CN105770144A - 复方鱼腥草糖浆及其治疗脑脊髓炎的制药用途及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉及一种复方鱼腥草糖浆。名称为复方鱼腥草糖浆及其治疗脑脊髓炎的制药用途及检测方法。该药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100、黄芩25、板蓝根25、连翘10、金银花10。制法为：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得。所述复方鱼腥草糖浆可用于治疗脑脊髓炎和单纯疱疹病毒性脑炎。本发明还提供了采用高效液相色谱法和气相色谱法对复方鱼腥草糖浆进行含量测定的方法。

Description

复方鱼腥草糖浆及其治疗脑脊髓炎的制药用途及检测方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及复方鱼腥草糖浆及其治疗脑脊髓炎的制药用途及检测方法。

背景技术

单纯疱疹病毒性脑炎(herpessimplexvirusencephalitis，HSVE)，简称为单纯疱疹脑炎(herpessimplexencephalitis，HSE)，是临床上最常见的非流行性病毒性脑炎，死亡率和致残率都相当高。引起单纯疱疹病毒性脑炎90%以上为单纯疱疹病毒I型（herpessimplexvirustype1，HSV-1）。

HSVE常累及大脑颞叶、额叶及边缘系统，引起脑组织出血坏死，故又称为急性坏死性脑炎或出血性脑炎。由于HSVE具有高病死率、病情严重、发展迅速等特点，且治疗效果受患者意识水平和神经功能缺损程度的影响，故应强调早期诊断、早期治疗。

目前国内外对抗HSV-1药物的研究主要集中在核苷类抑制DNA聚合酶的药物上，如阿昔洛韦、更昔洛韦等。而且，大多以联合用药为主，比如，更昔洛韦联合蒲地蓝消炎口服液治疗，阿昔洛韦联合地塞米松治疗，阿昔洛韦联合纳洛酮治疗等。由于这些药物都是病毒酶底物类似物，应用过程中病毒会产生耐药性，影响疗效，且副反应较大，因此寻找新的、高效低毒的抗HSV-1的药物仍为有意义之举。

本发明提供的复方鱼腥草糖浆药物可以用于治疗单纯疱疹病毒性脑炎。经研究表明，本发明药物对单纯疱疹病毒性脑炎具有较好的治疗效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种复方鱼腥草糖浆的药物。

本发明的另一目的是提供该复方鱼腥草糖浆药物的制备方法。

本发明还提供了该复方鱼腥草糖浆药物的制药新用途。

本发明还提供了该复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法。

本发明的目的是由以下方式实现的：

一种复方鱼腥草糖浆药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份。

所述的复方鱼腥草糖浆药物，采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得。

所述的复方鱼腥草糖浆药物可用于治疗脑脊髓炎。

所述的复方鱼腥草糖浆药物也可用于治疗单纯疱疹病毒性脑炎。

一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，该复方鱼腥草糖浆药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得；采用如下两种方法中的任意一种或两种进行质量检测：采用高效液相色谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定或/和采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定。

一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，该复方鱼腥草糖浆药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得；采用高效液相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为280～290nm；柱温：25～35℃；流速：0.5～1.5mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品置容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品置容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取置容量瓶中，加甲醇，超声处理，放置至室温后，用甲醇补充，经离心，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各2～10μL，注入高效液相色谱仪测定。

上述采用高效液谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定，优选方法和步骤如下：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为284nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备溶液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，150W，50kHz超声处理10min，放置至室温后，用甲醇补充至刻度，经3000r·min^-1离心10min，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各5μL，注入高效液相色谱仪测定。

一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，该复方鱼腥草糖浆药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得；采用气相色谱法对复方鱼腥草糖浆药物中的β-荜澄茄油烯进行含量测定：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比5～7:1；检测器温度200～240℃；进样口温度180～220℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯，置容量瓶中，用环己烷溶解并定容，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物，加水，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷，连接回流冷凝管，加热保持微沸，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，合并环己烷液，置容量瓶中，加环己烷，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1～5μL，注入气相色谱仪，测定。

上述采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定，优选方法和步骤如下：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比6:1；检测器温度220℃；进样口温度200℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯6.6mg，置10mL容量瓶中，用环己烷溶解并定容至刻度，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物50mL，加水250mL，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸4h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3mL，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25mL容量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定。

为了更好地理解本发明，发明人提供以下研究资料，说明本发明的技术效果，但下述实验用于进一步说明但不限于本发明。

实验一：本发明药物对单纯疱疹病毒性脑炎治疗作用的研究

本研究通过建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型，然后本发明药物腹腔内给药来观察该药对HSE（单纯疱疹病毒性脑炎）的治疗作用。

1材料与方法

1.1实验材料实验动物：BALBC小鼠，3周龄由黑龙江中医药大学实验动物中提供。

药物：本发明药物：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。制备方法：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。

细胞：非洲绿猴肾传代细胞（Verocellline），由哈尔滨医科大学微生物教研室提供。病毒：单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）F株，购自中国科学院武汉病毒研究所。主要试剂：HSV荧光定量PCR试剂盒，达安基因公司产品；DMEM干粉（高糖型），美国GIBCO公司新产品；新生牛血清，购自杭州四季青生物工程研究所；甲基纤维素，Sigma公司产品；24孔培养板，采用GIBCO公司产品。

1.2实验方案

1.2.1Vero细胞培养及病毒传代以（2～3）×10⁵个细胞/ml接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，置37℃、5%CO₂孵箱中培养，待细胞长成单层后进行实验。病毒传代：取出保存于-70℃冰箱中的HSV-1F株，自来水下冲至病毒悬液融化，接种长满单层Vero细胞的250ml培养瓶，置37℃、5%CO₂孵箱中感作1h，使病毒吸附，弃去残余未吸附病毒，加入含2%小牛血清的DMEM培养48～96h，待细胞出现变圆、融合及死亡脱落形成空斑时收集瓶中培养液，冻融2次，于1000r/min离心10min，取上清（病毒存于上清中），再作以上步骤传代，共4次。末次收集的病毒存于-70℃冰箱中备用。病毒的毒力鉴定用空斑单位形成（plaqueform-ingunit，PFU）法，病毒用DMEM作10倍连续稀释至10^-6，接种长满单层Vero细胞的24孔培养板，每个稀释度4孔，感作1h后，弃去未吸附的病毒，加入含2%甲基纤维素及2%小牛血清的DMEM培养96h，吸去培养液，用3.3%的结晶紫染色后可见清晰的空斑，计算最大稀释度的空斑数，病毒滴度根据以下公式计算：滴度（PFu/ml）=稀释度×（P1+P2+…+Pn）/n×1/V

其中，P=该稀释度培养板每孔中的空斑数，n=该稀释度接种的孔数，V=每孔接种病毒量（ml）

1.2.2Balb/c小鼠HSE模型的建立与分组

60只小鼠全部颅内接种HSV-1F株（5×10⁵），方法是用乙醚麻醉小鼠后，在右眼外眦与外耳道中点间垂直进针约3mm，注入病毒0.03ml，实验分为两个部分，A实验40只，B实验20只。A实验随机分为实验组20只，对照组20只；B实验随机分为实验组10只，对照组10只。实验组在接种病毒后的第3、4、5天分别经灌胃本发明药物0.2mg/kg，对照组注入等量生理盐水。

1.2.3观察指标

实验观察两组小鼠的死亡率，观察时间为病毒接种后4周。引物序列和探针序列见表1-1。

表1-1PCR引物及荧光探针的碱基序列

2实验结果

2.1实验的结果病毒接种后第3天开始有小鼠死亡，2周后未再有死亡。实验组死亡5只，死亡率为25%，对照组死亡12只，死亡率为60%。两组间的死亡率有显著差异（χ²=5.0123，P<0.05，见表1-2）。

表1-2实验两组间死亡率的比较（例）

病毒DNA定量拷贝数见表1-3。数据表明本发明药物处理组的病毒拷贝数明显低于对照组，提示本发明药物能有效地抑制HSV-1的复制。

表1-3实验组及对照组样本初始病毒DNA拷贝数

3讨论

本研究发现，颅内直接注射HSV-1能建立稳定的Balb/c小鼠的单纯疱疹病毒性脑炎模型，本发明药物能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率（P<0.05），能显著降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠脑内HSV-1DNA的拷贝数。因此推断本发明药物降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率与其抑制HSV-1的复制有关。

实验二：HPLC法同时测定本发明药物中右旋松脂酚和左旋圣草素的含量

为更好地控制本发明药物的质量，本发明以处方中连翘的成分右旋松脂酚和黄芩的成分左旋圣草素为定量指标，建立了一种HPLC法，用梯度洗脱的方法同时测定右旋松脂酚和左旋圣草素的含量，该方法准确性和稳定性好，可作为本发明药物的含量测定方法和质量控制依据，现研究如下。

1仪器与试药

DGLC双三元高效液相色谱仪（美国Thermo，双三元梯度泵、自动进样器、多波长紫外检测器、柱温箱）；Chromeleon色谱工作站；WatersSunFireC₁₈色谱柱（美国WATERS公司，150mm×4.6mm，5μm）；TP150超声清洗机（北京天鹏电子科技有限公司）；AUW120D电子分析天平（十万分之一，日本岛津公司）；乙腈、甲醇为色谱纯（美国TEDIA公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

右旋松脂酚对照品（中国食品药品检定研究院），左旋圣草素对照品（中国食品药品检定研究院），本发明药物：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g；制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。

2方法与结果

2.1色谱条件

WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为284nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000。

表2-1梯度洗脱程序

2.2溶液的制备

2.2.1右旋松脂酚和左旋圣草素对照品溶液

精密称取右旋松脂酚对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL右旋松脂酚1.60mg的贮备液。

精密称取左旋圣草素对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液。

2.2.2供试品溶液

取本发明药物摇匀，精密量取5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理（150W，50kHz）10min，放置至室温后，用甲醇补充至刻度，经3000r·min^-1离心10min，取上清液，过滤，即得供试品溶液。

2.2.3阴性样品溶液

右旋松脂酚的阴性样品溶液：按原处方量和工艺制备缺连翘的本发明药物，依照“2.2.2”项下的方法制备阴性样品溶液Ⅰ。

左旋圣草素的阴性样品溶液：按原处方量和工艺制备缺黄芩的本发明药物，依照“2.2.2”项下的方法制备阴性样品溶液Ⅱ。

2.3干扰试验

取对照品混合溶液（分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备溶液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL）、供试品溶液、阴性样品溶液各5μL，注入液相色谱仪，在“2.1”色谱条件下，本发明药物的供试品溶液在对照品色谱相同的位置有右旋松脂酚和左旋圣草素的峰，两成分峰与其相邻峰的完全分离，理论塔板数以右旋松脂酚的峰计均大于5000，而且阴性样品溶液中无相应的右旋松脂酚峰和左旋圣草素峰，对测定无干扰。见说明书附图中的色谱图：图1、图2、图3、图4。

2.4标准曲线的制备

分别精密量取左旋圣草素对照品贮备液3.0，2.0，1.0，0.5，0.25mL和右旋松脂酚对照品储备液6.0，4.0，2.0，1.0，0.5mL置同一20mL容量瓶中，混合均匀，用甲醇定量稀释成含左旋圣草素240.0，160.0，80.0，32.0，16.0μg·mL^-1；含右旋松脂酚480.0，320.0，160.0，64.0，32.0μg·mL^-1的系列混合对照品溶液，精密取5μL，注入色谱仪，以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X，μg·mL^-1），绘制标准曲线，得标准曲线方程，Y（左旋圣草素）=0.1935X（左旋圣草素）－0.0235，r=1.0000，线性范围16.0～240.0μg·mL^-1；Y（右旋松脂酚）=0.2295X（右旋松脂酚）+0.076，r=1.0000，线性范围32.0～480.0μg·mL^-1；结果表明，在线性范围内，两者线性关系良好。

2.5精密度试验

取“2.3”项下的对照品混合溶液5μL，在“2.1”色谱条件下，连续自动进样5次，记录左旋圣草素和右旋松脂酚的峰面积，计算5个峰面积值的RSD，结果左旋圣草素峰面积的RSD为0.363%，右旋松脂酚峰面积的RSD为0.294%；结果表明仪器精密度良好。

2.6重复性试验

取同一批号的样品，按“2.2.2”供试品溶液制备项下的方法，制备5份供试品溶液，分别取5μL进样，记录两成分的峰面积，并计算峰面积的RSD值，结果，左旋圣草素的含量平均值为0.5783mg·mL^-1，RSD为1.79%；右旋松脂酚的含量平均值为1.6386mg·mL^-1，RSD为1.53%，表明该法重复性较好。

2.7稳定性试验

取“2.9”项下的样品溶液在室温下放置1，6，12，24h，分别测定色谱峰面积，计算左旋圣草素和右旋松脂酚峰面积的RSD分别为0.90%、0.32%，结果表明样品在24h内稳定。

2.8回收率试验

精密量取已知含量的样品2.5mL，分别精密加入“2.2.1”项下左旋圣草素对照品贮备液1mL和右旋松脂酚对照品贮备液2.5mL，共制备6份；按“2.9”项下方法制备样品并测定左旋圣草素和右旋松脂酚的含量，计算加样回收率。结果左旋圣草素的平均加样回收率为97.02%，RSD=1.03%（n=6），右旋松脂酚的平均加样回收率为98.71%，RSD=0.67%（n=6）。

2.9样品含量测定

取3个批号的样品，按“2.2.2”供试品溶液制备项下方法，制成样品溶液，在“2.1”色谱条件下，分别取对照品混合溶液（含左旋圣草素80.0μg·mL^-1、右旋松脂酚160.0μg·mL^-1）和样品溶液各5μL，进样，测定两成分的峰面积，以外标法计算左旋圣草素、右旋松脂酚的含量。结果见表2-2。

表2-2样品含量测定结果（mg·mL^-1，n=3）

3结论

3.1在色谱条件筛选时，流动相采用1%冰醋酸溶液-乙腈（80:20）等度洗脱，左旋圣草素、右旋松脂酚与相邻杂质分离不理想；采用梯度洗脱，流动相极性由强到弱（乙腈比例由15%增大到80%），使两成分与相邻色谱峰完全分离，取得满意结果。

本试验经过测试，320nm、315nm、310nm、306nm、300nm、295nm、290nm、284nm、280nm、275nm、270nm的检测结果显示，284nm波长可兼顾两个被测成分的最大灵敏度，故采用284nm作为检测波长。

3.2本发明建立的HPLC法可同时测定左旋圣草素和右旋松脂酚的含量，操作简便，准确性高，为本发明药物质量控制提供可靠的方法。

3.3根据3批样品的含量测定结果，以左旋圣草素和右旋松脂酚含量平均值的80%作为最低标准限度来控制成品中两组分的含量。即每1mL样品中左旋圣草素和右旋松脂酚含量分别不得低于0.5mg和1.25mg。

实验三：气相色谱外标法测定本发明药物中β-荜澄茄油烯的含量

本发明建立了GC（气相色谱）外标法对本发明药物中金银花的成分之一β-荜澄茄油烯进行了含量测定，以此控制本发明药物的质量。

1仪器与试药

G-3900日立气相色谱仪，FID检测器，Anastar色谱工作站。SPH-200氢气发生器（北京中惠普分析技术研究所），SPB-3全自动空气源（北京中惠普分析技术研究所）。

本发明药物：处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g；制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。

β-荜澄茄油烯对照品由中国药品生物制品检定研究院提供；环己烷为分析纯。

2溶液制备

2.1对照品溶液

利用差量法精密称取β-荜澄茄油烯6.6mg，置10mL容量瓶中，用环己烷溶解并定容至刻度，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液。

2.2供试品溶液

精密量取本发明药物50mL，加水250mL，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸4h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3mL，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25mL容量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，即得。

3色谱条件

SE-30毛细管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比6:1；检测器温度220℃；进样口温度200℃。

在此色谱条件下，β-荜澄茄油烯峰与相邻色谱峰完全分离，理论塔板数按β-荜澄茄油烯峰计算应不低于10000，见说明书附图：图5、图6、图7。

4方法学考察

4.1线性关系考察

精密吸取浓度为0.20、0.34、0.52、0.69、0.82、1.03mg·mL^-1的β-荜澄茄油烯对照品溶液分别1μL注入气相色谱仪，按照“3”项下色谱条件测定β-荜澄茄油烯峰面积，以β-荜澄茄油烯浓度为横坐标，β-荜澄茄油烯吸收峰面积为纵坐标作线性回归得方程：

Y=2.514×104X—197.1，R²=0.9990，结果表明β-荜澄茄油烯进样浓度在0.20～0.98mg·mL^-1范围内关系良好。

4.2精密度试验

精密吸取β-荜澄茄油烯对照品溶液1μL，连续进样6次，测定峰面积分别为17532、17762、17714、17777、17843、17694，RSD为0.80%，说明仪器精密性良好。

4.3重复性试验

取本发明药物样品，按照“2.2”项下方法制备6份供试品溶

液，按照上述色谱条件，进样1μL测定峰面积。计算结果表明β-荜澄茄油烯峰含量的平均值为0.34mg·mL^-1，RSD为0.20%，说明本法重复性良好。

4.4稳定性试验

取本发明药物样品，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，然后分别在0，2，6，10，16h进样1μL，测定峰面积。计算结果表明β-荜澄茄油烯峰含量的平均值为0.35mg·mL^-1，RSD为0.50%，表明供试品溶液在16h内稳定。

4.5检测限及定量限测定

取对照品溶液（浓度为0.80mg·mL^-1）1mL，逐级稀释，每稀释1次，吸取1μL注入气相色谱仪，按照“3”项下色谱条件测定β-荜澄茄油烯峰面积。以S/N=3求得β-荜澄茄油烯的检测限为2.48×10^-2mg·mL^-1，以S/N=10求得β-荜澄茄油烯的定量限为9.93×10^-2mg·mL^-1。

4.6耐用性试验

为测试实验的耐用性，又使用PEG-20M毛细管色谱柱（外标法），结果实验的重复性、稳定性均比较好；通过不同的操作人员，所得实验结果基本一致。

4.7回收率试验

精密量取已知含量的6份本发明药物样品各25mL，分别精密加入β-荜澄茄油烯对照品7.38mg。按照“2.2”项下方法制备供试溶液，按上述色谱条件，进样1μL，计算加样回收率。计算结果表明平均回收率为99.46%，RSD为0.02%。

5样品测定

分别取6批样品按照“2.2”项下方法，每批样品平行制备2份供试品溶液。按上述色谱条件进样测定，以外标法计算含量。结果批号为20150223，20150224，20150225，20150207，20150208，20150620本发明药物中β-荜澄茄油烯含量（n=2）分别为0.32、0.36、0.33、0.27、0.24、0.35mg·mL^-1。

6讨论

6.1本发明采用外标法测定本发明药物中β-荜澄茄油烯的含量，结果发现该方法简便，重复性好，可用来测定本发明药物中β-荜澄茄油烯的含量。

6.2采用本研究方法对本发明药物中β-荜澄茄油烯的含量进行测定，可以有效控制药物的质量。

附图说明：

图1：对照品HPLC色谱图，图中1号峰为左旋圣草素色谱峰，2号峰为右旋松脂酚色谱峰

图2：供试品HPLC色谱图，图中1号峰为左旋圣草素色谱峰，2号峰为右旋松脂酚色谱峰

图3：阴性样品溶液Ⅰ（缺连翘）HPLC色谱图，图中1号峰为左旋圣草素色谱峰

图4：阴性样品溶液Ⅱ（缺黄芩）HPLC色谱图，图中1号峰为左旋圣草素色谱峰

图5：本发明药物样品气相色谱图

图6：对照品气相色谱图

图7：空白对照气相色谱图

具体实施方式：

实施例1：

处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。

制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。

含量测定：

采用高效液谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为284nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备溶液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，150W，50kHz超声处理10min，放置至室温后，用甲醇补充至刻度，经3000r·min^-1离心10min，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各5μL，注入高效液相色谱仪测定；

（5）测定结果：每1mL样品中左旋圣草素和右旋松脂酚含量分别为0.614mg和1.32mg。

采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比6:1；检测器温度220℃；进样口温度200℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯6.6mg，置10mL容量瓶中，用环己烷溶解并定容至刻度，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物50mL，加水250mL，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸4h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3mL，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25mL容量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定；

（5）测定结果：每1mL样品中β-荜澄茄油烯含量为0.35mg。

实施例2：

处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。

制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。

含量测定：

采用高效液谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为284nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备溶液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，150W，50kHz超声处理10min，放置至室温后，用甲醇补充至刻度，经3000r·min^-1离心10min，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各5μL，注入高效液相色谱仪测定；

（5）测定结果：每1mL样品中左旋圣草素和右旋松脂酚含量分别含量分别为0.621mg和1.35mg。

采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比6:1；检测器温度220℃；进样口温度200℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯6.6mg，置10mL容量瓶中，用环己烷溶解并定容至刻度，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物50mL，加水250mL，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸4h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3mL，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25mL容量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定；

（5）测定结果：每1mL样品中β-荜澄茄油烯含量为0.37mg。

实施例3：

处方：鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g。

制备方法：取鱼腥草100g、黄芩25g、板蓝根25g、连翘10g、金银花10g，加1190mL水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水1000mL，搅匀，过滤，灌装，即得。

含量测定：

采用高效液谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为284nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备溶液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，150W，50kHz超声处理10min，放置至室温后，用甲醇补充至刻度，经3000r·min^-1离心10min，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各5μL，注入高效液相色谱仪测定；

（5）测定结果：每1mL样品中左旋圣草素和右旋松脂酚含量分别为0.603mg和1.34mg。

采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比6:1；检测器温度220℃；进样口温度200℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯6.6mg，置10mL容量瓶中，用环己烷溶解并定容至刻度，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物50mL，加水250mL，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸4h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3mL，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25mL容量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定；

（5）测定结果：每1mL样品中β-荜澄茄油烯含量为0.33mg。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (9)

1.一种复方鱼腥草糖浆药物，其特征在于，该药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份。

2.如权利要求1所述的复方鱼腥草糖浆药物，其特征在于，该药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得。

3.如权利要求1～2中任意一项所述的复方鱼腥草糖浆药物用于制备治疗脑脊髓炎药物中的应用。

4.如权利要求1～2中任意一项所述的复方鱼腥草糖浆药物用于制备治疗单纯疱疹病毒性脑炎药物的应用。

5.一种复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，该复方鱼腥草糖浆药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得；其特征在于，采用如下两种方法中的任意一种或两种进行质量检测：采用高效液相色谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定或/和采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定。

6.如权利要求5所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，该复方鱼腥草糖浆药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得；其特征在于，采用高效液相色谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为280～290nm；柱温：25～35℃；流速：0.5～1.5mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品置容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品置容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取置容量瓶中，加甲醇，超声处理，放置至室温后，用甲醇补充，经离心，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各2～10μL，注入高效液相色谱仪测定。

7.如权利要求5或6所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，其特征在于，采用高效液谱法对右旋松脂酚和左旋圣草素进行含量测定：

（1）色谱条件：WatersSunFireC₁₈色谱柱；流动相A：乙腈，流动相B：1%冰醋酸溶液，梯度洗脱：0～15min，流动相A从15%线性增加至20%，流动相B从85%线性下降至80%；15～20min，流动相A从20%线性增加至25%，流动相B从80%线性下降至75%；20～25min，流动相A从25%线性增加至30%，流动相B从75%线性下降至70%；25～35min，流动相A保持在30%，流动相B保持在70%；35～40min，流动相A从30%线性增加至80%，流动相B从70%线性下降至20%；40～45min，流动相A保持在80%，流动相B保持在20%；检测波长为284nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min^-1；理论塔板数以右旋松脂酚峰计应不低于5000；

（2）右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液的制备：

①精密称取右旋松脂酚对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含右旋松脂酚1.60mg的贮备液；

②精密称取左旋圣草素对照品80.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含左旋圣草素1.60mg的贮备液；

③对照品混合溶液：分别取右旋松脂酚和左旋圣草素对照品贮备溶液1.0mL、0.5mL混合后，用甲醇稀释至10mL，得右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本发明药物摇匀，精密量取5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，150W，50kHz超声处理10min，放置至室温后，用甲醇补充至刻度，经3000r·min^-1离心10min，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

（4）测定：取供试品溶液、右旋松脂酚和左旋圣草素对照品混合溶液各5μL，注入高效液相色谱仪测定。

8.如权利要求5所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，该复方鱼腥草糖浆药物是由以下重量份的原料制成的：鱼腥草100重量份、黄芩25重量份、板蓝根25重量份、连翘10重量份、金银花10重量份，该复方鱼腥草糖浆药物采用如下方法制备：取鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花，加7倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩相对密度为1.18～1.20的清膏，加乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置24小时，取上清液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩药液；另取蔗糖，制成单糖浆，加入上述浓缩药液，加入水，搅匀，过滤，灌装，即得；其特征在于，采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比5～7:1；检测器温度200～240℃；进样口温度180～220℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯，置容量瓶中，用环己烷溶解并定容，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物，加水，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷，连接回流冷凝管，加热保持微沸，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，合并环己烷液，置容量瓶中，加环己烷，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1～5μL，注入气相色谱仪，测定。

9.如权利要求5或8所述的复方鱼腥草糖浆药物的质量检测方法，其特征在于，采用气相色谱法对β-荜澄茄油烯进行含量测定：

（1）色谱条件：SE-30毛细管柱；程序升温：柱温起始温度50℃，以15℃·min^-1速率升到150℃保持4min；氮气为载气；FID检测器；分流比6:1；检测器温度220℃；进样口温度200℃；

（2）对照品溶液：精密称取β-荜澄茄油烯6.6mg，置10mL容量瓶中，用环己烷溶解并定容至刻度，配成浓度为0.66mg·mL^-1的对照品溶液；

（3）供试品溶液：精密量取本发明药物50mL，加水250mL，照《中国药典》2015年版第四部通则2204挥发油测定法进行实验，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸4h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3mL，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25mL容量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，即得；

（4）测定：取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定。