内投与时，水为适用的赋形剂。还可以使用盐水溶液和右旋糖水溶液以及甘油溶液作为液体赋形剂，特别是用于可注射溶液。合适的药物赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、粉末、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、无水脱脂奶、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，本文所述的任何药剂还可以包含少量润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。

式I组合物可与包括化学治疗剂、靶向治疗剂、生物制剂或放射线疗法的其它药剂组合使用。

式I组合物可与化学治疗剂组合使用，所述化学治疗剂包括(但不限于)抗微管蛋白剂(太平洋紫杉醇(paclitaxel)、用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子、艾日布林(eribulin)、多西他赛(docetaxel)、伊沙匹隆(ixabepilone)、长春新碱(vincristine))、长春瑞滨(vinorelbine)、DNA烷基化剂(包括顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、替莫唑胺(temozolomide))、DNA嵌入剂(包括多柔比星(doxorubicin)、聚乙二醇化脂质体多柔比星、道诺霉素(daunorubicin)、艾达霉素(idarubicin)和表柔比星(epirubicin))、5-氟尿嘧啶、卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、地西他滨(decitabine)、5-氮杂胞苷、吉西他滨(gemcitabine)和甲氨蝶呤(methotrexate)。

式I组合物可与激酶抑制剂组合使用，所述激酶抑制剂包括(但不限于)埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatanib)、依维莫司(everolimus)、坦罗莫司(temsirolimus)、LY2835219、LEE011、PD 0332991、克卓替尼(crizotinib)、卡博替尼(cabozantinib)、舒尼替尼(sunitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、索拉非尼(sorafenib)、瑞格非尼(regorafenib)、阿西替尼(axitinib)、达沙替尼(dasatinib)、伊马替尼(imatinib)、尼罗替尼(nilotinib)、维罗非尼(vemurafenib)、达拉菲尼(dabrafenib)、曲美替尼 (trametinib)、艾德昔布(idelalisib)和喹杂替尼(quizartinib)。

式I组合物可与抗雌激素剂组合使用，所述抗雌激素剂包括(但不限于)他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群(fulvestrant)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)和依西美坦(exemestane)。

式I组合物可与抗雄激素剂组合使用，所述抗雄激素剂包括(但不限于)乙酸阿比特龙酯(abiraterone acetate)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、氟他胺(flutamide)、乙酸环丙孕酮(cyproterone acetate)。

式I组合物可与类固醇剂组合使用，所述类固醇剂包括(但不限于)强的松(prednisone)和地塞米松(dexamethazone)。

式I组合物可与拓扑异构酶I抑制剂组合使用，所述拓扑异构酶I抑制剂包括(但不限于)伊立替康(irinotecan)、喜树碱(camptothecin)和拓扑替康(topotecan)。

式I组合物可与拓扑异构酶II抑制剂组合使用，所述拓扑异构酶II抑制剂包括(但不限于)依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)和米托蒽醌(mitoxantrone)。

式I组合物可与组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂组合使用，所述组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂包括(但不限于)伏立诺他(vorinostat)、罗米地辛(romidepsin)、帕比司他(panobinostat)、丙戊酸(valproic acid)和贝林诺他(belinostat)。

式I组合物可与DNA甲基化抑制剂组合使用，所述DNA甲基化抑制剂包括(但不限于)DZNep和5-氮杂-2′-脱氧胞苷。

式I组合物可与蛋白酶体抑制剂组合使用，所述蛋白酶体抑制剂包括(但不限于)硼替佐米(bortezomib)和卡非唑米(carfilzomib)。

式I组合物可与沙立度胺、来那度胺和泊马度胺(pomalidomide)组合使用。

式I组合物可与以下组合使用：生物制剂，包括(但不限于)曲妥珠单抗(trastuzumab)、阿多-曲妥珠单抗(ado-trastuzumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、伊派利单抗(ipilimumab)；抗PD-1 剂，包括拉立珠单抗(labrolizumab)和尼沃单抗(nivolumab)；抗Pd-L1剂，包括 MPDL3280A；抗血管生成剂，包括贝伐单抗(bevacizumab)和阿柏西普(aflibercept)；和抗体-药物结合物(ADC)，包括贝伦妥单抗维多汀(brentuximab vedotin)和曲妥珠单抗恩他新(trastuzumabemtansine)。

式I组合物可与放射线疗法组合使用。

式I组合物可与治疗性疫苗组合使用，所述治疗性疫苗包括(但不限于)西普亮塞-T(sipuleucel-T)。

在一些实施例中，式I或式II的组合物可与本文所述的其它药剂中的一种或多种组合使用。

阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法：

本发明的第一方面涉及一种阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法，其包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的一个实施例中，式I组合物的给药方案为每天给药投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案为每天给药投与。间断的非每天给药方案可以包括(但不限于)隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的合适的给药方案包括每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案为每周两次或每周一次。

在本发明的这个方面的其它实施例中，式I组合物的给药方案为每周两次投与。

在本发明的又另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案投与式I组合物以及一种或多种获取自以下的药剂：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂或抗血管生成剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及太平洋紫杉醇。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及多西他赛。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及艾日布林。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及伊沙匹隆。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及长春瑞滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及卡培他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及吉西他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及5-氟尿嘧啶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及甲氨蝶呤。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及环磷酰胺。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及顺铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及卡铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及聚乙二醇化脂质体多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及表柔比星。

在本发明的这个方面的又另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及他莫昔芬。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及氟维司群。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及阿那曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及来曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及依西美坦。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及曲妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及阿多-曲妥珠单抗恩他新。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及帕妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及拉帕替尼。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及依维莫司。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及坦罗莫司。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及CDK4/6抑制剂LY2835219。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及CDK4/6抑制剂LEE011。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及CDK4/6抑制剂PD 0332991。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含投与式I组合物以及贝伐单抗。

本发明的另一个方面涉及一种阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法，其包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物以间断的非每天给药方案投与。在一些实施例中，间断的非每天给药方案包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药和每周一次给药。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物与一种或多种获取自以下的药剂组合投与：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂或抗血管生成剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与拉帕替尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与依维莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与坦罗莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LY2835219组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LEE011组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断原发性乳房肿瘤生长和侵袭性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂PD 0332991组合投与。

阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法：

在本发明的又另一个方面中，提供一种阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法，其包含向有需要的患者投与足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，足以阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的给药方案包含每天投与式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案为以间断的非每天给药方式投与，包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案为每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案为每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物以及一种或多种获取自以下的药剂：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂或抗血管生成剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及太平洋紫杉醇。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及多西他赛。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及艾日布林。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及伊沙匹隆。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及长春瑞滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及卡培他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及吉西他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及5-氟尿嘧啶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及甲氨蝶呤。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及环磷酰胺。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及顺铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及卡铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及表柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及他莫昔芬。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及氟维司群。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及阿那曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及来曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及依西美坦。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及曲妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及阿多-曲妥珠单抗恩他新。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及帕妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及拉帕替尼。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及依维莫司。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及坦罗莫司。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及CDK4/6抑制剂LY2835219。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及CDK4/6抑制剂LEE011。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及CDK4/6抑制剂PD 0332991。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及贝伐单抗。

在本发明的另一个方面中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为以间断的非每天给药形式投与。在一些实施例中，隔天给药包括每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与一种或多种获取自以下的药剂组合投与：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂或抗血管生成剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及聚乙二醇化脂质体多柔比星。

在本发明的这个方面的又另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含投与式I组合物以及他莫昔芬。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与拉帕替尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与依维莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与坦罗莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LY2835219组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LEE011组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌内渗、扩散和癌转移的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂PD 0332991组合投与。

阻断乳癌免疫耐受性的方法：

本发明的另一个方面涉及一种阻断乳癌免疫耐受性的方法。所述方法包含向有需要的患者投与有效量的式I组合物。在一个实施例中，盐的给药方案足以阻断介导免疫耐受性的肿瘤微环境中的TIE2激酶。

在本发明的这个方面的一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断介导免疫耐受性的肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含每天投与式 I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物以间断的非每天方式投与。在一些实施例中，间断的非每天方式包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的投与为每周两次、每周一次或隔周。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物以及一种或多种获取自以下的药剂：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA 嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂或免疫调节剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及太平洋紫杉醇。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及多西他赛。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及艾日布林。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及伊沙匹隆。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及长春瑞滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及卡培他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及吉西他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及5-氟尿嘧啶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及5-甲氨蝶呤。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及环磷酰胺。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及顺铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及卡铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及聚乙二醇化脂质体多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及表柔比星。

在本发明的这个方面的又另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式 I组合物以及他莫昔芬。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及氟维司群。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及阿那曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及来曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及依西美坦。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及曲妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及阿多-曲妥珠单抗恩他新。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及帕妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与拉帕替尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与依维莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与坦罗莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LY2835219组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LEE011组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂PD 0332991组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及贝伐单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及抗CTLA-4剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及伊派利单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及抗PD-1剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及拉立珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及抗PD L-1剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及MPDL3280A。

阻断乳癌免疫耐受性的方法：

在本发明的另一个方面中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案以间断的非每天给药方式投与，包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中所述式I组合物每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与一种或多种获取自以下的药剂组合投与：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂或免疫调节剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，阻断乳癌免疫耐受性的方法包含投与式I 组合物以及甲氨蝶呤。

提高乳癌患者的整体存活率的方法：

本发明的另一个方面涉及一种提高乳癌患者的整体存活率的方法，其包含向有需要的患者投与有效量的式I组合物。在一个实施例中，给药方案足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含其中式I组合物每天投与的给药方案。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以间断的非每天方式投与的给药方案中的式I组合物，包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含每周两次、每周一次或隔周投与的给药方案中的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法，式I组合物的给药方案为每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物的给药方案为仅每周两次投与。

本发明的这个方面的另一个实施例涉及提高乳癌患者的整体存活率的方法，所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案投与式I组合物以及一种或多种获取自以下的药剂：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂或免疫调节剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及太平洋紫杉醇。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及多西他赛。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及艾日布林。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及伊沙匹隆。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及长春瑞滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及卡培他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及吉西他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及5-氟尿嘧啶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及甲氨蝶呤。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及环磷酰胺。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及顺铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及卡铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及聚乙二醇化脂质体多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及表柔比星。

在本发明的这个方面的又另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及他莫昔芬。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及氟维司群。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及阿那曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及来曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及依西美坦。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及曲妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及阿多-曲妥珠单抗恩他新。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及帕妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与拉帕替尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与依维莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与坦罗莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与 CDK4/6抑制剂LY2835219组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与 CDK4/6抑制剂LEE011组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与 CDK4/6抑制剂PD 0332991组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及贝伐单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及抗CTLA-4剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及伊派利单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及抗PD-1剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及拉立珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及抗抗PD L-1剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含投与式I组合物以及MPDL3280A。

提高乳癌患者的整体存活率的方法：

在本发明的另一个方面中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为间断的非每天给药投与，包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与一种或多种获取自以下的药剂组合投与：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂或免疫调节剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法投与式 I组合物以及太平洋紫杉醇。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，提高乳癌患者的整体存活率的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂PD 0332991组合投与。

治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法：

本发明的另一个方面涉及一种治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法，其包含向有需要的患者投与和有效量的式I组合物，式I组合物的给药方案足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案为每天投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物，其中式I组合物的给药方案以间断的非每天方式投与，包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以每周两次、每周一次或隔周投与的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以每周两次或每周一次投与的给药方案投与式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的给药方案投与式I组合物以及一种或多种获取自以下的药剂：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA 合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂或免疫调节剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及太平洋紫杉醇。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及多西他赛。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及艾日布林。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及伊沙匹隆。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及长春瑞滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及卡培他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及吉西他滨。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及5-氟尿嘧啶。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及甲氨蝶呤。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及环磷酰胺。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及顺铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及卡铂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及聚乙二醇化脂质体多柔比星。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及表柔比星。

在本发明的这个方面的又另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及他莫昔芬。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及氟维司群。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及阿那曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及来曲唑。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及依西美坦。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及曲妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及阿多-曲妥珠单抗恩他新。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及帕妥珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与拉帕替尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与依维莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与坦罗莫司组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LY2835219组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂LEE011组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与CDK4/6抑制剂PD 0332991组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及贝伐单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及抗CTLA-4剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及伊派利单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及抗PD-1剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及拉立珠单抗。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及抗抗PD L-1剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及MPDL3280A。

治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法：

在本发明的另一个方面中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案以间断的非每天给药形式投与，包括隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

在本发明的这个方面的一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案每周两次、每周一次或隔周投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案每周两次或每周一次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，其中式I组合物的给药方案每周两次投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的剂量投与式I组合物，与一种或多种获取自以下的药剂组合投与：抗微管蛋白剂、DNA烷基化剂、DNA合成抑制剂、DNA嵌入剂、抗雌激素剂、抗HER2剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂或免疫调节剂。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，治疗在手术切除肿瘤之前处于新辅助情况中的乳癌患者的方法包含投与式I组合物以及5-甲氨蝶呤。

本发明的另一个方面涉及一种治疗卵巢癌的方法，因为TIE2路径信号传导已展示出会促进卵巢癌进展(Karlan等人，《临床肿瘤学杂志》(2012)30：362-370)。所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。在本发明的这个方面的一个实施例中，式I组合物以单一药剂形式投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与太平洋紫杉醇+卡铂、多西他赛+卡铂、太平洋紫杉醇+顺铂或其它紫杉烷+铂药物方案组合投与。

本发明的另一个方面涉及一种治疗肝细胞癌的方法，因为TIE2路径信号传导已展示出会促进肝细胞癌症进展且作为诊断标记物(Matsubara等人，《肝脏病学》(2013)57：1416-1425；Mitsuhashi等人，《肝脏病学》(2003)37：1105-1113；Tanaka等人，《临床研究杂志》(1999)103：341-345)。所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的一个实施例中，式I组合物以单一药剂形式投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与激酶抑制剂组合投与，所述激酶抑制剂包括索拉非尼、克卓替尼、卡博替尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、索拉非尼、瑞格非尼或阿西替尼。

本发明的另一个方面涉及一种治疗神经胶质瘤的方法，因为TIE2路径信号传导已展示出会促进神经胶质瘤癌症进展(Liu等人，Oncotarget(2010)1：700-709；Brunckhorst等人，《癌症研究》(2010)70：7283-7293)。所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的 TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与放射线疗法组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与替莫唑胺疗法组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与放射线疗法和替莫唑胺疗法组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与贝伐单抗疗法组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与放射线疗法和贝伐单抗疗法组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与替莫唑胺疗法和贝伐单抗疗法组合投与。

本发明的另一个方面涉及一种治疗黑素瘤的方法，因为TIE2路径信号传导已展示出会促进黑素瘤进展(Helfrich等人，《临床癌症研究》(2009)15：1384-1392；Peinado 等人，《自然·医学》(Nature Medicine)(2012)18：883-891)。所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与维罗非尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与达拉菲尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与达拉菲尼和曲美替尼组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与替莫唑胺组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与达卡巴嗪组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与伊派利单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与拉立珠单抗或尼沃单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与MPDL3280A组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与伊马替尼组合投与。

本发明的另一个方面涉及一种治疗结肠直肠癌的方法，因为TIE2路径信号传导已展示出会促进结肠直肠癌进展(Ahmad等人，《癌症》(2001)92：1138-1143；Hashizume 等人，《癌症研究》(2010)70：2213-2223)。所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的 TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与mFOLFOX6疗法(奥沙利铂+甲酰四氢叶酸(leucovorin)+5-氟尿嘧啶)组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与mFOLFOX6疗法和贝伐单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与mFOLFOX6疗法和帕尼单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与mFOLFOX6疗法和西妥昔单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与卡培他滨组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与卡培他滨和贝伐单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与FOLFIRI疗法(伊立替康+甲酰四氢叶酸+5-氟尿嘧啶)组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与FOLFIRI疗法和贝伐单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与FOLFIRI疗法和阿柏西普组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与FOLFIRI疗法和西妥昔单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与FOLFIRI疗法和帕尼单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与帕尼单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与帕尼单抗和伊立替康组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与西妥昔单抗组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与西妥昔单抗和伊立替康组合投与。

本发明的另一个方面涉及一种治疗急性骨髓性白血病的方法，因为TIE2路径信号传导已展示出会促进急性骨髓性白血病进展(Muller等人，《白血病研究》(2002)26： 163-168；Hou等人，《白血病研究》(2008)32：904-912)。所述方法包含以足以阻断肿瘤微环境中的TIE2激酶的给药方案向有需要的患者投与有效量的式I组合物。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与道诺霉素和阿糖胞苷组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与艾达霉素和阿糖胞苷组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与米托蒽醌和阿糖胞苷组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与阿糖胞苷组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与5-氮杂胞苷组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与地西他滨组合投与。

在本发明的这个方面的另一个实施例中，式I组合物与喹杂替尼组合投与。

本发明的另一个方面涉及一种治疗癌症的方法。所述方法包含向有需要的患者投与有效量的式I组合物。在一个实施例中，患者过度表达内膜内皮细胞激酶2(TIE2)，且所述癌症是选自乳癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、头颈癌、膀胱癌、卵巢癌、神经胶质瘤、血管肉瘤、黑素瘤或急性骨髓性白血病。

在治疗方案的本发明的某些实施例中，式I组合物以每天的频率投与。

在治疗方案的本发明的其它实施例中，式I组合物以非每天间断的频率投与。

在治疗方案的本发明的其它实施例中，式I组合物以每周三次的频率投与。

在治疗方案的本发明的其它实施例中，式I组合物以每周两次的频率投与。

在治疗方案的本发明的其它实施例中，式I组合物以每周一次的频率投与。

在治疗方案的本发明的其它实施例中，式I组合物以每两周一次的频率投与。

在其它实施例中，所述癌症为转移性、三阴性乳癌(雌激素受体阴性、孕酮受体阴性、HER2阴性)。

在其它实施例中，所述癌症为雌激素阳性(ER⁺)和HER2受体激酶阴性(HER2-) 乳癌。

在其它实施例中，所述癌症为发炎性乳癌。

在另一实施例中，所述方法包含预防或减少原发性肿瘤生长、肿瘤侵袭性、癌症内渗、癌症扩散、癌转移和肿瘤免疫耐受性中的一种或多种的治疗。在某些实施例，所述方法提高患者生存率。

调配物、投与、给药和治疗方案

本发明包括在各种调配物中的所描述的式I和/或II的盐(和/或额外药剂)。本文所述的任何组合物(和/或额外药剂)可呈以下形式：溶液、悬浮液、乳液、滴剂、片剂、丸剂、球粒、胶囊、含液体胶囊、散剂、持续释放调配物、栓剂、乳液、气雾剂、喷雾、悬浮液或任何其它适用的形式。在一个实施例中，组合物呈胶囊形式(参见例如美国专利第5,698,155号)。合适的药物赋形剂的其它实例描述在Remington’s Pharmaceutical Sciences 1447-1676(Alfonso R.Gennaro编，第19版.1995)中，其以引用的方式并入本文中。

必要时，本文中所描述的盐也可包括增溶剂。此外，药剂可用如所属领域中已知的合适的媒剂或传递装置传递。本文中概述的组合疗法可在单一传递媒剂或传递装置中共传递。用于投与的组合物可任选地包括局部麻醉剂(如利诺卡因(lignocaine))以减轻注射部位的疼痛。

在一个实施例中，本文所述的式I和/或II的盐(和/或额外药剂)根据常规程序调配为适合于投与模式的组合物。

在某些实施例中，投与途径包括例如：皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、口服、舌下、鼻内、脑内、阴道内、经皮、经直肠、通过吸入、或局部、尤其到耳、鼻、眼或皮肤。在一些实施例中，投与是经口或通过肠胃外注射实现。投与模式可留给医师判断，且部分取决于医学病况的部位。在大多数情况下，投与引起本文所述的任何药剂释放到血流中。

在特定实施例中，可为合意的是向需要治疗或阻断的区域局部投与。

在一个实施例中，本文所述的盐(和/或额外药剂)根据常规程序调配为适合于经口投与人类的组合物。经口传递的组合物可例如呈片剂、口含片、水性或油性悬浮液、颗粒、散剂、乳液、胶囊、糖浆剂或酏剂形式。经口投与的组合物可包含一种或多种试剂，例如甜味剂，如果糖、阿斯巴甜或糖精；调味剂，如胡椒薄荷、冬青油或樱桃油；着色剂；以及防腐剂，以提供医药学上适口的制剂。此外，当呈片剂或丸剂形式时，组合物可经包覆以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供经延长时间段的持续作用。本文所述的包围渗透活性驱动式I或II的盐(和/或额外试剂)的可选择性渗透膜还适用于经口投与的组合物。在后面的这些平台中，来自包围胶囊的环境的流体由驱动组合物吸收，所述驱动组合物膨胀以使药剂或药剂组合物移位穿过开口。这些传递平台可以提供与立即释放调配物的尖峰状曲线相对的基本上零级传递曲线。还可以使用延时材料，如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。口服组合物可以包括标准赋形剂，如甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素和碳酸镁。在一个实施例中，所述赋形剂是医药级的。除了活性组合物之外，悬浮液可含有悬浮剂，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂、黄芪胶等以及其混合物。

适用于肠胃外投与(例如静脉内、肌内、腹膜内、皮下和关节内注射和灌注)的剂型包括例如溶液、悬浮液、分散液、乳液等。其还可以无菌固体组合物(例如冻干组合物)形式制造，其可在即将使用之前溶解或悬浮于无菌可注射介质中。其可含有例如所属领域中已知的悬浮或分散剂。

本文中描述的式I和/或II的盐(和/或额外试剂)的剂量以及给药时程可取决于各种参数，包括(但不限于)所治疗的疾病、个体的一般健康状况和投与医师的判断。本文所述的任何药剂可在投与另一治疗剂之前(例如之前5分钟、15分钟、30分钟、45 分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、 1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、与其同时、或在其之后(例如之后 5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周) 投与有需要的个体。在各种实施例中，本文所述的任何药剂相隔1分钟、相隔10分钟、相隔30分钟、相隔不到1小时、相隔1小时、相隔1小时到2小时、相隔2小时到3 小时、相隔3小时到4小时、相隔4小时到5小时、相隔5小时到6小时、相隔6小时到7小时、相隔7小时到8小时、相隔8小时到9小时、相隔9小时到10小时、相隔 10小时到11小时、或相隔11小时到12小时投与。

本文所述的式I或II的盐(和/或额外试剂)的剂量可取决于数个因素，包括病况的严重度、病况是被治疗还是被预防的、以及待治疗的个体的年龄、体重和健康状况。此外，关于具体个体的药物基因体学(基因型对治疗的药物动力学、药效学或功效概况的作用)信息可影响所使用的剂量。此外，确切的个别剂量可视多种因素而略加调整，所述因素包括所投与的药剂的特定组合、投与的时间、投与的途径、调配物的性质、排泄的速率、所治疗的具体疾病、病症的严重度以及病症的解剖学位置。可预期剂量的一些变化。

通常，当经口投与哺乳动物时，本文所述的任何式I组合物(和/或额外药剂)的剂量可为0.001毫克/千克/天到100毫克/千克/天、0.01毫克/千克/天到50毫克/千克/天、或0.1毫克/千克/天到10毫克/千克/天。当经口投与人类时，本文所述的任何药剂的剂量通常为每天0.001mg到1500mg、每天1mg到600mg、或每天5mg到30mg。在一些实施例中，盐(或药剂)的剂量在每天57mg到1200mg范围内。在其它实施例中，药剂或盐的剂量在每天100mg到200mg范围内。

对于本文所述的式I或II的盐(和/或额外药剂)通过肠胃外注射的投与，剂量通常为每天0.1mg到250mg、每天1mg到20mg、或每天3mg到5mg。注射可给予最多每天四次。通常，当经口或肠胃外投与时，本文所述的任何药剂的剂量通常为每天0.1mg 到1500mg、或每天0.5mg到10mg、或每天0.5mg到5mg。每天可投与最多3000mg 的剂量。

本文所述的盐(和/或额外药剂)的投与可独立地为每天一到四次。具体来说，盐的投与可以盐为约50mg到1500mg的给药方案一天一次。适用于所寻求的预防性作用的每天剂量为57-1200毫克/天。如果每天两次投与，那么合适的剂量为100mg到200mg 的盐。盐还可间歇地非每天投与。具体地说，可每月一到四次或每年一到六次或每两年、三年、四年或五年一次进行盐的投与。在某些实施例中，每周或每两周进行盐的投与。当每周或每两周投与时，合适的盐给药方案在50-200mg/每投与范围内。在某些每周或每两周投与中，剂量为200-400mg/每投与。每周或每两周投与的又其它模式包括400-500 mg/每投与、500-600mg/每投与、600-700mg/每投与、700-800mg/每投与、800-900mg/ 每投与、900-1000mg/每投与、1000-1100mg/每投与或1100-1200mg/每投与。投与的持续时间可为一天或一个月、两个月、三个月、六个月、一年、两年、三年，且可能甚至持续个体的寿命。将在许多情况下指示慢性长期投与。剂量可以单一剂量形式或分成多个剂量投与。一般来说，所需剂量应以设定的时间间隔持续延长的时段投与，通常至少经数周或数月，不过可能需要数月或数年的投与的较长时间段。

实例

实例1. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲对未磷酸化的TIE2(uTIE2)的生物化学抑制

uTIE2(序列ID号1)的生物化学分析

uTIE2激酶的活性通过追踪从经由与丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶系统的偶合的激酶反应产生的ADP来测定(例如Schindler等人《科学》(Science)(2000)289：1938-1942)。在这一分析中，以分光光度法连续地监测NADH的氧化(由此在A_340nm下的减少)。反应混合物(100μL)含有TIE2(SignalChem)(5.6nM)、BSA(0.004％(w/v))、polyEY (1.5mg/ml)、MgCl₂(15mM)、DTT(0.5mM)、丙酮酸激酶(4个单位)、乳酸脱氢酶 (7个单位)、磷酸烯醇丙酮酸(1mM)和NADH(0.28mm)和ATP(1.5mM)于含有 0.2％辛基-葡糖苷和1％DMSO的90mM Tris缓冲液(pH 7.5)中。抑制反应通过将连续稀释的测试组合物与以上反应混合物混合一起来启动。在板读取器(BioTek)上在30℃下连续地监测在340nm下的吸收持续6小时。反应速率使用5到6小时时间范围计算。抑制百分比通过将反应速率与对照(即，无测试组合物)的反应速率比较来获得。IC₅₀值由使用如在GraphPad Prism软件包中实施的软件例程在一系列抑制剂浓度下测定的一系列抑制百分比值计算。组合物1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟 -4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐(如图中所述的化合物1)展现3.5nM的IC₅₀值。

用于筛选的uTIE2蛋白质序列(序列ID号1)

QLKRANVQRRMAQAFQNVREEPAVQFNSGTLALNRKVKNNPDPTIYPVLDWNDIKFQDVIGEGNFGQVLKARIKKDGLRMDAAIKRMKEYASKDDHRDFAGELEVLCKLGHHPNIINLLGACEHRGYLYLAIEYAPHGNLLDFLRKSRVLETDPAFAIANSTASTLSSQQLLHFAADVARGMDYLSQKQFIHRDLAARNILVGENYVAKIADFGLSRGQEVYVKKTMGRLPVRWMAIESLNYSVYTTNSDVWSYGVLLWEIVSLGGTPYCGMTCAELYEKLPQGYRLEKPLNCDDEVYDLMRQCWREKPYERPSFAQILVSLNRMLEERKTYVNTTLYEKFTYAGIDC SAEEAA

实例2. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲对磷酸化TIE2(pTIE2)的生物化学抑制

pTIE2的生物化学分析(序列ID号2)

pTIE2激酶的活性通过追踪从经由与丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶系统的偶合的激酶反应产生的ADP来测定(例如Schindler等人《科学》(2000)289：1938-1942)。在这一分析中，以分光光度法连续地监测NADH的氧化(由此在A_340nm下的减少)。反应混合物(100μL)含有TIE2(Life Technologies)(6nM)、BSA(0.004％(w/v))、polyEY(1.5 mg/ml)、MgCl₂(15mM)、DTT(0.5mM)、丙酮酸激酶(4个单位)、乳酸脱氢酶(7 个单位)、磷酸烯醇丙酮酸(1mM)和NADH(0.28mm)和ATP(1.5mM)于含有0.2％辛基-葡糖苷和1％DMSO的90mM Tris缓冲液(pH 7.5)中。抑制反应通过将连续稀释的测试组合物与以上反应混合物混合一起来启动。在板读取器(BioTek)上在30℃下连续地监测在340nm下的吸收持续6小时。反应速率使用2到3小时时间范围计算。抑制百分比通过将反应速率与对照(即，无测试组合物)的反应速率比较来获得。IC₅₀值由使用如在GraphPad Prism软件包中实施的软件例程在一系列抑制剂浓度下测定的一系列抑制百分比值计算。当测试时，组合物1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2- 氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐和1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6- 基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲双盐酸盐在＜0.1 μM浓度下展现＞50％pTIE2激酶的抑制。1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2- 氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐展现4.2nM的IC₅₀值。1-(3- 叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲双盐酸盐展现2.2nM的IC₅₀值。

用于筛选的pTIE2蛋白质序列(序列ID号2)

PVLDWNDIKFQDVIGEGNFGQVLKARIKKDGLRMDAAIKRMKEYASKDDHRDFAGELEVLCKLGHHPNIINLLGACEHRGYLYLAIEYAPHGNLLDFLRKSRVLETDPAFAIANSTASTLSSQQLLHFAADVARGMDYLSQKQFIHRDLAARNILVGENYVAKIADFGLSRGQEVYVKKTMGRLPVRWMAIESLNYSVYTTNSDVWSYGVLLWEIVSLGGTPYCGMTCAELYEKLPQGYRLEKPLNCDDEVYDLMRQCWREKPYERPSFAQILVSLNRMLEERKT

实例3. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲对CHO细胞中的TIE2的细胞抑制

CHO-K1细胞培养

CHO-K1细胞(目录号CCL-61)从美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture collection，ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯(Manassas，VA))获得。简单来说，细胞在37℃、 5％CO₂和95％湿度下在F12K培养基中生长，所述F12K培养基补充有10％特征化胎牛血清(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen，Carlsbad，CA))、100个单位/mL青霉素G、100μg/ml链霉素和0.29mg/mL L-谷氨酰胺(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。使细胞扩增，直到达到70％-95％汇合，此时将其传代培养或收集用于分析用途。

TIE2转染的CHO K1磷酸化TIE2蛋白质印迹分析(Western Blot Assay)

将CHO K1细胞(1×10⁵个细胞/孔)添加到24孔组织培养物处理的板中的补充有10％特征化胎牛血清和1×非必需氨基酸的1mL RPMI1640培养基(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)中。细胞接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育过夜。抽吸培养基，且将0.5mL培养基添加到各孔中。将转染级质粒DNA(TIE2基因Gateway克隆到 pcDNA3.2^TM/V5-DEST表达载体中，加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)在无血清的室温 I培养基(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)中稀释到5μg/mL。每0.5μg质粒DNA添加2μL脂染胺(Lipofectamine)LTX试剂(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。轻轻地混合试管，且在室温下培育25分钟以允许DNA-脂染胺LTX 复合物形成。将100μL DNA-脂染胺LTX复合物直接添加到含有细胞的各孔中且轻轻地混合。转染后二十四小时，抽吸含有DNA-脂染胺复合物的培养基，细胞用PBS洗涤，且添加补充有10％特征化胎牛血清(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)和1×非必需氨基酸(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)的RPMI1640培养基。将测试组合物(1-(3- 叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐)或DMSO添加到各孔中(0.5％最终DMSO浓度)。板接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育4小时。在培育之后，抽吸培养基，且细胞用PBS洗涤。细胞在4℃下在振荡下使用含有Halt磷酸酶和蛋白酶抑制剂(Pierce，伊利诺伊州罗克福德 (Rockford，IL))和磷酸酶抑制剂混合液2(密苏里州圣路易斯的西格玛公司(Sigma，St. Louis，MO))的MPER溶解缓冲液(Pierce，伊利诺伊州罗克福德)溶解10分钟。澄清的溶解物通过SDS-PAGE在4-12％Novex NuPage Bis-Tris凝胶(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)上分离，且接着转移到PVDF(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。在转移之后，PVDF膜用BSA(加利福尼亚州圣克鲁兹的圣克鲁兹生物技术公司(Santa CruzBiotechnology，Santa Cruz，CA))阻断，且接着用磷酸化TIE2的抗体(马萨诸塞州贝弗利的赛信通技术公司(Cell Signaling Technology，Beverly，MA))探测。结合于辣根过氧化酶的二级抗兔抗体(马萨诸塞州贝弗利的赛信通技术公司)用于检测磷酸化TIE2。添加ECLPlus(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团(GE Healthcare，Piscataway， NJ))，一种用于产生荧光产物的辣根过氧化酶的底物。荧光使用Storm 840磷光成像仪 (新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)以荧光模式检测。160kDa磷酸化TIE2条带使用ImageQuant软件(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)定量。数据使用 Prism软件(GraphPadSoftware，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))分析以计算 IC₅₀值。组合物1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐展现2.0nM的IC₅₀值。

实例4. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲对在抑制剂清除之后的CHO细胞中的TIE2的细胞抑制

CHO-K1细胞培养

CHO-K1细胞(目录号CCL-61)从美国典型培养物保藏中心(ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯)获得。简单来说，细胞在37℃、5％CO₂和95％湿度下在F12K培养基中生长，所述F12K培养基补充有10％特征化胎牛血清(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)、100个单位/mL青霉素G、100μg/ml链霉素和0.29mg/mL L-谷氨酰胺(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。使细胞扩增，直到达到70％-95％汇合，此时将其传代培养或收集用于分析用途。

TIE2转染的CHO K1磷酸化TIE2蛋白质印迹组合物清除分析

将CHO K1细胞(1×10⁵个细胞/孔)添加到24孔组织培养物处理的板中的补充有10％特征化胎牛血清和1×非必需氨基酸的1mL RPMI1640培养基(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)中。细胞接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育过夜。抽吸培养基，且将0.5mL培养基添加到各孔中。将转染级质粒DNA(TIE2基因Gateway克隆到 pcDNA3.2^TM/V5-DEST表达载体中，加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)在无血清的室温 I培养基(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)中稀释到5μg/mL。每0.5μg质粒DNA添加2μL脂染胺LTX试剂(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。轻轻地混合试管，且在室温下培育25分钟以允许DNA-脂染胺LTX复合物形成。将100 μL DNA-脂染胺LTX复合物直接添加到含有细胞的各孔中且轻轻地混合。转染后约18-24 小时，抽吸含有DNA-脂染胺复合物的培养基，细胞用PBS洗涤，且添加补充有10％特征化胎牛血清(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)和1×非必需氨基酸(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)的RPMI1640培养基。将测试组合物(1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6- 基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐)或 DMSO添加到各孔中(0.5％最终DMSO浓度)。板接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育2小时。在培育之后，抽吸培养基，且细胞用1mL培养基洗涤三次以清除游离组合物。接下来，添加1mL新鲜培养基，且将细胞在溶解之前培育具体时间点(即，0、 1、2、4、6和24小时)。细胞在4℃下在振荡下使用含有Halt磷酸酶和蛋白酶抑制剂 (Pierce，伊利诺伊州罗克福德)和磷酸酶抑制剂混合液2(密苏里州圣路易斯的西格玛公司)的MPER溶解缓冲液(Pierce，伊利诺伊州罗克福德)溶解10分钟。澄清的溶解物通过SDS-PAGE在4-12％Novex NuPage Bis-Tris凝胶(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)上分离，且接着转移到PVDF(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。在转移之后，PVDF膜用BSA(加利福尼亚州圣克鲁兹的圣克鲁兹生物技术公司)阻断，且接着用磷酸化TIE2的抗体(马萨诸塞州贝弗利的赛信通技术公司)探测。结合于辣根过氧化酶的二级抗兔抗体(马萨诸塞州贝弗利的赛信通技术公司)用于检测磷酸化TIE2。添加ECL Plus(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)，一种用于产生荧光产物的辣根过氧化酶的底物。荧光使用Storm840磷光成像仪(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)以荧光模式检测。剥离PVDF膜，且接着用总TIE2抗体(德克萨斯州达拉斯(Dallas，TX)的圣克鲁兹生物技术公司)如上再探测。160kDa磷酸化TIE2和总 TIE2条带使用ImageQuant软件(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)定量。磷酸化TIE2水平根据总TIE2水平标准化，并且数据使用Prism软件(GraphPad Software，加利福尼亚州圣地亚哥)绘制。当以0.1μM-1μM与TIE2转染的CHO K1细胞一起培育2小时随后清除时，本文揭示的组合物1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2- 氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐展现磷酸化TIE2水平的＞50％抑制持续＞24小时。

实例5. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲对HUVEC细胞中的TIE2的细胞抑制

HUVEC细胞培养

HUVEC(人类脐静脉内皮细胞；目录号CRL-1730)细胞从美国典型培养物保藏中心(ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯)获得。简单来说，细胞在EGM-2(马里兰州沃克斯维尔的龙沙公司(Lonza，Walkersville，MD))中在37℃、5％CO₂和95％湿度下生长。使细胞扩增，直到达到90％-95％饱和，此时将其传代培养或收集用于分析用途。

HUVEC磷酸化TIE2蛋白质印迹分析

将HUVEC细胞(2.5×10⁵个细胞/孔)添加到24孔组织培养物处理的板中的1mLEGM-2培养基(马里兰州沃克斯维尔的龙沙公司)中。细胞接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育过夜。接着抽吸培养基，且添加补充有2％FBS(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)的1mL EBM-2基础培养基(马里兰州沃克斯维尔的龙沙公司)。将测试组合物或DMSO添加到各孔中(0.5％最终DMSO浓度)。板接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育4小时。在培育期间，将组氨酸标记的血管生成素1(ANG1)生长因子(R&D Systems，明尼苏达州明尼阿波利斯(Minneapolis，MN))在室温下添加到抗多组氨酸抗体(R&D Systems，明尼苏达州明尼阿波利斯)中持续30分钟以产生ANG1的多聚物。在四小时培育组合物之后，细胞用800ng/mLANG1/抗多组氨酸抗体复合混合物刺激15 分钟。抽吸培养基，且细胞用PBS洗涤。细胞在4℃下在振荡下使用含有Halt磷酸酶和蛋白酶抑制剂(Pierce，伊利诺伊州罗克福德)和磷酸酶抑制剂混合液2(密苏里州圣路易斯的西格玛公司)的MPER溶解缓冲液(Pierce，伊利诺伊州罗克福德)溶解10分钟。澄清的溶解物通过SDS-PAGE在4-12％Novex NuPage Bis-Tris凝胶(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)上分离，且接着转移到PVDF(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)。在转移之后，PVDF膜用BSA(加利福尼亚州圣克鲁兹的圣克鲁兹生物技术公司) 阻断，且接着用磷酸化TIE2的抗体(马萨诸塞州贝弗利的赛信通技术公司)探测。结合于辣根过氧化酶的二级抗兔抗体(马萨诸塞州贝弗利的赛信通技术公司)用于检测磷酸化TIE2。添加ECL Plus(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)，一种用于产生荧光产物的辣根过氧化酶的底物。荧光使用Storm 840磷光成像仪(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)以荧光模式检测。160kDa磷酸化TIE2条带使用ImageQuant 软件(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团)定量。数据使用Prism软件(GraphPad Software，加利福尼亚州圣地亚哥)分析以计算IC₅₀值。本文揭示的组合物1-(3-叔丁基 -1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐展现0.018nM的IC₅₀值。

实例6. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲对血管生成素1(ANG1)或血管生成素2(ANG2)刺激的毛细管形成的抑制

HMVEC细胞培养

HMVEC(人类微血管内皮细胞；目录号PCS-110-010)细胞从美国典型培养物保藏中心(ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯)获得。简单来说，细胞在EGM-2MV(马里兰州沃克斯维尔的龙沙公司)中在37℃、5％CO₂和95％湿度下生长。使细胞扩增，直到达到90％-95％饱和，此时将其传代培养或收集用于分析用途。

HMVEC毛细管形成分析

HMVEC细胞(1.5×10⁴个细胞/孔)与测试组合物或DMSO对照一起混合，且将适当生长因子(ANG1或ANG2)或对照添加到用生长因子减少的基质胶涂布的96孔组织培养物处理的板中的0.1mL EBM-2基础培养基(马里兰州沃克斯维尔的龙沙公司)中。细胞接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育18小时。接着轻轻地抽吸培养基，且各孔用0.1mL EBM-2基础培养基轻轻地洗涤。同样抽吸培养基，且将含1μM钙黄绿素AM 溶液(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司)的基础培养基添加到各孔中以荧光标记活细胞。细胞接着在37℃、5％CO₂和95％湿度下培育30分钟。抽吸培养基，且各孔用磷酸盐缓冲盐水轻轻地洗涤两次。各孔的图像用荧光显微镜获得，且使用ImagePro分析仪(Media Cybernetics，Inc.，马里兰州罗克维尔(Rockville，MD))使用测量总毛细管长度的自动宏处理。数据使用Prism软件(GraphPadSoftware，加利福尼亚州圣地亚哥) 分析以计算IC₅₀值。本文揭示的组合物1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2- 氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对甲苯磺酸盐对于ANG1刺激的HMVEC 毛细管形成的抑制展现6.9nM的IC₅₀值。本文揭示的式I组合物对于ANG2刺激的 HMVEC毛细管形成的抑制展现34nM的IC₅₀值。

实例7. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲作为单一药剂和与太平洋紫杉醇组合对鼠类PyMT乳癌模型中的体内原发性肿瘤生长和侵袭性的抑制

PyMT同基因型乳癌模型原发性肿瘤生长

PyMT同基因型乳癌植入小鼠模型用于评估化合物1的体内活性。简单来说，将总体积0.1mL的1×10⁶个细胞(解离自PyMT肿瘤片段)植入到雌性小鼠(FVB/NJ， JAXWEST：RB05小鼠，来自Jackson Labs)的左侧上的第四乳房脂肪垫中。各组中植入总共10只小鼠。Molecular Imaging，Inc.的动物照护和使用委员会(Animal Care and Use Committee)批准所有实验方案且按照美国国家卫生研究院(National Institutes of Health， NIH)的所有法律、规定和指南进行实验。治疗通过以下方式开始：当肿瘤大小达到约 850mg时，根据治疗当天的个别体重以每20g 0.2mL经口投与(管饲)化合物1每天两次或媒剂(0.4％羟丙基甲基纤维素于水中)和/或静脉内投与(IV)太平洋紫杉醇每五天一次或媒剂(10％乙醇、10％Cremophor EL和80％盐水)。动物给药持续21天。每周三次记录体重和肿瘤测量值。肿瘤负荷(mg)由测径规测量法通过用于长椭球体积的公式估算，假设单位密度为：肿瘤负荷(mg)＝(L×W²)/2，其中L和W为对应的正交肿瘤长度和宽度测量值(mm)。在PyMT模型中，化合物1和太平洋紫杉醇组均证明肿瘤生长抑制。化合物1与太平洋紫杉醇的组合展示累加活性(图1)。这些数据证明化合物 1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

实例8. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲作为单一药剂和与太平洋紫杉醇的组合对鼠类PyMT乳癌模型中的体内原发性肿瘤巨噬细胞聚积的抑制

PyMT同基因型乳癌模型原发性肿瘤巨噬细胞聚积

PyMT同基因型乳癌植入小鼠模型用于评估化合物1的体内活性。简单来说，将总体积0.1mL的1×10⁶个细胞(解离自PyMT肿瘤片段)植入到雌性小鼠(FVB/NJ， JAXWEST：RB05小鼠，来自Jackson Labs)的左侧上的第四乳房脂肪垫中。各组中植入总共10只小鼠。Molecular Imaging，Inc.的动物照护和使用委员会批准所有实验方案且按照美国国家卫生研究院(NIH)的所有法律、规定和指南进行实验。治疗通过以下方式开始：当肿瘤大小达到约850mg时，根据治疗当天的个别体重以每20g 0.2mL经口投与(管饲)化合物1每天两次或媒剂(0.4％羟丙基甲基纤维素于水中)和/或静脉内投与 (IV)太平洋紫杉醇每五天一次或媒剂(10％乙醇、10％Cremophor EL和80％盐水)。动物给药持续21天。每周三次记录体重和肿瘤测量值。

在研究结束时，将肿瘤切除且放入福尔马林(formalin)中。接着，将福尔马林固定的肿瘤样品放入石蜡块中。福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片用二甲苯去石蜡，且经由一系列分级的醇冲洗液水合到蒸馏水中。抗原修复使用Dako的PT Link模块用 Tris/EDTA缓冲标靶修复溶液在95℃下进行20分钟。一旦切片冷却，将其加载到DakoAutostainerPlusLink上在室温下用分别染色巨噬细胞和内皮细胞的F4/80和CD31抗体进行免疫组织化学染色。组织中的内源性过氧化酶和碱性磷酸酶活性用双重内源性酶阻断溶液(Dako，S2003)淬灭5分钟。非特异性蛋白结合用于无血清蛋白阻断(serum free ProteinBlock)(Dako，X0909)阻断5分钟。大鼠抗小鼠CD31初级抗体接着在实验组织切片上在1∶100的免疫原性浓度下培育30分钟。初级抗体接着与兔抗大鼠免疫球蛋白二级抗体(Dako，E0468)结合。二级抗体接着用山羊抗兔过氧化酶标记的聚合物(Dako， K4003)放大30分钟。酶促染色用底物-色原体DAB+(Dako，K3468)显影5分钟。过量大鼠IgG组分另外用啮齿动物阻断大鼠(Rodent Block Rat)(Biocare Medical， RBR962H)阻断5分钟。大鼠抗小鼠F4/80初级抗体在实验组织切片上培育30分钟。 F4/80接着与兔抗大鼠免疫球蛋白二级抗体(Dako，E0468)结合。二级抗体接着用山羊抗兔碱性磷酸酶标记的聚合物(BiocareRALP525)放大30分钟。酶促染色用底物色原体WARP Red(Biocare WR806)显影。对比染色用自动化苏木精(hematoxylin)进行 10分钟。组织切片接着风干且用二甲苯澄清以便玻璃盖板滑动。切片使用以下量表针对 F4/80染色评分：0，无可见染色；1，弱染色；2，适度染色；3强染色。在PyMT模型中，化合物1证明原发性肿瘤处的巨噬细胞聚积减少，而太平洋紫杉醇不减少巨噬细胞聚积。化合物1与太平洋紫杉醇的组合展示出与化合物1单一药剂治疗类似的活性(图 2)。这些数据证明化合物1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

实例9. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲作为单一药剂和与太平洋紫杉醇的组合对鼠类PyMT乳癌模型中的体内原发性肿瘤TIE2细胞聚积的抑制

PyMT同基因型乳癌模型原发性肿瘤巨噬细胞聚积

在研究结束时，将肿瘤切除且放入福尔马林中。接着，将福尔马林固定的肿瘤样品放入石蜡块中。实验福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片用二甲苯去石蜡，且经由一系列分级的醇冲洗液水合到蒸馏水中。抗原修复使用Dako的PT Link模块用柠檬酸盐pH 6缓冲标靶修复溶液在95℃下进行20分钟。一旦切片冷却，将其加载到DakoAutostainerPlusLink上在室温下用TIE2和CD31抗体两者进行免疫组织化学染色。组织中的内源性过氧化酶和碱性磷酸酶活性用双重内源性酶阻断溶液(Dako，S2003)淬灭 5分钟。非特异性蛋白结合用于无血清蛋白阻断(Dako，X0909)阻断5分钟。大鼠抗小鼠CD31初级抗体接着在实验组织切片上在1∶100的免疫原性浓度下培育30分钟。初级抗体接着与兔抗大鼠免疫球蛋白二级抗体(Dako，E0468)结合。二级抗体接着用山羊抗兔过氧化酶标记的聚合物(Dako，K4003)放大30分钟。酶促染色用底物-色原体 DAB+(Dako，K3468)显影5分钟。过量蛋白组分另外用蛋白阻断(Protein Block)(Dako， X0909)阻断5分钟。兔抗TIE2初级抗体在实验组织切片上培育30分钟。TIE2抗体接着与碱性磷酸酶标记的山羊抗兔聚合物结合30分钟。酶促染色用底物色原体WARP Red (Biocare WR806)显影。对比染色用自动化苏木精进行10分钟。组织切片接着风干且用二甲苯澄清以便玻璃盖板滑动。切片使用以下量表针对TIE2染色评分：0，无可见染色；1，弱染色；2，适度染色；3强染色。在PyMT模型中，化合物1证明原发性肿瘤处的TIE2表达细胞聚积减少，而太平洋紫杉醇不减少TIE2表达细胞聚积。化合物1与太平洋紫杉醇的组合展示与化合物1单一药剂治疗相比活性增强(图3)。这些数据证明化合物1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

实例10. 1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶 -4-基氧基)苯基)脲作为单一药剂和与太平洋紫杉醇组合对鼠类PyMT乳癌模型中的体内肺癌转移的抑制

PyMT同基因型乳癌模型肺癌转移评估

在研究结束时，将肺组织切除且放入福尔马林中。接着，将福尔马林固定的肺样品放入石蜡块中。每个肺块有三个切片，其中每切片切割两个层面，且用苏木精和伊红(Eosin)染色。转移性肺结节经由显微镜计数。在PyMT模型中，化合物1和太平洋紫杉醇均证明肺癌转移的类似的减少。化合物1与太平洋紫杉醇的组合展示与单一药剂治疗相比累加的活性(图4)。这些数据证明化合物1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

实例11.与太平洋紫杉醇组合的间歇(非每天)给药的1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对鼠类PyMT乳癌模型中的体内肺癌转移的抑制

PyMT同基因型乳癌模型肺癌转移评估

PyMT同基因型乳癌植入小鼠模型用于评估化合物1的体内活性。简单来说，将总体积0.1mL的1×10⁶个细胞(解离自PyMT肿瘤片段且冷冻储存在细胞冷冻培养基中) 植入到雌性小鼠(FVB/NJ，JAXWEST：RB05小鼠，来自Jackson Labs)的左侧上的第四乳房脂肪垫中。各组中植入总共三只小鼠。Molecular Imaging，Inc.的动物照护和使用委员会批准所有实验方案且按照美国国家卫生研究院(NIH)的所有法律、规定和指南进行实验。治疗通过以下方式开始：当肿瘤大小达到约600mg时，根据治疗当天的个别体重以每20g 0.2mL经口投与(管饲)化合物1每周两次或媒剂(0.4％羟丙基甲基纤维素于水中)和/或静脉内投与(IV)太平洋紫杉醇每五天一次或媒剂(10％乙醇、10％ Cremophor EL和80％盐水)。动物给药持续12天。每周三次记录体重和肿瘤测量值。

在研究结束时，将肺组织切除且放入福尔马林中。接着，将福尔马林固定的肺样品放入石蜡块中。每个肺块有三个切片，其中每切片切割两个层面，且用苏木精和伊红染色。转移性肺结节经由显微镜计数。在PyMT模型中，太平洋紫杉醇证明肺癌转移的减少。化合物1与太平洋紫杉醇的组合展示与单一药剂治疗相比累加的活性(图5)。这些数据证明化合物1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

实例12.与艾日布林组合的间歇(非每天)给药的1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H- 吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对鼠类PyMT乳癌模型中的体内肺癌转移的抑制

PyMT同基因型乳癌模型肺癌转移评估

PyMT同基因型乳癌植入小鼠模型用于评估化合物1的体内活性。简单来说，将总体积0.1mL的1×10⁶个细胞(解离自PyMT肿瘤片段且冷冻储存在细胞冷冻培养基中) 植入到雌性小鼠(FVB/NJ，JAXWEST：RB05小鼠，来自Jackson Labs)的左侧上的第四乳房脂肪垫中。各组中植入总共三只小鼠。Molecular Imaging，Inc.的动物照护和使用委员会批准所有实验方案且按照美国国家卫生研究院(NIH)的所有法律、规定和指南进行实验。治疗通过以下方式开始：当肿瘤大小达到约600mg时，根据治疗当天的个别体重以每20g 0.2mL经口投与(管饲)化合物1每周两次或媒剂(0.4％羟丙基甲基纤维素于水中)和/或静脉内投与(IV)艾日布林每周三次或媒剂(80％盐水)。动物给药持续12天。每周三次记录体重和肿瘤测量值。

在研究结束时，将肺组织切除且放入福尔马林中。接着，将福尔马林固定的肺样品放入石蜡块中。每个肺块有三个切片，其中每切片切割两个层面，且用苏木精和伊红染色。转移性肺结节经由显微镜计数。在PyMT模型中，艾日布林证明肺癌转移的减少(或在低剂量下增加)。化合物1与艾日布林的组合展示与单一药剂治疗相比累加的活性(图 6)。这些数据证明化合物1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

实例13.与艾日布林组合的间歇(非每天)给药的1-(3-叔丁基-1-(喹啉-6-基)-1H- 吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲对鼠类PyMT乳癌模型中的整体存活率的提高

PyMT同基因型乳癌模型存活率评估

PyMT同基因型乳癌植入小鼠模型用于评估化合物1的体内活性。简单来说，将总体积0.1mL的1×10⁶个细胞(解离自PyMT肿瘤片段且冷冻储存在细胞冷冻培养基中) 植入到雌性小鼠(FVB/NJ，JAXWEST：RB05小鼠，来自Jackson Labs)的左侧上的第四乳房脂肪垫中。各组中植入总共十只小鼠。Molecular Imaging，Inc.的动物照护和使用委员会批准所有实验方案且按照美国国家卫生研究院(NIH)的所有法律、规定和指南进行实验。治疗通过以下方式开始：当肿瘤大小达到约850mg时，根据治疗当天的个别体重以每20g 0.2mL经口投与(管饲)化合物1每周一次或两次或媒剂(0.4％羟丙基甲基纤维素于水中)和/或静脉内投与(IV)艾日布林每周三次或媒剂(80％盐水)。肿瘤接着在治疗开始之后三天经切除。动物接着给药持续存活率实验的持续时间。每周三次记录体重和肿瘤测量值。在PyMT模型中，0.1mg/kg的艾日布林证明存活率无提高。化合物1与艾日布林的组合展示存活率显著提高(图7)。这些数据证明化合物1的体内活性，且展示出与酶促和细胞数据的相关性。

本发明的范围不受打算作为本发明几个方面的说明的实例中所揭示的特定实施例限制，且功能上等效的任何实施例均在本发明的范围内。实际上，除本文所示和所述以外，本发明的各种修改将为所属领域的技术人员显而易见且欲属于所附权利要求书的范围内。

等效物

所属领域的技术人员将顶多使用常规实验即可认识到或能够确定尤其在本文中所述的特定实施例的许多等效物。所述等效物打算涵盖在随附权利要求书的范围中。

Claims

1.式I组合物在制备用于阻断乳房肿瘤生长、侵袭性、扩散、癌转移或提高乳癌患者的存活率的药物中的用途，所述患者的肿瘤微环境表达TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶

其中

n为0到7的整数；

X为医药学上可接受的盐的碱性基团；

其限制条件为当n为0时，所述式I组合物为母体游离碱；

其中所述药物足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物适于每天投与。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物适于间断的非每天给药、隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与一种或多种获取自以下的药剂组合使用：抗微管蛋白剂、免疫调节剂、DNA嵌入剂或DNA烷基化剂。

5.根据权利要求1到3中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与太平洋紫杉醇组合使用。

6.根据权利要求1到3中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子组合使用。

7.根据权利要求1到3中任一项所述的用途，其中所述式I化合物与艾日布林组合使用。

8.式I组合物在制备用于阻断患者中乳癌免疫耐受性的药物中的用途方法，所述患者的肿瘤微环境表达TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶

其中

n为0到7的整数；

X为医药学上可接受的盐的碱性基团；

其限制条件为当n为0时，所述式I组合物为母体游离碱，

其中所述药物足以阻断介导免疫耐受性的肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物适于每天投与。

10.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物适于间断的非每天给药、隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

11.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与一种或多种获取自以下的药剂组合使用：抗微管蛋白剂或免疫调节剂。

12.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与太平洋紫杉醇组合使用。

13.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子组合使用。

14.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与艾日布林组合使用。

15.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与抗CTLA-4剂组合使用。

16.根据权利要求8到10中任一项所述的方法，其中所述式I组合物与伊派利单抗组合使用。

17.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与抗PD-1剂组合使用。

18.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与拉立珠单抗组合使用。

19.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与抗PD L-1剂组合使用。

20.根据权利要求8到10中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与MPDL3280A组合使用。

21.式I组合物在制备用于在手术切除肿瘤之前治疗患者中处于新辅助情况中的乳癌的药物中的用途，所述患者的肿瘤微环境表达TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶

其中

n为0到7的整数；

X为医药学上可接受的盐的碱性基团；

其限制条件为当n为0时，所述式I组合物为母体游离碱；

其中在手术切除肿瘤之前所述药物足以阻断肿瘤微环境TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶。

22.根据权利要求21所述的用途，其中所述药物适于每天投与。

23.根据权利要求21所述的用途，其中所述药物适于间断的非每天给药、隔天给药、每隔两天给药、每周两次给药或每周一次给药。

24.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与太平洋紫杉醇组合使用。

25.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子组合使用。

26.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与艾日布林组合使用。

27.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与抗CTLA-4剂组合使用。

28.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与伊派利单抗组合使用。

29.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与抗PD-1剂组合使用。

30.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与拉立珠单抗组合使用。

31.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与抗PD L-1剂组合使用。

32.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与MPDL3280A组合使用。

33.式I组合物在制备用于治疗患者中的癌症的药物中的用途，所述患者的肿瘤微环境表达TIE2表达巨噬细胞中的TIE2激酶：

其中

n为0到7的整数；

X为医药学上可接受的盐的碱性基团；

其限制条件为当n为0时，所述式I组合物为母体游离碱，

其中所述患者表达内膜内皮细胞激酶-2(TIE2激酶)。

34.根据权利要求33所述的用途，其中所述式I组合物与一种或多种其它药剂组合使用。

35.根据权利要求33或34所述的用途，其中所述药物适于每天投与。

36.根据权利要求33或34所述的用途，其中所述药物适于间断的非每天投与。

37.根据权利要求33或34所述的用途，其中所述药物减少原发性肿瘤生长、肿瘤侵袭性、癌症内渗、癌症扩散、癌转移和肿瘤免疫耐受性中的一种或多种。

38.根据权利要求34所述的用途，其中所述其它药剂为以下中的一种或多种：太平洋紫杉醇、用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子、艾日布林、多西他赛、伊沙匹隆、长春新碱、长春瑞滨、顺铂、卡铂、奥沙利铂、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺、多柔比星、聚乙二醇化脂质体多柔比星、道诺霉素、艾达霉素、和表柔比星、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、阿糖胞苷、地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、甲氨蝶呤、埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、依维莫司、坦罗莫司、LY2835219、LEE011、PD 0332991、克卓替尼、卡博替尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、索拉非尼、瑞格非尼、阿西替尼、达沙替尼、伊马替尼、尼罗替尼、维罗非尼、达拉菲尼、曲美替尼、艾德昔布、喹杂替尼、他莫昔芬、氟维司群、阿那曲唑、来曲唑、依西美坦、乙酸阿比特龙酯、恩杂鲁胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、氟他胺、乙酸环丙孕酮、强的松、地塞米松、伊立替康、喜树碱、拓扑替康、依托泊苷、磷酸依托泊苷、米托蒽醌、伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸、贝林诺他、DZNep 5-氮杂-2'-脱氧胞苷、硼替佐米、卡非唑米、沙立度胺、来那度胺、泊马度胺、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、伊派利单抗、拉立珠单抗、尼沃单抗、MPDL3280A、贝伐单抗、阿柏西普、贝伦妥单抗维多汀、阿多-曲妥珠单抗恩他新、放射线疗法和西普亮塞-T。

39.根据权利要求34所述的用途，其中所述其它药剂为以下中的一种或多种：用于可注射悬浮液的太平洋紫杉醇蛋白结合粒子、艾日布林、多西他赛、伊派利单抗、拉立珠单抗、尼沃单抗和MPDL3280A。

40.根据权利要求8所述的用途，其中所述式I组合物与尼沃单抗组合使用。

41.根据权利要求21所述的用途，其中所述式I组合物与尼沃单抗组合使用。

42.根据权利要求33所述的用途，其中所述癌症是选自乳癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、头颈癌、膀胱癌、卵巢癌、神经胶质瘤、血管肉瘤、黑素瘤或急性骨髓性白血病。

43.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与多柔比星组合使用。

44.根据权利要求21到23中任一项所述的用途，其中所述式I组合物与环磷酰胺组合使用。