CN105267211B

CN105267211B - Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物和治疗艾滋病药物中的应用

Info

Publication number: CN105267211B
Application number: CN201510703674.2A
Authority: CN
Inventors: 马忠俊; 余立雁; 丁婉婧; 朱焕章
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2015-10-27
Filing date: 2015-10-27
Publication date: 2018-06-19
Anticipated expiration: 2035-10-27
Also published as: CN105267211A

Abstract

本发明公开了一种Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物和治疗艾滋病药物中的应用，Aspochalasin类化合物为式I结构，所述的R₁、R₂、R₃、R₄和R₅为氢、羟基、羰基、双键、环氧、甲基、烷烃酰胺中的一种或两种以上，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅相同或者不相同。该Aspochalasin类化合物具有激活HIV潜伏的作用，可以与抗逆转录病毒药物联合使用，可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒库的清除，从而用于艾滋病的治疗。

Description

Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物和治疗艾滋病药物中的应用

技术领域

本发明涉及治疗艾滋病药物的技术领域，具体涉及Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物和治疗艾滋病药物中的应用。

背景技术

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是由艾滋病毒(HIV)感染引起的一种严重危害人们生命健康的传染性疾病，目前临床采用的高效抗逆转录病毒疗法(Highly activeantiretroviral therapy,HAART)，虽然能极大地提高艾滋病人的生存时间和质量，但是HIV感染人体后会与宿主细胞整合，形成无法被HAART清除的病毒库。这些潜伏病毒，在停止HAART后会重新激活并迅速反弹，因此艾滋患者需长期用药，而长期用药会引起病毒变异，耐药性增加，药物不良反应增加而使治疗失败(Ho,D.D.Toward HIV eradication orremission:the tasks ahead.Science，1998.280:1866–1867.)。研究显示，HIV难以在体内被完全清除的一个重要原因是HIV能够潜伏在静息的记忆CD4+T细胞中，该潜伏感染细胞是由一小部分HIV感染的活化CD4+T细胞转化而产生的，其整合的前病毒缺乏转录活性，因而，不会被免疫系统和抗逆转录酶病毒的药物攻击。尽管感染个体携带潜伏感染细胞数量较少，但衰减率是如此之慢，以至于欲在个体生存期内仅靠HAART治疗将其彻底清除是不可能的。因此，HIV潜伏感染的静息CD4+T细胞是构成机体内病毒储藏库(reservoir)的主要部分，同时也是目前临床治疗不能彻底清除HIV的巨大障碍[Finzi,D.et al.Latentinfection of CD4+T cells provides a mechanism for lifelong persistence ofHIV-1,even in patients on effective combination therapy.Nature Med.1999,5,512–517]。

现实成功的个案提示，艾滋病的“功能性”治愈是可以实现的，而清除HIV潜伏病毒库是最有希望的方法[实现艾滋病的功能性治愈的策略，中国艾滋病性病，2015,21:253-256]，因而探索激活和清除HIV潜伏库的方法以获得艾滋病临床功能性治愈，是当前艾滋病研究的热点。目前临床研究的HIV潜伏激活剂有细胞因子IL-2、细胞因子IL-7，组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他，以及甲基化酶抑制剂。以上在研药物都存在不同的不足，如激活效果弱，不良反应明显等。因而，发现更加安全有效的HIV潜伏激活剂及相应的治疗方案已是当务之急。

发明内容

本发明提供了一种Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物和在制备治疗艾滋病药物中的应用。

Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物和在制备治疗艾滋病药物中的应用，本发明提供的Aspochalasin类化合物，为一种具有激活HIV潜伏作用的药物，为式I所示的结构，式II所示的结构是在式I结构的基础上，标注了A、B、C，本发明的Aspochalasin类化合物，A、B、C环形成5/6/11三环骈合结构，其C大环可有不同的取代。即所述的R₁、R₂、R₃、R₄和R₅为氢、羟基、羰基、双键、环氧、甲基、烷烃酰胺等中的一种或两种以上(包括两种)，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅相同或者不相同。

本发明提供的Aspochalasin类化合物，可以为混合物，也可以为单一的化合物，Aspochalasin类化合物可包括Aspochalasin E(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为OH、OH、OH、H和H)、Aspochalasin M(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、＝O、OH、H和H)、Aspochalasin P(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、＝O、H和H)、Aspochalasin C(R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键)和19,20-dihydro-Aspochalasin C(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、OH、H和H)及其组合物。

即所述的Aspochalasin类化合物为Aspochalasin E、Aspochalasin M、Aspochalasin P、Aspochalasin C、19,20-dihydro-Aspochalasin C中的一种或两种以上，其中，Aspochalasin E中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为OH、OH、OH、H和H，Aspochalasin M中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、＝O、OH、H和H，Aspochalasin P中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、＝O、H和H，Aspochalasin C中R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键，19,20-dihydro-AspochalasinC中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、OH、H和H。

进一步优选，所述的Aspochalasin类化合物为Aspochalasin C，Aspochalasin C中R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键。在低浓度时即能明显使感染细胞内潜伏的HIV表达，相对激活率高，与抗逆转录病毒药物联合使用，可更好地清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒库的清除，从而用于艾滋病的治疗。

Aspochalasin类化合物可以商业购买，也可以由曲丽穗霉Spicariaelegans(Eur.J.Org.Chem.2009,3045-3051)、或Trichodermagamsii(Fitoterapia,2012,541-544)、或黄柄曲霉Aspergillus flavipes(J.Nat.Prod.2004,328-332)等真菌发酵产物提取分离得到。

本发明采用HIV潜伏细胞模型进行活性筛选试验，结果显示Aspochalasin类化合物能使感染细胞内潜伏的HIV表达，具有干预HIV潜伏的作用，与抗逆转录病毒药物联合使用，可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒库的清除，为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。

本发明提供的Aspochalasin类化合物和抗逆转录病毒药物联合在制备治疗艾滋病药物中的应用。

本发明提供的Aspochalasinl类化合物特别适合与其它抗HIV的药物联用。尤其是本发明的活性成分可与抗逆转录病毒药物联合使用，清除潜伏感染的细胞，从而用于艾滋病的治疗。所述的抗HIV药物包括：一、核苷类逆转录酶抑制剂：齐多夫定、地丹诺辛、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦；二、非核苷类逆转录酶抑制剂：奈韦拉平、地拉韦啶、依非韦伦；三、及蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、安普那韦。即所述的抗逆转录病毒药物为齐多夫定、地丹诺辛、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、奈韦拉平、地拉韦啶、依非韦伦、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、安普那韦中的一种或两种以上(包括两种)。

与现有技术相比，本发明的主要优点包括：

1.提出了Aspochalasin类化合物的新用途，其在低浓度时即能明显使感染细胞内潜伏的HIV表达。

2.所述的Aspochalasin类化合物可作为活性成分，制备具有激活HIV潜伏作用的药物。

3.所述的Aspochalasin类化合物可进一步可与抗逆转录病毒药物联合使用，为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。

具体实施方式

实施例1

HIV潜伏诱导激活实验

将活性筛选用的细胞按每孔2×10⁴个种植于96孔板，每孔加入100微升含10％FBS(胎牛血清，Gibco)的1640培养基(Gibco)。24小时后，加入一定浓度的Aspochalasin类化合物。药物处理细胞72小时后，在荧光显微镜下观察细胞GFP表达情况，并收集细胞进行流式细胞术检测，分析荧光细胞所占比例。

实施例2

用终浓度为20微克/毫升的Aspochalasin E(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为OH、OH、OH、H和H)处理HIV潜伏感染细胞模型，在其作用3天后，通过对报告基因绿色荧光蛋白的荧光显微镜观察和流式细胞术检测，分析HIV潜伏感染细胞的激活效率，结果显示,HIV潜伏感染细胞经Aspochalasin E处理后相对激活率为62％。

实施例3

用终浓度为20微克/毫升的Aspochalasin C(R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键)处理HIV潜伏感染细胞模型，在其作用3天后，通过对报告基因绿色荧光蛋白的荧光显微镜观察和流式细胞术检测，分析HIV潜伏感染细胞的激活效率，结果显示，HIV潜伏感染细胞经处理后相对激活率为80％。

实施例4

用终浓度为20微克/毫升的19,20-dihydro-Aspochalasin C(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、OH、H和H)处理HIV潜伏感染细胞模型，在其作用3天后，通过对报告基因绿色荧光蛋白的荧光显微镜观察和流式细胞术检测，分析HIV潜伏感染细胞的激活效率，结果显示,HIV潜伏感染细胞经19,20-dihydro-Aspochalasin C处理后相对激活率为56％。

实施例5

用终浓度为20微克/毫升的Aspochalasin类化合物的组合物，包括AspochalasinE(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为OH、OH、OH、H和H)、Aspochalasin M(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、＝O、OH、H和H)和Aspochalasin P(R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、＝O、H和H)，三者质量比1：1：1，处理HIV潜伏感染细胞模型，在其作用3天后，通过对报告基因绿色荧光蛋白的荧光显微镜观察和流式细胞术检测，分析HIV潜伏感染细胞的激活效率，结果显示，HIV潜伏感染细胞处理后激活率为51％。

实施例6

取Aspochalasin C(R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键)4g与药用淀粉10g，灌制成胶囊，每粒净重200mg，该胶囊具有激活HIV潜伏的作用，在低浓度时即能明显使感染细胞内潜伏的HIV表达。

实施例7

取Aspochalasin C(R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键)4g、齐多夫定4g、药用淀粉10g，灌制成胶囊，每粒净重200mg，该胶囊具有激活HIV潜伏的作用，与抗逆转录病毒药物齐多夫定联合使用，可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒库的清除，从而用于艾滋病的治疗。

Claims

1.Aspochalasin类化合物在制备抗HIV潜伏药物中的应用，其特征在于，所述的Aspochalasin类化合物为式I所示的结构，

所述的Aspochalasin类化合物为Aspochalasin E、Aspochalasin P、Aspochalasin C、19,20-dihydro-Aspochalasin C中的一种或两种以上，其中，Aspochalasin E中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为OH、OH、OH、H和H，Aspochalasin P中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、＝O、H和H，Aspochalasin C中R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键，19,20-dihydro-AspochalasinC中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅分别为H、OH、OH、H和H。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的Aspochalasin类化合物为Aspochalasin C，Aspochalasin C中R₁、R₂、R₃分别为H、OH、OH，R₄和R₅形成双键。