CN105287539B - 延胡索甲素的新应用 - Google Patents
延胡索甲素的新应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105287539B CN105287539B CN201510771967.4A CN201510771967A CN105287539B CN 105287539 B CN105287539 B CN 105287539B CN 201510771967 A CN201510771967 A CN 201510771967A CN 105287539 B CN105287539 B CN 105287539B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- virus
- corydaline
- influenza
- drug
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- VRSRXLJTYQVOHC-YEJXKQKISA-N corydaline Chemical compound C=1([C@H]2[C@H]3C)C=C(OC)C(OC)=CC=1CCN2CC1=C3C=CC(OC)=C1OC VRSRXLJTYQVOHC-YEJXKQKISA-N 0.000 title claims abstract description 92
- VRSRXLJTYQVOHC-UHFFFAOYSA-N Corydaline Natural products CC1C2C=3C=C(OC)C(OC)=CC=3CCN2CC2=C1C=CC(OC)=C2OC VRSRXLJTYQVOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 46
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 208000030303 breathing problems Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 241001113283 Respirovirus Species 0.000 claims abstract description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 3
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 claims description 16
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 12
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 10
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 9
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 8
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 7
- 241000701096 Human adenovirus 7 Species 0.000 claims description 6
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 241000134304 Influenza A virus H3N2 Species 0.000 claims description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 claims description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 206010044008 tonsillitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 6
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- -1 small molecule compounds Chemical class 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 24
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 241000252870 H3N2 subtype Species 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 241000709675 Coxsackievirus B3 Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 3
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 241000218176 Corydalis Species 0.000 description 2
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 2
- 241001500343 Influenzavirus C Species 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 2
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 2
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 2
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZCUOLOTMJILH-UHFFFAOYSA-N 2h-tetrazol-2-ium;bromide Chemical compound [Br-].C1=N[NH+]=NN1 QGZCUOLOTMJILH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 241000405758 Betapartitivirus Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000003390 Chinese drug Substances 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000830532 Corydalis yanhusuo Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000001860 Eye Infections Diseases 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 201000008197 Laryngitis Diseases 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229940123424 Neuraminidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000218180 Papaveraceae Species 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010062106 Respiratory tract infection viral Diseases 0.000 description 1
- 206010043515 Throat cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 208000037950 acute febrile pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010550 acute laryngitis Diseases 0.000 description 1
- 208000016150 acute pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 208000013228 adenopathy Diseases 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000001643 allantois Anatomy 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 230000003288 anthiarrhythmic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003097 anti-respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000002911 sialidase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940032021 tetramune Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明涉及医药技术领域，公开了延胡索甲素在制备抑制呼吸道病毒药物和/或制备预防和治疗呼吸道疾病药物中的应用，从而为临床上病毒性呼吸道疾病的治疗提供一种安全高效毒副作用小的天然小分子化合物。延胡索甲素在无毒性范围内能够有效地抑制呼吸道病毒的复制，可进一步开发为治疗或预防病毒性呼吸道疾病的药物，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及延胡索甲素的新应用。
背景技术
呼吸道病毒是一大类主要以呼吸道为侵入门户，首先在呼吸道粘膜上皮细胞中增殖引起呼吸道以及全身感染，造成呼吸道及其他器官损害的病毒的总称。病毒性呼吸道感染，又名病毒性感冒，多数有流行性发生，病种很多，临床表现较为多样，主要分病毒性上呼吸道感染和病毒性下呼吸道感染，前者表现为急性鼻炎、咽炎和喉炎，后者表现为急性气管炎、支气管炎和肺炎。以冬春季发病较多。临床上的急性呼吸感染中有90～95％是由病毒引起的，主要的致病病毒包括流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、腺病毒、鼻病毒、埃可病毒、柯萨奇病毒、麻疹病毒、风疹病、冠状病毒等。流感病毒是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，属于正粘液病毒科，人类流感病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为甲、乙、丙型三类。在核蛋白抗原性的基础上，流感病毒还根据血凝素和神经氨酸酶的抗原性分为不同的亚型，目前在人群中流行的甲型流感病毒为甲3型(H3N2)和亚甲型(H1N1)。呼吸道合胞病毒是在婴幼儿中引起致死性急性呼吸道感染的最重要的病原因子，典型的是细支气管炎和肺炎，但在较大儿童和成人主要引起上呼吸道感染。柯萨奇病毒是一种肠病毒，分为A和B两类，是一类常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。腺病毒属于腺病毒科，能引起急性发热性咽炎、咽结膜热、急性呼吸道感染、肺炎、眼部感染和胃肠道感染。近年来，随着全球物种活动范围的加大，各种病毒的变异性增强，特别是人与禽等其他种属间的流感病毒相互作用，产生具有高致病性的新变种病毒，人感染高致病性禽流感病例的发生、新发病毒的人群间高传染性及感染者的高死亡率，曾一度引起了全球范围对流感的恐慌，严重影响了人类的日常生活和经济稳定发展。
目前，治疗病毒性呼吸道感染的已上市药物种类依然有限，根据作用机制大致分为两类，一类为M2离子通道阻断剂，主要为20世纪60年代发现的金刚烷胺和金刚乙胺，此类药主要对甲型流感病毒有预防和治疗作用，研究表明此类药物具有神经毒性等毒副作用，而且容易产生耐药性和传染性的耐药株，因此M2离子通道阻断剂的临床使用并不广泛；另一类是神经氨酸酶抑制剂，代表性药物为20世纪90年代发现的扎那米韦和奥司他韦，此类药物对大多数的人流感病毒及高致病性禽流感病毒均有效。但是近年来关于奥司他韦的耐药株也不断有报道。因此，开发更多基于新靶点和新结构类型的呼吸道病毒防治药物具有重要的意义。
延胡索甲素，异名为延胡索碱或紫堇碱，英文名为Corydaline或corydaline，分子式为C22H27NO4，为季胺类生物碱，是罂粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuoW.T.Wang)块茎中的主要有效成分之一。现代药理学表明延胡索甲素不仅有镇痛、兴奋子宫、抗心律失常等作用，还可用于制备为戒毒药物。目前，尚未有延胡索甲素在抗呼吸道病毒及治疗呼吸道病毒感染引起疾病的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供延胡索甲素在制备抑制呼吸道病毒药物和/或制备预防和治疗呼吸道疾病药物中的应用。
延胡索甲素结构式如下：
其中，作为优选，所述呼吸道病毒为甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和/或柯萨奇病毒。
作为优选，所述呼吸道疾病为由甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和/或柯萨奇病毒引起的上/下呼吸道急/慢性炎症。
更优选地，所述甲型流感病毒为甲型流感病毒H3N2和/或甲型流感病毒H1N1。
更优选地，所述柯萨奇病毒为柯萨奇病毒B3型。
更优选地，所述腺病毒为腺病毒7型。
作为优选，所述呼吸道疾病包括流感、肺炎、哮喘、咳嗽、支气管炎、结膜炎、鼻炎、鼻窦炎和扁桃体炎。
作为优选，所述药物为片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸剂、液体制剂、煎膏剂、分散剂、栓剂、凝胶剂、气雾剂或贴剂。
本领域中，MDCK细胞感染是目前研究H1N1和H3N2等流感病毒的典型细胞模型。本发明以不同浓度的延胡索甲素测试对MDCK细胞的安全性，结果显示延胡索甲素对MDCK细胞的TC50(半数有毒浓度)为337.13μM，最大无毒浓度为67.67μM。同时，延胡索甲素对流感病毒H3N2的IC50(半数抑制浓度)为10.42μM，选择指数(SI)高达32.36；对流感病毒H1N1的IC50为18.18μM，选择指数(SI)为18.55。IC50浓度远低于最大无毒浓度，表明延胡索甲素能够有效抑制H1N1和H3N2的复制，可用于治疗H1N1和H3N2病毒引起的呼吸道疾病，且安全无毒。
Hep-2细胞感染是目前研究呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒B3型和腺病毒7等病毒的常用细胞模型。本发明以不同浓度的延胡索甲素测试对Hep-2细胞的安全性，结果显示延胡索甲素对Hep-2细胞的TC50(半数有毒浓度)为462.66μM，最大无毒浓度为135.34μM。同时，延胡索甲素对呼吸道合胞病毒IC50为16.68μM，选择指数(SI)为27.73；对柯萨奇病毒B3型IC50为21.52μM，选择指数(SI)为21.50；对腺病毒7型IC50为17.48μM，选择指数(SI)为26.47。IC50浓度远低于最大无毒浓度，表明延胡索甲素能够有效抑制呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒B3型和腺病毒7的复制，用于治疗呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒B3型和腺病毒7病毒引起的呼吸道疾病，且安全无毒。
由以上技术方案可知，本发明提供了延胡索甲素在制备抑制呼吸道病毒药物和/或制备预防和治疗呼吸道疾病药物中的应用，从而为临床上病毒性呼吸道疾病的治疗提供一种安全高效毒副作用小的天然小分子化合物。延胡索甲素在无毒性范围内能够有效地抑制呼吸道病毒的复制，可进一步开发为治疗或预防病毒性呼吸道疾病的药物，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1所示为延胡索甲素对MDCK细胞毒性检测柱形图；
图2所示为延胡索甲素抗流感病毒A/汉防/359/95(H3N2)检测柱形图；
图3所示为延胡索甲素抗流感病毒A/PR/8/34(H1N1)检测柱形图；
图4所示为延胡索甲素对Hep-2细胞毒性检测柱形图；
图5所示为延胡索甲素抗呼吸道合胞病毒(RSV，Long株)检测柱形图；
图6所示为延胡索甲素抗柯萨奇病毒B3型(CVB3，Nancy株)检测柱形图；
图7所示为延胡索甲素抗病毒7型(Ad7)检测柱形图。
具体实施方式
本发明公开了延胡索甲素的新应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
抗病毒药物的体外细胞筛选方法主要包括空斑减数法、MTT(噻唑蓝)比色分析法及CPE(细胞病变)观察法等。空斑减数法可以敏感精确地测定病毒的感染程度，检查结果直观可靠，但是其对操作技术要求较高，操作较繁琐，可推广性受限。CPE观察法检测药物毒性是以前用最为常用的，通过在显微镜下逐日观察细胞形态变化，但此法定量不准确，主观性强，难以判断结果，而且统计困难。MTT分析法是使用MTT对细胞进行染色，通过检测其光密度(OD值)的改变可判断细胞的活性，从而实现药物抗病毒活性的定量分析，该法操作简便，在国内外实验室中广泛应用。本发明具体实施方式中将MTT法与CPE法进行结合，通过在光镜下观察细胞的CPE，决定进行MTT测定的最适时间，从而保证结果的准确性。
以下就本发明所提供的延胡索甲素的新应用做进一步说明。
实施例1：延胡索甲素对MDCK细胞的细胞毒性实验
MDCK细胞购自美国模式菌种保藏中心(ATCC)；药物：延胡索甲素购于中国药品生物制品检定所。仪器为酶标仪，molecular devices spectraMax M2e；天平，MettlerToledo AL104。
细胞培养：37℃，5％CO2加湿培养箱中培养。细胞生长液为DMEM培养基，加10％小牛血清、100U/mL的青霉素和链霉素。细胞维持液除新生小牛血清为2％外，其余同细胞生长液。
延胡索甲素的细胞毒性检测：MDCK(狗肾)细胞按7000个细胞/孔接种于96孔细胞培养板中，体积为100μL，细胞贴壁后，分别加入浓度为4.23μM、8.46μM、16.92μM、33.84μM、67.67μM、135.34μM、270.68μM、541.36μM的延胡索甲素溶液(采用细胞维持液配制，DMEM+2％小牛血清)，每个浓度重复2个孔，置于37℃，5％CO2培养箱中培养48小时后，弃培养液上清，每孔加入含5mg/mL的MTT溶液100μL，继续培养2h后，弃MTT上清，PBS洗3次，每孔加溶解液DMSO 150μL，振荡10min，待结晶完全溶解，用酶标仪检测550nm处的OD值，计算细胞存活率。用统计学软件SPSS 20.0的Probit回归法，计算药物TC50。
结果如图1所示，延胡索甲素在67.67μM以下的浓度范围内对MDCK细胞完全没有细胞毒性。基于此结果，本发明实施案例中延胡索甲素细胞水平抗病毒实验(流感病毒)的给药剂量范围为0.53～67.67μM，完全处在安全无毒性浓度范围。
实施例2：延胡索甲素抗甲型流感病毒H3N2和H1N1活性评价实验
MDCK细胞购自美国模式菌种保藏中心(ATCC)；病毒株：流感病毒A/汉防/359/95(H3N2)和流感病毒A/PR/8/34(H1N1)，在鸡胚尿囊腔内培养传代，-80℃保存；药物：延胡索甲素购于中国药品生物制品检定所。仪器为酶标仪，molecular devices spectraMax M2e；天平，Mettler Toledo AL104。
实验方法：
将MDCK细胞按2×104细胞/孔接种于96孔细胞培养板中，体积为100μL，置37℃细胞培养箱中培养24h后，细胞长成单层，将孔板中培养基弃去，PBS液洗两遍，每孔加入100μL的100TCID50流感病毒液感染细胞，吸附2小时，弃病毒液，加入200μL含有不同稀释浓度药物(以67.67μM为起始浓度，连续2倍梯度稀释8个梯度浓度，每个浓度设2个复孔)的细胞维持液，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，观察各组CPE，在病毒对照组细胞病变达4+时，且细胞对照无病变时，确定为MTT比色的最适时间点(约38小时)，进行MTT比色分析，用酶标仪在550nm处读取OD值。
依下式计算各检测孔中药物对病毒的抑制率：抑制率(％)＝(试验组OD值-病毒对照组OD值)/(细胞对照组OD值-病毒对照组OD值)。用统计学软件SPSS 20.0的Probit回归法，计算药物抗病毒的IC50。
结果如图2和图3所示，延胡索甲素明显抑制了流感病毒A/汉防/359/95(H3N2)和流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的复制，且成剂量依赖型，其IC50分别为10.42μM和18.18μM。
实施例3：延胡索甲素对Hep-2细胞的细胞毒性实验
Hep-2细胞(人咽喉癌上皮细胞)购自美国模式菌种保藏中心(ATCC)；
Hep-2细胞培养：37℃，5％CO2加湿培养箱中培养。细胞生长液为DMEM培养基，加10％小牛血清、100U/mL的青霉素和链霉素。
延胡索甲素对Hep-2细胞的毒性检测：Hep-2细胞按5000个细胞/孔接种于96孔细胞培养板中，体积为100μL，细胞贴壁后，分别加浓度为4.23μM、8.46μM、16.92μM、33.84μM、67.67μM、135.34μM、270.68μM、541.36μM的延胡索甲素溶液(采用细胞维持液配制，DMEM+2％小牛血清)，每个浓度重复2个孔，置于37℃，5％CO2培养箱中培养48小时后，弃培养液上清，每孔加入含5mg/mL的MTT溶液100μL，继续培养2h后，弃MTT上清，PBS洗3次，每孔加溶解液DMSO 150μL，振荡10min，待结晶完全溶解，酶标仪测550nm处的OD值，计算细胞存活率。用统计学软件SPSS20.0的Probit回归法，计算药物对Hep-2细胞的TC50。
结果如图4所示，延胡索甲素在135.34μM以下的浓度范围内对Hep-2完全没有细胞毒性。
实施例4：延胡索甲素抗甲型呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒活性评价实验
病毒株：呼吸道合胞病毒(RSV，Long株)、柯萨奇病毒B 3型(CVB3，Nancy株)和腺病毒7型(Ad7)。
Hep-2细胞按1.5×104细胞/孔接种于96孔细胞培养板中，体积为100μL，置37℃细胞培养箱中培养24h后，细胞长成单层，将孔板中培养基弃去，PBS液洗两遍，每孔加入100μL的100TCID50流感病毒液(RSV、CVB3、Ad7)感染细胞，吸附2小时，弃病毒液，加入200μL含有不同稀释浓度样品(以67.67μM为起始浓度，连续2倍梯度稀释8个梯度浓度，每个浓度设2个复孔)的细胞维持液，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，观察各组CPE，在病毒对照组细胞病变达4+时，且细胞对照无病变时，确定为MTT比色的最适时间点(约38小时)，进行MTT比色分析，用酶标仪在550nm处读取OD值。
依下式计算各检测孔中药物对病毒的抑制率：抑制率(％)＝(试验组OD值-病毒对照组OD值)/(细胞对照组OD值-病毒对照组OD值)。用统计学软件SPSS 20.0的Probit回归法，计算药物抑制各病毒的IC50。
结果如图5-7所示，延胡索甲素明显抑制了呼吸道合胞病毒(RSV，Long株)、柯萨奇病毒B3型(CVB3，Nancy株)和腺病毒7型(Ad7)的复制，且成剂量依赖型，其IC50分别为16.68μM、21.52μM和17.48μM。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.延胡索甲素在制备抑制呼吸道病毒药物和/或制备预防和治疗呼吸道疾病药物中的应用；
所述呼吸道病毒为甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和/或柯萨奇病毒；
所述呼吸道疾病为由甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和/或柯萨奇病毒引起的上/下呼吸道急/慢性炎症。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述甲型流感病毒为甲型流感病毒H3N2和/或甲型流感病毒H1N1。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述柯萨奇病毒为柯萨奇病毒B3型。
4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述腺病毒为腺病毒7型。
5.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述呼吸道疾病包括流感、肺炎、哮喘、咳嗽、支气管炎、结膜炎、鼻炎、鼻窦炎和扁桃体炎。
6.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物为片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸剂、液体制剂、煎膏剂、分散剂、栓剂、凝胶剂、气雾剂或贴剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510771967.4A CN105287539B (zh) | 2015-11-12 | 2015-11-12 | 延胡索甲素的新应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510771967.4A CN105287539B (zh) | 2015-11-12 | 2015-11-12 | 延胡索甲素的新应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105287539A CN105287539A (zh) | 2016-02-03 |
| CN105287539B true CN105287539B (zh) | 2018-07-03 |
Family
ID=55185829
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510771967.4A Active CN105287539B (zh) | 2015-11-12 | 2015-11-12 | 延胡索甲素的新应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105287539B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106691879B (zh) * | 2016-12-16 | 2019-11-05 | 华东师范大学 | 中药单体及其组合物在防晒美白抗衰老化妆品中的应用 |
| CN109223780B (zh) * | 2018-08-03 | 2021-06-18 | 香港科技大学深圳研究院 | 以甲型流感病毒rna聚合酶为靶点的药物分子赝卡维丁及脱氢赝卡维丁以及制备方法 |
| CN114053273A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-18 | 华南农业大学 | 延胡索乙素在制备抗冠状病毒感染药物中的用途 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3295165B2 (ja) * | 1993-03-10 | 2002-06-24 | 第一製薬株式会社 | 抗アレルギー剤 |
| JP3793714B2 (ja) * | 2001-12-05 | 2006-07-05 | 第一製薬株式会社 | 抗アレルギー剤 |
| CN100595200C (zh) * | 2004-12-29 | 2010-03-24 | 中国人民解放军第二军医大学 | 脱氢卡维丁类化合物及其在医药中的应用 |
| CN101091787A (zh) * | 2006-06-22 | 2007-12-26 | 北京中医药大学 | 一种治疗哮喘的中药组合物及其制备方法 |
-
2015
- 2015-11-12 CN CN201510771967.4A patent/CN105287539B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105287539A (zh) | 2016-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Writing Committee of the World Health Organization (WHO) Consultation on Human Influenza A/H5 | Avian influenza A (H5N1) infection in humans | |
| Nie et al. | Antiviral activity of Isatidis Radix derived glucosinolate isomers and their breakdown products against influenza A in vitro/ovo and mechanism of action | |
| Saadh et al. | Inhibitory effects of epigallocatechin gallate (EGCG) combined with zinc sulfate and silver nanoparticles on avian influenza A virus subtype H5N1. | |
| CN105287539B (zh) | 延胡索甲素的新应用 | |
| CN108434167A (zh) | 异柯里拉京在制备抗流感病毒药物中的应用 | |
| CN101695511B (zh) | 石榴皮提取物及其生产方法和应用 | |
| CN106038536B (zh) | 二氢欧山芹素在制药中的应用 | |
| Albeshri et al. | Evaluation of cytotoxicity and antiviral activity of Rhazya stricta Decne leaves extract against influenza A/PR/8/34 (H1N1) | |
| CN106880630A (zh) | Retro‑2cycl及相关衍生物的用途 | |
| JP2014509614A (ja) | 漢方薬組成物の抗ｈｅｖ７１薬剤調製での用途 | |
| CN106668015B (zh) | 一种脂肪基酯类化合物wy124在制备抗肠道病毒药物中的应用 | |
| CN111317752B (zh) | 一种预防或治疗流感病毒感染的药物及用途 | |
| CN101991763B (zh) | 一种中药组合物在制备抗流感病毒药物中的应用 | |
| CN104906117B (zh) | 1,6-二磷酸果糖在制备防治包膜病毒感染的药物及病毒灭活剂中的应用 | |
| Iraci et al. | Nanoscale technologies in the fight against COVID-19: from innovative nanomaterials to computer-aided discovery of potential antiviral plant-derived drugs | |
| CN101791301A (zh) | 二烯丙基二硫醚在制备广谱抗病毒药物中的应用 | |
| CN110013482A (zh) | 帕纳替尼在制备治疗流感病毒感染的药物中的应用 | |
| CN105943540A (zh) | 一种西米杜鹃醇的用途 | |
| Verani et al. | In Vitro Potential Virucidal Effect Evaluation of Xibornol on Human Adenovirus Type 5, Human Rhinovirus Type 13, Human Coronavirus 229E, Human Parainfluenza Virus Type 1, and Human Respiratory Syncytial Virus | |
| CN111603526A (zh) | 一种复方银花解毒药物在制备抗病毒药物中的应用 | |
| CN113197886A (zh) | 双黄连制剂在抗病毒感染中的应用 | |
| CN113440562B (zh) | 复方鱼腥草合剂在制备预防或治疗冠状病毒药物中的应用 | |
| CN110151767B (zh) | Gnf-7在制备治疗流感病毒感染的药物中的应用 | |
| CN103251576B (zh) | 一种盐酸苯海拉明在制备治疗或预防流感病毒药物中的应用 | |
| CN110292576A (zh) | 罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |