CN105481835B

CN105481835B - 一种喹唑啉衍生物lu1508及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN105481835B
Application number: CN201510875195.9A
Authority: CN
Inventors: 卢光明; 张卓立; 潘璟
Original assignee: Nanjing General Hospital of Nanjing Command PLA
Current assignee: Nanjing General Hospital of Nanjing Command PLA
Priority date: 2015-12-03
Filing date: 2015-12-03
Publication date: 2018-09-04
Anticipated expiration: 2035-12-03
Also published as: CN105481835A

Abstract

本发明公开了一种新型喹唑啉衍生物LU1508及其制备方法，其化学命名为4‑{4‑[(7‑甲氧基)‑6‑(1‑吡咯‑2‑基)羟乙基]喹唑啉‑4‑基}氨基苯基氨基甲基苯酚。本发明的喹唑啉衍生物及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物对MCF‑7、SK‑BR‑3、MDA‑MB‑468、U‑118MG、HCT116、U‑87MG具有优秀的抗肿瘤体内外活性，在制备抗肿瘤药物上具有较好的应用前景。

Description

一种喹唑啉衍生物LU1508及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地涉及一种新型喹唑啉衍生物LU1508及其制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，近20年来，我国肿瘤死亡率上升了29.42％。在35至59岁的中壮年人群中，肿瘤已列居各类死因之首。有数据显示：我国肿瘤发病率约为200/10万人，每年新发病例约220万人以上，在治患者约600万人以上。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放射治疗和化学治疗。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段。寻找抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。近些年来，4-氨基喹唑啉类化合物因具有优良的生物活性，备受人们的广泛关注，成为生物学界和化学界学者们研究的热点。它们对EGF 受体或PDGF受体酪氨酸激酶产生较好的抑制作用，表现出具有抗肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、胆囊癌和前列腺癌等的功效，抗菌，抗HIV，抗炎，治疗糖尿病等作用，如吉非替尼、厄洛替尼、二甲苯磺酸拉帕替尼等上市药物。发明人发现，4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚有一定抗肿瘤活性，发明人提出与4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚或者该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物相关的发明。

发明内容

发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种新型喹唑啉衍生物LU1508，其化学命名为4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基} 氨基苯基氨基甲基苯酚，其对MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-468、U-118 MG、 HCT116、U-87 MG六株肿瘤细胞增殖具有抑制活性。

技术方案：为实现上述技术目的，本发明提供了一种新型喹唑啉衍生物 LU1508，其化学命名为4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚，其结构式如下所示：

本发明进一步提出了上述新型喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，包括如下步骤：

S1：在氮气保护下，将吡咯溶解于四氢呋喃，冰浴下缓慢滴加EtMgBr乙醚溶液，搅拌30分钟～2小时，反应液0～60℃搅拌30分钟～2小时，0～60℃加入溴乙酸甲酯搅拌30分钟～2小时，生成化合物(1)，即2-(1-吡咯-2-基)乙酸酯；

S2：在氮气保护下，将化合物(1)溶解于四氢呋喃，冰浴下边搅拌边分批加入LiAlH₄30分钟以上，得到还原产物化合物(2)，即2-(1-吡咯-2-基)乙醇；

S3：在氮气保护下，将化合物(2)与4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇、PPh₃溶解于四氢呋喃，在冰浴下边搅拌边分批加入DTAD，反应6小时以上，生成化合物 (3)，即4-氯-7-甲氧基-6-[2-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉；

S4：在氮气保护下，将4-羟甲基苯酚、三乙胺以乙酸乙酯溶解，0～25℃滴加乙酰氯，搅拌反应4～12小时，生成化合物(4)，即4-羟甲基乙酸苯酯；

S5：在氮气保护下，将化合物(4)，以乙醚溶解，加入四溴化碳，0～25℃分批加入Ph₃P，25～100℃搅拌3～12小时，生成化合物(5)，即4-溴甲基乙酸苯酯；

S6：将化合物(5)、苯-1，4-二胺和碳酸钾溶于四氢呋喃，60～120℃搅拌反应 1～6小时，生成化合物(6)，即4-[(4-氨基苯基)氨基]甲基乙酸苯酯。

S7：将化合物(3)以正丁醇溶解，加入化合物(6)，滴加三氟乙酸，25～100℃搅拌1～6小时，生成化合物(7)，即4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基乙酸苯酯；

S8：将化合物(7)溶于四氢呋喃，加入氨水，25～100℃搅拌反应4～12小时，生成化合物(8)，即4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚。

优选地，步骤S1中，EtMgBr乙醚溶液的浓度为3M，滴速为5～10ml/min， EtMgBr乙醚、溴乙酸甲酯、四氢呋喃、吡咯的用量比为100～500mL∶20～50g∶ 250～1000ml∶20～50g。

步骤S2中，LiAlH₄的用量为每克化合物(1)加入0.25～2g。

步骤S3中，所述的DTAD分3～6批加入，间隔2～4小时/次，其中，4-氯-7- 甲氧基喹唑啉-6-醇、PPh₃、DTAD、化合物(2)的摩尔用量比为1∶1∶1∶0.8～1.4。

步骤S4中，4-羟甲基苯酚、三乙胺和乙酰氯的摩尔用量比为1∶1∶0.6～1.4。

步骤S5中，Ph₃P、四溴化碳与化合物(4)的摩尔用量比为1∶1∶0.6～1.4。

步骤S6中，苯-1，4-二胺、碳酸钾和化合物(5)的摩尔用量比为1∶1∶0.4～2.5。

步骤S7中，化合物(3)、化合物(6)和三氟乙酸的摩尔用量比为1∶1∶0.01～ 1.0。

步骤S8中，氨水的用量为每1克化合物(7)加入氨水5～20ml。

本发明进一步提出了上述新型喹唑啉衍生物在制备抗肿瘤剂中的应用。

本发明同时提出一种药物组合物，该组合物包括所述新型喹唑啉衍生物和药学上可接受的载体。

更近一步地，本发明提出了上述化合物，或者上述的药物组合物在制备药剂中的用途。

同时，本发明还提出了上述新型喹唑啉衍生物LU1508或者该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物在制备抗肿瘤剂中的应用。

最后，本发明提出了上述新型喹唑啉衍生物LU1508或者该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物与一种或多种抗癌药剂结合在制备用于治疗肿瘤的药物上的用途。

有益效果：本发明公开了一种新型喹唑啉衍生物LU1508，并采用MTT法评价其抑制MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-468、U-118 MG、HCT116、U-87 MG六株肿瘤细胞增殖活性，计算抑制这六种肿瘤细胞增殖的IC₅₀值，结果表明所制备的新型喹唑啉衍生物LU1508对上述肿瘤细胞具有抑制作用，可用于制备抗肿瘤制剂。

附图说明

图1为喹唑啉衍生物的合成路线图，其中：i)溴乙酸甲酯，EtMgBr，THF；ii)THF，LiAlH₄；iii)4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇，PPh₃，DTAD，THF；iv)Et₃N，乙酰氯EA；v) CBr₄，Ph₃P，Et₂O；vi)苯-1，4-二胺，K₂CO₃，THF；vii)n-BuOH，TFA；viii)THF，NH₃·H₂O

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1 制备2-(1-吡咯-2-基)乙酸酯(化合物1)。

将500mL四氢呋喃置于2000mL的氮气保护的四颈圆底烧瓶中，加入50g 吡咯。冰浴下缓慢滴加(滴速为5ml/min，)266.8mL 3M EtMgBr乙醚溶液并搅拌30min。反应液室温下搅拌1小时，冰浴下滴加45.7g溴乙酸甲酯，反应液室温下再搅拌1小时。加入500mL of 1N HCl终止反应。反应液用乙酸乙酯萃取3 次，合并乙酸乙酯层，饱和氯化钠水溶液洗3次。分出合并的乙酸乙酯层，在 250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析得到19g(产率46％)化合物1，为棕色油状。

实施例2 制备2-(1-吡咯-2-基)乙醇(化合物2)。

将19g 2-(1-吡咯-2-基)乙酸酯(化合物1)溶解于200mL四氢呋喃，置于500 mL的氮气保护的四颈圆底烧瓶中，冰浴下分批(分四批，每批间隔10min)加入5.6g LiAlH₄，搅拌30min。往反应液中加入5.6mL水，，15％NaOH 16.8mL，室温搅拌10min，终止反应。在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析得到10g(产率66％)化合物2，为棕色油状。

对制备的化合物2进行¹H-NMR标准，结果如下：

¹H-NMR：(300MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ8.52(brs，1H)，6.73-6.71(m，1H)， 6.19-6.14(m，1H)，6.01-6.00(m，1H)，3.87-3.83(t，J＝5.7Hz，2H)，2.88-2.84(t，J＝ 5.7Hz，2H).

实施例3 制备4-氯-7-甲氧基-6-[2-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉(化合物3)。

将12.6g4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇，6g 2-(1-吡咯-2-基)乙醇(化合物2)，17.1gPPh₃溶解于150mL四氢呋喃，置于250mL氮气保护的三颈圆底烧瓶中，冰浴下分批(分3批，每批间隔2h)加入15gDTAD，室温搅拌过夜。反应混合物抽滤滤除固体残渣，滤液减压浓缩至干。得到的残余物用经柱层析得到8.8g (产率54％)化合物3，为无色粉末。

实施例4 制备4-羟甲基乙酸苯酯(化合物4)。

将15g 4-羟甲基苯酚和16.8mL三乙胺，溶解于200mL乙酸乙酯，置于500 mL氮气保护的三颈烧瓶中，冰浴搅拌下滴加9.4g乙酰氯，室温搅拌过夜。反应液减压过滤，滤液经柱层析得到12g(产率60％)化合物4，为无色油状。

对制备的化合物4进行¹H-NMR标准，结果如下：

¹H-NMR(300MHz，CD₃Cl-d₆，ppm)：δ7.42-7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.12-7.09 (d，J＝8.4Hz，2H)，4.72(s，2H)，2.33(s，3H).

实施例5 制备4-溴甲基乙酸苯酯(化合物5)

将11.2g 4-羟甲基乙酸苯酯(化合物4)溶于200mL乙醚中，置于500mL的氮气保护的三颈烧瓶中，加入26.9g四溴化碳，冰浴下分批(分4批，每批间隔 1h)加入21.2gPh₃P，室温搅拌4小时。反应液用200mL乙酸乙酯稀释，减压过滤，滤液用饱和氯化钠溶液洗涤3次，分出有机层在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析得到10g(产率65％) 化合物5，为无色粉末。

对制备的化合物5进行¹H-NMR标准，结果如下：

¹H-NMR(300MHz，CD₃Cl-d₆，ppm)：δ7.44-7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.10-7.08 (d，J＝8.4Hz，2H)，4.51(s，2H)，2.32(s，3H).

实施例6 制备4-[(4-氨基苯基)氨基]甲基乙酸苯酯(化合物6)

将9g 4-溴甲基乙酸苯酯(化合物5)，8.5g苯-1，4-二胺，10.8g碳酸钾，溶解于200mL四氢呋喃，置于500mL三颈圆底烧瓶中，60℃油浴搅拌1小时。冰浴冷却至室温，反应液加200mL乙酸乙酯稀释，饱和氯化钠水溶液洗2次。有机层在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析得到3.5g(产率35％)化合物6，为黄色粉末。

实施例7 制备4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基乙酸苯酯(化合物7)

将2.5g 4-氯-7-甲氧基-6-[2-(1-吡咯-2-基)羟甲基]喹唑啉(化合物3)溶于80mL正丁醇中，置于250mL的圆底烧瓶中，加入2.1g 4-[(4-氨基苯基)氨基]甲基乙酸苯酯(化合物6)，滴加0.01mL三氟乙酸，75℃油浴搅拌2小时。冰浴冷却至室温，滴加碳酸钠溶液调整pH到9，反应液用乙酸乙酯萃取2次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗2次。分出有机层在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤，滤液浓缩至干，经柱层析得到2.2g(产率51％)化合物7，为棕色粉末。

实施例8 制备4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基苯酚(化合物8)

将2.2g4-{4-[(7-甲氧基)-6-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯基氨基甲基乙酸苯酯(化合物7)溶解于30mL四氢呋喃，加入15mL NH₃·H₂O，置于 100mL圆底烧瓶中，室温搅拌过夜。反应液加50mL水稀释，用乙酸乙酯萃取3 次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗4次。有机层在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析得到1.147g(产率57％)化合物8，为棕色粉末。

对制备的化合物8进行ESI-MS、¹H-NMR标准，结果如下：

ESI-MS(m/z)：482[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ10.70(s， 1H)，9.25(s，1H)，8.29(s，1H)，7.79(s，1H)，7.28-7.26(d，J＝8.4Hz，2H)，7.18-7.15 (d，J＝8.4Hz，2H)，7.13(s，1H)，6.72-6.69(d，J＝8.4Hz，2H)，6.49(s，1H)，6.60-6.57 (d，J＝8.7Hz，2H)，6.03-5.93(t，J＝5.4Hz，1H)，5.93(s，2H)，4.27-4.22(t，J＝5.1Hz， 1H)，4.14-4.12(d，J＝5.4Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.12-3.07(t，J＝7.5Hz，2H).

实验例9 化合物8抗肿瘤细胞增殖活性评价。

(1)受试样品：

本发明的化合物8均用含0.1％DMSO的培养基配制成所需浓度。

(2)细胞株：

MCF-7(人乳腺癌细胞，ATCC：HTB-22)、SK-BR-3(人乳腺癌细胞，ATCC：HTB-30)、HCT116(人结肠癌细胞，ATCC：CCL-247)、U-118 MG(人脑星形胶质母细胞瘤，ATCC：HTB-15)、U-87 MG(人脑星形胶质母细胞瘤， ATCC：HTB-14)、MDA-MB-468(人乳腺癌细胞，ATCC：HTB-132)6株肿瘤细胞均购自美国标准菌种收藏所(ATCC)。

(3)主要仪器及材料

超纯水仪：MILLIPORE Direct-Q 3；

高压灭菌锅：HVE-50，Hirayama公司；

数显恒温水浴锅：HH-4，国华电器有限公司；

超净台：VS-1300-U洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；

细胞孵育箱：HF151UVCO2培养箱，上海力申公司；

低温离心机：上海安亭科学仪器厂

酶标仪：ELx800，Biotek公司

平板振荡器：ZD-9556，太仓市科教器材厂；

96孔细胞培养板、25cm²培养瓶：Corning Costar公司；

2mL冻存管：Corning Costar公司；

(4)主要试剂

RPMI-1640培养基：Gibco公司；

DMEM培养基：Gibco公司；

McCoy’s 5A培养基：Gibco公司；

L-15培养基：Gibco公司；

MEM培养基：Gibco公司；

PBS缓冲液：Gibco公司；

胎牛血清：Gibco公司；

0.25％胰酶溶液：Hyclone公司；

MTT(四噻唑蓝)：Sigma公司，溶于PBS溶液中，制成5mg/mL的溶液，过滤除菌后使用，避光保存；

阿霉素(ADR)：北京华丰联合技术有限公司。

DMSO：二甲基亚枫，Sigma公司；

(5)试验方法

MCF-7、U-118 MG细胞选用DMEM培养基，U-87MG细胞选用MEM培养基，MDA-MB-468细胞选用L-15培养基，HCT 116细胞选用McCoy’s 5A培养基，其他细胞选用RPMI-1640培养基。培养基中均含10％灭火的胎牛血清和 80U·mL^-1青霉素和0.08mg·mL^-1链霉素。

将生长状态良好、处于对数生长期的MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-468、 U-118 MG、HCT116、U-87 MG细胞按1×10⁴个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl。置于37℃、5％CO₂培养箱中培养12小时待贴壁。加药细胞孔按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的溶于培养基的化合物8，每孔200μl，空白细胞孔加入等体积的培养基，对照细胞孔按预设的浓度梯度加入等体积溶于培养基的阿霉素(ADR)，平行6孔。在37℃、5％CO₂培养箱中培养48小时后，每孔加入10μl浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续置于37℃、5％CO₂培养箱中培养4小时。小心吸出上清液，每孔加入150μl DMSO溶解紫色残留物(甲瓒)，平板振荡10分钟使沉淀全部溶解，于酶标仪上测定O.D.值(吸光度)，波长570nm。

按照公式“相对生存率＝(D含药-D空白)/(D对照-D空白)×100％”计算每一个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率。

实验平行重复3次，以抑制率对化合物浓度作图，计算本发明化合物8的IC₅₀ (半数有效抑制浓度)值。同时采用阿霉素(ADR)作为阳性对照药物。

(6)实验结果

表1 化合物8LU1508抗肿瘤细胞增殖活性(IC₅₀±SDμM)

化合物

MCF-7

SK-BR-3

HCT 116

U-118 MG

U-87 MG

MDA-MB-468

ADR

3.98±0.07

4.65±0.02

26.57±0.12

13.49±1.75

82.47±7.15

2.45±0.31

化合物8

40.68±1.81

27.26±4.16

68.02±2.72

50.59±3.40

92.58±7.67

24.49±2.89

如表1所示，给出了化合物8抗肿瘤细胞增殖活性的测试结果，结果表明所制备的新型喹唑啉衍生物对上述肿瘤细胞具有抑制作用，可用于制备抗肿瘤制剂。

Claims

1.一种喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其化学结构式为：

其特征在于，包括如下步骤：

S1：在氮气保护下，将吡咯溶解于四氢呋喃，冰浴下缓慢滴加EtMgBr乙醚溶液，搅拌30分钟～2小时，反应液0～60℃搅拌30分钟～2小时，0～60℃加入溴乙酸甲酯搅拌30分钟～2小时，生成化合物(1)，即

S2：在氮气保护下，将化合物(1)溶解于四氢呋喃，冰浴下边搅拌边分批加入LiAlH₄ 30分钟以上，得到还原产物化合物(2)，即

S3：在氮气保护下，将化合物(2)与4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇、PPh₃溶解于四氢呋喃，在冰浴下边搅拌边分批加入DTAD，反应6小时以上，生成化合物(3)，即

S4：在氮气保护下，将4-羟甲基苯酚、三乙胺以乙酸乙酯溶解，0～25℃滴加乙酰氯，搅拌反应4～12小时，生成化合物(4)，即

S5：在氮气保护下，将化合物(4)，以乙醚溶解，加入四溴化碳，0～25℃分批加入Ph₃P，25～100℃搅拌3～12小时，生成化合物(5)，即

S6：将化合物(5)、苯-1,4-二胺和碳酸钾溶于四氢呋喃，60～120℃搅拌反应1～6小时，生成化合物(6)，即

S7：将化合物(3)以正丁醇溶解，加入化合物(6)，滴加三氟乙酸，25～100℃搅拌1～6小时，生成化合物(7)，即

S8：将化合物(7)溶于四氢呋喃，加入氨水，25～100℃搅拌反应4～12小时，生成化合物(8)，即

2.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S1中，EtMgBr乙醚溶液的浓度为3M，滴速为5～10ml/min，EtMgBr乙醚、溴乙酸甲酯、四氢呋喃、吡咯的用量比为100～500mL：20～50g：250～1000ml：20～50g；步骤S2中，LiAlH₄的用量为每克化合物(1)加入0.25～2g。

3.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述的DTAD分3～6批加入，间隔2～4小时/次，其中，4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇、PPh₃、DTAD、化合物(2)的摩尔用量比为1:1:1:0.8～1.4。

4.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S4中，4-羟甲基苯酚、三乙胺和乙酰氯的摩尔用量比为1:1:0.6～1.4。

5.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S5中，Ph₃P、四溴化碳与化合物(4)的摩尔用量比为1:1:0.6～1.4。

6.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S6中，苯-1,4-二胺、碳酸钾和化合物(5)的摩尔用量比为1:1:0.4～2.5。

7.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S7中，化合物(3)、化合物(6)和三氟乙酸的摩尔用量比为1:1:0.01～1.0。

8.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物LU1508的制备方法，其特征在于，步骤S8中，氨水的用量为每1克化合物(7)加入氨水5～20ml。