CN105136966B

CN105136966B - 一种良附丸类制剂的质量检测方法

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Publication number: CN105136966B
Application number: CN201510367381.1A
Authority: CN
Inventors: 卢君蓉; 李文兵; 王世宇; 傅超美; 季宁平; 严鑫; 傅舒
Original assignee: Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2015-06-29
Filing date: 2015-06-29
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2035-06-29
Also published as: CN105136966A

Abstract

本发明公开了一种良附丸类制剂的质量检测方法，本方法是薄层色谱方法，以α‑香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素作为指标成分进行检测的。薄层色谱的展开条件为体积比5：1的石油醚‑乙酸乙酯；薄层板为硅胶GF₂₅₄板。本发明的质量检测方法，可以同时检测出良附丸类制剂中的5种指标性成分，环境适应性高，方法简便，各指标性成分分离良好，为全面检测良附丸类制剂的质量提供了有效保障。

Description

一种良附丸类制剂的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药物质量控制方法技术领域，具体涉及一种良附丸类制剂的质量检测方法。

背景技术

良附丸首载于清·谢元庆之《良方集腋》，是由高良姜、醋香附两味中药等份、粉碎、混合而制成的水泛丸，为治疗寒凝气滞胃脘疼痛的代表制剂，在中医临床应用已有近千年的历史。作为典型的中药复方传统制剂，良附丸药味组成固定，制备工艺简单，临床疗效显著，极具开发的潜力。

作为一种中药复方制剂，良附丸具有多成分、多靶点、多层次、整体作用的特点，但中国药典2010年版一部中仅以α-香附酮作为良附丸指标成分，难以准确、全面地反映制剂的质量，更不能代表其功能与主治。

因此，目前需要一种能全面反映良附丸类制剂质量的检测方法。

发明内容

发明人通过研究发现，α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮可以作为醋香附的指标成分，高良姜素和山柰素可以作为高良姜的指标成分。因此，本发明以α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素5个成分作为质量检测的指标成分。

因此，为解决上述问题，本发明提供了一种良附丸类制剂的质量检测方法，本方法是薄层色谱方法，它包括以下步骤：

(1)取α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素对照品，混合，加甲醇配制成对照品溶液；

(2)将对照品溶液在薄层板上点样，展开剂展开后，取出检视即可，得到α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素的Rf值；所述展开剂为体积比5∶1的石油醚-乙酸乙酯；薄层板为硅胶GF₂₅₄板；

(3)取良附丸类制剂或其粉末，加入甲醇提取，过滤；

(4)将步骤(3)所得滤液挥干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(5)按照步骤(2)的薄层色谱方法进行检测，将薄层板上各斑点的Rf值与α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素对照品的Rf值比对，可知良附丸类制剂的质量情况。

进一步优选地，在步骤(2)中，展开的温度为4-30℃。

进一步优选地，在步骤(2)中，展开的湿度为32％-88％。

进一步优选地，在步骤(2)中，所述点样量为2-10μL，优选为4μL。

进一步优选地，在步骤(2)中，所述检视方法为：将薄层板置紫外光灯254nm下检视；或，向薄层板喷硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点颜色明显，置紫外灯365nm下检视。

进一步优选地，所述硫酸乙醇溶液的浓度为10％。

进一步优选地，所述对照品溶液的浓度为1mg/mL。

进一步优选地，所述步骤(3)的提取是超声提取。

进一步优选地，所述超声提取的时间为30min。

进一步优选地，在步骤(3)中，所述甲醇与良附丸类制剂或其粉末的体积重量比为25∶1mL/g；在步骤(4)中，所述甲醇与良附丸类制剂或其粉末的体积重量比为1∶1mL/g。

进一步优选地，所述良附丸类制剂包括良附丸、良附滴丸或良附软胶囊。

本发明的质量检测方法，可以同时检测出良附丸类制剂中的5种指标性成分(α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素和山柰素)，远大于中国药典2010年版一部中仅以α-香附酮作为良附丸指标成分的检测方法。同时，本发明方法简便，环境适应性高，各指标性成分分离良好，为全面检测良附丸类制剂的质量提供了有效保障。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

在下列附图的对照品薄层色谱图中，从上到下的斑点依次为α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素。

图1为实施例1中的本发明方法在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-5为良附丸样品。

图2为实施例1中的本发明方法在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-5为良附丸样品。

图3为实施例1中的对比例1方法在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-4为良附丸样品。

图4为实施例1中的对比例1方法在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-4为良附丸样品。

图5为实施例1中的对比例2方法在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-4为良附丸样品。

图6为实施例1中的对比例2方法在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-4为良附丸样品。

图7为实施例1中的对比例2方法在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-4为良附丸样品。

图8为实施例1中的对比例2方法在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1为对照品，2-4为良附丸样品。

图9为实施例2中的提取方法考察试验在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1为对照品，2为超声提取法，3为回流提取法。

图10为实施例2中的提取方法考察试验在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1为对照品，2为超声提取法，3为回流提取法。

图11为实施例3中的点样量考察试验在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1-6的点样量依次为1、2、4、6、8、10μL。

图12为实施例3中的点样量考察试验在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1-6的点样量依次为1、2、4、6、8、10μL。

图13-16实施例4中薄层板考察试验在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：图9-12的薄层板依次为青岛海洋、青岛海浪、青岛裕民源、天津思利达的薄层板，1为对照品，2-5为良附丸样品。

图17和18分别实施例4展开温度考察试验在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：图13为4℃下，图14为30℃下，1为对照品，2-5为良附丸样品。

图19为实施例4下各制剂在紫外光灯254nm下的薄层色谱图：1为对照品，2为高良姜对照药材，3为香附对照药材，4-9为良附丸样品，10-12为良附滴丸，13-15为良附软胶囊。

图20为实施例4下各制剂在紫外光灯365nm下的薄层色谱图：1为对照品，2为高良姜对照药材，3为香附对照药材，4-9为良附丸样品，10-12为良附滴丸，13-15为良附软胶囊。

具体实施方式

本发明具体实施方式中的原料、仪器与试剂的来源如下：

KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂，自制硅胶G板)。

良附丸(北京同仁堂制药有限公司)、良附软胶囊(天津太平洋制药有限公司)、良附滴丸(贵州黄果树立爽药业有限公司)；高良姜素(中国药品生物制品检定所，111699-200501)、山柰素(成都曼思特生物科技有限公司，must-12020812)，圆柚酮(美国Sigma公司、10112423)、α-香附酮(江西本草天工科技有限责任公司，1443-080529)、香附烯酮(自制)、香附对照药材(中国药品生物制品检定所，120918-200809)、高良姜对照药材(中国药品生物制品检定所，1263-0301)。

石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯、环己烷、丙酮、甲醇均为分析纯，由成都科龙化工试剂厂提供。

实施例1

1、对照品溶液的制备：取高良姜素、山柰素、圆柚酮、α-香附酮、香附烯酮对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2、供试品溶液制备：取良附丸粉末1g，加甲醇25mL，超声处理30min，滤过，将滤液挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

3、薄层色谱条件：

展开剂：石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(5∶1)；

薄层板：硅胶GF₂₅₄板；

点样量：供试品溶液、对照品溶液各4μL；

温度为22℃，相对湿度为58％。

4、检视：置紫外光灯254nm下检视，结果如图1所示，各指标成分斑点明显，分离良好；再喷以10％硫酸乙醇显色，105℃加热至斑点颜色明显，置紫外灯365nm下检视，结果如图2所示，各指标成分斑点明显，分离良好。

对比例1

2、供试品溶液制备：取良附丸粉末1g，加甲醇25mL，超声处理30min，滤过，滤液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

3、薄层色谱条件：

展开剂：环己烷-丙酮(3∶1)；

薄层板：硅胶GF₂₅₄板；

点样量：供试品溶液、对照品溶液各4μl；

温度为22℃，相对湿度为58％。

4、检视：置紫外光灯(254nm)下检视，结果如图3所示，各指标成分斑点不明显，分离较差；再喷以10％硫酸乙醇显色，105℃加热至斑点颜色明显，置紫外灯(365nm)下检视，结果如图4所示，各指标成分，斑点不明显，分离较差。

对比例2

按照实施例1的方法，区别在于展开剂为石油醚-乙酸乙酯＝3∶1，其他条件不变，结果如图5和图6所示。

可以看出，在该条件下，α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮未能成功分离开。

对比例3

按照实施例1的方法，区别在于展开剂为石油醚-乙酸乙酯＝7∶1，其他条件不变，结果如图7和图8所示。

可以看出，在该条件下，高良姜素、山柰素展距太小，未能完全分开。

通过对比可知，本发明的方法较之对比例的方法，待检测5个成分Rf值适中，主要显色斑点清晰且分离度较好，且灵敏度高，方法稳定，重现性好。

实施例2提取方法考察

取良附丸粉末1g，加甲醇25mL，分别考察回流提取和超声2种提取方法，提取时间为30min，滤过，滤液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液，薄层色谱条件和检视方法同实施例1，结果如图9和图10所示。

结果表明，两种提取方法中主要斑点均较清晰。由于超声提取法操作更为简单、方便，故本发明优选超声提取法法作为供试品制备方法。

实施例3点样量考察

按照实施例1的方法，取同一硅胶GF254薄层板，分别考察1、2、4、6、8、10μL的点样量。结果如图11和图12所示。

结果表明，供试品溶液点样量为2-10μL时斑点的清晰度和分离度都较好，其中最佳点样量为4μL。

实施例4耐用性考察

1、不同厂家薄层板的考察

按照实施例1的方法，选取青岛海浪、青岛海洋、青岛裕民源、天津思利达薄层板，结果如图13-16所示。

结果表明，本发明方法对不同品牌的薄层板适应性较好，均能达到鉴别要求。

2、不同温度的考察

按照实施例1的方法，取点样后的薄层板，在相对湿度(RH)54％的条件下，分别在4℃和30℃的温度环境下进行展开，结果如图17和18所示。

结果表明，本发明方法对不同温度的适应性较好，均能达到鉴别要求。

3不同湿度的考察

按照实施例1的方法，取点样后的薄层板，在25℃的条件下，分别在32％和88％的湿度环境下进行展开。

结果表明，本发明方法对不同湿度的适应性较好，均能达到鉴别要求。

4、不同批良附丸及其制剂的考察

取样品12批，按实施例1方法进行实验，结果如图19和图20所示。

结果表明，供试品色谱图中，在与对照药材和和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。说明本发明方法稳定性高，重现性好，可以对良附丸及其各种试剂进行有效检测。

综上所述，本发明的质量检测方法，可以同时检测出良附丸类制剂中的5种指标性成分(α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素和山柰素)，远大于中国药典2010年版一部中仅以α-香附酮作为良附丸指标成分的检测方法。同时，本发明方法简便，环境适应性高，各指标性成分分离良好，为全面检测良附丸类制剂的质量提供了有效保障。

Claims

1.一种良附丸类制剂的质量检测方法，其特征在于：所述方法是薄层色谱方法，它包括以下步骤：

(2)将对照品溶液在薄层板上点样，展开剂展开后，取出检视即可，得到α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮、高良姜素、山柰素的Rf值；所述展开剂为体积比5：1的石油醚-乙酸乙酯；薄层板为硅胶GF₂₅₄板；

(3)取良附丸类制剂的粉末，加入甲醇提取，过滤；

2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：在步骤(2)中，展开的温度为4-30℃。

3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：在步骤(2)中，展开的湿度为32％-88％。

4.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述点样量为2-10μL，

5.根据权利要求4所述的质量检测方法，其特征在于：所述点样量为4μL。

6.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述检视方法为：将薄层板置紫外光灯254nm下检视；

或，向薄层板喷硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点颜色明显，置紫外灯365nm下检视。

7.根据权利要求6所述的质量检测方法，其特征在于：所述硫酸乙醇溶液的浓度为10％。

8.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：所述对照品溶液的浓度为1mg/mL。

9.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：所述步骤(3)的提取是超声提取。

10.根据权利要求1-9任意一项所述的质量检测方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述甲醇与良附丸类制剂或其粉末的体积重量比为25:1mL/g；在步骤(4)中，所述甲醇与良附丸类制剂或其粉末的体积重量比为1:1mL/g。