CN105639397B - 一种天然混合抑菌剂及其制备方法 - Google Patents
一种天然混合抑菌剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于食品防腐技术领域，具体涉及一种天然混合抑菌剂及其制备方法。本发明包括绿原酸、二氢杨梅素和原花青素；并通过将绿原酸、二氢杨梅素、原花青素按一定的比例混合，加入一定量的水溶液，充分搅拌溶解后调节溶液的pH值制得。本发明对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、福氏志贺菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌等11种不同类型细菌均有较好的抑制效果，有望作为一种绿色、安全、高效的防腐剂应用于食品加工。
Description
技术领域
本发明属于食品防腐技术领域，具体涉及一种天然混合抑菌剂及其制备方法。
背景技术
近年来，全世界农副产品、果蔬等食品因腐烂变质而引起的经济损失十分巨大，所以保证食品的品质、延长保存期限、防止食品及原材料的腐败变质是食品工业的重要任务。
添加食品防腐剂仍是防止食品腐烂变质的重要手段之一。目前使用的较多的还是化学合成防腐剂。长期的研究表明，化学合成防腐剂存在致癌性、致畸性和易引起食物中毒等问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种不仅安全，而且抑菌效果好的，以多种天然植物提取物为原料的天然混合抑菌剂。
本发明的目的之二是提供了所述天然混合抑菌剂的制备方法。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种天然混合抑菌剂，包括绿原酸、二氢杨梅素和原花青素。
较佳地，所述绿原酸、二氢杨梅素和原花青素之间的重量比为2～2.5:1.5～2:0.8～1。
较佳地，所述的绿原酸的纯度≥99％，二氢杨梅素的纯度≥95％，原花青素的纯度≥95％、聚合度为2～4。
较佳地，所述的绿原酸由杜仲叶或金银花提取所得。
较佳地，所述绿原酸通过如下方法制备：杜仲叶或金银花—水提—大孔树脂吸附—混合溶剂分相—重结晶—干燥，最后经检测纯度达到要求即得到所述绿原酸。
较佳地，所述的二氢杨梅素由藤茶提取所得。
较佳地，所述的二氢杨梅素通过如下方法制备：藤茶—超声提取—重结晶—干燥，最后经检测纯度达到要求即得到所述二氢杨梅素。
较佳地，所述原花青素由油茶果壳提取所得。
较佳地，所述的原花青素通过如下方法制备：油茶果壳—水提—大孔树脂串联吸附—选择性洗脱—重结晶，最后经检测纯度达到要求即得到所述原花青素。
制备所述天然混合抑菌剂的方法，具体为：
(1)、将所述绿原酸、二氢杨梅素、原花青素按所述比例进行混合，得到抑菌剂原料；
(2)、往步骤(1)所述抑菌剂原料中加入水溶液，控制绿原酸的浓度在4～5mg/ml、二氢杨梅素浓度3～4mg/ml、原花青素浓度1.6～2mg/ml的范围内，不断搅拌溶液，直至粉末完全溶解，得到抑菌剂混合液；
(3)、往步骤(2)抑菌剂混合液中滴加盐酸，调节溶液的pH值为2～3，即得天然混合抑菌剂。
本发明以绿原酸、二氢杨梅素、原花青素三种植物提取物为抑菌剂的主要原料，制备天然混合抑菌剂。其中绿原酸、二氢杨梅素、原花青素三种天然植物提取物，与化学合成防腐剂相比，具有无毒、绿色、安全等优点。通过调节三种天然提取物的比例，提高了抑菌剂的协同抑菌能力，相对于三种提取物本身以及传统抗菌药盐酸黄连素和苯甲酸钠，表现出更好的抑菌效果。同时，本发明制备抑菌剂的方法简单、成本低廉，对常见病菌具有广谱抗菌作用，可用于天然食品防腐剂和药用资源的开发，市场前景广阔。
具体的实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解本发明。
实施例1：
一种天然混合抑菌剂，包括绿原酸、二氢杨梅素和原花青素，所述绿原酸、二氢杨梅素和原花青素之间的重量比为2.5:1.5:1。
天然混合抑菌剂的制备方法：
1、绿原酸的制备：杜仲叶或金银花—水提—大孔树脂吸附—混合溶剂分相—重结晶—干燥，最后经检测纯度达到要求即得到所述绿原酸。
2、二氢杨梅素的制备：藤茶—超声提取—重结晶—干燥，最后经检测纯度达到要求即得到所述二氢杨梅素。
3、原花青素的制备：油茶果壳—水提—大孔树脂串联吸附—选择性洗脱—重结晶，最后经检测纯度达到要求即得到所述原花青素。
4、天然混合抑菌剂的方法，具体为：
(1)、将所述绿原酸、二氢杨梅素、原花青素按所述比例进行混合，得到抑菌剂原料；
(2)、往步骤(1)所述抑菌剂原料中加入水溶液，控制绿原酸的浓度在5mg/ml、二氢杨梅素浓度3mg/ml、原花青素浓度2mg/ml的范围内，不断搅拌溶液，直至粉末完全溶解，得到抑菌剂混合液；
(3)、往步骤(2)抑菌剂混合液中滴加盐酸，调节溶液的pH值为2，即得天然混合抑菌剂。
实施例2：
一种天然混合抑菌剂，包括绿原酸、二氢杨梅素和原花青素，所述绿原酸、二氢杨梅素和原花青素之间的重量比为2:2:1。
天然混合抑菌剂的制备方法，同实施例1，其区别在于：
(2)、往步骤(1)所述抑菌剂原料中加入水溶液，控制绿原酸的浓度在4mg/ml、二氢杨梅素浓度4mg/ml、原花青素浓度2mg/ml的范围内，不断搅拌溶液，直至粉末完全溶解，得到抑菌剂混合液；
(3)、往步骤(2)抑菌剂混合液中滴加盐酸，调节溶液的pH值为2.5，即得天然混合抑菌剂。
实施例3：
一种天然混合抑菌剂，包括绿原酸、二氢杨梅素和原花青素，所述绿原酸、二氢杨梅素和原花青素之间的重量比为2:1.5:0.8。
天然混合抑菌剂的制备方法，同实施例1，其区别在于：
(2)、往步骤(1)所述抑菌剂原料中加入水溶液，控制绿原酸的浓度在4mg/ml、二氢杨梅素浓度3mg/ml、原花青素浓度1.6mg/ml的范围内，不断搅拌溶液，直至粉末完全溶解，得到抑菌剂混合液；
(3)、往步骤(2)抑菌剂混合液中滴加盐酸，调节溶液的pH值为3，即得天然混合抑菌剂。
上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。
本发明的抑菌实验方法如下：
1、抑菌圈直径的测定
本实验采用LB培养基，培养基的制备方法为：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，定容于1000ml，调pH值7.4-7.6，分装，121℃条件下灭菌20min，备用。
将供试菌移入相对应的试管斜面培养基，于37℃下培养18-24h，用接种环挑取少许菌体，放入装有无菌水的试管内，振动摇匀，制成菌悬液。采用比浊法计数，调整菌悬液浓度，使其含菌数约为107个/ml，备用。
取直径为6mm的滤纸片放入配好浓度的抑菌溶液中浸泡6h，取出置于真空干燥箱中灭菌干燥。将各种供试菌悬液取0.2mL分别注入直径为120mm的无菌培养皿中培养，再倒入20mL LB培养基，混匀后冷却成含菌平板，然后用无菌镊子夹取含浸出液的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴6片，每菌重复三次，细菌培养箱中37℃培养24h后，测定滤纸片周围抑菌圈直径大小，观察抑菌效果。在上述实验条件下，使用同样浓度的盐酸黄连素和苯甲酸钠进行对比实验，实验结果见表1。
2、最低抑菌浓度(MIC)的测定
用LB培养基以二倍稀释法分别配制抑菌剂，浓度分别为20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078mg/mL(绿原酸、二氢杨梅素、原花青素三者按2:2:1混合后浓度之和)，然后分别接种不同菌种的过夜培养液200μL，于细菌培养箱中37℃下培养24小时，观察生长现象，取没有细菌生长的最低浓度为MIC。在上述相同实验条件下，使用绿原酸、二氢杨梅素、原花青素的三种单独提取物进行对比实验，观察抑菌剂的协同抑菌作用，实验结果见表2。
表1本抑菌剂与盐酸黄连素、苯甲酸钠的抑菌效果对比
表2不同抑菌药物的最低抑菌浓度MIC
注：抑菌剂溶度为绿原酸、二氢杨梅素、原花青素三者按2:2:1混合后浓度之和。
通过以上实验证明，天然混合抑菌剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌等11种不同类型的细菌均有较好的抑制作用，说明具有广谱抗菌性。与传统抗菌药盐酸黄连素和苯甲酸钠相比，抑菌圈直径更大，说明抑菌效果更好。与绿原酸、二氢杨梅素、原花青素三种提取物的单独抑菌效果相比，最低抑菌浓度(MIC)均有所降低，说明抑菌剂中三种提取物具有协同抑菌作用。
Claims (9)
1.一种天然混合抑菌剂，其特征在于，包括绿原酸、二氢杨梅素和原花青素，所述原花青素的聚合度为2～4，所述绿原酸、二氢杨梅素和原花青素之间的重量比为2～2.5：1.5～2：0.8～1。
2.如权利要求1所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述的绿原酸的纯度≥99％，二氢杨梅素的纯度≥95％，原花青素的纯度≥95％。
3.如权利要求2所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述的绿原酸由杜仲叶或金银花提取所得。
4.如权利要求3所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述绿原酸通过如下方法制备：杜仲叶或金银花—水提—大孔树脂吸附—混合溶剂分相—重结晶—干燥，最后经检测纯度达到要求即得到所述绿原酸。
5.如权利要求2所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述的二氢杨梅素由藤茶提取所得。
6.如权利要求5所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述的二氢杨梅素通过如下方法制备：藤茶—超声提取—重结晶—干燥，最后经检测纯度达到要求即得到所述二氢杨梅素。
7.如权利要求2所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述原花青素由油茶果壳提取所得。
8.如权利要求7所述天然混合抑菌剂，其特征在于，所述的原花青素通过如下方法制备：油茶果壳—水提—大孔树脂串联吸附—选择性洗脱—重结晶，最后经检测纯度达到要求即得到所述原花青素。
9.制备权利要求1－8中任意一项所述天然混合抑菌剂的方法，其特征在于，具体为：
(1)、将所述绿原酸、二氢杨梅素和原花青素按所述比例进行混合，得到抑菌剂原料；
(2)、往步骤(1)所述抑菌剂原料中加入水溶液，控制绿原酸的浓度为4～5mg/ml、二氢杨梅素浓度为3～4mg/ml、原花青素浓度为1.6～2mg/ml，不断搅拌溶液，直至粉末完全溶解，得到抑菌剂混合液；
(3)、往步骤(2)抑菌剂混合液中滴加盐酸，调节溶液的pH值为2～3，即得所述天然混合抑菌剂。
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