CN105816473B - 一种黄酮苷类组合物及其制剂和制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种黄酮苷类组合物，该组合物主要由槲皮素苷、山奈酚苷、二氢杨梅素苷、花色苷、柚皮素苷和圣草素苷按一定重量份比经加工制备而成；该组合物对对糖尿病及其并发症具有很好的疗效。黄酮类化合物和任意合理糖类以糖苷键结合形成黄酮苷类化合物，利用成苷的结构，在不影响苷元作为有效成分的治疗效果的前提下，提高黄酮类化合物的稳定性，并且苷类易溶，在人体内吸收较快，能更好的发挥苷元的治疗作用。

Description

一种黄酮苷类组合物及其制剂和制法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，特别涉及一种黄酮苷类组合物及其制剂和制法。

背景技术

糖尿病是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的终身性代谢性疾病。糖尿病本身不一定造成危害，但长期血糖增高，大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼睛、足等，据世界卫生组织统计，糖尿病并发症高达100多种，是目前已知并发症最多的一种疾病。因糖尿病死亡者有一半以上是心脑血管所致，10％是肾病变所致，截肢患者中因糖尿病引发是其他原因的10～20倍。因此治疗和预防糖尿病及其并发症是至关重要的社会问题。

随着对糖尿病及其并发症发病机制的认识,防治糖尿病及其并发症的药物及先导化合物也相继被发现和研究,其中黄酮类化合物作为自然界中一类具有生物活性的天然产物,也逐渐引起医药界的重视。近年来发现许多黄酮类化合物对糖尿病及其并发症有一定的预防和治疗作用，尤其是槲皮素和二氢杨梅素等化合物，例如中国专利101674821中公开的“用槲皮素、杨梅黄酮和绿原酸治疗糖尿病和代谢疾病的组合物”，可以用于治疗患者糖尿病和代谢疾病以及减轻肥胖患者体重；中国专利申请104000813A中公开了“槲皮素对糖尿病性白内障的防治作用”。但目前存在的问题是，黄酮类物质极易被氧化，无法长期在常温下存储，严重影响了其成药性和临床的推广应用。另外，单一种类的黄酮类化合物或者单一植物的总黄酮类组合物治疗糖尿病效果单一，疗效欠佳。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种性质稳定的，对糖尿病及并发症治疗效果明显，且副作用小的黄酮苷类组合物。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供一种黄酮苷类组合物，该组合物主要由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷0.01-20 山奈酚苷0.01-30 二氢杨梅素苷0.01-20

花色苷0.01-20 柚皮素苷0.01-20 圣草素苷0.01-20。

本发明将黄酮类化合物和有效糖元以糖苷键结合形成黄酮苷类化合物，利用成苷的结构，在不影响苷元作为有效成分的治疗效果前提下，提高黄酮类化合物的稳定性，并且苷类易溶，在人体内吸收较快，能更好的发挥苷元的活性。本发明所提供的黄酮苷类组合物，各组分协同作用，对糖尿病及其并发症具有意想不到的好疗效，远远优于单一成分。另外，本发明所提供的治疗糖尿病及其并发症的黄酮苷类组合物对人体无毒无害，绿色安全。

进一步的优选，制备所述组合物所用原料的重量份数为：

槲皮素苷1-20 山奈酚苷20-26 二氢杨梅素苷0.5-20

花色苷14-20 柚皮素苷2-20 圣草素苷15-20。

更进一步优选，制备所述组合物所用原料的重量份数为：

槲皮素苷1 山奈酚苷25 二氢杨梅素苷20

花色苷14 柚皮素苷20 圣草素苷20。

为了服用及携带方便，本发明所述黄酮苷类组合物和辅料制成固体制剂，该固体制剂包括片剂、胶囊剂、散剂或丸剂，所述组合物和辅料的重量份数比为1:1.5-3。

进一步优选，本发明将黄酮苷类组合物和辅料制成的片剂，所述辅料包括包括瓜尔胶、咪唑烷脲和白陶土；所述瓜尔胶、咪唑烷脲和白陶土的重量份数比为8-10:1:10-12。

本发明所提供的片剂内加入的瓜尔胶和咪唑烷脲可缩短片剂的崩解时限，利于主要活性成分的溶出；白陶土可以促进组合物间的粘结力，不用加入其余的粘合剂，可提高成型；本发明所提供的片剂具有性质稳定，崩解度好，疗效显著等有益效果。

优选，本发明所述的黄酮苷类组合物，由重量份比为1:1的杨梅和藤茶的混合物为原料制得的。制备方法包括以下步骤：

1)取藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所得的混合物加入总重量4-6倍的溶剂中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:8-8:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以所述溶剂为洗脱液进行洗脱，收集流出液10-60min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

进一步优化制备方法，所述黄酮苷类制备方法中的溶剂为70％-95％乙醇，所述方法包括如下步骤：

1)取藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所得的混合物加入总重量4-6倍的70％-95％乙醇中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:8的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以95％乙醇为洗脱液进行洗脱，收集流出液10-30min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

或者所述黄酮苷类制备方法中的溶剂为纯水，所述方法包括如下步骤：

1)取藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所得的混合物加入总重量4-6倍的纯水中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按8:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以纯水为洗脱液进行洗脱，收集流出液10-60min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

另一方面，本发明还提供所述黄酮苷类组合物在制备用于治疗糖尿病及其并发症的药物中的应用。

本发明的创新性在于将黄酮类化合物和任意合理糖类以糖苷键结合形成黄酮苷类化合物，利用成苷的结构，在不影响苷元作为有效成分的治疗效果的前提下，提高黄酮类化合物的稳定性，并且苷类易溶，在人体内吸收较快，能更好的发挥苷元的治疗作用。利用不同黄酮苷类化合物的组合，各组分协同作用，协同提高存储稳定性和抗糖尿病及其并发症的生物活性，对糖尿病及其并发症具有意想不到的好疗效，远远优于单一成分。另外，本发明所提供黄酮苷类组合物对人体无毒无害，绿色安全，是一种安全、高效、稳定的抗糖尿病及其并发症产品。

本发明所述原料药的简介如下：

槲皮素：又名栎精、槲皮黄素，Meletin Sophretin；分子式：C15H10O7，黄色针状结晶,属黄酮类化合物，存在于许多植物的花、叶、果实中。本发明所述槲皮素苷为槲皮素与任意合理糖类物质以糖苷键结合形成的苷。

山奈酚：又名山柰酚-3、山柰黄酮醇、四羟基黄酮百蕊草素Ⅲ，Kaempferol；分子式：C15H10O6，黄色精细粉末，属黄酮类化合物，存在于许多植物的花、叶、果实中。本发明所述山奈酚苷为山奈酚与任意合理糖类物质以糖苷键结合形成的苷。

二氢杨梅素：又名白蔹素、(2R,3R)-3,5,7-三羟基-2-(3,4,5-三羟基苯基)苯并二氢吡喃-4-酮，Dihydromyricetin；分子式：C15H12O8，白色针状结晶，属黄酮类化合物，来源为：葡萄属植物藤茶的提取物。本发明所述二氢杨梅素苷为二氢杨梅素与任意合理糖类物质以糖苷键结合形成的苷。

花色素：又名花青素(Anthocyanidin)，分子式：C15H11O6，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属类黄酮化合物。其与糖类物质以糖苷键结合之后即为花色苷，与花的颜色、叶变红等有关，是一种天然的抗氧化剂。

柚皮素：柚皮素是柚皮甙的甙元，又名4',5,7-三羟基黄酮、柑橘素、Naringenin、naringetol；分子式：C15H12O5，白色针状结晶，精细粉末，属于二氢黄酮类化合物。本发明所述柚皮素苷为柚皮素与任意合理糖类物质以糖苷键结合形成的苷。

圣草素：又名圣草酚，Eriodictyol，分子式：C15H12O6，淡黄色结晶性粉末，黄酮类化合物，具有较强的抗氧化效果。本发明所述圣草素苷为圣草素与任意合理糖类物质以糖苷键结合形成的苷。

附图说明

图1为黄酮苷组合物、杨梅黄酮、藤茶黄酮对自发性糖尿病鼠血管、心肌、肾作用比较图。

具体实施方式

实施例1

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷0.01 山奈酚苷0.01 二氢杨梅素苷12

花色苷15 柚皮素苷0.01 圣草素苷20。

实施例2

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷1 山奈酚苷5 二氢杨梅素苷0.01

花色苷20 柚皮素苷20 圣草素苷0.01。

实施例3

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷20 山奈酚苷30 二氢杨梅素苷20

花色苷0.01 柚皮素苷4 圣草素苷3。

实施例4

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷1 山奈酚苷25 二氢杨梅素苷20

花色苷14 柚皮素苷20 圣草素苷20。

制备方法：

1)取等重量藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所述的新鲜杨梅和藤茶浸泡于总重量4倍的95％的乙醇中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:8的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以95％乙醇为洗脱液进行洗脱，收集流出液10min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

实施例5

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷18 山奈酚苷26 二氢杨梅素苷20

花色苷14 柚皮素苷2 圣草素苷20。

制备方法：

1)取等重量藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所述的新鲜杨梅和藤茶浸泡于总重量6倍的70％的乙醇中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:8的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以95％乙醇为洗脱液进行洗脱，收集流出液30min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

实施例6

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷20 山奈酚苷24.5 二氢杨梅素苷0.5

花色苷20 柚皮素苷20 圣草素苷15。

制备方法：

1)取等重量藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；；

2)将步骤1)所述的新鲜杨梅和藤茶浸泡于总重量6倍的纯水中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按8:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以纯水为洗脱液进行洗脱，收集流出液10min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

实施例7

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷15 山奈酚苷24.5 二氢杨梅素苷0.5

花色苷20 柚皮素苷20 圣草素苷20。

制备方法：

1)取等重量藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所述的新鲜杨梅和藤茶浸泡于总重量4倍的纯水中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按7:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以纯水为洗脱液进行洗脱，收集流出液25min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

实施例8

一种黄酮苷类组合物，该组合物由下列重量份的原料经加工制备而成：

槲皮素苷6 山奈酚苷22 二氢杨梅素苷8

花色苷20 柚皮素苷19 圣草素苷17。

制备方法：

1)取等重量藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所述的新鲜杨梅和藤茶浸泡于总重量5倍的纯水中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以纯水为洗脱液进行洗脱，收集流出液60min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

实施例9片剂

制备方法：

1)将瓜尔胶加入2.5倍量的水中，充分研磨至水分量少于5％的糊状物，研磨下加入实施例4)所制备的组合物，混合均匀，冷冻干燥，制得包合物；

2)将包合物与50％白陶土和咪唑烷脲混合均匀，制得混合物，制粒，再加入50％白陶土，混合均匀，压片，每片重约0.5g。

实施例10片剂

制备方法：按实施例7所述方法制备112片，每片重约0.8g。

实施例11片剂

制备方法：按实施例7所述方法制备150片，每片重约0.8g。

实施例12丸剂

实施例7所制备的组合物 30g

辅料：木糖醇酐单硬脂酸酯 38g

肉豆蔻醇 5g

制备方法：

1)将木糖醇酐单硬脂酸酯和肉豆蔻醇置于水浴中加热熔融，制得熔融物，搅拌下加入实施例7所制备的组合物，充分搅拌使组合物分散在熔融物中，制得熔融液；

2)将熔融液置滴丸机中；

3)用10℃的液体石蜡进行滴制，制得100粒丸剂，每粒重约0.7g。

实施例13胶囊剂

制备方法：

1)将组合物加到聚乳酸醋酸酐中，研磨均匀，制得研磨物；将2/3重量的预凝胶淀粉按体积比为1:2加入水中，制得水溶液；将研磨物和水溶液混合均匀，于高速剪切乳化，制得初乳；将初乳置于高压匀质机中乳化，制得乳液；将乳液超微粉碎，制得粒径范围为10μm的微囊；

2)将微囊与剩余的预凝胶淀粉混合均匀，制得混合粉；

3)将羟丙甲纤维素溶于无水乙醇中，加入混合粉，混合均匀，制软材；

4)将软材过24目筛，制湿颗粒，将湿颗粒喷雾干燥，进行整粒，制得颗粒；

5)；将步骤4)制得的颗粒填充在胶囊壳内，制得100粒胶囊剂，每粒重约0.3g。

试验1黄酮苷类组合物的稳定性及抗氧化作用试验

1试验材料

1.1仪器与试剂：

AE-240电子分析天平(梅特勒-托利仪器有限公司)

UV-2401型分光光度计(日本岛津)

羟自由基清除能力测定试剂盒，购自江莱生物科技有限公司。

1.2试验组药物：

试验组1：实施例4中所制备的黄酮苷类组合物；

试验组2，实施例6中所制备的黄酮苷类组合物。

1.3对照组药物：

对照组1：杨梅中含有的总黄酮，医用级，浙江天然产物化学有限公司，批号：D20141226；

对照组2：藤茶中含有的总黄酮，医用级，浙江天然产物化学有限公司，批号：20140302。

1.4待测液的配制：

精确称取试验组和对照组样品，分别配置成浓度为0.05mg/ml的水溶液，备用；

2氧自由基清除率的测定

分别取试验组1、试验组2、对照组1和对照组2水溶液各四份，30℃放置10min、1h、6h和12h后用羟自由基清除能力测定试剂盒，测定样品的氧自由基清除率，检测结果见表1。

表1清除氧自由基活性检测结果

与试验组1相比**p<0.01，^ap<0.05,，^bp＞0.05；与试验组2相比##p<0.01。

3.结论

试验结果表明本发明所述的黄酮苷类组合物有较好的清除氧自由基作用，且稳定性较好，12h后效果基本稳定不变。对照组的黄酮类化合物也具有较好的抗氧自由基活性，但其稳定性差，6h后氧自由基的清除率已低于50％。

试验2黄酮苷类组合物的降血糖作用试验

1试验材料

1.1试验动物：SD鼠，雌雄兼用，180-250g,武汉大学动物试验中心提供，常规饲料，许可证号：SCXK(鄂)2008-0004。

1.2药物：

试验组1：实施例4中所制备的黄酮苷类组合物；

试验组2，实施例6中所制备的黄酮苷类组合物。

对照组1：杨梅中含有的总黄酮，医用级，浙江天然产物化学有限公司，批号：D20141226；

对照组2：藤茶中含有的总黄酮，医用级，浙江天然产物化学有限公司，批号：20140302。

链脲霉素sigma产品，批号：20140506。

2试验方法

将60只SD大鼠随机分配为6组，每组10只，随机选取5组，按按50mg/kg一次性腹腔注射链脲霉素溶液，72h后从大鼠尾静脉取血，离心分离血清，按试剂盒方法测定空腹血糖，血糖值均≥16mmol/L，说明造模成功。将该5组大鼠随机分配为试验组1、试验组2、对照组1、对照组2和模型组，另外未注射链脲霉素溶液的为空白组。试验组和对照组每天分别灌胃给药一次，每次50mg/kg，空白组及模型组灌胃同体积蒸馏水，连续给药15d。末次给药后，每组大鼠均给予戊巴比妥钠40mg/kg，腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心分离血清，测定空腹血糖。

3.数据处理

采用SPSS10.0软件进行统计分析。计量资料以(χ±S)表示，结果进行t检验；计数资料采用卡方检验。P<0.05为差异显著，试验结果见表2。

表2药物对糖尿病大鼠血糖的影响

与空白组相比^@@p<0.01；与模型组相比^&&p<0.01，^ap<0.05；与试验组1相比**p<0.05；与试验组2相比^##p<0.05。

4.结论

由试验可知，连续给药15天后，试验组和对照组小鼠空腹血糖含量均有降低，但试验组治疗效果要明显优于对照组，即本发明所述的黄酮苷类组合物，各组分协同作用，降血糖效果要优于单一植物总黄酮类化合物。

试验3黄酮苷类组合物对自发性糖尿病的治疗作用

1试验材料

1.1试验动物：SD鼠，雌雄兼用，180-250g,武汉大学动物试验中心提供，常规饲料，许可证号：SCXK(鄂)2008-0004；自发性糖尿病鼠，南京模式动物中心提供。

1.2药物：

试验组1：实施例4中所制备的黄酮苷类组合物；

试验组2：实施例6中所制备的黄酮苷类组合物；

对照组1：杨梅中含有的总黄酮，医用级，浙江天然产物化学有限公司，批号：D20141226；

对照组2：藤茶中含有的总黄酮，医用级，浙江天然产物化学有限公司，批号：20140302。

2试验方法

将30只自发性2型糖尿病(OLETF)大鼠随机分配为5组，每组6只，分别为试验组1、试验组2、对照组1、对照组2和模型组，空白组选6只健康SD大鼠。试验组和对照组每天分别灌胃给药一次，每次50mg/kg，空白组及模型组灌胃同体积蒸馏水，连续给药30d。然后测量血压，取血测量血糖和血脂，试验结果见表3；处死后取心、血管、肾，组织病理学观察，试验结果见图1。

3.数据处理

采用SPSS10.0软件进行统计分析。计量资料以(χ±S)表示，结果进行t检验；计数资料采用卡方检验。P<0.05为差异显著。

表3药物对自发性糖尿病大鼠血压、血糖、血脂的影响

与空白组相比^@@p<0.01；与模型组相比^&&p<0.01；^ap<0.05；与试验组1相比**p<0.01；与试验组2相比^##p<0.01。

4.结论

试验结果可知，本发明所述黄酮苷类组合物可有效降低自发性糖尿病大鼠的血糖，同时降低小鼠由糖尿病引起的高血压、高血糖和高血脂并发症状，效果显著，喂药30天，各项指标可接近正常值。而对照组的单一黄酮效果欠佳。

组织病理学观察结果可知，糖尿病大鼠血管平滑肌增生，导致血管内径狭窄；心肌细胞排列紊乱；肾单位减少，肾组织萎缩。使用黄酮苷类组合物后，血管内径明显变宽，心肌细胞以及肾组织趋于正常，说用本发明所属黄酮苷类组合物具有良好的血管保护作用、心肌保护作用和肾保护作用。对照组的单一黄酮类化合物对血管、心肌和肾组织有一定保护作用，但作用不如黄酮苷类组合物。

因此，本发明所述的黄酮苷类组合物在治疗糖尿病及其并发症方面具有较好的效果，且性质稳定，可储存，可成药，具有较为广阔的临床应用前景，是一项具有创新性及使用价值的发明。

Claims (8)

1.一种黄酮苷类组合物，其特征在于，所述组合物由下列重量份的成分组成：

槲皮素苷0.01-20 山奈酚苷0.01-30 二氢杨梅素苷0.01-20

花色苷0.01-20 柚皮素苷0.01-20 圣草素苷0.01-20；

所述黄酮苷类化合物是以重量份比为1:1的杨梅和藤茶的混合物为原料制得的，所述的黄酮苷类组合物的制备方法包括如下步骤：

1)取藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所得的混合物加入总重量4-6倍的溶剂中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:8-8:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以所述溶剂为洗脱液进行洗脱，收集流出液10-60min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

2.如权利要求1所述的黄酮苷类组合物，其特征在于，所述组合物由下列重量份的成分组成：

槲皮素苷1-20 山奈酚苷20-26 二氢杨梅素苷0.5-20

花色苷14-20 柚皮素苷2-20 圣草素苷15-20。

3.如权利要求1所述的黄酮苷类组合物，其特征在于，所述组合物由下列重量份的成分组成：

槲皮素苷1 山奈酚苷25 二氢杨梅素苷20

花色苷14 柚皮素苷20 圣草素苷20。

4.如权利要求1-3任一所述的黄酮苷类组合物和辅料制成的固体制剂，其特征在于，所述固体制剂包括片剂、胶囊剂、散剂或丸剂；所述组合物和辅料的重量份数比为1:1.5-3。

5.如权利要求4所述的黄酮苷类组合物和辅料制成的固体制剂，其特征在于，所述固体制剂为片剂，所述辅料包括瓜尔胶、咪唑烷脲和白陶土；所述瓜尔胶、咪唑烷脲和白陶土的重量份数比为8-10:1:10-12。

6.如权利要求1所述的黄酮苷类组合物，其特征在于，所述溶剂为70％-95％乙醇，所述方法包括如下步骤：

1)取藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所得的混合物加入总重量4-6倍的70％-95％乙醇中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按1:8的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以95％乙醇为洗脱液进行洗脱，收集流出液10-30min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

7.如权利要求6所述的黄酮苷类组合物，其特征在于，所述溶剂为纯水，所述方法包括如下步骤：

1)取藤茶和去核杨梅洗净，混匀，得混合物，备用；

2)将步骤1)所得的混合物加入总重量4-6倍的纯水中浸提，过滤，去除残渣，浓缩，按8:1的比例加入醇和水的混合物，过滤去除沉淀，上清液过硅胶柱，以纯水为洗脱液进行洗脱，收集流出液10-60min的液体，浓缩，挥干，得到黄酮苷类组合物。

8.如权利要求1-3任一所述的黄酮苷类组合物在制备用于治疗糖尿病及其并发症的药物中的应用。