CN105148279B - 右旋糖酐纳米药物载体及其制备方法与抗肿瘤药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种右旋糖酐纳米药物载体及其制备方法与抗肿瘤药物及其制备方法。该右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，所述羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为20～100纳米。粒径为20～100纳米的羧基化右旋糖酐纳米粒子具有良好的生物包容性及降解性，可以用于负载药物作用于人体，并且由于羧基化的右旋糖酐本身的结构特点，可以通过腙键负载药物，腙键对pH敏感，在特定的pH环境下断裂而靶向释放药物。因此，上述右旋糖酐纳米药物载体可以用于建立pH响应的释药系统，以提高疗效，减少副作用。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种右旋糖酐纳米药物载体及其制备方法与抗肿瘤药物及其制备方法。
背景技术
目前，癌症已经成为威胁人类生命和健康的首要敌人。传统的抗癌药物，如阿霉素等，由于其缺乏特异性的肿瘤靶点，不能特异性分布于正常细胞与肿瘤细胞，不仅疗效差，而且阿霉素药物剂量相关的副作用明显。
在正常生理条件下，人体不同部位的pH不同，在病理状况下，pH变化尤为明显，利用这种变化可设计pH响应的释药系统以提高药物的靶向性，从而提高疗效，减少副作用。
发明内容
基于此，有必要提供一种右旋糖酐纳米药物载体，用于建立pH响应的释药系统，以提高疗效，减少副作用。
一种右旋糖酐纳米药物载体，包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，所述羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为20～100纳米。
一种右旋糖酐纳米药物载体的制备方法，包括如下步骤：
在保护气体氛围中，将右旋糖酐溶于溶剂中，制备得到第一溶液；
在保护气体氛围中，将硝酸铈铵溶于硝酸中，制备得到第二溶液；
在保护气体氛围中，将所述第二溶液注入所述第一溶液中，并于20～30℃下反应5～10分钟，加入丙烯酸，再于20～30℃下反应20～30分钟，加入N,N-亚甲基双丙烯酰胺，然后于20～30℃下继续反应4～6小时，分离纯化，得到所述右旋糖酐纳米药物载体，所述右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，所述羧基化的右旋糖酐纳米药物粒子的粒径为20～100纳米。
在其中一个实施例中，所述分离纯化的方法为：将反应液的pH调至中性，然后将反应液装入透析袋中，在去离子水中透析72小时，冷冻干燥，得到所述右旋糖酐纳米药物载体。
一种抗肿瘤药物，包括阿霉素和肉桂醛中的一种及如权利要求1所述的右旋糖酐纳米药物载体，所述阿霉素和肉桂醛中的一种通过腙键连接于所述右旋糖酐纳米药物载体上。
一种抗肿瘤药物，包括阿霉素和肉桂醛中的一种、EGFR抗体及上述右旋糖酐纳米药物载体，所述EGFR抗体与所述右旋糖酐纳米药物载体相连，所述阿霉素和肉桂醛中的一种通过腙键连接于所述右旋糖酐纳米药物载体上。
在其中一个实施例中，所述阿霉素和肉桂醛中的一种的质量百分比为23％。
一种抗肿瘤药物的制备方法，包括如下步骤：
混合EGFR抗体和上述右旋糖酐纳米药物载体，并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液，将所述第一混合液的pH值调节为4.5～5，于室温下反应2～4小时，分离纯化得到中间产物；
将所述中间产物溶于溶剂中得到含有中间产物的溶液，将所述含有中间产物的溶液滴加入联氨溶液中，并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液，将所述第二混合液于室温反应20～25小时，分离纯化得到氨基修饰的中间产物；
将所述氨基修饰的中间产物溶于溶剂中，加入阿霉素和肉桂醛中的一种，在35～40℃下振荡48～72小时，分离纯化后得到所述抗肿瘤药物。
在其中一个实施例中，所述EGFR抗体和所述右旋糖酐纳米药物载体的摩尔比为20～30:1。
在其中一个实施例中，所述并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液的步骤中，所述碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为5～10:1。
在其中一个实施例中，所述并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液的步骤中，所述碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为5～10:1。
粒径为20～100纳米的羧基化右旋糖酐纳米粒子具有良好的生物包容性及降解性，可以用于负载药物作用于人体，并且由于羧基化的右旋糖酐本身的结构特点，可以通过腙键负载药物，腙键对pH敏感，在特定的pH环境下断裂而靶向释放药物。因此，上述右旋糖酐纳米药物载体可以用于建立pH响应的释药系统，以提高疗效，减少副作用。
附图说明
图1为一实施方式的右旋糖酐纳米药物载体的制备方法的流程图；
图2为一实施方式的上述抗肿瘤药物的制备方法的流程图；
图3为图2所示的抗肿瘤药物的制备方法的合成示意图；
图4为实施例1所制备的右旋糖酐纳米药物载体的TEM图；
图5为实施例5的EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物的DOX在不同pH条件下的释放曲线；
图6(a)～图6(c)为实施例5的EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物的共焦扫描显微镜荧光显色图；
图7为实施例4的Dextran-DOX抗肿瘤药物及实施例5的EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物的抗肿瘤疗效实验结果。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
一种右旋糖酐纳米药物载体，表示为Dextran。该Dextran包括羧基化右旋糖酐纳米粒子，该羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为20～100纳米。
右旋糖酐具有良好的生物包容性及降解性，无可观察到的毒性，其外周血循环时间较长，使用该右旋糖酐纳米药物载体负载药物进入人体时，安全性较高。因而可以使用该右旋糖酐纳米药物载体负载药物作用于人体。
并且，由于羧基化的右旋糖酐本身的结构特点，可以通过腙键负载药物，腙键对pH敏感，在特定的pH环境下断裂而靶向释放药物。因此，上述右旋糖酐纳米药物载体，可以用于建立pH响应的释药系统，以提高疗效，减少副作用。
羧基化的右旋糖酐易于被修饰，为右旋糖酐纳米药物载体负载多种药物提供了可能。同时，粒径为20～100nm的纳米粒子可避免被网状内皮系统(RES)的吞噬细胞清除，通过适当的表面修饰，还可有效延长右旋糖酐纳米粒子的血液循环时间，从而提高疗效。
请参阅图1，上述右旋糖酐纳米药物载体的制备方法包括如下步骤：
步骤S110：在保护气体氛围中，将右旋糖酐溶于溶剂中，制备得到第一溶液。
保护气体可以为氮气或惰性气体，优选为氮气。
右旋糖酐为平均分子量为20000～40000的右旋糖酐。溶剂为去离子水。右旋糖酐在第一溶液中的浓度优选为0.05mg/mL。
步骤S120：在保护气体氛围中，将硝酸铈铵溶于硝酸中，制备得到第二溶液。
保护气体可以为氮气或惰性气体，优选为氮气。
硝酸为0.1N的稀硝酸。硝酸铈铵在第二溶液中的浓度优选为0.25mg/mL。
步骤S130：在保护气体氛围中，将第二溶液注入第一溶液中，并于20～30℃下反应5～10分钟，加入丙烯酸，再于20～30℃下反应20分钟，加入N,N-亚甲基双丙烯酰胺，然后于20～30℃下继续反应4～6小时，分离纯化，得到右旋糖酐纳米药物载体，右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，羧基化的右旋糖酐纳米药物粒子的粒径为20～100纳米。
保护气体可以为氮气或惰性气体，优选为氮气。
将第二溶液注入第一溶液中，以在右旋糖酐链上引发自由基。第一溶液和第二溶液的体积比优选为30:1～40:1。
丙烯酸与第一溶液的体积比优选为1:20～30，N,N-亚甲基双丙烯酰胺与第一溶液的固液比为1g:15～20mL。
分离纯化的方法具体为：将反应液的pH调至中性，然后将反应溶液装入透析袋中，在去离子水中透析72小时，以除去未反应的单体，透析完后冷冻干燥，得到右旋糖酐纳米药物载体，该右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，羧基化的右旋糖酐纳米药物粒子的粒径为20～100纳米。
上述右旋糖酐纳米药物载体的制备方法将右旋糖酐纳米化的同时进行羧基化，制备得到可以用于建立pH响应的释药系统的右旋糖酐纳米药物载体，工艺简单，制备成本低。
一种抗肿瘤药物，包括阿霉素和肉桂醛中的一种及上述右旋糖酐纳米药物载体，阿霉素和肉桂醛中的一种通过腙键连接于右旋糖酐纳米药物载体上。
腙键对pH敏感，只有在特定的pH条件下断裂，腙键的断裂释放阿霉素或肉桂醛，使得阿霉素或肉桂醛在特定的环境下靶向释放，有利于提高疗效，减少副作用。
上述抗肿瘤药物的制备方法包括如下步骤：
步骤S210：将上述右旋糖酐纳米药物载体、乙醇和浓硫酸混合得到混合液，将该混合液回流3～4小时，冷却后加入饱和碳酸钠中和，然后加入质量浓度为80％的水合肼，继续回流10～20小时，过滤，收集固体产物。
浓硫酸为质量百分比为85％的硫酸。右旋糖酐纳米药物载体、乙醇和浓硫酸的固液比优选为1g:5mL:10mL。
右旋糖酐纳米药物载体与质量浓度为80％的水合肼的固液比优选为1g:5mL。
步骤S220：将固体产物溶于水中，并加入阿霉素或肉桂醛，然后在37℃下振荡72小时，于去离子水中透析72小时，冷冻干燥，得到抗肿瘤药物。
上述抗肿瘤药物的制备方法首先在右旋糖酐纳米药物载体上生成肼键，然后肼键与阿霉素或肉桂醛上的羰基反应生成腙键，从而通过腙键将阿霉素或肉桂醛负载于右旋糖酐纳米药物载体上，得到具有pH响应的抗肿瘤药物。
进一步地，还提供另一种抗肿瘤药物，包括阿霉素和肉桂醛中的一种、EGFR(表皮生长因子受体)抗体及上述右旋糖酐纳米药物载体。其中，EGFR抗体与右旋糖酐纳米药物载体相连，阿霉素和肉桂醛中的一种通过腙键连接于右旋糖酐纳米药物载体上。
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变、失调或过表达于许多上皮恶性肿瘤，在肿瘤的生长和分化过程中起重要作用。EGFR在肿瘤信号转导途径，调节细胞增殖，存活和分化过程中起着极其重要的作用。相对于人体正常组织而言，约60％的三阴性乳腺癌(TNBC)患者肿瘤细胞中可检测到高表达的EGFR，因而EGFR是TNBC理想的治疗靶点。
上述抗肿瘤药物就以EGFR为作用靶点，Dextran为药物载体，实现癌症的靶向治疗，从而提高疗效，减少副作用。
优选地，上述抗肿瘤药物中，阿霉素或肉桂醛的质量百分比为23％。
请参阅图2和图3，上述抗肿瘤药物的制备方法包括如下步骤：
步骤S310：混合EGFR抗体和上述右旋糖酐纳米药物载体，并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液，然后将第一混合液的pH值调节为4.5～5，于室温下反应2～4小时，分离纯化得到中间产物。EGFR抗体为EGFR单克隆抗体。EGFR抗体和Dextran的摩尔比为20～30:1，优选为25:1。
碳二亚胺(EDAC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的摩尔比优选为5～10:1。旋糖酐纳米药物载体Dextran与碳二亚胺的摩尔比为1:50～100。
使用MES缓冲液将第一混合液的pH值调节为4.5～5。pH值为4.5～5的第一混合液于室温下反应2小时，分离纯化得到中间产物，中间产物为EGFR抗体和上述右旋糖酐纳米药物载体相连形成的物质，表示为EGFR-Dextran。
分离纯化的方法为用MES缓冲液洗涤三次。
EGFR抗体在使用前还包括近红外染料Cy5.5和荧光探针标记并定量EGFR的步骤。
步骤S320：将中间产物溶于溶剂中得到含有中间产物的溶液，将含有中间产物的溶液滴加入联氨溶液中，并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液，将第二混合液于室温反应20～25小时，分离纯化得到氨基修饰的中间产物。
溶剂优选为无水二甲基亚砜(DMSO)。含有中间产物的溶液中，中间产物的浓度优选为0.1～0.2g/mL。
含有中间产物的溶液与联氨溶液的体积比优选为3:2。碳二亚胺(EDAC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的摩尔比优选为5～10:1。
该步骤S320中，Dextran上的-COOH与联氨反应，在Dextran上引入氨基。
分离纯化的方法为：用甲醇沉淀，然后冷冻干燥。氨基修饰的中间产物表示为氨基修饰的EGFR-Dextran。
步骤S330：将氨基修饰的中间产物溶于溶剂中，加入阿霉素，在35～40℃下振荡48～72小时，分离纯化后得到抗肿瘤药物。
溶剂优选为无水二甲基亚砜(DMSO)。
分离纯化的方法为用去离子水透析48小时，然后冷冻干燥。
阿霉素(DOX)与氨基修饰的EGFR-Dextran通过腙键连接，生成抗肿瘤药物EGFR-Dextran-DOX。
上述抗肿瘤药物的制备方法先合成EGFR-Dextran，然后对EGFR-Dextran进行氨基修饰生成氨基修饰的EGFR-Dextran，氨基修饰的EGFR-Dextran与DOX通过腙键连接，生成EGFR-Dextran-DOX。该方法工艺简单，制备成本低。
以下通过具体实施例进一步阐述。
实施例1
制备右旋糖酐纳米药物载体
1、在氮气氛围中，在三颈烧瓶中将2.5mg平均分子量为20000的右旋糖酐溶于50mL去离子水中，搅拌使其充分溶解，制备得到第一溶液；
2、在氮气氛围中，将0.31g硝酸铈铵溶于1.25mL 0.1N的硝酸中，制备得到第二溶液；
3、在保护气体氛围中，将第二溶液注入第一溶液中，并于30℃下反应5分钟后，然后加入2mL丙烯酸，再于30℃下反应20分钟，加入2.75g N,N-亚甲基双丙烯酰胺，然后于30℃下继续反应4小时，反应结束后加入1N NaOH调节体系pH至中性，最后将反应液装入透析袋中，在去离子水中透析72小时，冷冻干燥，得到右旋糖酐纳米药物载体，该右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子。使用动态光散射法(DLS)及透射型电子显微镜(TEM)测量粒径大小，TEM图见图4，羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为95纳米。
实施例2
制备右旋糖酐纳米药物载体
1、在氮气氛围中，在三颈烧瓶中将3.0mg平均分子量为40000的右旋糖酐溶于60mL去离子水中，搅拌使其充分溶解，制备得到第一溶液；
2、在氮气氛围中，将0.6g硝酸铈铵溶于2.5mL 0.1N的硝酸中，制备得到第二溶液；
3、在保护气体氛围中，将第二溶液注入第一溶液中，并于20℃下反应10分钟后，然后加入2mL丙烯酸，再于20℃下反应20分钟后，加入2.75g N,N-亚甲基双丙烯酰胺，然后于20℃下继续反应6小时，反应结束后加入1N NaOH调节体系pH至中性，最后将反应液装入透析袋中，在去离子水中透析72小时，冷冻干燥，得到右旋糖酐纳米药物载体，该右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子。使用动态光散射法(DLS)及透射型电子显微镜(TEM)测量粒径大小，羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为98纳米。
实施例3
制备右旋糖酐纳米药物载体
1、在氮气氛围中，在三颈烧瓶中将3.0mg平均分子量为40000的右旋糖酐溶于60mL去离子水中，搅拌使其充分溶解，制备得到第一溶液；
2、在氮气氛围中，将0.6g硝酸铈铵溶于2.5mL 0.1N的硝酸中，制备得到第二溶液；
3、在保护气体氛围中，将第二溶液注入第一溶液中，并于25℃下反应8分钟后，然后加入2mL丙烯酸，再于25℃下反应20分钟后，加入2.75g N,N-亚甲基双丙烯酰胺，然后于25℃下继续反应5小时，反应结束后加入1N NaOH调节体系pH至中性，最后将反应液装入透析袋中，在去离子水中透析72小时，冷冻干燥，得到右旋糖酐纳米药物载体，该右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子。使用动态光散射法(DLS)及透射型电子显微镜(TEM)测量粒径大小，羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为50纳米。
实施例4
制备Dextran-DOX抗肿瘤药物
1、将1g实施例1制得的右旋糖酐纳米药物载体、5mL乙醇和10mL浓硫酸混合得到混合液，将该混合液回流4小时，冷却后加入饱和碳酸钠至体系的pH值为7，然后加入5mL质量浓度为80％的水合肼，继续回流12小时，过滤，收集固体产物；
2、将固体产物溶于水中，并加入5g阿霉素，然后在37℃下振荡72小时，于去离子水中透析72小时，冷冻干燥，得到Dextran-DOX抗肿瘤药物。
实施例5
制备EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物
1、购买美国SANT CRUZE公司的EGFR单克隆抗体，使用近红外染料Cy5.5和荧光探针标记并定量EGFR，将标记和定量好的EGFR单克隆抗体和实施例1制备的右旋糖酐纳米药物载体Dextran按摩尔比25:1进行混合，然后加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液，其中，碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为5:1，旋糖酐纳米药物载体Dextran与碳二亚胺的摩尔比为1:50；用MES缓冲液调节第一混合液的pH为4.5，然后于室温下反应2小时，MES缓冲液洗涤3次，得到中间产物；
2、将中间产物溶于无水DMSO中得到浓度为0.1g/mL的含有中间产物的溶液，将含有中间产物的溶液滴加入联氨溶液中，并加入摩尔比为5:1的碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液，其中，含有中间产物的溶液与联氨溶液的体积比为3:2；将第二混合液于室温下反应24小时，反应结束后，用甲醇沉淀，冷冻干燥得氨基修饰的中间产物；
3、将氨基修饰的中间产物溶于无水DMSO中，加入阿霉素，在37℃下振荡72小时，在去离子水中透析48小时，冷冻干燥，得到EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物；
4、使用微电泳检测纳米表面电荷，高效液相色谱(HPLC)-荧光检测法用于DOX定量。HPLC参数如下：
检测器：2487双通道紫外检测器，检测波长为254nm；色谱柱：C18柱(大连依利特ODS2分析柱，250I砌X4.6iTlm，5岬)，不锈钢柱；保护柱：菲罗门C18(4mnl×4mm)；恒温：35℃。流速：1.0mL/min；流动相：水和甲醇的混合液(水和甲醇的体积比为28:72)；进样：Wate玛1525泵，717自动取样器，进样量为20出；工作站：Breeze色谱工作站。
实验结果表明，DOX载药率可达77％，DOX在EGFR-Dextran-Dox中的质量百分比为23％。
5、EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物的pH响应特性
将20毫升的EGFR-Dextran-DOX溶液置于透析中并浸入480毫升pH(4,5,6,7)缓冲液中，配制pH分别为4、5、6和7的样品，在37℃下于选定的时间间隔，取透析袋外1毫升的溶液通过HPLC检测DOX的含量，并制成药物释放曲线，其中HPLC的参数同实施例4。
实验结果如图5所示，由图5可知，EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物具有pH响应特性，调节pH值可达到控制DOX释放的目的。因为外周循环血的pH值为7～7.4，而肿瘤局部及肿瘤细胞内的pH值为4～6之间，因而EGFR-Dextran-DOX在血中可保持相对的稳定，保证了大部分药物在肿瘤局部释放而发挥靶向治疗作用，并降低了副作用。
6、细胞内的EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物中DOX定位和实时监测药物释放
利用共焦扫描显微镜荧光显色观察EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物中DOX。
实验结果如图6(a)、图6(b)和图6(c)所示，EGFR显示绿色荧光，DOX显示红色荧光，重叠后显示为黄色。
由图6(a)、图6(b)和图6(c)可知，EGFR-Dextran-DOX中的DOX经EGFR介导的细胞内吞后可以于胞内释放药物进而到达其靶点而发挥细胞毒作用。
7、EGFR-Dextran-DOX及Dextran-DOX抗肿瘤药物的抗肿瘤疗效
选用荷人TNBC肿瘤细胞MDA-MB231(EGFR高表达)及MDA-MB231(EGFR敲除)的裸鼠为动物模型，3只小鼠/组，药物浓度:1毫克/公斤体重，皮下注射给药，2次/周，治疗3周，观察Dextran-DOX(实施例3所制备的)及EGFR-Dextran-DOX的抗瘤疗效，以PBS缓冲液和DOX作为对照。
实验结果如图7所示，给予EGFR-Dextran-DOX纳米粒子治疗的小鼠，瘤体体积较Dextran-DOX及非靶向DOX纳米粒明显缩小，而Dextran-DOX的效果优于非靶向DOX。说明低浓度下(1毫克/公斤体重)，EGFR-Dextran-DOX的抗瘤活性较Dextran-DOX及非靶向性DOX纳米显著增强，而Dextran-DOX的抗肿瘤活性高于非靶向性DOX。
实施例6
制备抗肿瘤药物
1、购买美国SANT CRUZE公司的EGFR单克隆抗体，使用近红外染料Cy5.5和荧光探针标记并定量EGFR，将标记和定量好的EGFR单克隆抗体和实施例1制备的右旋糖酐纳米药物载体Dextran按摩尔比25:1进行混合，然后加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液，其中，碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为10:1，旋糖酐纳米药物载体Dextran与碳二亚胺的摩尔比为1:100；用MES缓冲液调节第一混合液的pH为5，然后于室温下反应4小时，MES缓冲液洗涤3次，得到中间产物；
2、将中间产物溶于无水DMSO中得到浓度为0.2g/mL的含有中间产物的溶液，将含有中间产物的溶液滴加入联氨溶液中，并加入摩尔比为10:1的碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液，其中，含有中间产物的溶液与联氨溶液的体积比为3:2；将第二混合液于室温下反应20小时，反应结束后，用甲醇沉淀，冷冻干燥得氨基修饰的中间产物；
3、将氨基修饰的中间产物溶于无水DMSO中，加入肉桂醛，在40℃下振荡48小时，在去离子水中透析48小时，冷冻干燥，得到抗肿瘤药物。
实施例7
制备EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物
1、购买美国SANT CRUZE公司的EGFR单克隆抗体，使用近红外染料Cy5.5和荧光探针标记并定量EGFR，将标记和定量好的EGFR单克隆抗体和实施例1制备的右旋糖酐纳米药物载体Dextran按摩尔比25:1进行混合，然后加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液，其中，碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为8:1，旋糖酐纳米药物载体Dextran与碳二亚胺的摩尔比为1:80；用MES缓冲液调节第一混合液的pH为5，然后于室温下反应3小时，MES缓冲液洗涤3次，得到中间产物；
2、将中间产物溶于无水DMSO中得到浓度为0.2g/mL的含有中间产物的溶液，将含有中间产物的溶液滴加入联氨溶液中，并加入摩尔比为8:1的碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液，其中，含有中间产物的溶液与联氨溶液的体积比为3:2；将第二混合液于室温下反应25小时，反应结束后，用甲醇沉淀，冷冻干燥得氨基修饰的中间产物；
3、将氨基修饰的中间产物溶于无水DMSO中，加入阿霉素，在40℃下振荡60小时，在去离子水中透析48小时，冷冻干燥，得到EGFR-Dextran-DOX抗肿瘤药物。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括阿霉素和肉桂醛中的一种、EGFR抗体及右旋糖酐纳米药物载体，所述EGFR抗体与所述右旋糖酐纳米药物载体相连，所述阿霉素和肉桂醛中的一种通过腙键连接于所述右旋糖酐纳米药物载体上，所述右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，所述羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为20～100纳米。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述阿霉素和肉桂醛中的一种的质量百分比为23％。
3.一种抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
混合EGFR抗体和右旋糖酐纳米药物载体，并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液，将所述第一混合液的pH值调节为4.5～5，于室温下反应2～4小时，分离纯化得到中间产物，所述右旋糖酐纳米药物载体包括羧基化的右旋糖酐纳米粒子，所述羧基化的右旋糖酐纳米粒子的粒径为20～100纳米；
将所述中间产物溶于溶剂中得到含有中间产物的溶液，将所述含有中间产物的溶液滴加入联氨溶液中，并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液，将所述第二混合液于室温反应20～25小时，分离纯化得到氨基修饰的中间产物；
将所述氨基修饰的中间产物溶于溶剂中，加入阿霉素和肉桂醛中的一种，在35～40℃下振荡48～72小时，分离纯化后得到所述抗肿瘤药物。
4.根据权利要求3所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，所述EGFR抗体和所述右旋糖酐纳米药物载体的摩尔比为20～30:1。
5.根据权利要求3所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，所述并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第一混合液的步骤中，所述碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为5～10:1。
6.根据权利要求3所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，所述并加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺得到第二混合液的步骤中，所述碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为5～10:1。
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Non-Patent Citations (2)
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