CN105146614A

CN105146614A - 一种功能性钙果酵素、酵素饮料及其生产方法

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Publication number: CN105146614A
Application number: CN201510464172.9A
Authority: CN
Inventors: 周学义; 朱文昭
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-08-01
Filing date: 2015-08-01
Publication date: 2015-12-16
Anticipated expiration: 2035-08-01
Also published as: CN105146614B

Abstract

本发明公开了一种功能性钙果酵素、钙果酵素饮料及其生产方法，钙果酵素的原料组成为：钙果1-10份、枸杞0-5份、叶黄素0-1份、牛磺酸0-1份、蜂蜜1-10份、果葡糖浆1-10份、甜菊糖0-1份、低聚糖0-3份，它经过清洗、打浆、酶解、灭菌、发酵而成钙果酵素原液，由此经调配而成钙果酵素饮料。本发明钙果酵素及其饮料含有丰富的钙、多酚、黄酮、玉米黄质、β-胡萝卜素、多糖等特殊成分，对补钙、软化血管、改善微循环，提高机体抗氧化能力，延缓衰老、缓解视疲劳具有积极作用。

Description

一种功能性钙果酵素、酵素饮料及其生产方法

技术领域

本发明属于生物发酵领域，具体地说是涉及一种功能性钙果酵素、酵素饮料及其生产方法。

背景技术

钙果又称欧李，含有丰富的蛋白质矿物质元素、维生素和氨基酸。每百克鲜果钙铁含量分别达到80毫克和1.5毫克，是苹果的6倍，果实中含有17种氨基酸，总量高达338.3～451.7mg/100g，特别是维生素C、B2和E的含量以及钾、磷、铁、锌、硒和赖氨酸的含量均高于现有常见果树品种。是儿童和老人孕妇的高级保健水果。据有关方面调查，我国有一半以上人口缺少维生素B和钙。为了弥补这两类营养物质的不足，目前行之有效的办法就是多吃钙果，使钙变为易被人体吸收的有机钙并产生大量的维生素B。钙果被称为“补钙之星”。

申请号为200510104930.2的发明专利申请公开了一种欧李汁及其加工方法，其采用高温浸提法提取钙果汁，使钙果的营养价值及香气流失严重。申请号为200710062781.7的发明专利公开了一种欧李果汁饮料及其制备方法的发明专利，其采用手工去核，生产效率低，且生产的是一种澄清饮料。申请号为201310202825.7的发明专利，其公开了欧李钙果果汁饮料，其没有事先脱核，直接打浆，会使部分果核破碎，由于欧李的核中含有大量的苦杏仁苷、脂肪油和粗蛋白质，如果在欧李破碎打浆的过程中，核破碎过多，将会直接影响欧李酒的品质。且目前没有将钙果进行发酵制备酵素的发明，也没有制备具有补钙及明目双重功能的钙果酵素和饮料。

目前，以枸杞、红枣、其他果蔬为原料制备酵素类产品的公开专利文献较多，比如：申请号为201410326646.9的中国专利公开了一种枸杞酵素的制备方法，以枸杞残次品为原料，经分离取汁、酶解、降糖发酵、乳酸菌发酵、超声低温浓缩、调配、干燥、粉碎而制得，添加剂少，无残留，实现了枸杞酵素产品中活性物质含量的提升。申请号为201110038192.1的中国专利公开了一种具有滋补气血功效的醋饮料及其生产方法，各材料的质量组成比为：中药固体颗粒1～5，红枣果肉5～15，枸杞子5～15，糖10～20、食醋10～20；人参、党参、山药经过浸泡、熬煮、过滤、蒸发提取得到中药固体颗粒，再和切块的红枣果肉、枸杞子、糖、食醋进行发酵提取而得到，具有滋补气血的功效，有效率在85％以上。申请号为201010624400.1的中国专利公开了一种金丝小枣酵素的制备方法，以金丝小枣为原料经枣泥制备、一次酶解、二次酶解、调配消毒、发酵、冷冻干燥而制得，制备的金丝小枣酵素含有丰富的蛋白酶、脂肪酶、超氧化歧化酶、淀粉酶、维生素、矿物质及酚类、黄酮类等次生代谢产物。申请号为201410432581.6的中国专利公开了一种环保酵素的制作方法，采用原料为：苹果、香菇、胡萝卜、山楂、枸杞子、柠檬和白砂糖；经原料清洗、密闭自然发酵、取滤液、纯种发酵、后熟制得，该环保酵素的制作方法，改变了传统的酵素生产使用诸多添加剂等，制取的酵素不仅对于人体吸收有益，而且在养生保健等方面有明显作用。申请号为201210406990.X的中国专利公开了一种苹果酵素，以质量份数计，其组成为：党参40-60份，北芪15-25份，红枣30-60份，枸杞子30-80份，青苹果400-600份，寡糖粉80-100份，花蜜200-300份；制备方法是利用纯天然的植物和水果通过自然发酵产生酵素，具有补益强身、提升免疫系统功能，促进血液循环，清血整肠，加速新陈代谢，保持机体健壮等显著功效。如申请号201310546788.1的“一种果蔬酵素及其制备方法”的发明专利，公开了以苹果、香蕉、枣子、葡萄、芒果、山楂、菠萝、蜜桔、草莓、熟白果、洋葱为原料，经清洗、捣碎，入坛自然发酵180天而成，有活性物质，但是不宜无保。申请号201110151867的“益生植物本草发酵饮料”的发明专利，该专利公开了益生植物本草发酵饮料及其制备方法，该饮料以红枣、枸杞子、决明子为原料制成提取液，在提取液中调配砂糖、低聚糖，并接种植物乳杆菌、乳酸片球菌两种乳酸菌发酵，得饮料；其中，每1000kg饮料中，有以折光度计≥10％的红枣、枸杞子、决明子提取液400kg，饮料pH为3.5，乳酸菌总数为4.9×10⁸/ml。

上述已经公开的专利主要研究方向集中在原料及发酵方式的变化上，主要存在以下几点缺陷：1)自然发酵周期长、成本高、发酵污染风险大；2)发酵方式采用传统自然菌群发酵、现代复配纯种发酵或二者的结合，过于传统，无创新；3)酵素生物活性及稳定性差，保质期短；4)口感和风味适应性差、食欲性低；5)以提取液进行发酵，损失了原料的营养成分。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种生物活性高、稳定性强、口感和风味好，保健效果显著的钙果酵素、酵素饮料及其生产方法。

本发明的技术方案是：一种功能性钙果酵素、钙果酵素饮料及其生产方法，钙果酵素饮料以钙果酵素生产过程中的产物为原料；钙果酵素的原料组成为：钙果1-30份、枸杞0-5份、叶黄素0-1份、牛磺酸0-1份、低聚糖0-3份、其他辅料若干份，所述钙果酵素及其饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、加0-2倍水打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置，分离部分上清液(澄清汁)备用，其量为钙果汁总量的0-50％；

2)枸杞清洗后加入5-10倍的水进行复水，打浆，然后用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时；

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和步骤2)得到的枸杞汁混合，进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到2-6％，调pH值7-8；

4)将步骤3)得到的浆液加入低聚糖后灭菌，降温至30-40℃，接种益生菌进行通氧保温发酵，发酵期间适时补充果葡糖浆，维持可溶性固形物稳定，发酵20-60小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；

5)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到3.0-4.0时终止发酵，室温后酵0-30天后得钙果酵素原液；

6)将步骤1)分离出的钙果上清液和步骤5)得到的钙果酵素原液混合，然后加入叶黄素、牛磺酸等辅料，溶解混合均匀即得一种功能性钙果酵素；

7)取步骤5)得到的钙果酵素原液1-30份，取步骤1)分离出的钙果上清液1-20份，取叶黄素0.1-1份、牛磺酸0.1-1份、其他辅料适量，纯净水适量，经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成钙果酵素饮料。

一种功能性钙果酵素，其特征在于由固、液两部分组成，固体部分为上述制得的钙果酵素粉，液体部分为上述的钙果酵素，其包装形式为一个液体包装配备若干个固体小包装组成一个完整的钙果酵素包装，食用时将一定量的液体稀释后加入一个小包装的固体混匀后饮用。

所述的分离出的钙果上清液进行明胶、蛋清粉或PVPP处理。明胶或蛋清粉使用量为50-100mg/L,以不过量为限，溶解后，加入钙果上清液中搅拌均匀，静置10小时以上过滤；PVPP处理用量1-5％，用20倍的水浸泡溶胀后加入钙果上清液中搅拌均匀，静置1小时后分离，PVPP可以循环使用。

一种钙果酵素粉，是在上述步骤4)中制得钙果酵素粉；或由钙果酵素原液或钙果酵素经浓缩、干燥而成；也可由钙果经清洗、脱核、预热、打浆后经浓缩所得的浓缩钙果汁接种益生菌发酵后，加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后浓缩、干燥而成；也可由钙果经清洗、脱核、预热后打浆得到的钙果汁经浓缩，加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后干燥而成；也可由钙果经清洗、脱核、预热后打浆所得的钙果汁杀菌后接种益生菌发酵，发酵结束后加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后浓缩、干燥而成；也可由钙果经清洗、脱核、预热后经干燥、粉碎后加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖混合均匀而成。

一种钙果片，由钙果酵素粉加工而成；钙果片包括泡腾片、咀嚼片、含片；钙果酵素粉也可以加工成颗粒冲剂、胶囊等产品形式。

所述的益生菌为青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种(保加利亚乳杆菌)、蜡样芽孢杆菌、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、马克斯克鲁维酵母、乳酸片球菌、戊糖片球菌中的一种或几种。

益生菌均为国家批准可用于食品或药品的不产生毒素的菌株。

将钙果浆经成分调整、杀菌、真空浓缩，再接种益生菌发酵后干燥而制成的含大量乳酸菌体及其代谢产物的混合粉状物，属功能型性钙果制品，富含益生菌素，可作保健食品或食品添加剂。

干燥采用微波干燥，真空干燥、真空冷冻干燥等。

钙果酵素原液或钙果酵素浓缩采用低温真空浓缩，干燥温度不宜超过50℃，最大限度的保留处理物料中的活性成分。

上述低聚糖为低聚木糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、低聚半乳糖、水苏糖、大豆低聚糖、棉子糖、低聚麦芽糖中的一种或几种。

可溶性固形物调整时采用砂糖、果葡糖浆或蜂蜜。

另外的，新鲜钙果经清洗、灭酶或不灭酶，破碎，保持果核完整，加入果胶酶和纤维素酶保温酶解，期间持续挤压搅拌，酶解结束时，加入1-2倍的水搅拌均匀后静置30分钟，加入其它原料，混合后经过灭菌，接种微生物进行发酵，发酵结束后即可分离出钙果酵素原汁。

另外的，新鲜钙果经清洗、灭酶或不灭酶、挤压破碎果肉，保持果核不被破碎，加糖拌匀自然发酵，发酵结束后分离得钙果酵素原汁。

新鲜钙果烘干，酵素生产时经清洗，复水，在不破坏果核的条件下挤压破碎，灭菌，接种益生菌进行发酵，发酵液经离心分离脱去果核得钙果酵素原汁。

钙果酵素可以灭菌保存。也可以通过加入果葡糖浆或白砂糖将钙果酵素原液的可溶性固形物调整至50-70％，通过高渗透压和益生菌产生的益生菌素抑制微生物活性，使钙果酵素得以长期保存。

原料打浆、微细化处理、调整可溶性固形物含量和Ph值后灭菌，接种凝结芽孢杆菌等益生菌发酵，发酵20-40天后，经过调配，然后用砂糖或果葡糖浆将发酵液可溶性固形物含量调整至60％左右，装瓶即为钙果酵素。

本发明达到了以下几个效果：

由于枸杞子含有丰富的胡萝卜素、玉米黄质、酸浆果红素、维生素A1、B1、B2、C等钙、铁等健康眼睛的必需营养，故擅长明目，所以俗称“明眼子”。联合钙果中的花青素，叶黄素、牛磺酸，能够起到很好的明目功能。

益生菌在发酵过程中，由于微生物促进原料代谢产生大量的初级、次级代谢产物如氨基酸、维生素、有机酸、各种酶、芳香族化合物、糖醇、多酚、多糖、小分子肽以及大量的低聚糖等有机活性成分外，而且还产生大量的益生菌细胞、超氧化物岐化酶(SOD)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)及黄酮类化合物等对人类具有保健作用的诸多宝贵因子。钙果酵素在乳酸菌发酵过程产生大量的乳酸菌素等小分子功能成分和原料自身所含的大量营养及功能成分，这些有益成分极大的促进肠道有益菌群的增值，抑制有害菌，从而减少腐败物质和有毒物质的产生，在起到功能性同时，还起到调节肠道菌群平衡，增强免疫、增进美容、促进睡眠、延缓衰老的作用。

本发明由于原料酶解处理及多菌种发酵的生化反应，使枸杞原料中的花青素、玉米黄质及其酯类与果肉纤维分离，呈游离状态，有利于人体更好的吸收，明目功能更好。

本发明采用多菌种联合发酵而成，产生大量的原料代谢产物和菌体自溶物和大量的菌体细胞，对提高机体免疫力具有重要作用。

本发明的含有丰富的可溶性膳食纤维，低聚糖，含有大量的益生菌，使产品具有整肠通便，清除体内毒素的良好功效，长期食用可达到降脂减肥、排毒养颜、防治大肠癌、防治心脏疾病的医疗价值和保健作用。

本发明含有丰富钙、磷、钾、镁、铁、锌、维生素C、B族维生素等营养元素，对维持机体正常功能具有重要作用。

本发明还含有丰富的多酚、黄酮、玉米黄质、花青素、β-胡萝卜素、多糖等特殊成分，对软化血管、改善微循环，提高机体抗氧化能力，延缓衰老、缓解视疲劳具有积极作用。

本发明的酵素和饮料都保留了钙果的香气，产品口感和功能都得到提升。

本发明解决了现有技术钙果脱核效率低、设备投入大，实现钙果酵素工业化生产。

下面以具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

具体实施方式

实施例1

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果30份、枸杞5份、叶黄素1份、牛磺酸1份、蜂蜜10份、果葡糖浆10份、砂糖40份、低聚木糖3份。

功能性钙果酵素及其酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、加2倍水打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置，分离部分上清液(澄清汁)备用，其量为钙果汁总量的50％；

2)枸杞清洗后加入10倍的水进行复水，打浆，然后用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时；

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和枸杞汁混合，进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到2％，调pH值为7；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚糖，灭菌后降温至30℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段补充果葡糖浆，维持固形物含量为2％；发酵20小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、发酵乳杆菌、约氏乳杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之五。

5)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到4.0时终止发酵，室温后酵30天后得钙果酵素原液；益生菌为婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、发酵乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之五。

6)在步骤5)所述的钙果酵素原液中加入步骤1)分离出的钙果上清液，加入叶黄素、牛磺酸、甜菊糖、糖浆、蜂蜜，溶解后进行灭菌处理即得一种功能性钙果酵素。

7)取步骤5)得到的钙果酵素原液30份，取步骤1)分离出的钙果上清液20份，取叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚异麦芽糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

另一种钙果酵素由固、液两部分组成，固体部分为上述钙果酵素粉，液体部分为上述钙果酵素，其包装形式为一个液体包装配备若干个固体小包装组成钙果酵素包装，食用时将一定量的液体稀释后加入一个小包装的固体混匀后饮用。

将钙果酵素原液过滤，则生产出澄清钙果酵素和澄清钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液和钙果酵素分别经浓缩、微波干燥而成钙果酵素粉。

也可由钙果经清洗、脱核、预热、打浆、杀菌后经浓缩所得的浓缩钙果汁接种上述益生菌发酵后，加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后浓缩、干燥而成钙果酵素粉。

也可由钙果经清洗、脱核、预热、打浆所得的钙果汁杀菌后接种上述益生菌发酵，加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后经浓缩、微波干燥而成钙果酵素粉。

分别由上述的五种钙果酵素粉加工而成钙果片，钙果片包括泡腾片、咀嚼片、含片。

上述五种钙果酵素粉也可以加工成颗粒冲剂、胶囊等产品形式。

实施例2

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果1份、枸杞0.5份、叶黄素0.1份、牛磺酸0.2份、蜂蜜1份、果葡糖浆2份、砂糖3份、低聚异麦芽糖0.6份。

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置，分离部分上清液(澄清汁)备用，其量为钙果汁总量的20％；

2)枸杞清洗后加入5倍的水进行复水，打浆，然后用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时；

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和枸杞汁混合，进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到6％，调pH值为8；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚糖，灭菌后降温至40℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段补充果葡糖浆，维持固形物含量为6％；发酵60小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为两歧双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、地衣芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌，各菌种等比例使用，总用量为百分之五。

5)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到3.0时终止发酵，得钙果酵素原液；益生菌为两歧双歧杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之五。

6)在步骤4)所述的钙果酵素原液中加入步骤1)分离出的钙果上清液，加入叶黄素、牛磺酸、糖浆、蜂蜜和砂糖，溶解后即得一种功能性钙果酵素。

7)取钙果酵素原液1份，分离出的钙果上清液1份、叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚异麦芽糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液过滤后可生产出澄清钙果酵素饮料。

分离出的钙果上清液中加入80mg/L的明胶或蛋清粉溶液，搅拌均匀，静置10小时以上过滤。

钙果酵素原液和钙果酵素分别经浓缩、真空冷冻干燥而成钙果酵素粉，钙果酵素原液和钙果酵素浓缩均采用低温真空浓缩，温度不宜超过50℃，最大限度的保留处理物料中的活性成分。

实施例3

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果30份、枸杞0份、叶黄素0份、牛磺酸0份、蜂蜜2份、果葡糖浆2份、砂糖30份、低聚木糖0份。

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、加1.5倍水打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置，分离部分上清液(澄清汁)备用，其量为钙果汁总量的50％；

2)将步骤1)剩余的钙果果汁进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到4％，调pH值为7.5；

3)将步骤2)得到的浆液中加入低聚木糖，灭菌后降温至37℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段补充果葡糖浆，维持固形物含量为4％；发酵40小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为两歧双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、地衣芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌，各菌种等比例使用，总用量为百分之五。

4)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到3.5时终止发酵，室温后酵20天即得钙果酵素原液；益生菌为两歧双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、地衣芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之十。

5)在步骤4)所述的钙果酵素原液中加入步骤1)分离出的钙果上清液，加入糖浆、蜂蜜和砂糖，溶解后即得一种功能性钙果酵素。

6)取钙果酵素原液30份，分离出的钙果上清液10份、叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚木糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

钙果酵素原液和钙果酵素分别经浓缩、真空干燥而成钙果酵素粉，钙果酵素原液和钙果酵素浓缩均采用低温真空浓缩，温度不宜超过50℃，最大限度的保留处理物料中的活性成分。

实施例4

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果20份、枸杞2份、叶黄素0.2份、牛磺酸0.3份、蜂蜜2份、果葡糖浆1份、砂糖20份、低聚果糖0.4份；

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、加1倍水打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置；

2)枸杞清洗后加入8倍的水进行复水，打浆，然后用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时；

3)将步骤1)的钙果果汁和步骤2)枸杞汁混合，进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到3％，调pH值为7；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚果糖，灭菌后降温至35℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段间歇补充果葡糖浆，维持固形物含量为3％；发酵30小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、卷曲乳杆菌、凝结芽孢杆菌、约氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、副干酪乳杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌，各菌种等比例使用，总用量为百分之二。

5)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到3.5时终止发酵，室温后酵10天即得钙果酵素原液；益生菌为两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、卷曲乳杆菌、凝结芽孢杆菌、约氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、副干酪乳杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之二。

6)钙果酵素原液中加入步骤1)分离出的钙果上清液，然后加入叶黄素、牛磺酸、砂糖、糖浆、蜂蜜，溶解，即得一种功能性钙果酵素。

7)取钙果酵素原液10份，叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚果糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液过滤后可生产出澄清酵素饮料。

实施例5

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果5份、枸杞2份、叶黄素0.2份、牛磺酸0.3份、蜂蜜2份、果葡糖浆1份、砂糖10份、低聚果糖0.4份；

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、加1倍水打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置，过滤得钙果澄清汁，用3％的PVPP处理1小时过滤；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚果糖，灭菌后降温至35℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段间歇补充果葡糖浆，维持固形物含量为3％；益生菌为动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、短双歧杆菌、地衣芽孢杆菌、格氏乳杆菌唾液乳杆菌、植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌，各菌种等比例使用，总用量为百分之三。

5)发酵30小时后终止发酵，得钙果酵素原液；

6)在钙果酵素原液中加入叶黄素、牛磺酸、蜂蜜，用糖浆、砂糖调可溶性固形物含量为62％，即得一种功能性钙果酵素。

7)取钙果酵素原液15份，钙果澄清汁5份、叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚果糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

分别由上述的四种钙果酵素粉加工而成钙果片，钙果片包括泡腾片、咀嚼片、含片。

上述四种钙果酵素粉也可以加工成颗粒冲剂、胶囊等产品形式。

实施例6

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果15份、枸杞2份、叶黄素0.15份、牛磺酸0.25份、蜂蜜1份、果葡糖浆2份、砂糖15份、低聚半乳糖0.6份。

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)钙果清洗、去核、预热、加2倍水打浆，用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时得钙果汁，钙果汁静置，分离部分上清液(澄清汁)备用，其量为钙果汁总量的20％；

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和枸杞汁混合，进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到5％，调pH值为7.5；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚半乳糖，灭菌后降温至37℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段补充果葡糖浆，维持固形物含量为5％；发酵40小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为青春双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌，各菌种等比例使用，总用量为百分之一。

5)在步骤4)所得的上清液接种益生菌继续发酵，当发酵液ph值达到3.0时终止发酵，室温后酵15天即得钙果酵素原液；益生菌为短双歧杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之五。

6)在步骤5)得到的钙果酵素原液中加入步骤1)分离出的钙果上清液，然后加入低聚半乳糖、叶黄素、牛磺酸，加入砂糖、糖浆、蜂蜜，溶解、装瓶杀菌后即得一种功能性钙果酵素。

7)取钙果酵素原液10份，分离出的钙果上清液5份、叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚异麦芽糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液过滤后可生产出澄清钙果酵素饮料。

取4％的PVPP，用20倍的水浸泡溶胀后加入分离出的钙果上清液中搅拌均匀，静置1小时后分离过滤后用于饮料调配，PVPP可以循环使用。

实施例7

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果10份、枸杞1份、叶黄素0.15份、牛磺酸0.15份、蜂蜜1份、果葡糖浆2份、砂糖12份、大豆低聚糖0.6份。

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和步骤2)得到的枸杞汁混合，进行超微化处理，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到2％，调pH值为7.5；

4)将步骤3)得到的浆液中加入大豆低聚糖，灭菌后降温至37℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段补充果葡糖浆，维持固形物含量为2％；发酵30小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为凝结芽孢杆菌，用量为百分之二。

5)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到3.5时终止发酵，室温后酵20天即得钙果酵素原液；益生菌为两歧双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之十。

6)在步骤5)所述的钙果酵素原液中，加入步骤1)分离出的钙果上清液，加入叶黄素、牛磺酸、蜂蜜，用糖浆、砂糖调整可溶性固形物含量达到62％，即得一种功能性钙果酵素。

7)取钙果酵素原液10份，分离出的钙果上清液5份、叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、大豆低聚糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液过滤后可生产出澄清钙果酵素饮料。

实施例8

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果15份、枸杞2份、叶黄素0.5份、牛磺酸0.6份、蜂蜜1份、果葡糖浆2份、砂糖15份、低聚木糖0.5份。

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)新鲜钙果经清洗、灭酶或不灭酶，破碎，加入果胶酶和纤维素酶保温酶解，酶解结束时，加入1-2倍的水，搅拌均匀后静置，分离部分上清液(澄清汁)备用，其量为钙果汁总量的20％；

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和步骤2)得到的枸杞汁混合，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到5％，调pH值7.0；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚木糖，灭菌后降温至38℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，间歇补充果葡糖浆，维持固形物含量为5％；发酵30小时后离心过滤去渣即得钙果酵素原液；益生菌为凝结芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，两菌株等比例使用，用量为百分之二。

5)在钙果酵素原液中加入步骤1)分离出的钙果澄清汁，加入叶黄素、牛磺酸、蜂蜜，用砂糖、糖浆调整酵素原液可溶性固形物含量达到60％，即得一种功能性钙果酵素。

6)取钙果酵素原液10份，钙果上清液5份、叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚木糖2份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液过滤后可生产出澄清钙果酵素饮料。

取4％的PVPP，用20倍的水浸泡溶胀后加入分离出的钙果上清液中搅拌均匀，静置1小时后分离过滤后也可用于饮料调配，PVPP可以循环使用。

实施例9

一种功能性钙果酵素的原料组成为：钙果10份、枸杞1份、叶黄素0.1份、牛磺酸0.4份、蜂蜜1份、果葡糖浆2份、砂糖11份、低聚木糖0.3份。

功能性钙果酵素、酵素饮料的生产方法包含以下步骤：

1)新鲜钙果经清洗、灭酶或不灭酶，破碎，保持果核完整，加入果胶酶和纤维素酶保温酶解3小时，分离去除果核；

3)将步骤1)剩余的钙果果汁和步骤2)得到的枸杞汁混合，调整混合浆液浓度，使上述混合浆液的可溶性固形物含量达到2％，调pH值7.5；

4)将步骤3)得到的浆液中加入低聚木糖，灭菌后降温至37℃，接种益生菌进行通氧、保温发酵，阶段补充果葡糖浆，维持固形物含量为2％；发酵30小时后离心分离得清液和浓缩液，浓缩液经低温干燥制得钙果酵素粉；益生菌为凝结芽孢杆菌，用量为百分之二。

5)清液继续接种益生菌进行密闭发酵，当发酵液ph值达到3.0时终止发酵，室温后酵30天即得钙果酵素原液；益生菌为两歧双歧杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌，各菌种等比例使用，总用量为千分之十。

6)在钙果酵素原液中加入叶黄素、牛磺酸、蜂蜜，加入砂糖、糖浆使可溶性固形物含量达到62％，即得一种功能性钙果酵素。

7)取钙果酵素原液10份，叶黄素1份、牛磺酸1份、甜菊糖1份、低聚木糖1份、蜂蜜适量、果葡糖浆适量，稳定剂适量，纯净水适量；经调配、均质、脱气、杀菌、灌装而成一种功能性钙果酵素饮料。

将钙果酵素原液过滤后可生产出澄清钙果酵素饮料。

实施例10

一种功能性钙果酵素粉的原料组成为：钙果15份、枸杞2份、叶黄素0.5份、牛磺酸0.6份、蜂蜜1份、果葡糖浆2份、甜菊糖0.4份、低聚糖0.5份。

功能性钙果酵素粉的生产方法包含以下步骤：

1)钙果经清洗、去核，破碎，打浆；

2)枸杞清洗后加入5倍的水进行复水，打浆；

3)将钙果果浆和枸杞汁混合，然后用果胶酶和纤维素酶在45-50℃酶解2小时，真空浓缩一倍，加入蜂蜜、果葡糖浆、叶黄素、牛磺酸、低聚糖，灭菌；

4)灭菌后降温至30℃，后接种益生菌进行通氧、保温发酵，益生菌为长双歧杆菌、干酪乳杆菌、凝结芽孢杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌，各菌种等比例使用，总用量为百分之五；

5)发酵25个小时时终止发酵，加入甜菊糖，真空干燥或真空冷冻干燥成钙果酵素粉；

6)由上述钙果酵素粉加工而成钙果片，钙果片包括泡腾片、咀嚼片、含片；

7)上述钙果酵素粉也可以加工成颗粒冲剂、胶囊等产品形式。

实施例11

一种功能性钙果酵素粉的原料组成为：钙果15份、枸杞2份、叶黄素0.5份、牛磺酸0.6份、蜂蜜1份、甜菊糖0.4份、低聚糖0.5份。

功能性钙果酵素粉的生产方法包含以下步骤：

1)钙果经清洗、去核，破碎，打浆；

2)枸杞清洗后加入5倍的水进行复水，打浆；

3)将钙果浆和枸杞浆混合，加入蜂蜜、叶黄素、牛磺酸、低聚糖、甜菊糖后真空干燥或真空冷冻干燥成钙果酵素粉；

4)由上述钙果酵素粉加工而成钙果片，钙果片包括泡腾片、咀嚼片、含片；

5)上述钙果酵素粉也可以加工成颗粒冲剂、胶囊等产品形式。

实施例12

一种功能性钙果酵素粉的原料组成为：钙果15份、枸杞2份、叶黄素0.5份、牛磺酸0.6份、砂糖粉1份、甜菊糖0.4份、低聚糖0.5份。

功能性钙果酵素粉的生产方法包含以下步骤：

1)钙果经清洗、去核，破碎，打浆；

2)枸杞清洗后加入5倍的水进行复水，打浆；

3)将钙果浆和枸杞浆混合，真空干燥或真空冷冻干燥，加入砂糖粉、叶黄素、牛磺酸、低聚糖、甜菊糖后混合均匀即成钙果酵素粉；

上述实施例仅用来进一步说明本发明的技术方案，而非对其进行限制，本发明并不局限于实施例，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单的修改、替换、等同变化与修饰，均落入本发明技术方案的保护范围。

实施例13

对实施例1所得的钙果酵素进行检测，检测结果如下表所示：

其他实施例检测结果与实施例1的检测结果相差不大。

钙果酵素的含钙量高达43.5mg/100g，是苹果的10倍，而且均为生物活性钙，更利于人体吸收。

1985年美国学者波恩(Bone)等人证明人体视网膜黄斑部所存在的色素为叶黄素和玉米黄素的混合物，并未检测出其它的类胡萝卜素。后来另外的科技工作者对眼球晶状体中的类胡萝卜素进行分析，证明晶状体中也只检测出玉米黄质，也未检测出其它的类胡萝卜素。

大量的研究报告了通过叶黄素和玉米黄质膳食补充剂的摄入，血液中相应成分的浓度会升高，视网膜黄斑区的叶黄素和玉米黄质浓度也会增加，即黄斑色素密度(MPOD)升高。所以，人体所需的叶黄素和玉米黄质可以通过膳食来补充。多项研究也表明，人体叶黄素和玉米黄质的营养状况与年龄相关性眼病(如AMD)风险之间存在负相关性，从而明确了叶黄素和玉米黄质起着视力保护成分的作用,进一步证实了提高叶黄素和玉米黄质的摄入量能有效降低AMD等眼病的发展风险，其中最受到广泛关注的研究是由美国国家眼科研究所(NEI)于2006起开展的为期5年的年龄相关性眼病研究2(Age-relatedeyediseasestudy2，AREDS2)。该研究是横跨全美、在80多个地点进行的一项随机试验，其受试者超过4000名，年纪介于50-85岁，且大多数受试者都患有中度AMD。AREDS2是截止到目前为止针对AMD人群测试叶黄素、玉米黄质的有效性的最大型的临床试验研究，目的在于分析补充叶黄素和玉米黄质对于进一步降低AMD和白内障风险的效果，其中叶黄素和玉米黄质的补充摄入量分别为10mg/天和2mg/天。钙果酵素中玉米黄质和叶黄素的含量达到了18.6mg/100g和33.4mg/100g，可作为名目功能成分的有效膳食补充源。

实施例14本发明钙果酵素粉益生性试验

将本发明实施例1制备的钙果酵素粉，用无菌水制备成活菌数为2×10¹⁰CFU/mL的益生菌溶液，于4℃保存备用；

1、取保存好的10mL益生菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10^-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上，迅速摇匀。再将装有10mL益生菌溶液的试管2置于70-80℃水浴锅中加热15-25min，取加热后的益生菌溶液进行十倍逐级稀释至10^-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35℃条件下培养24h，计算加热前后的数量。

结果表明，活菌存活率达到了98％。

2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为1.5、2.5和3.5，取100mL稀盐酸溶液，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取1mL保存好的益生菌溶液加入到9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为98％。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL，分别接种于9mLpH值为6.8的人工肠液中，置于30-45℃静置培养2-4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99％。

3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成1g/L的溶液，并在溶液中加入0.8％的猪胆盐，用10％的NaOH调整pH为8.0，然后用0.45μm微滤膜过滤并除菌。将0.5mL保存好的益生菌溶液接种到4.5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10^-8，并用MRS倾注，然后置于35℃静置培养24h。结果表明活菌存活率为99％。

以上试验结果表明，本发明钙果酵素粉中的益生菌益生性(耐热性、耐pH性、耐胆盐)较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠功能。

需要说明的是：本发明实施例2-10制备的钙果酵素粉及其固体同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例15本发明钙果酵素对机体免疫力的影响

1实验目的

通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，验证本发明钙果酵素的提高免疫力、抗疲劳作用。

2实验材料与试剂

2.1供试样品试样：

市售酵素(G1)；市售水果酵素(G2)；本发明实施例1-9制备的钙果酵素(G3-G12)。

2.2试剂：

肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸(AR)，南京化学试剂有限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。

3.实验动物

ICR小鼠，♂，清洁级，体重18-22g，由宁夏医科大学比较医学中心提供，实验期间小鼠自由饮食。

4.主要仪器

铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司；秒表，温度计

5.实验分组

5.1剂量分组及受试样品给予时间：随机将小鼠分为13组，每组10只，第1组至第12组分别给G1～G12的样品试样，第13组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给予受试样品30天。

5.2样品配制：第1组至第12组：称取2.25g样品试样样品，用蒸馏水配至150ml；空白对照组(第13组)：双蒸水150ml。

6.实验方法

6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。

6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。

6.3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。

6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值)

7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值

8.统计方法实验数据用表示，采用t检验进行组间比较

9.实验结果

9.1本发明钙果酵素对小鼠体重的影响

各组小鼠在给予G1～G12样品试样后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G12样品试样均无明显的毒性。实验结果详见表5。

表5负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重()

9.2本发明钙果酵素对小鼠负重游泳时间的影响

经口给予小鼠G1～G12样品试样后，G1～G2样品试样与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明钙果酵素G3～G12样品试样与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2样品试样。结果详见表6。

表6钙果酵素对小鼠负重游泳时间的影响()

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

9.3本发明钙果酵素对小鼠运动前后血乳酸的影响

经口给予小鼠本发明的钙果酵素后，本发明钙果酵素G3～G12样品试样对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，G1～G2样品试样组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P＞0.05)。结果见表7。

表7本发明钙果酵素对小鼠运动前后血乳酸水平的影响()

“*”p<0.05vs空白对照；

9.4本发明钙果酵素对小鼠肝糖原的影响

经口给予小鼠G1～G12样品试样后，G1～G2样品试样与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明钙果酵素G3～G12样品试样与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2样品试样。结果详见表8。

表8本发明钙果酵素对小鼠肝糖原含量的影响()

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

9.5本发明钙果酵素对小鼠血清尿素的影响

经口给予小鼠G1～G12样品试样后，G1～G2样品试样组与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明钙果酵素G3～G12样品试样与与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2样品试样。结果详见表9。

表9本发明钙果酵素对小鼠血清尿素含量的影响()

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

10.实验结论

本实验主要通过小鼠负重游泳实验，同时检测小鼠肝糖原的储备来观察本发明钙果酵素提高免疫力、抗疲劳的效果。初步研究结果显示如下：

1、本发明G3～G12钙果酵素均能延长小鼠负重游泳时间(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2的钙果酵素。

2、生化检测方面显示，本发明G3～G12钙果酵素各剂量组均能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，而其它G1～G2的钙果酵素虽然也能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，但与对照组比较，无统计学差异(P＞0.05)；

3、本发明G3～G12钙果酵素各剂量组均能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2的钙果酵素；

4、高尿酸模型发现，本发明G3～G12钙果酵素能显著降低小鼠游泳后血清中尿素的含量(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2钙果酵素；

11.结论

上述实验证明本发明钙果酵素能显著提高机体免疫力，提高小鼠的体力和耐力，降低小鼠运动后血清中尿素及乳酸的含量，且能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备，有助于缓解运动负荷引起的疲劳；能延长小鼠负重游泳至力竭的时间。

实施例16本发明钙果酵素小鼠肠道性能试验

用本发明实施例2制备的钙果酵素进行试验，实验前对样品进行稀释5倍。

选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18-20g，常规词养。从中随机挑选40只，每天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小鼠，随机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的益生菌溶液0.5ml(2×10¹⁰cfu/ml)/只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对钙果酵素治疗组和自然恢复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表2；每5天测各组小鼠粪便大肠杆菌数量，计算平均数，结果如表3。取小鼠粪便约0.1g，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠(以0.1g粪样加0.5mL稀释液)，稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆菌数。

表2小鼠增重情况

分组	平均始重(g/只)	平均末重(g/只)	平均增长率(％)
				自然恢复组	19.72±1.53	26.41±1.51	33.91^a
治疗组	19.78±1.32	34.58±1.60	74.82^b

表3小鼠粪便中大肠杆菌数的情况

钙果酵素治疗组小鼠体重平均增长率(74.82％)显著高于自然恢复组(33.91％)；饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低83.89％，显著高于自然恢复组(32.21％)，表明本发明钙果酵素中的益生菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道性能。

需要说明的是：本发明实施例1-9制备的钙果酵素及酵素粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

Claims

1.一种功能性钙果酵素、钙果酵素饮料及其生产方法，钙果酵素饮料以钙果酵素生产过程中的产物为原料；钙果酵素的原料组成为：钙果1-30份、枸杞0-5份、叶黄素0-1份、牛磺酸0-1份、低聚糖0-3份、其他辅料若干份，所述钙果酵素及其饮料的生产方法包含以下步骤：

6)将步骤1)分离出的钙果上清液和步骤5)得到的钙果酵素原液混合，然后加入叶黄素、牛磺酸等辅料，溶解混合均匀即得功能性钙果酵素；

2.一种功能性钙果酵素，其特征在于由固、液两部分组成，固体部分为权利要求1的步骤4)制得的钙果酵素粉，液体部分为权利要求1的步骤6)得到的钙果酵素，一个液体包装配备若干个固体小包装组成一个完整的钙果酵素包装，食用时将一定量的液体稀释后加入一个小包装的固体混匀后饮用。

3.根据权利要求1所述的功能性钙果酵素及其钙果酵素饮料的生产方法，其特征在于所述的分离出的钙果上清液进行明胶、蛋清粉或PVPP处理。

4.一种钙果酵素粉，其特征在于所述钙果酵素粉是在权利要求1的步骤4)中制得钙果酵素粉；或由权利要求1所述的钙果酵素原液或钙果酵素经浓缩、干燥而成；也可由权利要求1所述的步骤1)中钙果经清洗、脱核、预热、打浆后经浓缩所得的浓缩钙果汁接种益生菌发酵后，加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后浓缩、干燥而成；也可由权利要求1所述的步骤1)中钙果经清洗、脱核、预热后打浆得到的钙果汁经浓缩，加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后干燥而成；也可由权利要求1所述的步骤1)中钙果经清洗、脱核、预热后打浆所得的钙果汁杀菌后接种益生菌发酵，发酵结束后加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖后浓缩、干燥而成；也可由权利要求1所述的步骤1)中钙果经清洗、脱核、预热后经干燥、粉碎后加入叶黄素、牛磺酸、低聚糖混合均匀而成。

5.一种钙果片，其特征在于所述钙果片是由权利要求4所述的钙果粉加工而成；所述钙果片包括泡腾片、咀嚼片、含片；该钙果粉也可以加工成颗粒冲剂、胶囊等产品形式。

6.根据权利要求1、4所述的功能性钙果酵素、钙果酵素饮料及其生产方法和钙果酵素粉，其特征在于所述的益生菌为青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种(保加利亚乳杆菌)、蜡样芽孢杆菌、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、马克斯克鲁维酵母、乳酸片球菌、戊糖片球菌中的一种或几种。