CN105675890B - 一种检测实验鼠怀孕的装置及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测实验鼠怀孕的装置及方法，包括中空的检测盒、探测棒、滑动开关、胶体金试纸条和观测窗，探测棒收纳于检测盒内，检测盒上开有探测棒出口，探测盒侧壁上开有滑动槽，滑动开关设于探测盒侧壁外并穿过滑动槽固定在探测棒上，探测棒由滑动开关控制进出，胶体金试纸条固定于检测盒内，胶体金试纸条最前端的样品接触端头伸出至检测盒外，该发明主要通过利用雌鼠阴道解剖学特征、雄雌鼠交配行为学特征和雄鼠精子生物学特征，结合多种检测技术，达到检测实验鼠怀孕的目的。本发明具有检测方便，无应激，准确度高，数据可信度高等优点。

Description

一种检测实验鼠怀孕的装置及方法

技术领域

本发明属于实验动物妊娠诊断技术和免疫学技术领域，具体涉及一种检测实验鼠怀孕的装置及方法。

背景技术

实验动物是从事科学研究、教学、生产、检测及其科学实验的动物，被广泛应用于生物医学、医药研发、教学实验、生物检测等方面，在生命科学研究中起着非常重要的作用。因为小鼠和人的基因相似度有99％，且小鼠和大鼠的繁殖和饲养均相对廉价，繁殖迅速。目前，每10只实验动物中有大约9只是小鼠或大鼠，应用领域包括免疫学、肿瘤学、生理学。病理学、胚胎学和毒理学等，而且在神经科学中的应用也在不断增多，实验鼠也成了实验动物的代名词。

实验鼠的繁殖是实验动物生产和实验过程的关键。在实验鼠繁殖过程中，怀孕天数和妊娠时间是确定实验鼠分笼饲喂时间和实验孕鼠制备的决定性因素。准确的妊娠诊断可以使实验动物生产厂家和研究人员掌握准确的妊娠时间，更合理有效的安排饲养空间，并进一步减少漏检提高实验动物的利用率，并减少饲养成本。目前常用的实验鼠妊娠的诊断方法有阴栓目测检测法和阴道精子涂片检查法。

(1)阴栓检测法：阴栓是老鼠在交配4-5min后形成的一种白色浆液性物质，堵塞在阴道至子宫颈的腔内，阴栓一般在交配后12-24h自动脱落。阴栓检测法就是在老鼠合笼后次日清晨把是否检查到阴栓作为其交配和妊娠的标志，目前主要通过目测和探测来确定。目测就是直接用眼睛观察，探测需要持探测棒轻触老鼠阴道口，如有明显抵触感则表明有阴栓，如无抵触感且探测棒可无阻力的插入则无阴栓。该方法简单方便，但由于老鼠阴栓大小不一，大则凸出于阴道口易于观察，而小则在子宫颈内，需要翻开阴道口仔细检查，因此仅靠目测很难确诊，且漏检的几率也很大，使得饲养成本提高，造成了生产浪费。探测检查用的探测棒大都自制，探测过程中易对雌鼠产生较大刺激。由漏检所导致的孕鼠和初生的小鼠因无法确定相关指标，也必须处理，在动物伦理方面也存在消极影响。

(2)阴道精子涂片检查法：在老鼠合笼后次日清晨将沾有生理盐水的棉签轻柔旋入雌鼠的阴道，旋转一圈后拿出，再将棉签涂片，巴氏染色镜检。该方法虽然准确性较高，但程序繁琐。在实际大规模生产和实验过程中，因动物数量较多，需耗费大量时间，并不实用。

发明内容

为了解决现有条件下不能快速简单而准确检测的不足，本发明设计提供一套全面快速的检测方法，具有携带方便、检测快速准确、操作简单的特点。

实现本发明目的的技术方案是：

一种检测实验鼠怀孕的装置，包括中空的检测盒、探测棒、滑动开关、胶体金试纸条和观测窗，所述的探测棒收纳于检测盒内，检测盒上开有探测棒出口，探测盒侧壁上开有滑动槽，滑动开关设于探测盒侧壁外并穿过滑动槽固定在探测棒上，探测棒由滑动开关控制进出，所述的胶体金试纸条固定于检测盒内，胶体金试纸条最前端的样品接触端头伸出至检测盒外，胶体金试纸条包括吸收垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫、pH试纸层和PVC底板，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述的样品垫样作为样品接触端头设在胶体金试纸条最前端，胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸收垫再自前向后依次粘贴在PVC底板上，所述的pH试纸层连接在吸收垫中段，检测盒上开有观测窗，所述的观测窗开设于胶体金试纸条的检测线、质控线和pH试纸层的上方，所述的胶体金垫包被有胶体金标记的能识别鼠精子抗原的鼠抗精子抗体，所述检测线包被有鼠抗精子抗体，所述质控线包被有山羊抗鼠IgG。

所述的一种检测实验鼠怀孕的装置，所述的能识别鼠精子抗原的鼠抗精子抗体是提取于免疫性不育小鼠精液。

所述的一种检测实验鼠怀孕的装置，还包括试纸保护盖，试纸保护盖盖在检测盒上，以保护伸出至检测盒外的胶体金试纸条，且试纸保护盖与探测棒出口处于检测盒相反的两端。

所述的一种检测实验鼠怀孕的装置，还包括试纸固定突起，所述的试纸固定突起为中空的棱台体，试纸固定突起固定在伸出至检测盒外的胶体金试纸条处，胶体金试纸条从试纸固定突起的上底面伸出。

一种检测实验鼠怀孕的方法，利用如权利要求1-4任一所述的装置，包括以下步骤：

步骤1：首先查看待测母鼠阴部有无肉眼可见的阴栓，有则完成检测并判断为怀孕，否则伸出装置上的探测棒，对待测母鼠阴部内部进行探测，若有阻塞感则判断为有阴栓，完成检测并判断为怀孕，否则执行步骤2；

步骤2：往待测雌鼠阴道内插入检测试纸，并将试纸检测接触端头与待测母鼠阴道内部分泌物充分接触，然后读取试纸上显示的结果，若检测PH值呈中性，PH试纸为褐色，并发生抗精子抗体免疫反应即免疫试纸条呈现两条红色指示线，则为强阳性，判断为怀孕；若检测PH值呈弱酸性，PH试纸为红色或橙色，且发送抗精子抗体免疫反应免疫试纸条呈现两条红色指示线则为阳性，判断为怀孕；若检测PH值呈中性，PH试纸为褐色，未发生免疫反应则为假阳性，判断为未怀孕；若检测PH值呈弱酸性，PH试纸为红色或橙色，未发生免疫反应则为阴性，判断为未怀孕。

本发明的技术效果在于，本发明采用探测法、胶体金试纸法与PH值测定法三种方法结合的评价体系。并开发出一种新的胶体金试纸与探测结合装置。

胶体金免疫层析技术是新型免疫测定技术，主要用于检测各类疾病。该技术可以减少分析时间和样品采集量、提高检测灵敏度和准确度。鼠抗精子抗体(AsAb)是免疫性不育的雄鼠产生的一种病理性抗体，它可以与精子抗原结合。当雄鼠与雌鼠交配射精后，会在雌鼠阴道内残留大量精液，精液中含有大量精子抗原。本发明通过该原理，提出一种利用抗精子抗体与精子抗原结合的定性检测方法对实验鼠进行妊娠诊断。

正常雄鼠的精液PH值范围在6.4-7.5，呈中性，然而在发情期，雌鼠阴道内乳杆菌含量表达增高，使阴道内环境PH值降低，范围在5.6-4.5，呈弱酸性。因此，当雄鼠与母鼠进行交配射精后，精液与阴道内环境液体会有PH值中和的作用，PH值会发生变化。本发明通过这一原理，在检测试纸上同时对PH值进行检测。进一步验证雌鼠妊娠的准确性。

检测时，若阴道内残留有精子抗原，检测线不会形成红色沉淀线，质控线上，形成红色沉淀线；若阴道内残留无精子抗原，检测线和质控线上均形成红色沉淀线。

附图说明

图1为本发明装置的结构示意图；

图2为试纸条的结构示意图；

其中1为探测棒；2为滑动开关；3为试纸保护盖；4为胶体金试纸条；5为试纸固定突起；6为读数显示屏；7为试纸接触端头；8为滑动槽；9为吸收垫；10为PVC底板；11为胶体金垫；12为检测线；13为质控线；14为硝酸纤维素膜；15为PH试纸层；16为吸收垫。

具体实施方式

下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案，不限制本发明应用范围。

本实施例的装置包括中空的检测盒、探测棒、滑动开关、胶体金试纸条和观测窗，探测棒收纳于检测盒内，检测盒上开有探测棒出口，探测盒侧壁上开有滑动槽，滑动开关设于探测盒侧壁外并穿过滑动槽固定在探测棒上，探测棒由滑动开关控制进出，胶体金试纸条固定于检测盒内，胶体金试纸条最前端的样品接触端头伸出至检测盒外，胶体金试纸条包括吸收垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫、pH试纸层和PVC底板，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，样品垫样作为样品接触端头设在胶体金试纸条最前端，胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸收垫再自前向后依次粘贴在PVC底板上，pH试纸层连接在吸收垫中段，检测盒上开有观测窗，观测窗开设于胶体金试纸条的检测线、质控线和pH试纸层的上方，胶体金垫包被有胶体金标记的能识别鼠精子抗原的鼠抗精子抗体，检测线包被有鼠抗精子抗体，质控线包被有山羊抗鼠IgG。

本实施例能识别鼠精子抗原的鼠抗精子抗体是提取于免疫性不育小鼠精液。下面给出具体的鼠抗精子抗体制备步骤：

抗精子抗体的制备及纯化：参照专利号200710190243.6中的方法：收集免疫性不育小鼠的睾丸细胞，用NP-40萃取细胞膜抗原，再用超声波粉碎，超速离心后去上清液，作为粗制抗原A液。用免疫性不育小鼠的睾丸细胞免疫实验动物，取抗血清，经盐析法粗体γ免疫球蛋白，称免疫血清IgG；同时取未被免疫的该种实验动物的混合血清，经盐析法粗体γ免疫球蛋白，称未免疫血清IgG；用正常小鼠的的睾丸细胞免疫实验动物，取抗血清，经盐析法粗体γ免疫球蛋白，称抗鼠全血清IgG。用Sepharose-4B琼脂糖凝胶分别与上述的免疫血清IgG、未免疫血清IgG和抗鼠全血清IgG偶联成免疫亲和层析A柱、B柱和C柱。去粗制抗原A液过亲和层析A柱，收集与A柱上IgG结合的抗原物质，浓缩后为粗制抗原B液；后者过亲和层析B柱，收集不与B柱上结合的抗原物质，浓缩后为抗原C液；C液再过亲和层析C柱，收集不与C柱上相结合的抗原物质，浓缩后精制抗原液。

收集免疫性不育的小鼠血清，用盐析法及DEAE52纤维素柱纯化IgG型和IgA型免疫球蛋白，并分别为粗制IgG型抗体D液和粗制IgA型抗体D液。收集正常小鼠的血清液，收集不含目的抗原的小鼠的睾丸细胞，并制备成睾丸细胞裂解液。用Sepharose-4B琼脂糖凝胶分别与精制抗原液、不含目的抗原的混合精液以及不含目的抗原的小鼠睾丸细胞裂解液偶联成亲和层析D柱、E柱和F柱。取粗制IgG型或IgA型抗体D液过亲和层析D柱，收集与D柱上自身抗原相结合的抗体物质，浓缩后为粗制IgG型或IgA型抗体E液；后者过亲和层析E柱，收集不与E柱上蛋白相结合的抗体物质，浓缩后为粗制IgG或IgA型抗体F液；F液再过亲和层析F柱，收集不与F柱上蛋白相结合的抗体物质，浓缩后获得精制的鼠抗精子抗体，冷冻真空干燥成粉后保存备用。

本实施例装置还包括试纸保护盖，试纸保护盖盖在检测盒上，以保护伸出至检测盒外的胶体金试纸条，且试纸保护盖与探测棒出口处于检测盒相反的两端。

为了固定试纸，本实施例还包括试纸固定突起，试纸固定突起为中空的棱台体，试纸固定突起固定在伸出至检测盒外的胶体金试纸条处，胶体金试纸条从试纸固定突起的上底面伸出。

本实施例用于检测实验鼠怀孕的方法，利用上述的装置，包括以下步骤：

步骤1：首先查看待测母鼠阴部有无肉眼可见的阴栓，有则完成检测并判断为怀孕，否则伸出装置上的探测棒，对待测母鼠阴部内部进行探测，若有阻塞感则判断为有阴栓，完成检测并判断为怀孕，否则执行步骤2；

步骤2：往待测雌鼠阴道内插入检测试纸，并将试纸检测接触端头与待测母鼠阴道内部分泌物充分接触，然后读取试纸上显示的结果，若检测PH值呈中性，PH试纸为褐色，并发生抗精子抗体免疫反应即免疫试纸条呈现两条红色指示线，则为强阳性，判断为怀孕；若检测PH值呈弱酸性，PH试纸为红色或橙色，且发送抗精子抗体免疫反应免疫试纸条呈现两条红色指示线则为阳性，判断为怀孕；若检测PH值呈中性，PH试纸为褐色，未发生免疫反应则为假阳性，判断为未怀孕；若检测PH值呈弱酸性，PH试纸为红色或橙色，未发生免疫反应则为阴性，判断为未怀孕。

本发明与阴栓目测法和阴道精子涂片检查法比较

已查有栓有耳标号但大小不一CD-1雌鼠30只，未交配雌鼠15只，随机分为3组，即发明组、目测组和涂片组，每组各有有栓雌鼠10只，未交配鼠5只。每组一名经验相当实验人员进行检查。三组实验人员检查结果如见表1。

表1检测对比表

组别	查栓数(只)	时间(秒)	准确率(％)
				目测组	6	147	60％
涂片组	9	732	90％
				发明组	9	321	90％

从表1可知，本发明组准确率明显高于目测组，检查时间明显少于涂片组。从实际生产实践上表明，本发明组能在高效快捷准确的对实验鼠进行妊娠诊断。

Claims (4)

1.一种检测实验鼠怀孕的装置，其特征在于，包括中空的检测盒、探测棒、滑动开关、胶体金试纸条和观测窗，所述的探测棒收纳于检测盒内，检测盒上开有探测棒出口，探测盒侧壁上开有滑动槽，滑动开关设于探测盒侧壁外并穿过滑动槽固定在探测棒上，探测棒由滑动开关控制进出，所述的胶体金试纸条固定于检测盒内，胶体金试纸条最前端的样品接触端头伸出至检测盒外，胶体金试纸条包括吸收垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫、pH试纸层和PVC底板，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述的样品垫样作为样品接触端头设在胶体金试纸条最前端，胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸收垫再自前向后依次粘贴在PVC底板上，所述的pH试纸层连接在吸收垫中段，检测盒上开有观测窗，所述的观测窗开设于胶体金试纸条的检测线、质控线和pH试纸层的上方，所述的胶体金垫包被有胶体金标记的能识别鼠精子抗原的鼠抗精子抗体，所述检测线包被有鼠抗精子抗体，所述质控线包被有山羊抗鼠IgG，所述的能识别鼠精子抗原的鼠抗精子抗体是提取于免疫性不育小鼠精液。

2.根据权利要求1所述的一种检测实验鼠怀孕的装置，其特征在于，还包括试纸保护盖，试纸保护盖盖在检测盒上，以保护伸出至检测盒外的胶体金试纸条，且试纸保护盖与探测棒出口处于检测盒相反的两端。

3.根据权利要求1所述的一种检测实验鼠怀孕的装置，其特征在于，还包括试纸固定突起，所述的试纸固定突起为中空的棱台体，试纸固定突起固定在伸出至检测盒外的胶体金试纸条处，胶体金试纸条从试纸固定突起的上底面伸出。

4.一种检测实验鼠怀孕的方法，其特征在于，利用如权利要求1-3任一所述的装置，包括以下步骤：

步骤1：首先查看待测母鼠阴部有无肉眼可见的阴栓，有则完成检测并判断为怀孕，否则伸出装置上的探测棒，对待测母鼠阴部内部进行探测，若有阻塞感则判断为有阴栓，完成检测并判断为怀孕，否则执行步骤2；

步骤2：往待测雌鼠阴道内插入检测试纸，并将试纸检测接触端头与待测母鼠阴道内部分泌物充分接触，然后读取试纸上显示的结果，若检测PH值呈中性，PH试纸为褐色，并发生抗精子抗体免疫反应即免疫试纸条呈现两条红色指示线，则为强阳性，判断为怀孕；若检测PH值呈弱酸性，PH试纸为红色或橙色，且发送抗精子抗体免疫反应免疫试纸条呈现两条红色指示线则为阳性，判断为怀孕；若检测PH值呈中性，PH试纸为褐色，未发生免疫反应则为假阳性，判断为未怀孕；若检测PH值呈弱酸性，PH试纸为红色或橙色，未发生免疫反应则为阴性，判断为未怀孕。