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CN105431447A - Pcsk9的小分子调节剂和其使用方法 - Google Patents

Pcsk9的小分子调节剂和其使用方法 Download PDF

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CN105431447A
CN105431447A CN201480026888.4A CN201480026888A CN105431447A CN 105431447 A CN105431447 A CN 105431447A CN 201480026888 A CN201480026888 A CN 201480026888A CN 105431447 A CN105431447 A CN 105431447A
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CN
China
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compound
substituted
alkyl
unsubstituted
phenyl
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Application number
CN201480026888.4A
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丹尼尔·瓜伊
谢尔登·克兰
尼古拉斯·拉尚斯
让-弗朗索瓦·基亚森
武伊·灵·长
帕特里克·拉孔贝
凯瑟琳·斯科雷
纳比尔·G·赛义达
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
AMORCHEM HOLDINGS Inc
A Dalata Partnership Co Ltd
Original Assignee
AMORCHEM HOLDINGS Inc
A Dalata Partnership Co Ltd
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Abstract

一种式(I)化合物：

Description

PCSK9的小分子调节剂和其使用方法
相关申请案
本申请是提交于2014年3月14日且根据PCT第21(2)条以英文公开的PCT申请序列号PCT/CA2014/*的进入国家阶段申请，所述申请本身就要求提交于2013年3月15日的美国临时申请序列号61/792,249的权益。以上所有文献在此整体并入作为参考。
技术领域
关于联邦资助的研究或开发的声明
N.A.
本发明涉及前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶-科信9型(PCSK9)的小分子调节剂和其使用方法。更具体地，本发明涉及这些分子在治疗低密度脂蛋白(LDL)-胆固醇相关的疾病或病症中的用途。
发明背景
由心血管疾病导致的并发症是世界范围内死亡的主要原因，影响～1300万人/年，较之以由于各种形式的癌症影响～600万人/年。其中最强效的心血管危险因素是升高的低密度脂蛋白(LDL)胆固醇(LDL-C)水平。预计心血管病变的发生率在未来二十年里将大幅增加。临床试验数据表明，降低LDL胆固醇水平都与冠状动脉事件的发生率有关(Law等人，2003BMJ326：1423-1427)。中度终身降低血浆LDL胆固醇水平已被证明是基本上与冠状动脉事件的发生率显著降低相关(Cohen等人，N.Engl.J.Med.354：1264-1272)，即使在非脂质相关的心血管危险因素发病率较高的人群中。因此，有很大的好处将从LDL胆固醇水平的管理控制得到。其中重要的降胆固醇药物是他汀类药物(Briel，M.、Nordmann，A.J.和Bucher，H.C.Curr.Opin.Lipidol.，16：601-605，2005)。尽管大多数患者耐受性良好，但是不良副作用正在整理中(https：//www.statineffects.com/info/)。他汀类药物与依泽替米贝(一种肠固醇转运阻滞剂)的组合进一步降低了LDL-C≤20％。
因此，有必要开发可降低循环LDL-C的替代战略(Brown，M.S.和Goldstein，J.L.Science，311：1721-1723，2006；Tall，A.R.N.Engl.JMed.，354：1310-1312，2006)。
低密度脂蛋白受体(LDLR)是调节血液中循环LDL水平的关键调节者。降低的LDLR水平是与升高的血浆胆固醇(LDL-C)相关联，升高的血浆胆固醇强烈地与动脉粥样硬化和冠心病(工业化文明中死亡的首要原因)的风险增加相关。在细胞表面达成增加LDLR蛋白水平的试剂将因此提供受血浆高胆固醇血症影响的个体正常化LDL-C的方法。前蛋白转化酶PCSK9通过加强其在核内体/溶酶体中的降解来降低LDLR水平。已经确定了一些临床试验，以单克隆抗体抑制PCSK9-介导的LDLR降解会剂量依赖性地降低健康人受试者的LDL-C(Lambert等人，ThePCSK9Decade’，J.LipidRes.2012，53(12)，2515-24和其中引用的文献)。从给药的成本和便利的观点来看，一种会降低分泌的PCSK9的量的口服用小分子试剂的开发将是静脉内或皮下递送生物药剂(如定制来破坏LDLR的PCSK9介导降解的抗体或寡核苷酸)的理想替代方案。
发明概要
更具体来说，根据本发明，提供一种式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或外消旋混合物或立体异构体，
其中：R1为-CH(OH)Ra或-B(ORb)(ORc)；
R2为-H、-CH2Rd、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；
R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同或不同的且独立地为氢或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6硫代烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基、-CN、-C(O)N(Rf)Rg、-C(O)ORf、-C(Rf)(Rg)ORh、-ORf、-OC(O)ORf、-OC(O)NRf(Rg)、-SRf、-S(O)nRf、-S(O)nN(Rf)Rg、-S(O)nN(Rf)C(O)Rg、-N(Rf)Rg、-N(Rf)C(O)Rg、--N(Rf)C(O)ORg、-N(Rf)C(O)N(Rg)(Rh)、-N(Rf)S(O)nRg和-N(Rf)S(O)N(Rg)Rh取代基取代；
当(R3和R4)或(R5和R6)或(R7和R8)不是氢时，括号内的对也可以与-C(O)-、-CO2-、-C(O)N(H)-、-C(O)N(Rx)--O-、-NH-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-、-S(O)nN(H)-、-S(O)nN(Rx)-基团连接以形成环状结构；
R9为RiC(O)-、RiS(O)n-、RiOC(O)-、RiNHC(O)-、RiNHS(O)n-、Rk(Rl)NC(O)-、Rl(Rl)NS(O)n-；或一个或多个氨基酸残基；
Ra为C1-3烷基、C1-2氟烷基或环丙基；
Rb和Rc是相同或不同的且独立地为H或C1-6烷基或可以连接在一起以形成环状5-或6-员环结构，或与另外的脂族或芳族环体系稠合，所述环状5-或6-员环结构或脂族或芳族环体系任选地经一个或多个C1-6烷基和/或C1-6卤代烷基取代基取代；
Rd和Re是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Rf、Rg、Rh、Rk和Rl是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Ri为C1-10烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rj为ORd或N(Rd)(Re)；
Rx为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-4环烷基、-C(O)Ry、-C(O)ORy、-C(O)NH2、-C(O)NH(Ry)或-C(O)NHS(O)nRy；
Ry为C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基；
m为值0或1的整数；且
n为值1或2的整数，
限制条件为：
当R1为-CH(OH)Ra时，R2为-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；且
当R1为-B(ORb)(ORc)时，R2为-H、-CH3、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re。
更具体来说，根据本发明，提供一种式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或外消旋混合物或立体异构体，
其中：
R1为-CH(OH)Ra或-B(ORb)(ORc)；
R2为-H、-CH2Rd、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；
R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同或不同的且独立地为氢或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6硫代烷基、C1-6氨基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基、-CN、-C(O)N(Rf)Rg、-C(O)ORf、-C(Rf)(Rg)ORh、-ORf、-OC(O)ORf、-OC(O)NRf(Rg)、-SRf、-S(O)nRf、-S(O)nN(Rf)Rg、-S(O)nN(Rf)C(O)Rg、-N(Rf)Rg、-N(Rf)C(O)Rg、--N(Rf)C(O)ORg、-N(Rf)C(O)N(Rg)(Rh)、-N(Rf)S(O)nRg和-N(Rf)S(O)N(Rg)Rh取代基取代；
当(R3和R4)或(R5和R6)或(R7和R8)不是氢时，括号内的对也可以与-C(O)-、-CO2-、-C(O)N(H)-、-C(O)N(Rx)-、-O-、-NH-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-、-S(O)nN(H)-、-S(O)nN(Rx)-基团连接以形成环状结构；
R9为RiC(O)-、RiS(O)n-、RiOC(O)-、RiNHC(O)-、RiNHS(O)n-、Rk(Rl)NC(O)-、Rl(Rl)NS(O)n-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或一个或多个氨基酸残基；
Ra为C1-3烷基、C1-2氟烷基或环丙基；
Rb和Rc是相同或不同的且独立地为H或C1-6烷基或可以连接在一起以形成环状5-或6-员环结构，或与另外的脂族或芳族环体系稠合，所述环状5-或6-员环结构或脂族或芳族环体系任选地经一个或多个C1-6烷基和/或C1-6卤代烷基取代基取代；
Rd和Re是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Rf、Rg、Rh、Rk和Rl是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Ri为C1-10烷基、C1-10杂烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基、杂芳基、C1-10烷基-C3-8环烷基、C1-10烷基-杂环基、C1-10烷基-芳基、C1-10烷基-杂芳基、C1-10杂烷基-C3-8环烷基、C1-10杂烷基-杂环基、C1-10杂烷基-芳基或C1-10杂烷基-杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rm为C1-10烷基、C1-10杂烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rj为ORd或N(Rd)(Re)；
Rx为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-4环烷基、-C(O)Ry、-C(O)ORy、-C(O)NH2、-C(O)NH(Ry)或-C(O)NHS(O)nRy；
Ry为C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基；
m为值0或1的整数；且
n为值1或2的整数，
限制条件为：
1)当R1为-CH(OH)Ra时，R2为-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；且
2)当R1为-B(ORb)(ORc)时，R2为-H、-CH3、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re。
在式I化合物的一特定实施方案中，(i)当R1为-CH(OH)-CF3时，R9不是-C(O)OCH2-苯基或-C(O)OCH3；(ii)当R1为B(OH)2时，R9不是-C(O)OCH3或-C(O)-苯基-苯基；和/或(iii)当R1为CH(OH)CH2F时，R9不是-C(O)(CH2)8CH3。
在式I化合物的一特定实施方案中，R1为-B(ORb)(ORc)或-CH(OH)Ra；R2为H或-CH2(CH2)mC(O)Rj；R3为H；R4为取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基或取代的或未取代的芳基；R5为H；R6为经芳基取代的C1-6烷基；R7为H；R8为经C1-6烷基取代的C1-6烷基；和/或R9为RiOC(O)-或RiC(O)-。
在式I化合物的另一特定实施方案中，R1为-B(ORb)(ORc)或-CH(OH)Ra；R2为H或-CH2(CH2)mC(O)Rj；R3为H；R4为取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基或取代的或未取代的芳基；R5为H；R6为经芳基取代的C1-6烷基；R7为H；R8为经C1-6烷基取代的C1-6烷基；且R9为RiOC(O)-或RiC(O)-。
在式I化合物的另一特定实施方案中，R1为-B(ORb)(ORc)或-CH(OH)Ra；R2为H或-CH2(CH2)mC(O)Rj；R3为H或取代的或未取代的C1-6烷基；R4为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；R5为H；R6为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷烃；R7为H；R8为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；和/或R9为RiOC(O)-、RiC(O)-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或RiS(O)n-。
在式I化合物的另一特定实施方案中，R1为-B(ORb)(ORc)或-CH(OH)Ra；R2为H或-CH2(CH2)mC(O)Rj；R3为H或取代的或未取代的C1-6烷基；R4为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；R5为H；R6为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷烃；R7为H；R8为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；且R9为RiOC(O)-、RiC(O)-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或RiS(O)n-。
在式I化合物的一特定实施方案中，R2；R3或R4；R5或R6；和/或R7R8可为相同或不同的且可为除了以D或L构型的脯氨酸以外的任何天然氨基酸的侧链。其它取代基是如本文所定义。在一个更具体的实施方案中，(i)R2为谷氨酰胺或甘氨酸的侧链；(ii)R3或R4为丙氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺或甘氨酸的侧链；(iii)R5或R6为苯丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸或缬氨酸的侧链；(iv)R7或R8为缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸或丙氨酸；或(v)(i)至(iv)中至少两者的任何组合。
在式I化合物的另一特定实施方案中，R6为苯基-CH2-；和/或R8为(CH3)2CH-。在另一特定实施方案中，R1为-B(ORb)(ORc)。在另一特定实施方案中，Rb和Rc为H。在另一特定实施方案中，Rb和Rc连接以形成环状5员环结构或与脂族环体系稠合。在另一特定实施方案中，R1为2，9，9-三甲基-3，5--二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基。在另一特定实施方案中，R1为-CH(OH)Ra。在另一特定实施方案中，Ra为C1-2氟烷基。在另一特定实施方案中，Ra为-CF3。在另一特定实施方案中，Ra为-CH2F。在另一特定实施方案中，Ra为C1-3烷基。在另一特定实施方案中，Ra为-CH3。在另一特定实施方案中，R2为H。在另一特定实施方案中，R2为-CH2(CH2)mC(O)Rj。在另一特定实施方案中，Rj为ORd。在另一特定实施方案中，Rd为CH3。在另一特定实施方案中，Rj为NH2。
在式I化合物的另一特定实施方案中，R3为H。在另一特定实施方案中，R3为取代的或未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R3为未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R3为CH3。
在式I化合物的另一特定实施方案中，R4为H。在另一特定实施方案中，R4为取代的或未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R4为未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R4为芳基取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R4为-CH3。在另一特定实施方案中，R4为CH3CH2-。在另一特定实施方案中，R4为-CH2CH(CH3)2。在另一特定实施方案中，R4为芳基取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R4为苯基-CH2-。在另一特定实施方案中，R4为-(CH2)2C(O)NH2。在另一特定实施方案中，R4为取代的或未取代的C1-6硫代烷基。在另一特定实施方案中，R4为CH3S(CH2)2-。在另一特定实施方案中，R4为取代的或未取代的芳基。在另一特定实施方案中，R4为苯基-。在另一特定实施方案中，R4为环烷基。
在另一特定实施方案中，R6为H。在另一特定实施方案中，R6为取代的或未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R6为取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R6为芳基取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R6为-烷基-苯基。在另一特定实施方案中，R6为-CH2-苯基。在另一特定实施方案中，R6为-CH2-羟苯基。在另一特定实施方案中，R6为-(CH2)2-苯基。在另一特定实施方案中，R6为-CH2-吲哚。在另一特定实施方案中，R6为未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R6为未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R6为CH3。在另一特定实施方案中，R6为-CH(CH3)2。在另一特定实施方案中，R6为取代的或未取代的C1-6硫代烷基。在另一特定实施方案中，R6为CH3S(CH2)2-。在另一特定实施方案中，R6为取代的或未取代的芳基。在另一特定实施方案中，R6为苯基。在另一特定实施方案中，R6为取代的或未取代的环烷基。在另一特定实施方案中，R6为苯并环戊基。
在另一特定实施方案中，R8为H。在另一特定实施方案中，R8为取代的或未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R8为未取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R8为-CH(CH3)2。在另一特定实施方案中，R8为-CH3。在另一特定实施方案中，R8为取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R8为芳基取代的C1-6烷基。在另一特定实施方案中，R8为-CH2-苯基。在另一特定实施方案中，R8为取代的或未取代的C1-6硫代烷基。在另一特定实施方案中，R8为CH3S(CH2)2-。在另一特定实施方案中，R8为取代的或未取代的芳基。在另一特定实施方案中，R8为未取代的芳基。在另一特定实施方案中，R8为苯基。在另一特定实施方案中，R8为取代的或未取代的环烷基。在另一特定实施方案中，R8为未取代的环烷基。R8为环戊基。在另一特定实施方案中，R8为环丙基。
在另一特定实施方案中，R9为RiOC(O)-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为未取代的C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为CH3-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为(CH3)3C-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-CH2-。
在另一特定实施方案中，R9为RiC(O)-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的芳基-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的芳基-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的杂芳基。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的芳基。在另一特定实施方案中，Ri为取代的芳基。在另一特定实施方案中，Ri为芳基-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为杂芳基-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为双吖丙啶-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为氟苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为氟烷基-双吖丙啶-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为三氟甲基-双吖丙啶-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为吡啶-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为噁二唑-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为杂环基-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为吗啉-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为烷基-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为(CH3)2CH-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为OHCH2-苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为氟苯基。在另一特定实施方案中，Ri为未取代的芳基。在另一特定实施方案中，Ri为苯基。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的杂芳基。在另一特定实施方案中，Ri为取代的杂芳基。在另一特定实施方案中，Ri为芳基-杂芳基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-杂芳基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-吡唑-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-甲基吡唑-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-噻唑-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-吡啶-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-呋呫-。在另一特定实施方案中，Ri为杂芳基-杂芳基-。在另一特定实施方案中，Ri为吡啶-异噻唑-。在另一特定实施方案中，Ri为未取代的杂芳基。在另一特定实施方案中，Ri为吡啶。在另一特定实施方案中，Ri为吡嗪。在另一特定实施方案中，Ri为吲哚。在另一特定实施方案中，Ri为4-[3-三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为3-[3-三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为未取代的芳基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为芳基-C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-炔-。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-CH2-。
在另一特定实施方案中，Ri为氟甲氧基-芳基-(C1-6烷基)-。在另一特定实施方案中，Ri为氟甲氧基-苯基-CH2-。在另一特定实施方案中，Ri为三氟甲氧基-苯基-CH2-。在另一特定实施方案中，Ri为4-(三氟甲氧基)苯基-CH2-。在另一特定实施方案中，Ri为氟烷基-双吖丙啶-苯基-(C1-10烷基)。在另一特定实施方案中，Ri为三氟甲基-双吖丙啶-苯基-CH2-。在另一特定实施方案中，Ri为4-[3-三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为3-[3-三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基-。在另一特定实施方案中，Ri为未取代的C1-10烷基-。在另一特定实施方案中，Ri为CH3(CH2)8-。
在另一特定实施方案中，R9为RmORiC(O)-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的C1-10烷基。在另一特定实施方案中，Ri为-CH2-。在另一特定实施方案中，Rm为取代的或未取代的C1-10烷基。在另一特定实施方案中，Rm为-CH2-。在另一特定实施方案中，Rm为芳基-CH2-。在另一特定实施方案中，Rm为苯基-CH2-。在另一特定实施方案中，Rm为取代的或未取代的芳基。在另一特定实施方案中，Rm为苯基。
在另一特定实施方案中，R9为RmC(O)RiC(O)-。在另一特定实施方案中，Rm为杂芳基。在另一特定实施方案中，Rm为吗啉。在另一特定实施方案中，Ri为芳基。在另一特定实施方案中，Ri为苯基。
在另一特定实施方案中，R9为RiS(O)n-。在另一特定实施方案中，Ri为取代的或未取代的芳基。在另一特定实施方案中，Ri为取代的芳基。在另一特定实施方案中，Ri为取代的苯基。在另一特定实施方案中，Ri为苯基-苯基。
在另一特定实施方案中，所述式I化合物为：
在一个具体实施方案中，本发明化合物不是化合物1；2；17；21a和21b的混合物；25和/或26。
根据本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含至少一种本发明化合物。在所述组合物的一具体实施方案中，所述组合物进一步包含至少一种其它本发明化合物。在另一特定实施方案中，所述组合物进一步包含至少一种会改善患者的血脂谱的其它活性成分。在另一特定实施方案中，所述组合物进一步包含药物载体或赋形剂。
根据本发明的另一方面，提供一种本发明化合物或组合物，其用作药剂。在一个具体实施方案中，所述化合物或组合物是用于制造药剂。在另一特定实施方案中，所述药剂是用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症，其限制条件为所述化合物不是以下：
在所述化合物或组合物的另一具体实施方案中，所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症为高胆固醇血症。
根据本发明的另一方面，提供一种预防或治疗LDL-胆固醇相关疾病或病症的方法，其包括对有此需要的受试者施用治疗上有效量的本发明化合物或组合物(例如，包含本发明化合物的组合物)，其限制条件为所述化合物不是以下：
在所述方法的一具体实施方案中，所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症为高胆固醇血症。
根据本发明的另一方面，提供一种本发明化合物或组合物的用途，其用作药剂。在一个具体实施方案中，本发明化合物或组合物的用途是用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症，其限制条件为所述化合物不是以下：
在一个具体实施方案中，所述用途是用于制造用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病的药剂，其限制条件为所述化合物不是以下：
在所述用途的另一个具体实施方案中，所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症为高胆固醇血症。
根据本发明的另一方面，提供一种用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症的试剂盒，所述试剂盒包括(i)至少一种本发明化合物或组合物，和(ii)(a)至少一种改善患者的血脂谱的其它活性成分；(b)至少一种其它本发明化合物或组合物；(c)用于所述化合物和/或活性成分的容器；和/或(d)关于使用所述化合物来预防或治疗所述受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症的说明书，其限制条件为所述化合物不是以下：
在所述试剂盒的一个具体实施方案中，所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症为高胆固醇血症。
附图简述
在附图中：
图1示出了(A)19种化合物对PCSK9分泌的效应，作为初始筛选的一部分。将稳定表达WTPCSK9(+V5)的HepG2细胞在只有培养基(-)或含有DMSO对照(DMSO)或100μM标明化合物的培养基中培养24h。在回收的培养基和细胞级分中的PCSK9水平是通过ELISA量化且表示为ngPCSK9/ml级分。标明化合物对PCSK9分泌的抑制效应是从相对于DMSO对照降低培养基/细胞比来评估。星号识别具有抑制活性的化合物；以及(B)化合物a至j的结构；
图2示出了3种化合物对PCSK9分泌的剂量依赖性效果。在不存在(DMSO)或存在渐增浓度的每种标明化合物下培养稳定表达WTPCSK9(+V5)的HepG2细胞24h。回收培养基和细胞并通过ELISA量化每种级分中的PCSK9水平。细胞中的PCSK9水平针对总蛋白质量校正，其是通过Bio-RadDC蛋白测定法测量。在每种浓度下，标明化合物对PCSK9分泌的抑制效应是从相对于DMSO对照的培养基/细胞比降低来评估；
图3示出了5种化合物相对于DMSO对照的细胞毒性测定法。在不存在(DMSO)或存在渐增浓度的每种标明化合物下培养稳定表达WTPCSK9(+V5)的HepG2细胞24h。通过MTT细胞毒性测定法测量毒性水平；
图4示出了PCSK9抑制化合物对HepG2初始细胞的表面上的LDLR水平的效应。在不存在(DMSO)或存在33.3μM化合物19下培养细胞20h。通过免疫荧光分析非透化细胞。使用人类LDLRAb染色LDLR(绿色标记)。显示每种DMSO对照和化合物19条件的三种不同场。注意，在细胞表面的LDLR的增加由化合物19诱导；
图5示出了PCSK9抑制化合物对细胞表面LDLR的活性的效应，如通过在HepG2初始细胞(A)和HEK293初始细胞(B)中的DiI-LDL摄取所测得，或对总LDLR水平的效应，如通过在HepG2初始细胞(C)中的Western印迹分析所测得。阴性对照是化合物i。在不存在(DMSO)或存在33.3μM标明化合物下培养表达内源性PCSK9的HepG2初始细胞(A)或缺乏PCSK9表达的HEK293初始细胞(B)6h，然后添加DiI-LDL，接着再进行18h-培养。对于每种条件，Dil-LDL摄取(Dil荧光探针的荧光)是针对细胞总数(CyQuantTMGR染料的荧光)校正且表示为DMSO对照的活性％。数据呈现以一式三份进行的2至5个(A)或2至3个(B)独立实验的平均值。(C)在不存在(Cnt_0)或存在渐增浓度的化合物19下培养24h的HepG2初始细胞中的总LDLR的Western印迹分析。将标准化为β-肌动蛋白的总LDLR水平针对每种条件以对照(Cnt)％绘图。使用图像JTM软件获得蛋白质带的量化；和
图6示出了PCSK9的体内抑制。在展现″人源化″LDLc谱(LDLcx2-3)并通过具有WT和Ldlr-/-背景的相互杂交小鼠产生的杂合子Ldlr+/-小鼠中测试选定的抑制剂。这些小鼠表现正常水平的小鼠PCSK9(Pcsk9+/+)、不表现PCSK9(Pcsk9-/-)和/或从其自身的人类启动子(TgDY)编码人类PCSK9-D374Y的转基因的一或五种副本。还测试PCSK9的人类WT形式。
具体实施方式
PCSK9也称为神经细胞凋亡-调节的转化酶1(NARC-1)，是一种人的692个氨基酸的蛋白酶K-Hke枯草杆菌酶(NP_777596.2)，并包括信号肽(1-30)，接着前片段(残基31-152)、催化结构域(残基153-454)和C-端Cys-His-富结构域(CHRD；残基455-692)。PCSK9是在能够增殖和分化的细胞，诸如肝细胞、肾间质细胞、肠回肠、结肠上皮细胞和胚胎脑端脑的神经元中表达(Seidah等人，2003，Proc.Natl.Acad.Sci.USA100：928-933)。
继在ER中易位后，PCSK9的前片段在VFAQ152↓SIP位点自动催化裂解。在PC中，前片段(pro)是分子内分子伴侣/抑制剂，其通常在细胞内移除以产生完全活性的蛋白酶。不同于其它PC，PCSK9是分泌为稳定的非共价络合物[pro≡PCSK9]。因此，由PCSK9诱导的LDLR的降解增强不需要成熟PCSK9形式的催化活性。在人类和小鼠血浆中，可以检测到两种全长的PCSK9(153-692)和截短形式的PCSK9-ΔN218(219-692)。后者对LDLR没有活性，它很可能由弗林蛋白酶和/或PC5产生，因为它们在RFHR218↓体外裂解PCSK9。
在本文所公开的研究中，本发明者已产生并识别针对人类PCSK9的抑制化合物，并不显示，这些化合物抑制PCSK9活性(例如，在人肝癌来源的细胞系如HepG2中，PCSK9分泌、诱导的LDLR降解)。
化合物
本发明涉及式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或外消旋混合物或立体异构体，
其中：
R1为-CH(OH)Ra或-B(ORb)(ORc)；
R2为-H、-CH2Rd、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；
R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同或不同的且独立地为氢或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6硫代烷基、C1-6氨基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基、-CN、-C(O)N(Rf)Rg、-C(O)ORf、-C(Rf)(Rg)ORh、-ORf、-OC(O)ORf、-OC(O)NRf(Rg)、-SRf、-S(O)nRf、-S(O)nN(Rf)Rg、-S(O)nN(Rf)C(O)Rg、-N(Rf)Rg、-N(Rf)C(O)Rg、--N(Rf)C(O)ORg、-N(Rf)C(O)N(Rg)(Rh)、-N(Rf)S(O)nRg和-N(Rf)S(O)N(Rg)Rh取代基取代；
当(R3和R4)或(R5和R6)或(R7和R8)不是氢时，括号内的对也可以与-C(O)-、-CO2-、-C(O)N(H)-、-C(O)N(Rx)-、-O-、-NH-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-、-S(O)nN(H)-、-S(O)nN(Rx)-基团连接以形成环状结构；
R9为RiC(O)-、RiS(O)n-、RiOC(O)-、RiNHC(O)-、RiNHS(O)n-、Rk(Rl)NC(O)-、Rl(Rl)NS(O)n-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或一个或多个氨基酸残基；
Ra为C1-3烷基、C1-2氟烷基或环丙基；
Rb和Rc是相同或不同的且独立地为H或C1-6烷基或可以连接在一起以形成环状5-或6-员环结构，或与另外的脂族或芳族环体系稠合，所述环状5-或6-员环结构或脂族或芳族环体系任选地经一个或多个C1-6烷基和/或C1-6卤代烷基取代基取代；
Rd和Re是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Rf、Rg、Rh、Rk和Rl是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Ri为C1-10烷基、C1-10杂烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基、杂芳基、C1-10烷基-C3-8环烷基、C1-10烷基-杂环基、C1-10烷基-芳基、C1-10烷基-杂芳基、C1-10杂烷基-C3-8环烷基、C1-10杂烷基-杂环基、C1-10杂烷基-芳基或C1-10杂烷基-杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rm为C1-10烷基、C1-10杂烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rj为ORd或N(Rd)(Re)；
Rx为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-4环烷基、-C(O)Ry、-C(O)ORy、-C(O)NH2、-C(O)NH(Ry)或-C(O)NHS(O)nRy；
Ry为C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基；
m为值0或1的整数；且
n为值1或2的整数，
限制条件为：
1)当R1为-CH(OH)Ra时，R2为-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；且
2)当R1为-B(ORb)(ORc)时，R2为-H、-CH3、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re。
如上所引用，本发明包括在R9中的另外的氨基酸残基。在R9中的一个或多个氨基酸残基可促进本发明化合物跨细胞膜的活性传输(参见Koren，E.；Torchilin，V.P.CellPenetratingPeptides：BreakingThroughtotheOtherSide.TrendsMol.Med.2012，18(7)，385-93和其中的参考文献)。
本发明的具体实施方案包括(但不限于)以下各者：
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-(苯基甲酰胺基)丁酰胺；5。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸苄酯；7。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸叔丁酯；6。
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-({4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}甲酰胺基)丁酰胺；8a。
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-({3-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}甲酰胺基)丁酰胺；8b。
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-(2-{4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}乙酰胺基)丁酰胺；8c。
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-(2-{3-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}乙酰胺基)丁酰胺；8d。
(2S)-2-[(2-氟苯基)甲酰胺基]-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]丁酰胺；9。
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-3-甲基-2-{2-[4-(三氟甲氧基)苯基]乙酰胺基}丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸；3。
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-癸酰胺基-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸；4。
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-3-甲基-2-[(4-苯基苯基)甲酰胺基]丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸；2。
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸；1。
[(1R/S)-3-氨基甲酰基-1-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]丙基]硼酸；18。
[(1R/S)-4-甲氧基-1-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]-4-氧代丁基]硼酸；17。
N-[(1S)-1-{[(1R/S)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-3-氨基甲酰基-1-[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]丙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-苯基乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酸甲基酯；16。
(4R/S)-4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]-2-苯基乙酰胺基]-4-[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]丁酸甲酯；15。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(S)-苯基({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)甲基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯；14。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-1-{[(1S)-3-甲基-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-苯基乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯；13。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-1-{[(1S)-3-(甲基磺酰基)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)丙基]氨基甲酰基}-2-苯基乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯；12。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-2-苯基-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯；11。
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)丙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯；10。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；19。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；20a。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-(((3R)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；20b。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1-氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；21a和21b。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；22a和22b。
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺；23。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；24。
((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸苄酯；25。
((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸甲酯；26。
((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯；27。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-异丙基苯甲酰胺；28。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯甲酰胺；29。
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(4-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺；30。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-3-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯甲酰胺；31。
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(3-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺；32。
4-((S)-2-((S)-2-((S)-2-([1，1′-联苯基]-4-磺酰氨基)-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺；33。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺；34。
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-苯基乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺；35。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-6-苯基烟酰胺；36)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-(吡啶-4-基)噻唑-4-甲酰胺；37。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(吡啶-3-基)苯甲酰胺；38。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(羟甲基)苯甲酰胺；39。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺；40。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-吗啉并苯甲酰胺；41。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(吗啉-4-羰基)苯甲酰胺；42。
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(3-苯基丙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺；43。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)烟酰胺；44。
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-苯氧基乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺；45。
4-((6S，9S，12S)-9-苄基-6-异丙基-12-甲基-4，7，10-三氧代-1-苯基-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十三-13-酰胺基)-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺；46。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1H-吲哚-5-甲酰胺；47。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺；48。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(1，3，4-噁二唑-2-基)苯甲酰胺；49。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-苯基噻唑-4-甲酰胺；50。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4′-(甲基磺酰基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；51。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4′-氟-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；52。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)吡嗪-2-甲酰胺；53。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)苯甲酰胺；54。
2S)-N1-(6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)-2-((S)-2-((S)-2-癸酰胺基-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)戊二酰胺；55。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-4-(甲硫基)-1-氧代丁-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；56。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；57)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；58。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；59。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；60。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-(((3R)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺；61。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；62。
N-((2S)-1-(((2S)-1-((2-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；63。
N-((2S)-1-(((2S)-1-((1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基甲酰基)环丙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；64。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；65。
N-((2S)-1-(((2S)-1-((1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基甲酰基)环丁基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；66。
N-((2S)-1-(((2S)-1-((1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；67。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；68。
N-((2S)-1-(((2R)-1-(((2R)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；69。
N-((2S)-1-(((2R)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；70。
N-((2S)-1-((2-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；71。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；72。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-4-(甲硫基)-1-氧代丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；73。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；74。
N-((5S，8S，11S)-17-氨基-8-苄基-11-甲基-6，9，12，17-四氧代-14-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)-2-硫杂-7，10，13-三氮杂十七-5-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；75。
N-((2R)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；76。
N-((1S)-2-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；77。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；78。
N-(2-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；79。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；80。
N-((5R，8S，11S)-17-氨基-8-苄基-11-甲基-6，9，12，17-四氧代-14-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)-2-硫杂-7，10，13-三氮杂十七-5-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；81。
N-((5R，8R，11S)-17-氨基-8-苄基-11-甲基-6，9，12，17-四氧代-14-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)-2-硫杂-7，10，13-三氮杂十七-5-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；82。
2-((S)-2-([1，1′-联苯基]-4-甲酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺；83。
N-((2S)-1-(((1S)-2-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；84。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-4-苯基丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；85。
N-((2S)-1-(((2R)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-4-苯基丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；86。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-(4-羟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；87。
甲酸3-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-(4-羟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)苯基)吡啶-1-鎓；88。
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；89。
N-(1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酰基)环戊基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；90。
N-(1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酰基)环丙基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺；91。
以上所列的化合物由数字(以粗体表示)识别。这些数字也是指具体的实例，在实例中以上所列化合物每个都进一步进行描述。如果本文针对本发明化合物所用的结构和名称之间存在差异，则以结构为准。
定义：
化学基团
如本文所用，术语“烷基”是指具有在指定范围内的多个碳原子的单价直链或支链饱和或不饱和脂族烃基。因此，例如，“C1-6烷基”(或“C1-C6烷基”)是指己基烷基和戊基烷基异构体以及正、异、仲和叔丁基、正和异丙基、乙基和甲基中的任一者。作为另一个实例，“C1-4烷基”是指正、异、仲和叔丁基、正和异丙基、乙基和甲基。作为另一个实例，“C1-3烷基”是指正丙基、异丙基、乙基和甲基。烷基包括不饱和脂族烃，包括炔烃(R-C≡C-R)；和/或烯烃(R-C＝C-R)。
术语“卤素”(或“卤代”)是指氟、氯、溴和碘(可选地称为氟、氯、溴和碘)。术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子已经被替换为卤素(即F、Cl、Br和/或I)的如上所定义的烷基。因此，例如，“C1-6卤代烷基”(或“C1-C6卤代烷基”)是指具有一个或多个卤素取代基的如上所定义的C1至C6直链或支链烷基。术语“氟烷基”具有类似的含义，不同的是卤素取代基被限定为氟。合适的氟烷基包括系列(CH2)0-4CF3(即，三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、3，3，3-三氟-正丙基等)。
术语“杂烷基”被赋予本领域中的通常含义，且是指其中一个或多个碳原子被替换为杂原子(例如，氧、氮、硫或其衍生物等)的如本文所述的烷基。杂烷基的实例包括但不限于，烷氧基、烷基取代的氨基、硫醇基如蛋氨酸侧基。多达两个杂原子可以是连续的。当一个前缀，如C2-6被用于指杂烷基，碳原子数(在本实例中为2-6)是指也包括所述杂原子。
术语“氨基烷基”是指其中一个或多个氢或碳原子已经被替换为氮或氨基衍生物的如上述所定义的烷基。因此，例如，“C1-6氨基烷基”(或“C1-C6氨基烷基”)是指具有一个或多个氨基衍生物(例如，NH、酰胺、双吖丙啶等)的如上所定义的C1至C6直链或支链烷基。
术语“硫代烷基”是指其中一个或多个氢或碳原子已经被替换为硫原子或硫醇衍生物的如上述所定义的烷基。因此，例如，“C1-6氨烷基”(或“C1-C6氨基烷基”)是指具有一个或多个硫原子或硫醇衍生物(例如，S、SH等)的如上所定义的C1至C6直链或支链烷基。
氨基烷基和硫代烷基是术语“杂烷基”或取代的烷基的特定实施例并且由其涵盖，此取决于杂原子取代碳原子或氢原子。
术语“环烷基”是指由任选地与另外的(1-3)脂族(环烷基)或芳族环体系稠合的饱和3-8元环组成的饱和脂环烃，每个另外的环由3-8元环组成。它包括但不限于环丙烷、环丁烷、环戊烷和环己烷。
术语“杂环基”是指(i)含有1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-至7-元饱和杂环，或(ii)为杂二环(例如，苯并环戊基)。本发明范围内的4-至7-元饱和杂环的实例包括，例如，氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、六氢嘧啶基、噻嗪烷基、噻氮杂环庚烷基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基和二噁烷基。本发明范围内的4-至7-元不饱和杂环的实例包括单不饱和的杂环，对应于在前面的句子中列出的饱和杂环其中一个单键被替换为双键(例如，碳-碳单键被替换为碳-碳双键)。
术语“C(O)”指羰基。术语“S(O)2”和“SO2”各自是指磺酰基。术语“S(O)”是指亚磺酰基。
术语“芳基”是指由任选地稠合有另外的(1-3)脂族(环烷基)或芳环体系的3-8元环组成的芳族(不饱和)化合物，每个另外的环由3-8元环组成。在一个具体的实施方案中，它是指苯基、苯并环戊基或萘基。特别感兴趣的芳基是苯基。术语“杂芳基”是指(i)含有1至3个独立选自N、O和S杂原子的3-、4-、5-或6-元杂芳族环，或者(ii)选自下列的杂二环：喹啉基、异喹啉基和喹喔啉基。合适的3-、4-、5-和6-元杂芳族环包括，例如，双吖丙啶基、吡啶基(也称为吡啶基)、吡咯基、二嗪(例如，吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基)、三嗪基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、三唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁三唑基、噻唑基、异噻唑和噻二唑。特别感兴趣的杂芳基为吡咯基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、喹啉基(或喹啉基)、异喹啉基(或异喹啉基)和喹喔啉基。合适的杂二环包括吲哚基。
如本文所用，且除非另有说明，否则术语“烷基”、“卤代烷基”、“氨基烷基”、“环烷基”、“杂环基”、“芳基”、“杂烷基”和“杂芳基”和指定其具体的实施方案的术语(例如，丁基、氟丙基、氨基丁基、环丙烷、吗啉、苯基、吡唑等)包括这些基团的取代的(即在卤代烷基和氨基烷基的情况下，分别地除了它们的卤素和氮取代基)和未取代的实施方案。因此，例如，术语“苯基”包括未取代的苯基以及氟苯基、羟苯基、甲基磺酰基苯基(或联苯基)、三氟甲基-双吖丙啶-苯基、异丙基-苯基、三氟羟基-苯基。类似地，术语吡唑包括未取代的吡唑以及甲基吡唑。所述一个或多个取代基可以是胺、卤素、羟基、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基(等)。
应理解，上面列出的具体的环不限制在可在本发明中使用的环。这些环仅仅是代表性的。
除非在特定情况下明确说明与此相反，否则本文所述的任何各种环状环和环系可被附连到化合物中在任何环原子的其余部分(即，任何碳原子或任何杂原子)，条件是稳定的化合物产生。
除非明确说明与此相反，否则本文引用的所有范围都包括在内。例如，被描述为含有“1至4个杂原子”的杂芳环指所述环可以含有1、2、3或4个杂原子。还应理解，本文引用的任何范围包括在其范围内所有在该范围内的子范围。因此，例如，被描述为包含“1至4个杂原子”的杂环旨在包括含有2至4个杂原子、3或4个杂原子、1至3个杂原子、2或3个杂原子、1或2个杂原子、1个杂原子、2个杂原子、3个杂原子和4个杂原子的杂环作为其方面。
作为另一实例，被描述为任选被“1至4个取代基”取代的芳基或杂芳基旨在包括任选地被1至4个取代基、2至4个取代基、3至4个取代基、4个取代基、1至3个取代基、2至3个取代基、3个取代基、1至2个取代基、2个取代基和1个取代基取代的芳基或杂芳基。
当任何变量(例如，XA或XB)在任何组成或式I或在描绘和描述本发明的化合物的任何其它通式中出现多于一次时，其每次出现时的定义独立于在每次其它出现时其定义。此外，取代基和/或变量的组合是允许的，只要这样的组合产生稳定的化合物。
除非明确说明与此相反，否则由取代基为名的取代允许在环(例如，环烷基、杂环基、芳基或杂芳基)的任何原子，条件为这种环取代是化学上允许并产生稳定的化合物。
盐、酯、水合物和溶剂合物
本发明的化合物包括药理学上可接受的盐和其酯衍生物以及其水合物或溶剂合物和所参考化合物的所有立体异构形式。本发明化合物和其药理学上可接受的酯可以在必要时形成药理学上可接受的盐。
盐
术语“药理学上可接受的盐”是指一种本发明化合物可转化的盐，其保留母体化合物的期望生物活性并且不赋予任何不希望的毒理学效应(见例如，Berge，S.M.等人，1977J.Pharm.Sci.66：1-19)。这类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括那些衍生自无毒无机酸，如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等，以及无毒有机酸如脂族单和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香酸、脂族和芳族磺酸等的盐。碱加成盐包括那些衍生自碱土金属，如钠、钾、镁、钙等，以及自无毒有机胺，如N，N′-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等的盐。这样的盐的优选实例包括碱金属盐，如钠盐、钾盐、锂盐、镁盐或钙盐；碱土金属盐如钙盐和镁盐；金属盐，如铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐和钴盐；胺盐如无机盐，包括铵盐；有机盐或铵盐，如叔辛胺盐、二苄胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、N，N′-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基苯乙胺盐、哌嗪盐、四甲基铵盐和三(羟甲基)氨基甲烷盐；无机酸盐如氢卤酸盐如氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐或氢碘酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐或磷酸盐；低碳数烷基磺酸盐如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐或乙磺酸盐；芳基磺酸盐如苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐等，其对活的有机体是无毒的；有机酸盐如乙酸盐、苹果酸盐、己二酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、衣康酸盐、乳酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、磺酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、十一烷酸盐、酒石酸盐、草酸盐或马来酸盐；和氨基酸盐，如甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、组氨酸盐、谷氨酸盐或天冬氨酸盐。此外，碱性含氮基团可以用诸如以下的试剂季铵化：低碳数烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐、其中包括二甲基、二乙基和二丁基硫酸盐；和二戊基硫酸盐、长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，包括苄基和苯乙基溴化物及其它。关于进一步的实例，参见S.M.Berge等人，″PharmaceuticalSalts，″J.Pharm.Sci.1977，66，1-19。这类盐可以很容易地通过本领域技术人员使用标准技术形成。
与存在于本发明的化合物中的酸性基团形成的盐的优选实例包括金属盐如碱金属盐(例如，钠盐、钾盐和锂盐)、碱土金属盐(例如，钙盐和镁盐)、铝盐和铁盐；胺盐如无机胺盐(例如，铵盐)和有机胺盐(例如，叔辛胺盐、二苄胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、N，N′-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基苯乙胺盐、哌嗪盐、四甲基铵盐和三(羟甲基)氨基甲烷盐；和氨基酸盐如甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐和天冬氨酸盐。
所有的盐意欲成为本发明范围内的药学上可接受的盐且所有的盐被认为等同于用于本发明目的的游离形式的相应化合物。
酯
生理学上/药学上可接受的酯也可适用作活性药剂。术语“药学上可接受的酯”包括本发明化合物的酯，其中羟基(例如在羧酸)已经被转化成相应的酯并且可以作为前药，当前药吸收到温血动物的血液中，可以以释放药物形式并允许药物得到改进的治疗效果的这样的方式裂解。这些酯可以与无机或有机酸如硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等形成，它们对活的生物体是无毒的。其它实例是与脂族或芳族酸如乙酸或与脂族醇(例如，烷基酯，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或戊基酯等)或芳族醇(例如，苄酯)的酯。
酯可以从它们相应的酸或盐通过本领域技术人员公知的各种方法，如，例如，通过首先转化酸为酰氯然后使酰氯与合适的醇制备。其它合适的用于制备酯的方法是在Kemp和Vellaccio，1980中描述。
当本发明的酯具有碱性基团如氨基，所述化合物可以通过与酸反应转化为盐，并在酯具有酸性基团如磺基的情况下，所述化合物可以通过将其与碱反应而转化为盐。本发明化合物包括这样的盐。
本发明的化合物的盐和酯可以由公知的方法通过采用合适的起始原料或中间体化合物(其是容易得到的和/或在本文中描述的)制备。
通常，本发明化合物的期望的盐可以通过在本领域中公知的最终分离和纯化化合物期间在原位制备。例如，所期望的盐可通过使分别在其游离碱或游离酸形式的纯化化合物分别与合适的有机或无机酸，或合适的有机或无机碱反应，并分离由此形成的盐来制备。在碱性化合物的情况下，例如，在合适的溶剂如THF中，将游离碱用无水HCl处理，和该盐分离为盐酸盐。在酸性化合物的情况下，这些盐可以通过，例如，在合适的溶剂如乙醚中由无水氨处理游离酸和随后分离铵盐。这些方法是常规的，且将是本领域技术人员容易显而易见的。
本发明的化合物可以通过各种常规程序，包括使适当酐、羧酸或酰氯与本发明化合物的醇基反应来酯化。使合适的酸酐与醇在碱的存在下反应以促进酰化如1，8-双[二甲基氨基]萘或N，N-二甲氨基吡啶。或者，合适的羧酸可与醇在脱水剂如二环己基碳二亚胺、1-[3-二甲基氨基丙基]-3-乙基碳二亚胺或其它用来通过去除水以驱动反应的水可溶脱水剂和任选的酰化催化剂存在下反应。酯化也可以通过使用适当的羧酸在三氟乙酸酐和任选的吡啶存在下进行，或在N，N-羰基二咪唑与吡啶存在下进行。酰氯与醇反应可以用酰化催化剂如4-DMAP或吡啶进行。
本领域技术人员将容易知道如何成功地进行这些以及醇的醚化的其它已知方法。
前药和溶剂合物
本发明化合物的前药和溶剂合物也设想在本文中。前药的讨论是在T.Higuchi和V.Stella，A.C.S.论文集丛书的Pro-drugsasNovelDeliverySystems(1987)14和在BioreversibleCarriersinDrugDesign，(1987)EdwardB.Roche编辑，美国医药协会和Pergamon出版社中提供。术语“前药”是指在体内转化以产生本发明化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的化合物(例如，药物前体)。该转化可通过各种机制(例如，通过代谢或化学过程)，诸如例如，通过在血液中水解发生。使用前药的讨论是提供在T.Higuchi和W.Stella，“Pro-drugsasNovelDeliverySystems，”A.C.S.论文集丛书的14卷和在BioreversibleCarriersinDrugDesign，编辑EdwardB.Roche，美国医药协会和Pergamon出版社，1987中。
例如，如果本发明化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物含有羧酸官能团，则前药可包括通过用如下基团置换酸基团的氢原子形成的酯：诸如例如，(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷酰氧基甲基、具有4至9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基、具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基、具有3至6个碳原子的烷氧基羰氧基甲基、具有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰氧基)乙基、具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰氧基)乙基、具有3至9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基、具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞基、4-巴豆酸內酯基、γ-丁内酯-4-基、二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(如β-二甲氨基乙基)、氨基甲酰基-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨基甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶基-、吡咯烷基-或吗啉并(C2-C3)烷基等。
类似地，如果本发明化合物含有醇官能团，则前药可以通过用以下基团置换醇基团的氢原子形成：诸如例如，(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)链烷烃基、芳基酰基和α-氨酰基或α-氨酰基-α氨基酰基，其中每个α-氨酰基独立地选自天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(由除去碳水化合物半缩醛形式的羟基产生的自由基)等。
如果本发明化合物并入胺官能团，则前药可以通过用以下基团置换胺基团中的氢原子形成：诸如，例如，R-羰基，RO-羰基，NRR′-羰基，其中R和R′各自独立地为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苄基，或R-羰基是天然的α氨酰基或天然α-氨酰基、-C(OH)C(O)OY1，其中Y1为H、(C1-C6)烷基或苄基、-C(OY2)Y3，其中Y2是(C1-C4)烷基且Y3是(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷基、氨基(C1-C4)烷基或单-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基烷基、-C(Y4)Y5，其中Y4是H或甲基且Y5是单-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基吗啉并、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基等。
本发明的一种或多种化合物可以以未溶剂化以及与药学上可接受的溶剂例如水、乙醇等溶剂化形式存在，和其意图是，本发明涵盖这两种溶剂化和未溶剂化形式。“溶剂合物”是指本发明化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。此物理缔合涉及不同程度的离子和共价键合，包括氢键合。在某些情况中，溶剂合物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子是并入到结晶固体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液相和可分离的溶剂合物。合适的溶剂合物的非限制性实例包括乙醇化物物、甲醇化物等。“水合物”是其中溶剂分子为H2O的溶剂合物。
溶剂合物的制备通常是已知的。因此，例如，M.Caira等人，J.PharmaceuticalSci.，93(3)，601-611(2004)描述抗真菌剂氟康唑在乙酸乙酯中溶剂合物，以及从水的制备。溶剂合物、半溶剂合物水合物等的类似制备由E.C.vanTonder等人，AAPSPharmSciTech.，5(1)，文章12(2004)；和A.L.Bingham等人，Chem.Commun.，603-604(2001)描述。典型的非限制性方法涉及在所需量的所需溶剂(有机物或水或其混合物)中在高于环境温度下溶解本发明化合物，并以足以形成晶体的速率冷却溶液，然后通过标准方法分离。分析技术，诸如，例如红外光谱，表明在作为溶剂合物(或水合物)的晶体中存在溶剂(或水)。
水合物
如本文所用，术语“药学上可接受的水合物”是指与一个或多个水分子结晶以形成水合形式的本发明化合物。
立体异构体、非对映体、对映体、外消旋体、互变异构体
本发明化合物具有不对称碳原子/手性中心，作为取代基和取代基模式的选择的结果，可以包含另外的手性中心，且因此可作为立体异构体混合物(外消旋物)，或作为单独的非对映体或对映体。本发明包括所有这些形式。
非对映体(有时称为非对映异构体)是非对映体的立体异构体。当化合物的两种或多种立体异构体具有在一个或多个(但不是全部)等效(相关)立体中心的不同构型，并且不互为镜像时非对映化发生。当两个非对映异构体彼此仅在一个立体中心不同时，它们是差向异构体。每个立构中心产生了两种不同构型，从而产生两种不同的立体异构体。
非对映体与对映体的不同之处在于，后者是在所有立构中心不同的立体异构体对，因此彼此为镜像。具有超过一个立构中心的化合物的对映体也是该化合物的非其镜像的其它立体异构体的非对映体。非对映体具有不同的物理性质和不同反应性，不像对映体。本发明的非对映体包括例如番茄碱和3α-羟基番茄碱。
在一定程度上，取代基和取代基型态提供本发明化合物中互变异构体(例如，酮-烯醇互变异构体)的存在，这些化合物的所有互变异构形式，不论是单独存在或以混合物，都在本发明的范围内。杂芳环的一个碳原子上具有羟基取代基的本发明化合物被理解为包括其中只有羟基存在的化合物，其中只有互变异构酮形式(即，氧代取代基)存在的化合物和其中酮和烯醇形式都存在的化合物。
对于本说明书来说，“药学上可接受的互变异构体”是指本发明的任何化合物的任何互变异构形式。
对映体的纯化和本发明化合物的异构体混合物的分离可以通过本领域中已知的标准技术来完成。
“稳定”化合物是可被制备和分离的化合物，且其结构和性质保持或可以被导致基本保持不变持续一段时间足以允许出于本文所述目的使用化合物(例如，治疗或预防性施用至受试者)。本发明化合物不限于由式I涵盖的稳定的化合物。
制备本发明化合物的合成方法在以下通用程序、方案和实例中示出。起始原料是市售的或可以根据在本领域已知或本文所示的程序来制备。本发明化合物可通过以下所示的具体实例来说明。然而，这些具体实例并不被解释为形成被认为是本发明的唯一种类。这些实例进一步说明制备本发明化合物的细节。那些熟练的技术人员将容易理解，以下制备程序的条件和过程的已知变化可用于制备这些化合物。
所有的温度都是以摄氏度计。质谱(MS)通过电喷雾离子质谱法(ESI)在与Agilent1100TM系列HPLC仪器耦合的Agilent6120QuadrapoleTMMS上进行测量。NMR谱在针对1H为400MHz为和针对19F为376MHz下被记录在VarianMercury光谱仪上。
出于本说明书的目的，下列缩写具有所示含义：
AcOH＝乙酸
Alk＝烷基
Ar＝芳基
atm＝大气压
BINAP＝2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘
Boc＝叔丁氧基羰基
n-BuLi＝正丁基锂
Cbz＝羧基苄基
CH2Cl2＝二氯甲烷
DBU＝1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯
DIPEA＝N，N-二异丙基乙胺
DMAP＝4-(二甲基氨基)吡啶
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲基亚砜
ESI＝电喷雾电离
Et3N＝三乙胺
Et2O＝乙醚
EtOAc或EA＝乙酸乙酯
EtOH＝乙醇
h＝小时
H2＝氢气
HATU＝六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲
HCl＝盐酸
HPLC＝高压液相色谱
iPrOH＝2-丙醇
KF＝氟化钾
LC-MS＝液相色谱质谱法
LiOH＝氢氧化锂
MeCN＝乙腈
MeMgBr＝甲基溴化镁
MeOH＝甲醇
MeTHF＝2-甲基四氢呋喃
MgSO4＝硫酸镁
min＝分钟
MS＝质谱
MTBE＝甲基叔丁基醚
N2＝氮气
NaBH4＝硼氢化钠
NaHCO3＝碳酸氢钠
NaOH＝氢氧化钠
Na2SO4＝硫酸钠
NH3＝氨
NH4Cl＝氯化铵
NH4OH＝氢氧化铵
NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR＝核磁共振光谱
Moc＝甲氧基羰基
P＝压力
Pd/C＝炭载钯
PG＝保护基
Ph＝苯基
Pyr＝吡啶
rbf＝圆底烧瓶
Rf＝在硅胶上的滞留因子
rt＝室温
TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基
Ts＝甲苯-4-磺酰基
TFA＝三氟乙酸
TFAA＝三氟乙酸酐
TFA-NHS＝三氟乙酸N-羟基琥珀酰亚胺
THF＝四氢呋喃
TLC＝薄层色谱法
TMEDA＝N，N，N′，N′-四甲基乙二胺
T3P＝丙基膦酸酐
三氟乙酸N-羟基琥珀酰亚胺(TFA-NHS)的制备描述在以下文献中：Sohn，C.H.；Lee，J.E.；Sweredoski，M.J.；Graham，R.L.J.；Smith，G.T.；Hess，S.；Czerwieniec，G.；Loo，J.A.；Deshaies，R.J.；Beauchamp，J.L.J.Am.Chem.Soc.2012，134，2672-2680。
(S)-3-叔丁氧基羰基-4-(2-苄氧基羰基乙基)噁唑-5-酮的制备描述在以下文献中：Aurelio，L.；Brownlee，R.T.C.；Hughes，A.B.；Sleebs，B.E.Aust.J.Chem.2000，53，425-433。(R)-3-叔丁氧基羰基-4-(2-苄氧基羰基乙基)噁唑烷-5-酮也可以以类似的方式从N-Boc-D-谷氨酸5-苄酯开始制备。
药物组合物
在另一个方面，本发明提供了一种组合物，例如，药物组合物，含有与药学上可接受的载体和/或赋形剂一起配制的一种本发明化合物或其组合。
本发明的药物组合物也可施用在组合治疗中，即，与其它试剂组合。例如，组合治疗可包括至少一种其它降胆固醇剂。可以在组合治疗中使用的治疗剂的实例在下文中更详细地描述。
如本文所用，“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。所述载体应该是适于口服、静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。根据施用途径，活性化合物可以包衣在材料中，以保护免受可能灭活化合物的酸和其它自然条件的作用。
载体/赋形剂
本发明的药物组合物可以包括可药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、棓酸丙酯、α-生育酚等；和金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
合适的本发明药物组合物可以采用的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合适的混合物、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。适当的流动性可以例如通过使用包衣材料，如卵磷脂，在分散体的情况下通过保持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂来维持。
这些组合物还可含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。防止微生物的存在可以通过上述的灭菌程序，和通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等两者来确保。它也可能希望包括等渗剂，如糖、氯化钠等在组合物中。此外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包含延迟吸收的物质如单硬脂酸铝和明胶来实现。
药学上可接受的载体或赋形剂包括无菌水溶液或分散体和用于无菌注射溶液或分散体的临时制备的无菌粉末。用于药学活性物质的此类介质和药剂是本领域已知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则其在本发明药物组合物中的使用是预期的。补充的活性化合物也可以并入组合物。
治疗组合物通常在制造和储存的条件下必须是无菌和稳定的。组合物可以配制成溶液、微乳剂、脂质体或适合于高药物浓度的其它有序结构。载体可以是溶剂或分散介质，包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。适当的流动性可以例如，通过使用包衣如卵磷脂，在分散液的情况下通过保持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持。在许多情况下，人们可以包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化钠在组合物中。
可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延缓吸收的试剂，例如，单硬脂酸盐和明胶来实现。
无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性化合物与一种以上列举成分或其组合(如果需要)并入适当的溶剂中，接着无菌微量过滤来制备。一般地，分散体通过将活性化合物并入到含有基本分散介质和以上列举的所需其它成分的无菌媒剂来制备。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况中，制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其从先前无菌过滤溶液产生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
用于口服施用的药物制剂的实例包括内用的片剂(如未包衣片剂、糖包衣片剂、包衣片剂、肠溶包衣片剂和咀嚼片剂)、施用到口腔的片剂(如经颊制剂、舌下片剂、锭剂和粘合片剂)、粉剂、胶囊(如硬胶囊和软胶囊)、颗粒剂(如包衣颗粒剂、丸剂、锭剂、液体制剂或药用可接受的缓释药物制剂)。能够被口服给药的液体制剂的具体实例是内用的溶液、摇匀的混合物、悬浮液、乳剂、糖浆剂、干糖浆剂、酏剂、输液和汤和柠檬水。
可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将依赖于所治疗受试者和特定的给药模式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常将是产生治疗效果的组合物的量。通常，在百分之百上，该量的范围从约0.01％至约99％的活性成分，约0.1％至约70％或从约1％约30％的活性成分与药学上可接受的载体组合。
剂量和给药方案
调节剂量方案，以提供最佳的期望反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次推注，几个分剂量可以随时间施用或剂量可以如治疗情况的紧急程度所示按比例减少或增加。特别有利的是配制成剂量单位形式的肠胃外组合物以易于施用和给药均匀性。此处使用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于待治疗的受试者的物理上离散的单位；每个单位含有计算与所需的药物载体组合产生期望的治疗效果的预定量的活性化合物。本发明剂量单位形式的规格是由以下决定且直接依赖于以下：活性化合物的独特特性和要实现的特定治疗效果和配制用于治疗个体敏感性的此种活性化合物的领域中固有的局限。
对于所述化合物的施用，剂量范围从约0.0001至100mg/kg，更通常为0.01至5mg/kg宿主体重。例如，剂量可以是0.3mg/kg体重、1mg/kg的体重、3mg/kg的体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内。示例性的治疗方案需要每天一次、每周、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3个月一次或每3至6个月一次施用。
在一些方法中，具有不同活性的两种或多种化合物同时施用，在这种情况下施用的每种化合物的剂量落入所示范围内。所述化合物通常多次施用。单剂量之间的间隔可以是，例如，每周、每月、每三个月或每年。间隔也可以是不规则的，如通过测量在患者中化合物的血液水平所指示。在一些方法中，调整剂量以达到约1-1000μg/ml和在一些方法中约25-300μg/ml的化合物的血浆浓度。
或者，化合物可以作为持续释放制剂施用，在这种情况下，较不频繁的施用是必需的。剂量和频率取决于化合物在患者中的半衰期而变。施用的剂量和频率可以根据治疗是预防性的还是治疗性而改变。在预防性应用中，相对低的剂量以相对不频繁的间隔施用很长一段时间。一些患者余生继续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要相对高的剂量以相对短的间隔，直到疾病的进展减轻或停止，或直至患者显示疾病症状的部分或完全改善。此后，可对患者施用预防性方案。
在本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，以便获得活性成分的量，其可有效地达到特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应(例如，降低的血浆LDL/胆固醇水平)，而不对患者有毒。选择的剂量水平将取决于多种药物动力学因素，包括使用的本发明的特定组合物中的活性，或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、使用的特定化合物的排泄的速率、治疗的持续时间、与所采用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料、所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和之前的医疗史和在医学领域众所周知的类似因素。
本发明化合物的“治疗上有效量”或“有效量”或“治疗有效剂量”可以导致在受试者中降低LDL-C的水平、至少一种疾病症状的严重程度的降低(例如，血浆LDL-胆固醇的减少，或LDL-胆固醇相关病症的症状减少)、增加了无疾病症状期的频率和持续时间或预防由于受试者的疾病痛苦而致的受损或失能。
施用途径
本发明的组合物可通过使用一个或多个本领域已知的各种方法，一个或多个施用途径来施用。如将被熟练的技术人员所了解，施用途径和/或模式将根据所期望的结果而变化。本发明化合物的施用途径包括口服、静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、脊髓或其它肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。本文所使用的短语“肠胃外施用”是指除肠和局部施用以外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于，静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。或者，本发明的化合物可以通过非注射途径给药，如局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部给药。
所述活性化合物可以用将保护化合物免于快速释放的载体，如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂和微囊化递送系统来制备。可以使用可生物降解的，生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多制备此类制剂的方法是专利或一般为本领域技术人员所熟知。参见，例如，SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems，J.R.Robinson编辑，MarcelDekker，Inc.，纽约，1978。治疗组合物可以用本领域中已知的医疗装置给药。在某些实施方案中，本发明化合物可以配制以确保在体内适当分布。例如，血-脑屏障(BBB)排除许多高度亲水的化合物。为了确保本发明的治疗化合物穿过BBB(如果希望)，可以将它们配制在例如脂质体中。脂质体可包含选择性输送到特定的细胞、组织或器官的一个或多个部分，从而增强靶向药物递送(见，例如，V.V.Ranade，1989J.Clin.Pharmacol.29：685)。在一个实施方案中，本发明化合物可以配制为待递送到肝脏(即，肝细胞)。
化合物的功能表征
本发明化合物的功能特性可在体外和体内进行测试。例如，可测试化合物抑制PCSK9蛋白水解活性、对LDLR的PCSK9依赖性效应(例如，LDL-C的LDLR介导的摄取)、PCSK9依赖性LDLR降解(包括PCSK9到LDLR的相互作用)和降低体内LDL-C的能力。
结合LDLR的PCSK9可以通过表面等离子共振(SPR)(使用)，通过固定LDLR到固体支撑并检测结合LDLR的可溶PCSK9而检测。或者，可固定PCSK9，并且可检测到LDLR结合。PCSK-9/LDLR结合也可以通过ELISA(例如，通过检测PCSK9结合固定LDLR)，通过荧光共振能量转移(FRET)，或噬菌体展示进行分析。为了进行FRET，可以检测到在溶液中荧光团标记的结合LDLR的PCSK9(参见，例如，美国专利号5,631,169)。结合LDLR的PCSK9已经通过免疫共沉淀检测(Lagace等人，2006J.Clin.Inv.116(11)：2995-3005)。例如，为了检查PCSK9-LDLR以这种方式结合，将HepG2细胞在固醇耗尽的培养基中培养18小时。在0.1mM氯喹存在下，将纯化的PCSK9添加到培养基，将细胞温育1小时。细胞在温和的清洁剂(1％洋地黄，重量/体积)裂解。PCSK9或LDLR是从细胞裂解物免疫沉淀出，通过SDS-PAGE分离，且进行免疫印迹来分别检测免疫共沉淀LDLR或PCSK9的存在(Lagace等人，2006，同上)。
这些测定法可以用以较高亲和力结合LDLR的PCSK9的突变体形式(例如，hPCSK9D374Y，Lagace等人，2006，同上)进行。肝细胞在细胞表面上表达LDLR。加入纯化的PCSK9到培养的肝细胞(例如，HepG2细胞、ATCCHB-8065、HuH7细胞、原代人或小鼠肝细胞)产生LDLR表达以剂量和时间依赖性方式降低(Lagace等人，2006同上)。可以测试本发明化合物增加肝细胞中LDLR水平的能力。例如，将HepG2细胞在固醇耗尽的培养基(补充有100U/ml青霉素、100μg/ml硫酸链霉素和1g/l葡萄糖，5％(体积/体积)新生牛脂蛋白缺乏的血清(NCLPDS)、10μM康帕丁钠和50μM甲羟戊酸钠的DMEM)培养18小时以诱导LDLR表达。将纯化的PCSK9(5μg/ml)加入到培养基中。测定在加入PCSK9后的0、0.5、1、2和4小时收获的细胞的LDLR水平(Lagace等人，2006，同上)。LDLR水平可通过流动细胞术、FRET、免疫印迹或其它手段来确定。由细胞(例如，HepG2细胞、HuH7细胞)的LDL-C的摄取可以通过使用荧光标记的LDL-C、DiI-LDL(3，3′-二-十八烷基吲哚羰基青色素低密度脂蛋白)来测量，如由Stephan和Yurachek(1993，J.LipidRes.34：325-330)描述。简言之，将细胞在37℃具有DiI-LDL(20-100μg蛋白质/ml)的培养基温育2小时。洗涤细胞，裂解，并使用分光光度计定量内化的DiI-LDL的浓度。LDL-C的摄取可以在与PCSK9抑制化合物接触的细胞中来测定(其中DiI-LDL存在于细胞培养物时期的之前和/或期间)。
在肝中过度表达人类PCSK9的转基因小鼠相对非转基因小鼠增加血浆LDL-C的水平(Lagace等人，2006同上)。另请参见Maxwell和Breslow，2004Proc.Natl.Acad.Sci.USA，101：7100，其描述在小鼠使用腺病毒载体的PCSK9过度表达。PCSK9-/-小鼠已经产生(Rashid等人，2005Proc.Natl.Acad.Sci.102(5)：5374-5379)。这些小鼠可以被遗传修饰以表达小鼠或人类PCSK9转基因。化合物可以以任何这些模型，或在未遗传修饰的动物中进行测试清除或降低总胆固醇和/或LDL-C的能力。
LDL从血浆清除的动力学可通过注入动物[125I]-标记的LDL，在注射后0、5、10、15和30分钟获得血液样品，和定量样品中的[125I]-LDL来确定(Rashid等人，2005同上)。PCSK9-/-小鼠的LDL清除率相对于野生型小鼠增加(Rashid等人，2005同上)。施用化合物的动物中增加的LDL清除表明该试剂抑制体内PCSK9活性。
响应于与化合物处理降低总血浆胆固醇、血浆甘油三酯和/或LDL-C指示针对PCKS9活性的治疗功效。胆固醇和血脂谱可以通过比色、气-液相色谱或使用市售试剂盒的酶方法来确定。
确定PCSK9活性的方法/测定法描述如下。本文所用的术语“PCSK9活性”和“PCSK9功能”是指可检测的(直接或间接)可归因于PCSK9的酶、生物化学或细胞活性。不局限于此，这些活性包括PCSK9对降低在细胞表面LDLR的水平，对降低血浆LDL-C的效应和/或PCSK9蛋白酶活性本身(例如，PCSK9分泌)。
PCSK9分泌和加工的体外分析。
分泌和/或前PCSK9至PCSK9加工是使用ELISA测定法或使用通过Western印迹测量在细胞和培养基中的PCSK9的生物合成方法进行测试。响应于化合物的存在PCSK9分泌下降指示，该化合物抑制PCSK9活性。对于统计显著性，每个实验一式三份进行。进行化合物的“剂量依赖性”反应。
PCSK9依赖性LDLR降解的体外分析。
还测试化合物由PCSK9对小鼠或人肝细胞系如HepG2或HuH7抑制LDLR增强的降解的能力。该测定法是由新增野生型(WT)、突变体或嵌合PCSK9，要么在转染后或直接在存在或不存在所测试化合物下的培养上清液。进行化合物的“剂量依赖性”反应。对于统计显著性，每个“剂量-反应”实验针对4至6个不同剂量一式两份或一式三份进行。
PCSK9活性的抑制是通过LDLR蛋白表达增加证明和/或在细胞表面，由以下证明：
·对于总LDLR，细胞裂解物的Western印迹分析；
·对于LDLR，细胞表面的FACS分析；
·荧光DiI-LDL并入，监测LDLR的细胞表面的活性。
Dil-LDL荧光摄取试验测定法包括经由LDLR内化荧光测定DiI-LDL细胞并入(细胞表面LDLR活性的量度)。将细胞温育在不同剂量的试验化合物的存在或不存在下的96孔格式中2小时，然后加入DiI-LDL，再温育2小时。PCSK9活性的抑制是通过DiI-LDL荧光的增加来检测。
a.WTPCSK9。该测定法包括新增野生型(WT)PCSK9，或者作为从转染的细胞的条件培养基或纯化，并在所测试化合物的存在或不存在下添加到培养物上清液。常规选择用于细胞外添加PCSK9的剂量为1ug/ml。
b.突变体PCSK9(功能增益)。为了进一步表征测试化合物是否能抑制功能突变的增益的功能，将所述细胞用纯化的突变体蛋白，在存在或不存在不同剂量的试验化合物下培养。纯化的PCSK9突变体为PCSK9-D374Y，例如(表现出对LDLR高～25倍的亲和力)或S127R(显示PCSK9的增加稳定性)。常规选择用于细胞外加入PCSK9和其功能增益天然突变体D374Y的剂量为1μg/ml和0.2μg/ml。类似使用其它PCSK9突变体。该测定法也可以使用从转染功能增益PCSK9突变体的细胞收获的培养基中进行。
c.嵌合PCSK9。用于测量试验化合物对PCSK9细胞外途径活性的的活性，测试融合PCSK9与细胞表面血管紧张素转化酶2的跨膜和胞质结构域的嵌合蛋白质(PCSK9-ACE2)。或者，融合PCSK9与Lamp-1(其直接通信蛋白质到胞内体/溶酶体)的跨膜和胞质结构域的嵌合蛋白(PCSK9-Lamp1)被测试用于测量试验化合物对PCSK9细胞内途径活性的活性。表达嵌合PCSK9-ACE2或PCSK9-Lamp1的稳定细胞是可用的且在存在或不存在不同剂量的试验化合物下培养。嵌合蛋白还包括具有V5标签的PCSK9。
d.原代人肝细胞。对小鼠和人原代肝细胞测试所述PCSK9抑制化合物以测量其对细胞表面LDLR的效应。使用小鼠原代肝细胞的优点是，它还测量在野生型或分别表达或缺乏PCSK9的基因敲除小鼠的背景下化合物的特异性。也出于相似药物特异性目的使用不再内源性表达PCSK9的HepG2和HuH7细胞(例如，在shRNA敲低下)。
PCSK9包含在从转染的细胞的条件培养基中。人野生型PCSK9(PCSK9-WT)和功能增益(PCSK9-D374Y)蛋白质是由HEK293细胞或Huh7细胞的过度表达产生。简言之，HEK293或Huh7细胞系生长于有10％胎牛血清(Invitrogen)的杜氏改良依格培养基，并在37℃在5％CO2下保持。根据制造商的协议，将HEK293细胞用jetPRIMETM转染(Polyplus转染)，且将Huh7细胞用LipofectamineTM2000(Invitrogen)转染。转染后二十四小时，将细胞洗涤并温育在无血清培养基。含有分泌人类PCSK9-D374Y或PCSK9-WT蛋白质的条件培养基在24小时后收集。在条件培养基中的PCSK9蛋白的水平通过酶联免疫吸附试验(ELISA)定量，如先前所述(DubucG、TremblayM、ParéG、JacquesH、HamelinJ、BenjannetS、BouletL、GenestJ、BernierL、SeidahNG、DavignonJ.2010.AnewmethodformeasurementoftotalplasmaPCSK9：clinicalapplicationsJLipidRes.51：140-149.)。
稳定表送PCSK9的人类HepG2细胞。使用FugeneTMHD转染试剂(Roche)，使人类HepG2细胞(ATCC，HB-8065)转染质粒构建体(在C末端标记V5的人类PCSK9)。即，在在35mm的培养皿中，使用HepG2细胞的FugeneTMHD优化协议(对于7ul的FugeneTMHD，2ug的DNA，按照制造商的说明)转染HepG2细胞。转染后72小时，将细胞胰蛋白酶化，并转移到含以下选择培养基的100mm培养皿：DMEM(高萄萄糖+丙酮酸钠)(Wisent)/10％FBS和600ug/ml的G418(Wisent)。10天的选择后，获得表达目的基因的细胞池。另请参见Seidah，NG、Benjannet，S、Wickham，L、Marcinkiewicz，J、Jasmin，SB、Stifani，S、Baska，A、Prat，A和Chretien，M.Thesecretoryproproteinconvertaseneuralapoptosis-regulatedconvertase1(NARC-1)：liverregenerationandneuronaldifferentiation.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A，100：928-933，2003；Benjannet，S.、Rhainds，D.、Essalmani，R.、Mayne，J.、Wickham，L.、Jin，W.、Asselin，M.C.、Hamelin，J.、varret，M.、Allard，D.、Trillard，M.、Abifadel，M.、Tebon，A.、Attie，A.D.、Rader，D.J.、Boileau，C.、Brissette，L.、Chretien，M.、Prat，A.和Seidah，N.G.NARC-1/PCSK9anditsnaturalmutants：zymogencleavageandeffectsonthelowdensitylipoprotein(LDL)receptorandLDLcholesterol.J.Biol.Chem.，279：48865-48875，2004；以及Benjannet，S.、Rhainds，D.、Hamelin，J.、Nassoury，N.和Seidah，N.G.TheproproteinconvertasePCSK9isinactivatedbyfurinand/orPC5/6A：Functionalconsequencesofnaturalmutationsandpost-translationalmodifications.J.Biol.Chem.，281：30561-30572，2006。
PCSK9分泌测定：通过ELISA检测分泌的PCSK9。在12孔板(GreinerBioOneTM)中，将稳定表达PCSK9(+V5)的HepG2细胞以1×106个/孔的密度接种在完全培养基中，并在37℃下温育20小时。细胞用2ml/孔的D-PBS(+钙+镁)(Wisent)漂洗一次，随后加入含有以各种浓度(11、33、100μM)的抑制化合物或DMSO对照(0.4％最终)的0.5ml/孔温育培养基(+0.07％BSA)中和隔夜(24小时)培养。收集24小时的条件培养基，在130×g下离心5分钟以除去细胞碎片，将除去的上清液通过ELISA进行PCSK9定量(100μl的1∶30稀释)。将细胞用冰冷的D-PBS(+钙+镁)(Wisent)洗涤一次，然后用含有蛋白酶抑制剂混合物(RocheAppliedScience)的250ul/孔的放射免疫沉淀测定缓冲液(RIPA)(50mMTris-HCl，pH7.8，150mMNaCl，1％NonidentP-40，0.5％脱氧胆酸钠，0.1％SDS)在冰上裂解30分钟，和在11,300×g离心细胞团5分钟。除去上清液用于通过ELISA量化细胞PCSK9(1∶20稀释的100μl)和通过Bio-RadTMDC蛋白测定(Bio-Rad)(一式两份，4μl细胞裂解物)进行总蛋白质测定(DubucG、TremblayM、ParéG、JacquesH、HamelinJ、BenjannetS、BouletL、GenestJ、BernierL、SeidahNG、DavignonJ.2010.AnewmethodformeasurementoftotalplasmaPCSK9：clinicalapplicationsJLipidRes.51：140-149)。测定培养基(M)相对细胞(C)的PCSK9浓度的比例并降低M/C＞30％的化合物被认为是活性的。
通过Western印迹检测。在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤细胞3次，并在补充有1×完全蛋白酶抑制剂混合物(RocheAppliedScience)的完全RIPA缓冲液(50mM的Tris/HCl，pH8.0，1％(体积/体积)的NonidetP40，0.5％脱氧胆酸钠，150mM的NaCl和0.1％(体积/体积)SDS)中裂解。蛋白质由8％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并印迹在聚偏二氟乙烯(PVDF，PerkinElmer)膜(GEHealthcare)上，所述膜在含有5％脱脂奶粉的TBS-T(50mM的Tris-HCl，pH7.5，150mMNaCl，0.1％吐温-20)阻断1小时。然后在5％脱脂牛奶与多克隆hPCSK9抗体(1∶2500)、人LDLR抗体(1∶1000，R&DSystems)或兔β-肌动蛋白抗体(1∶2500，Sigma)任一者中培养膜3小时。合适的辣根过氧化物酶共轭的二级抗体(1∶10,000，Sigma)被用于用ECL加试剂盒(GEHealthcare)检测增强的化学发光。
荧光激活细胞分选(FACS)定量细胞表面LDLR水平。在37℃下，在存在或不存在添加化合物下，用各种PCSK9构建体培养HuH7细胞4小时或18小时，然后用含0.5％牛血清白蛋白(Sigma)和1g/l葡萄糖的无钙/镁的杜氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)(溶液A)洗涤3次。然后在37℃用500μl的1×VerseneTM溶液(Invitrogen)将细胞温育5分钟，和层叠在5ml溶液A上。然后将细胞以1000rpm离心5分钟并重新悬浮在含有1∶100针对人LDLR的单克隆LDLR抗体C7(mAb-C7，SantaCruzBiotechnology)的1ml溶液A中40分钟。将细胞用5ml溶液A洗涤一次，离心并在含有1∶250的AlexaFluor647驴抗小鼠(MolecularProbes)的1mlPBS中重新悬浮20分钟。洗涤细胞，并重新悬浮于300μl的0.2％碘化丙啶(PI)的PBS。然后通过FACS针对PI和AlexaFluor647两者使用FACSBDLSR(BDBiosciences)分析活细胞(PI阴性)。。
在人Huh7细胞中的LDLR的免疫荧光。将HepG2初始细胞铺于放置在24孔细胞培养板中的聚-L-赖氨酸涂覆(50ug/ml)的圆形显微镜盖玻片1.12mm厚度(Fisherbrand12CIR#1)。在DMEM完全培养基(10％FBS)进行接种，并在24小时后，将培养基换为含33.3μM不同抑制剂化合物的培养基(+0.07％BSA)中(300μl/孔)。将相当于抑制剂化合物体积的DMSO体积也稀释在含有0.07％BSA的培养基中且用作阴性对照。20小时温育期后，将细胞用PBS洗涤3次，再用3.7％的多聚甲醛固定10分钟。在非透的条件下进行人LDLR的免疫荧光(绿色标签)。用PBS另外洗涤3次后，将细胞用1％BSA阻断30分钟，接着在4℃下用一级抗体(在1％BSA中的1∶200山羊多克隆抗hLDLR，R&DSystems)温育过夜。在最后用PBS洗涤3次后，在室温下用Alexafluor标记的二级抗体培养1小时揭示抗原-抗体复合物并安装在ProLongGold抗淬灭试剂(MolecularProbes，Invitrogen)中。用共聚焦显微镜(ZeissLSM-710)进行免疫荧光分析。
PCSK9活性的DiI-LDL摄取细胞基测定法。将HepG2初始细胞和HEK293初始细胞以25,000个细胞/孔的密度，在完全培养基(DMEM高葡萄糖(+丙酮酸钠，对于HepG2细胞)(Wisent)+10％FBS)中，接种在96孔板(有透明底部的CellBind黑板(Corning；目录号3340))。20小时后，将细胞用无血清DMEM培养基(100μl/孔)洗涤30分钟，除去洗涤培养基，并用含有不同浓度的化合物(11、33、100μM)或DMSO对照(0.4％终)的100μl/孔温育培养基(DMEM高葡萄糖(+丙酮酸钠，对于HepG2)(Wisent)+0.07％BSA(Sigma-Aldrich))更换。每个条件制备一式三份。在37℃下培养6小时后，将Dil-LDL(BiomedicalTechnologies(目录号BT-904))以5μg/ml的最终浓度加入到细胞培养基(5μl)，并返回到组织培养箱的细胞再培养18个小时(总共用化合物培养24小时)。用冰冷的D-PBS(Wisent)洗涤2次后(200μl/孔)和吸清最后的洗涤，将板在SpectraMaxGeminiEMTM平板读数器(MolecularDevices)中进行扫描(底部读)。对于每个孔，将原始Dil-LDL摄取测定为在孔中3个不同点的9个读数的平均荧光强度(RFU)(激发：520nm/em：575nm，截止：550nm)。每个孔中的Dil-LDL摄取通过进行CyQuantTM细胞分析(Invitrogen；目录号C7026)对细胞总数校正。即，记录了Dil荧光后，将板在-80℃冷冻过夜。第二天，将板在室温下解冻，根据制造商的方案将细胞裂解，且细胞/孔的数目通过测量CyQuant绿色荧光染料结合至细胞核酸的荧光(RFU)(激发：485nm/em：538nm，截止：515nm)确定。对于每个条件，Dil-RFU除以CyQuant-RFU。校正的diI-LDL摄取报告为％DMSO对照并从一式三份孔获得。
PCSK9的转染、生物合成分析、免疫沉淀。用3×105HEK293细胞进行转染，使用EffecteneTM(Qiagen)和共0.5μgcDNA。或者，用总共4μgcDNA在LipofectamineTM2000(Invitrogen)中转染5×105HuH7或6×105HepG2细胞。转染后两天，对HEK293细胞进行洗涤，然后用任一250μCi/ml[35S]Met/Cys(PerkinElmerLifeSciences)温育不同的时间。将细胞在改性RIPA缓冲液(150mMNaCl，50mMTris-HCl，pH7.5)，1％的NonidetP-40，0.5％脱氧胆酸钠，0.1％SDS和蛋白酶抑制剂混合物(RocheAppliedScience)中裂解，在此之后，制备裂解物和培养基用于免疫沉淀。所使用的抗体是抗V5mAb(Invitrogen，1∶500)，和专有的兔抗PCSK931-454(A-03)。免疫沉淀物是通过SDS-PAGE在8％的Tricine凝胶上解析和放射自显影。这些实验至少重复三次。定量是通过使用ImageQuantTM版本5.2软件，在StormImagerTM(AmershamBiosciences)上进行。生物合成是一种敏感的方法，其允许对测试化合物是否影响内质网中前PCSK9至PCSK9活化，从而影响活性PCSK9络合其前片段到培养基中的分泌。工程化以内源性和稳定地表达PCSK9(例如PCSK9-V5)WT或突变变体的细胞用化合物培养且存在于培养基和细胞裂解物中的不同PCSK9形式是通过使用敏感人类PCSK9抗体的Western印迹进行分析。
MTT毒性测定。将过度表达hPCSK9(+V5)的HepG2稳定细胞以1×105个细胞/孔(100μl)的密度接种在完全DMEM(高葡萄糖+丙酮酸钠)(Wisent)+10％FBS培养基中的96孔板(GreinerBioOne)并温育20小时。用100ul/孔的无血清DMEM培养基洗涤细胞一次，然后加入含有各种浓度化合物(11、33、100μM)或DMSO对照(0.4％终浓度)的100μl/孔的DMEM(高葡萄糖+丙酮酸钠)(Wisent)+0.07％的BSA(Sigma-Aldrich)培养基，接着过夜(24小时)温育。MTT分析(Promega)由以下组成：按照制造商的说明，加入20μl/孔的MTT试剂和在37℃下温育45分钟。记录在490nm处的吸光度和校正由于非特异性吸光度(690nm)的背景。
使用化合物的方法
PCSK9已经涉及胆固醇体内平衡，因为它似乎在胆固醇生物合成或摄取中具有特定作用。在胆固醇喂养的大鼠的研究中，据报道，PCSK9以与参与胆固醇生物合成的其它基因类似的方式被下调(Maxwell等人，2003JLipidRes.44：2109-2119)。已经发现PCSK9表达由他汀类药物以归因于药物的降低胆固醇的效果的方式上调(Dubuc等人，2004，ArteriosclerThrombVascBiol.24：1454-1459)。PCSK9的腺病毒表达导致循环低密度脂蛋白(LDL)胆固醇(LDL-C)的时间依赖性增加(Benjannet等人，2004J.Biol.Chem.279：48865-48875)，和PCSK9基因缺失的小鼠具有增加的肝脏LDL受体(LDLR)的水平并更迅速从血浆清除LDL-C(Rashid等人，2005同上)。从瞬时转染PCSK9的HepG2细胞的培养基发现当转移到未转染的HepG2细胞时减少细胞表面LDLR和LDL-C的内化的量(Cameron等人，2006HumanMol.Genet.15：1551-1558)。此外，加入到HepG2细胞的培养基中的纯化的PCSK9以剂量和时间依赖性方式降低细胞表面LDLR数(Lagace等人，2006，同上)。
在基因PCSK9中的许多突变已与常染色体显性高胆固醇血症(ADH)相关联，一种遗传代谢病症，其特征是LDL-C颗粒在血浆中显著升高，可能导致过早的心血管功能衰竭(例如，Abifadel等人，2003Nat.Genetics34：154-156；Tirnms等人，2004Hum.Genetics114：349-353；Leren，2004Clin.Genet.65：419-422)。
PCSK9的增加的表达或上调与LDL-C的增加的血浆水平相关联，且抑制或缺乏PCSK9的表达与低LDL-C的血浆水平相关联。与PCSK9序列变异有关的LDL-C的较低水平赋予防止冠心病(Cohen等人，2006N.Engl.J.Med.354：1264-1272)。
本文所述的化合物具有体外和体内治疗用途。例如，这些分子可以施用于培养中的细胞，例如，体外或离体，或有需要的受试者，例如，体内，以治疗、预防或诊断多种与PCSK9活性/功能相关联的病症。
本发明化合物特别适合治疗患有以下或处于以下风险的人类患者：升高的胆固醇或与升高胆固醇(例如，LDL胆固醇)相关的病症，包括脂质紊乱(例如，高血脂、高胆固醇血症、黄瘤症)。本发明化合物也可以适用于治疗患有动脉粥样硬化性病症(例如，动脉粥样硬化)、冠状动脉病、心血管疾病、中风、局部缺血、周围血管疾病的人类患者和预防处于这些疾病危险的患者，例如，由于存在一种或多种危险因素(例如，高血压、吸烟、糖尿病、肥胖或同型半胱氨酸血症)。
本文所用的术语“LDL-胆固醇相关疾病或病症”是指一种部分由于血流中循环LDL胆固醇的高水平的疾病或病症。不被如此限制，LDL-胆固醇相关的疾病或病症包括高脂血症、高胆固醇血症、黄瘤症和心血管疾病如动脉粥样硬化性病症(例如，动脉粥样硬化)、冠状动脉疾病、中风、局部缺血和周围血管疾病。
如本文所用，术语“治疗(treat/treating/treatment)”和“预防(prevent/preventing/prevention)”是指引发期望生物反应，即分别为治疗和预防效果。根据本发明，治疗效果包括减少/降低的LDL-胆固醇相关疾病或病症的进展或相关联症状的严重程度或完全治愈LDL-胆固醇相关疾病或病症和/或相关症状。根据本发明，预防效果可包括在施用本发明化合物或组合物后，延迟或下降LDL-胆固醇相关疾病或病症和相关症状的发作、其进展，或严重程度(例如，减少血浆LDL/胆固醇水平)。在一个实施方案中，包含式(1)化合物的本发明化合物或组合物治疗或预防受试者的LDL-胆固醇相关疾病或病症。本文所述的方法、组合物制剂和用途适合于人类和动物(包括鸟类)，优选哺乳动物。
组合治疗
当化合物与另一种药物一起施用时，两者可以以任何顺序依序或同时施用(在同一组合物或在不同的组合物)。在一些实施方案中，将化合物施用给受试者，所述受试者也接受可用于治疗疾病/病状的第二药物的治疗(例如，第二降胆固醇剂)。可与本发明组合施用的活性成分的实例包括但不限于：改善患者的脂质谱的其它化合物，如(a)HMG-CoA还原酶抑制剂，(例如，他汀类，包括洛伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、普伐他汀、利伐他汀、阿托伐他汀、伊伐他汀、匹伐他汀、西伐他汀和其它他汀类)。他汀类通过阻断HMGCoA，胆固醇生物合成中的关键酶来抑制胆固醇合成；(b)胆固醇吸收抑制剂，如甾烷醇酯，β-谷甾醇，甾醇苷如替奎安；和氮杂环丁酮，如依泽替米贝；(c)胆固醇酯转运蛋白(CETP)抑制剂(例如，安塞曲匹或达塞曲匹)，现在是在临床试验中，以增加HDL和降低LDL胆固醇；(d)烟酸和相关化合物，如烟醇、烟酰胺和烟酸或其盐；(e)胆汁酸螯合剂(消胆胺，考来替泊(例如，考来替泊盐酸盐)，交联葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物，胆汁酸螯合剂中断胆汁酸从肠道到肝脏的再循环；(f)酰基CoA：胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂，如阿伐麦布和甲亚油酰胺，以及包括选择性ACAT-1和ACAT-2抑制剂和双重抑制剂；(g)PPARy激动剂，如吉非贝齐和非诺贝酸衍生物(贝特类)，包括氯贝丁酯、非诺贝特、苯扎贝特、环丙贝特和依托贝特；(h)微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)/ApoB分泌抑制剂；(i)抗氧化维生素，如维生素C和E和β胡萝卜素；(j)条拟甲状腺素；(k)LDL受体诱导剂；(1)血小板凝集抑制剂，例如糖蛋白IIb/IIIa的血纤维蛋白原受体拮抗剂和阿司匹林；(m)维生素B12(也称为氰钴胺素)；(n)叶酸或其药学上可接受的盐或酯，如钠盐和甲基葡糖胺盐；(o)FXR和LXR配体，包括抑制剂和激动剂；(p)提高ABCA1基因表达的试剂；(q)回肠胆汁酸转运体和长链α，ω-二羧酸。
组合治疗方案可以是相加，或者它可以产生协同结果(例如，降低胆固醇大于预期的两种药剂的组合使用)。在一些实施方案中，化合物和降胆固醇剂(例如，他汀类药物、贝特类、依泽替米贝或其组合)的组合治疗产生协同结果(例如胆固醇的协同减少)。在一些受试者中，这可以允许减少在降胆固醇剂的剂量以达到所需的胆固醇水平。化合物可以适用于不能耐受另一种降胆固醇剂治疗的受试者，或另一种降胆固醇剂治疗已经产生不充分的结果的受试者(例如，利用他汀类药物治疗经历不足LDL-C降低的受试者)。
本文中所描述的化合物可以施用给具有升高胆固醇(例如，LDL-胆固醇)的受试者(例如，具有200mg/dl或更高的总血浆胆固醇水平的人受试者，具有160mg/dl或更高的LDL-C水平的人受试者)。
试剂盒
本发明还涵盖包含至少一种本发明化合物的试剂盒。例如，所述试剂盒可包含一种或多种预防和/或治疗LDL-胆固醇相关疾病或病症的化合物。所述试剂盒可任选地包括一个或更多个对照样品和一个装置(例如，注射器等)。所述试剂盒可任选地包括一种或多种改善患者的脂质谱的其它活性成分。所述化合物或成分可以包装在合适的容器中。所述试剂盒可以进一步包括使用所述试剂盒的说明(例如，使用化合物以预防或治疗受试者的低密度脂质胆固醇相关疾病或病症)。
对本发明作了充分的描述，本发明进一步由以下实例和权利要求说明，实例和权利要求是说明性的，并不意味着是进一步限制性。本领域技术人员将认识到或能够使用不超过常规实验，以确定，许多本文中所描述的具体程序的等同方案。这些等同方案都是在本发明和权利要求书的范围内。引用在本申请中的所有参考文献的内容，包括授权的专利和公布的专利申请，通过引用并入本文。
实施本发明的方式
本发明是通过以下非限制性实例来进一步详细地说明。
中间体1
2-((S)-2-氨基-3-苯基丙酰胺基)丙酸(S)-甲基酯三氟乙酸盐
步骤1：在0℃下，历时10分钟将DIPEA(46mL，260mmol，3.5当量)滴加到N-Boc-L-苯基丙氨酸(20g，74mmol)、L-丙氨酸甲酯盐酸盐(12.6g，90.5mmol，1.2当量)和HATU(42.9g，113mmol，1.5当量)在DMF(250mL)中的搅拌溶液，接着温至室温。在搅拌18h后，将反应混合物倒入冷的NaHCO3饱和溶液并用1∶1EtOAc∶己烷(2x)萃取。用水和盐水洗涤合并的有机部分，干燥(MgSO4)、过滤并在减压下浓缩。在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液洗脱，纯化残余物。
步骤2：在0℃下，用TFA(32.5mL，422mmol，10当量)逐滴处理来自步骤1的产物(14.8g，42.2mmol)在CH2Cl2(141mL)中的搅拌溶液。随后将反应混合物升温至室温并再搅拌3h，然后浓缩至干。用Et2O磨碎残余物，且通过过滤来收集固体并在高真空下干燥，得到标题化合物。
中间体2
(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酸
步骤1：在0℃下，在搅拌下历时10分钟将可力丁(3.0mL，23mmol，2.5当量)滴加到N-甲氧基羰基-L-缬氨酸(1.60g，9.13mmol)，中间体1(3.49g，9.59mmol，1.05当量)和HATU(3.82g，10.0mmol，1.1当量)在DMF(30mL)中的搅拌溶液，在此温度下搅拌1h，然后在室温下搅拌18h。然后将混合物再冷却至0℃并缓慢添加NaHCO3饱和水溶液(50mL)，接着添加Et2O(50mL)。剧烈搅拌混合物20分钟，并通过过滤收集固体产物，用单独部分的水和Et2O洗涤，并在抽吸和高真空下干燥。
步骤2：将1MLiOH(10.65mL，10.65mmol，1.25当量)滴加到步骤1产物(3.47g，8.52mmol)在THF(40mL)和MeOH(20mL)的混合物中的搅拌悬浮液中，接着历时几个小时缓慢升温至室温。然后将容器内含物再次冷却至0℃，滴加另外的1MLiOH(3.4mL，3.4mmol，0.4当量)，且在室温下再搅拌混合物2h，然后在0℃下用1MHCl酸化至pH4，并用乙酸乙酯(2x)萃取。用水、半饱和盐水洗涤合并的有机部分，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩，得到无需进一步纯化即可使用的标题化合物。
中间体3
(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯
在-78℃下，将DIPEA(0.33mL，1.9mmol，3.0当量)添加到中间体2(0.25g，0.64mmol)和TFA-NHS(0.40g，1.9mmol，3.0当量)在DMF(4.5mL)中的溶液。然后将反应混合物缓慢升温至0℃并在此温度下搅拌2h，然后分配在水和EtOAc之间。分离层，并用EtOAc(2x)萃取水层。用半饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩，得到无需进一步纯化即可用于后续反应中的标题化合物。
中间体4
(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酸甲酯盐酸盐
步骤1：在0℃下，历时10分钟将DIPEA(6.7mL，38mmol，3.5当量)滴加到中间体1(4.0g，11mmol)、N-Boc-L-缬氨酸(2.62g，12.0mmol，1.1当量)和HATU(5.0g，13mmol，1.2当量)在DMF(35mL)中的搅拌溶液。在室温下搅拌过夜后，将容器内含物倒入冰(100mL)、饱和NaHCO3水溶液(100mL)和Et2O(200mL)的混合物中，并搅拌混合物30分钟。通过过滤收集固体产物，用水和1∶1Et2O/己烷洗涤并在抽吸和高真空下干燥。
步骤2：在0℃下，将TFA(7.3mL，95mmol，10当量)滴加到步骤1产物(4.28g，9.52mmol)在CH2Cl2(30mL)中的搅拌溶液。然后，将反应容器内含物保持在室温下持续5h，然后再浓缩至干。用Et2O磨碎残余物并通过过滤收集固体产物且在高真空下干燥。
步骤3：将4MHCl的二噁烷溶液(14mL，56mmol，5.9当量)添加到步骤2产物(4.40g，9.52mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌悬浮液，在室温下搅拌过夜。在将混合物浓缩至干后，添加Et2O并搅拌20分钟并通过过滤收集固体产物且在高真空下干燥，得到标题化合物。
中间体5
(4R/S)-4-叠氮基-4-[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]丁酸甲酯
反应顺序：
步骤1：将DIPEA(6.2mL，44mmol，1.1当量)和THF(40mL)置于用N2净化的火焰干燥的rbf。将温度冷却至-78℃且历时2分钟滴加n-BuLi(2.5M的己烷溶液，17mL，42mmol，1.0当量)到反应容器。然后，将反应混合物升温至0℃并搅拌5分钟，然后冷却回至-78℃。将4，4，5，5，-四甲基-2-苯基磺酰基甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环(10mL，42mmol)在THF(10mL)中的溶液滴加到反应混合物，接着在0℃下搅拌。在此温度1h后，将反应容器内含物再次冷却到-78℃且逐滴引入丙烯酸甲酯(7.6mL，85mmol，2.0当量)。在-78℃下6h后，通过倒入200mL10％柠檬酸水溶液淬灭反应。分离层，且用Et2O(3x)萃取水层。合并有机物，用半饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液洗脱的快速色谱分离产物。
步骤2：在50℃下，将步骤1产物(1.80g，5.35mmol)、碘代甲烷(6.6mL，110mmol，20当量)和乙腈(8mL)一起在N2净化的密封管中加热。在此温度下24h后，在减压下浓缩容器内含物。将残余物直接用于下一步骤中。
步骤3：将步骤2产物(1.89g，5.35mmol)溶解于DMF(11mL)中，并用叠氮化钠(0.70g，11mmol，2.0当量)处理，在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物分配在EtOAc和水之间。分离层，并用EtOAc(2x)萃取水层。用半饱和盐水(3x)洗涤合并的有机物，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。残余物直接用于下一步骤中。
步骤4：在室温下，搅拌步骤3产物(1.43g，5.35mmol)和(1S，2S，3R，5S)-(+)-蒎烷二醇(1.00g，5.90mmol，1.1当量)在THF(21mL)中的溶液18h。将反应容器内含物浓缩至干且残余物通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液洗脱的快速色谱纯化，得到标题化合物。
中间体6
(4R/S)-4-叠氮基-4-[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]丁酰胺
在室温下，在N2净化的密封管中，搅拌中间体5(0.30g，0.94mmol)与7.0MNH3的MeOH溶液(4mL，30mmol，30当量)42h。然后在减压下浓缩容器内含物，且残余物通过在硅胶上用渐增比例的MeOH的EtOAc溶液洗脱的快速色谱纯化，得到标题化合物。
中间体7a
4-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯甲酸
中间体7b
3-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯甲酸
反应顺序：
步骤1：在0℃下，以逐份的方式将Et3N(11mL，80mmol，1.5当量)和DMAP(0.65g，5.3mmol，0.1当量)添加到4-溴苄基醇(以制备7a)或3-溴苄基醇(以制备7b)(10.00g，53.46mmol)在CH2Cl2(60mL)中的搅拌溶液，接着添加叔丁基二甲基甲硅烷基氯(8.86g，58.8mmol，1.1当量)。然后将反应容器内含物升温至室温持续3h。添加水，并搅拌混合物直到所有固体已溶解。将混合物转移至分离漏斗并用CH2Cl2(3x)萃取。用NH4Cl饱和水溶液和水洗涤合并的有机部分，然后干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。残余物直接用于下一步骤中。
步骤2：在-78℃下，历时30分钟，将n-BuLi(2.5M的己烷溶液，24mL，60mmol，1.1当量)滴加到步骤1产物(15.89g，52.74mmol)在THF(175mL)中的搅拌溶液。在此温度下搅拌反应30分钟，然后历时30分钟逐滴引入三氟乙酸乙酯(7.6mL，63mmol，1.2当量)在THF(30mL)中的溶液。在-78℃下，再搅拌反应90分钟，然后分配在EtOAc和饱和NH4Cl溶液之间。分离相，且用EtOAc(2x)萃取水层。用饱和盐水溶液洗涤合并的有机部分，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。残余物是通过在高真空(P＝10mmHg)下蒸馏纯化，收集沸点在160-170℃之间的馏分。
步骤3：在回流下，将步骤2产物(8.0g，25mmol)和羟胺盐酸盐(1.92g，27.6mmol，1.1当量)在吡啶(12mL)和EtOH(6mL)的混合物中一起加热。3h后，在减压下移除溶剂且将残余物分配在EtOAc和水之间。分离相，并用EtOAc(2x)萃取水层。用饱和盐水溶液洗涤合并的有机部分，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。残余物是在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液纯化。
步骤4：在0℃下，以逐份方式将对甲苯磺酰氯(3.29g，17.2mmol，1.15当量)添加到步骤3产物(5.0g，15mmol)、Et3N(2.5mL，18mmol，1.2当量)和DMAP(0.183g，1.5mmol，0.10当量)在CH2Cl2(26mL)中的搅拌溶液。通过TLC判断反应完全后，在减压下浓缩混合物，并将残余物分配在EtOAc和水之间。分离层并用另外的水然后用盐水洗涤有机相，然后干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。无需另外的纯化而将残余物用于下一步骤中。
步骤5：在10℃下，在厚壁玻璃管中，将浓NH4OH(68mL)添加到步骤4产物(6.85g，14.1mmol)在二噁烷(68mL)中的搅拌溶液。将管封盖，且在室温下搅拌内含物48h。然后添加水和EtOAc并分离层。用EtOAc(2x)萃取水层且用饱和盐水溶液洗涤合并的有机部分，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。残余物是在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液纯化。
步骤6：在室温下，用Ag2O(2.50g，10.9mmol，2当量)搅拌步骤5产物(1.8g，5.4mmol)在Et2O(54mL)中的溶液。4h后，添加第二部分的Ag2O(2.50g，10.9mmol，2当量)，并在室温下搅拌混合物过夜。然后添加己烷(100mL)，并通过硅胶垫过滤混合物。用9∶1己烷/EtOAc洗涤垫，并在减压下浓缩滤液。残余物直接用于下一步骤中。
步骤7：在0℃下，将TBAF(1.0M的THF溶液，6.2mL，6.2mmol，1.2当量)滴加到步骤6产物(1.70g，5.15mmol)在THF(25mL)中的溶液，接着在室温下搅拌1h。然后将混合物分配在EtOAc和水之间并分离相。用EtOAc(2x)萃取水相并用饱和盐水溶液洗涤合并的有机物，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。残余物是在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液纯化。
步骤8：将琼斯试剂(2.5M，0.56mL，1.4mmol，2.0当量)添加到步骤6产物(0.15g，0.69mmol)在丙酮(7.0mL)中的溶液，在0℃下搅拌1h。然后，用EtOAc稀释混合物，并在分离漏斗中用水洗涤直到水层中颜色不可见。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物。
中间体7c
2-(4-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯基)乙酸
中间体7d
2-(3-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯基)乙酸
反应顺序：
步骤1：在0℃下，将MsCl(0.22mL，2.8mmol，1.5当量)滴加到在制备中间体7a或7b时步骤7的对-或间-产物(400mg，1.85mmol)和Et3N(0.52mL，3.7mmol，2当量)在Et2O(19mL)中的溶液，并在此温度下搅拌15分钟，然后在室温下搅拌。2h后，过滤混合物，用乙醚洗涤固体材料，并真空中浓缩滤液。残余物无需进一步纯化而用于下一步骤中。
步骤2：在室温下，将步骤1产物(535mg，1.82mmol)和NaCN(134mg，2.70mmol，1.5当量)一起在DMF(10mL)中搅拌过夜。随后，将混合物分配在水Et2O和之间并分离层。用水，然后盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。残余物是通过在硅胶上用1/4EtOAc/己烷洗脱的快速色谱纯化。
步骤3：在65℃下，用1MNaOH(4.5mL，5当量)的EtOH(4.5mL)溶液搅拌步骤2产物(200mg，0.89mmol)过夜。在冷却至室温后，通过添加1MHCl(5mL)淬灭反应，并将混合物分配在水和Et2O之间。分离层并用另外的Et2O(2x)萃取水相。合并有机物，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。残余物是通过在硅胶上用含有1％AcOH的1/9EtOH/己烷洗脱的快速色谱纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物。
中间体8
4-氨基-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺盐酸盐
反应顺序：
步骤1：将三氟乙醛乙基半缩醛(90％，15mL，110mmol，1.8当量)、4-硝基丁酸甲酯(8.0mL，62mmol)、氟化钾(3.65g，62.8mmol)和i-PrOH(20mL)置于密封的反应容器中，并在室温下搅拌混合物20h。然后，将混合物分配在EtOAc(200mL)和5％(w/w)柠檬酸水溶液和盐水的1∶1混合物(300mL)之间并分离层。用另外的盐水(200mL)洗涤有机相，并用EtOAc(200mL)萃取合并的水层。合并有机层，经MgSO4干燥，过滤和通过在减压下同时保持浴温在20℃旋转蒸发浓缩。残余物是通过在硅胶上用20％EtOAc/己烷洗脱的管柱色谱纯化。
步骤2：在真空下，将步骤1产物(13.0g，52.9mmol)、二碳酸二-叔丁酯(15.0g，68.7mmol，1.3当量)和10％Pd/C(4.00g)的混合物置于隔膜-封盖的rbf中，并通过注射器引入脱气的EtOAc(100mL)。然后，将混合物置于经由乳胶气球的H2氛围下，并在超声波浴中使反应容器声波处理2分钟，接着在室温下搅拌内含物24h。通过TLC判断反应完全后，将容器用N2净化并添加CH2Cl2。通过硅藻土垫过滤悬浮液，且用EtOAc和CH2Cl2的混合物彻底的洗涤垫。在真空中浓缩滤液，且用Et2O/庚烷的1∶4混合物处理残余物。静置4h后，通过抽吸过滤收集固体产物，并用少量1∶4Et2O/庚烷洗涤，得到以＞10∶1非对映体纯度的所需非对映体。
步骤3：在0℃下，在N2下，在厚壁玻璃管中将NH3在MeOH中的溶液(7.0M，30mL，200mmol，20当量)添加到步骤2产物(3.0g，9.5mmol)，且用Teflon螺帽密封入口，接着在35℃下加热内含物5天。然后，在减压下浓缩混合物，且用Et2O搅拌残余物过夜。通过抽吸过滤收集固体产物并在高真空下干燥。
步骤4：在0℃下，将HCl的1，4-二噁烷溶液(4M，1.2mL，5mmol，5当量)滴加到步骤3产物(0.30g，1.0mmol)在CH2Cl2(2mL)中的悬浮液，接着在室温下搅拌直到通过LCMS测定反应为完全(3h)。然后在减压下将反应混合物浓缩至干，得到标题化合物。在-15℃下，在N2氛围下储存所述物质，且无需进一步纯化即可用于后续反应中。
中间体9
(4S)-4-氨基-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺盐酸盐
反应顺序：
步骤1：在N2氛围下，用CF3TMS(2.5mL，17mmol，1.2当量)和CsF(0.34g，2.2mmol，0.15当量)处理(S)-3-叔丁氧基羰基-4-(2-苄氧基羰基乙基)噁唑烷-5-酮(4.97g，14.2mmol)在无水THF(30mL)中的溶液。然后在超声波浴中超声处理反应容器且通过TLC监测反应进展。1h后，添加水(2.5mL)且继续超声处理直到通过TLC判断中间体甲硅烷基醚的水解已完全(30分钟)。添加EtOAc，且用水和盐水洗涤混合物。用EtOAc萃取水相，且合并的有机层经Na2SO4/MgSO4干燥，过滤和在真空下浓缩且残余物直接用于下一步骤中。
步骤2：以足以保持内部温度在30℃以下的速率将LiBH4的THF溶液(2.0M，6.5mL，13mmol，1.05当量)滴加到步骤1产物(5.28g，12.6mmol)在THF(50mL)中的溶液。通过TLC判断反应完全后(5分钟)，将反应容器冷却至0℃且通过添加冰水淬灭反应。将反应容器内含物分配在EtOAc和水之间并分离层。用另外的EtOAc(2x)萃取水相且用盐水洗涤合并的有机物，经MgSO4/Na2SO4干燥，过滤和在真空下浓缩，得到呈非对映体的2.2∶1混合物的产物。通过重复的在硅胶上用渐增比例的EtOAc(0-30％)的甲苯溶液洗脱的快速色谱分离这些非对映体的混合物。所需非对映体对应于极性更大的化合物且是在反应中产生的较少的异构体。
步骤3：在0℃下，在N2下，在厚壁玻璃管中将NH3的MeOH溶液(7.0M，15mL，100mmol，110当量)添加到步骤2产物(0.38g，0.90mmol)且用Teflon螺帽密封入口，接着在45℃下加热内含物48h。然后在减压下浓缩混合物，且将残余用醚/庚烷(2x)共沸，然后用Et2O磨碎1h。通过抽吸过滤收集固体产物并在高真空下干燥。
步骤4：在0℃下，将HCl的1，4-二噁烷溶液(4M，0.70mL，2.8mmol，28当量)滴加到步骤3产物(30mg，0.10mmol)在CH2Cl2(0.7mL)中的悬浮液，接着在室温下搅拌直到通过LCMS测定反应已完全(2h)。然后将反应混合物在减压下浓缩至干，得到标题化合物。无需另外的纯化将所述物质直接用于后续反应中。
以上顺序也可用于从(R)-3-叔丁氧基羰基-4-(2-苄氧基羰基乙基)噁唑烷-5-酮制备(4R，5S)-和(4R，5R)-4-氨基-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺盐酸盐。
中间体10
4-氨基-6-氟-5-羟基己酰胺盐酸盐
反应顺序：
步骤1：在-78℃下，将DMSO(8.7mL，120mmol，3当量)在CH2Cl2(15mL)中的溶液缓慢添加至草酰氯(4.2mL，48mmol，1.2当量)在CH2Cl2(50mL)中的溶液，接着在此温度下搅拌30分钟。然后，逐滴引入2-氟乙醇(2.4mL，41mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液，且历时1h将混合物缓慢升温至-40℃接着重新冷却到-78℃，然后再滴加Et3N(28.5mL，204mmol，5当量)。在添加过程中保持必需用手摇晃反应容器来确保均一性的不可溶物质的形成。然后将悬浮液升温至室温，并再搅拌1.5h，此后添加4-硝基丁酸甲酯(4mL，31.2mmol，0.77当量)到反应容器，同时在室温下在水浴中冷却。将混合物储存在-15℃下过夜，然后在室温下搅拌2.5h，再将混合物分配在EtOAc(100mL)和从10％柠檬酸和盐水制得的水溶液之间。用EtOAc(100mL)萃取水相且用盐水洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤和通过在减压下在20℃的浴温下旋转蒸发浓缩。使残余物经历在硅胶上用渐增比例的EtOAc(0-50％)的己烷溶液洗脱的快速色谱，得到呈非对映体混合物的产物。
步骤2：在真空下，将步骤1产物(4.01g，20.0mmol)、二碳酸二-叔丁酯(5.23g，24.0mmol，1.25当量)和10％Pd/C(1.00g)置于隔膜封盖的rbf中并经由注射器引入脱气的EtOAc(50mL)。然后将混合物置于经由乳胶气球的H2氛围下且使反应容器内含物超声处理2分钟，接着在室温下搅拌内含物24h。然后重复反应容器内含物的超声处理再2分钟时间，且在室温下再搅拌混合物24h。通过TLC判断反应完全后，用N2净化容器并添加CH2Cl2。通过硅藻土垫过滤悬浮液，且用EtOAc和CH2Cl2的混合物彻底洗涤垫。真空中浓缩滤液，且残余物是通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc(10-50％)的己烷溶液洗脱的快速色谱纯化。主要非对映异构体首先洗脱(极性较小)且次要非对映异构体其次洗脱(极性较大)。通过用Et2O/己烷磨碎，进一步纯化两种非对映体，得到以＞10∶1非对映体纯度的产物，如通过1HNMR所测得。
步骤3：在0℃下，在N2下，在厚壁玻璃管中将NH3的MeOH溶液(7.0M，6.0mL，42mmol，30当量)添加到步骤2中分离的产物(400mg，1.43mmol)，且用Teflon螺帽密封入口，接着在40℃下加热内含物3d。然后将混合物在减压下浓缩至干并用Et2O磨碎残余物。通过抽吸过滤收集固体产物，并在真空下干燥。
步骤4：在0℃下，将HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，1.0mL，4.0mmol，14当量)滴加到步骤3产物(75mg，0.28mmol)在CH2Cl2(1mL)中的悬浮液，接着在室温下搅拌直到通过LCMS测定反应已完成(2h)。然后将反应混合物在减压下浓缩至干，得到标题化合物，其无需进一步纯化即可直接用于后续反应中。
中间体11
4-氨基-5-羟基己酰胺
反应顺序：
步骤1：在0℃下，将T3P(50wt.％的EtOAc溶液，21mL，35mmol，1.2当量)和DIPEA(12.5mL，71.8mmol，2.4当量)依序添加至N-Cbz-L-谷氨酸(10.0g，29.6mmol)和N，O-二甲基羟胺盐酸盐(3.46g，35.5mmol，1.2当量)在DMF(15mL)中的混合物，接着在室温下搅拌1h。然后将反应容器内含物倒入冷的0.5MHCl水溶液并用EtOAc(2x)萃取。用冷的0.5MHCl，然后用盐水洗涤合并的有机物。合并的有机物经MgSO4干燥并通过硅胶垫过滤。用另外的EtOAc洗涤垫，且将滤液浓缩至干。残余物直接用于下一步骤中。
步骤2：在-78℃下，将3.0MMeMgBr的Et2O溶液(34mL，100mmol，3.0当量)滴加到步骤1产物(12.9g，34.0mmol)在THF(100mL)中的溶液。添加完成后，使混合物升温至室温，并在此温度下搅拌，直到通过LCMS测得反应完全(2h)。然后将反应容器内含物倒入冷的0.5MHCl水溶液并用EtOAc(2x)萃取。用冷的0.5MHCl水溶液和盐水洗涤合并的有机物，然后经MgSO4干燥，过滤和在真空下浓缩至干。通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc(25-50％)的己烷溶液洗脱的快速色谱分离酮产物。
步骤3：在-30℃下，将TFA(10mL，130mmol，5.4当量)滴加到步骤2产物(8.08g，24.1mmol)在CH2Cl2(2mL)中的搅拌溶液。然后将反应容器内含物缓慢升温至室温并在此温度下搅拌3h，然后浓缩至干。使含有产物的残余物与甲苯(3x)共沸，在高真空下干燥并直接用于下一步骤中。
步骤4：在-78℃下，将NaBH4(170mg，4.44mmol，2.5当量)和MeOH(1mL)依序添加至步骤3产物(500mg，1.79mmol)在THF(4mL)中的溶液，接着升温至0℃，并在此温度下搅拌45分钟。然后将反应容器内含物分配在10％(w/w)柠檬酸水溶液和EtOAc之间，并分离层。用另外的EtOAc萃取水相，并用盐水洗涤合并的有机物，经Na2SO4干燥，过滤，用DIPEA(0.62mL)处理，并通过在减压下在20℃的浴温下旋转蒸发浓缩。在0℃下，将残余物溶解于DMF(5mL)并用DMAP(22mg，0.18mmol，0.1当量)、HATU(817mg，2.15mmol，1.2当量)、DIPEA(1.87mL，10.7mmol，6当量)和NH4Cl(481mg，9.0mmol，5当量)处理，接着升温至室温并搅拌过夜。然后添加浓NH4OH水溶液(1.8mL，25mmol，14当量)和DMF(5mL)，继续在室温下搅拌3d。然后将反应容器内含物倒入盐水(50mL)并用EtOAc(50mLx2)萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩至干，和用Et2O/EtOAc的混合物磨碎残余物。通过抽吸过滤收集固体产物并在高真空下干燥。
步骤5：在高真空下，将步骤4产物(0.27g，0.95mmol)、10％Pd/C(100mg)的混合物置于橡胶隔膜密封的烧瓶中。然后经由注射器添加脱气的MeOH(5mL)，和将混合物置于由乳胶气球供应的N2氛围下。将反应容器浸没于超声波浴中并超声处理2分钟。通过由乳胶气球递送H2净化N2氛围，和在室温下搅拌混合物。5h后，通过TLC分析判断反应完全。将H2氛围用N2更换，添加CH2Cl2，并通过硅藻土垫过滤悬浮液，随后用MeOH/CH2Cl2的混合物洗涤所述垫。真空中浓缩滤液，并用MeOH的EtOAc溶液磨碎残余物，得到标题化合物。
中间体12-14的制备
反应顺序：
中间体12
(S)-2-((S)-2-((S)-2-癸酰胺基-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酸
步骤1：在0℃下，将癸酰氯(0.73mL，3.6mmol，1.1当量)和Et3N(1.6mL，12mmol，3.5当量)依序滴加到中间体4(1.25g，3.24mmol)在THF(15mL)中的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温。在搅拌过夜后，添加另外的THF(70-80mL)以促进混合物的搅拌且添加第二份癸酰氯(0.10mL，0.50mmol，0.15当量)，继续在室温下搅拌直到通过LCMS判断反应完全(24h)。然后将反应容器内含物倒入冷的0.5MHCl水溶液、EtOAc和己烷的混合物。通过重力过滤收集固体产物，用水和1∶1Et2O/己烷洗涤，然后在高真空下干燥。
步骤2：在0℃下，将1MLiOH水溶液(9mL，9mmol，3当量)添加到步骤1产物(1.47g，2.92mmol)在MeOH(9mL)和THF(18mL)中的搅拌悬浮液，接着升温至室温。4h后，添加另外的MeOH(18mL)且在室温下搅拌悬浮液过夜。LCMS分析表明24h后反应未达到完全。将混合物重新冷却至0℃，并添加另一份1MLiOH(3mL，3mmol，1当量)，接着在室温下搅拌第二个24h时间。在此时，反应仍未达到完全，这是由于起始酯在反应介质中的低溶解性。必需添加第三份MeOH和1MLiOH(3mL，3mmol，1当量)以推动反应完全。随后过滤混合物以移除固体，并用1MHCl将滤液酸化至pH1，接着浓缩至干。将固体残余物悬浮于水中，通过抽吸过滤收集并用水和Et2O洗涤。在抽吸和高真空下干燥固体，提供标题化合物。
中间体13
(S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酸
步骤1：在0℃下，历时10分钟，将DIPEA(0.51mL，2.9mmol，3.5当量)滴加到中间体4(0.32g，0.83mmol)、4-(三氟甲氧基)苯基乙酸(0.20g，0.91mmol，1.1当量)和HATU(0.38g，1.0mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的溶液，接着缓慢升温至室温，并搅拌过夜。然后，用Et2O稀释反应容器内含物并倒入冰和饱和NaHCO3水溶液的混合物中。搅拌此混合物30分钟，直到冰已融化且通过抽吸过滤收集固体产物，用水和Et2O洗涤并在高真空下干燥。
步骤2：在0℃下，将1MLiOH水溶液(3mL，3mmol，4当量)添加到步骤1产物(0.40g，0.73mmol)在MeOH(3mL)和THF(6mL)中的快速搅拌的悬浮液。在此温度15分钟后，将反应容器升温至室温，并通过LC-MS监测反应进展。2h后，将混合物冷却至0℃并通过添加0.05MHCl水溶液(100mL)酸化至pH1，再在室温下搅拌1h。通过抽吸过滤收集固体产物，用水洗涤和在抽吸和高真空下干燥，得到标题化合物。
中间体14
(S)-2-((S)-2-((S)-2-([1，1′-联苯基]-4-基甲酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酸
步骤1：在0℃下，历时10分钟，将DIPEA(0.42mL，2.4mmol，3.5当量)滴加到中间体4(0.32g，0.83mmol，1.2当量)、联苯基-4-甲酸(145mg，0.732mmol)和HATU(316mg，0.832mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的溶液，接着在室温下搅拌3d。然后用EtOAc稀释混合物，并倒入冰和饱和NaHCO3水溶液的混合物中，在室温下搅拌直到冰融化(约30分钟)。通过抽吸过滤收集固体产物，依次用水和EtOAc洗涤，然后在抽吸和高真空下干燥。
步骤2：在0℃下，将1MLiOH水溶液(3mL，3mmol，5当量)添加到步骤1产物(0.33g，0.62mmol)在MeOH(3mL)和THF(6mL)中的悬浮液，接着在室温下快速搅拌直到通过LCMS判断反应完全(3h)。然后将反应容器内含物重新冷却至0℃并通过添加0.05MHCl水溶液(100mL)酸化，接着在室温下搅拌1h。通过抽吸过滤收集固体产物，用水和Et2O洗涤，并在抽吸和高真空下干燥，得到标题化合物。
一般顺序1：
步骤1(对于RCO2H)：在0℃下，将DIPEA(3.5当量)添加到中间体4(0.83mmol)、HATU(1.2当量)和适当酸(1.1当量)在DMF(3.0mL)中的搅拌悬浮液，伴随缓慢升温至室温并搅拌过夜。然后添加饱和NaHCO3水溶液和EtOAc并通过抽吸过滤收集固体产物，用水和EtOAc洗涤并在高真空下。
步骤1(对于RC(O)Cl)：在0℃下，将适当的酰氯(1.1当量)逐份添加至中间体4(1.3mmol)和DIPEA(2.2当量)在CH2Cl2(13mL)的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温并搅拌过夜。添加另外的CH2Cl2和水至反应容器，且通过抽吸过滤分离固体产物，用CH2Cl2洗涤，并在高真空下干燥。
步骤2：在0℃下，将1MLiOH水溶液(4当量)滴加到步骤1产物(0.73mmol)在MeOH(3mL)和THF(6mL)中的搅拌悬浮液。15分钟后，使反应升温至室温，并再搅拌3h。然后添加碎冰，并用1MHCl将混合物酸化至pH3。再搅拌1h后，通过抽吸过滤分离固体产物并在高真空下干燥。通过用EtOAc(3x)萃取处理，分离在这些条件下无法沉淀的类似物。用盐水洗涤合并的有机物，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩且残余物直接用于下一步骤中。
步骤3：在0℃下，将DIPEA(2.5当量)添加到步骤2产物(0.14mmol)、HATU(1.1当量)和氨基甲基硼酸频哪醇酯盐酸盐(1.1当量)或硼-Gly-(+)-蒎烷二醇盐酸盐(1.1当量)在DMF(1mL)中的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温，并搅拌过夜。然后添加半饱和NaHCO3水溶液和EtOAc，且在超声波浴中搅动混合物1h。通过抽吸过滤分离固体产物并在高真空下干燥。
一般顺序2：
步骤1：在0℃下，历时10分钟，将DIPEA(38mmol，3.5当量)滴加到中间体1(11mmol)、L-缬氨酸衍生物(12mmol，1.1当量)和HATU(13mmol，1.2当量)在DMF(35mL)中的溶液，接着缓慢升温至室温，并搅拌过夜。然后将混合物倒入碎冰(100mL)、饱和NaHCO3水溶液(100mL)和Et2O(200mL)的混合物中，并搅拌30分钟直到冰融化。通过抽吸过滤收集固体产物，用水和1∶1Et2O/己烷洗涤，并在高真空下干燥。
步骤2：在0℃下，将步骤1产物(3.33mmol)悬浮于THF(20mL)和MeOH(10mL)的混合物中并用1MLiOH(4.3mL，4.3mmol，1.3当量)处理，接着缓慢升温至室温，并搅拌过夜。然后将混合物重新冷却至0℃，用1MHCl酸化至pH4，并用EtOAc(3x)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机物，过滤和浓缩且残余物直接用于下一步骤中。
步骤3：在0℃下，将DIPEA(2.0mmol，2.5当量)滴加到步骤2产物(0.90mmol)、硼-Gly-(+)-蒎烷二醇盐酸盐(1.1mmol，1.2当量)和HATU(1.03mmol，1.1当量)在DMF(4.5mL)中的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温。搅拌过夜后，用半饱和NaHCO3水溶液稀释混合物并用EtOAc(3x)萃取。用半饱和盐水(2x)洗涤合并的有机物，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。用Et2O搅拌残余物并通过过滤收集固体物质且在高真空下干燥，得到最终产物。
一般顺序3
步骤1：在0℃下，用2MHCl的Et2O溶液(20mmol，40当量)处理具有R＝Boc的一般顺序2的最终产物(0.51mmol)，在此温度下搅拌18h，接着在减压下浓缩。残余物直接用于下一步骤中。
步骤2(对于RCO2H)：在0℃下，将DIPEA(0.27mmol，3.0当量)滴加至步骤1产物(0.089mmol)、HATU(0.11mmol，1.2当量)和适当的羧酸(1.1当量)在DMF(0.89mL)中的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温。搅拌过夜后，添加EtOAc和半饱和NaHCO3水溶液并通过抽吸过滤收集固体产物，用水洗涤和在高真空下干燥。
步骤2(对于RCOCl)：在0℃下，将DIPEA(0.13mmol，3.0当量)添加到步骤1产物(0.042mmol)在CH2Cl2(0.4mL)中的搅拌悬浮液，接着逐份引入适当的酰氯(0.064mmol，1.5当量)。使反应缓慢升温至室温并搅拌过夜。此后，用EtOAc和半饱和NaHCO3稀释反应，并分离层。用EtOAc(2x)萃取水层且用半饱和盐水(2x)洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)和在减压下浓缩。用Et2O磨碎残余物且通过过滤分离固体产物并在高真空下干燥。
一般顺序4
步骤1：在0°下，将HATU(11.9g，31.4mmol，1.1当量)和DIPEA(14.9mL，85.5mmol，3.0当量)添加到(S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(5.00g，28.5mmol)和L-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐(6.15g，28.5mmol，1.0当量)在DMF(100mL)中的溶液，接着缓慢升温至室温，搅拌过夜。随后用EtOAc稀释混合物，并用10％HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。分离有机层，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩且残余物是直接用于下一步骤中。
步骤2：在0℃下，将1MLiOH水溶液(60mL)添加至步骤1产物(9.58g，28.5mmol)在THF(120mL)和MeOH(60mL)中的溶液。在室温下搅拌3h后，用1MHCl将混合物酸化至pH2-3，并用EtOAc萃取。分离有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。用EtOAc和己烷的混合物磨碎残余物且通过抽吸过滤收集固体产物并在高真空下干燥。
步骤3：在0℃下，将HATU(1.12mmol，1.2当量)和DIPEA(3.7mmol，4.0当量)依序添加至步骤2产物(0.93mmol)和适当的保护的氨基酸(0.93mmol)在DMF(5mL)中的搅拌混合物，接着缓慢升温至室温，并在此温度下搅拌3h。然后，将混合物分配在EtOAc和10％HCl水溶液之间。分离有机相，并用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤和在减压下浓缩。残余物是通过在硅胶上用渐增比例的MeOH的CH2Cl2溶液洗脱的快速色谱纯化。
步骤4：在0℃下，用1MLiOH水溶液(0.95mmol，2.0当量)处理步骤3产物(0.47mmol)在THF(2mL)和MeOH(1mL)中的搅拌悬浮液，缓慢升温至室温并搅拌3h。然后用1MHCl将混合物酸化至pH2-3并用EtOAc萃取。分离有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。用EtOAc和Et2O的混合物磨碎残余物并通过抽吸过滤分离固体产物且在高真空下干燥。
步骤5：在0℃下，用HATU(0.13mmol，1.2当量)和DIPEA(0.44mmol，4.0当量)处理步骤4产物(0.11mmol)和硼-Gly-(+)-蒎烷二醇盐酸盐(0.12mmol，1.1当量)在DMF(1mL)中的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温并搅拌过夜。随后，将反应容器内含物分配在EtOAc和半饱和NaHCO3水溶液之间。分离EtOAc层，并用另外的EtOAc(2x)萃取水层。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。用水磨碎残余物和通过抽吸过滤分离固体产物并在高真空下干燥。
一般顺序5
在0℃下，将DIPEA(3.5当量)滴加至适当的羧酸(中间体12、13或14)、适当的胺(中间体8、9、10或11，1.2-1.4当量)和HATU(1.2-1.3当量)在DMF(0.1M)中的搅拌悬浮液，接着缓慢升温至室温并搅拌过夜。然后用EtOAc稀释反应混合物，并用冰冷的半饱和NaHCO3水溶液搅拌。通过过滤分离固体酰胺产物，用EtOAc和水洗涤，接着在抽吸和高真空下干燥。当产物可溶于EtOAc中时，分离层并用另外的EtOAc萃取水相。用5％LiCl水溶液和饱和盐水洗涤合并的有机相，然后经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。用Et2O磨碎残余物并通过过滤收集固体产物且在高真空下干燥。
实例1至24中所述的化合物上通过实例编号识别。因此，实例1中所公开的化合物被指定为化合物1。
实例1(1)
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸
在0℃下，将2，4，6-可力丁(0.14mL，1.1mmol，2.1当量)滴加到中间体2(0.20g，0.51mmol)、HATU(0.194g，0.510mmol)和氨基甲基硼酸频哪醇酯盐酸盐(0.099g，0.51mmol)在DMF(2.9mL)中的悬浮液中，同时缓慢升温到室温并搅拌过夜。随后，将容器内含物分配在半饱和的NaHCO3水溶液和EtOAc之间。分离有机层，并用EtOAc(2x)萃取水相。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。用EtOAc/Et2O/水的混合物磨碎残余物，并在超声波浴中搅拌1h。通过抽吸过滤收集固体材料并在高真空下干燥，得到标题化合物。
1HNMR(甲醇-d4)：δ7.31-7.18(5H)，4.63(1H)，4.50(1H)，3.80(1H，d)，3.64(3H)，3.20(1H)，2.94(1H)，2.34(2H)，1.92(1H)，1.42(3H)，0.83-0.75(6H)。MSESI：473.3[M+Na]+
使用一般顺序1制备实例2-5：
实例2(2)
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-3-甲基-2-[(4-苯基苯基)甲酰胺基]丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸
1HNMR(甲醇-d4)：δ7.89(2H)，7.73(2H)，7.68(2H)，7.47(2H)，7.38(1H)，7.28-7.22(2H)，7.21-7.13(2H)，7.09(1H)，4.69(1H)，4.39(1H)，4.32(1H)，3.23(1H)，2.93(1H)，2.35-2.22(2H)，2.13(1H)，1.41-1.31(3H)，1.00-0.88(6H)。MSESI：595.4[M+Na]+
实例3(3)
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-3-甲基-2-{2-[4-(三氟甲氧基)苯基]乙酰胺基}丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.26(1H)，8.16(1H)，8.20-8.12(2H)7.38-7.32(2H)，7.30-7.12(7H)，4.53(1H)，4.30(1H)，4.10(1H)，3.55(1H)，3.45(1H)，3.04(1H)，2.77(1H)，2.27(1H)，1.89(1H)，1.22-1.18(3H)，0.74-0.72(6H)。MSESI：617.3[M+Na]+
实例4(4)
{[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-癸酰胺基-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]甲基}硼酸
1HNMR(甲醇-d4)：δ7.29-7.16(5H)，4.59(1H)，4.48(1H)，4.04(1H)，3.15(1H)，2.94(1H)，2.33(2H)，2.26-2.14(2H)，1.95(1H)，1.56(2H)，1.40(3H)，1.35-1.20(12H)，0.91-0.81(9H)。MSESI：569.4[M+Na]+
实例5(5)
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S，-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-(苯基甲酰胺基)丁酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.22-8.16(2H)，8.11-8.03(2H)，7.84(2H)，7.55(1H)，7.50-7.45(2H)，7.26-7.09(5H)，4.57(1H)，4.29(1H)，4.20(2H)，3.05(1H)，2.77(1H)，2.37(2H)，2.22(1H)，2.10-1.99(2H)，1.86(1H)，1.80(1H)，1.67(1H)，1.28-1.17(10H)，0.83(3H)，0.79(3H)，0.75(3H)。MSESI：653.5[M+Na]+
使用一般顺序2制备实例6和7：
实例6(6)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸叔丁酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.26(1H)，8.08(1H)，7.87(1H)，7.19-7.16(5H)，6.64(1H)，4.58(1H)，4.29(1H)，4.19(1H)，3.68(1H)，3.02(1H)，2.74(1H)，2.38(2H)，2.22(1H)，2.06(1H)，1.87(1H)，1.84-1.73(2H)，1.68(1H)，1.36(9H)，1.31-1.14(10H)，0.79(3H)，0.73-0.61(6H)。MSESI：627.5[M+H]+
实例7(7)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸苄酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.21(1H)，8.09(1H)，7.98(1H)，7.40-7.29(5H)，7.27-7.12(6H)，5.02(2H)，4.56(1H)，4.29(1H)，4.19(1H)，3.80(1H)，3.04(1H)，2.76(1H)，2.38(2H)，2.22(1H)，2.06(1H)，1.89-1.76(3H)，1.68(1H)，1.30-1.15(10H)，0.79(3H)，0.72(6H)。MSESI：683.4[M+Na]+
使用一般顺序3制备实例8a、8b、8c、8d和9：
实例8a(8a)
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-({4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}甲酰胺基)丁酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.36(1H)，8.16(1H)，8.10-8.04(2H)，7.93(2H)，7.38(2H)，7.24-7.05(5H)，4.55(1H)，4.32-4.14(3H)，3.03(1H)，2.76(1H)，2.36(2H)，2.20(1H)，2.08-1.96(2H)，1.86(1H)，1.78(1H)，1.66(1H)，1.29-1.13(10H)，0.84-0.72(9H)。MSESI：739.4[M+H]+
实例8b(8b)
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-({3-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}甲酰胺基)丁酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.46(1H)，8.16-8.05(3H)，8.00(1H)，7.65-7.60(2H)，7.55(1H)，7.24-7.19(2H)，7.17-7.05(3H)，4.54(1H)，4.31-4.15(3H)，3.04(1H)，2.76(1H)，2.39-2.34(2H)，2.20(1H)，2.09-1.97(2H)，1.86(1H)，1.79(1H)，1.67(1H)，1.30-1.11(10H)，0.86-0.74(9H)。MSESI：739.4[M+H]+
实例8c(8c)
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-(2-{4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}乙酰胺基)丁酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.14-8.04(3H)，7.39-7.33(2H，)7.24-7.10(8H)，4.51(1H)，4.28(1H)，4.18(1H)4.09(1H)，3.60-3.44(2H)，3.01(1H)，2.75(1H)，2.38-2.34(2H)，2.21(1H)，2.05(1H)，1.92-1.83(2H)，1.79(1H)，1.66(1H)，1.29-1.09(10H)，0.81-0.65(9H)。MSESI：753.5[M+H]+
实例8d(8d)
(2S)-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]-2-(2-{3-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基}乙酰胺基)丁酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.15-8.03(3H)，7.44-7.36(2H)，7.23-7.09(8H)，4.56-4.42(2H)，4.30-4.07(2H)，3.63-3.39(2H)，3.02(1H)，2.76(1H)，2.38-2.33(2H)，2.20(1H)，2.04(1H)，1.93-1.82(2H)，1.78(1H)，1.66(1H)，1.28-1.09(10H)，0.80-0.75(3H)，0.75-0.67(6H)。MSESI：753.4[M+H]+
实例9(9)
(2S)-2-[(2-氟苯基)甲酰胺基]-3-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]丁酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.25(1H)，8.14-8.08(2H)，8.03(1H)，7.64-7.51(2H)，7.33-7.11(7H)，4.60(1H)，4.30(2H)，4.18(1H)，3.05(1H)，2.75(1H)，2.38(2H)，2.20(1H)，2.10-1.93(2H)，1.87(1H)，1.79(1H)，1.67(1H)，1.29-1.18(10H)，0.82-0.74(9H)。MSESI：649.4[M+H]+
使用一般顺序4制备实例10-14：
实例10(10)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)丙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.11-8.04(2H)，7.98(1H)，7.27-7.21(4H)，7.17(1H)，7.05(1H)，4.58(1H)，4.22-4.14(2H)，3.77(1H)，3.52(3H)，3.02(1H)，2.78(1H)，2.37(2H)，2.22(1H)，2.06(1H)，1.89-1.77(3H)，1.71-1.61(2H)，1.52(1H)，1.31-1.24(4H)，1.23-1.20(3H)，0.85-0.77(6H)，0.74-0.69(6H)。MSESI：599.4[M+H]+
实例11(11)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(1S)-2-苯基-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)乙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.23(1H)，8.09(1H)，7.88(1H)，7.29-7.12(10H)，7.03(1H)，4.59-4.45(2H)，4.24(1H)，3.76(1H)，3.53(3H)，3.00-2.68(4H)，2.39(2H)，2.24(1H)，2.09(1H)，1.90(1H)，1.86-1.78(2H)，1.71(1H)，1.34-1.26(4H)，1.25-1.20(3H)，0.81(3H)，0.77-0.62(6H)。MSESI：661.5[M+H]+
实例12(12)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-1-{[(1S)-3-(甲基磺酰基)-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)丙基]氨基甲酰基}-2-苯基乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.13(1H)，8.03(1H)，7.95(1H)，7.27-7.15(5H)，7.06(1H)，4.54(1H)，4.34(1H)，4.22(1H)，3.77(1H)，3.52(3H)，3.02(1H)，2.79(1H)，2.47-2.32(4H)，2.22(1H)，2.06(1H)，2.01(3H)，1.93-1.74(5H)，1.69(1H)，1.30-1.21(7H)，0.79(3H)，0.72(6H)。MSESI：645.4[M+H]+
实例13(13)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-1-{[(1S)-3-甲基-1-({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-苯基乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.12(1H)，8.07(1H，s)，8.00(1H)，7.26-7.14(5H)，7.04(1H)，4.56(1H)，4.31(1H)，4.18(1H)，3.79(1H)，3.52(3H)，3.01(1H)，2.78(1H)，2.30-2.36(2H)，2.21(1H)，2.05(1H)，1.89-1.76(3H)，1.68(1H)，1.56(1H)，1.48-1.39(2H)，1.30-1.24(4H)，1.22(3H)，0.86(3H)，0.85(3H)，0.76(3H)，0.72(6H)。MSESI：627.5[M+H]+
实例14(14)
N-[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-2-苯基-1-{[(S)-苯基({[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]甲基}氨基甲酰基)甲基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酸甲酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.66(0.5H)，8.53(0.5H)，8.44(0.5H)，8.32(0.5H)，8.05(0.5HH)，7.97(0.5H)，7.92(1H)，7.42-7.00(10H)，5.47(1H)，4.68(1H)，4.27(1H)，3.77(1H)，3.52(3H)，2.95(1H)，2.76(1H)，2.58-2.42(2Hoverlapped)，2.23(1H)，2.07(1H)，1.94-1.77(3H)，1.65(1H)，1.32-1.19(7H)，0.79(3H)，0.75-0.63(6H)。MSESI：647.4[M+H]+
实例15(15)
(4RS)-4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]-2-苯基乙酰胺基]-4-[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]丁酸甲酯
将中间体5(0.027g，0.084mmol)，中间体3(0.062g，0.13mmol，1.5当量)和氧化铂(0.002g，0.008mmol，0.1当量)置于rbf中并用隔膜密封。净化(真空，N2)烧瓶并添加脱气的THF(2.5mL)。然后在经由乳胶气球提供的H2氛围(P＝1atm)下搅拌混合物。18h后，添加EtOAc和NaHCO3饱和水溶液。分离层并用另外的EtOAc(2x)萃取水层。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物是通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc的己烷溶液洗脱的快速色谱纯化，得到呈非对映体混合物的标题化合物。
1HNMR(丙酮-d6)：δ7.89(0.5H)，7.77(0.5H)，7.61-7.51(2H)，7.31-7.17(5H)，6.52(0.5H)，6.48(0.5H)，4.58(1H)，4.45(1H)，4.17(1H)，3.87(1H)，3.61-3.55(6H)，3.21(2H)，2.97(1H)，2.68(1H)，2.56-2.32(2H)，2.31-2.17(2H)，1.94-1.69(5H)，1.44(1H)，1.34-1.23(9H)，0.86-0.81(9H)。MSESI：671.5[M+H]+
实例16(16)
N-[(1S)-1-{[(1R/S)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-3-氨基甲酰基-1-[(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基]丙基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-苯基乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酸甲酯
将中间体6(0.12g，0.39mmol)、中间体3(0.30g，0.61mmol，1.6当量)和氧化铂(0.009g，0.04mmol，0.1当量)置于用隔膜密封的rbf。净化(真空，然后N2)烧瓶并添加脱气的THF(2.5mL)。然后在经由乳胶气球递送的H2氛围(P＝1atm)下搅拌混合物。18h后，添加甲醇和硅胶到反应容器并浓缩混合物。将残余物倒入用EtOAc预装的硅胶管柱的顶部。在硅胶上用渐增比例的MeOH的EtOAc溶液洗脱的快速色谱，浓缩含有所需物质的溶离份，用EtOAc磨碎残余物，并通过抽吸过滤收集固体产物，接着在高真空下干燥，得到呈非对映体混合物的标题化合物。
1HNMR(甲醇-d4)：δ7.30-7.18(5H)，4.59(1H)，4.49(1H)，4.18(1H)，3.77(1H)，3.63(3H)，3.20(1H)，2.95(1H)，2.64(1H)，2.37-2.10(4H)，1.97-1.70(6H)，1.42(3H)，1.37-1.31(4H)，1.27(3H)，0.86(3H)，0.82-0.77(6H)。MSESI：656.5[M+H]+
实例17(17)
[(1R/S)-4-甲氧基-1-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]-4-氧代丁基]硼酸
在室温下，将实例15(0.010g，0.015mmol)与聚合物负载的苯硼酸(3mmol/g负载，0.058g)在1mL的1∶1乙腈/水中搅拌18h。通过过滤移除树脂，并用水和乙腈洗涤。浓缩滤液，添加另外部分的聚合物负载的苯硼酸(3mmol/g，0.058g)和乙腈(5mL)，并在室温下搅拌18h。通过过滤移除第二部分的树脂，并用水和乙腈洗涤。真空中浓缩滤液以移除乙腈，冷冻干燥残余的水溶液，用Et2O磨碎残余物，得到标题化合物。
1HNMR(MeOH-d4)：δ7.31-7.17(5H)，4.58(1H)，4.47(1H)，3.80(1H)，3.67-3.61(6H)，3.19(1H)，2.95(1H)，2.58(1H)，2.46-2.39(2H)，1.93(1H)，1.86-1.65(2H)，1.43(3H)，0.84-0.76(6H)。MSESI：559.3[M+Na]+
实例18(18)
[(1R/S)-3-氨基甲酰基-1-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2S)-2-[(甲氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酰胺基]-3-苯基丙酰胺基]丙酰胺基]丙基]硼酸
将实例16的最终产物的样品(0.020g，0.030mmol)悬浮于Et2O(2.5mL)、水(1mL)和EtOAc(0.5mL)的混合物中。添加苯基硼酸(0.036g，0.30mmol，10当量)并在室温下搅拌混合物18h。分离相，用EtOAc(5x)洗涤水层，且弃置收集的有机物。冷冻干燥水层，并用EtOAc磨碎残余物，得到标题化合物。
1HNMR(DMSO-d6+5％H2O)：δ8.08-7.96(2H)，7.65(1H)，7.37(1H)，7.28-7.12(5H)，7.04(1H)，6.69(1H)，4.55(1H)，4.30(1H)，3.75(1H)，3.51(3H)，2.99(1H)，2.75(1H)，2.56(1H)，2.02-1.95(2H)，1.79(1H)，1.69-1.40(2H)，1.20-1.12(3H)，0.68(6H)。MSESI：544.3[M+Na]+
根据一般顺序5制备以下实例：
实例19(19)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
从中间体12(0.10g，0.20mmol)、中间体8(57mg，0.24mmol，1.2当量)、HATU(91mg，0.24mmol，1.2当量)和DIPEA(0.12mL，0.69mmol，3.5当量)在DMF(4mL)中制备成非对映体的混合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.02-7.87(3H)，7.71(1H)，7.25-7.12(6H)，6.71(1H)，4.52(1H)，4.21(1H)，4.07(1H)，3.97-3.77(2H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.20-1.93(4H)，1.93-1.81(2H)，1.64(1H)，1.49-1.38(2H)，1.29-1.15(15H)，0.85(3H)，0.73(6H).19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65，-74.72。ESI-MS：672.5[M+H+]
实例20a(20a)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
从中间体12(40mg，0.082mmol)、中间体9(23mg，0.1mmol，1.2当量)、HATU(38mg，0.1mmol，1.2当量)和DIPEA(50μL，0.29mmol，3.5当量)在DMF(2mL)中制备。通过溶解于热EtOH中，用活性炭处理，并通过硅藻土垫过滤，来纯化固体产物。用另外的热EtOH洗涤垫且在减压下浓缩滤液，用含有几滴MeOH的EtOAc磨碎后，得到呈固体的标题化合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.01(1H)，7.98(1H)，7.92(1H)，7.72(1H)，7.25-7.12(6H)，6.71(1H)，6.53(1H)，4.52(1H)，4.21(1H)，4.07(1H)，3.93(1H)，3.82(1H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.19-1.97(4H)，1.97-1.81(2H)，1.60(1H)，1.49-1.39(2H)，1.29-1.16(12H)，1.18(3H)，0.85(3H)，0.73(6H)。19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65。ESI-MS：672.5[M+H+].
实例20b(20b)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-(((3R)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
从中间体12和ent-中间体9针对20a制备。
实例21a(21a)、21b(21b)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1-氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
从中间体12(100mg，0.20mmol)、中间体10的次要非对映异构体(56mg，0.28mmol，1.4当量)、HATU(100mg，0.26mmol，1.3当量)和DIPEA(0.12mL，0.69mmol，3.5当量)在DMF(3mL)中制备化合物21a。将标题化合物通过在硅胶上用渐增比例的MeOH(5％至10％)的CH2Cl2溶液洗脱的快速色谱分离为两种非对映体的混合物。利用中间体10的主要非对映异构体，以类似方式制备化合物21b。
化合物b(参见图1)为化合物21a和21b的混合物。
21a：1HNMR(DMSO-d6)：δ8.01-7.93(2H)，7.74-7.62(2H)，7.24-7.13(6H)，6.69(1H)，5.28(1H)，4.52(1H，m)，4.44-4.03(4H)，3.66-3.46(2H)，3.03(1H)，2.79(1H)，2.19-1.82(6H)，1.59-1.38(3H)，1.30-1.16(15H)，0.85(3H)，0.74(6H)。19FNMR(DMSO-d6)：δ3.84，3.18。ESI-MS：636.5[M+H]+
21b：1HNMR(DMSO-d6)：δ8.04-7.95(2H)，7.74-7.67(1H)，7.55(05H)，7.48(0.5H)，7.26-7.12(6H)，6.71(1H)，4.52(1H)，4.37-4.04(4H)，3.80-3.67(2H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.20-1.92(4H)，1.87(1H)，1.76-1.58(2H)，1.50-1.40(2H)，1.29-1.17(15H)，0.85(3H)，0.77-0.70(6H)。ESI-MS：636.5[M+H]+
实例22a(22a)和22b(2b)
N-((2S)-1-(((2S)-1-((-1-((6-氨基-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
从中间体12(100mg，0.204mmol)、中间体11(40mg，0.27mmol，1.3当量)、HATU(91mg，0.24mmol，1.2当量)和DIPEA(0.12mL，0.69mmol，3.5当量)在DMF(3mL)中制备。两种非对映体产物可通过在硅胶上用渐增比例的MeOH(5％至10％)的CH2Cl2溶液洗脱的快速色谱分离。化合物22a首先被洗脱(极性较小)非对映体且化合物22b上第二被洗脱(极性较大)非对映体。在浓缩适当的溶离份并用水和Et2O磨碎残余物后，两种产物被分离为固体。
22a：1HNMR(DMSO-d6)：δ8.15(1H)，7.96(1H)，7.73(1H)，7.45(1H)，7.26-7.14(6H)，6.69(1H)，4.56(1H)，4.40(1H)，4.16(1H)，4.10(1H)，3.50-3.41(2H)，2.95(1H)，2.84(1H)，2.20-2.02(2H)，2.02-1.82(4H)，1.56-1.40(3H)，1.30-1.17(12H)，1.07(3H)，0.99(3H)，0.85(3H)，0.764(3H)，0.748(3H)。ESI-MS：618.5[M+H]+。
22b：1HNMR(DMSO-d6)：δ8.00(1H)，7.93(1H)，7.71(1H)，7.52(1H)，7.25-7.12(6H)，6.68(1H)，4.63(1H)，4.53(1H)，4.21(1H)，4.07(1H)，3.52-3.39(2H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.19-1.81(6H)，1.51-1.39(3H)，1.29-1.18(15H)，0.98(3H)，0.85(3H)，0.74(6H)。ESI-MS：618.5[M+H]+。
实例23(23)
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺
从中间体13(108mg，0.20mmol)、中间体8(57mg，0.24mmol，1.2当量)、HATU(91mg，0.24mmol，1.2当量)、DIPEA(0.12mL，0.69mmol，3.5当量)在DMF(2mL)中制备。标题产物通过在硅胶上用渐增比例的MeOH(5％至10％)的CH2Cl2溶液洗脱的快速色谱，接着用水和Et2O磨碎，分离为非对映体的混合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.11-8.05(2H)，7.99(0.4H)，7.92-7.90(1.6H)，7.36(2H)，7.27(2H)，7.24-7.11(6H)，6.72(1H)，6.50(1H)，4.53(1H)，4.22(1H)，4.10(1H)，3.96-3.78(2H)，3.57(1H)，3.46(1H)，3.02(1H)，2.77(1H)，2.10-1.82(4H)，1.64(1H)，1.20(1.8H)，1.16(1.2H)，0.73(6H)。19FNMR(DMSO-d6)：δ-57.2(两种非对映体)，-74.6(一种非对映体)，-74.71(另一非对映体)。ESI-MS：720.3[M+H+]。
实例24(24)
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
从中间体14(70mg，0.14mmol)、中间体8(46mg，0.18mmol，1.3当量)、HATU(62mg，0.16mmol，1.2当量)、DIPEA(85μL，0.49mmol，3.5当量)在DMF(1.4mL)中制备成非对映体的混合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.27(1H)，8.11-8.00(2H)，7.97-7.86(3H)，7.78(2H)，7.74(2H)，7.50(2H)，7.42(1H)，7.26-7.09(6H)，6.71(1H)，6.52(1H)，4.60(1H)，4.26-4.19(2H)，3.98-3.77(2H)，3.05(1H)，2.79(1H)，2.12-1.82(4H)，1.63(1H)，1.23(1.5H)，1.19(1.5H)，0.84(3H，d)，0.762(1.5H)，0.752(1.5H)。19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69。ESI-MS：698.4[M+H+]。
方案1至9和以下内文描述用于制备化合物实例25-91的通用实验程序。对湿气、大气中的氧和/或二氧化碳敏感的所有反应是在被预先在分子筛上干燥并通过在高真空下几个冻融循环脱气的溶剂中在无水氮气氛围下进行。在必要时对所述程序的修改是包含在其所适用的具体实例的描述中。最终化合物是分离为米色到无色粉末。除非另有说明，否则从中间体8制备的化合物一般分离为非对映体的1∶1混合物。
使用HATU、DIPEA偶联的胺到羧酸的一般程序：
在-20℃下，将DIPEA(3.5当量)滴加到适当的胺(1.2当量)、HATU(1.2当量)和0.2M浓度的适当的羧酸在DMF中的搅拌混合物，接着缓慢升温至0℃并在室温下搅拌过夜。然后用EtOAc稀释反应容器内含物，并用冰冷的半饱和NaHCO3水溶液搅拌。通过过滤分离固体酰胺产物，用水和EtOAc洗涤，并在抽吸和高真空下干燥。在产物可溶于EtOAc中的情况下，分离层并用另外的EtOAc萃取水相。用5-10％LiCl水溶液或1∶1饱和盐水/水洗涤合并的有机物，接着经MgSO4干燥。过滤有机物并在减压下浓缩和用含有0-50％EtOAc的醚磨碎残余物。通过过滤收集固体产物并在高真空下干燥。在通过磨碎纯化不足以达到＞90-95％的最终纯度的情况下，使分离的物质经历再结晶或通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc或MeOH的CH2Cl2溶液洗脱的快速色谱。
使用氯甲酸异丁酯偶联的胺到羧酸的一般程序：
(Shieh，Wen-Chung；Carlson，JohnA.；Shore，MichaelE.；TetrahedronLett.1999，40，7167-70.)
在0℃下，历时1h时间将0.35M氯甲酸异丁酯(1.1当量)的CH2Cl2或THF溶液缓慢添加至适当的胺盐酸盐(1.1当量)、N-甲基吗啉(2.2当量)和0.1M浓度的适当的羧酸在CH2Cl2或THF中的混合物。继续在此温度下搅拌另外的15分钟，然后通过添加饱和碳酸氢钠水溶液和EtOAc淬灭反应。通过抽吸过滤收集固体酰胺产物，并依序用水、EtOAc和醚洗涤。在抽吸和高真空下干燥，通常得到呈无色到米色粉末的所需化合物。通过萃取性处理程序(EtOAc(2x)，饱和NaHCO3水溶液和NaCl洗涤，Na2SO4来干燥有机层，过滤，真空中浓缩)分离可溶性产物。在通过磨碎(通常用醚或用1∶1EtOAc/醚)纯化不足以达到＞90-95％的最终纯度的情况下，使产物通过再结晶(在指定溶剂混合物中)或通过在硅胶上用渐增比例的EtOAc或MeOH的CH2Cl2溶液或EtOAc的己烷溶液洗脱的快速色谱纯化。
用氢氧化锂酯皂化的一般程序：
在0℃下，将LiOH水溶液(1M，1.5-2当量)滴加至在MeOH和THF的2∶1混合物中的0.1M浓度的适当的甲酯或乙酯。在此温度下15分钟后，将反应升温至室温，并搅拌直到通过LCMS或TLC分析判断反应完全。然后添加碎冰，并用1MHCl将混合物酸化至pH3-4。再搅拌1h后，通过抽吸过滤分离固体产物并在高真空下干燥。在这些条件下无法沉淀的产物是通过用EtOAc(2x)萃取分离，此后用盐水洗涤合并的有机物，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩且残余物直接用于下一步骤中。
用4MHCl的二噁烷溶液Boc脱保护的一般程序：
在0℃下，将4MHCl的1，4-二噁烷溶液(10-20当量)缓慢添加到在CH2Cl2中的0.5M浓度的适当的Boc-保护的胺。然后在室温下搅拌所得混合物，且通过LCMS或TLC监测反应进展。当需要时，添加另外的HCl的二噁烷溶液以驱动反应完全。然后将反应混合物在减压下浓缩至干，得到所需脱保护的胺盐酸盐，其无需进一步纯化即可直接用于下一反应中。
经由氢解的苄酯或Cbz-脱保护的一般程序：
在真空下，在隔膜封盖的rbf中，将会达成0.1-0.2M的基质浓度的测量体积的脱氧的MeOH经由插管添加到适当的Cbz-保护的胺或苄酯和10％Pd/C(30wt％)。然后将反应容器内含物置于经由乳胶气球的H2氛围下，并在超声波浴中搅动反应容器2分钟。在室温下搅拌混合物，直到通过LCMS或TLC分析判断反应已完全，随后用N2净化容器，并用等体积的CH2Cl2稀释反应混合物。通过硅藻土垫过滤悬浮液，并用MeOH和CH2Cl2的1∶1混合物彻底洗涤垫。浓缩滤液并在高真空下干燥且残余物直接用于下一步骤中。
使用酰基或磺酰氯引入R9的一般程序：
在0℃下，将适当的酰基或磺酰氯(1.1当量)逐份添加至DIPEA(2.2当量)或Et3N(2.2当量)和0.1-0.2M浓度的适当的胺或胺盐酸盐在CH2Cl2中的搅拌混合物，接着缓慢升温至室温，并搅拌直到通过LCMS或TLC分析判断反应已完全。添加另外的CH2Cl2和稀HCl水溶液至反应容器，并通过抽吸过滤分离固体产物，用CH2Cl2和水洗涤并在高真空下干燥。非固体或可溶性产物是通过用CH2Cl2或EtOAc的萃取性处理分离，接着用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的有机萃取物，经MgSO4干燥并在减压下浓缩。用Et2O磨碎残余物，通常产生固体产物，其通过过滤分离并在高真空下干燥。
制备N-酰基氨基酸的一般程序：
在室温下，将合适的酰氯(1当量)以一份式添加至含有适当的氨基酸的NaOH水溶液(1M，2当量)、THF和Et2O的3∶2∶6混合物，接着快速搅拌过夜。酰化产物是通过用EtOAc(2x)萃取分离，接着用10％HCl水溶液将混合物调整至pH2-3。用盐水洗涤合并的有机物，经Na2SO4干燥并浓缩至干。使残余物从CH2Cl2/Et2O再结晶，得到以合适纯度的所需N-酰基氨基酸，其可用于后续反应中。
a试剂和条件：a)HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；b)LiOH、H2O、THF、MeOH，
0℃至室温；c)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；d)4MHCl的二噁烷溶液或
2MHCl的醚溶液，0℃至室温；e)H2(1atm)、10％Pd/C、MeOH；f)适当的酰氯或磺酰氯、
Et3N或DIPEA、THF或DMF，0℃至室温或适当的羧酸、HATU、DIPEA，DMF，0℃至室温。
根据方案1制备的化合物实例：
实例25
((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸苄酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.10(0.5H)，8.00(1.5H)，7.90(1H)，7.40-7.08(12H)，6.72(1H)，6.50(1H)，5.00(2H)，4.55(1H)，4.20(1H)，3.99-2.65(3H)，3.00(1H)，2.72(1H)，2.12-1.75(4H)，1.60(1H)，1.18(3H)，0.70(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65，-74.69；MSESI：652.4[M+H]+
实例26
((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸甲酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.12(0.5H)，8.05(0.5H)；7.94(1H)；7.63(0.5H)，7.51(0.5H)；7.35-7.12(6H)，7.03(1H)，6.72(1H)，6.56(0.5H)，6.52(0.5H)，4.56(1H)，4.28(1H)，4.15-3.98(2H)，3.73(1H)，3.50(3H)，3.00(1H)，2.75(1H)，2.04(2H)，1.82(1H)，1.85-1.62(2H)，1.20(1.5H)，1.17(1.5H)，0.72(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-75.25，-75.37；MSESI：576.3[M+H]+
实例27
((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.12(0.5H)，8.04(0.5H)，7.86(2H)，7.24-7.08(6H)，6.69(1H)，6.62(1H)，6.47(1H)，4.58(1H)，4.20(1H)，3.96-3.75(2H)，3.66(1H)，3.00(1H)，2.73(1H)，2.10-1.80(3H)，1.77(1H)，1.61(1H)，1.38(9H)，1.18(3H)，0.64(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.66，-74.69；MSESI：618.4[M+H]+
实例28
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-异丙基苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.14-7.93(3H)，7.84(1H)，7.75(2H)，7.30(2H)，7.25-7.01(6H)，6.70(1H)，6.46(1H)，4.58(1H)，4.25-4.12(2H)，3.98-3.72(2H)，3.02(1H)，2.93(1H)，2.74(1H)，2.11-1.78(4H)，1.60(1H)，1.20(9H)，0.80(3H)，0.70(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65，-74.70；MSESI：664.4[M+H]+.
实例29
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.38(1H)，8.10-7.80(5H)，7.37(2H)，7.24-7.02(6H)，6.67(1H)，6.45(1H)，4.55(1H)，4.20(2H)，3.97-3.72(2H)，3.01(1H)，2.77(1H)，2.12-1.80(4H)，1.60(1H)，1.20(3H)，0.80(3H)，0.75(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-64.90，-74.66，-74.70；MSESI：730.4[M+H]+
实例30
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(4-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.08(2H)，7.86(2H)，7.37(2H)，7.30-7.02(8H)，6.68(1H)，6.44(1H)，4.50(1H)，4.20(1H)，4.10(1H)，3.98-3.75(2H)，3.36(1H)，3.24(1H)，3.00(1H)，2.73(1H)，2.12-1.80(4H)，1.60(1H)，1.18(3H)，0.68(6H)；MSESI：744.4[M+H]+
实例31
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-3-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.46(1H)，8.16(1H)，8.00(1H)，7.98-7.84(2H)，7.60(2H)，7.52(1H)，7.27-7.02(6H)，6.69(1H)，6.47(1H)，4.55(1H)，4.21(2H)，3.97-3.75(2H)，3.01(1H)，2.77(1H)，2.12-1.80(4H)，1.64(1H)，1.18(3H)，0.80(6H)；MSESI：730.3[M+H]+
实例32
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(3-(3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基)苯基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.20-8.05(2H)，8.00-7.90(2H)，7.40(2H)，7.26-7.08(8H)，6.71(1H)，6.59(1H)，4.51(1H)，4.20(1H)，4.09(1H)，3.98-3.75(2H)，3.60(1H)，3.42(1H)，3.00(1H)，2.75(1H)，2.10-1.80(4H)，1.60(1H)，1.18(3H)，0.70(6H)；MSESI：744.4[M+H]+
实例33
4-((S)-2-((S)-2-((S)-2-([1，1′-联苯基]-4-磺酰氨基)-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺
利用9∶1CH2Cl2∶MeOH作为有机相进行最终步骤中的萃取处理；通过在硅胶上用2-6％MeOH/CH2Cl2洗脱的快速色谱完成最终纯化。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.10(1H)，7.95(1H)，7.90-7.75(2H)，7.72-7.60(6H)，7.47(2H)，7.40(1H)，7.23-7.07(6H)，6.70(1H)，6.46(1H)，4.30(1H)，4.18(1H)，3.95-3.75(2H)，3.53(1H)，2.89(1H)，2.63(1H)，2.06-1.71(4H)，1.58(1H)，1.13(3H)，0.70(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.66，-74.71；MSESI：734.4[M+H]+
实例34
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.20(1H)，8.10-7.95(2H)，7.90(1H)，7.82(1H)，7.60-7.40(5H)，7.24-7.05(6H)，6.70(1H)，6.54(1H)，4.57(1H)，4.20(2H)，3.98-3.76(2H)，3.02(1H)，2.80(1H)，2.47(3H)，2.13-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.80(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：702.4[M+H]+
实例35
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-苯基乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.05(1H)，8.00-7.82(3H)，7.30-7.08(11H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.53(1H)，4.22(1H)，4.10(1H)，3.97-3.76(2H)，3.53(1H)，3.40(1H)，3.01(1H)，2.77(1H)，2.10-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.72(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：636.4[M+H]+
实例36
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-6-苯基烟酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.07(1H)，8.62(1H)，8.26(1H)，8.20-7.97(5H)，7.90(1H)，7.58-7.42(3H)，7.25-7.02(6H)，6.70(1H)，6.60(1H)，4.57(1H)，4.22(2H)，3.99-3.75(2H)，3.03(1H)，2.80(1H)，2.12-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.80(6H)；MSESI：699.4[M+H]+
实例37
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-(吡啶-4-基)噻唑-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.76(2H)，8.49(1H)，8.38(1H)，8.15-7.82(5H)，7.11-7.00(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.59(1H)，4.33(1H)，4.22(1H)，3.97-3.74(2H)，3.02(1H)，2.77(1H)，2.15-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.80(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.66；MSESI：706.3[M+H]+
实例38
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(吡啶-3-基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.97(1H)，8.60(1H)，8.31(1H)，8.20-7.70(8H)，7.50(1H)，7.12-7.00(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.60(1H)，4.22(2H)，4.07-3.71(2H)，3.01(1H)，2.79(1H)，2.17-1.78(4H)，1.61(1H)，1.18(3H)，0.79(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.65；MSESI：699.4[M+H]+
实例39
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(羟甲基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.12(1H)，8.08(1.5H)，8.0(0.5H)，7.86(1H)，7.80(2H)，7.40(2H)，7.24-7.04(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，5.30(1H)，4.59(1H)，4.56(2H)，4.20(2H)，3.97-3.76(2H)，3.03(1H)，2.75(1H)，2.10-1.80(4H)，1.60(1H)，1.19(3H)，0.80(3H)，0.70(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：652.3[M+H]+
实例40
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.04(1H)，8.19(1H)，8.16(1H)，8.00-7.83(3H)，7.82(2H)，7.54(2H)，7.38(1H)，7.23-7.02(6H)，6.71(1H)，6.51(1H)，4.55(1H)，4.23-4.18(2H)，3.98-3.77(2H)，3.04(1H)，2.80(1H)，2.14-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.80(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65，-74.70；MSESI：688.3[M+H]+
实例41
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-吗啉并苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.08-7.98(2H)，7.98-7.82(2H)，7.76(2H)，7.26-7.06(6H)，6.97(2H)，6.70(1H)，6.55(1H)，4.56(1H)，4.25-4.08(2H)，3.98-3.78(2H)，3.72(4H)，3.20(4H)，3.02(1H)，2.77(1H)，2.14-1.80(4H)，1.60(1H)，1.20(3H)，0.80(3H)，0.70(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.65；MSESI：707.4[M+H]+
实例42
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(吗啉-4-羰基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.31(1H)，8.15-8.10(1.5H)，8.01(0.5H)，7.97-7.82(3H)，7.50(2H)，7.27-7.04(6H)，6.70(1H)，6.52(1H)，4.60(1H)，4.20(2H)，4.00-3.77(2H)，3.75-3.42(8H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.15-1.80(4H)，1.63(1H)，1.20(3H)，0.83(3H)，0.77(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：735.4[M+H]+
实例43
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(3-苯基丙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.74(1H)，8.14(1H)，8.06(0.5H)，8.00(0.5H)，7.92(1H)，7.59(2H)，7.54-7.40(3H)，7.27-7.17(6H)，6.70(1H)，6.52(1H)，4.66(1H)，4.31-4.11(2H)，3.98-3.72(2H)，3.02(1H)，2.78(1H)，2.12-1.80(4H)，1.62(1H)，1.18(3H)，0.78(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：646.4[M+H]+
实例44
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)烟酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.99(1H)，8.70(1H)，8.47(1H)，8.17(1H)，8.10(1H)，8.01(0.5H)，7.98(0.5H)，7.90(1H)，7.50(1H)，7.24-7.02(6H)，6.70(1H)，6.48(1H)，4.58(1H)，4.20(2H)，3.97-3.75(2H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.12-1.80(4H)，1.63(1H)，1.20(3H)，0.85(3H)，0.77(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.68；MSESI：623.3[M+H]+
实例45
6，6，6-三氟-5-羟基-4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-甲基-2-(2-苯氧基乙酰胺基)丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)丙酰胺基)己酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.20(1H)，8.03(0.5H)，7.98(0.5H)，7.92(1H)，7.72(1H)，7.30-7.06(8H)，6.99-6.84(3H)，6.68(1H)，6.53(1H)，4.60-4.45(3H)，4.27-4.13(2H)，3.98-3.76(2H)，3.03(1H)，2.76(1H)，2.15-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.70(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.60，-74.66；MSESI：652.4[M+H]+
实例46
4-((6S，9S，12S)-9-苄基-6-异丙基-12-甲基-4，7，10-三氧代-1-苯基-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酰胺基)-6，6，6-三氟-5-羟基己酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.23(1H)，8.07(0.5H)，8.00(0.5H)，7.90(1H)，7.42-7.02(12H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.56(1H)，4.50(2H)，4.26-4.11(2H)，3.99-3.72(4H)，3.03(1H)，2.72(1H)，2.12-1.90(4H)，1.61(1H)，1.20(3H)，0.72(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：666.4[M+H]+
实例47
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1H-吲哚-5-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ11.31(1H)，8.17-7.95(4H)，7.84(1H)，7.60(1H)，7.40(2H)，7.14-7.01(6H)，6.70(1H)，6.58-6.40(2H)，4.60(1H)，4.24-4.10(2H)，3.98-3.72(2H)，3.02(1H)，2.68(1H)，2.15-1.80(4H)，1.60(1H)，1.20(3H)，0.82(3H)，0.70(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.69；MSESI：661.3[M+H]+
实例48
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.87(1H)，8.31(1H)，8.15-8.00(3H)，7.90(1H)，7.70-7.52(3H)，7.27-6.98(6H)，6.70(1H)，6.46(1H)，4.60(1H)，4.23(2H)，3.98-3.72(2H)，3.04(1H)，2.73(1H)，2.14-1.80(4H)，1.60(1H)，1,20(3H)，0.82(3H)，0.73(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.67，-74.70；MSESI：690.3[M+H]+
实例49
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(1，3，4-噁二唑-2-基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.40(1H)，8.43(1H)，8.18-7.95(5.5H)，7.96-7.80(1.5H)，7.27-7.00(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.58(1H)，4.27-4.14(2H)，3.98-3.75(2H)，3.02(1H)，2.79(1H)，2.14-1.80(4H)，1.60(1H)，1.18(3H)，0.82(3H)，0.76(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.68；MSESI：690.4[M+H]+
实例50
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-苯基噻唑-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.38(1H)，8.32(1H)，8.10(0.5H)，8.05(0.5H)，8.00(3H)，7.92(1H)，7.60-7.50(3H)，7.23(2H)，7.15(3H)，7.05(1H)，6.69(1H)，6.50(1H)，4.60(1H)，4，53(1H)，4.21(1H)，3.97-3.72(2H)，3.04(1H)，2.77(1H)，2.14-1.80(4H)，1.60(1H)，1.20(3H)，0.80(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.68；MSESI：705.3[M+H]+
实例51
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4′-(甲基磺酰基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.33(1H)，8.13-7.93(8H)，7.92-7.80(3H)，7.27-7.04(6H)，6.70(1H)，6.48(1H)，4.60(1H)，4.22(2H)，3.98-3.77(2H)，3.25(3H)，3.04(1H)，2.77(1H)，2.12-1.80(4H)，1.61(1H)，1.20(3H)，0.82(3H)，0.77(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：776.3[M+H]+
实例52
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4′-氟-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.26(1H)，8.14-8.00(2H)，7.99-7.82(3H)，7.80-7.68(4H)，7.30(2H)，7.26-7.02(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.60(1H)，4.30-4.10(2H)，3.99-3.72(2H)，3.03(1H)，2.78(1H)，2.16-1.77(4H)，1.63(1H)，1.20(3H)，0.80(3H)，0.70(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69，-115.0；MSESI：716.3[M+H]+
a试剂和条件：a)适当的酰氯或磺酰氯、Et3N、THF，0℃至室温或适当的羧酸、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；b)LiOH、H2O、THF、MeOH，0℃至室温；c)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温。
根据方案2制备的化合物实例：
实例53
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)吡嗪-2-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.19(1H)，8.90(1H)，8.73(1H)，8.45-8.35(2H)，8.13(0.5H)，8.03(0.5H)，7.90(1H)，7.27-7.10(5H)，7.05(1H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.60(1H)，4.35(1H)，4.20(1H)，3.98-3.72(2H)，3.02(1H)，2.71(1H)，2.14-1.80(4H)，1.60(1H)，1.20(3H)，0.77(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.68；MSESI：624.4[M+H]+
实例54
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)苯甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.20(1H)，8.07(1.5H)，8.00(0.5H)，7.88(1H)，7.80(2H)，7.50(1H)，7.45(2H)，7.23-7.02(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.56(1H)，4.24-4.12(2H)，3.96-3.76(2H)，3.01(1H)，2.78(1H)，2.10-1.80(4H)，1.61(1H)，1.18(3H)，0.80(3H)，0.72(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65，-74.70；MSESI：622.4[M+H]+
a试剂和条件：a)HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温；b)4MHCl的二噁烷溶液、CH2Cl2，0℃至室温；c)癸酰氯或4-苯基苯甲酰氯、Et3N、THF，0℃至室温；
d)LiOH、H2O、THF、MeOH，0℃至室温；e)H2(1atm)、10％Pd/C、MeOH；
f)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；g)TFA/CH2Cl2(1∶1)，0℃至室温。
根据方案3制备的化合物实例：
实例55
(2S)-N1-(6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)-2-((S)-2-((S)-2-癸酰胺基-3-甲基丁酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)戊二酰胺
通过自使用活性炭脱色的乙醇/水再结晶来纯化化合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.01-7.86(3H)，7.71(1H)，7.26-7.05(7H)，6.80-6.64(2H)，6.44(1H)，4.55(1H)，4.20(1H)，4.03(1H)，3.98-3.80(2H)，3.01(1H)，2.80(1H)，2.20-1.94(6H)，1.94-1.55(5H)，1.50-1.30(2H)，1.30-1.10(12H)，0.82(3H)，0.75(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.61，-74.70；MSESI：729.5[M+H]+
实例56
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-4-(甲硫基)-1-氧代丁-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.10-7.82(3H)，7.75(1H)，7.23-7.08(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.52(1H)，4.30(1H)，4.04(1H)，3.98-3.80(2H)，3.00(1H)，2.80(1H)，2.44-2.30(2H)，2.20-1.55(9H)，2.00(3H)，1.52-1.30(2H)，1.30-1.10(12H)，0.81(3H)，0.73(6H)；MSESI：732.5[M+H]+
实例57
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ7.98(1H)，7.95(0.5H)，7.83(1.5H)，7.73(1H)，7.23-7.06(6H)，6.70(1H)，6.47(1H)，4.53(1H)，4.44(1H)，4.05(1H)，3.96-3.78(2H)，3.00(1H)，2.80(1H)，2.20-1.80(6H)，1.70-1.33(6H)，1.30-1.10(12H)，0.83(9H)，0.73(6H)；MSESI：714.5[M+H]+
实例58
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.04-7.87(2H)，7.79-7.70(2H)，7.23-7.04(6H)，6.70(1H)，6.44(1H)，4.55(1H)，4.19-4.01(2H)，3.90(1H)，3.80(1H)，2.98(1H)，2.78(1H)，2.20-1.76(7H)，1.63(1H)，1.50-1.32(2H)，1.30-1.13(12H)，0.80(9H)，0.75(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.61，-74.69；MSESI：700.5[M+H]+
实例59
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.03(1H)，8.00(1H)，7.90(1H)，7.70(1H)，7.30-7.07(11H)，6.72(1H)，6.47(1H)，4.60-4.42(2H)，4.05(1H)，4.00-3.74(2H)，3.00-2.82(2H)，2.80-2.62(2H)，2.20-1.97(3H)，1.97-1.73(3H)，1.62(1H)，1.52-1.32(2H)，1.30-1.15(12H)，0.82(3H)，0.70(6H)；MSESI：748.5[M+H]+
实例60
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
单一非对映异构体；使用中间体9制备。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.07(1H)，7.95(1H)，7.78(1H)，7.70(1H)，7.25-7.10(6H)，6.70(1H)，6.40(1H)，4.43(1H)，4.17(1H)，4.09(1H)，3.96-3.79(2H)，2.94(1H)，2.81(1H)，2.20-1.80(6H)，1.68(1H)，1.51-1.38(2H)，1.30-1.14(12H)，1.05(3H)，0.83(3H)，0.74(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.67；MSESI：672.5[M+H]+
实例61
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-(((3R)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)癸酰胺
单一非对映异构体；使用中间体ent-9制备；通过自EtOAc/EtOH缓慢再结晶纯化。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.10(1H)，7.97(1H)，7.81(1H)，7.64(1H)，7.25-7.10(6H)，6.66(1H)，6.43(1H)，4.42(1H)，4.18(1H)，4.10(1H)，3.96-3.77(2H)，2.95(1H)，2.80(1H)，2.20-1.80(6H)，1.62(1H)，1.44-1.36(2H)，1.30-1.14(12H)，1.02(3H)，0.82(3H)，0.74(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62；MSESI：672.5[M+H]+
实例62
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.32-8.16(2H)，8.03(1H)，7.99-7.89(2H)，7.83-7.62(5H)，7.55-7.43(2H)，7.40(1H)，7.24-7.01(6H)，6.70(1H)，6.42(1H)，4.50(1H)，4.32-4.12(2H)，3.99-3.77(2H)，2.96(1H)，2.81(1H)，2.27-1.78(4H)，1.62(1H)，1.03(3H)，0.81(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.66，-74.69；MSESI：698.4[M+H]+
实例63
N-((2S)-1-(((2S)-1-((2-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.30-8.20(2H)，8.10(1H)，7.91(2H)，7.84(1H)，7.80-7.64(4H)，7.47(2H)，7.40(1H)，7.25-7.01(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.60(1H)，4.23(1H)，4.00-3.80(2H)，3.79-3.59(2H)，3.01(1H)，2.81(1H)，2.16-1.79(4H)，1.62(1H)，0.83(3H)，0.78(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.68；MSESI：684.4[M+H]+
实例64
N-((2S)-1-(((2S)-1-((1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基甲酰基)环丙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
分离为非对映异构体的2.4∶1混合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.21(0.7H)，8.15(0.3H)，8.10(0.3H)，8.00(0.7H)，7.98(0.3H)，7.90(0.7H)，7.70-7.58(2H)，7.50-7.36(4H)，7.18(2H)，7.10(2H)，6.97-6.75(6H)，6.40(0.3H)，6.38(0.7H)，6.00(1H)，4.00(1H)，3.90(1H)，3.67-3.50(2H)，2.70-2.50(2H)，1.86-1.30(5H)，0.94-0.72(1.7H)，0.72-0.48(6.3H)，0.30(0.7H)，0.13(0.3H)，0.02(1H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62(次要非对映异构体)，-74.84(主要非对映异构体)；MSESI：710.4[M+H]+
实例65
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2R)-1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
单一非对映异构体；使用中间体9制备。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.30(1H)，8.20(1H)，8.03(1H)，7.97(2H)，7.81(1H)，7.76-7.68(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.24-7.05(6H)，6.70(1H)，6.40(1H)，4.50(1H)，4.33-4.16(2H)，3.97-3.79(2H)，2,95(1H)，2.82(1H)，2.10-1.78(4H)，1.70(1H)，1.05(3H)，0.82(3H)，0.78(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.66；MSESI：698.4[M+H]+
实例66
N-((2S)-1-(((2S)-1-((1-(((3S)-6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基甲酰基)环丁基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
单一非对映异构体；使用中间体9制备。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.40(1H)，8.35(2H)，7.97(2H)，7.73(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.30-7.12(6H)，7.06(1H)，6.70(1H)，6.36(1H)，4.43(1H)，4.23(1H)，3.92(1H)，3.81(1H)，3.06-2.88(2H)，2.52(1H)，2.24(1H)，2.13-1.53(9H)，0.90(3H)，0.84(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62；MSESI：724.4[M+H]+
实例67
N-((2S)-1-(((2S)-1-((1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
通过在硅胶上用0-4％MeOH的EtOAc溶液洗脱的快速色谱纯化。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.31-8.18(2H)，7.99-7.88(3H)，7.80-7.64(4H)，7.47(2H)，7.42-7.27(2H)，7.25-7.00(6H)，6.70(1H)，6.36(1H)，4.46(1H)，4.24(1H)，3.98-3.80(2H)，3.01(1H)，2.82(1H)，2.18-1.80(4H)，1.62(1H)，1.32-1.20(6H)，0.95-0.75(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.57，-74.67；MSESI：712.4[M+H]+
实例68
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.27(1H)，8.13(2H)，8.00(1H)，7.94(2H)，7.76(4H)，7.50(2H)，7.42(1H)，7.28-7.02(11H)，6.72(1H)，6.55(1H)，4.62-4.46(2H)，4.23(1H)，3.99-3.77(2H)，3.05-2.88(2H)，2.86-2.63(2H)，2.13-1.74(4H)，1.65(1H)，0.83(3H)，0.74(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.69，-74.72；MSESI：774.4[M+H]+
a试剂和条件：a)适当的酰氯、NaOH、H2O、THF，0℃至室温；
b)N-甲基吗啉、i-BuOCOCI、CH2Cl2、0℃或HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温；
c)LiOH、H2O、THF、MeOH，0℃至室温；d)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温。
根据方案4制备的化合物实例：
实例69
N-((2S)-1-(((2R)-1-(((2R)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.42(1H)，8.30(1H)，8.14(1H)，7.95(2H)，7.80(0.5H)，7.73(4.5H)，7.46(2H)，7.40(1H)，7.24(2H)，7.20-7.05(4H)，6.70(1H)，6.45(1H)，4.56(1H)，4.22(1H)，4.17(1H)，3.97-3.74(2H)，3.12(1H)，2.68(1H)，2.10-1.80(4H)，1.60(1H)，1.35-1.20(3H)，0.75(3H)，0.58(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.75；MSESI：698.4[M+H]+
a试剂和条件：a)适当的酰氯、NaOH、H2O、THF，0℃至室温；
b)N-甲基吗啉、i-BuOCOCl、CH2Cl2，0℃或HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温；
c)LiOH、H2O、THF、MeOH，0℃至室温；d)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；e)H2(1atm)、10％Pd/C、MeOH；f)HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温。
根据方案5制备的化合物实例：
实例70
N-((2S)-1-(((2R)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
分离为非对映异构体的4∶1混合物。
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.48(1H)，8.36(1H)，8.05(1H)，7.97(2H)，7.88(1H)，7.76(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.23(2H)，7.20-7.06(4H)，6.70(1H)，6.53(1H)，4.52(1H)，4.22(1H)，4.17(1H)，3.96(1H)，3.83(1H)，3.05(1H)，2.76(1H)，2.18-1.82(4H)，1.61(1H)，1.18(3H)，0.78(3H)，0.57(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63；MSESI：698.4[M+H]+
实例71
N-((2S)-1-((2-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.44-8.30(2H)，8.00(2H)，7.90(2H)，7.76(4H)，7.48(2H)，7.40(1H)，7.18(1H)，6.68(1H)，6.53(1H)，4.23(2H)，3.99-3.80(2H)，3.76(2H)，2.20-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.97(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64.-74.66；MSESI：608.4[M+H]+
实例72
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.32(1H)，8.18(1H)，8.00-7.80(4H)，7.72(4H)，7.48(2H)，7.40(1H)，7.17(1H)，6.68(1H)，6.56(1H)，4.30(2H)，4.20(1H)，3.98-3.73(2H)，2.20-1.80(4H)，1.60(1H)，1.25-1.10(6H)，0.93(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.53，-74.54；MSESI：622.4[M+H]+
实例73
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-4-(甲硫基)-1-氧代丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.39(1H)，8.16(1H)，8.00-7.85(4H)，7.75(4H)，7.47(2H)，7.40(1H)，7.19(0.5H)，7.11(0.5H)，6.70(1H)，4.38(1H)，4.30-4.14(2H)，3.96-3.76(2H)，2.42(2H)，2.20-1.72(6H)，2.00(3H)，1.60(1H)，1.20(3H)，0.94(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.69；MSESI：682.4[M+H]+
实例74
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.40(1H)，8.03-7.80(5H)，7.74(4H)，7.46(2H)，7.40(1H)，7.20(0.5H)，7.06(0.5H)，6.65(1H)，6.47(1H)，4.33(1H)，4.30-4.10(2H)，3.95-3.72(2H)，2.21-1.79(5H)，1.60(1H)，1.23-1.10(3H)，0.92(6H)，0.83(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.66，-74.70；MSESI：650.4[M+H]+
实例75
N-((5S，8S，11S)-17-氨基-8-苄基-11-甲基-6，9，12，17-四氧代-14-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)-2-硫杂-7，10，13-三氮杂十七烷-5-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.54(1H)，8.03(2H)，7.98(2H)，7.89(1H)，7.75(4H)，7.48(2H)，7.40(1H)，7.23-7.05(6H)，6.70(1H)，6.48(1H)，4.58(1H)，4.53(1H)，4.20(1H)，4.00-3.76(2H)，3.03(1H)，2.80(1H)，2.40(2H)，2.15-1.80(5H)，2.02(3H)，1.62(1H)，1.21(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.66；MSESI：730.4[M+H]+
实例76
N-((2R)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.44(1H)，8.31(1H)，8.17(1H)，7.95(2H)，7.87(0.5H)，7.80(0.5H)，7.77(4H)，7.44(2H)，7.40(1H)，7.24(2H)，7.20-7.07(4H)，6.70(1H)，4.57(1H)，4.22(1H)，4.18(1H)，3.96-3.75(2H)，3.13(1H)，2.73(1H)，2.10-1.80(4H)，1.60(1H)，1.25(3H)，0.77(3H)，0.58(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.75；MSESI：698.4[M+H]+
实例77
N-((1S)-2-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.81(1H)，8.41(1H)，8.10-7.92(3H)，7.86(1H)，7.75(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.38-7.00(11H)，6.70(1H)，6.48(1H)，5.63(1H)，4.60(1H)，4.20(1H)，3.98-3.78(2H)，3.09(1H)，2.82(1H)，2.17-1.80(3H)，1.61(1H)，1.20(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.67；MSESI：732.4[M+H]+
实例78
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.60(1H)，8.17(2H)，7.90(1H)，7.84(2H)，7.72(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.33-7.09(11H)，6.70(1H)，6.49(1H)，4.63(1H)，4.58(1H)，4.22(1H)，4.00-3.78(2H)，3.03(2H)，2.95(1H)，2.82(1H)，2.18-1.80(3H)，1.61(1H)，1.21(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.65；MSESI：746.4[M+H]+
实例79
N-(2-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.79(1H)，8.21-8.12(2H)，7.94(2H)，7.87-7.63(5H)，7.45(2H)，7.40(1H)，7.26-7.07(6H)，6.70(1H)，6.47(1H)，4.57(1H)，4.21(1H)，4.00-3.70(3H)，3.02(1H)，2.80(1H)，2.15-1.80(4H)，1.62(1H)，1.21(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.68；MSESI：656.4[M+H]+
实例80
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.57(1H)，8.03-7.95(4H)，7.82(1H)，7.77(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.22-7.05(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.50(1H)，4.40(1H)，4.20(1H)，4.00-3.77(2H)，3.02(1H)，2.81(1H)，2.16-1.80(3H)，1.61(1H)，2.22(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.65，-74.68；MSESI：670.4[M+H]+
实例81
N-((5R，8S，11S)-17-氨基-8-苄基-11-甲基-6，9，12，17-四氧代-14-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)-2-硫杂-7，10，13-三氮杂十七烷-5-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.52(1H)，8.35(1H)，8.17(1H)，7.96(2H)，7.90(0.5H)，7.72(4.5H)，7.48(2H)，7.40(1H)，7.24-7.04(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.59(1H)，4.51(1H)，4.21(1H)，3.98-3.78(2H)，3.10(1H)，2.73(1H)，2.38-2.15(2H)，2.12-1.80(3H)，2，00(3H)，1.80-1.48(3H)，1.24(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.72；MSESI：730.4[M+H]+
实例82
N-((5R，8R，11S)-17-氨基-8-苄基-11-甲基-6，9，12，17-四氧代-14-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)-2-硫杂-7，10，13-三氮杂十七烷-5-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.60(0.5H)，8.56(0.5H)，8.18-8.05(2H)，7.98(2H)，7.85(0.5H)，7.75(4.5H)，7.48(2H)，7.40(1H)，7.23-7.11(6H)，6.77(0.5H)，6.67(0.5H)，6.45(1H)，4.50(2H)，4.20(1H)，3.99-3.78(2H)，2.98(1H)，2.84(1H)，2.44(2H)，2.15-1.52(6H)，2.00(3H)，1.11(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.65；MSESI：730.3[M+H]+
a试剂和条件：a)HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；b)4MHCl的二噁烷溶液、CH2Cl2，0℃至室温；c)适当的酰氯或磺酰氯、Et3N、THF，0℃至室温或适当的羧酸，HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温；d)LiOH、H2O、THF、MeOH，0℃至室温；
e)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温。
根据方案6制备的化合物实例：
实例83
2-((S)-2-([1，1′-联苯基]-4-甲酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.72(1H)，8.48(1H)，7.99(2H)，7.75(5H)，7.50(3H)，7.40(1H)，7.22-7.00(5H)，6.70(0.5H)，6.63(0.5H)，6.45(1H)，4.16(1H)，4.01(1H)，3.98-3.73(2H)，3.58(1H)，3.39(1H)，3.24(2H)，2.18-1.80(4H)，1.62(1H)，1.18(3H)，0.94(3H)，0.77(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.60，-74.66；MSESI：710.4[M+H]+
实例84
N-((2S)-1-(((1S)-2-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.42(3H)，7.96(2H)，7.85(0.5H)，7.76(4.5H)，7.50(2H)，7.40(3H)，7.36-7.20(3H)，7.15(0.5H)，7.04(0.5H)，6.69(0.5H)，6.63(0.5H)，6.48(1H)，5.58(1H)，4.40(1H)，4.22(1H)，3.85(1H)，3.75(1H)，2.17(1H)，2.05-1.75(3H)，1.57(1H)，1.20(3H)，0.90(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.67，-74.70；MSESI：684.3[M+H]+
实例85
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-4-苯基丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.60(1H)，8.22(1H)，8.03-7.86(4H)，7.76(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.28-7.07(6H)，6.70(1H)，6.60(1H)，4.40-4.15(3H)，4.06-3.72(2H)，2.60(2H)，2.20(1H)，2.15-1.76(5H)，1.61(1H)，1.20(3H)，0.97(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.71；MSESI：712.4[M+H]+
实例86
N-((2S)-1-(((2R)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-4-苯基丁-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.57-8.42(2H)，8.00(2H)，7.93(1H)，7.84(1H)，7.74(4H)，7.49(2H)，7.40(1H)，7.25(2H)，7.16(4H)，6.70(1H)，6.48(1H)，4.22(3H)，3.98-3.75(2H)，2.61(1H)，2.51(1H)，2.21-1.72(6H)，1.61(1H)，1.20(3H)，1.00(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.65；MSESI：712.4[M+H]+
实例87
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-(4-羟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
通过RP-HPLC(固定相：PhenomenexC12Synergi4uMax-RP；流动相A：0.1％甲酸的H2O溶液；流动相B：0.1％甲酸的CH3CN溶液；梯度在A中的18-58％B；运行时间＝20分钟)纯化。
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.12(1H)，8.29(1H)，8.06-7.82(5H)，7.75(4H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.20(1H)，7.00(2H)，6.69(1H)，6.62-6.44(3H)，4.50(1H)，4.20(2H)，4.00-3.78(2H)，2.92(1H)，2.67(1H)，2.18-1.80(4H)，1.62(1H)，1.20(3H)，0.80(6H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.69；MSESI：714.4[M+H]+
实例88
甲酸3-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-(4-羟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)苯基)吡啶-1-鎓
通过RP-HPLC(固定相：PhenomenexC12Synergi4uMax-RP8A50x20mm；流动相A：0.1％甲酸的H2O溶液；流动相B：0.1％甲酸的CH3CN溶液；梯度在A中的12-52％B；运行时间＝20分钟)纯化。
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.20(1H)，8.94(1H)，8.60(1H)，8.50(1H)，8.38(1H)，8.14(1H)，8.08-7.87(5H)，7.83(2H)，7.51(1H)，7.19(0.5H)，7.15(0.5H)，7.00(2H)，6.70(1H)，6.62(1H)，6.66(2H)，4.48(1H)，4.20(2H)，3.96-3.74(2H)，2.91(1H)，2.57(1H)，2.11-1.80(4H)，1.61(1H)，1.19(3H)，0.85(3H)，0.77(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.64，-74.70；MSESI：715.4[M+H]+
实例89
N-((2S)-1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ10.79(1H)，8.28(1H)，8.13(1H)，8.05-7.80(4H)，7.75(4H)，7.58(1H)，7.50(2H)，7.41(1H)，7.30(1H)，7.18(2H)，7.04(1H)，6.95(1H)，6.73(1H)，6.50(1H)，4.61(1H)，4.30-4.15(2H)，3.99-3.77(2H)，3.14(1H)，2.98(1H)，2.15-1.80(4H)，1.65(1H)，1.30-1.10(3H)，0.87(3H)，0.80(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.65；MSESI：737.4[M+H]+
通过RP-HPLC(固定相：PhenomenexC12Synergi4uMax-RP8A50x20mm；流动相A：0.1％甲酸的H2O溶液；流动相B：0.1％甲酸的CH3CN溶液；梯度在A中的20-60％B；运行时间＝20分钟)纯化。
a试剂和条件：a)HATU、DIPEA、DMF，-20℃至室温；b)LiOH、H2O、THF、MeOH，0℃至室温；
c)中间体8、9或ent-9、HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温；d)4MHCl的二噁烷溶液，CH2Cl2，0℃至室温；e)适当的酰氯或磺酰氯、Et3N、THF，0℃至室温或适当的羧酸、HATU、DIPEA、DMF，0℃至室温。
根据方案7制备的化合物实例：
实例90
N-(1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酰基)环戊基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ8.66(0.5H)，8.61(0.5H)，8.00(2H)，7.86-7.60(6H)，7.58-7.36(4H)，7.13(6H)，6.68(1H)，6.45(1H)，4.44(1H)，4.15(1H)，3.99-3.78(2H)，3.10(1H)，2.87(1H)，2.25(1H)，2.17-1.74(5H)，1.73-1.40(6H)，1.23(3H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.62，-74.67；MSESI：710.4[M+H]+
实例91
N-(1-(((2S)-1-(((2S)-1-((6-氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-6-氧代己-3-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酰基)环丙基)-[1，1′-联苯基]-4-甲酰胺
1HNMR(DMSO-d6)：δ9.10(1H)，8.02-7.90(3H)，7.85-7.66(6H)，7.50(2H)，7.40(1H)，7.12(6H)，6.70(1H)，6.50(1H)，4.53(1H)，4.20(1H)，4.00-3.78(2H)，3.02(1H)，2.90(1H)，2.18-1.79(3H)，1.61(1H)，1.40-1.15(5H)，1.03(1H)，0.93(1H)；19FNMR(DMSO-d6)：δ-74.63，-74.71；MSESI：682.3[M+H]+。
然后使用生物PCSK9基测定法筛选本发明化合物。
实例92
初始筛选
在不存在(DMSO)或存在10μM、100μM或渐增浓度(11、33、100μM)的试验化合物下培养稳定表达WTPCSK9(+V5)的HepG2细胞过夜(24小时)。收集24小时条件培养基，离心，并移除上清液用于通过ELISA(100μl的1∶30稀释)进行PCSK9定量。用含有蛋白酶抑制剂混合物(RocheAppliedScience)的250ul/孔的放射免疫沉淀测定缓冲液(RIPA)(50mMTris-HCl，pH7.8，150mMNaCl，1％NonidentP-40，0.5％脱氧胆酸钠，0.1％SDS)裂解细胞，并在11,300xg下沉淀5分钟。移除上清液，用于通过ELISA(100μl的1∶20稀释)的细胞PCSK9定量和通过Bio-RadDC蛋白质测定法(Bio-Rad)的总蛋白质测定(DubucG、TremblayM、ParéG、JacquesH、HamelinJ、BenjannetS、BouletL、GenestJ、BernierL、SeidahNG、DavignonJ.2010.AnewmethodformeasurementoftotalplasmaPCSK9：clinicalapplications.JLipidRes.51：140-149)。使超过165种化合物接受在100μM下通过PCSK9分泌测定的第一次筛选。
确定为在此测定中相对于DMSO对照降低PCSK9-培养基/细胞比至少30％(30％抑制)的某些化合物进一步测试其以剂量依赖性方式抑制PCSK9分泌的能力。至少24种化合物被确定为以剂量依赖性方式抑制PCSK9分泌(实例1至24中所述的化合物)。
图1和表I呈现一组精选的试验化合物。图2示出了在稳定表达PCSK9(+V5)的HepG2细胞中剂量依赖性抑制PCSK9分泌，以选择试验化合物，即19、22a和23，其在33.3μM的剂量下，相对于DMSO对照降低PCSK9-培养基/细胞在30％与50％之间。
表I.在10μM的浓度下测试的选定化合物的PCSK9分泌
使用以下公式的计算活性％：
实例93
细胞毒性分析
在初始筛选后，使用MTT毒性试验(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基溴化四唑鎓)，根据制造商方案(Promega)(对于参见图3)或使用细胞活力测定(参见表II)，测试化合物的细胞毒性。
对于MTT毒性测定法，将过度表达WTPCSK9(+V5)的HepG2稳定细胞接种于96-孔板(GreinerBioOne)中并培养20小时。简短洗涤后，将细胞在存在渐增浓度(11、33、100μM)的化合物或不存在DMSO(对照)下培养过夜(24小时)。MTT测定法(Promega)由以下组成：按照制造商指示，加入20ul/孔MTT试剂并在37℃下培养45分钟。记录在490nm的吸光度，并针对由于非特异性吸光度(690nm)的背景校正。在33.3μM或更低下具有低毒性的化合物被选为图3中的示例，为化合物19、22a、23、4和17。
对于细胞存活力测定法，在存在33μM化合物或在存在DMSO(对照)下测量在实例92中所述的PCSK9分泌测定法期间HepG2细胞的细胞密度。下表II呈现在33.3μM或更低下具有低毒性的化合物。
表II：在存在33μM的浓度的选定化合物下的细胞存活力，呈现为在其不存在(DMSO)时所获得的细胞存活力的百分比
选定PCSK9抑制化合物对PCSK9的活性进一步使用各种测定法表征，该测定法包括Western印迹分析和对PCSK9自动处理和分泌的效应的生物合成分析。选定PCSK9抑制化合物的对LDLR降解的效应和活是使用一系列测定法表征，包括免疫荧光测定法、Dil-LDL摄取测定法和细胞表面LDLR的FACS分析，以及总LDLR的Western印迹分析。
实例94
免疫荧光测定法
PCSK9抑制化合物是通过细胞表面LDLR和人转铁蛋白受体作为对照在HepG2初始细胞中的免疫荧光来表征。将细胞铺于放置在24孔细胞培养板中的聚-L-赖氨酸涂覆(50ug/ml)的圆形显微镜盖玻片1.12mm厚度(Fisherbrand12CIR#1)。在接种后第24h，在不存在(DMSO)或在存在33.3μM的PCSK9抑制剂下培养细胞。20小时温育期后，将细胞用3.7％的多聚甲醛固定。在非透的条件下进行人LDLR的免疫荧光(绿色标签)。将细胞用1％BSA阻断，接着在4℃下用一级抗体(在1％BSA中的1∶200山羊多克隆抗hLDLR，R&DSystems)温育过夜。在室温下用Alexafluor标记的二级抗体培养1小时揭示抗原-抗体复合物并安装在ProLongGold抗淬灭试剂(MolecularProbes，Invitrogen)中。用共聚焦显微镜(ZeissLSM-710)进行免疫荧光分析。细胞核用DAPI染色(蓝色标签)。LDLR是用抗LDLRAb染色(绿色标签)。通过在细胞表面增加的LDLR检测PCSK9活性对LDLR降解的抑制，如在图4中针对化合物19所例示。
实例95
DiI-LDL测定法
PCSK9抑制化合物也使用如在Poirier等人，J.Biol.Chem.284：28856-28864，2009中所述的Dil-LDL荧光摄取测定法表征。该方法包括在人肝细胞衍生的HuH7或HepG2细胞系或人胚胎HEK293细胞，在存在或不存在化合物下经由LDLR内化荧光测定DiI-LDL细胞并入(细胞表面LDLR活性的量度)。
将HepG2初始细胞和HEK293初始细胞接种在96孔板(有透明底部的CellBindTM黑板(Corning；目录号3340))。在接种后第20h，在不存在(DMSO或阴性对照)或在存在不同浓度的化合物下培养细胞。每个条件制备一式三份。在6小时培养后，将Dil-LDL(BiomedicalTechnologies(目录号BT-904))添加到细胞培养基，且细胞返回至组织培养箱再培养18小时。将板在SpectraMaxGeminiEMTM平板读数器(MolecularDevices)中进行扫描(底部读)。对于每个孔，将原始Dil-LDL摄取测定为在孔中3个不同点的9个读数的平均荧光强度(RFU)(激发：520nm/发射：575nm，截止：550nm)。每个孔中的Dil-LDL摄取通过按照制造商指示进行CyQuantTM细胞分析(Invitrogen；目录号C7026)对细胞总数校正。校正的Dil-LDL摄取报告为％DMSO对照并从一式三份孔获得。通过DiI-LDL摄取的增加检测PCSK9活性对LDLR降解的抑制(在图5A中针对化合物19、22a、23、24、21a、21b在HepG2初始细胞中示例)。选择化合物i作为阴性对照且化合物1、17和2显示在该测定法中在HepG2细胞中没有可测量的活性。化合物针对PCSK9的特异性示例于图5B中，其示出了在已知缺乏PCSK9表达的HEK293细胞中，相同的一组化合物对Dil-LDL摄取没有影响。
表III：在10μM浓度的选定化合物的存在下，在HepG2细胞中的Dil-LDL摄取，其呈现为在其不存在(DMSO)时所获得的Dil-LDL摄取的百分比
为了进一步测试这些化合物是否还可以抑制PCSK9的功能突变体D374Y的增益功能，通过使用Dil-LDL荧光摄取测定法分析表达PCSK9-D374Y的细胞。化合物的抑制效果还使用在Dil-LDL摄取测定法中肝脏来源的小鼠细胞系FL-83B(ATCC，CRL-2390)表征。
实例96
Western印迹
测试化合物其在人类肝细胞细胞系HepG2中抑制PCSK9的LDLR增强型降解的能力。在不存在或存在试验PCSK9抑制化合物下，将细胞培养24h。在培养后，将细胞在RIPA中裂解。蛋白质通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并印迹在聚偏二氟乙烯(PVDF，PerkinElmer)膜(GEHealthcare)上。然后在存在人LDLR抗体(1∶1000，R&D体系)和β-肌动蛋白抗体(1∶2500，Sigma)下培养膜。合适的辣根过氧化物酶共轭的二级抗体(1∶10,000，Sigma)被用于用ECL加试剂盒(GEHealthcare)检测增强的化学发光。在这些测定法中PCSK9功能的抑制是通过增加的总LDLR/β-肌动蛋白的比率检测，如通过Western印迹分析所测得。使用图像JTM软件获得蛋白质带的量化。图5C例示在不存在(Cnt_0)或存在渐增浓度的化合物19下培养24h的HepG2初始细胞中总LDLR的Western印迹分析。将标准化为β-肌动蛋白的总LDLR水平针对每个条件以对照(Cnt)％绘图。
实例97
FACS测定法
PCSK9抑制化合物阻止PCSK9对细胞表面LDLR的活性的能力还通过使用如在BenjannetS.等人J.Biol.Chem.285：40965-40978，2010中所述的流式细胞术分析进行测量。在HepG2细胞表面的LDLR水平是通过使用抗人类LDLR抗体(1∶100，mAb-C7，SantaCruzBiotechnology)和二级AlexaFluor647驴抗小鼠(MolecularProbes)抗体进行测量。然后通过FACS针对PI和AlexaFluor647两者使用FACSBDLSR(BDBiosciences)分析活细胞(PI阴性)。细胞表面LDLR是相对于对照(未处理细胞)记录。在这些测定法中PCSK9功能的抑制是通过增减的阳性细胞数而检测，阳性细胞数与在细胞表面的LDLR表达增加相关。
更具体地，将人类肝母HepG2细胞(4x105个细胞/孔)接种在12孔板(GreinerBioOne)的完全培养基中，并在37℃下培养20小时，接着在37℃下在无血清培养基中洗涤1小时。接下来，移除洗涤培养基，并将细胞以含有10uM化合物或DMSO对照(0.4％终浓度)的0.9ml/孔培育培养基培养过夜(24小时)。在用缓冲液A冲洗一次后，接着再用EDTA溶液(2.5mMEDTA-2Na)冲洗，通过在37℃下在存在新制EDTA溶液(1ml)下培养20分钟，来分离细胞。在细胞分离后的所有步骤是在冰上或4℃下进行。为了终止分离，将含有细胞转移到含有3ml缓冲液A的15ml管中，并立即以900rpm(100g)(4℃)离心5分钟。将细胞重新悬浮于500ul缓冲液A中，连同1∶250人类LDLR抗体一起，并在冰上培养10分钟。用5ml缓冲液A洗涤细胞一次，离心5分钟，重新悬浮于含有1∶500AlexaFluor647二级抗体的500ul缓冲液A，并在冰上培养5分钟。染色后，用5ml缓冲液A洗涤细胞一次，离心5分钟，并重新悬浮于含有1.67ug/ml碘化丙锭的300ul缓冲液A。然后通过针对AlexaFluor647(细胞表面LDLR)的FACS，使用FACS-CyAnADP流式细胞仪(BeckmanCoulter(DAKO))和Summit软件(SummitSonwareInc.)分析活细胞(碘化丙锭阴性)的固定数目(2,000个细胞)。
材料：
人类HepG2细胞系：ATCC，HB-8065
接种培养基：完全培养基-EMEM(高葡萄糖+丙酮酸钠)(Wisent)+10％FBS
洗涤培养基：无血清培养基-EMEM(高葡萄糖+丙酮酸钠)(Wisent)
具有化合物的培养基：EMEM(高葡萄糖+丙酮酸钠)(Wisent)+0.07％BSA(Sigma-Aldrich)
缓冲液A：无钙和镁的1XD-PBS(Wisent311-425-CL)+0.5％BSA(SigmaA7409-50ml)+1ug/L葡萄糖(Wisent609-036-EL)。
一级抗体：人LDLR抗体，单克隆小鼠IgG1克隆#472413(MAB2148，R&DSystems)
二级抗体：Alexa647山羊抗小鼠IgG(H+L)*2mg/mL*(A21235，MolecularProbes)
碘化丙锭：1mg/ml溶液(P4864，Sigma)
结果呈现于表IV中。
表IV-在存在和不存在(DMSO)10μM浓度的选定化合物下，FACS-LDLR，表示为LDLR阳性细胞的百分比
还在小鼠和人类原代肝细胞上测试PCSK9抑制化合物，以测量其对细胞表面LDLR的效应。使用小鼠原代肝细胞的优点是，它允许测量分别在野生型或表达或缺乏PCSK9的基因敲除小鼠的背景下化合物的特异性。
实例98
在动物模型中PCSK9-诱导的LDLR降解的抑制的表征
然后在表达人类PCSK9的小鼠模型中使用候选的PCSK9抑制化合物，以评估其降低体内血浆胆固醇水平的能力。
在过度表达人类PCSK9的小鼠中测试化合物。从其自己的启动子构建转基因品系(Herbert，B.，等人(2010).Arteriosclerosis，Thrombosis，andVascularBiology，30(7)：1333-1339)，其携带人类基因组DNA中表达人类PCSK9的～190kb(WT、D374Y低或D374Y高)。进一步交叉产生在Pcsk9-/-Ldlr+/-背景下表达人类PCSK9转基因的小鼠品系(Ldlr杂合子)。这通过小鼠PCSK9基因的内源性表达消除干扰并提高其LDLc水平(图6)。通过多次回交，在纯的C57BL/6背景中获得这些模型小鼠，以用于分析的均一性和再现性。作为特异性的对照，测试在Ldlr-/-背景中的转基因效应。
小鼠注射：化合物是静脉内注射到WT、Pcsk9-/-、Ldlr-/-和Pcsk9-Tg小鼠，以6只小鼠/基因型(图6)。在第一周期间每天且在接下来2周每三天测量总胆固醇(TC)、LDLc和PCSK9水平。血浆中剩余的未络合的PCSK9的水平也是通过免疫沉淀，使用先前描述的抗体(Zaid，A.，等人(2008).Hepatology，48(2)：646-65)进行测量。在另一组实验中，在最低LDLc的时间点(注射后4-7天)杀死6只小鼠，并分析其FPLC血浆脂质谱，以及肝LDLR蛋白质。仔细监测任何明显的毒性和/或发病率效应。Pcsk9-/-、Ldlr-/-小鼠的对照允许验证所观察到的效应是PCSK9-依赖性的。
他汀+PCSK9抑制化合物的效应：评估阿托伐他汀和抑制化合物的组合，因为他汀类药物增加PCSK9表达，同时降低LDLR表达(Dubuc，G.，等人(2004).Arteriosclerosis，Thrombosis，andVascularBiology，24(8)：1454-1459；Lakoski，S.G.，等人(2009).TheJournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism，94(7)：2537-2543)，并已表明他汀类药物甚至进一步降低Pcsk9-/-小鼠的LDLc(Rashid，S.等人(2005).ProcNatlAcadSciUSA102(15)：5374-5379)。

Claims (164)

1.一种式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或外消旋混合物或立体异构体，
其中：
R1为-CH(OH)Ra或-B(ORb)(ORc)；
R2为-H、-CH2Rd、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；
R3、R4、R5、R6、R7和R8是相同或不同的且独立地为氢或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6硫代烷基、C1-6氨基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基、-CN、-C(O)N(Rf)Rg、-C(O)ORf、-C(Rf)(Rg)ORh、-ORf、-OC(O)ORf、-OC(O)NRf(Rg)、-SRf、-S(O)nRf、-S(O)nN(Rf)Rg、-S(O)nN(Rf)C(O)Rg、-N(Rf)Rg、-N(Rf)C(O)Rg、--N(Rf)C(O)ORg、-N(Rf)C(O)N(Rg)(Rh)、-N(Rf)S(O)nRg和-N(Rf)S(O)N(Rg)Rh取代基取代；
当(R3和R4)或(R5和R6)或(R7和R8)不是氢时，括号内的对也可以与-C(O)-、-CO2-、-C(O)N(H)-、-C(O)N(Rx)-、-O-、-NH-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-、-S(O)nN(H)-、-S(O)nN(Rx)-基团连接以形成环状结构；
R9为RiC(O)-、RiS(O)n-、RiOC(O)-、RiNHC(O)-、RiNHS(O)n-、Rk(Rl)NC(O)-、Rl(Rl)NS(O)n-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或一个或多个氨基酸残基；
Ra为C1-3烷基、C1-2氟烷基或环丙基；
Rb和Rc是相同或不同的且独立地为H或C1-6烷基或可以连接在一起以形成环状5-或6-员环结构，或与另外的脂族或芳族环体系稠合，所述环状5-或6-员环结构或脂族或芳族环体系任选地经一个或多个C1-6烷基和/或C1-6卤代烷基取代基取代；
Rd和Re是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)--O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Rf、Rg、Rh、Rk和Rl是相同或不同的且独立地为H或以下基团中的一者：C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基，或可以直接或与-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Rx)-、-O-、-N(Rx)-、-S-、-S(O)n-或-S(O)nN(Rx)-基团连接在一起以形成环状3-8员环结构；
Ri为C1-10烷基、C1-10杂烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基、杂芳基、C1-10烷基-C3-8环烷基、C1-10烷基-杂环基、C1-10烷基-芳基、C1-10烷基-杂芳基、C1-10杂烷基-C3-8环烷基、C1-10杂烷基-杂环基、C1-10杂烷基-芳基或C1-10杂烷基-杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rm为C1-10烷基、C1-10杂烷基、C3-8环烷基、C1-10卤代烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述基团任选地经一个或多个卤素、C1-6氨基烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷基、C3-8环烷基、C1-6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代；
Rj为ORd或N(Rd)(Re)；
Rx为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-4环烷基、-C(O)Ry、-C(O)ORy、-C(O)NH2、-C(O)NH(Ry)或-C(O)NHS(O)nRy；
Ry为C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-4环烷基；
m为值0或1的整数；且
n为值1或2的整数，
限制条件为：
1)当R1为-CH(OH)Ra时，R2为-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re；且
2)当R1为-B(ORb)(ORc)时，R2为-H、-CH3、-CHRd(Re)、-CH2(CH2)mC(O)Rj、-CH2(CH2)mC(O)N(Rd)Re或-CH2(CH2)mS(O)nN(Rd)Re。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中：
a.R1为-B(ORb)(ORc)或-CH(OH)Ra；
b.R2为H或-CH2(CH2)mC(O)Rj；
c.R3为H或取代的或未取代的C1-6烷基；
d.R4为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；
e.R5为H；
f.R6为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷烃；
g.R7为H；
h.R8为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；且/或
i.R9为RiOC(O)-、RiC(O)-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或RiS(O)n-。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中：
a.R1为-B(ORb)(ORc)或-CH(OH)Ra；
b.R2为H或-CH2(CH2)mC(O)Rj；
c.R3为H或取代的或未取代的C1-6烷基；
d.R4为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；
e.R5为H；
f.R6为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷烃；
g.R7为H；
h.R8为H、取代的或未取代的C1-6烷基、取代的或未取代的C1-6硫代烷基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的环烷基；且
i.R9为RiOC(O)-、RiC(O)-、RmORiC(O)-、RmC(O)RiC(O)-或RiS(O)n-。
4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R1为-B(ORb)(ORc)。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中：
a.Rb和Rc为H。
6.根据权利要求4所述的化合物，其中：
a.Rb和Rc连接以形成环状5员环结构或与脂族环体系稠合。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中：
a.R1为2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂三环[6.1.1.02，6]癸-4-基。
8.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R1为-CH(OH)Ra。
9.根据权利要求1至3或8中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.Ra为C1-2氟烷基。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中：
a.Ra为-CF3。
11.根据权利要求9所述的化合物，其中：
a.Ra为-CH2F。
12.根据权利要求8所述的化合物，其中：
a.Ra为C1-3烷基。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中：
a.Ra为-CH3。
14.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R2为H。
15.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R2为-CH2(CH2)mC(O)Rj。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中：
a.Rj为ORd。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中：
a.Rd为CH3。
18.根据权利要求15所述的化合物，其中：
a.Rj为NH2。
19.根据权利要求1至18中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R3为H。
20.根据权利要求1至18中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R3为取代的或未取代的C1-6烷基。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中：
a.R3为未取代的C1-6烷基。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中：
a.R3为CH3。
23.根据权利要求1至22中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R4为H。
24.根据权利要求1至22中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R4为取代的或未取代的C1-6烷基。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中：
a.R4为未取代的C1-6烷基。
26.根据权利要求25所述的化合物，其中：
a.R4为-CH3。
27.根据权利要求25所述的化合物，其中：
a.R4为CH3CH2-。
28.根据权利要求25所述的化合物，其中：
a.R4为-CH2CH(CH3)2。
29.根据权利要求24所述的化合物，其中：
a.R4为取代的C1-6烷基。
30.根据权利要求29所述的化合物，其中：
a.R4为经芳基取代的C1-6烷基。
31.根据权利要求30所述的化合物，其中：
a.R4为苯基-CH2-。
32.根据权利要求29所述的化合物，其中：
a.R4为-(CH2)2C(O)NH2。
33.根据权利要求1至22中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R4为取代的或未取代的C1-6硫代烷基。
34.根据权利要求33所述的化合物，其中：
a.R4为CH3S(CH2)2-。
35.根据权利要求1至22中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R4为取代的或未取代的芳基。
36.根据权利要求35所述的化合物，其中：
a.R4为苯基。
37.根据权利要求1至22中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R4为环烷基。
38.根据权利要求1至37中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R6为H。
39.根据权利要求1至37中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R6为取代的或未取代的C1-6烷基。
40.根据权利要求39所述的化合物，其中：
a.R6为取代的C1-6烷基。
41.根据权利要求40所述的化合物，其中：
a.R6为经芳基取代的C1-6烷基。
42.根据权利要求41所述的化合物，其中：
a.R6为-烷基-苯基。
43.根据权利要求42所述的化合物，其中：
a.R6为-CH2-苯基。
44.根据权利要求42或43所述的化合物，其中：
a.R6为-CH2-羟苯基。
45.根据权利要求42所述的化合物，其中：
a.R6为-(CH2)2-苯基。
46.根据权利要求41所述的化合物，其中：
a.R6为-CH2-吲哚。
47.根据权利要求39所述的化合物，其中：
a.R6为未取代的C1-6烷基。
48.根据权利要求47所述的化合物，其中：
a.R6为未取代的C1-6烷基。
49.根据权利要求48所述的化合物，其中：
a.R6为CH3。
50.根据权利要求48所述的化合物，其中：
a.R6为-CH(CH3)2。
51.根据权利要求1至37中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R6为取代的或未取代的C1-6硫代烷基。
52.根据权利要求51所述的化合物，其中：
a.R6为CH3S(CH2)2-。
53.根据权利要求1至37中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R6为取代的或未取代的芳基。
54.根据权利要求53所述的化合物，其中：
a.R6为苯基。
55.根据权利要求1至37中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R6为取代的或未取代的环烷基。
56.根据权利要求55所述的化合物，其中：
a.R6为苯并环戊基。
57.根据权利要求1至56中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R8为H。
58.根据权利要求1至56中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R8为取代的或未取代的C1-6烷基。
59.根据权利要求58所述的化合物，其中：
a.R8为未取代的C1-6烷基。
60.根据权利要求59所述的化合物，其中：
a.R8为-CH(CH3)2。
61.根据权利要求59所述的化合物，其中：
a.R8为-CH3。
62.根据权利要求58所述的化合物，其中：
a.R8为取代的C1-6烷基。
63.根据权利要求62所述的化合物，其中：
a.R8为经芳基取代的C1-6烷基。
64.根据权利要求63所述的化合物，其中：
a.R8为-CH2-苯基。
65.根据权利要求1至56中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R8为取代的或未取代的C1-6硫代烷基。
66.根据权利要求65所述的化合物，其中：
a.R8为CH3S(CH2)2-。
67.根据权利要求1至56中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R8为取代的或未取代的芳基。
68.根据权利要求67所述的化合物，其中：
a.R8为未取代的芳基。
69.根据权利要求68所述的化合物，其中：
a.R8为苯基。
70.根据权利要求1至56中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R8为取代的或未取代的环烷基。
71.根据权利要求70所述的化合物，其中：
a.R8为未取代的环烷基。
72.根据权利要求71所述的化合物，其中：
a.R8为环戊基。
73.根据权利要求71所述的化合物，其中：
a.R8为环丙基。
74.根据权利要求1至73中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R9为RiOC(O)-。
75.根据权利要求74所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的C1-10烷基。
76.根据权利要求75所述的化合物，其中：
a.Ri为未取代的C1-10烷基-。
77.根据权利要求76所述的化合物，其中：
a.Ri为CH3-。
78.根据权利要求75所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的C1-10烷基-。
79.根据权利要求78所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-CH2-。
80.根据权利要求1至73中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R9为RiC(O)-。
81.根据权利要求80所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的杂芳基。
82.根据权利要求81所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的芳基。
83.根据权利要求82所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的芳基。
84.根据权利要求83所述的化合物，其中：
a.Ri为芳基-苯基-。
85.根据权利要求84所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-苯基-。
86.根据权利要求84所述的化合物，其中：
a.Ri为杂芳基-苯基-。
87.根据权利要求86所述的化合物，其中：
a.Ri为双吖丙啶-苯基-。
88.根据权利要求87所述的化合物，其中：
a.Ri为三氟甲基-双吖丙啶-苯基-。
89.根据权利要求86所述的化合物，其中：
a.Ri为吡啶-苯基-。
90.根据权利要求86所述的化合物，其中：
a.Ri为噁二唑-苯基-。
91.根据权利要求83所述的化合物，其中：
a.Ri为杂环基-苯基-。
92.根据权利要求91所述的化合物，其中：
a.Ri为吗啉-苯基-。
93.根据权利要求83所述的化合物，其中：
a.Ri为烷基-苯基-。
94.根据权利要求93所述的化合物，其中：
a.Ri为(CH3)2CH-苯基-。
95.根据权利要求93所述的化合物，其中：
a.Ri为OHCH2-苯基-。
96.根据权利要求83所述的化合物，其中：
a.Ri为氟苯基。
97.根据权利要求82所述的化合物，其中：
a.Ri为未取代的芳基。
98.根据权利要求97所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基。
99.根据权利要求81所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的杂芳基。
100.根据权利要求99所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的杂芳基。
101.根据权利要求100所述的化合物，其中：
a.Ri为芳基-杂芳基-。
102.根据权利要求101所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-杂芳基-。
103.根据权利要求102所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-吡唑-。
104.根据权利要求102所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-甲基吡唑-。
105.根据权利要求102所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-噻唑-。
106.根据权利要求102所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-吡啶-。
107.根据权利要求102所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-呋呫-。
108.根据权利要求100所述的化合物，其中：
a.Ri为杂芳基-杂芳基-。
109.根据权利要求108所述的化合物，其中：
a.Ri为吡啶-异噻唑-。
110.根据权利要求99所述的化合物，其中：
a.Ri为未取代的杂芳基。
111.根据权利要求110所述的化合物，其中：
a.Ri为吡啶。
112.根据权利要求111所述的化合物，其中：
a.Ri为吡嗪。
113.根据权利要求112所述的化合物，其中：
a.Ri为吲哚。
114.根据权利要求80所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的C1-10烷基-。
115.根据权利要求114所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的C1-10烷基-。
116.根据权利要求115所述的化合物，其中：
a.Ri为芳基-C1-10烷基-。
117.根据权利要求116所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-C1-10烷基-。
118.根据权利要求117所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-炔-。
119.根据权利要求117所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-CH2-。
120.根据权利要求119所述的化合物，其中：
a.Ri为氟甲氧基-苯基-CH2-。
121.根据权利要求120所述的化合物，其中：
a.Ri为三氟甲氧基-苯基-CH2-。
122.根据权利要求121所述的化合物，其中：
a.Ri为4-(三氟甲氧基)苯基-CH2-。
123.根据权利要求117所述的化合物，其中：
a.Ri为氟烷基-双吖丙啶-苯基-(C1-10烷基)-。
124.根据权利要求123所述的化合物，其中：
a.Ri为三氟甲基-双吖丙啶-苯基-CH2-。
125.根据权利要求124所述的化合物，其中：
a.Ri为4-[3-三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基-。
126.根据权利要求125所述的化合物，其中：
a.Ri为3-[3-三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯基-。
127.根据权利要求114所述的化合物，其中：
a.Ri为未取代的C1-10烷基-。
128.根据权利要求127所述的化合物，其中：
a.Ri为CH3(CH2)8-。
129.根据权利要求1至73中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R9为RmORiC(O)-。
130.根据权利要求129所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的C1-10烷基。
131.根据权利要求130所述的化合物，其中：
a.Ri为-CH2-。
132.根据权利要求129至131中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.Rm为取代的或未取代的C1-10烷基。
133.根据权利要求132所述的化合物，其中：
a.Rm为-CH2-。
134.根据权利要求133所述的化合物，其中：
a.Rm为芳基-CH2-。
135.根据权利要求134所述的化合物，其中：
a.Rm为苯基-CH2-。
136.根据权利要求129至131中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.Rm为取代的或未取代的芳基。
137.根据权利要求136所述的化合物，其中：
a.Rm为苯基。
138.根据权利要求1至73中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R9为RmC(O)RiC(O)-。
139.根据权利要求138所述的化合物，其中：
a.Rm为杂芳基。
140.根据权利要求139所述的化合物，其中：
a.Rm为吗啉。
141.根据权利要求138至140中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.Ri为芳基。
142.根据权利要求141所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基。
143.根据权利要求1至73中任一权利要求所述的化合物，其中：
a.R9为RiS(O)n-。
144.根据权利要求143所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的或未取代的芳基。
145.根据权利要求144所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的芳基。
146.根据权利要求145所述的化合物，其中：
a.Ri为取代的苯基。
147.根据权利要求146所述的化合物，其中：
a.Ri为苯基-苯基。
148.根据权利要求1所述的化合物，其为：
149.一种药物组合物，其包含至少一种如权利要求1至148中任一权利要求所定义的化合物。
150.根据权利要求61所述的药物组合物，其进一步包含至少一种如权利要求1至148中任一权利要求所述的其它化合物。
151.根据权利要求149或150所述的药物组合物，其进一步包含至少一种改善患者的血脂谱的其它活性成分。
152.根据权利要求150至151中任一权利要求所述的药物组合物，其进一步包含药物载体或赋形剂。
153.根据权利要求1至148中任一权利要求所述的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所述的组合物，其用作药剂。
154.根据权利要求1至148中任一权利要求所述的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所述的组合物，其用于制造药剂。
155.根据权利要求153或154所述的化合物或组合物，其中所述药剂用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症，限制条件为所述化合物不是以下：
156.根据权利要求155所述的化合物或组合物，其中所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症是高胆固醇血症。
157.一种预防或治疗LDL-胆固醇相关疾病或病症的方法，其包括对有此需要的受试者施用治疗上有效量的根据权利要求1至148中任一权利要求所定义的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所述的组合物，限制条件为所述化合物不是以下：
158.根据权利要求157所述的方法，其中所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症是高胆固醇血症。
159.根据权利要求1至148中任一权利要求所定义的式I化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所定义的组合物的用途，其用作药剂。
160.根据权利要求1至148中任一权利要求所定义的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所定义的组合物的用途，其用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症，限制条件为所述化合物不是以下：
161.根据权利要求1至148中任一权利要求所定义的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所定义的组合物的用途，其用于制造用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病的药剂，限制条件为所述化合物不是以下：
162.根据权利要求159至161中任一权利要求所述的用途，其中所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症为高胆固醇血症。
163.一种用于预防或治疗受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症的试剂盒，其包括
(i)至少一种根据权利要求1至148中任一权利要求所定义的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所定义的组合物，和
(i)(a)至少一种改善患者的血脂谱的其它活性成分；
(b)至少一种其它的根据权利要求1至148中任一权利要求所定义的化合物或根据权利要求149至152中任一权利要求所定义的组合物；
(c)用于所述化合物和/或活性成分的容器；和/或
(d)关于使用所述化合物来预防或治疗所述受试者的低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症的说明书，限制条件为所述化合物不是以下：
164.根据权利要求163所述的试剂盒，其中所述低密度脂蛋白-胆固醇相关疾病或病症是高胆固醇血症。
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