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CN105497094B - 一种治疗鼻炎的药物组合物及其制备方法与质量检测方法 - Google Patents

一种治疗鼻炎的药物组合物及其制备方法与质量检测方法 Download PDF

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CN105497094B CN201510955972.0A CN201510955972A CN105497094B CN 105497094 B CN105497094 B CN 105497094B CN 201510955972 A CN201510955972 A CN 201510955972A CN 105497094 B CN105497094 B CN 105497094B
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Abstract

本发明属于中药领域，提供了一种治疗鼻炎的药物组合物，发明名称为一种治疗鼻炎的药物组合物及其制备方法与质量检测方法，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：柏树果1～2、骨牌草1～2、盾果草1～2、铃钟三七1～2。该药物组合物采用中药学中常规的制药方法制备成滴鼻剂。本发明提供了采用高效液相色谱法对积雪草苷进行含量测定的方法，还提供了采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定的方法。该药物组合物可用于制备治疗鼻炎、变应性鼻炎、慢性肥厚性鼻炎的药物。

Description

一种治疗鼻炎的药物组合物及其制备方法与质量检测方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种治疗鼻炎的药物组合物，具体涉及由柏树果、骨牌草、盾果草、铃钟三七为原料制成的药物组合物。
背景技术：
随着全球工业化进程的不断加快以及环境污染等因素的影响，全球性呼吸道疾病发生率提高较快。变应性鼻炎(Allergic Rhinitis，AR)的发病率有逐渐增高趋势。正因为变应性鼻炎如此高的发病率、与过敏性哮喘的密切关系以及对人们生活质量的严重影响，所以对其病因、发病机制、诊断以及治疗各个环节的研究都得到空前重视。根据国际耳鼻咽喉科学联合会31个成员国于1997年发表的综合报告，变应性鼻炎人群患病率为10％～40％。
变应性鼻炎又称过敏性鼻炎，为机体对某些变应原(即过敏原)敏感性增高而发生在鼻腔黏膜的变态反应，也是呼吸道变态反应的常见表现形式。一般由接触过敏原后，由IgE介导的发生在鼻黏膜的变态反应性疾病，属于Ⅰ型变态反应，即速发型变态反应。主要症状表现为突然和反复性发作的鼻痒、阵发性喷嚏、大量水样涕和鼻塞等。
慢性鼻炎是鼻黏膜及黏膜下层的慢性炎症。其主要特点是炎症持续三个月以上或反复发作，迁延不愈，间歇期亦不能恢复正常，且无明确的致病微生物，伴有不同程度的鼻塞，分泌物增多，鼻黏膜肿胀或增厚等障碍。
中医认为，变应性鼻炎当属“鼻鼽”范畴，对其主要的病因病机的认识历代文献中都有相关记录。其中《内经》认为此病主要与时令气候有关，亦与经络、脏腑，特别是肾有关。隋代巢元方所著《诸病源候论》中有“肺气通于鼻，其脏有冷，冷气入乘于鼻，故使津液不能自收”的记载，指出肺脏虚冷是发病的重要病因。明代《医学纲目》中的“运气鼻鼽有二，一曰火攻肺虚鼻鼽；二曰金助肺实鼻鼽”，又指出了火热亦可发病。同为明代的薛立斋提出了肺脾致虚的观点，正如《内科摘要》所载：“一儒者素勤苦，恶风寒，鼻流清涕，寒禁嚏喷。余曰：此脾肺气虚不能实腠理。”都是具有代表性的观点。
临床实践认为，本病的发生原因有二：一是内在因素，多为脏腑功能失调，主要是肺、脾、肾三脏虚损；二是外在因素，多为风寒、异气之邪侵袭鼻窍所致。外因与内因常合而为患，脾气不充，肾元亏虚都会致肺气虚弱，卫阳不固，外邪乘虚而入发为此病。因此，本病以内因为本，外因为标，变应性鼻炎的临床发病过程，即急性发作期与间歇缓解期。发作期时以外感邪实为主，间歇缓解期则多见肺脾肾三脏亏虚而复感外邪。而外邪则主要是风邪，外邪侵袭风邪为首，多与寒、热相夹为病，正所谓“风邪乃百病之长”。
目前市面治疗变应性慢性鼻炎的药物，西药主要用收缩鼻血管的药物如麻黄素、抗组胺类药物如西替利嗪、类固醇激素喷剂等，这些都是对症治疗，没有根治病源，而且有不同程度的副作用；另外还有中药治疗，因副作用小、且对因治疗，效果较好，目前相关中药品种较多，但因只对病源治疗没有对症治疗，没有达到标本兼治的效果。
本发明提供了一种治疗变应性鼻炎的药物组合物，经研究表明，该药物组合物对鼻炎，尤其是变应性鼻炎具有较好的治疗效果。
发明内容：
本发明的目的是提供一种治疗鼻炎的药物组合物。
本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种治疗鼻炎的药物组合物，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：柏树果1～2份、骨牌草1～2份、盾果草1～2份、铃钟三七1～2份。
该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：柏树果1份、骨牌草2份、盾果草1份、铃钟三七2份。
该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：柏树果2份、骨牌草1份、盾果草2份、铃钟三七1份。
该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：柏树果1份、骨牌草1份、盾果草1份、铃钟三七1份。
本发明药物组合物采用药学中常规的制药方法制备成滴鼻剂。
本发明药物组合物采用如下方法制备：取干燥的柏树果、骨牌草、盾果草、铃钟三七，加3～10倍量的水，煎煮1～3次，每次0.5～2小时，煎液滤过，滤液合并，加入辅料，混匀，制滴鼻剂。
所述的药物，采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行积雪草苷的含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的乙腈-水；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：5～20μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
上述采用高效液相色谱法对积雪草苷进行含量测定的检测方法，优选的方法如下：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
所述的药物采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，0.5～1.5mL·mL-1；氢气，30～50mL·mL-1；空气，300～500mL·min-1；分流比：5～15：1；进样口温度：240～260℃，检测器温度：290～310℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取本品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯及香豆素的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入气相色谱仪，进行检测。
上述采用气相色谱法进行胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定，优选采用如下方法：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：10：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯7.301mg·mL-1及香豆素9.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
所述的药物组合物还可用于制备治疗鼻炎的药物。
所述的药物组合物还可用于制备治疗变应性鼻炎的药物。
所述的药物组合物还可用于制备治疗慢性肥厚性鼻炎的药物。
本发明药物组合物中原料药的基源如下：
柏树果为柏科柏木属植物柏木Cupresus funebris Endl.的球果；
骨牌草为水龙骨科瓦韦属植物黄瓦韦Lepisorus asterolepis(Bak.)Ching[Polypodium asterolepis Bak.]的全草或根；
盾果草为紫草科盾果草属植物盾果草Thyrocarpus sampsonii Hance[Bothriospermum majasculum(Hayata)Suzuki]的全草；
铃钟三七为虎耳草科黄山梅属植物黄山梅Kirengeshoma palmata Yatabe的根茎。
上述药材均购于哈药集团人民同泰连锁药店。
通过如下实验研究验证本发明的技术效果：
实验例一：本发明药物组合物治疗变应性鼻炎的实验研究
1材料与方法
1.1主要药品及试剂
二异氰酸甲苯购自武汉市欧利捷化工有限公司；橄榄油购自湖北威得利化学科技有限公司；嗜酸性粒细胞凋亡试剂盒购自北京鼎国生物技术有限责任公司；组胺ELISA试剂盒购自大连泛邦化工技术开发有限公司。
1.2实验仪器
HPIAS21000高清晰度彩色病理图文分析系统，O-lympus显微镜，酶标仪，低温离心机，薄层色谱仪LC-6A、HCP1-2型临界点干燥仪。
1.3受试药物
(1)对比药物A(柏树果、骨牌草、盾果草组合物)：干燥的柏树果66g、骨牌草66g、盾果草66g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
(2)对比药物B(骨牌草、盾果草、铃钟三七组合物)：干燥的骨牌草66g、盾果草66g、铃钟三七66g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
(3)对比药物C(盾果草、铃钟三七、柏树果组合物)：干燥的盾果草66g、铃钟三七66g、柏树果66g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
(4)对比药物D(铃钟三七、柏树果、骨牌草组合物)：干燥的铃钟三七66g、柏树果66g、骨牌草66g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
(5)本发明药物组合物：柏树果50g、骨牌草50g、盾果草50g、铃钟三七50g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
1.4变应性鼻炎豚鼠模型的建立
本实验采用国内赵秀杰法(赵秀杰，董震，杨占泉.鼻超敏反应实验模型建立[J].中华耳鼻咽喉科杂志.1993，28(1)：17.)建立豚鼠变应性鼻炎动物模型，在造模型成功的基础上，选择健康豚鼠80只，体重280～320g，雌雄兼用，由烟台大学实验动物中心提供，随机分8组，分别为正常组、模型组、地塞米松组、对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组、对比药物D组、本发明药物组合物组，每组10只。其中模型组、地塞米松组、对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组、对比药物D组、本发明药物组合物组。在造模成功后改为隔日激发1次(维持)，模型组从第11天起用生理盐水滴鼻；地塞米松组从第11天起用0.5％地塞米松滴鼻治疗，每侧鼻腔各滴5uL，每日3次，治疗15天；对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组、对比药物D组、本发明药物组合物组从第11天起分别用60mg·kg-1的对比药物A、对比药物B、对比药物C、对比药物D、本发明药物组合物溶于1ml蒸馏水，每天分3次从鼻腔滴鼻给药，治疗15天。所有动物在末次激发30分钟后麻醉后放血处死，并立即取双侧鼻粘膜，随机将一侧鼻粘膜放入10％中性福尔马林溶液中固定，1周后石蜡包埋；另一侧鼻粘膜立即投入液氮中保存备用。
1.5药效学观察指标及实验方法
1.5.1观察豚鼠鼻部症状并按表1-1打分并累计总分。观察时间：造模成功后及第1次鼻腔滴药后第15天，鼻腔滴药后30min内。
表1-1豚鼠实验性变应性鼻炎症状评分标准
1.5.2 HE染色和Chromotrope 2R特染分别检测豚鼠鼻腔分泌物及鼻粘膜组织中炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞数。用特制微型小棉棒，伸入鼻腔轻轻擦取下鼻甲表面3次，根据Loren法改进的方法制作涂片，均匀地涂于载波片上，分别行HE染色和Chromotrope 2R特染。检查时间：造模成功后及第1次鼻腔滴药后第15天。最后取石蜡标本切片，每标本切2片，分别行HE染色和Chromotrope 2R特染，光镜下每张切片观察10个(×400)视野，分别计数平均每高倍镜视野中炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞数。
1.5.3TUNEL法检测豚鼠鼻粘膜组织中嗜酸性粒细胞凋亡情况。具体步骤参照试剂盒说明书。石蜡标本切片常规脱蜡、入水、微波增透；蛋白酶消化20min，PBS洗2min×3次；提前配制TUNEL反应液，待样本消化后滴加TUNEL反应液，37℃反应60min，PBS洗2min×3次；将样本周围擦干，滴加转化物POD，并加疏水膜，37℃反应30min；擦干样本周围，加新鲜配制的DAB应用液，苏木精-Chromo-trope2R复染，常规脱水室温染色2～3min，蒸馏水洗5～10min；透明后中性树脂封片。高倍镜(×400)下观察EOS原位凋亡，每张切片至少数200个以上EOS，计算凋亡阳性EOS所占百分率。
1.5.4甲苯胺蓝染色检测豚鼠鼻粘膜组织中肥大细胞数及脱颗粒数。取石蜡标本切片，行甲苯胺蓝染色，光镜下观察并记录肥大细胞数及脱颗粒数。
1.5.5ELISA法检测豚鼠鼻粘膜组织中组胺含量。从液氮中取出1份100mg标本，解冻后，每管加入015ml 5％高氯酸在冰上匀浆，1500r/min离心10min，取上清，按照双抗夹心ELISA法测定，酶标仪波长450nm处读OD值，绘制标准曲线。根据样品的OD值、标准曲线计算样品组胺含量。
1.6统计学处理统计学方法采用t检验、χ2检验。
2结果
2.1鼻部症状观察结果见表1-2。
表1-2各组给药前后症状积分比较(分，)
注：与模型组比较，*P﹤0.05；与地塞米松组比较，#P﹤0.05；
2.2鼻分泌物涂片细胞学检查及计数见表1-3.
表1-3各组给药后鼻分泌物涂片细胞学检查及计数(个，)
组别 n 炎性细胞总数 嗜酸性细胞数
正常 10 1.63±0.33 0.14±0.16
模型 10 14.34±2.47 12.37±3.37
地塞米松 10 6.43±0.74* 3.57±0.33*
对比药物A 10 10.74±2.66*# 10.28±2.47*#
对比药物B 10 9.43±1.52*# 9.55±1.56*#
对比药物C 10 11.16±2.38*# 11.06±2.03*#
对比药物D 10 10.26±1.58*# 10.37±1.67*#
本发明药物 10 6.27±0.56* 3.38±0.63*
注：与模型组比较，*P﹤0.05；与地塞米松组比较，#P﹤0.05；
2.3鼻粘膜组织中病变指标检测结果见表1-4。
表1-4各组给药后鼻粘膜组织中炎性细胞检测结果
注：与模型组比较，*P﹤0.05；与地塞米松组比较，#P﹤0.05；
3讨论与结论
本实验研究发现经用本发明药物组合物滴鼻治疗后变应性鼻炎豚鼠的鼻痒、喷嚏、流涕等症状得到明显减轻。检测发现本发明药物组合物滴鼻治疗后变应性鼻炎豚鼠鼻分泌物及鼻粘膜组织中的炎性细胞总数、嗜酸性粒细胞数明显减少(P﹤0.05)；嗜酸性细胞凋亡率明显增加(P﹤0.05)；豚鼠鼻粘膜组织中的肥大细胞数及脱颗粒数明显减少(P﹤0.05)；组胺含量明显减少(P﹤0.05)。本发明药物组合物鼻分泌及鼻粘膜组织中的这些指标的减少程度与地塞米松组相当，且明显优于对比药物A、对比药物B、对比药物C、对比药物D。说明本发明药物组合物中各药味缺一不可，各药味的配伍组合产生了明显的协同增效作用。
从以上动物实验研究结果证明本发明药物组合物在治疗变应性鼻炎上是有效的，而且与糖皮质激素相比是无明显毒副作用的。这为后续的开发以及试验打下一定的基础。
实验二：本发明药物高效液相色谱法质量检测方法研究
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪(Agilent110高效液相色谱仪及工作站，G1311Aquat泵，G1314紫外检测器)。
1.2试药
积雪草苷对照品(中国药品生物制品检定研究院)；本发明中药组合物；中药材(哈药集团人民同泰连锁药店提供)；甲醇(色谱醇，上海生化工助剂厂)；其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1处方
柏树果50g、骨牌草50g、盾果草50g、铃钟三七50g。
2.2制备
柏树果50g、骨牌草50g、盾果草50g、铃钟三七50g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
2.3积雪草苷的含量测定
2.3.1 HPLC色谱条件
采用HypersilDs(4.0mm×125mm，5μm)色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；在该色谱条件下，对照品及样品色谱峰良好，无盾果草阴性对照对测定无干扰。
2.3.2对照品溶液的制备
精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。
2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备
精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得；另按处方比例制备不含盾果草的阴性对照品，同法制成阴性对照液。
2.3.4标准曲线的绘制
精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，用甲醇制成10.4，20.8，41.6，83.2，166.4μgmL-1系列浓度的溶液，分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测定。
以峰面积比值与浓度进行线性回归，得回归方程为：A＝21.2763C-0.1391，r＝0.9999。表明积雪草苷在10.4～166.4μgmL-1浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3.5稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μL，分别于0，1，2，4，8h进样，并计算积雪草苷含量。结果8h内RSD为0.45％(n＝5)。表明样品溶液在8h内稳定。
2.3.6重复性试验
按供试品溶液制备方法平行处理样品5份，依法测定积雪草苷含量并计算。结果测得积雪草苷平均含量为0.12mg·mL-1，RSD为1.3％。
2.3.7精密度实验
精密吸取积雪草苷对照品溶液，重复进样5次，依法测定峰面积。结果RSD为0.23％(n＝5)。表明精密度较好。
2.3.8回收率实验
精密称取已知积雪草苷含量的同一批号的样品6份，按高、中、低浓度分别精密加入适量的积雪草苷对照品溶液，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为100.3％，RSD为0.45％(n＝5)。
2.3.9样品含量测定
分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10μL，按上述色谱条件测定3批样品，平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液积雪草苷的含量。本品含积雪草苷应为标示含量的95％～105％，以每1mL样品含积雪草苷计，不得少于0.12mg。3批样品含量分别为100.8％(RSD＝1.2％)，101.7％(RSD＝1.3％)，99.2％(RSD＝1.1％)。
实验例三：本发明药物气相色谱法同步测定胜红蓟色烯、香豆素的含量
1仪器与试药
Agilent7890N气相色谱仪：FID检测器，A.01.12.1色谱工作站；SGH－300高纯氢气发生器(北京东方精华科技苑科技有限公司)；色谱柱弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；梅特勒－托利多十万分之一电子分析天平；胜红蓟色烯对照品(含量99.9％，中国食品药品检定研究院)；香豆素对照品(含量99.9％，中国食品药品检定研究院)；本发明药物(参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备)，试剂：环己酮，无水乙醇均为色谱纯。
2色谱条件
色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：10：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法。
3试验方法与结果
3.1内标溶液的制备
取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。
3.2供试品溶液的制备
精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。
3.3对照品储备溶液的制备
精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯7.301mg·mL-1及香豆素9.901mg·mL-1的对照品储备液，备用。
3.4阴性对照溶液的制备
取按处方中未加胜红蓟色烯与香豆素的空白溶液，按“3.2”项下制备方法，制成阴性对照溶液。
3.5线性关系的考察
分别精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5mL对照品储备液于10mL容量瓶中，加内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别取1μL进样，记录色谱图，以胜红蓟色烯、香豆素与内标的峰面积比值为纵坐标(Y)，浓度(C)为横坐标(X)，分别绘制标准曲线，得回归方程分别为：Y(胜红蓟色烯)＝1.1148X－0.0016，R2＝0.9999，胜红蓟色烯浓度在0.146～2.555mg·mL-1范围内，线性关系良好；Y(香豆素)＝1.1347X+0.0035，R2＝0.9998，香豆素浓度在0.198～3.465mg·mL-1范围内，线性关系良好。
3.6精密度试验
取胜红蓟色烯浓度为0.730mg·mL-1和香豆素浓度为0.990mg·mL-1的对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，分别计算2种成分与内标的峰面积比值(A/A内标)，胜红蓟色烯、香豆素的RSD分别为0.24％和1.2％(n＝6)。
3.7重复性试验
取同一批样品，按样品测定项下的方法重复测定6次，结果胜红蓟色烯、香豆素的RSD分别为0.36％、1.8％(n＝6)。
3.8稳定性试验
取同一批样品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、8、12h后测定，结果按胜红蓟色烯、香豆素的RSD分别为0.38％、1.7％，说明样品溶液在12h内测定，结果稳定。
3.9加样回收率试验
取已知含量的样品溶液9份，并加入适当的低、中、高对照品溶液，按样品测定法测定胜红蓟色烯、香豆素含量，分别计算回收率，结果见表3-1。
表3-1回收率测定结果(n＝9，％)
结果表明，本方法的回收率较好，胜红蓟色烯的回收率分别在99.4％～100.2％，香豆素的回收率在98.1％～100.7％之间，相对标准偏差分别为0.28％与0.86％，本测定方法能满足本发明药物中胜红蓟色烯与香豆素的含量测定。
3.10定量限与检测限
采用“信噪比法”来确定本研究的定量限和检测限，取线性标准溶液适量，采用加无水乙醇逐步稀释法进行稀释，当进样浓度为6.27、9.90μg·mL-1时，取1μL进样，连续进样3次，得到胜红蓟色烯、内标、香豆素信噪比平均值分别接近10.0，可以以此浓度为定量限；继续稀释进样，当进样浓度为1.044、1.65μg·mL-1，连续进样3次，得到胜红蓟色烯、内标、香豆素信噪比平均值接近3.0，可以以此浓度为检测限。
3.11耐用性试验
经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察，以及柱温，进样口温度和检测器温度考察，表明本方法耐用性良好，适用于本发明药物中两组分的含量测定。
3.11.1色谱柱的影响
选用3根不同商品规格的色谱柱，测定同一批样品的含量，计算含量值的RSD％分别为1.3、1.7、1.6。结果表明，样品用不同的PEG色谱柱测定含量，胜红蓟色烯、香豆素与内标均可有效分离，说明方法耐用性良好。
3.11.2柱温的影响
柱温对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间，温度越高，主峰出峰时间越短，在第一阶段为80℃时，胜红蓟色烯主峰胜红蓟色烯与杂质峰能保证基线分离，第二阶段120℃时香豆素主峰与杂质峰能保证基线分离，且各温度下含量的RSD小于2.0％。
3.11.3进样口温度的影响
进样口温度高于柱温时，胜红蓟色烯与杂质峰能够保证基线分离，香豆素与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0％。
3.11.4检测器温度的影响
检测器温度高于进样口温度时，胜红蓟色烯与杂质峰能够保证基线分离，香豆素与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0％。
3.12样品含量测定结果
经过方法学验证，本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好，能更有效地控制产品质量。因此应用该方法对10批样品，按照前述方法采用内标法进行含量测定，结果见表3-2。
表3-2样品含量测定结果
4讨论
4.1系统适应性试验
在本试验气相色谱系统下，分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各1μL，记录色谱图。2种组分与内标物均能够较好地分离，阴性无干扰。该系统适应性结果见表3-3。
表3-3系统适应性试验
4.2内标物的选择
曾试用过环己酮、萘、联苯、水杨酸甲酯等，因样品挥发性成分多，结果以环己酮的保留时间及分离效果最合适。
4.3柱温的选择
胜红蓟色烯、环己酮和香豆素的沸点相差比较大，柱温低时，香豆素的保留时间过长，柱温高时，胜红蓟色烯与杂质不能有效分离，经采用两段程序升温方式能满足两种成分的同时分析。
4.4本品的含量限度
由10批次产品测定结果，暂定本品的含量限度为：本品每1mL含胜红蓟色烯，不得少于84.0mg，含香豆素不得少于88.0mg。
本方法对2种成分同时进行分离与检测，方法快速、灵敏，分离度好、专属性好，能有效地控制药品质量。
具体实施方式：
实施例1：
处方：柏树果50g、骨牌草50g、盾果草50g、铃钟三七50g。
制法：取干燥的柏树果50g、骨牌草50g、盾果草50g、铃钟三七50g，加1000mL水，煎煮2次，每次1小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
检测方法：
1、采用高效液谱法对积雪草苷进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
(5)测定结果：以每1mL样品含积雪草苷计，不得少于0.12mg。
2、采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：10：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯7.301mg·mL-1及香豆素9.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
(6)测定结果：本品每1mL含胜红蓟色烯，不得少于84.0mg，含香豆素不得少于88.0mg。
功能主治：鼻炎、变应性鼻炎、慢性肥厚性鼻炎。
实施例2：
处方：柏树果33g、骨牌草66g、盾果草33g、铃钟三七66g。
制法：取干燥的柏树果33g、骨牌草66g、盾果草33g、铃钟三七66g，加800mL水，煎煮1次，2小时，煎液滤过，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，制滴鼻剂。
检测方法：
1、采用高效液谱法对积雪草苷进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
(5)测定结果：以每1mL样品含积雪草苷计，不得少于0.12mg。
2、采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：10：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯7.301mg·mL-1及香豆素9.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
(6)测定结果：本品每1mL含胜红蓟色烯，不得少于84.0mg，含香豆素不得少于88.0mg。
功能主治：鼻炎、变应性鼻炎、慢性肥厚性鼻炎。
实施例3：
处方：柏树果66g、骨牌草33g、盾果草66g、铃钟三七33g。
制法：取干燥的柏树果66g、骨牌草33g、盾果草66g、铃钟三七33g，加600mL水，煎煮2次，每次1.5小时，煎液滤过，滤液合并，加入0.01％的月桂醇硫酸钠2mL，加水至1000mL，混匀，制滴鼻剂。
检测方法：
1、采用高效液谱法对积雪草苷进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
(5)测定结果：以每1mL样品含积雪草苷计，不得少于0.12mg。
2、采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：10：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取本品1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯7.301mg·mL-1及香豆素9.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
(6)测定结果：本品每1mL含胜红蓟色烯，不得少于84.0mg，含香豆素不得少于88.0mg。
功能主治：鼻炎、变应性鼻炎、慢性肥厚性鼻炎。

Claims (6)

1.一种治疗变应性鼻炎的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：柏树果1份、骨牌草1份、盾果草1份、铃钟三七1份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用如下方法制备：取柏树果、骨牌草、盾果草、铃钟三七，加3～10倍量的水，煎煮1～3次，每次0.5～2小时，煎液滤过，滤液合并，加入辅料，混匀，制滴鼻剂。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，采用高效液相色谱法对积雪草苷进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的乙腈-水；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：5～20μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取所述的药物组合物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，采用高效液谱法对积雪草苷进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的积雪草苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取所述的药物组合物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，0.5～1.5mL·mL-1；氢气，30～50mL·mL-1；空气，300～500mL·min-1；分流比：5～15：1；进样口温度：240～260℃，检测器温度：290～310℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取所述的药物组合物，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯及香豆素的对照品溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入气相色谱仪，进行检测。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，采用气相色谱法对胜红蓟色烯、香豆素进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：10：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取所述的药物组合物1.0mL，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取胜红蓟色烯对照品、香豆素对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含胜红蓟色烯7.301mg·mL-1及香豆素9.901mg·mL-1的对照品溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1634467A (zh) * 2004-02-14 2005-07-06 刘强 复方滴鼻油及其制备方法
CN101224276A (zh) * 2008-01-09 2008-07-23 于国录 一种治疗鼻炎的中成药

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1634467A (zh) * 2004-02-14 2005-07-06 刘强 复方滴鼻油及其制备方法
CN101224276A (zh) * 2008-01-09 2008-07-23 于国录 一种治疗鼻炎的中成药

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中医药治疗过敏性鼻炎近况;高尚社;《中国中医药现代远程教育》;20120229;第149-153页 *
中药熏吸治疗鼻炎临床举隅;高先德;《中医外治杂志》;19981217(第06期);第41页 *

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