CN105324121A

CN105324121A - 组合使用并治疗癌症患者亚群的肽和肽模拟物

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Publication number: CN105324121A
Application number: CN201480035471.4A
Authority: CN
Inventors: 河边拓己; 三根直木; 西户直也; 榊原计一; 佐藤卓治
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2013-06-24
Filing date: 2014-06-24
Publication date: 2016-02-10
Also published as: IL243266A0; EP3013351A1; JP2016522245A; LT3013351T; SI3013351T1; HUE046873T2; ES2765300T3; NZ715285A; JP6401255B2; MX366341B; CA2916136C; KR20160021792A; SG11201510490VA; RS60180B1; RU2016101718A3; MX2015017609A; PH12015502855A1; AU2014300713A1; HRP20192264T1; BR112015032542A2

Abstract

本发明提供了包括可用于治疗细胞增殖疾患的肽和肽模拟物的化合物，所述细胞增殖疾患例如与良性和恶性肿瘤细胞相关的那些。虽然本发明不限于任何特定机制，但本发明化合物似乎至少部分通过抑制G2细胞周期检查点而发挥作用。因此，本发明化合物可以单独用于抑制细胞生长，或者与核酸损伤治疗组合用于抑制细胞生长。

Description

组合使用并治疗癌症患者亚群的肽和肽模拟物

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年6月24日提交的美国临时申请号61/838,777的优先权，该申请通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及包括单独和与直接或间接损害核酸(例如，DNA)的治疗组合而具有抗细胞增殖活性的肽和肽模拟物的化合物。本发明化合物因此可用于抑制细胞增殖，并且由此可用于治疗细胞增殖疾患，包括癌症。

前言

细胞周期包括S期(DNA复制)、M期(有丝分裂)和S期与M期之间的两个间期(G1和G2期)。细胞周期中的检查点(checkpoint)可确保准确进展，如监控DNA完整性的状态、DNA复制、细胞大小情况及周围环境(Maller,J.L.Curr.Opin.CellBiol.,3：26(1991))。对多细胞生物而言，维持基因组完整性尤为重要，因而存在多个监控基因组状态的检查点。这些检查点当中，G1和G2检查点分别在DNA复制和有丝分裂之前存在。进入S期之前纠正DNA损伤是至关紧要的，因为一旦受损的DNA得到复制，常常引发突变(Hartwell,L.Cell,71：543(1992))。经由G1和G2检查点而未修复过度DNA损伤的进展可导致细胞凋亡和/或毁灭。

大部分癌细胞在G1检查点相关蛋白例如p53、Rb、MDM-2、p16^INK4和p19^ARF中存在异常(Levine,A.J.Cell,88：323(1997))。或者，突变可引起致癌基因产物例如Ras、MDM-2和细胞周期蛋白D的过度表达和/或过度活化，从而降低G1检查点的严格性。除这些突变外，生长因子的过度表达可导致过度的生长因子信号传导，这可降低G1检查点的严格性。与丧失和获得功能的突变一起，生长因子受体或下游信号转导分子的连续活化可通过跨越G1检查点而引起细胞转化。被取消的G1检查点促成了较高的突变率以及在癌细胞中可观测到的许多突变。结果是大部分癌细胞依赖于G2检查点以对抗过度DNA损伤而得以存活(O’Connor和Fan,Prog.CellCycleRes.,2:165(1996))。

DNA损伤后，促使细胞周期G2期停滞的机制被认为在从酵母到人的物种中是保守的。存在受损DNA的情况下，由于Cdc2激酶上的苏氨酸-14和酪氨酸-15残基的抑制性磷酸化作用，或细胞周期蛋白B的蛋白水平降低的缘故，Cdc2/细胞周期蛋白B激酶保持无活性状态。有丝分裂开始时，双重磷酸酶Cdc25移除了这些抑制性磷酸盐，并从而活化了Cdc2/细胞周期蛋白B激酶。Cdc2/细胞周期蛋白B的活化相当于M期的开始。

在裂殖酵母中，蛋白激酶Chk1对响应于受损DNA的细胞周期停滞而言是必不可少的。Chk1激酶作用于若干rad基因产物的下游，并通过DNA损伤后的磷酸化作用得到修饰。已知芽殖酵母的激酶Rad53和裂殖酵母的Cds1均从未复制的DNA传导信号。在Chk1与Cdsl之间似乎存在某些冗余，因为Chk1与Cdsl二者的清除在破坏由受损DNA引起的G2停滞方面最有效。有趣的是，Chk1和Cds1均可使Cdc25磷酸化，并促使Rad24与Cdc25结合，从而将Cdc25隔离到细胞溶质中并阻止Cdc2/细胞周期蛋白B的活化。因此Cdc25似乎是这些激酶的共同靶标，意味着该分子在G2检查点中是不可缺少的因子。

在人中，裂殖酵母Chk1的人同源物hChk1，与芽殖酵母Rad53和裂殖酵母Cds1的人同源物Chk2/HuCdsl响应于DNA损伤，均于关键调节位点丝氨酸-216处将Cdc25C磷酸化。该磷酸化为裂殖酵母的Rad24和Rad25的人同源物，即小酸性蛋白14-3-3s创建了一个结合位点。Cdc25C上的丝氨酸-216被丙氨酸取代而破坏了人细胞中细胞周期G2期停滞的事实清楚地说明该磷酸化的调节作用。然而，G2检查点的机制尚未被完全了解。

肿瘤微环境在癌细胞生长、侵染、转移和抗肿瘤免疫性的预防或促进方面也发挥作用，其影响患者预后。已经表明，曾经预期对抗癌细胞的巨噬细胞在肿瘤发展中发挥抑制和促进两种作用。称为M1的具有经典抗肿瘤表型的巨噬细胞是促炎性的，而具有促肿瘤和抗炎类型的那些巨噬细胞称为M2，其具有属于该类别的至少三个主要的亚型(Martinez和Gordon,F1000PrimeReports6：13(2014))。

嗜中性粒细胞细胞外诱捕网(neutrophilextracellulartrap,NET)代表了肿瘤微环境连同白细胞的另一要素。虽然NET的形成对于嗜中性粒细胞抗击入侵微生物是有用的，但是它们可以促成癌症患者中的深部静脉血栓形成(DVT)(Martinnod和Wanger,Blood(2013))和肿瘤细胞转移(Cools-Lartigue,J.等人.J.Clin.Invest.(2013))。因此，NET可以不利地影响患者存活。DVT在癌症患者中是常见且可能致命的，并且白细胞增多(其导致高WBC)是主要风险因素(Pabinger,I.等人.Blood122：12(2013)；Blix,K.等人.PLOSOne4：8(2013)；Wang,T.F.等人.Thromb.Res.133(1)：25(2014))。

概述

根据本发明，提供了具有抑制细胞增殖、刺激细胞凋亡或毁灭、取消细胞的细胞周期G2检查点的一种或多种活性；或治疗不希望的细胞增殖或存活，例如特征为细胞增殖性疾患的那些的肽化合物的方法和用途。例如，本发明提供了抑制细胞增殖；取消细胞的细胞周期G2检查点；增加细胞对核酸损伤剂或治疗的敏感性；增加对细胞的核酸损伤的方法和用途。

在一个实施方案中，一种用于在具有正常范围内白细胞计数的哺乳动物(例如人)中增加过度增殖细胞的核酸损伤或者用于预防或治疗细胞增殖疾患的方法或用途，包括向所述哺乳动物施用肽化合物，其中所述肽化合物包括以下序列的任何一个：A)包含表示为P1-P6的残基的肽，所述P1-P6具有结构P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1；其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；其中P3、P4、P5是任何氨基酸，或者其中P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同；其中P6是Bpa、Phe4NO2、任何一个氨基酸和Tyr、任何一个氨基酸和Phe、任何氨基酸或没有；B)或A)的肽，其中具有简单碳链的氨基酸是11-氨基十一烷酸、10-氨基癸酸、9-氨基壬酸、8-氨基辛酸、7-氨基庚酸、6-氨基己酸、或具有一个或多个不饱和碳键的相似结构，和/或其中所述任何一个氨基酸是Ser，和/或其中P4是Trp，和/或其中所述占据相似侧链空间的氨基酸是Tyr或Phe；或包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6；P6、P5、P4、P3、P2、P1；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、占据相似侧链空间的氨基酸(例如d-或l-Tyr、d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、或喹唑啉基团的任何氨基酸；其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、或占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；其中P3、P4、P5是任何氨基酸，或者其中P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同；其中P6是Bpa、Phe4NO2、任何一个氨基酸和Tyr、任何一个氨基酸和Phe；并且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是碱性氨基酸，其余是任何氨基酸或不存在；或C)的肽，其中具有简单碳链的氨基酸是11-氨基十一烷酸、10-氨基癸酸、9-氨基壬酸、8-氨基辛酸、7-氨基庚酸、6-氨基己酸、或具有一个或多个不饱和碳键的相似结构，和/或其中所述任何一个氨基酸是Ser，和/或其中P4是Trp，和/或其中所述占据相似侧链空间的氨基酸是Tyr或Phe；或包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、占据相似侧链空间的氨基酸、或在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；其中P3、P4、P5是任何氨基酸，或者其中P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同；其中P6是Bpa、Phe4NO2、任何一个氨基酸和Tyr、任何一个氨基酸和Phe、任何氨基酸或没有；并且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是碱性氨基酸，其余是任何氨基酸或不存在；或E)的肽，其中具有简单碳链的氨基酸是氨基十一烷酸或8-氨基辛酸，和/或其中所述任何一个氨基酸是Ser，和/或其中所述占据相似侧链空间的氨基酸是Tyr或Phe；或包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1，其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe；其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe；其中P3是Ser、Arg、Cys、Pro或Asn；其中P4是Trp；其中P5是Ser、Arg或Asn；或其中P3、P4、P5是单一氨基十一烷酸或单一8-氨基辛酸；和其中P6是Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或Ser-Phe)；或

包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe；其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe；其中P3是Ser、Arg、Cys、Pro或Asn；其中P4是Trp；其中P5是Ser、Arg或Asn；或其中P3、P4、P5是单一氨基十一烷酸或单一8-氨基辛酸；其中P6是Bpa、Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe)；并且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是Arg或Lys，其余是任何氨基酸或不存在；或

包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；其中P1是Cha或Nal(2)；其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)；其中P3是Ser；其中P4是Trp；其中P5是Ser或Asn；其中P6是Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe)；并且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是Arg，其余是任何氨基酸或不存在；或包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1；其中P1是Cha或Nal(2)；其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3)；其中P3是Ser；其中P4是Trp；其中P5是Ser；并且其中P6是Bpa或(Ser-Tyr)；或

包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6；P6、P5、P4、P3、P2、P1；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；其中P1是Cha或Nal(2)；其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3)；其中P3是任何氨基酸；其中P4是d-或l-Trp；其中P5是任何氨基酸；其中P6是Bpa或(Ser-Tyr)；其中P7是Arg；其中P8是Arg；其中P9是Arg；其中P10是Gln或Arg；其中P11是Arg；并且其中P12是d-或l-Arg，或

K)的肽，其中所述任何氨基酸是Ser或Pro；或

包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；其中P1是Cha或Nal(2)；其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)；其中P3是Ser；其中P4是Trp；其中P5是Ser；其中P6是Bpa或(Ser-Tyr)；其中P7是Arg；其中P8是Arg；其中P9是Arg；其中P10是Gln或Arg；其中P11是Arg；并且其中P12是Arg；或

其前药或其药学上可接受的盐，从而增加过度增殖细胞的核酸损伤或者预防或治疗所述细胞增殖疾患。

在特定实施方案中，方法或用途采用包括任何以下序列的肽化合物：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；

(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；

(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)；

(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)；

(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；

(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；

(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；

(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；

(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)；或(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)。

在其他特定实施方案中，方法或用途采用包括任何以下序列或由任何以下序列组成的肽化合物：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：1)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)。

在其他特定实施方案中，对以下哺乳动物实施方法或用途：具有小于约11,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有约4,000至约11,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约10,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约9,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有约4,000至约9,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约8,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约7,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；或具有小于每个临床实验室正常上限的白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物。

方法和用途包括药物制剂中的肽化合物。发明方法和用途还包括通过任何途径施用。在特定实施方案中，局部、区域或全身施用肽化合物。

方法和用途包括肽化合物的药学上可接受的盐。在特定方面，药学上可接受的盐是以下任何一种或组合：乙酸盐、磺酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、一氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、酞酸盐、、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲烷-磺酸盐、丙烷磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。

方法和用途包括这样的肽化合物，其包括以下长度或由以下长度组成：6至10、10至15、15至20、20至25、25至30、30至40、40至50、50至75、75至100、100至150、150至200、或200至300个氨基酸残基。

方法和用途包括这样的肽化合物，其包含与其连接或缀合的细胞穿透分子或由与其连接或缀合的细胞穿透分子组成。在特定的非限制性方面，细胞穿透分子通过共价键、或肽或非肽连接子连接至所述肽化合物。在其他特定的非限制性方面，细胞穿透肽包含交替模式的极性/带电氨基酸和非极性疏水氨基酸。在其他特定的非限制性方面，细胞穿透肽包含聚阳离子或两亲性的α-螺旋结构。在其他特定的非限制性方面，细胞穿透肽包括聚精氨酸(Arg)序列(例如包括(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或由(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)组成的肽)。

在其他特定的方面，肽化合物和/或所述细胞穿透肽包含L-或D-异构体氨基酸、或L-和D-异构体氨基酸的混合物或由L-或D-异构体氨基酸、或L-和D-异构体氨基酸的混合物组成。

在其他特定的实施方案中，方法或用途还包括施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗。非限制性的核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗包括以下或由以下组成：手术切除、放射疗法、电离或化学放射疗法、化疗、免疫疗法、局部或区域热(高热)疗法、接种、烷化剂、抗代谢物、植物提取物、植物生物碱、亚硝基脲、激素、或核苷或核苷酸类似物。

在其他特定的实施方案中，方法或用途还包括以下或由以下组成：在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前、同时或之后施用的肽化合物。在特定方面，肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于48小时施用；肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于24小时施用；肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于12小时施用；肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于6小时施用；肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于4小时施用；肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于2小时施用；肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于1小时施用。

核酸损伤剂或抗增殖剂的非限制性实例包括药物。核酸损伤剂或抗增殖剂的非限制性实例包括含铂药物，例如顺铂、卡铂、奈达铂、mitaplatin、沙铂、吡铂(picoplatin)、三核铂、米铂或奥沙利铂。

更具体地，方法和用途包括以下或由以下组成：施用含铂药物、顺铂、卡铂、奥沙利铂、培美曲塞、吉西他滨、5-氟尿嘧啶(5-FU)、蝴蝶霉素、阿霉素(ADR)、博来霉素(Bleo)、培洛霉素、顺铂、顺式铂氨或顺式二胺二氯铂(II)(CDDP)、奥沙利铂或喜树碱(CPT)、环磷酰胺、硫唑嘌呤、环孢菌素A、强的松龙、美法仑、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、硫代鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、AZT、5-氮杂胞苷(5-AZC)或5-氮杂胞苷相关化合物、放线菌素D、光神霉素、丝裂霉素C、卡氮芥、罗氮芥、司莫司汀、链脲佐菌素、羟基脲、顺铂、米托坦、甲基苄肼、达卡巴嗪、紫杉烷、长春花碱、长春新碱、多柔比星、二溴甘露醇、放射或放射性同位素。放射的特定非限制性实例包括UV放射、IR放射、X射线、或α-、β-或γ-放射。放射性同位素的特定非限制性实例包括I¹³¹、I¹²⁵、Sr⁸⁹、Sm¹⁵³、Y⁹⁰或Lu¹⁷⁷。

发明方法和用途适用于细胞增殖或过度增殖疾患或不希望的细胞增殖。在特定实施方案中，细胞增殖疾患包括肿瘤或癌症。在更具体实施方案中，细胞增殖疾患包括转移性肿瘤或癌症。

肿瘤或癌症的特定非限制性实例包括肺肿瘤或癌症，例如小细胞或非小细胞肺癌，或腺癌、鳞状细胞癌或大细胞癌。肿瘤或癌症的其他特定非限制性实例包括癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、腺瘤、腺癌、黑素瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、间皮瘤、网状内皮、淋巴或造血瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤。肿瘤或癌症的其他特定非限制性实例是肺、甲状腺、头或颈、鼻咽、喉、鼻或鼻窦、脑、脊柱、乳腺、肾上腺、脑垂体、甲状腺、淋巴、胃肠(口、食管、胃、十二指肠、回肠、空肠(小肠)、结肠、直肠)、生殖泌尿道(子宫、卵巢、子宫颈、子宫内膜、膀胱、睾丸、阴茎、前列腺)、肾脏、胰腺、肝脏、骨骼、骨髓、淋巴、血液、肌肉或皮肤瘤形成、肿瘤或癌症。肿瘤或癌症的其他特定非限制性实例包括乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、胸膜间皮瘤、结肠癌、直肠癌、大肠癌、小肠癌、食管癌、十二指肠癌、舌癌、咽癌、唾液腺癌、脑肿瘤、神经鞘瘤、肝癌、肾癌、胆管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、膀胱癌、尿道癌、皮肤癌、血管瘤、恶性淋巴瘤、恶性黑素瘤、甲状腺癌、甲状旁腺癌、鼻癌、鼻窦癌、听觉器官癌、口底癌、喉癌、腮腺癌、下颌癌、骨癌、血管纤维瘤、视网膜肉瘤、阴茎癌、睾丸肿瘤、儿科实体癌症、卡波西肉瘤、上颌窦肿瘤、纤维组织细胞瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或白血病。

肉瘤的特定非限制性实例包括淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤或纤维肉瘤。造血肿瘤、癌症或恶性肿瘤的特定非限制性实例包括骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。

发明方法和用途包括施用有效治疗肿瘤或癌症的量的肽化合物。在特定方面，方法或用途抑制或减少肿瘤或癌症的复发、生长、进展、恶化或转移；导致瘤形成、肿瘤、癌症或恶性细胞质量、体积、大小或细胞数量的部分或完全破坏，刺激、诱导或增加瘤形成、肿瘤、癌症或恶性细胞坏死、溶解或凋亡，减少瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤体积大小、细胞质量，抑制或防止瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤体积、质量、大小或细胞数目的进展或增加，或者延长寿命；导致减少或降低与瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤相关或由瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤引起的不良症状或并发症的严重度、持续时间或频率；或方法导致减少或降低疼痛、不适、恶心、虚弱或疲倦，或者导致增加的能量、食欲、改善的运动性或心理健康。

而且，提供了包括任选与核酸损伤治疗(例如核酸损伤剂)或抗增殖剂组合的肽化合物的试剂盒。在一个实施方案中，试剂盒包括用于实施本发明方法的肽化合物和说明书(例如，施用至具有正常范围内白细胞计数的哺乳动物，例如，具有小于约11,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有约4,000至约11,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约10,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约9,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有约4,000至约9,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约8,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；具有小于约7,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物；或具有小于每个临床实验室正常上限的白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数的哺乳动物)

附图说明

图1显示针对经博莱霉素处理的Jurkat细胞使用时每种化合物的剂量反应曲线。X轴指示剂量，并且Y轴指示处理后的％G2/M细胞。

图2显示针对经秋水仙碱处理的Jurkat细胞使用时每种化合物的剂量反应曲线。X轴指示剂量，并且Y轴指示处理后的％G2/M细胞。

图3A和3B经(A)博莱霉素(Bleo)或(B)阿霉素(ADR)，与不同剂量的化合物处理后的人胰腺癌来源细胞系MIAPaCa2。对收获细胞进行DNA染色并利用流式细胞术分析。％亚G1细胞群体被表示为死细胞。

图4A至4C是G2检查点取消因子(l-Gly)(l-Arg)(l-Lys)(l-Lys)(l-Arg)(l-Arg)(l-Gln)(l-Arg)(l-Arg)(l-Cha)(l-Phe-2,3,4,5,6-F)(l-Arg)(l-Ser)(l-Pro)(l-Ser)(l-Tyr)(l-Tyr)(SEQIDNO：78)的结构活性关系的示意图：(A)对经博莱霉素处理后的Jurkat细胞中的l-Cha而言，氨基酸取代的G2检查点取消活性顺序为：[l-Cha＝l-Nal(2)]>[l-Ala(3-Bzt)＝l-Nal(1)＝l-Trp＝l-Dph]>[l-Ala(tBu)＝Cys(tBu)＝Leu]；(B)对经秋水仙碱处理后的Jurkat细胞中的l-Cha而言，氨基酸取代的M期检查点取消活性和/或非特异性毒性顺序为：[Ala(3-Bzt)＝l-Nal(1)＝l-Dph]>[l-Cha＝l-Nal(2)]；(C)对l-Phe-2,3,4,5,6-F而言，氨基酸取代的G2检查点取消活性顺序为：l-(Phe-2,3,4,5,6-F)＝l-(Phe-3,4,5-F)＝l-(Phe-4CF3)]>[l-(Phe-3Br,4Cl,5Br)＝l-(Phe-4Cl)＝l-Tyr]。

图5显示各个富精氨酸序列的G2取消活性。将所示肽添加至经由或未经由博莱霉素处理的Jurkat细胞中。Y轴指示％G2/M细胞。X轴指示如下：1，仅由博莱霉素处理；2，0.2μg/ml；3，0.39μg/ml；4，0.78μg/ml；5，1.56μg/ml；6，3.125μg/ml；7，6.25μg/ml；8，12.5μg/ml；9，25μg/ml；和10，50μg/ml。肽序列如下：rrrqrrkkr，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Lys)(d-Lys)(d-Arg)(SEQIDNO：79)；CBP501，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：80)；无TAT，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：81)；rqrr，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：82)；rrqrr，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：83)；rrrq，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(SEQIDNO：84)；和rrrqr，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(SEQIDNO：85)。

图6显示各个无(d-Bpa)的肽的G2取消活性。将所示肽添加至经由或未经由博莱霉素处理的Jurkat细胞中。Y轴指示％G2/M细胞。X轴指示如下：1，仅由博莱霉素处理；2，0.2μg/ml；3，0.39μg/ml；4，0.78μg/ml；5，1.56μg/ml；6，3.125μg/ml；7，6.25μg/ml；8，12.5μg/ml；9，25μg/ml；和10，50μg/ml。肽序列如下：CBP0，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：86)；CBP451,(d-Tyr)(d-Ser)(d-Pro)(l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：87)；CBP452，(d-Tyr)(d-Ser)(l-Pro)(l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：88)；和CBP501，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：80)。

图7显示各个富精氨酸和富赖氨酸肽序列的G2取消活性。将所示肽添加至如上述的Jurkat细胞中，并计算％G2/M细胞(Y轴)。肽序列如下：CBP603，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe4NO2)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：89)；CBP607，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：90)；CBP608，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO91：)；和CBP609，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(SEQIDNO：92)。

图8显示序列中富精氨酸部分的定位可以变化。将所示肽添加至如上述的Jurkat细胞中，并计算％G2/M(Y轴)。肽序列如下：CBP501，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：80)；CBP510，(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQIDNO：93)；CBP511，(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：94)；和CBP512，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQIDNO：95)。

图9显示若干经特意取代的肽序列的结构。G2取消活性随着浅阴影部分取代(*)的增多而升高，M期检查点取消活性和/或非特异性毒性随着深阴影部分取代(**)的增多而升高，并且对其它取代而言，基本保持不变。

图10显示经CBP501和顺铂处理后的scid小鼠体内肿瘤生长(人胰腺癌)的抑制。第0日表示治疗开始。Y轴指示每个治疗组具有标准偏差的平均肿瘤尺寸，并且X轴指示治疗开始后的天数。

图11显示具有激酶抑制序列区和基于HIV-TAT转导序列的序列区的肽的G2取消活性，如上。Y轴指示％G2/M。X轴指示如下：1，仅由博莱霉素处理；2，0.2μg/ml；3，0.39μg/ml；4，0.78μg/ml；5，1.56μg/ml；6，3.125μg/ml；7，6.25μg/ml；8，12.5μg/ml；9，25μg/ml；和10，50μg/ml。肽序列如下：CBP501，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：80)；CBP700，(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：96)；CBP701，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：97)；CBP702，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：98)；CBP703，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：99)。

图12显示经博莱霉素或秋水仙碱处理后的肽的G2取消活性与M取消活性和/或非特异性毒性之间的对比，其中对G2取消分析采用博莱霉素处理，对M取消活性和/或非特异性毒性采用秋水仙碱处理。将指定的肽添加至经博莱霉素或秋水仙碱处理后的Jurkat细胞中。Y轴指示％G2/M细胞。X轴指示如下：1，仅由博莱霉素或秋水仙碱处理；2，0.2μg/ml；3，0.39μg/ml；4，0.78μg/ml；5，1.56μg/ml；6，3.125μg/ml；7，6.25μg/ml；8，12.5μg/ml；9，25μg/ml；和10，50μg/ml。肽序列如下：CBP501，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)。

图13显示CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)的分子结构。

图14显示所有治疗患者相对于基线WBC的总体存活的Kaplan-Meyer分析：所有治疗患者中相对于基线WBC的Kaplan-Meyer存活曲线、中值OS与危险比。危险比随着截止水平降低而升高，并且在截止水平WBC8000/μl时达到峰值。

图15显示ICON招募患者相对于基线WBC的总体存活的Kaplan-Meyer分析：ICON招募患者中相对于基线WBC的Kaplan-Meyer存活曲线、中值OS与危险比。危险比随着截止水平降低而升高，并且在截止水平WBC8000/μl时达到峰值，并且组A和组B之间的差异在峰值时是统计学上显著的。

图16显示在组所示所有治疗群中筛选，相对于WBC>8000或<8000的Kaplan-Meyer存活曲线、中值OS、患者数目、危险比和通过对数轶(Mantel-Cox)检验的p值。

图17显示通过CBP501治疗的活化嗜中性粒细胞的增加的NET形成。

图18显示通过体内CBP501增加的凝血酶/抗凝血酶复合物。

图19显示体外M1和M2巨噬细胞两者的CBP501抑制的吞噬。

图20显示从小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)TNF释放的抑制。

详细描述

本发明提供了包括抑制细胞增殖的肽和肽模拟物的化合物。因此本发明的化合物可用于治疗以不希望或不想要的细胞增殖为特征的细胞增殖疾患或生理状况，如良性和恶性肿瘤细胞。本发明的肽和肽模拟物抑制细胞增殖的能力似乎至少部分地由于对细胞周期G2检查点的取消。由于细胞可响应于核酸损伤被诱导进入细胞周期G2检查点，以使细胞在DNA复制和细胞分裂发生之前修复损伤，通过抑制G2检查点，本发明的肽和肽模拟物使细胞对核酸损伤剂和治疗方案敏感。累积足够多核酸损伤的细胞将由于G2检查点的破坏而不能完成受损核酸的修复。这种细胞便表现出减少的增殖(例如，由于未修复对存活起关键作用的基因的突变)并最终经历凋亡。

具有正常G1的细胞较不易受累积中的受损核酸的影响，因为G1期间也可发生核酸修复。因此，正常细胞较不易受本发明化合物作用的影响。然而，细胞周期G1检查点已受损或被破坏的细胞则更可能累积受损核酸，因为G1检查点受损或被破坏后，细胞完全修复受损核酸的可能性较少。因此，采用破坏G2检查点的本发明肽或肽模拟物处理G1已受损或被破坏的细胞，使这些细胞完全修复受损核酸的可能性还要更小。所以，G1已受损或被破坏的细胞尤其对本发明的此类肽和肽模拟物敏感。因此，包括肽和肽模拟物的本发明的化合物可用于大体上抑制或防止细胞增殖，并且尤其可以抑制G1检查点已受损或被破坏的细胞的增殖。

G1细胞周期检查点已受损或被破坏的细胞包括但不限于快速增殖的细胞。以快速生长的细胞、不期望生长的细胞，或未经历凋亡而存活的细胞为特征的细胞增殖疾患和生理状况往往存在G1细胞周期检查点已受损或被破坏的情况。因此，由于本发明的肽和肽模拟物抑制增殖或刺激细胞凋亡的能力似乎至少部分地由于G2细胞周期检查点的破坏，从而使因G1检查点已受损或被破坏而出现快速或不期望增殖的细胞成为尤其具有吸引力的靶标。

CBP501是细胞周期G2检查点抑制肽TAT-S216A(Suganuma,M.等人.CancerRes.59：5887(1999))。采用基于细胞周期表型的筛选方法来优化TAT-S216A以减少细胞周期G2期中响应于DNA损伤剂的癌细胞累积而不影响正常细胞的细胞周期表型(Sha,S.等人.Mol.CancerTher.6：147(2007))。发现CBP501增加CBP501敏感肿瘤细胞中的铂浓度和铂-DNA加合物的形成，并且可以替代地除了经由钙调蛋白抑制的G2检查点抑制/破坏而发挥作用(Mine,N.等人.Mol.CancerTher.10：1929(2011))。

由于破坏G2检查点很可能致使核酸损伤在细胞分裂时累积，因此包括肽和肽模拟物的本发明化合物可以通过其本身而不联合其它损伤核酸或具有抗增殖活性的治疗来抑制细胞增殖。相应地，可以单独采用本发明的化合物，或联合核酸损伤疗法(如化学试剂或治疗方案)处理异常或不期望增殖或存活的细胞，以抑制或防止细胞的增殖或刺激细胞凋亡/毁灭。

与快速靶向增殖细胞而无视该细胞是正常还是异常(如癌细胞)的常规抗细胞增殖剂不同，本发明的化合物优先靶向细胞周期G1检查点已受损或被破坏的细胞。例如，与顺铂不同，CBP501不影响HUVEC细胞的生长(见如表3)。CBP501也不影响秋水仙碱诱导的M期细胞周期停滞和/或非特异性毒性(见如图12)。因此，本发明的化合物较不可能产生过多与常规抗细胞增殖治疗剂相关的不希望的副作用，如骨髓抑制、恶心、食欲丧失、腹泻及脱发。此外，由于绝大多数的癌细胞具有已受损或被破坏的细胞周期G1检查点，所以癌细胞表现出对取消细胞周期G2检查点的本发明化合物增加的敏感性。正常细胞较不易感也意味着包括肽和肽模拟物的本发明的化合物的用量可以更大。

根据本发明，提供了包括具有抗细胞增殖活性和/或取消G2细胞周期检查点的肽和肽模拟物的化合物。该肽或肽模拟物包含抑制细胞增殖或刺激细胞凋亡的序列。该肽或肽模拟物也包含取消细胞周期G2检查点的序列。在一个实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：1)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：2)；其中P1是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、占据相似侧链空间的氨基酸(例如，d-或l-Tyr，d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘基团、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；P2是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、占据相似侧链空间的氨基酸(例如，d-或l-Tyr，d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉或喹唑啉基团的任何氨基酸；P3、P4、P5是任何氨基酸，或者P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同(d-或l-Trp是在P4处的例子)；P6是d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、任何氨基酸和d-或l-Tyr(例如，d-Ser-d-Tyr)、任何氨基酸和d-或l-Phe(例如d-Ser-d-Phe)、任何氨基酸或没有。在各个方面，具有简单碳链的氨基酸为d-或l-11-氨基十一烷酸、d-或l-10-氨基癸酸、d-或l-9-氨基壬酸、d-或l-8-氨基辛酸、d-或l-7-氨基庚酸、d-或l-6-氨基己酸或具有一个或多个不饱和碳键的相似结构。

在另一个实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：3)；P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：4)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：5)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQIDNO：6)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：7)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQIDNO：8)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：9)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：10)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：11)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：12)；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQIDNO：13)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQIDNO：14)；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQIDNO：15)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQIDNO：16)；其中P1是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、占据相似侧链空间的氨基酸(例如d-或l-Tyr，d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；P2是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)或占据相似侧链空间的氨基酸(例如，d-或l-Tyr，d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘基团、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉或喹唑啉基团的任何氨基酸；P3、P4、P5是任何氨基酸，或者P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同(d-或l-Trp是在P4处的例子；P6是d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、任何氨基酸和d-或l-Tyr(例如，d-Ser-d-Tyr)、任何氨基酸和d-或l-Phe(例如d-Ser-d-Phe)，并且P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是碱性氨基酸，其余是任何氨基酸或不存在。在各个方面，具有简单碳链的氨基酸为d-或l-11-氨基十一烷酸、d-或l-10-氨基癸酸、d-或l-9-氨基壬酸、d-或l-8-氨基辛酸、d-或l-7-氨基庚酸、d-或l-6-氨基己酸或具有一个或多个不饱和碳键的相似结构。

在进一步实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：17)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：18)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQIDNO：19)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQIDNO：20)；其中P1是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、占据相似侧链空间的氨基酸(例如d-或l-Tyr，d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉或喹唑啉基团的任何氨基酸；P2是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、占据相似侧链空间的氨基酸(例如，d-或l-Tyr，d-或l-Phe)、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；P3、P4、P5是任何氨基酸，或者P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同(d-或l-Trp是在P4处的例子)；P6是d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、任何氨基酸和d-或l-Tyr(例如d-Ser-d-Tyr)、任何氨基酸和d-或l-Phe(例如，d-Ser-d-Phe)、任何氨基酸或没有；并且P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是碱性氨基酸，其余是任何氨基酸或不存在。在各个方面，具有简单碳链的氨基酸为d-或l-11-氨基十一烷酸或d-或l-8-氨基辛酸。

而在另一个实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：21)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：22)；其中P1是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、d-或l-Tyr、或d-或l-Phe；P2是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、d-或l-Tyr、或d-或l-Phe；P3是d-或l-丝氨酸、d-或l-精氨酸、d-或l-半胱氨酸、d-或l-脯氨酸、或d-或l-天冬酰胺；P4是d-或l-色氨酸；并且P5是d-或l-丝氨酸、d-或l-精氨酸、或d-或l-天冬酰胺；或者P3、P4、P5是单一d-或l-氨基十一烷酸或单一d-或l-8-氨基辛酸；P6是d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、(d-Ser-d-Tyr)、或(d-Ser-d-Phe)。

在另一个实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：23)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQIDNO：24)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：25)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQIDNO：26)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：27)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：28)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：29)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：30)；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQIDNO：31)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQIDNO：32)；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQIDNO：33)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQIDNO：34)；其中P1是d-或l-Cha、Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、d-或l-Tyr、或d-或l-Phe；P2是d-或l-Cha、d-或l-Nal(2)、d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)、d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、d-或l-Tyr、或d-或l-Phe；P3是d-或l-丝氨酸、d-或l-精氨酸、d-或l-半胱氨酸、d-或l-脯氨酸、或d-或l-天冬酰胺；P4是d-或l-色氨酸；P5是d-或l-丝氨酸、d-或l-精氨酸、或d-或l-天冬酰胺；或P3、P4、P5是单一d-或l-氨基十一烷酸或单一d-或l-8-氨基辛酸；P6是d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、(d-Ser-d-Tyr)、或(d-Ser-d-Phe)；并且P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是d-或l-Arg或d-或l-Lys，其余是任何氨基酸或不存在。

在其他实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：35)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：36)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQIDNO：37)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQIDNO：38)；其中P1是d-或l-Cha、或d-或l-Nal(2)；P2是d-或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-或l-(Phe-3,4,5F)、d-或l-(Phe-4CF3)；并且P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是d-或l-Arg，其余是任何氨基酸或不存在；P3是d-或l-丝氨酸；P4是d-或l-色氨酸；P5是d-或l-丝氨酸或d-或l-天冬酰胺；P6是d-或l-Bpa、d-或l-Phe₄NO₂、(d-或l-Ser-d-或l-Tyr)、或(d-或l-Ser-d-或l-Phe)。

而在一个其他实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：39)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：40)；其中P1是d-或l-Cha、或d-或l-Nal(2)；P2是(d-或l-Phe-2,3,4,5,6-F)、(d-或l-Phe-3,4,5F)或(d-或l-Phe-4CF3)；P3是d-或l-Ser；P4是d-或l-Trp；P5是d-或l-Ser；P6是d-或l-Bpa、或(d-或l-Ser-d-或l-Tyr)。

在一个其他实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：41)；P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：42)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：43)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQIDNO：44)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：45)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQIDNO：46)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：47)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：48)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQIDNO：49)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：50)；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQIDNO：51)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQIDNO：52)；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQIDNO：53)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQIDNO：54)；其中P1是d-或l-Cha、或d-或l-Nal(2)；P2是(d-或l-Phe-2,3,4,5,6-F)、(d-或l-Phe-3,4,5F)或(d-或l-Phe-4CF3)；P3是任何氨基酸(例如，d-或l-Ser、或d-或l-Pro)；P4是d-或l-Trp；P5是任何氨基酸(例如，d-或l-Ser)；P7是d-或l-Arg；P8是d-或l-Arg；P9是d-或l-Arg；P10是d-或l-Gln或d-或l-Arg；P11是d-或l-Arg；P12是d-或l-Arg；P6是d-或l-Bpa或(d-或l-Ser-d-或l-Tyr)。

在另一个实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQIDNO：55)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQIDNO：56)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQIDNO：57)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQIDNO：58)；其中P1是d-或l-Cha或d-或l-Nal(2)；P2是(d-或l-Phe-2,3,4,5,6-F)；P3是d-或l-Ser；P4是d-或l-Trp；P5是d-或l-Ser；P7是d-或l-Arg；P8是d-或l-Arg；P9是d-或l-Arg；P10是d-或l-Gln或d-或l-Arg；P11是d-或l-Arg；P12是d-或l-Arg；P6是d-或l-Bpa或(d-或l-Ser-d-或l-Tyr)。

在其他实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：99)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：100)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：59)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：60)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：61)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQIDNO：62)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：63)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQIDNO：64)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQIDNO：65)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：66)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：67)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：68)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：69)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：70)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：71)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：72)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：73)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：74)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：75)；或(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：76)。

在其他实施方案中，相邻肽或肽模拟物序列包括下列结构：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：77)。

为协助跨越细胞膜，本发明的肽和肽模拟物可任选包含一个聚赖氨酸和/或精氨酸序列。由于其它氨基酸序列(例如，HIVtat、细胞表面受体/蛋白的配体等)能够跨膜，并且还可利用其它分子来促进G2取消肽和肽模拟物进入细胞(如脂质体、微团及其它脂质分子、病毒和其它载体、电穿孔等)，包含聚赖氨酸和/或聚精氨酸序列是任选的。因此，在其他实施方案中，肽和肽模拟物不具有协助进入细胞的聚赖氨酸和/或精氨酸序列。例如，在两个特定实施方案中，不具有协助跨越细胞膜的聚赖氨酸/精氨酸序列的最小序列包括P6、P5、P4、P3、P2、P1，如d-Bpa、d-Ser、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha(SEQIDNO：101)；和d-Tyr、d-Ser、d-Pro、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha(SEQIDNO：102)。在另两个特定实施方案中，不具有协助跨越细胞膜的聚赖氨酸/精氨酸序列的最小序列包括，例如d-Bpa、d-Cys、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha、d-Cys(SEQIDNO：103)；和d-Tyr、d-Cys、d-Pro、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha、d-Cys(SEQIDNO：104)；Cys残基为任选环化的。

如上所述，本发明的化合物单独具有抗细胞增殖活性或G2取消活性。通过将本发明的化合物与可直接或间接引起核酸损伤的治疗结合，可提高其抗细胞增殖活性。也可通过将本发明的此类化合物与抑制细胞增殖的治疗结合来提高其抗细胞增殖活性，而不论该治疗是否损伤核酸。因此本发明进一步提供了包含本发明化合物(如肽或肽模拟物序列)和核酸损伤剂的组合物，以及包含本发明化合物(如肽或肽模拟物序列)和抗增殖剂的组合物。

本文所用术语“取消细胞周期G2检查点”、“破坏细胞周期G2检查点”、“损伤细胞周期G2检查点”及其语法变型均指抑制细胞以使细胞周期于G2检查点处停滞。其中细胞周期G2检查点被取消的细胞表现为细胞处于G2检查点的时间长度缩短，这一时间段的范围可以从完全缺乏G2检查点到适当条件下G2检查点在数分钟、数小时、数日、数周或更长的时间段上缩短。因此，与本发明的化合物接触的细胞的G2检查点时间段长度比处于缺乏该化合物情况下的细胞正常具有的G2检查点时间段长度短。例如，G2检查点时间段长度的缩短可能意味着当可处于G2期持续某一时间段，如4小时的细胞与本发明的化合物接触时，其处于G2期的时间段便短于4小时，如3.5小时、3小时、2.5小时、2小时、1小时或更短时间。

本文所用术语“细胞凋亡”指程序性细胞死亡，并如本领域所理解，在细胞生理学，如核酸断裂、半胱天冬酶激活等方面的相关变化。术语“毁灭(catasrtrophe)”指有由丝分裂过程中出现的错误所导致的细胞死亡。毁灭中存在细胞凋亡所特有的较少特征，如半胱天冬酶激活、染色体凝缩等。

本文所用术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用，并且指通过一个酰胺键或非酰胺等效物共价连接的两个或多个氨基酸。本发明的肽可为任意长度。例如，该肽可具有大约5至100个或更多个残基，诸如，5至12个、12至15个、15至18个、18至25个、25至50个、50至75个、75至100个残基，或更多个残基的长度。本发明的肽包括l-和d-异构体，以及l-和d-异构体的组合。该肽可包括通常与蛋白质的翻译后加工相关的修饰，例如，环化(如，二硫键或酰胺键)、磷酸化、糖基化、羧化、遍在蛋白化、十四烷基化或脂化。

本文所公开的肽进一步包括具有氨基酸结构和功能性类似物的化合物，例如，具有合成或非天然氨基酸或氨基酸类似物的肽模拟物，只要该模拟物具有一种或多种功能或活性。因此本发明的化合物包括“模拟物”和“肽模拟物”形式。

本文所用术语“模拟物”和“肽模拟物”指基本上具有与本发明的肽相同的结构和/或功能特性的合成化合物。该模拟物可完全由合成、非天然氨基酸类似物构成，或者可以是包括一种或多种天然肽氨基酸以及一种或多种非天然氨基酸类似物的嵌合分子。该模拟物也可以掺入任意数量的天然氨基酸保守性取代，只要该取代不破坏模拟物的活性即可。当本发明多肽为保守性变体时，可利用常规测试确定该模拟物是否具有必要的活性，如具有可检测的细胞周期G2检查点取消活性。因此，当施用于受试者或者接触在细胞上时可检测地破坏G2细胞周期检查点的模拟物会具有G2检查点取消活性。

肽模拟物组合物可包含非天然结构组分的任意组合，该非天然结构组分通常来自于三种结构基团：a)天然酰胺键(“肽键”)连接外的残基连接基团；b)代替天然存在的氨基酸残基的非天然残基；或c)诱导二级结构模拟的残基，即诱导或稳定二级结构，如β转角、γ转角、β折叠、α螺旋构象等。例如，当通过除酰胺键外的化学方法连接一个或多个残基时，多肽可以表征为模拟物。可通过酰胺键、非天然和非酰胺化学键连接个体肽模拟物残基，其它化学键或偶联方式包括例如戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯、双官能马来酰亚胺、N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)或N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)。可代替酰胺键的连接基团包括例如酮亚甲基(如-C(＝O)-CH₂-代替-C(＝O)-NH-)、氨基亚甲基(CH₂-NH)、乙烯、烯烃(CH＝CH)、醚(CH₂-O)、硫醚(CH₂-S)、四唑(CN₄-)、噻唑、retroamide、硫代酰胺或酯(见如Spatola(1983)，ChemistryandBiochemistryofAminoAcids,Peptides andProteins，第7卷，第267-357页，“PeptideandBackboneModifications,”MarcelDecker，NY)。

如上所述，通过包含一个或多个非天然残基以取代天然存在的氨基酸残基的肽可以被表征为模拟物。非天然残基是本领域已知的。可作为天然氨基酸残基模拟物的非天然残基的特定非限制性实例为芳香族氨基酸的模拟物包括D-或L-萘基丙氨酸；D-或L-苯基甘氨酸；D-或L-2噻吩基丙氨酸；D-或L-l、-2、3-、或4-芘基丙氨酸；D-或L-3噻吩基丙氨酸；D-或L-(2-吡啶基)-丙氨酸；D-或L-(3-吡啶基)-丙氨酸；D-或L-(2-吡嗪基)-丙氨酸；D-或L-(4-异丙基)-苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯丙氨酸；D-对氟-苯丙氨酸；D-或L-对联苯基苯丙氨酸；K-或L-对甲氧基-联苯基苯丙氨酸；D-或l-2-吲哚(烷基)丙氨酸；和D-或L-烷基胺，其中烷基可为取代的或未取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、异丙基、异丁基、sec-isotyl、异戊基或非酸性氨基酸。可被用于替代天然芳香环的非天然氨基酸的芳香环包括例如噻唑基、苯硫基、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基和吡啶基芳香环。

通过用非羧化氨基酸，如(膦酰基)丙氨酸和硫酸化苏氨酸取代，同时维持负电荷，可生成酸性氨基酸的模拟物。通过与包括例如1-环己基-3(2-吗啉基-(4-乙基)碳二亚胺或1-乙基-3(4-氮杂-4,4-二甲基戊基)碳二亚胺在内的碳二亚胺(R’-N-C-N-R’)反应，也可以选择性地修饰羧基侧基(如天冬氨酰基或谷氨酰基)。通过与铵离子反应也可将天冬氨酰或谷氨酰基团转化为天冬酰胺酰和谷氨酰胺酰基团。

除了赖氨酸和精氨酸，还通过以例如氨基酸鸟氨酸、瓜氨酸或(胍基)-乙酸、或(胍基)烷基-乙酸取代，可生成碱性氨基酸的模拟物，其中烷基可为取代的或未取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、异丙基、异丁基、sec-isotyl、异戊基或非酸性氨基酸。腈衍生物(如包含代替COOH的CN-部分)可取代天冬酰胺或谷氨酰胺。天冬酰胺酰基和谷氨酰胺酰基残基可脱氨基成对应的天冬氨酰基或谷氨酰基残基。

精氨酸模拟物可通过使精氨酰基与一种或多种试剂(包括例如苯甲酰甲醛、2,3-丁二酮、1,2-环己二酮或茚三酮)任选地于碱性条件下反应而生成。酪氨酸残基模拟物可通过使酪氨酰基与芳香族重氮化合物或四硝基甲烷反应而生成。N-乙酰基咪唑和四硝基甲烷可被用于分别形成O-乙酰基酪氨酰基类和3-硝基衍生物。

赖氨酸模拟物可通过使赖氨酰基与琥珀酸或其它羧酸酐反应而生成(并可改变氨基末端残基)。赖氨酸及其它含α-氨基的残基模拟物也可通过与亚氨基酯(例如甲基吡啶亚胺甲酯、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯硼氢化物、三硝基苯磺酸、O-甲基异脲、2,4,戊二酮)反应，并采用乙醛酸进行转酰氨基酶催化反应而生成。

蛋氨酸模拟物可通过与蛋氨酸亚砜反应而生成。脯氨酸模拟物包括例如哌啶酸、噻唑烷羧酸、3-或4-羟基脯氨酸、脱氢脯氨酸、3-或4-甲基脯氨酸和3,3,-二甲基脯氨酸。组氨酸模拟物可通过使组氨酰基与二乙基焦碳酸酯或对溴苯甲酰甲基溴反应而生成。其它模拟物包括例如，通过脯氨酸和赖氨酸的羟基化作用；丝氨酰基或苏氨酰基残基的羟基基团的磷酸化作用；赖氨酸、精氨酸和组氨酸的α-氨基的甲基化作用；N-末端胺的乙酰化作用；主链酰胺残基的甲基化或用N-甲基氨基酸取代；或C-末端羧基的酰胺化作用生成的那些模拟物。

一个或多个残基也可被手性相反的氨基酸(或肽模拟物残基)替代。因此，以L-构型(也可被称为R或S，取决于该化学实体的结构)天然存在的任何氨基酸，可被相同但属于相反手性的氨基酸或模拟物替代，这些相反手性的氨基酸或模拟物被称为D氨基酸，但也可被称为R-或S-型。

本发明的肽和肽模拟物进一步包括本文所列序列的修饰形式，前提是修饰形式保留了未修饰或参照肽或肽模拟物的至少一部分功能。例如，修饰肽或肽模拟物将保留至少一部分的细胞增殖抑制或G2取消活性，但仍可能具有相对于参照肽或肽模拟物而言提高或降低的细胞增殖抑制或G2取消活性。

修饰肽和肽模拟物中可以存在一个或多个被另一残基取代、被添加至序列中或从序列中缺失的氨基酸残基。在一个实施方案中，修饰肽或肽模拟物存在一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失(如1-3个，3-5个，5-10个或更多个)。在一个方面，用侧链占据与参照氨基酸或模拟物(被取代的氨基酸或模拟物)相似的空间的氨基酸或模拟物进行取代。另一方面，用结构上类似于人残基的非人氨基酸进行取代。在一个特定方面，取代为保守性氨基酸取代。

本文所用术语“相似空间”指化学部分占据的三维空间在尺寸上与参照部分所占据的三维空间相似。占据相似空间的部分典型地在尺寸上与参照部分相似。“占据相似侧链空间”的氨基酸或模拟物具有的侧链所占据的三维空间在尺寸上与参照氨基酸或模拟物相似。d-(Phe-2,3,4,5,6-F)、l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)、l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)的特定实例为(l或d-Phe-2R1,3R2,4R3,5R4,6R5)，其中R1、R2、R3、R4、R5可为氯化物、溴化物、氟化物、碘化物、氢、氧化氢或不存在。对小分子而言，如尺寸大约为1埃的氟化物，相似空间可能缺乏一个部分。

术语“保守性取代”指一个氨基酸被在生物学、化学或结构上相似的残基替代。生物学上相似指该取代与生物学活性，如抗细胞增殖或G2取消活性相容。结构上相似指氨基酸具有长度相似的侧链，如丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸，或者具有相似尺寸。化学相似性指残基具有相同电荷或均为亲水性的或疏水性的。特定实例包括由一个疏水性残基，诸如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或蛋氨酸取代另一个疏水性残基，或者由一个极性残基取代另一个极性残基，如精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸，或谷氨酰胺取代天冬酰胺、丝氨酸取代苏氨酸等。

因此，本发明的肽和肽模拟物包括序列与表1所列肽和肽模拟物序列不一致的肽和肽模拟物。在一个实施方案中，肽或肽模拟物所具有的序列与表1所列序列有50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高的同一性。在一个方面，该同一性超越了序列的限定区域，如氨基或羧基末端3-5个残基。

利用本领域已知的任何方法均可制备并分离本发明包括肽和肽模拟物的化合物。利用本领域已知的化学方法可完整或部分地合成肽(见如Caruthers(1980)NucleicAcidsRes.Symp.Ser.215-223；Horn(1980)NucleicAcidsRes.Symp.Ser.225-232；和Banga,A.K.,TherapeuticPeptidesandProteins,Formulation,ProcessingandDeliverySystems(1995)TechnomicPublishingCo.,Lancaster,PA)。可利用各种固相技术进行肽合成(见如Roberge(1995)Science269：202；Merrifield(1997)MethodsEnzymol.289：3-13)，并且可例如利用ABI431A肽合成仪(PerkinElmer)根据生产商的说明书实现自动合成。

可利用本领域已知的多种程序和方法合成掺入各个合成残基和多肽的模拟物(见如OrganicSynthesesCollectiveVolumes,Gilman等人(编)JohnWiley&Sons,Inc.,NY)。也可利用组合方法合成肽和肽模拟物。用于生成肽和肽模拟物文库的技术是熟知的，并且包括例如多中心肽合成(multipin)、茶叶袋(teabag)和裂解-偶联-混合(split-couple-mix)技术(见例如al-Obeidi(1998)Mol.Biotechnol.9：205-223；Hruby(1997)Curr.Opin.Chem.Biol.1：114-119；Ostergaard(1997)Mol.Divers.3：17-27；和Ostresh(1996)MethodsEnzymol.267：220-234)。可通过化学修饰方法进一步产生经修饰的肽(见例如，Belousov(1997)NucleicAcidsRes.25：3440-3444；Frenkel(1995)FreeRadic.Biol.Med.19：373-380；和Blommers(1994)Biochemistry33：7886-7896)。

为更容易地分离重组合成的肽，或鉴定并分离抗体或抗体表达B细胞，肽也可作为融合蛋白合成并表达，该融合蛋白上连接一个或多个可用于生成具有更多免疫原性的肽的其它结构域。有利于检测和纯化的结构域包括例如金属鳌合肽，如允许在固定的金属上纯化的聚组氨酸束(polyhistidinetract)和组氨酸-色氨酸组件(histidine-tryptophanmodule)；允许在固定的免疫球蛋白上纯化的蛋白质A结构域；和用于FLAGS延伸/亲和纯化系统(ImmunexCorp,SeattleWA)的结构域。将可裂解连接子序列，如因子Xa或肠激酶(Invitrogen,SanDiegoCA)包含在纯化结构域与肽之间可用于促进肽纯化。例如，一个表达载体可包括一个被连接至6个组氨酸残基，以及其后的硫氧还蛋白和肠激酶裂解位点的肽编码核酸序列(见如Williams(1995)Biochemistry34：1787-1797；Dobeli(1998)ProteinExpr.Purif.12：404-14)。组氨酸残基有利于融合蛋白的检测和纯化，而肠激酶裂解位点则提供了一种从融合蛋白的其余部分纯化肽的方法。有关编码融合蛋白的载体的技术以及融合蛋白的应用是本领域已知的(见如Kroll(1993)DNACell.Biol.,12：441-53)。

本发明进一步提供了编码本发明肽的核酸。在特定实施方案中，核酸编码长度大约为8至12、12至15、15至18、15至20、18至25、20至25、25至35、25至50或50至100个或更多氨基酸的本发明肽序列。

术语“核酸”和“多核苷酸”在本文可互换使用，指所有形式的核酸，包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。该核酸可为双链、单链，或三链、线形或环形。核酸包括基因组DNA、cDNA和反义。RNA核酸可为已被剪接或未剪接的mRNA、rRNA、tRNA或反义(如RNAi)。本发明的核酸包括天然存在的、合成的以及核苷酸类似物和衍生物。这种改变的或修饰的多聚核苷酸包括提供例如核酸酶抗性的类似物。核酸长度也可短于示范的肽序列。例如，任意一种肽序列的子序列均可编码具有抗增殖或G2取消活性的肽。

利用多种熟知的标准克隆和化学合成方法中的任意一种均可制备核酸，并可通过本领域技术人员已知的定点诱变或其它重组技术有意地对其进行改造。多核苷酸的纯度可借助于测序、凝胶电泳等方法确定。

本发明的核酸可被插入核酸构建体中，该构建体中核酸的表达受“表达控制元件”的影响或调节，该组合被称为“表达盒”。术语“表达控制元件”指调节或影响与其可操作地连接的核酸序列的表达的一个或多个序列元件。与核酸序列可操作地连接的表达控制元件控制该核酸序列的转录及适当的翻译。

术语“可操作地连接”指功能性并置，其中所描述的组分之间的关系可使其以各自的方式发挥功能。典型的表达控制元件于基因的5’或3’末端并置，但也可以是内含子。启动子通常位于编码序列的5’端。“启动子”指足以引导转录的最小序列元件。

表达控制元件包括位于蛋白质编码基因之前的启动子、增强子、转录终止子、基因沉默子、起始密码子(如ATG)。表达控制元件激活了组成型转录、诱导型转录(即需要外部信号以激活)或去阻抑转录(即信号阻断了转录；移除该信号便可激活转录)。表达盒也可包括足以使基因表达对特定细胞类型或组织而言是可控制的控制元件(即组织特异性控制元件)。

本发明的核酸可被插入质粒中用于在宿主细胞内繁殖，以及随后的基因操纵。该质粒为可于宿主细胞内稳定繁殖的核酸；为促使宿主细胞内编码肽的该核酸的表达，该质粒任选含有表达控制元件。本文所用术语“载体”与质粒同义，并且也可包括在宿主细胞内用于表达的表达控制元件。质粒和载体通常包含至少一个用于在细胞内繁殖的复制起点和启动子。因此，质粒和载体有助于编码肽的核酸的基因操纵，有助于肽的生成，也有助于例如在宿主细胞或整个生物体内表达该肽。

因此，可利用组成型启动子如T7或诱导型启动子如噬菌体λ的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac杂合启动子)于细菌系统内表达肽；在酵母系统内则利用组成型启动子如ADH或LEU2，或诱导型启动子如GAL(见如Ausubel等人,CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2卷,第13章,编辑GreenePublish.Assoc.&WileyInterscience,1988；Grant等人MethodsinEnzymology,153：516(1987),编辑.Wu&Grossman；BitterMethodsinEnzymology,152：673(1987),编辑.Berger&Kimmel,Acad.Press,N.Y.；和Strathern等人,TheMolecular BiologyoftheYeastSaccharomyces(1982)编辑.ColdSpringHarborPress,第I和II卷；R.Rothstein，DNACloning,APracticalApproach,第11卷,第3章,编辑.D.M.Glover,IRLPress,Wash.,D.C.,1986)；在昆虫细胞系统内则利用组成型或诱导型启动子，如蜕皮激素；以及在哺乳动物细胞系统内利用组成型启动子如SV40、RSV，或来源于哺乳动物细胞基因组的诱导型启动子如金属硫蛋白IIA启动子、热休克启动子，或来源于哺乳动物病毒的启动子如腺病毒晚期启动子，或可诱导的小鼠乳腺肿瘤病毒长末端重复序列。肽表达系统进一步包括设计供体内使用的载体，包括腺病毒载体(美国专利号5,700,470和5,731,172)、腺相关载体(美国专利号5,604,090)、单纯疱疹病毒载体(美国专利号5,501,979)和逆转录病毒载体(美国专利号5,624,820、5,693,508和5,674,703以及WIPO公布WO92/05266和WO92/14829)。牛乳头瘤病毒(BPV)也可应用于基因治疗(美国专利号5,719,054)。这种基因治疗载体也包括基于CMV的载体(美国专利号5,561,063)。

因此，本发明也提供了插入宿主细胞内的编码本发明肽的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞为原核细胞。在另一个实施方案中，宿主细胞为真核细胞。在各个方面，该真核细胞为酵母或哺乳动物(如人、灵长类等)细胞。

本文所用“宿主细胞”指其中引入可被繁殖、转录或编码所表达肽的核酸的细胞。该术语也包括该宿主细胞的任意子代。

宿主细胞包括但不限于微生物，如细菌或酵母；植物、昆虫和哺乳动物细胞。例如，提供了由重组噬菌体核酸、质粒核酸或粘粒核酸表达载体转化的细菌；由重组酵母表达载体转化的酵母；由重组病毒表达载体(如花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染，或由重组质粒表达载体(如Ti质粒)转化的植物细胞系统；由重组病毒表达载体(如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；或由重组病毒表达载体(如逆转录病毒、腺病毒、牛痘病毒)感染的动物细胞系统，或经工程改造用于稳定表达的转化动物细胞系统。

表达载体也可包含编码可选择标记或可识别标记(如β-半乳糖苷酶)的核酸，其中该可选择标记可赋予其对选择压力的抗性，从而使具有该载体的细胞可被识别、生长并扩增。可选地，可选择标记可位于第二个载体之上，该载体与含本发明多核苷酸的第一个载体一起共转染进宿主细胞内。可利用大量的选择系统，包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(Wigler等人,Cell11：223(1977))、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(Szybalska等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA48：2026(1962))和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等人,Cell22：817(1980))基因，上述基因均可分别应用于tk-、hgprt-或aprt-细胞。抗代谢物抗性可作为选择下列基因的基础，即赋予氨甲喋呤抗性的dhfr(O'Hare等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78：1527(1981))；赋予霉酚酸抗性的gpt基因(Mulligan等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78：2072(1981))；赋予氨基糖苷G-418抗性的新霉素基因(Colberre-Garapin等人,J.Mol.Biol.150：1(1981))；以及赋予潮霉素抗性的潮霉素基因(Santerre等人,Gene30：147(1984))。其它可选择基因包括可使细胞利用吲哚代替色氨酸的trpB；可使细胞利用组胺代替组氨酸的hisD(Hartman等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：8047(1988))；以及赋予鸟氨酸脱羧酶抑制剂2-(二氟甲基)-DL-鸟氨酸，DFMO抗性的ODC(鸟氨酸脱羧酶)(McConlogue(1987)，CurrentCommunicationsinMolecularBiology,ColdSpringHarborLaboratory)。

本文所用术语“核酸损伤治疗”和“核酸损伤剂”指直接或间接损伤核酸(如DNA、cDNA、基因组DNA、mRNA、tRNA或rRNA)的任何治疗方案。这类试剂的特定实例包括烷化剂、亚硝基脲、抗代谢物、植物碱、植物提取物和放射性同位素。所述试剂的特定实例还包括核酸损伤药物，例如，5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、S-1(替加氟(Tegafur)，5-氯-2,4-二羟基吡啶和氧嗪酸)、5-乙炔尿嘧啶、阿糖胞嘧啶(ara-C)、5-氮杂胞苷(5-AC)、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞苷(dFdC)、嘌呤抗代谢物(巯基嘌呤、硝基咪唑硫嘌呤、硫代鸟嘌呤)、盐酸吉西他滨(Gemzar)、喷司他丁、别嘌呤醇、2-氟-阿糖腺嘌呤(2F-ara-A)、羟基脲、硫芥(双氯乙基硫醚)、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、噻替派、AZQ、丝裂霉素C、去水卫矛醇、二溴卫矛醇、烷基磺酸盐(白消安)、亚硝基脲(BCNU、CCNU、4-甲基CCNU或ACNU)、甲基苄肼、氮烯咪胺、蝴蝶霉素、蒽环类抗生素(anthracyclin)诸如多柔比星(阿霉素；ADR)、柔红霉素(Cerubicine)、伊达比星(Idamycin)和表柔比星(Ellence)、蒽环类抗生素类似物诸如米托蒽醌、放射菌素D、非嵌入拓扑异构酶抑制剂如表鬼臼毒素(依托泊苷＝VP16、替尼泊苷＝VM-26)、鬼臼毒素，博莱霉素(Bleo)、培洛霉素、与核酸形成加合物的化合物，包括铂衍生物(如顺铂(CDDP)、顺铂的反式类似物、卡铂、异丙铂、四铂和奥沙利铂)、喜树碱、拓扑替康、伊力替康(CPT-11)和SN-38。核酸损伤治疗的特定实例包括放射(如紫外线(UV)、红外线(IR)或α-、β-或γ-射线)和环境冲击(如高热)。

本文所用术语“抗增殖治疗”和“抗增殖剂”指直接或间接抑制细胞、病毒、细菌或其它单细胞或多细胞生物体的增殖，而无论该治疗或药剂是否损伤核酸的任何治疗方案。抗增殖剂的特定实例为抑制细胞增殖，或病毒增殖或复制的抗肿瘤和抗病毒药物。特定实例尤其包括环磷酰胺、硫唑嘌呤、环孢菌素A、强的松龙、美法仑、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、泰素、长春花碱、长春新碱、多柔比星、放线菌素D、光神霉素、卡氮芥、罗氮芥、司莫司汀、链脲佐菌素、羟基脲、顺铂、米托坦、甲基苄肼、达卡巴嗪和二溴甘露醇。引起核酸复制错误或抑制核酸复制的抗增殖剂如核苷和核苷酸类似物(如AZT或5-AZC)。

本发明的肽和肽模拟物也可增强微管稳定剂或破坏稳定剂，如长春花生物碱(长春花碱＝VLB、长春新碱＝VCR、长春瑞宾＝VRLB、长春氟宁＝VFL)和紫杉烷类药物(紫杉醇和多烯紫杉醇＝taxotare)的抗细胞增殖活性。因此，本发明的组合物可进一步地包括这类药剂，并将其用于本发明方法中。

利用本发明的化合物可治疗的细胞包括任何希望抑制或防止其体外、离体或体内增殖的细胞。特定靶细胞表现为细胞周期G1检查点时间短于正常细胞，或者具有受损的细胞周期G1检查点，从而使该细胞在转而完成核酸修复之前足够时间便已退出G1检查点。因此候选细胞包括快速增殖的细胞，而无论该细胞是正常还是异常。特定实例为良性或肿瘤性、转移性或非转移性的细胞。其它候选细胞可通过测定其增殖速率或其停留于G1期的时间长度识别。也可通过使测试细胞与本发明的化合物单独接触，或联合核酸损伤疗法，并且确定已接触细胞是否表现为增殖减少或细胞死亡或凋亡/毁灭增多，从而识别候选细胞。

因此，本发明的化合物可用于抑制细胞于体外、离体及体内的增殖。同样，可单纯利用本发明的化合物，或联合直接或间接导致核酸损伤的治疗或抗增殖治疗，对患有或处于患有以异常、不希望的或有害的细胞增殖或细胞存活，或异常或缺乏的细胞分化为特征的疾患或生理状况危险的受试者进行治疗。

因此，根据本发明，提供了抑制细胞增殖的方法、提高细胞对核酸损伤剂或治疗的敏感性的方法，以及增加对体外、离体和体内细胞的核酸损伤的方法。在一个实施方案中，方法包括使细胞(如培养细胞或存在于受试者体内的细胞)与一定量足以抑制该细胞增殖的本发明肽或肽模拟物接触。在另一个实施方案中，方法包括使细胞与一定量足以提高细胞对核酸损伤剂或治疗敏感性的本发明肽或肽模拟物接触。在另一实施方案中，方法包括使细胞与一定量足以增加对该细胞的核酸损伤的本发明肽或肽模拟物接触。在各个方面，方法进一步包括使细胞与核酸损伤剂接触，或者使细胞暴露于核酸损伤治疗。

本发明进一步提供了治疗受试者体内细胞增殖疾患或分化疾患的方法，所述疾患包括以不希望的或有害的细胞增殖或细胞存活为特征的病状、以缺乏或异常细胞凋亡为特征的病状、以异常或缺乏细胞存活为特征的病状，也包括以异常或缺乏细胞分化为特征的病状。在一个实施方案中，方法包括向患有细胞增殖疾患或处于患有细胞增殖疾患危险的受试者施用一定量可有效治疗细胞增殖疾患的本发明肽或肽模拟物。在一个方面，该量足以改善受试者的病状。在特定方面，该改善包括在至少一部分的靶细胞(如异常增殖细胞)中出现细胞增殖减少、细胞数量减少、细胞数量的增加受抑制、凋亡增加或存活减少。另一方面，在对受试者施用抑制细胞增殖的治疗之前、同时或之后施用本发明的化合物。在其它特定方面，至少一部分增殖疾患的细胞位于血液、乳腺、肺、甲状腺、头或颈、脑、淋巴、胃肠道、泌尿生殖道、肾脏、胰腺、肝脏、骨骼、肌肉或皮肤中。

在另一个实施方案中，方法包括向受试者施用一定量的化合物以治疗实体瘤。在另一个实施方案中，方法包括向受试者施用一定量的本发明化合物以治疗液体瘤。在各个方面，是在向具有肿瘤的受试者施用其它抗肿瘤疗法之前、同时或之后施用本发明的化合物。

本文所用术语“增殖疾患”和“增殖病状”指以异常或不希望的增殖(如细胞、病毒、细菌、真菌等的增殖)为特征的任何病理性或非病理性的生理状况。术语“细胞增殖疾患”和“细胞增殖病状”指以异常或不希望的细胞增殖为特征的任何病理性或非病理性的生理病状，也包括以不希望的或有害细胞增殖或细胞存活(如由于缺乏凋亡)为特征的病状、以缺乏或异常细胞凋亡为特征的病状，和以异常或不希望的或有害细胞存活为特征的病状。术语“分化疾患”指以异常或缺乏分化为特征的任何病理性或非病理性的生理病状。

适于治疗的增殖或分化疾患包括以异常或不希望的细胞数量、细胞生长或细胞存活为特征的、良性和瘤性的疾病和非病理性生理状况。因此这种疾患或病状可能构成疾病状态，并包括所有类型的癌生长或致瘤过程、转移组织或恶性转化细胞、组织或器官，或者可能是非病理性的，即由正常的偏离，但并不与疾病典型相关。根据本发明可治疗的非病理性病状的特定实例是源于创伤修复的组织再生长，而该创伤修复可致使疤痕形成。

包含增生或分化疾患的细胞可聚集成一个细胞团块或者被分散。术语“实体瘤”指通常聚集在一起并形成团块的瘤形成或转移。特定实例包括内脏瘤，如胃或结肠癌、肝细胞瘤、肾癌、肺和脑肿瘤/癌。“液体瘤”指造血系统的瘤形成，如淋巴瘤、骨髓瘤和白血病，或者是由于不通常形成实体团块而本质上处于扩散状态的瘤形成。白血病的特定实例包括急性和慢性成淋巴细胞的白血病、成髓细胞的白血病及多发性骨髓瘤。

这类疾患包括可几乎影响任何细胞或组织类型的赘生物或癌症，如癌、肉瘤、黑素瘤、转移性疾患或造血性瘤形成疾患。转移瘤可来源于许多原发肿瘤类型，包括但不限于乳腺、肺、甲状腺、头和颈、脑、淋巴、胃肠(口、食道、胃、小肠、结肠、直肠)、泌尿生殖道(子宫、卵巢、子宫颈、膀胱、睾丸、阴茎、前列腺)、肾脏、胰腺、肝脏、骨骼、肌肉、皮肤等。

癌指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，并且包括呼吸系统癌、胃肠系统癌、生殖泌尿系统癌、睾丸癌、乳癌、前列腺癌、内分泌系统癌及黑素瘤。示例性的癌包括形成自子宫颈、肺、前列腺、乳腺、头和颈、结肠、肝和卵巢的那些。该术语也包括癌肉瘤，例如包括由癌性和肉瘤性组织构成的恶性肿瘤。腺癌包括腺组织的癌，或内部肿瘤形成腺状结构。

肉瘤指间质细胞来源的恶性肿瘤。示例性肉瘤包括例如淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤和纤维肉瘤。

本文所用术语“造血性增殖异常”指涉及增生性/赘生性造血起源细胞的疾病，如来源于骨髓、淋巴或红细胞系，或其前体细胞。通常，这类疾病起因于分化不良的急性白血病，如成红血细胞白血病和急性巨核细胞白血病。其他示例性的骨髓疾患包括但不限于急性前髓细胞白血病(APML)、急性髓细胞白血病(AML)及慢性髓细胞白血病(CML)；淋巴恶性肿瘤包括但不限于包括B细胞系ALL和T细胞系ALL的急性成淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、前淋巴细胞白血病(PLL)、毛细胞白血病(HLL)和Waldenstrom巨球蛋白血症(WM)。其它恶性淋巴瘤包括但不限于非霍奇金淋巴瘤及其变体、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、大颗粒淋巴细胞白血病(LGF)、霍奇金病和Reed-Sternberg病。

与本发明的化合物联合应用的治疗包括本文公开或本领域已知的任何抗增殖、核酸损伤或抗肿瘤治疗。例如，抗细胞增殖或抗肿瘤治疗可能包括放射治疗或外科切除，并任意联合药物治疗。该治疗可能包括施用化学物质，如放射性同位素、诸如化疗剂的药物，或者包括遗传疗法，诸如抗致癌基因(如Rb、DCC、p53等)、显性负性致癌基因或反义致癌基因。该化合物可以在其它治疗方案之前、同时或之后施用。例如，对抗细胞增殖疗法(如放射疗法、化学疗法、基因疗法、外科切除术等)的候选受试者而言，可于开始实施抗细胞增殖疗法之前施用本发明的化合物。因此，提供了预防性治疗方法。

术语“受试者”指动物，典型的为哺乳动物，如灵长类(人、猿、长臂猿、黑猩猩、猩猩、猕猴)、家畜(狗和猫)、农场动物(马、牛、山羊、绵羊、猪)及实验动物(小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。受试者包括动物疾病模型(如携带肿瘤的小鼠)。

适合治疗的受试者包括当前正经历或候选接受针对增生或分化疾患的治疗(如抗肿瘤疗法)的受试者。其它候选受试者包括例如，处于发展细胞增殖疾患危险中的受试者。因此，本发明方法可应用于治疗处于发展细胞增殖疾患危险中，但还未表现出该疾患的明显症状的受试者。具有可发展细胞增殖疾患的遗传性倾向或家族史的受试者被认为是处于危险的受试者。例如，具有激活的致癌基因，或具有肿瘤抑制基因突变或缺失的受试者为候选受试者。因此，可利用常规遗传筛选确定是否存在遗传性损害，或询问受试者的家族史，以确定其是否处于该疾患的危险中，从而鉴定处于危险的受试者。处于危险的受试者的一个特定实例是具有家族史，或其它显示出易患癌症倾向的遗传特征的受试者，该受试者体内的赘生性或抗药赘生性细胞表达CD40。遗传性疾病的一个具体特定实例是由于Rb肿瘤抑制基因的缺陷而导致的眼癌。

施用的量通常为“有效量”或“足够量”，即足以产生预期效果的量。因此，有效量包括可获得下述一种或多种效果的量：至少一部分包括增殖细胞的细胞(如至少一部分靶细胞)增殖减少、细胞数量减少、增多的增殖受抑制、增加的细胞数量受抑制、细胞凋亡增加或存活减少。因此，例如，当希望细胞增殖受抑制时，有效量为可检测到细胞增殖或增殖细胞数量减少，或者细胞凋亡增加或细胞存活减少现象的量。因此该量足以降低靶细胞数量、稳定靶细胞数量或抑制靶细胞数量的增加。例如，当疾患包括实体瘤时，减小肿瘤尺寸，稳定肿瘤尺寸，或防止至少一部分肿瘤的进一步的肿瘤生长(如抑制包含肿瘤团块的5-10％，或10-20％或更多细胞的生长)即为令人满意的临床终点。当疾患包括液体瘤时，减少肿瘤细胞数量，稳定肿瘤细胞数量，或抑制至少一个肿瘤细胞亚群的肿瘤细胞数量的进一步增加(如抑制5-10％或10-20％或更多细胞的生长)为令人满意的临床终点。

此外，被认为有效的量应可防止或抑制病状或疾患的发展。例如，某些肿瘤随着发展日益具有侵略性，包括进展为转移瘤形式。因此，可导致减少或防止肿瘤日益具有侵略性或转移现象的量也被认为是有效量。相应的，抑制或防止疾患或病状的恶化，即稳定状况是另一项令人满意的临床终点。

检查含液体瘤的生物样本(如血液或组织样本)，可确定肿瘤细胞团块或数量是否已缩减，或者肿瘤细胞增殖的抑制是否已发生。对实体瘤而言，侵入性和非侵入性成像方法可确定肿瘤尺寸减少，或肿瘤尺寸的增加受抑制的情况。受体阳性肿瘤的受体计数减少可被用于评估肿瘤细胞增殖的减少或抑制。激素生成肿瘤，如乳腺、睾丸或卵巢癌的激素量可被用于评估肿瘤增殖的减少或抑制。

有效量也可在客观或主观上减低或减少与疾患或病状相关症状的严重程度或频率。例如，缓解疼痛、呕吐或其它不适，或增进食欲或主观幸福感的本发明化合物的量是令人满意的临床终点。

有效量还包括采用另一方案治疗的用量(如剂量)或频率的减少，这也被认为是令人满意的临床终点。例如，采用本发明化合物治疗的癌症患者可能需要较少的核酸损伤治疗以抑制癌细胞增殖。该实例中，有效量将包括与未经本发明化合物治疗的剂量频率或所施用的量相比，减少对受试者所施用的核酸损伤剂的剂量频率或量的量。

导致受试者的病状改善或治疗益处的本发明方法可能在持续时间上相对较短，例如，改善可能持续数小时、数日或数周，或延续更长的一段时间，如数月或数年。有效量并不一定能完全根除病状或疾患的任意或所有症状。因此，当存在如采用任何适用于确定疾患或病状的状态的上述标准或本领域已知的其它标准所确定受试者状况随着短或长的时间段出现主观或客观上的改善时，便实现了对于有效量的令人满意的临床终点。正如本文所描述或本领域已知的，有效提供一种或多种有益效果的量被称为受试者状况的“改善”或对受试者有“治疗益处”。

基于动物研究或任选地在人临床试验中，可确定本发明化合物的有效量。本领域技术人员将理解可能影响治疗特定受试者所需剂量或时机的各种因素，如一般健康状况、年龄或受试者的性别、疾患或病状的严重程度或阶段、之前的治疗、对不希望的副作用的易感性、期望的临床结果及其它疾患或病状的存在。这些因素可能影响提供对治疗益处而言足够量所需的剂量和时机。剂量方案也考虑药物代谢动力学，即药物组合物的吸收速率、生物利用率、代谢及清除(见如Egleton(1997)“Bioavailabilityandtransportofpeptidesandpeptidedrugsintothebrain”Peptides18：1431-1439；和Langer(1990)Science249：1527-1533)。此外，剂量或治疗方案可根据受试者具体调整或基于药物基因组数据而改变。

因此，根据实现期望效果的任何方案或途径，可全身性、区域(如直接针对器官或组织，如通过注射进入门静脉以治疗肝脏的细胞增殖疾患)或局部地(如直接进入肿瘤团块)单独或作为药物组合物来施用本发明的化合物。可将该化合物和药物组合物作为每天单剂或多剂(如以低剂量)，或间断地(如以较高剂量每隔一天、一周一次等)施用。该化合物和药物组成可借助于吸入(如气管内)、口服、静脉内、动脉内、血管内、鞘内、腹膜内、肌肉内、皮下、腔内、经皮(如局部)、经粘膜(如经口、膀胱、阴道、子宫、直肠或鼻)方式通过多次施用、持续释放(如随着时间逐渐灌注)或单次浓注而得以施用。用于施用药物的可植入装置，包括微型加工装置是本领域所熟知的，并且也可用于将本发明的化合物送递给受试者。

静脉内(IV)施用的化合物应经若干小时(典型的1、3或6小时)内，以约0.01mg/h至约1.0mg/h施用，该方式可以间歇性的循环重复一周或数周。可采用明显更高的剂量(如范围扩大到约10mg/ml)，特别是当将药物施用于隐蔽位点且不进入血流，如进入体腔或器官内腔，如脑脊髓液(CSF)中时。

因此，本发明进一步提供了药物组合物。这些药物组合物可用于向受试者进行体内或离体施用，并用于例如采用本发明的化合物治疗受试者。

本文所用术语“药学上可接受的”和“生理学上可接受的”包括与药物施用相容的溶剂(水性或非水性)、溶液、乳剂、分散介质、包衣、等渗和吸收促进或延迟剂。因此，“药物组合物”或“药物制剂”指适合在受试者体内发挥药物用途的组合物。该药物组合物和制剂包括一定量的本发明化合物，例如，有效量的本发明的肽或肽模拟物、编码所述肽或肽模拟物的核酸、载体或细胞，以及药学上或生理学上可接受的载体。

药物组合物可被配制为与特定施用途径(全身或局部的)相容。因此，药物组合物包括适合通过各种途径施用的载体、稀释剂或赋形剂。

肠内(口服)施用的制剂可包含于片剂(有包衣或无包衣)、胶囊(硬或软)、微球、乳剂、粉末、颗粒、晶体、悬液、糖浆或酏剂中。包括例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁的常规无毒性固体载体可用于制备固体制剂。补充性的活性化合物(如防腐剂、抗菌剂、抗病毒和抗真菌剂)也可掺入制剂中。液体制剂也可用于肠内施用。载体可选自各种油，包括石油、动物油、植物油或合成油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油。合适的药物赋形剂包括例如淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、天然碳酸钙(chalk)、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇。

用于肠内、胃肠外或经粘膜送递的药物组合物包括例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、汉克斯溶液(Hank’ssolution)、林格氏溶液(Ringer’ssolution)、右旋糖/盐水和葡萄糖溶液。制剂可含有接近生理条件的辅助性物质，如缓冲剂、张度调整剂、润湿剂、去污剂等。添加剂也可包括其它活性成分，如杀菌剂或稳定剂。例如，溶液可含有乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、单月桂酸失水山梨醇酯或三乙醇胺油酸酯。Bai(1997)J.Neuroimmunol.80：65-75；Warren(1997)J.Neurol.Sci.152：31-38；和Tonegawa(1997)J.Exp.Med.186：507-515中描述了其它胃肠外制剂和方法。胃肠外制剂可被封入安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶内。

用于皮内或皮下施用的药物组合物可包括无菌稀释剂，如水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸、谷胱甘肽或亚硫酸氢钠；鳌合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调整张度的试剂，如氯化钠或右旋糖。

用于注射的药物组合物包括水性溶液(水溶的)或分散液，以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对静脉内施用而言，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、CremophorEL^TM(BASF,Parsippany,NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)及其适当混合物的溶剂或分散介质。流动性可例如通过利用包衣如卵磷脂，在分散液情况下通过维持所需颗粒尺寸，以及通过利用表面活性剂来维持。抗菌和抗真菌剂包括例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸和硫柳汞。组合物内可包含等渗剂，如糖；多元醇诸如甘露醇、山梨糖醇；氯化钠。可将得到的溶液包装以原样使用或者冻干，冻干制剂可以在以后施用前与无菌溶液混合。

药学上可接受的载体可含有稳定、提高或延迟吸收或清除的化合物。这种化合物包括例如碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；低分子量蛋白质；降低肽的清除或水解的组合物；赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲剂。延迟吸收的物质包括例如单硬脂酸铝和明胶。去污剂也可用于稳定或提高或降低药物组合物的吸收，包括脂质体载体。为防止化合物被消化，可将其与使其具有抗酸性和酶水解性的组合物复合，或者将化合物复合进合适的抗性载体，如脂质体内。防止化合物消化的方法是本领域已知的(见如Fix(1996)PharmRes.13：1760-1764；Samanen(1996)J.Pharm.Pharmacol.48：119-135；和美国专利5,391,377，描述了用于口服送递治疗剂的脂质组合物)。

对经粘膜或经皮施用而言，制剂中使用了适合穿透载体的渗透剂。这种渗透剂通常是本领域已知的，并且包括例如对经粘膜施用而言的去污剂、胆汁盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜施用可借助于鼻喷雾剂或栓剂(见如Sayani(1996)“Systemicdeliveryofpeptidesandproteinsacrossabsorptivemucosae”Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.13：85-184)。对经皮施用而言，可将活性化合物配制成如本领域通常已知的软膏、油膏、凝胶或乳膏。经皮送递系统也可利用贴剂实现。

对吸入送递而言，药物制剂可以气雾剂或薄雾形式施用。对气雾剂施用而言，制剂可以细分形式连同表面活性剂和推进剂一起应用。在另一个实施方案中，用于将制剂送递至呼吸组织的装置内可使制剂气化。本领域已知的其它送递系统包括干粉气雾剂、液体送递系统、吸入器、喷气式喷雾器及推进系统(见如Patton(1998)Biotechniques16：141-143；DuraPharmaceuticals,SanDiego,CA；Aradigm,Hayward,CA；Aerogen,SantaClara,CA；和InhaleTherapeuticSystems,SanCarlos,CA)。

也可利用生物可降解、生物相容的聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。这种制剂的制备方法是本领域技术人员已知的。材料也可通过商业渠道获自AlzaCorporation和NovaPharmaceuticals,Inc.。脂质体悬液(包括利用抗体或病毒外壳蛋白靶向细胞或组织的脂质体)也可被用作药学上可接受的载体。这些可根据本领域已知方法制备，例如美国专利号4,235,871；4,501,728；4,522,811；4,837,028；6,110,490；6,096,716；5,283,185；5,279,833；Akimaru(1995)CytokinesMol.Ther.1：197-210；Alving(1995)Immunol.Rev.145：5-31；和Szoka(1980)Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9：467)中描述的方法。能够持续送递包括肽在内的小分子的生物可降解微球或胶囊或其它生物可降解聚合物构型是本领域已知的(见如Putney(1998)Nat.Biotechnol.16：153-157)。本发明的化合物可被掺入微团内(见如Suntres(1994)J.Pharm.Pharmacol.46：23-28；Woodle(1992)Pharm.Res.9：260-265)。肽可连接至脂质单层或双层的表面。例如，肽可连接至含酰肼-PEG-(二硬脂酰基磷脂酰基)乙醇胺的脂质体(见如Zalipsky(1995)Bioconjug.Chem.6：705-708)。或者，可采用任何形式的脂质膜，如平面脂质膜或完整细胞如红血球的细胞膜。可通过任何方式送递含脂质体和脂质制剂，包括例如静脉内、经皮(见如Vutla(1996)J.Pharm.Sci.85：5-8)、经粘膜或口服施用。

药学上可接受的制剂可含大约1％-99.9％的活性成分(如肽或肽模拟物)。药物组合物可通过常规、熟知的灭菌技术进行灭菌，或可以灭菌过滤。

其它药物制剂及送递系统是本领域已知的，并可适用于本发明的方法和组合物(见如Remington’sPharmaceuticalSciences(1990)第18版,MackPublishingCo.,Easton,PA；TheMerckIndex(1996)第12版,MerckPublishingGroup,Whitehouse,NJ；Pharmaceutical PrinciplesofSolidDosageForms,TechnonicPublishingCo.,Inc.,Lancaster,Pa.,(1993)；和Poznansky等人,DrugDeliverySystems,R.L.Juliano,编辑,Oxford,N.Y.(1980),第253-315页)。

药物制剂可以单位剂量形式包装以便于施用和剂量均一性。本文所用的“单位剂量形式”指用于向对待治疗的受试者施用的物理分离的单位剂量；每一单位均含有与药物载体或赋形剂组合的预定量的产生期望效果的化合物。

以下是本文使用的缩写词：

Cha：环己基-丙氨酸

Phe-2,3,4,5,6-F：位于苯丙氨酸的苯基残基上的2、3、4、5、6位的氟化物

F：氟化物

Bpa：苯甲酰基-苯丙氨酸

Nal(2)：2-萘基-丙氨酰基

Ala(3-Bzt)：(3-苯并噻吩基)-丙氨酸

Nal(1)：1-萘基-丙氨酰基

Dph：二苯基-丙氨酸

Ala(tBu)：叔丁基-丙氨酰基

Cys(tBu)：叔丁基-半胱氨酸

Phe-3,4,5-F：位于苯丙氨酸的苯基上的3、4、5位的氟化物

Phe-4CF3：CF3位于苯丙氨酸的苯基残基上的4位

Phe-3Br，4Cl，5Br：溴化物位于苯丙氨酸的苯基上的3位，氯化物位于4位，并且溴化物位于5位

Phe-4Cl：氯化物位于苯丙氨酸的苯基上的4位

P1、P2、P3、P4、P5、P6等和(P1、P2、P3、P4、P5、P6等)；和P7、P8、P9、P10、P11、P12等和(P7、P8、P9、P10、P11、P12等)：分别为P1、P2、P3,P4、P5、P6等和P7、P8、P9、P10、P11、P12的连续序列。

除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。虽然与本文所述的这些相似的或等同的方法或材料也可以用于实践或试验本发明，但是本文描述了合适的方法和材料。

本文引用的所有出版物、专利或其它参考文献都整体以引用方式并入。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。

如本文所使用的，单数形式“一(a)”、“和(and)”、“该(the)”和“是(is)”包括复数指代物，除非上下文另外清楚地说明。因而，例如，对“化合物”的提及包括多种化合物，并且对“一个残基”或一个“氨基酸”的提及包括提及一个或多个残基或氨基酸。

已经描述了本发明的大量实施方案。然而，应当理解可作出多种修改，而不偏离本发明的精神和范围。因此，下述实施例预期用于示例说明，而不是限制权利要求中所描述的发明的范围。

实施例

实施例1

本实施例描述了材料和若干方法。本实施例还描述了所分析的肽/肽模拟物的序列。

化学品及试剂博莱霉素购自WakoPureChemicalCo.(Osaka,Japan)，并将其溶解于蒸馏水至10mg/ml。碘化丙啶(PI)和阿霉素购自Sigma(St.Louis,MO)。

细胞培养于37℃/5％CO₂下，在补充有10％胎牛血清(IBL：Immuno-BiologicalLaboratories,Gunma,Japan)的RPMI1640(Sigma)中培养人T细胞白血病来源的细胞系，Jurkat。于37℃/5％CO₂下，在含有10％胎牛血清的DMEM中培养人胰腺癌来源的细胞系，MIAPaCa2。

细胞周期分析如Kawabe(1997)Nature385：454-458所描述，通过流式细胞术分析经博莱霉素或阿霉素处理后的细胞的细胞周期状态。简言之，4℃下，将2百万个细胞重新悬浮于200μlKrishan’s溶液(0.1％柠檬酸钠、50μg/mlPI，20μg/mlPIRNA酶A及0.5％NP-40)中并孵育1小时，并利用流式细胞术FACScan^TM(BecktonDickinson,MountainView,CA)和程序CELLQuest^TM(BecktonDickinson)分析。

表1.示例性肽/肽模拟物的序列及相应的代码名称

实施例2

本实施例描述了指示各种肽的G2取消活性的数据，及各种序列排列对活性的影响，包括缩短序列长度的影响。

采用人白血病来源的Jurkat细胞系进行G2检查点取消的流式细胞术分析。简言之，采用各种剂量的肽/肽模拟物和40μg/ml的博莱霉素处理培养的细胞24小时。采用碘化丙啶使细胞的DNA染色，并通过流式细胞术分析。这些结果概括于表2。

当针对经博莱霉素处理的Jurkat细胞使用时的每种肽/肽模拟物的剂量反应曲线如图1、5、6、7、8、11和12所示；Y轴指示处理后24小时％G2/MJurkat细胞。

采用经秋水仙碱(5μg/ml或0.5μg/ml)和各个剂量的肽/肽模拟物处理24小时后的人T细胞白血病Jurkat细胞系进行通过所述化合物的M期检查点取消的流式细胞术分析(图12)。使细胞的DNA染色，并如上所述利用流式细胞术分析。结果也概括于表2。

当针对经秋水仙碱处理的Jurkat细胞使用时的每种肽/肽模拟物的剂量反应曲线如图2和14所示；Y轴指示处理后24小时％G2/MJurkat细胞。

表2.诱导G2检查点取消或副作用的化合物的剂量

“单独应用时副作用的出现”表示产生Jurkat细胞周期干扰的肽/肽模拟物剂量，即出现了大量的SubG1细胞(死细胞)或其中每个细胞DNA含量变化多于通常的细胞。例如，G1细胞通常在FACS分析中表现出一个尖峰，但经处理后，细胞周期被扰乱时，该尖峰变得较宽和较低，指示不适当的细胞周期进展或细胞死亡的开始。“G2取消剂量”指示连同40μg/ml博莱霉素一起处理24小时后，产生可检测的G2检查点取消活性的肽/肽模拟物剂量。“与秋水仙碱一起使用时副作用的出现”指示连同5μg/ml秋水仙碱一起处理24小时后，产生Jurkat细胞周期干扰的肽/肽模拟物剂量。

在各种细胞系中研究当与顺铂联合应用时CBP501的G2检查点取消活性。简言之，将顺铂(3μg/ml)和CBP501(0.4、2和10μM)同时添加至已于37度和5％CO₂下孵育3小时的细胞培养物中。吸出培养基，添加不含上述化合物的新鲜培养基，并继续孵育细胞45小时。采用胰蛋白酶-EDTA溶液收获包括悬浮细胞的细胞，与Krishan溶液一起孵育，并如上所述通过流式细胞术分析DNA含量。这些结果概括于表3。不同于HUVEC，阴影加强表示显著丧失G2群体，且subG1群体增多的细胞系，指示经CBP501处理后的G2检查点取消和对顺铂的敏感性。具有正常G1检查点的HUVEC细胞对至少达50μMCBP501不敏感的观察结果指示CBP501对G2检查点具有特异性，而不是非特异性。

表3.CBP501针对各种细胞系的G2检查点取消剂量

研究了不同剂量的各种化合物对经博莱霉素(Bleo)或阿霉素(ADR)处理的人胰腺癌来源细胞系MIAPaCa2的G2检查点取消活性。简言之，将细胞与化合物和博莱霉素(10μg/ml)或阿霉素(1μg/ml)孵育3小时。更换培养基并孵育另外21小时。通过碘化丙啶对收获的细胞DNA染色，并如上所述利用流式细胞术分析。图3中，sub-G1细胞群体的百分比被表示为死细胞。结果指示CBP501以剂量依赖方式使MIAPaCa2细胞对博莱霉素和阿霉素敏感。

图4A和4C总结了采用肽对进行的G2检查点取消活性，所述肽对中存在一个氨基酸残基的差异。如上所述，采用经博莱霉素处理的Jurkat细胞分析这些肽的G2检查点取消活性。图4B总结了采用肽对进行的M检查点取消活性和/或非特异性毒性分析，所述肽对中存在一个氨基酸残基的差异。如上所述，采用经秋水仙碱处理的Jurkat细胞分析这些肽的M检查点取消活性和/或非特异性毒性。

研究了不同剂量的各种富精氨酸序列对经博莱霉素处理的细胞的G2检查点取消活性。简言之，将0.2μg/ml、和的肽添加至经博莱霉素(40μg/ml)处理的Jurkat细胞的培养基中。随后在24小时后收获细胞，用Krishan溶液染色，并如上所述利用流式细胞术分析。图5中，％G2/M细胞(Y轴)对肽剂量(X轴)作图。数据指示与具有更少或更多数量残基的序列相比，“(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：137)”富碱性残基序列是最佳序列。

研究了不同剂量无(D-Bpa)的肽对于经博莱霉素处理的细胞的G2检查点取消活性。简言之，将0.2μg/ml、和的肽添加至经博莱霉素(40μg/ml)处理的Jurkat细胞的培养基中。如上所述，随后收获细胞并利用流式细胞术分析。图6中，％G2/M细胞(Y轴)对肽剂量(X轴)作图。该结果指示序列(Tyr)(Ser)(Pro)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha)(SEQIDNO：138)具有与序列(Bpa)(Ser)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha)(SEQIDNO：139)相当的G2检查点取消活性。

研究了不同剂量的富精氨酸和富赖氨酸序列对经博莱霉素处理的细胞的G2检查点取消活性。简言之，将指示剂量(X轴)的肽添加至经博莱霉素(40μg/ml)处理的Jurkat细胞的培养基中。如上所述，随后收获细胞并利用流式细胞术分析。图7中，％G2/M细胞(Y轴)对肽剂量(X轴)作图。结果指示对富碱性氨基酸序列而言，Arg序列似乎比Lys序列提供更好的活性，并且Gln对序列的功能而言并非必需。

研究了其中富精氨酸区位置变化的序列的G2检查点取消活性。简言之，将指示剂量(X轴)的肽添加至经博莱霉素(40μg/ml)处理的Jurkat细胞的培养基中。如上所述，随后收获细胞并利用流式细胞术分析。图8中，％G2/M细胞(Y轴)对肽剂量作图。

数据指示富精氨酸区位置的变化并不显著改变肽的G2取消活性。此外，CBP501溶于水，而CBP511则不溶。由于某些系统优选的是水溶性化合物，因此这一差异可能对特定的药物送递系统而言是有利的。

图9示例说明采用各种肽对进行的分析的总结，这些肽对之间仅存在一个氨基酸残基的差异。如上所述，采用经博莱霉素处理的Jurkat细胞分析这些肽的G2检查点取消活性。

每个氨基酸的大小、电荷及疏水性决定了序列如何有效地适合靶分子。肽或肽模拟物的侧链会自由移动，因此甚至当具有一个或两个不利侧链时，该肽或肽模拟物可适合靶分子的袋或沟。总结指示每条侧链均存在优选尺寸，表明对于每条侧链的靶蛋白的结合区(袋或沟)尺寸。例如，具有环状结构如苯、吲哚和环己烷的侧链决定了G2取消或M取消的强度和/或非特异性毒性；见图9和4，其中大于5元的环状结构影响G2取消活性(P1和P2的中等大小提高了G2取消活性)，而过大的结构(P1、P5和P6)提高了M取消活性和/或非特异性毒性。

无环状结构的侧链似乎是中性的。因此，为获得更高的活性，希望P1、P2、P4和P6处适当大小的环结构，并且在P3和P5处无环状结构或者环状结构少于6元。对P1、P2和P6而言，适当环为通过5或6元的两个环的融合的1-6元环。对P4而言，适当大小的环为5或6元的两个环的融合。因此，对P1而言，Cha或Nal(2)似乎最合适；对P2而言，Phe-2,3,4,5,6F、Phe-3,4,5F或Phe-CF3似乎最好。这些侧链大小指示在靶分子中该区域相互作用的地方存在两个袋或一个较大的袋。对P3和P5而言，可接受小侧链如Ser或Pro，并且也可接受较大侧链如Arg，说明靶分子的这一区域内不存在袋，因此侧链可恰好与靶对置。然而，环状结构可能使肽或肽模拟物与其它分子(即除了靶分子以外)相互作用，从而反过来增加副作用。对P6而言，Bpa或Ser-Tyr似乎优于单个的Tyr或更小侧链，说明在靶中存在水平的较深的沟。基于对于P4的残基大小，也可能在靶中存在对于P4的一个浅而宽的袋。

如上所述，利用Jurkat和博莱霉素分析下列肽。肽序列如下：CBP501，(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：80)；CBP700，(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：96)；CBP701，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：97)；CBP702，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：98)；和CBP703，(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：99)。结果说明，尽管CBP700、701、702、703短于其它示例肽，但仍保留了与其它具有显著G2检查点取消活性的肽相当的G2检查点取消活性(图11)。

进行通过CBP501的G2检查点取消活性与非特异性毒性(M检查点取消)的对比。简言之，用40μg/ml博莱霉素或0.5μg/ml秋水仙碱处理Jurkat细胞以分别检查G2检查点取消活性和非特异性毒性。如上所述，通过流式细胞术分析经处理的细胞各自的DNA含量。数据说明CBP501以剂量依赖方式取消G2检查点，而非特异性毒性在达到50μM肽之前一直缺乏，如通过M期停滞细胞未变化的百分比所确定的(图12)。

实施例3

本实施例描述了肽/肽模拟物激酶抑制活性，以及对多种肽的血清稳定性分析。

由于Chkl和Chk2这两种激酶对G2检查点机制而言是重要的，因此对这两种酶进行激酶抑制分析。除采用纯化的CHK2激酶代替PKC外，使用“PepTag^(R)Non-RadioactiveProteinKinaseAssays”,Promega根据公司方案进行了体外激酶抑制分析。纯化的PKC购自UpstateBiotechnology,Inc.。这些结果示于表4A。

表4A化合物的激酶抑制分析

体外激酶抑制分析是由CycLex,Co.Ltd.,Nagano,Japan进行的。简言之，使用杆状病毒来源、具有组氨酸标记的重组人全长Chkl，或大肠杆菌来源、与GST融合的重组人全长Chk2作为激酶。使用大肠杆菌来源的重组GST-Cdc25C(氨基酸167-267)作为底物。反应条件为20mMHepes-KOH(pH7.5)、1mMDTT、80μg/mlBSA、10mMMgCl₂和50mMATP，在30度持续60分钟。利用酶联免疫测定通过抗Cdc25C-磷酸化的S216抗体检测GST-Cdc25C上的丝氨酸216的磷酸化。这些结果示于表4B。

表4B肽的激酶抑制分析

数据说明Chk1和Chk2激酶抑制出现在高于G2取消剂量(通过CBP500、501、505、506、603的G2取消的IC₅₀均低于1μM)的剂量。这些结果说明这些肽具有除抑制Chk1/2分子外的作用机制。可选地，肽可能累积于细胞内，从而使其在细胞内的浓度高于周围培养基中的浓度。

进行血清分析以确定肽在小鼠和人血清中的稳定性。简言之，于37度将肽(10mM或2.5mM)与新鲜制备的人血清孵育1小时。于37度将CBP501(10mM)与新鲜制备的小鼠血清孵育1小时。Jurkat细胞经含有或不含肽和博来霉素(40μg/ml)的血清处理，并孵育24小时。如上所述通过流式细胞术确定G2期细胞群体。通过比较经处理的血清的％G2细胞与用肽、博来霉素和Jurkat细胞处理的培养基产生的标准曲线来确定血清处理的肽的残余G2检查点取消活性(表5A)。采用乙醇处理除去蛋白质后，利用HPLC确定残余CBP501的量(表5B)。数据说明在血清中，含d型氨基酸的肽如CBP501和CBP603比含1-型氨基酸的肽如CBP413更稳定。

表5A人血清处理分析

表5B小鼠血清处理分析

实施例4

本实施例描述了CBP501对培养细胞的抗细胞增殖活性。本实施例还描述了证实肽/肽模拟物的体内活性的数据。

为证实化合物的抗细胞增殖活性，单独和组合采用CBP501(10μmM)、顺铂(1、3或9μg/ml)和奥沙利铂(1、3或9μg/ml)处理培养的MIAPaCa2人胰腺癌细胞。简言之，将细胞以300个细胞/孔铺板至6孔板，孵育过夜，并用化合物处理3小时。更换培养基，并培养另外10天。随后用70％甲醇固定细胞，用0.1％结晶紫染色并可视化。菌落形成分析结果说明CBP501增强了顺铂和奥沙利铂针对MIAPaCa2细胞的细胞毒性活性。

采用正常人脐带内皮细胞(HUVEC)进行类似研究。由于正常细胞不形成集落，因此其以3000个细胞/孔而非300个细胞/孔铺板。结果说明肽本身不干扰正常细胞的生长，肽也不增强顺铂和奥沙利铂对细胞的细胞毒性活性。因此，肽似乎没有表现出针对经历核酸损伤治疗的正常细胞的显著的G2取消活性，相反对易感于核酸损伤治疗的增生细胞如癌细胞表现出G2取消活性。结果说明肽在使增殖细胞而非正常细胞针对核酸损伤治疗敏感方面具有特异性。

表6采用alamarblue进行MIAPaCa2的生长抑制分析

进行AlamarBlue分析以分析在有和没有顺铂的情况下CBP501的生长抑制活性。简言之，一式两份将MIAPaCa2细胞在96孔培养板中以2500细胞/孔暴露于1、3、10、30、100μM的顺铂，或含有或没有10μM顺铂的0.22、0.67、2、6和18μM的CBP501，持续3小时。更换培养基并孵育另外24、48或72小时。孵育之后，将20μlalamarBlue90％试剂添加至各孔，持续另外6小时以通过荧光强度检测细胞活力。利用具有激发530nm和发射590nm的SpectrafluorPlus酶标仪测量荧光强度。计算IC₅₀(表6)。

本研究说明摩尔剂量的单独CBP501比顺铂更好抑制细胞生长。当与近似治疗癌症所用顺铂剂量的10μM顺铂联合应用时，CBP501以低得多的剂量抑制细胞生长。此外，CBP501的生长抑制活性长于顺铂；采用CBP501时，72小时的IC₅₀远好于顺铂。

通过定量腹膜内注射CBP501(40mg/kg)后1、3和6小时小鼠血清中的CBP501，确定CBP501的体内半衰期。在用乙醇处理除去从注射小鼠抽取的血清中的蛋白质之后，用HPLC确定残余完整CBP501的量(表7)。

表7CBP501的体内半衰期

为确定对肽的耐受性，将数组10只小鼠一次静脉注射CBP501(5、8或10mg/kg)或一次腹膜内注射CBP501(50、80或100mg/kg)。观察注射小鼠的存活持续一周(表8)。

表8单次注射小鼠体内的最大耐受剂量

为研究化合物的体内功效，在scid小鼠中皮下植入MIAPaCa2人胰腺癌细胞。当原发肿瘤尺寸变为0.1cm3(第0日)或更大例如直径7或8mm时，开始治疗。单独或组合地腹膜内施用CDDP(3mg/kg)和CBP501(10或40mg/kg)。利用测径器一周三次测量肿瘤尺寸，并利用以下公式计算体积：重量(mg)＝[宽度(mm)2x长度(mm)]/2。将各治疗组的平均肿瘤尺寸对治疗开始后的天数作图(n＝4)(图10)

结果说明单独CBP501治疗抑制体内人胰腺癌细胞的生长。结果进一步说明CBP501提高了顺铂的抗肿瘤活性。

实施例5

本实施例包括肺癌的描述和使用CBP501的研究

肺癌是西方国家成人癌症死亡的主要原因。在美国，2009年诊断了219,440新病例并且由于该病发生159,390例死亡，占所有癌症死亡的大约29％(参见例如，Americancancersociety,CancerFacts&Figures2009)。所有新肺癌病例的百分之八十七(87％)是非小细胞肺癌(NSCLC)组织学，其存在三个主要类型：腺癌、鳞状细胞(表皮样)癌和大细胞癌(Americancancersociety，CancerFacts&Figures2009)。尽管手术技术和组合疗法的改良，诊断为NSCLC的患者预后依然是差的。对于疾病依然是局部的早期检测的病例，五年存活率是47％，但大部分NSCLC患者(68％)(参见例如，AJCCCancerStagingManual.FlemingID,编辑.Philadelphia：Lippincott-Raven；2002)被诊断患有需要化疗的晚期疾病(III期)或转移性疾病(IV期)。对于患有III期疾病的那些患者，5年存活率是8.4％，并且对于IV期是1.6％，大部分晚期NSCLC患者在2年内死于疾病(参见例如，Americancancersociety,CancerFacts&Figures2009；AJCCCancerStagingManual.FlemingID,编辑.Philadelphia：Lippincott-Raven；2002.)能够在患者存活和生命质量方面产生显著改善的新治疗剂的引入是未满足的需求。

患有良好体力状态的晚期(IIIb或IV)NSCLC的患者可以从化疗获益(参见例如，Souquet,PJ.等人.,Lancet342：19-21,1993；Marino,P.等人.,Chest106：861-865,1994；Marino,P.等人.,Cancer76：593-601,1995；Helsing,M.等人.,EurJCancer34：1036-1044,1998；Cullen,MH.等人.,JClinOncol17：3188-3194,1999；Pfister,DG.等人.,JClinOncol22：330-353,2004)。化疗二联与单剂或无化疗比较时显示提高的存活(参见例如，Bunn,PA.等人.,JClinOncol20：23S-33S,2002)。目前推荐的晚期NSCLC一线化疗方案包括与吉西他滨、长春瑞滨或紫杉烷(紫杉醇或多西他赛)、伊立替康、依托泊苷、长春花碱、和/或培美曲塞组合的铂化合物(顺铂[CDDP]或卡铂)作为参考方案(Pfister,DG.等人.,JClinOncol22：330-353,2004)。

随机试验显示，各种铂二联组合都具有相似功效，尽管方案在毒性、方便性和成本方面略有差异。结果发现17％至32％的总体响应率(ORR)，7至10个月的中值存活时间，和30至45％的1年存活率(参见例如，Scagliotti,G.等人.,SeminOncol32：S5-S8,2005；Schiller,JH.等人.,NEnglJMed346：92-98,2002；Scagliotti,G.等人.,JClinOncol20：4285-4291,2002；Kelly,K.等人.,JClinOncol19：3210-3218,2001；Fossella,F.等人.,JClinOncol21：3016-3024,2003)。

迄今为止，三联化疗的大多数实例还没有导致存活的进一步增加，但是毒性增加。然而，卡铂+紫杉醇+贝伐单抗的最近研究显示一些存活益处(参见例如，Sandler,A.等人.,NEnglJMed355：2542-2550,2006)，表明添加具有非重叠毒性的靶向剂可以改善二联化疗。正通过使用预测抗肿瘤活性的分子标记寻求优化化疗益处的积极尝试。NSCLC的化疗功效的基因预测正在开始出现(参见例如，Bepler,G.等人.,ASCOEducationalBook：350-352,2008；Sommers,K.等人.,ProcAmSocClinOncol262008)。这些中值得注意的是诸如ERCC1、BRCA1/2、RRM1和TS的标记(表9)。

表9.预测NSCLC中化疗功效的分子标记

实施例6

本实施例包括指示某些人患者亚群有利地响应于肽和化疗剂(核酸损伤剂)的组合的数据说明。出乎意料地，数据显示对在用CBP501治疗之前具有小于10,000白细胞(WBC)计数每立方毫米的非鳞状非小细胞肺癌NSCLC的临床研究的患者群亚组得到了通过施用CBP501的益处。

CBP501是合成的十二肽，完全由D-氨基酸构成(图13)。这是针对以下活性优化了的TAT-S216A的进化形式：在基于流式细胞术的DNA含量测定中减少响应于用DNA损伤剂治疗的G2(4N)细胞累积的活性。

已经进行了两个I期剂量范围和药代动力学研究以在总计78名患者中考察CBP501：CBP501的单一疗法研究在第1、8和15日以60-min静脉内输注施用，每4周重复；与顺铂的组合疗法研究每3周施用一次(参见例如，Shapiro,GI.等人.,ClinCancerRes.May15；17(10)：3431-42,2011)。

I期单剂研究(CBP04-01)：这是男性首次单剂量I期剂量放大试验，在具有晚期实体瘤的患者群中每28天考察了三次注射(第1-8-15日)的方案。施用了总计68个周期，每个患者的中值周期数是2(范围1-8)。两名患者实现了7个周期的稳定疾病治疗，一名诊断为胰腺癌，其他具有卵巢癌。大多数患者(87％)由于疾病进展而中断研究。没有患者由于毒性而中断(参见例如，Shapiro,GI.等人.,ClinCancerRes.May15；17(10)：3431-42,2011)。

与顺铂(CBP06-01)组合的CBP501的I期研究：本I期研究的主要目的是测定CBP501和顺铂组合施用时的MTD和RD，每21天一次。首先以1小时输入施用CBP501，随后在治疗开始后2小时施用顺铂。还根据针对I期单剂研究开发的相同方案给予患者针对变态反应的预防性治疗(氯雷他定、地塞米松、雷尼替丁和苯海拉明)。

在三个美国中心治疗总计48名患者，并施用总计182个周期，每名患者的中值周期数是4(范围1-13)。在3.6mg/m²至36.4mg/m²的剂量范围内考察了CBP501。研究的最高剂量水平是CBP50136.4mg/m²和顺铂75mg/m²。在该剂量水平，六名患者中的两名经历了考察者判断为剂量限制性的变态反应(等级3)。认为MTD是略低的剂量水平，为CBP50124.3mg/m²和顺铂75mg/m²。在几名患者中记录了活性暗示(参见例如，Shapiro,GI.等人.,ClinCancerRes.May15；17(10)：3431-42,2011)。

无机铂配位络合物顺铂(顺式二胺二氯铂)优先在DNA的鸟嘌呤和腺嘌呤残基的N7位反应以形成许多单官能和双官能的加合物。通过阻碍需要分离两个DNA链的各种细胞过程例如复制和转录，这些加合物促成了药物的细胞毒性。

已经针对许多肿瘤临床评估了顺铂，因为其针对睾丸癌和卵巢癌的可靠抗肿瘤活性。自从其批准，顺铂已经成为重要的化疗剂并且已经单独或与其他抗肿瘤剂组合而广泛使用。还已知顺铂在表现其他肿瘤类型例如肺癌、膀胱癌和头颈癌的患者中提供实质的减轻作用，并且其包括在这些疾病中使用的大多数化疗方案中。

培美曲塞二钠是结构上新颖的抗叶酸剂，具有独特的6-5稠合吡咯并[2,3-d]嘧啶核，并且其抑制参与合成细胞生长和分裂所必需的底物的叶酸依赖性酶的功能，所述酶例如胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶(参见例如，Taylor,EC.等人.,JMedChem35：4450-4454,1992；Schultz,RM.等人.,AnticancerRes19：437-443,1999)。

已经临床试验中证明了培美曲塞在大量肿瘤类型中的活性，包括肺癌、乳腺癌、结肠癌、胸膜癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、头颈癌和子宫颈癌。与顺铂组合的培美曲塞在2004年2月4日得到FDA批准用于治疗其疾病是不可切除的具有MPM的患者或者在其他方面不是治愈性手术候选者的患者。

在具有NSCLC的首次化疗患者中的II期研究中，与顺铂或卡铂组合的培美曲塞产生了与其他铂二联相当的功效结果(参见例如，Scagliotti,G.等人.,ClinCancerRes11：690-696,2005；ZinnerR.等人.,Cancer104：2449-2456,2005；Manegold,C.等人.,AnnOncol11：435-440,2000；Shepherd,FA.等人.,Cancer92：595-600,2001)。此外，培美曲塞具有优良的安全性特征和方便的施用方案。

最近的随机III期研究在非次级设计试验中比较了1725例具有III期或IV期NSCLC的首次化疗患者用顺铂加吉西他滨或顺铂加培美曲塞每3周一次持续六个周期治疗的总体存活(OS)(参见例如，Scagliotti,G.等人.,JClinOncol26：3543-3551,2008；Pimentel,F.等人.,ProcAmSocClinOncol26(II的部分I)：448s,2008,(增刊15S)(摘要)#448s)。顺铂加培美曲塞的OS不差于顺铂加吉西他滨(两个治疗的中值存活都是10.3个月)。在具有腺癌(n＝847；分别是12.6个月和10.9个月)和大细胞癌组织(n＝153；分别是10.4个月和6.7个月)的患者中，顺铂加培美曲塞的OS统计学显著优于顺铂/吉西他滨。对于顺铂加培美曲塞，3或4级中性粒细胞减少、贫血和血小板减少；中性粒细胞减少性发热；和秃顶的比率显著低于顺铂/吉西他滨治疗组，而3或4级恶心是更常见的。

患者和方法：

临床研究设计：开放标签、多中心、II期随机、两组对比研究。该方案评价了有或没有CBP501的全剂量顺铂和培美曲塞。患者以1：1比率随机分至培美曲塞、顺铂和CBP501(组A)或培美曲塞和顺铂(组B)。根据疾病的基线期(IIIb对IV)、脑转移的存在以及患者对于贝伐单抗疗法是否合格来划分随机化。

考察者/试验地点：在美国、俄罗斯、加拿大、巴西、阿根廷和秘鲁的大约40个中心。

研究目的：

主要：比较具有局部晚期(具有恶性胸膜渗漏或心包渗漏的IIIB期)或转移性(IV期)非鳞状NSCLC的患者中有或没有CBP501的顺铂和培美曲塞的功效、无进展存活。

次要：表征研究方案的安全性特征和不同于无进展存活的功效参数例如总体存活。

研究群体：

纳入标准：

1.在开始任何研究特异性程序之前获得的签字的知情同意书

2.组织学或细胞学上确认的不适合放射切除术的、具有胸膜或心包渗漏的IIIB期或IV期的、之前未接受在先化疗或其他系统治疗的非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断

3.根据实体瘤响应评价标准(RECIST)至少一个一维可测量的损伤

4.年龄至少18岁的男性或女性患者

5.ECOG体力状态(PS)：0-1

6.预期寿命>3个月

7.如果在研究药物治疗第一剂之前≥3周完成，则允许在先的局部放射疗法

8.允许对现有骨损伤同时缓和放射疗法以控制疼痛

9.如果在研究药物治疗第一剂之前至少4周进行，则允许在先手术，并且患者应该完全恢复

10.足够的器官功能，包括以下：

·骨髓：白细胞(WBC)计数≥4x109/L，嗜中性粒细胞绝对计数(ANC)≥1.5x109/L，血小板计数≥100x109/L，血红蛋白≥9g/dL

·肝：胆红素≤1.5x正常上限(ULN)，天冬氨酸转氨酶(AST/SGOT)和丙氨酸转氨酶(ALT/SGPT)≤2.5xULN(或如果存在肝转移则≤5xULN)，INR≤1.5xULN，白蛋白≤3.0g/dL

·肾：血清肌酸酐≤1.5mg/dL或肌酸酐清除≥45mL/min(根据Cockroft和Gault公式计算)

11.有生育能力的女性患者必须具有阴性妊娠试验，并且在研究之前4周使用至少一种考察者允许的避孕形式并且持续研究药物最后剂量之后4个月。出于本研究目的，生育能力定义为：“所有女性患者，除非她们绝经后至少一年或者手术不育”

12.男性患者必须在研究期间使用考察者允许的障碍物避孕形式，并且持续研究药物最后剂量之后4个月

13.协调治疗和随访的能力

排除标准：

1.在进入研究之前，对超过30％骨髓的放射疗法

2.肿瘤样品中神经内分泌特征的存在

3.采用化疗、新生物疗法(小分子，抗体)、免疫疗法的在先治疗

4.不存在可测量的损伤

5.进行的或主动感染、有症状的充血性心力衰竭、不稳定的心绞痛、有症状的或控制差的心律失常、不受控制的血栓或出血疾患、或者任何其他在考察者看来严重的不受控制的医学疾患

6.研究进入5年内另一恶性肿瘤的任何之前病史(不同于治愈的皮肤基底细胞癌或治愈的原位宫颈癌)

7.将妨碍患者依从性的任何显著的中枢神经系统(CNS)或精神疾患的存在

8.根据NCI-CTCAE第3版>1级的周围神经病的证据

9.用任何其他考察剂治疗，或者在研究进入之前28内参加另一临床试验

10.怀孕或哺乳患者，或者未使用适当避孕措施的有生育能力的任何患者。

11.已知的HIV、HBV、HCV感染

12.有症状的脑转移的存在。具有脑转移的患者必须：

·在局部治疗(手术或放射)后具有稳定的神经状态，持续完成确定疗法之后至少2周，并且在研究进入之前1周停止使用皮质类固醇

·没有混淆神经和其他AE评价的神经功能障碍

13.不能或不愿意服用叶酸、维生素B12或皮质类固醇

14.不能中断阿司匹林或其他非甾体抗炎剂，除了阿司匹林剂量≤1.3克每日，持续5天时期(对于长效药剂例如吡罗昔康是8天时期)

15.显著的体重减轻(前6周期间≥10％体重)

16.临床上显著的(通过体检)第三空间流体收集的存在，例如在研究进入之前不能受引流或其他程序控制的腹水或胸膜渗漏

患者数目：

总计195名患者接受治疗，其中97名患者用CBP501、顺铂和培美曲塞治疗(组A)，并且98名患者用培美曲塞和顺铂治疗(组B)。

研究药物：

制剂：在单剂量小瓶中提供了供注射的CBP501(20mg)，所述小瓶含有无菌冻干粉末，其包含CBP501肽乙酸盐(肽基本单元)。为了施用，在5％DextroseInjection,USP中使小瓶内容物复水并添加至100mL静脉内袋装5％DextroseInjection,USP。

培美曲塞：使用了培美曲塞的商业制剂，在20mL0.9％氯化钠注射溶液中复水，然后稀释至100mL。

顺铂：使用了顺铂的商业制剂并在250mL正常盐水中稀释以供施用。

剂量方案和施用途径：

在同一天(第1天)施用CBP501、培美曲塞和顺铂，每3周一次，持续最多六个周期。认为一个周期是3周(21天)。

组A

1.以1小时静脉内输注施用CBP50125mg/m²。

2.在CBP501输注之后立即经10分钟以静脉内输注施用培美曲塞500mg/m²。

3.在培美曲塞输注之后立即以1小时静脉内输注施用顺铂75mg/m²。

组B

1.经10分钟以静脉内输注施用培美曲塞500mg/m²。

2.在培美曲塞输注之后立即以1小时静脉内输注施用顺铂75mg/m²。

经由中枢或外周静脉通道施用每种组合。

预防性治疗：

所有招募的患者接受：

1.维生素补充剂：指导所有患者以每天基础服用低剂量口服叶酸制剂或含有叶酸的多种维生素。在第一剂培美曲塞之前7天期间必须服用至少5天剂量的叶酸，并且给药应该在治疗全过程持续，并且持续最后一剂培美曲塞之后21天。所示剂量的叶酸范围350-1000μg。患者还必须再第一剂培美曲塞之前一周以及之后每3个周期已经接受一(1)次肌肉内注射维生素B12。随后的维生素B12注射可以与培美曲塞同一天给予。维生素B12剂量为1000μg。

2.在治疗施用前一日、当日和后一日口服地塞米松4mg，每天两次。

3.预防性止吐治疗：根据标准治疗中心方案，由5HT3拮抗剂+类固醇组成。按照需要给予患者进一步的口服止吐药。

·在没有心血管损伤的患者中建议以下水合方案。可以实施在考察中心常规施用的类似方案：

1.患者接受了总计1.5-2.0升含有20mEqKCl/升和1gMgSO4/升的水合作用5％右旋糖或1/2正常盐水)，以500mL/小时运行。

2.在患者接受了1小时水合输注之后，通过静脉内推注施用12.5g甘露醇。

3.然后经1小时输注顺铂输注(以1mg/mL在正常盐水中混合)，同时继续水合输注。

4.如果有必要在水合期间维持250mL/小时的尿输出量，施用额外甘露醇(通过静脉内推注12.5-50.0g)。

·对于用CBP501治疗的患者(组A)，推荐他们接受以下预防性方案以减少归因于组胺释放的症状的发生率和严重度：

1.在每次CBP501输注之前，苯海拉明(DPH)50mg静脉内和雷尼替丁50mg静脉内(或另一组胺H2拮抗剂)。

2.在CBP501施用前一日(第-1日)、当日(第0日)和后一日(第1日)，氯雷他定(10mg)PO。

每名患者研究期持续时间：

患者将接受最多六个周期的研究治疗，除非更早发现以下任何一个：

·疾病进展

·不可接受的毒性

·撤销同意

·严重的方案违法

·治疗延迟>2周(除非潜在或察觉的患者益处的情况)

在治疗中断之后，患者将会每8周随访，直至疾病进展或开始进一步的系统抗癌疗法，之后每6个月，直至死亡。

知情同意

在进行任何研究特异性筛选程序之前，考察者向患者充分解释研究目的和方法以及任何预期效果和不良反应。为患者提供信息表，并给与足够时间和机会以询问试验细节并决定是否参与。考察者与之讨论的知情同意书的患者和人在同意书上签名和日期。

考察者解释，患者完全自由拒绝进入研究或者在任何时候以任何原因从中退出。类似地，考察者和/或发起者在任何时间出于安全或管理原因而撤出患者。根据目前CFR(21，部分312D、50和56)和ICH(ICHE61997)GCP指南和Helsinki,1964的说明(如2004年在东京澄清的)，解释了保护患者人权必要的任何其他要求。

患者数目的分配

集中管理针对治疗组的患者随机化和分配。

统计分析：

采用Cox比例危险模型来评估2个治疗组之间PFS的危险比率(HR)。模型包括治疗组作为一个因子以及随机化分层因子。开发了以下协变量：年龄、性别、种族(高加索人/非高加索人)、在先手术/程序(是/否)、在先放射疗法(是/否)、x射线解释(正常/异常)、ECG解释(正常/异常)、骨扫描(正常/异常)和诊断时间。如果产生更好的模型拟合，可以通过指定2类或几类值将任何连续变量例如年龄和诊断至研究治疗的时间转化成分类变量。使用逐步回归算法，使用以下标准加入示例性变量：变量必须在待进入模型的0.25水平下是显著的，并且在0.15水平下是显著的以维持在模型中。对于最终模型，与95％CI一起提供了危险比率的点评估。

对于在筛选时具有WBC<10000μL的患者进行亚组分析。使用软件GraphPadPrism5，用每个分析患者的原始数据进行额外亚组分析。

功效结果：

没有探究关于无进展存活(PFS)的其他协变量的情况下的Cox比例危险模型分析指示，组A(使用CBP501的组)具有比组B更高的危险(HR＝1.20[0.88,1.65])，但不是统计学上显著的(P＝0.25)。探究其他协变量的相同模型也指示，组A具有比组B更高的危险(HR＝1.21[0.85,1.73])，但这不是统计学上显著的(P＝0.30)。

对于在筛选时具有WBC<10000/μL的患者，没有探究其他协变量的情况下的Cox比例危险模型分析指示，组A具有比组B更高的危险(HR＝1.04[0.73,1.49])，但这不是统计学上显著的(P＝0.81)。探究其他协变量的相同模型也指示，组A具有比组B更高的危险(HR＝1.06[0.71,1.59])，但这不是统计学上显著的(P＝0.78)。

注意，两个分析中，当分析限于在筛选时具有WBC<10000/μL的患者时，对于组A，PFS的危险比得到改善(表A，B)。

表A没有探究其他协变量的情况下对PFS的Cox协变量分析

具有独立放射学检查的PFS没有探究其他协变量的Cox协变量分析

表B探究其他协变量的情况下对PFS的Cox协变量分析

探究其他协变量

对所有治疗群体的总体存活(OS)的Cox比例危险模型分析

在没有和有探究其他协变量的情况下，组A具有比组B更低的危险(HR＝0.96和0.77)。差异不是统计学上显著的(P＝0.82和0.25)。

在筛选时具有WBC<10000/μL的患者的OS的Cox比例危险模型分析

对于治疗群体中在筛选时具有WBC<10000/μL的患者的OS，在没有和有探究其他协变量的情况下，组A具有比组B更低的危险(HR＝0.80和0.69)；差异不是统计学上显著的(P＝0.32和0.16)。

注意，所有分析中，当分析限于在筛选时具有WBC<10000/μL的患者时，对于组A，OS的危险比得到改善(表C，D)。

表C没有探究其他协变量的情况下对OS的Cox协变量分析

没有探究其他协变量的情况下对总体存活的Cox协变量分析

表D探究其他协变量的情况下对OS的Cox协变量分析

探究其他协变量

图14显示了所有治疗患者中相对于在筛选时的WBC(基线)的Kaplan-Meyer存活曲线，中值OS和危险比。危险比随着截止水平降低而提高，并且在WBC8000/μl达到峰值，作为截止水平。

参考图17，在用Hetasep(Stemcelltechnol.)去除红细胞之后，使用EasySep嗜中性粒细胞富集试剂盒(Stemcelltechnol.)从人外周血纯化嗜中性粒细胞。在有或没有1μMCBP501条件下培养纯化的嗜中性粒细胞((1x10⁶个细胞/孔，24孔板)持续15分钟(通过添加EDTA终止反应)，然后与1nMPMA、3或10μMA23187、或100或1000ng/mlLPS进一步培养四小时。洗涤孔两次，并与DNA酶一起孵育15分钟，收集上清液，与用弹性蛋白酶底物一起孵育2小时，然后分析以检测弹性蛋白酶活性。

参考图18，在注射苯海拉明之前30分钟，对8周龄的C57BL/6小鼠静脉内注射或不注射LPS2.5、5或10ug/ml。在注射苯海拉明之后30分钟注射CBP501(7.5mg/kg)。在从CBP501或模拟物注射之后3小时抽取的血液分离的血浆中，用ELISA定量凝血酶/抗凝血酶复合物。在四个动物中的每个条件下获得数据。

参考图19，通过0.32uMofPMA刺激人外周血单核细胞并在PMA刺激48小时去除所有悬浮细胞，获得了巨噬细胞。细胞与50ng/mlIFN-γ、10ng/mlLPS进一步孵育以获得M1表型，并与20ng/mlIL-4孵育以获得M2巨噬细胞。两种处理都使用或者不使用CBP501。通过使用荧光标记珠粒和流式细胞术监测吞噬活性。

参考图20，巨噬细胞系RAW264.7在有或没有0.1或1μMCBP501的条件下孵育3-6小时，然后在有或没有10或1000ng/mlLPS的条件下进一步孵育4小时。通过ELISA测量释放的TNF。

CBP501在临床前(Sha,S.等人.Mol.CancerTher.6：147(2007))和I期临床研究(Shapiro,G.I.等人.Clin.CancerRes.(2011))中显示作为有效抗肿瘤剂的潜力。CBP501可以在两种作用机制下发挥作用，例如通过细胞周期G2检查点取消(Sha,S.等人.Mol.CancerTher.6：147(2007))和肿瘤细胞中的铂浓度，或者通过钙调蛋白抑制(Mine,N.等人.Mol.CancerTher.10：1929(2011))。

如本文说明的，通过对非鳞状非小细胞肺癌患者的II期临床研究的患者群的亚组分析，出乎意料地发现：在筛选时具有高白细胞计数(WBC)的患者与具有正常或低WBC的患者之间患者组的存活存在统计学显著的(p<0.0001)差异。

如通过本文结果进一步所示，除了直接作用于肿瘤细胞，当患者减少通过巨噬细胞的NET清除/吞噬而发炎时，CBP501还可以通过抑制钙调蛋白并增加嗜中性粒细胞细胞外捕获(NET)而作用于肿瘤微环境，例如巨噬细胞。这可以增加患有深静脉血栓(DVT)和转移的机会，并由此可能不利地影响患者存活。相反，患者中M2型巨噬细胞的抑制可以防止巨噬细胞对肿瘤生长、血管发生、转移和肿瘤免疫逃脱的积极作用，所有这些促进了可能缩短患者存活的肿瘤转移。

与该发现一致，已经证明了通过体外CBP501治疗增加的活化嗜中性粒细胞的NET形成，以及在LPS刺激小鼠中增加的凝血酶/抗凝血酶复合物形成。还已经指示了CBP501对M1和M2型巨噬细胞两者的细胞因子分泌和吞噬的抑制。

虽然临床研究已经指示CBP501通过增强顺铂对肿瘤细胞的细胞毒性而发挥作用，但本文结果通过对非鳞状NSCLC患者的II期研究进行的亚组分析证明了预料不到的发现，指示响应于使用CBP501的方案，在临床研究筛选时具有高白细胞计数(WBC)的患者组存活较短，而具有正常或低WBC的其他患者组存活较长，并且差异是统计学上高度显著的，其中通过对数轶(Mantel-Cox)检验在关于总体存活的Kaplan-Meyer曲线上计算的p值小于0.0001。

因此，出乎意料地发现，在治疗之前具有正常或低WBC的患者受益于CBP501治疗，而具有高WBC的患者受到相同治疗的不利影响。CBP501对钙调蛋白的抑制活性表明，对许多微环境细胞例如巨噬细胞、白细胞和淋巴细胞的作用可能已经抑制或调节了其可能促进双向结果的活性，因为例如通过仅仅抑制巨噬细胞，如果其抑制了M1型巨噬细胞，其可能不利地影响患者存活，并且如果其抑制了M2巨噬细胞，其会延长患者存活。

已经报道钙调蛋白抑制剂抑制巨噬细胞(Horwitz,S.B.等人.J.CellBiol.91：798(1981)；Takenawa,T.等人.BiochemJ.15：208(1982)；Westra,J.等人.BMCMusculoskelet.Disord.30：11(2010))、白细胞(Naccache,P.H.等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.97(1)：62(1980)；Takeshige,K.等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.99(2)：484(1981)；Jones,H.P.等人.BiochemBiophys.Acta.714(1)：152(1982)；Jones,H.P.等人.MethodsEnzymol.015：389(1984)；Verploegen,S.等人.Eur.J.Biochem.269(18)4625(2002))和淋巴细胞(Salisbury,J.L.等人.Nature12：294(1981)；Boubali,S.等人.Mol.Immunol.52(2)：51(2012))的多种功能。具有高WBC的患者倾向于具有M1巨噬细胞，因为他们是促炎类型，而具有正常或低WBC的具有肿瘤的患者将倾向于具有M2巨噬细胞(Hao,N.等人.Clin.Dev.Immunol.(2012))。而且，已知具有高WBC的患者更倾向于具有深静脉血栓(DVT)(Pabinger,I.等人.Blood122：12(2013)；Blix,K.等人.PLOSOne4：8(2013)；Wang,T.F.等人.Thromb.Res.133(1)：25(2014))，其是大量癌症患者死亡的原因。那些患者倾向于具有更多NET，并且NET促进了肿瘤转移(Cools-Lartigue,J.等人.J.Clin.Invest.(2013))，其是包括肺癌患者在内的许多癌症患者短预后的一个原因。

在本实施例中，当在所有治疗群体中分析时，没有从CBP501添加至标准方案、培美曲塞加顺铂检测到的统计学上显著的存活益处。然而，通过亚组分析出乎意料地发现，添加CBP501对在临床试验筛选时显示正常或低白细胞(WBC)计数的人组提供了益处。WBC的正常值随地点和国家而改变。正常WBC上限可以是8000/μl至11000/μl。

令人惊讶的是，具有正常范围WBC的患者受益于CBP501，而在筛选时具有高WBC的那些患者表现比用顺铂和培美曲塞治疗的患者差，尽管与对照组、顺铂和培美曲塞治疗群体比较时两者的差异都不是统计学上显著的。

虽然CBP501的这种潜在双向作用的精确原因不是明显的，但钙调蛋白的CBP501抑制作用指示，许多微环境细胞例如巨噬细胞、白细胞和淋巴细胞中的钙调蛋白的抑制，抑制或调节其促进双向结果的活性，因为例如，如果其抑制M1型巨噬细胞，则其将通过抑制巨噬细胞的抗肿瘤活性和/或抑制NET清除而不利地影响患者存活，因为NET促进血栓生成和转移，并且如果其抑制促肿瘤M2巨噬细胞，其将延长患者存活。此外，已知顺铂使巨噬细胞从M1型向M2型倾斜(Dijkgraaf,E.M.等人.CancerRes.15：73(8)：2480(2013))，并且已知化疗本身促进肿瘤转移(Haas,M.J.SciBX1-3(2011))，因此当进行化疗时存在CBP501可能对肿瘤转移具有重要影响。已知钙调蛋白抑制剂能够抑制巨噬细胞(Horwitz,S.B.等人.J.CellBiol.91：798(1981)；Takenawa,T.等人.BiochemJ.15：208(1982)；Westra,J.等人.BMCMusculoskelet.Disord.30：11(2010))、白细胞(Naccache,P.H.等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.97(1)：62(1980)；Takeshige,K.等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.99(2)：484(1981)；Jones,H.P.等人.BiochemBiophys.Acta.714(1)：152(1982)；Jones,H.P.等人.MethodsEnzymol.015：389(1984)；Verploegen,S.等人.Eur.J.Biochem.269(18)4625(2002))和淋巴细胞(Salisbury,J.L.等人.Nature12：294(1981)；Boubali,S.等人.Mol.Immunol.52(2)：51(2012))的多种功能。具有高WBC的患者倾向于具有更多M1巨噬细胞，因为它们是促炎类型，而具有正常或低WBC的具有肿瘤的患者将倾向于具有M2巨噬细胞(Hao,N.等人.Clin.Dev.Immunol.(2012))。而且，具有高WBC的患者倾向于具有更多NET。如果CBP501防止NET的吞噬，患者更会处于患有DVT和转移的风险，两者都将减少存活时间。

可选地，由于钙调蛋白参与白细胞的正常功能(Horwitz,S.B.等人.J.CellBiol.91：798(1981)；Takenawa,T.等人.BiochemJ.15：208(1982)；Westra,J.等人.BMCMusculoskelet.Disord.30：11(2010)；Naccache,P.H.等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.97(1)：62(1980)；Takeshige,K.等人.Biochem.Biophys.Res.Commun.99(2)：484(1981)；Jones,H.P.等人.BiochemBiophys.Acta.714(1)：152(1982)；Jones,H.P.等人.MethodsEnzymol.015：389(1984)；Verploegen,S.等人.Eur.J.Biochem.269(18)4625(2002)；Salisbury,J.L.等人.Nature12：294(1981)；Boubali,S.等人.Mol.Immunol.52(2)：51(2012)；Hao,N.等人.Clin.Dev.Immunol.(2012))。当过度需要它们时，例如当患者罹患会增加白细胞计数的主动感染的情况下，CBP501可以通过对WBC功能潜在危害而干扰并抵销其对总体存活的有益活性。

通过作用于淋巴细胞，钙调蛋白抑制还可以影响抗癌免疫性，因为已经表明钙调蛋白可以诱导T细胞无能(Boubali,S.等人.Mol.Immunol.52(2)：51(2012))。

已经指示预治疗或基线WBC计数是用基于铂的疗法治疗的NSCLC患者的预后因子(Teramukai,S.等人.Eur.J.Cancer(45(11：1950(2009)；Kim,J.W.等人.CancerRes.Trest.45：4)：325(2013))，CBP501可以通过调节顺铂活性而增强该作用。由于每名患者在治疗之前都将获得WBC计数的实验分析作为统一批准的标准程序，所以可以基于WBC计数来选择患者。

独立于铂浓度，CBP501对钙调蛋白的抑制还可以直接抑制肿瘤迁移和转移，因为已经显示钙调蛋白在迁移中发挥重要作用(Wang,H.等人.Nat.Commun.4：1354(2013))。

Claims

1.一种用于在具有正常范围内白细胞计数的哺乳动物中增加过度增殖细胞的核酸损伤或者用于预防或治疗细胞增殖疾患的方法，其包括向所述哺乳动物施用肽化合物，其中所述肽化合物包括以下序列的任何一个：

A)包含表示为P1-P6的残基的肽，所述P1-P6具有结构P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1；

其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链内具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；

其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链内具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、或喹唑啉基团的任何氨基酸；

其中P3、P4、P5是任何氨基酸，或者其中P3、P4、P5的一个或多个是简单碳链，使得P2与P6之间的距离与当P3、P4、P5的每一个是氨基酸时的距离大致相同；

其中P6是Bpa、Phe4NO2、任何一个氨基酸和Tyr、任何一个氨基酸和Phe、任何氨基酸或没有；或

B)A)的所述肽，其中具有简单碳链的所述氨基酸是11-氨基十一烷酸、10-氨基癸酸、9-氨基壬酸、8-氨基辛酸、7-氨基庚酸、6-氨基己酸、或具有一个或多个不饱和碳键的相似结构，和/或

其中所述任何一个氨基酸是Ser，和/或

其中P4是Trp，和/或

其中所述占据相似侧链空间的氨基酸是Tyr或Phe；或

C)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

P1、P2、P3、P4、P5、P6；P6、P5、P4、P3、P2、P1；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；

其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、占据相似侧链空间的氨基酸(例如d-或l-Tyr、d-或l-Phe)、或者在所述侧链内具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、或喹唑啉基团的任何氨基酸；

其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、或占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链内具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；

其中P6是Bpa、Phe4NO2、任何一个氨基酸和Tyr、任何一个氨基酸和Phe；并且

其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是碱性氨基酸，其余是任何氨基酸或不存在；或

D)C)的所述肽，其中具有简单碳链的所述氨基酸是11-氨基十一烷酸、10-氨基癸酸、9-氨基壬酸、8-氨基辛酸、7-氨基庚酸、6-氨基己酸、或具有一个或多个不饱和碳键的相似结构，和/或

其中所述任何一个氨基酸是Ser，和/或

其中P4是Trp，和/或

其中所述占据相似侧链空间的氨基酸是Tyr或Phe；或

E)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；

其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、占据相似侧链空间的氨基酸、或者在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、或喹唑啉基团的任何氨基酸；

其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、占据相似侧链空间的氨基酸、或在所述侧链中具有一个或两个芳香族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉或嘧啶基团或者一个吲哚、戊搭烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、色原烷、喹喔啉、喹唑啉基团的任何氨基酸；

其中P6是Bpa、Phe4NO2、任何一个氨基酸和Tyr、任何一个氨基酸和Phe、任何氨基酸或没有；并且

F)E)的所述肽，其中具有简单碳链的氨基酸是氨基十一烷酸或8-氨基辛酸，和/或

其中所述任何一个氨基酸是Ser，和/或

其中所述占据相似侧链空间的氨基酸是Tyr或Phe；或

G)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1，

其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe；

其中P2是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe；

其中P3是Ser、Arg、Cys、Pro或Asn；

其中P4是Trp；

其中P5是Ser、Arg或Asn；或

其中P3、P4、P5是单一氨基十一烷酸或单一8-氨基辛酸；和

其中P6是Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或Ser-Phe)；或

H)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12；

其中P1是Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO₂、Tyr或Phe；

其中P3是Ser、Arg、Cys、Pro或Asn；

其中P4是Trp；

其中P5是Ser、Arg或Asn；或

其中P3、P4、P5是单一氨基十一烷酸或单一8-氨基辛酸；

其中P6是Bpa、Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe)；并且

其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是Arg或Lys，其余是任何氨基酸或不存在；或

I)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

其中P1是Cha或Nal(2)；

其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)；

其中P3是Ser；

其中P4是Trp；

其中P5是Ser或Asn；

其中P6是Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe)；并且

其中P7、P8、P9、P10、P11、P12的至少三个是Arg，其余是任何氨基酸或不存在；或

J)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1；

其中P1是Cha或Nal(2)；

其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3)；

其中P3是Ser；

其中P4是Trp；

其中P5是Ser；并且

其中P6是Bpa或(Ser-Tyr)；或

K)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

其中P1是Cha或Nal(2)；

其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3)；

其中P3是任何氨基酸；

其中P4是d-或l-Trp；

其中P5是任何氨基酸；

其中P6是Bpa或(Ser-Tyr)；

其中P7是Arg；

其中P8是Arg；

其中P9是Arg；

其中P10是Gln或Arg；

其中P11是Arg；并且

其中P12是d-或l-Arg，或

L)K)的所述肽，其中所述任何氨基酸是Ser或Pro；或

M)包含表示为P1-P12的残基的肽，所述P1-P12具有任何以下结构：

其中P1是Cha或Nal(2)；

其中P2是(Phe-2,3,4,5,6-F)；

其中P3是Ser；

其中P4是Trp；

其中P5是Ser；

其中P6是Bpa或(Ser-Tyr)；

其中P7是Arg；

其中P8是Arg；

其中P9是Arg；

其中P10是Gln或Arg；

其中P11是Arg；并且

其中P12是Arg；或

其前药或其药学上可接受的盐，从而增加所述过度增殖细胞的核酸损伤或者预防或治疗所述细胞增殖疾患。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述肽化合物包括任何以下序列：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQIDNO：59)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQIDNO：64)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：69)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)；(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)；或(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述肽化合物包括：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO：1)。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有小于约11,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有约4,000至约11,000个白细胞每微升(wbc/l)血液的白细胞计数。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有小于约10,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有小于约9,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有约4,000至约9,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有小于约8,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有小于约7,000个白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物具有小于每个临床实验室正常上限的白细胞每微升(wbc/μl)血液的白细胞计数。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述肽化合物包括药物制剂。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述其药学上可接受的盐选自乙酸盐、磺酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、一氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、酞酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲烷-磺酸盐、丙烷磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。

14.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物具有6至10个、10至15个、15至20个、20至25个、25至30个、30至40个、40至50个、50至75个、75至100个、100至150个、150至200个、或200至300个氨基酸残基的长度。

15.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物还包含与其连接或缀合的细胞穿透分子。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述细胞穿透分子通过共价键、或肽或非肽连接子连接至所述肽化合物。

17.如权利要求15所述的方法，其中所述细胞穿透肽包含交替模式的极性/带电氨基酸和非极性疏水氨基酸。

18.如权利要求15所述的方法，其中所述细胞穿透肽包含聚阳离子或两亲性的α-螺旋结构。

19.如权利要求1或15所述的方法，其中所述肽化合物和/或所述细胞穿透肽包含L-或D-异构体氨基酸、或L-和D-异构体氨基酸的混合物。

20.如权利要求15所述的方法，其中所述细胞穿透肽包括聚精氨酸(Arg)序列。

21.如权利要求15所述的方法，其中所述细胞穿透肽包括(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或由(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)组成。

22.如权利要求1至3中任一项所述的方法，还包括施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗包括手术切除、放射疗法、电离或化学放射疗法、化疗、免疫疗法、局部或区域热(高热)疗法、接种、烷化剂、抗代谢物、植物提取物、植物生物碱、亚硝基脲、激素、或核苷或核苷酸类似物。

24.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前、同时或之后施用。

25.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于48小时施用。

26.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于24小时施用。

27.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于12小时施用。

28.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于6小时施用。

29.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于4小时施用。

30.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于2小时施用。

31.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物在施用核酸损伤剂、核酸损伤治疗、抗增殖剂或抗增殖治疗之前或之后小于1小时施用。

32.如权利要求22至31中任一项所述的方法，其中所述核酸损伤剂或抗增殖剂包括药物。

33.如权利要求22至31中任一项所述的方法，其中所述核酸损伤剂或抗增殖剂包括含铂药物。

34.如权利要求22至31中任一项所述的方法，其中所述核酸损伤剂或抗增殖剂包括顺铂、卡铂、奈达铂、mitaplatin、沙铂、吡铂、三核铂、米铂或奥沙利铂。

35.如权利要求1至3中任一项所述的方法，还包括施用含铂药物、顺铂、卡铂、奥沙利铂、培美曲塞、吉西他滨、5-氟尿嘧啶(5-FU)、蝴蝶霉素、阿霉素(ADR)、博来霉素(Bleo)、培洛霉素、顺铂、顺式铂氨或顺式二胺二氯铂(II)(CDDP)、奥沙利铂或喜树碱(CPT)、环磷酰胺、硫唑嘌呤、环孢菌素A、强的松龙、美法仑、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、硫代鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、AZT、5-氮杂胞苷(5-AZC)或5-氮杂胞苷相关化合物、放线菌素D、光神霉素、丝裂霉素C、卡氮芥、罗氮芥、司莫司汀、链脲佐菌素、羟基脲、顺铂、米托坦、甲基苄肼、达卡巴嗪、紫杉烷、长春花碱、长春新碱、多柔比星、二溴甘露醇、放射或放射性同位素。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述放射包括UV放射、IR放射、X射线、或α-、β-或γ-放射。

37.如权利要求35所述的方法，其中所述放射性同位素包括I¹³¹、I¹²⁵、Sr⁸⁹、Sm¹⁵³、Y⁹⁰或Lu¹⁷⁷。

38.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞增殖疾患包括肿瘤或癌症。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述细胞增殖疾患包括转移性肿瘤或癌症。

40.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肿瘤或癌症包括肺肿瘤或癌症。

41.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肺肿瘤或癌症包括小细胞或非小细胞肺癌。

42.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肺肿瘤或癌症包括腺癌、鳞状细胞癌或大细胞癌。

43.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肿瘤或癌症包括癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、腺瘤、腺癌、黑素瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、间皮瘤、网状内皮、淋巴或造血瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤。

44.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肉瘤包括淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤或纤维肉瘤。

45.如权利要求43所述的方法，其中所述造血瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤包括骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。

46.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肿瘤或癌症包括肺、甲状腺、头或颈、鼻咽、喉、鼻或鼻窦、脑、脊柱、乳腺、肾上腺、脑垂体、甲状腺、淋巴、胃肠(口、食管、胃、十二指肠、回肠、空肠(小肠)、结肠、直肠)、生殖泌尿道(子宫、卵巢、子宫颈、子宫内膜、膀胱、睾丸、阴茎、前列腺)、肾脏、胰腺、肝脏、骨骼、骨髓、淋巴、血液、肌肉或皮肤瘤形成、肿瘤或癌症。

47.如权利要求38或39所述的方法，其中所述肿瘤或癌症包括乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、胸膜间皮瘤、结肠癌、直肠癌、大肠癌、小肠癌、食管癌、十二指肠癌、舌癌、咽癌、唾液腺癌、脑肿瘤、神经鞘瘤、肝癌、肾癌、胆管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、膀胱癌、尿道癌、皮肤癌、血管瘤、恶性淋巴瘤、恶性黑素瘤、甲状腺癌、甲状旁腺癌、鼻癌、鼻窦癌、听觉器官癌、口底癌、喉癌、腮腺癌、下颌癌、骨癌、血管纤维瘤、视网膜肉瘤、阴茎癌、睾丸肿瘤、儿科实体癌症、卡波西肉瘤、上颌窦肿瘤、纤维组织细胞瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或白血病。

48.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

49.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽化合物包括：(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)。

50.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中施用的所述肽化合物的量有效治疗所述肿瘤或癌症。

51.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法抑制或减少所述肿瘤或癌症的复发、生长、进展、恶化或转移。

52.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法导致瘤形成、肿瘤、癌症或恶性细胞质量、体积、大小或细胞数量的部分或完全破坏；刺激、诱导或增加瘤形成、肿瘤、癌症或恶性细胞坏死、溶解或凋亡；减少瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤体积大小、细胞质量；抑制或防止瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤体积大小、质量、大小或细胞数目的进展或增加；或者延长寿命。

53.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法导致减少或降低与瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤相关或由瘤形成、肿瘤、癌症或恶性肿瘤引起的不良症状或并发症的严重度、持续时间或频率。

54.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法导致减少或降低疼痛、不适、恶心、虚弱或疲倦，或者导致增加的能量、食欲、改善的运动性或心理健康。