CN105616477A

CN105616477A - 一种纯化蓝靛果忍冬中多酚的方法

Info

Publication number: CN105616477A
Application number: CN201610114628.3A
Authority: CN
Inventors: 李斌; 雷月; 智红涛; 王杕; 董禹; 刘辉; 孟宪军; 张琦; 霍俊伟; 吴林; 王维生; 殷秀岩; 矫馨瑶; 丑述睿; 杨培青; 张野; 高凝轩
Original assignee: Shenyang Agricultural University
Current assignee: Shenyang Agricultural University
Priority date: 2016-03-02
Filing date: 2016-03-02
Publication date: 2016-06-01

Abstract

一种纯化蓝靛果忍冬中多酚的方法，步骤如下：蓝靛果打浆、高压均质机均质、超声波辅助乙醇提取法浸提、真空抽虑并收集滤液、旋转蒸发仪浓缩滤液、收集多酚浓缩液、大孔树脂纯化、薄层色谱法跟踪检测并收集蓝靛果多酚洗脱液、用0.45？μm有机微孔滤膜过滤多酚富集物、利用Sephadex？LH-20葡聚糖凝胶柱层析法再次纯化多酚富集物、减压浓缩多酚洗脱液并回收乙醇、真空冷冻干燥蓝靛果多酚、获取紫红色蓝靛果忍冬多酚成品。本发明提高了蓝靛果资源的商用价值，所选大孔树脂具有理化性质稳定、吸附选择性好、吸附容量大效果好、解吸条件温和、再生简单等优点，适合蓝靛果多酚的规模化生产，操作工艺安全可靠，无污染，成本低廉，提取和纯化效率较高。

Description

一种纯化蓝靛果忍冬中多酚的方法

技术领域

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用超声波辅助提取-大孔树脂联用技术纯化蓝靛果忍冬中多酚的方法。

背景技术

蓝靛果忍冬（LoniceraCaeruleaL）简称为蓝靛果，民间也俗称山茄子、羊奶子等，其形状为长椭圆形，呈深蓝紫色，果实味道类似于越蔓橘、蓝莓等，呈酸甜味。蓝靛果是一种新兴的野生浆果资源，具有较强的生命力、抗寒能力，适应性也很好。蓝靛果中含有维生素、矿物质等多种营养成分，可鲜食也可进行生产加工。此外，蓝靛果也是一种生物活性成分富集的浆果，尤其是花色苷类物质、酚酸类物质和黄酮类物质的种类多样、含量较高，同时还具有多种生物活性，如预防心血管疾病、抑菌抗炎、预防癌症和抗氧化等生理功效。本发明采用超声波辅助提取-大孔树脂联用技术所得蓝靛果忍冬多酚的含量和纯度均较高，旨在为蓝靛果多酚分离及应用提供新的途径。

发明内容

本发明目的是提供一种利用超声波辅助提取-大孔树脂联用技术纯化蓝靛果忍冬中多酚的方法，在保证以高效率获取高含量、高纯度的蓝靛果忍冬多酚精制品的同时尽可能的降低工艺成本、减少能源消耗和对环境造成的污染。

本发明所提供技术方案的工艺流程如下：

蓝靛果忍冬鲜果→挑选、清洗、沥干→打浆→高压均质机均质→超声波辅助乙醇提取法浸提→真空抽虑并收集滤液→旋转蒸发仪浓缩滤液→筛选后的大孔树脂纯化→蒸馏水除杂→乙酸酸化的乙醇溶液洗脱→薄层色谱法跟踪检测→收集多酚富集物→0.45μm有机微孔滤膜过滤多酚富集物→SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析法再次纯化多酚富集物→用乙醇-乙酸-水（70:0.01:29.99，v/v/v）溶液洗脱→减压浓缩洗脱液→真空冷冻干燥→紫红色蓝靛果多酚精制品

方法步骤如下：

（1）原料挑选：挑选出采摘后的蓝靛果忍冬中无病虫害和机械损伤且成熟度一致的果实，清洗、沥干。

（2）蓝靛果多酚提取：采用匀浆机对预处理后的蓝靛果忍冬进行打浆，并通过高压均质机对蓝靛果果浆均质5min，然后加入比例为40～55:0.1:59.9～44.9（v/v/v）的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比为1：15～25（g/mL）的比例进行混合，待混合均匀后置于35～50℃超声波清洗机（功率为500W）中浸提75～100min。

（3）真空抽滤：对浸提后的多酚粗提液进行真空抽虑并收集滤液。

（4）浓缩：将蓝靛果多酚滤液置于圆底烧瓶中并在35～40℃条件下的真空旋转蒸发仪中处理30～35min，回收乙醇并收集多酚浓缩液。

（5）大孔树脂的筛选：对收集的多酚浓缩液再次真空抽虑，并通过比较分析型号分别为XAD-7、X-5、S-8、D101、AB-8、D1400的大孔树脂对多酚滤液的吸附量、吸附率和解吸率，从中筛选出纯化蓝靛果忍冬多酚的最适大孔树脂。

（6）大孔树脂纯化：用恒流泵将浓度为2.03mg/mL的浓缩滤液以0.5～2BV/h的流速进行上样，上样量为树脂体积的1.5～2.5倍，至大孔树脂呈吸附饱和状态。先用洗脱体积为2.5～4BV的蒸馏水冲洗柱子，清除蓝靛果多酚中多糖、蛋白质等杂质，接着用4倍柱体积的65～95%(v/v)的乙醇洗脱液控制洗脱流速为1～2BV/h进行梯度洗脱，并用薄层色谱法跟踪和检测，收集蓝靛果多酚富集物。

（7）有机滤膜过滤：用0.45μm有机微孔滤膜过滤蓝靛果多酚富集物并收集滤液。

（8）葡聚糖凝胶柱层析：将过滤后的多酚富集物经SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱吸附饱和后进行二次纯化，用4～5BV的乙醇-乙酸-水（70:0.01:29.99，v/v/v）溶液进行洗脱，收集二次纯化的多酚洗脱液。

（9）浓缩和真空冷冻干燥：对收集到的多酚洗脱液在35～45℃条件下进行减压浓缩并回收乙醇，接着将多酚浓缩液置于30～40℃条件下的真空冷冻干燥机中进行干燥处理，制成蓝靛果多酚精制品粉末，呈紫红色。

本发明的优点是：1.大孔树脂具有理化性质稳定、吸附容量大效果好、再生简单等优点，适合蓝靛果多酚的规模化生产；2.整个操作工艺安全可靠，操作技术成本低廉；3.通过此工艺获取的蓝靛果多酚含量和纯度均较高；4.此技术提高了蓝靛果资源的商用价值。

具体实施方式

实施例1

挑选出采摘后的蓝靛果忍冬中无病虫害和机械损伤且成熟度一致的果实，清洗、沥干后，用匀浆机进行打浆，并通过高压均质机对蓝靛果果浆均质5min，然后加入比例为40:0.1:59.9（v/v/v）的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比为1：15（g/mL）的比例进行混合，待混合均匀后置于35℃超声波清洗机（功率为500W）中浸提75min；接着对多酚浸提液进行真空抽虑，收集蓝靛果多酚滤液并置于圆底烧瓶中在35℃条件下旋转蒸发30min，回收乙醇并收集多酚浓缩液，再次真空抽虑多酚浓缩液；通过比较分析型号分别为XAD-7、X-5、S-8、D101、AB-8、D1400的大孔树脂对多酚滤液的吸附量、吸附率和解吸率，筛选结果为XAD-7型大孔树脂纯化蓝靛果忍冬多酚的效果最佳。用恒流泵将浓度为2.03mg/mL的浓缩滤液以0.5BV/h的流速进行上样，上样量为树脂体积的1.5倍，至大孔树脂呈吸附饱和状态，先用洗脱体积为3BV的蒸馏水冲洗柱子，清除蓝靛果多酚中多糖、蛋白质等杂质，接着用4倍柱体积的65～95%(v/v)的乙醇洗脱液控制洗脱流速为1BV/h进行梯度洗脱，并用薄层色谱法跟踪和检测，收集蓝靛果多酚富集物，接着用0.45μm有机微孔滤膜过滤蓝靛果多酚富集物并收集滤液，将多酚滤液经SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱吸附饱和后进行二次纯化，用4BV的乙醇-乙酸-水（70:0.01:29.99，v/v/v）溶液进行洗脱，收集二次纯化的多酚洗脱液。在35℃条件下对多酚洗脱液进行减压浓缩并回收乙醇，接着将多酚浓缩液置于30℃条件下的真空冷冻干燥机中进行干燥处理，制成蓝靛果多酚精制品粉末，呈紫红色。

实施例2

挑选出采摘后的蓝靛果忍冬中无病虫害和机械损伤且成熟度一致的果实，清洗、沥干后，用匀浆机进行打浆，并通过高压均质机对蓝靛果果浆均质5min，然后加入比例为50:0.1:49.9（v/v/v）的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比为1：20（g/mL）的比例进行混合，待混合均匀后置于40℃超声波清洗机（功率为500W）中浸提90min；接着对多酚浸提液进行真空抽虑，收集蓝靛果多酚滤液并置于圆底烧瓶中在40℃条件下旋转蒸发35min，回收乙醇并收集多酚浓缩液，再次真空抽虑多酚浓缩液；通过比较分析型号分别为XAD-7、X-5、S-8、D101、AB-8、D1400的大孔树脂对多酚滤液的吸附量、吸附率和解吸率，筛选结果为XAD-7型大孔树脂纯化蓝靛果忍冬多酚的效果最佳。用恒流泵将浓度为2.03mg/mL的浓缩滤液以1BV/h的流速进行上样，上样量为树脂体积的2倍，至大孔树脂呈吸附饱和状态，先用洗脱体积为3.5BV的蒸馏水冲洗柱子，清除蓝靛果多酚中多糖、蛋白质等杂质，接着用4倍柱体积的65～95%(v/v)的乙醇洗脱液控制洗脱流速为1.5BV/h进行梯度洗脱，并用薄层色谱法跟踪和检测，收集蓝靛果多酚富集物，接着用0.45μm有机微孔滤膜过滤蓝靛果多酚富集物并收集滤液，将多酚滤液经SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱吸附饱和后进行二次纯化，用4.5BV的乙醇-乙酸-水（70:0.01:29.99，v/v/v）溶液进行洗脱，收集二次纯化的多酚洗脱液。在40℃条件下对多酚洗脱液进行减压浓缩并回收乙醇，接着将多酚浓缩液置于35℃条件下的真空冷冻干燥机中进行干燥处理，制成蓝靛果多酚精制品粉末，呈紫红色。

实施例3

挑选出采摘后的蓝靛果忍冬中无病虫害和机械损伤且成熟度一致的果实，清洗、沥干后，用匀浆机进行打浆，并通过高压均质机对蓝靛果果浆均质5min，然后加入比例为55:0.1:44.9（v/v/v）的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比为1：25（g/mL）的比例进行混合，待混合均匀后置于50℃超声波清洗机（功率为500W）中浸提100min；接着对多酚浸提液进行真空抽虑，收集蓝靛果多酚滤液并置于圆底烧瓶中在40℃条件下旋转蒸发35min，回收乙醇并收集多酚浓缩液，再次真空抽虑多酚浓缩液；通过比较分析型号分别为XAD-7、X-5、S-8、D101、AB-8、D1400的大孔树脂对多酚滤液的吸附量、吸附率和解吸率，筛选结果为XAD-7型大孔树脂纯化蓝靛果忍冬多酚的效果最佳。用恒流泵将浓度为2.03mg/mL的浓缩滤液以1.5BV/h的流速进行上样，上样量为树脂体积的2.5倍，至大孔树脂呈吸附饱和状态，先用洗脱体积为4BV的蒸馏水冲洗柱子，清除蓝靛果多酚中多糖、蛋白质等杂质，接着用4倍柱体积的65～95%(v/v)的乙醇洗脱液控制洗脱流速为2BV/h进行梯度洗脱，并用薄层色谱法跟踪和检测，收集蓝靛果多酚富集物，接着用0.45μm有机微孔滤膜过滤蓝靛果多酚富集物并收集滤液，将多酚滤液经SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱吸附饱和后进行二次纯化，用5BV的乙醇-乙酸-水（70:0.01:29.99，v/v/v）溶液进行洗脱，收集二次纯化的多酚洗脱液。在45℃条件下对多酚洗脱液进行减压浓缩并回收乙醇，接着将多酚浓缩液置于40℃条件下的真空冷冻干燥机中进行干燥处理，制成蓝靛果多酚精制品粉末，呈紫红色。

Claims

1.一种纯化蓝靛果忍冬中多酚的方法，其特征在于具体操作步骤如下：

（1）挑选出采摘后的蓝靛果忍冬中无病虫害和机械损伤且成熟度一致的果实，清洗沥干后，采用匀浆机打浆，并通过高压均质机对蓝靛果果浆均质5min，然后加入比例为40～55:0.1:59.9～44.9（v/v/v）的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比为1：15～25（g/mL）的比例进行混合，待混合均匀后置于35～50℃超声波清洗机中浸提75～100min，对所得浸提液进行真空抽虑并收集滤液；

（2）将蓝靛果多酚滤液置于圆底烧瓶中并在35～40℃条件下的真空旋转蒸发仪中处理30～35min，回收乙醇并收集多酚浓缩液；

（3）对收集的多酚浓缩液再次真空抽虑，并通过比较分析型号分别为XAD-7、X-5、S-8、D101、AB-8、D1400的大孔树脂对多酚滤液的吸附量、吸附率和解吸率，从中筛选出纯化蓝靛果忍冬多酚的最适大孔树脂；

（4）用恒流泵将浓度为2.03mg/mL的浓缩滤液以0.5～2BV/h的流速进行上样，上样量为树脂体积的1.5～2.5倍，至大孔树脂呈吸附饱和状态；

先用洗脱体积为2.5～4BV的蒸馏水冲洗柱子，清除蓝靛果多酚中多糖、蛋白质杂质，接着用4倍柱体积的65～95%(v/v)的乙醇洗脱液控制洗脱流速为1～2BV/h进行梯度洗脱，并用薄层色谱法跟踪和检测，收集蓝靛果多酚富集物；

（5）收集蓝靛果多酚富集物并用0.45μm有机微孔滤膜过滤，然后将多酚富集物经SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱吸附饱和后进行二次纯化，用4～5BV的乙醇-乙酸-水溶液进行洗脱，乙醇-乙酸-水溶液的三者比例70:0.01:29.99（v/v/v），收集二次纯化的多酚洗脱液；

（6）对收集到的多酚洗脱液在35～45℃条件下进行减压浓缩并回收乙醇，接着将多酚浓缩液置于30～40℃条件下的真空冷冻干燥机中进行干燥处理，制成蓝靛果多酚精制品粉末，呈紫红色。