CN105125592A - 一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法，所述蟾酥脂溶物，其中蟾毒灵、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基三种成分的重量之和大于蟾酥脂溶物总重量的50％；本发明的蟾酥脂溶物的制备方法如下：将蟾酥药材粉碎后加入药材5～50倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干后得干燥提取物，将提取物加入5～30倍量的纯化水超声混悬后，用5～50倍量的氯仿萃取。本发明还提供一种药物组合物及其制备方法，所述的药物组合物为蟾酥提取物脂质微球口服溶液剂，用于消化道肿瘤的治疗。

Description

一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切的说它是一种含蟾酥脂溶物的提取方法，及其脂质微球口服溶液剂。

背景技术

近年来，癌症逐渐成为新世纪人类的第一杀手。根据世界卫生组织(WHO)报道，目前全球有2460万癌症患者；到2020年，估计将达到3000万。2005年有760万人死于癌症，死亡人数占全世界5800万人口的13％，到2020年，癌症每年将造成1000多万人死亡。2005年中国的癌症死亡人数近190万，其中的120万人寿命低于70岁。专家预计，到2020年因患癌症而死亡的人数将超过400万。

癌性疼痛是癌症患者最常见且难以控制的症状，也是影响患者生活质量的重要因素。应用“三阶梯药物止痛法”控制癌痛的方案，疗效虽然比较确切，但长期使用镇痛剂毒副作用大，成瘾性、依赖性强，并受患者耐受性的限制，致使部分病人止痛效果欠佳。

中医药在肿瘤治疗领域中有其独特的功效。蟾酥在我国有长期内服或外敷治疗癌症的历史，并取得了良好的临床效果。药效学研究表明，蟾酥主要用于治疗消化系统肿瘤，如肝癌、胃癌、结肠癌、食管癌等，其抗癌活性比目前临床使用的紫杉醇、阿霉素和喜树碱等抗癌药强十倍，甚至百倍，并且无副作用，这无疑为消化系统肿瘤的治疗提供了更好的选择。蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍BufoBufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍BufomelanostictusSchneide等的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥而成。性甘辛，温，有毒。能解毒，消肿，强心，止痛。治疗疮，痈疽，发背等症。研究证实蟾酥抗癌止痛有效成分为多脂溶性化合物，其中酯蟾毒配基、蟾毒灵、华蟾酥毒基含量较多，活性较强。

现有研究只是针对蟾酥原料药或者简单的蟾酥醇提物进行研究，制剂中有效成分的浓度低，临床需用体积量大，这给患者带来了很大的不便，限制了临床使用。同时因为中药成分复杂，制剂中含有的其它杂质可能会对有效成分本身起到增加或减弱药效的作用。因此，本发明提供了一种蟾蜍配基脂溶性成分的提取方式，其中酯蟾毒配基、蟾毒灵、华蟾酥毒基含量大于50％。

目前临床上被批准使用的蟾酥注射液为水针剂，其主要成分为吲哚类生物碱。而大量的研究结果表明蟾酥脂溶性成分的抗肿瘤活性较强，主要为蟾蜍二烯内酯类化合物，其较大的生物毒性严重制约了其临床应用，开展以减少蟾酥及其药效成分生物毒性为目的的新型制剂研究具有重要意义。

很多研究者从多角度研究改良药物剂型，使其在发挥药理作用的同时，减低毒副作用。目前已见研究报道的蟾酥相关制剂包括透皮吸收制剂、微球、β-环糊精包合物、注射液、片剂、胶囊剂、固体脂质纳米粒等，但是上述制剂在开发过程中由于难于工业化生产、安全性低、毒性高、药效差等不同的因素均未实现最终的产业化。

现有研究绝大部分是针对蟾酥原料药或者简单的蟾酥醇提物进行研究，制剂中有效成分的浓度低，临床需用体积量大，这给患者带来了很大的不便，限制了临床使用。同时因为中药成分复杂，制剂中含有的其它杂质可能会对有效成分本身起到增加或减弱药效的作用。因此，中药制剂有效成分的纯度需要提高。

为减少蟾酥脂溶性提取物及单体的毒性和刺激性，CN1985851A专利提供了一种含有蟾酥提取物的脂质微球注射液。有效降低蟾酥脂溶性提取物或其单体的毒性及刺激性，但蟾酥脂质纳米粒和脂质微球注射液均为注射用乳液，对辅料要求比较高，油相辅料中不可避免的存在甾醇，容易引发毒副反应，存在成本较高，安全性较差的缺点。

本发明提供一种蟾蜍配基脂溶性成分的口服乳剂，其优点在于：1、采用制剂手段将药物包裹于O/W型乳剂的内油相中，避免对消化道直接刺激。2、由于其特定粒径范围，影响在体内初步分布，避免有效成分被心脏摄取而降低毒性，同时提高药物瘤体内浓度。3、可采用一般符合药用要求的油相，对油相中的甾醇没有限制，更适合工业化生产；4、在给患者提供必要营养的同时，由于其油相中一定量甾醇，对患者胆固醇水平及康复有益。5、由于其毒副作用的降低，对于增加剂量发挥更大的抗肿瘤效果有益，这对于肿瘤的治疗具有重大意义。6、在发挥抗肿瘤具有辅助镇痛、提供营养作用，更符合肿瘤患者治疗多方位需求，对肿瘤治疗具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蟾酥脂溶物的制备方法，并进一步提供以所制备的蟾酥脂溶物作为活性成分的药物组合物。

为此，本发明提供一种蟾酥脂溶物，其中蟾毒灵、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基三种成分的重量之和大于蟾酥脂溶物总重量的50％。

更进一步的，本发明的蟾酥脂溶物其中含有以下重量百分比的蟾毒灵9.0％～11.0％、华蟾酥毒基13.5％～16.8％、酯蟾毒配基22.5％～27.5％。

本发明的蟾酥脂溶物的制备方法如下：

将蟾酥药材粉碎后加入药材5～50倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干后得干燥提取物，将提取物加入5～30倍量的纯化水超声混悬后，用5～50倍量的氯仿萃取，其中药材的提取和萃取为行业技术人员所公知的技术。

优选的，本发明的蟾酥脂溶物的制备方法如下：

将蟾酥药材粉碎后加入药材5～25倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干后得干燥提取物，将提取物加入5～20倍量的纯化水超声混悬后，用5～40倍量的氯仿萃取。

更优选的，本发明的蟾酥脂溶物的制备方法如下：

将蟾酥药材粉碎后加入药材5～15倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干后得干燥提取物，将提取物加入5～10倍量的纯化水超声混悬后，用5～30倍量的氯仿萃取。

最优选的本发明所述的蟾酥脂溶物，其特征在于，含有蟾毒灵10.3％、华蟾酥毒基16.7％、酯蟾毒配基26.1％。其制备方法，步骤如下：

将蟾酥药材粉碎并过200目筛后得到蟾酥药材细粉，称量细粉，加入5倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干，滤液干燥物置60℃真空干燥箱干燥24h，得到蟾酥提取物，取蟾酥提取物，加入10倍量的纯化水超声混悬1h后，再加入混悬液30倍量的氯仿将提取物萃取，萃取后取有机层将其蒸干，所得干燥物置60℃烘箱中干燥48小时，得到。

本发明进一步提供含有本发明蟾酥脂溶物作为药物活性成分的药物组合物，所述组合物包含蟾酥脂溶物、脂溶性介质、甘油、表面活性剂和水。

本发明所述组合物中的蟾酥脂溶物优选为本发明方法制备的其中含有蟾毒灵、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的蟾酥脂溶物，也可以是市场上购买的蟾酥脂溶物，如来源于蟾酥的蟾酥脂溶物，或者人工合成的蟾酥脂溶物。

典型的，本发明的药物组合物，各组分的重量百分含量如下：

其余为水。

本发明组合物中所述的脂溶性介质指一大类生理可接受性物质，不管是矿物油，植物油，动物油，精油或合成油，或其混合物。因此，脂溶性介质用以指一个宽范围的具有十分不同化学性质的物质。在以类型或功能分类油时，如矿物油源自石油并包含脂肪或蜡基烃，芳香烃或混合的脂肪与芳香基烃。在矿物油类别中也包含石油衍生的油，如精制石蜡油等。在植物油类别中，油主要来源于种子或坚果，并包含干性油如亚麻籽和桐油；半干性油如红花油和大豆油；不干性油如蓖麻油、棉籽油和椰子油及可用作皂类的如棕榈油和椰子油。在动物油类别中，油通常来自作为牛羊脂，猪油和硬脂酸的脂肪。液状动物油包含鱼油，油酸，鲸蜡油等。它们通常含大量脂肪酸。液状动物油包含一些植物油，如橄榄油，棉籽油，谷物油和花生油，也包含一些特殊的鱼油，它们由于富含维生素而被广泛的用作药物，如鳕鱼肝，鲨鱼肝油等。液状脂肪油如单、双、三甘油酯，或其混合物为优选的油。根据本发明，中等链长的三甘油酯也为可用的油，优选为长链脂肪酸甘油酯、中链脂肪酸甘油酯，或其混合物。

本发明组合物中所述的表面活性剂可为任何表面活性剂，包括磷脂，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类，油酸钠，油酸，胆酸，胆酸钠，去氧胆酸，去氧胆酸钠及其混合物。

其中所述磷脂选自卵磷脂，豆磷脂，及其混合物。

所述聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯选自Tween20，Tween40，Tween60，Tween80，Tween85，或其混合物。

本发明优选的表面活性剂选自：卵磷脂，豆磷脂，油酸钠，油酸，Tween80，普朗尼克F-68，或其混合物。

本发明的药物组合物为液体形式的药物制剂，所述制剂包含注射剂、混悬剂、口服溶液剂、擦剂、洗剂、滴鼻剂、滴耳剂、含漱剂、合剂等。优选的本发明的药物组合物为脂质微球口服溶液剂。

本发明优选的脂质微球口服溶液剂配方组成为：

原料	重量百分比
		蟾酥脂溶物	0.2-0.5％
植物油	15-25％
		表面活性剂	1.5-5％
甘油	3-5％
		其余为水

本发明更优选的脂质微球口服溶液剂配方组成为：

原辅料

重量百分比

蟾酥脂溶物	0.2-0.4％
		大豆油	15-25％
蛋黄卵磷脂	1.5-2.5％
		普朗尼克F-68	0.5-0.8％
去氧胆酸	0.1-0.3％
		甘油	3-5％

本发明的脂质微球口服溶液剂的制备方法如下：

将磷脂和蟾酥脂溶物加入到大豆油组成的油相中，加热搅拌至溶解，得到澄清的含药油相，；将普朗尼克F-68、去氧胆酸和甘油加入至适量水中，加热搅拌使溶解，制得水相，在高速分散机的搅拌下，将水相加入到油相中，转速为15000rpm，继续搅拌10min，制得初乳，将初乳用盐酸调节pH值至7-8，用水定容至全量，转移至高压均质机中，以1200bar压力均质，装瓶后即得。

本发明最优选的蟾酥脂溶物是经过筛选获得的，筛选过程请见实施例。

和现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、减少了对消化道直接刺激。

2、降低了毒性。

3、提高了药物的稳定性，收率，纯度以及抗肿瘤效果。

4、具有辅助镇痛、提供营养的作用。

本发明的有益效果考察及数据如下：

一、胃肠道刺激、抗肿瘤效果及毒性的实验考查

本发明参照细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则方法对受试药物蟾蜍脂质微球口服溶液(简称受试药)进行人结肠癌HCT-8瘤株、人胃癌BGC803瘤株裸鼠经给药抑瘤生长作用、胃肠道刺激及毒性进行试验观察。

采用BALB/c-nu裸鼠进行实验。实验设计每次经口灌胃受试药物剂量为2mg/kg，每周经口灌胃给药6次，连续给药3周。另设氟尿嘧啶注射液组(简称阳性药组1)、蟾酥提取物脂质微球注射液(简称阳性药物组2)和肠溶包衣蟾酥微丸(简称阳性药物组3)，计算阳性药物组给药量，每周静脉注射给药2次。连续给药3周。每组各设10只裸鼠。

给药期间每3～4天测量荷瘤裸鼠体重，计算肿瘤增殖率(T/C％)。实验连续观察22-23天。于末次给药后3天分别处死各实验组荷瘤裸鼠，完整剥离瘤及胃肠道组织，称重。

二、镇痛作用实验考查

1.将温控热板以调节在55±0.5℃，放入大烧杯固定。以小鼠放入后至舔后足之间的时间为痛觉反应时间。

2.取雌性小白鼠2只，标记，称重。在给药前，先测试两鼠的痛觉反应时间。取痛反应时间在10～30s内小鼠作为试验用。

3.使用受试药及不同阳性药物组计算给药量分别对小鼠空腹进行给药，在给药后60min测痛觉反应。在测试中，如60s内无痛觉反应，应立即取出，并以60s计。观察小鼠给药前后的表现，并仔细记录结果，计算痛阈提高百分率＝(药后痛觉反应时间-药前痛觉反应时间)/药前痛觉反应时间×100％，痛阈提高百分率越高表明镇痛效果越明显。

实验结果如下：

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

蟾酥药材的提取

将蟾酥药材粉碎并过200目筛后得到蟾酥药材细粉，称量细粉，加入5倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干，滤液干燥物置真空干燥箱(60℃)干燥24h，得到蟾酥提取物。

实施例2

蟾酥药材的提取

将蟾酥药材粉碎并过200目筛后得到蟾酥药材细粉，称量细粉，加入15倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干，滤液干燥物置真空干燥箱(60℃)干燥24h，得到蟾酥提取物。

实施例3

蟾酥药材的提取

将蟾酥药材粉碎并过200目筛后得到蟾酥药材细粉，称量细粉，加入10倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干，滤液干燥物置真空干燥箱(60℃)干燥24h，得到蟾酥提取物。

实施例4

蟾酥提取物萃取

称量蟾酥提取物，加入5倍量的纯化水超声混悬1h后，再加入混悬液5倍量的氯仿将提取物萃取，萃取后取有机层将其蒸干，所得干燥物置烘箱中(60℃)干燥48小时，得到蟾酥萃取物(即本发明所述蟾酥脂溶物)。

实施例5

蟾酥提取物萃取

称量蟾酥提取物，加入8倍量的纯化水超声混悬1h后，再加入混悬液15倍量的氯仿将提取物萃取，萃取后取有机层将其蒸干，所得干燥物置烘箱中(60℃)干燥48小时，得到蟾酥萃取物(即本发明所述蟾酥脂溶物)。

实施例6

蟾酥提取物萃取

称量蟾酥提取物，加入10倍量的纯化水超声混悬1h后，再加入混悬液30倍量的氯仿将提取物萃取，萃取后取有机层将其蒸干，所得干燥物置烘箱中(60℃)干燥48小时，得到蟾酥萃取物(即本发明所述蟾酥脂溶物)。

三、提取效果实验考查

对实施例1-6进行进一步的筛选实验，筛选结果如下：

将实施例1-3的提取物按照实施例4-6的方法进行组合萃取，分别制备成不同的蟾酥脂溶物，测定各组分的含量和三种组分的总含量，测定结果如下表所示：

实施例7

药物组合物

处方：

制备工艺：

1.将处方量的磷脂和蟾酥萃取物加入到大豆油组成的油相中，在60℃条件下加热搅拌至溶解，得到澄清的含药油相，备用；

2.将处方量的普朗尼克F-68、去氧胆酸和甘油加入至适量纯化水中，60℃加热搅拌使溶解，制得水相，备用；

3.在高速分散机的搅拌下，将水相加入到油相中，转速为15000rpm，继续搅拌10min，制得初乳，备用；

4.将初乳用盐酸调节pH值至7.5左右，用纯化水定容至全量，冷却至30℃左右，转移至高压均质机中，以1200bar压力均质15次。

5.装瓶，充氮气，封口，121℃高压灭菌15min，取出后降至室温，即得。

实施例8

药物组合物

处方：

制备工艺：

1.将处方量的磷脂和蟾酥萃取物加入到大豆油组成的油相中，在60℃条件下加热搅拌至溶解，得到澄清的含药油相，备用；

2.将处方量的普朗尼克F-68、去氧胆酸和甘油加入至适量纯化水中，60℃加热搅拌使溶解，制得水相，备用；

3.在高速分散机的搅拌下，将水相加入到油相中，转速为15000rpm，继续搅拌10min，制得初乳，备用；

4.将初乳用盐酸调节pH值至7.5左右，用纯化水定容至全量，冷却至30℃左右，转移至高压均质机中，以1200bar压力均质15次。

5.装瓶，充氮气，封口，121℃高压灭菌15min，取出后降至室温，即得。

实施例9

药物组合物

处方：

制备工艺：

1.将处方量的磷脂和蟾酥萃取物加入到大豆油组成的油相中，在60℃条件下加热搅拌至溶解，得到澄清的含药油相，备用；

2.将处方量的普朗尼克F-68、去氧胆酸和甘油加入至适量纯化水中，60℃加热搅拌使溶解，制得水相，备用；

3.在高速分散机的搅拌下，将水相加入到油相中，转速为15000rpm，继续搅拌10min，制得初乳，备用；

4.将初乳用盐酸调节pH值至7.5左右，用纯化水定容至全量，冷却至30℃左右，转移至高压均质机中，以1200bar压力均质15次。

5.装瓶，充氮气，封口，121℃高压灭菌15min，取出后降至室温，即得。

本发明对辅料进行了筛选，筛选结果显示使用本发明以下配方效果最佳：

原辅料	重量百分比
		蟾酥脂溶物	0.2-0.4％
大豆油	15-25％
		蛋黄卵磷脂	1.5-2.5％
普朗尼克F-68	0.5-0.8％
		去氧胆酸	0.1-0.3％
甘油	3-5％
		其余为水。

四、配方效果实验考查

配方筛选方法是：将不同辅料用相同方法制备的脂质微球口服溶液在恒温箱中40℃放置3个月，测定三种活性组分的总含量，结果如下：

结果显示，本发明效果最优。

Claims (10)

1.一种蟾酥脂溶物，其特征在于，含有蟾毒灵9.0％～11.0％、华蟾酥毒基13.5％～16.8％、酯蟾毒配基22.5％～27.5％。

2.权利要求1所述的蟾酥脂溶物，其特征在于，含有蟾毒灵10.3％、华蟾酥毒基16.7％、酯蟾毒配基26.1％。

3.权利要求1所述的蟾酥脂溶物的制备方法，其特征在于，步骤如下：

将蟾酥药材粉碎后加入药材5～50倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干后得干燥提取物，将提取物加入5～30倍量的纯化水超声混悬后，用5～50倍量的氯仿萃取得到。

4.权利要求2所述的蟾酥脂溶物的制备方法，其特征在于，步骤如下：

将蟾酥药材粉碎并过200目筛后得到蟾酥药材细粉，称量细粉，加入5倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干，滤液干燥物置60℃真空干燥箱干燥24h，得到蟾酥提取物，取蟾酥提取物，加入10倍量的纯化水超声混悬1h后，再加入混悬液30倍量的氯仿将提取物萃取，萃取后取有机层将其蒸干，所得干燥物置60℃烘箱中干燥48小时，得到。

5.含有权利要求1所述蟾酥脂溶物作为药物活性成分的药物组合物，所述组合物包含权利要求1或2的蟾酥脂溶物、脂溶性介质、甘油、表面活性剂和水，其特征在于，各组分的重量百分含量如下：

6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述的脂溶性介质选自矿物油，植物油，动物油，精油或合成油，或其混合物，其中矿物油中包含石油衍生的油，如精制石蜡油等。在植物油中，油主要来源于种子或坚果，包含干性油如亚麻籽和桐油；半干性油如红花油和大豆油；不干性油如蓖麻油、棉籽油和椰子油及可用作皂类的如棕榈油和椰子油，在动物油中，油选自牛羊脂，猪油和硬脂酸的脂肪，液状动物油包含鱼油，油酸，鲸蜡油,中等链长的三甘油酯，长链脂肪酸甘油酯、中链脂肪酸甘油酯，或其混合物。

其中所述的表面活性剂选自：磷脂，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物,普朗尼克F-68，油酸钠，油酸，胆酸，胆酸钠，去氧胆酸，去氧胆酸钠及其混合物；

其中所述磷脂选自卵磷脂，豆磷脂，及其混合物，所述聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯选自Tween20，Tween40，Tween60，Tween80，Tween85，或其混合物。

7.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，为脂质微球口服溶液剂，其配方组成为

原料 重量百分比 蟾酥脂溶物 0.2-0.5％ 植物油 15-25％ 表面活性剂 1.5-5％ 甘油 3-5％ 其余为水。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述脂质微球口服溶液剂配方组成为

原辅料 百分比 蟾酥脂溶物 0.2-0.4％ 大豆油 15-25％ 蛋黄卵磷脂 1.5-2.5％ 普朗尼克F-68 0.5-0.8％ 去氧胆酸 0.1-0.3％ 甘油 3-5％ 其余为水。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述脂质微球口服溶液剂配方组成为

制备工艺：

1)将磷脂和蟾酥脂溶物加入到大豆油组成的油相中，在60℃条件下加热搅拌至溶解，得到澄清的含药油相，备用；

2)将普朗尼克F-68、去氧胆酸和甘油加入至部分纯化水中，60℃加热搅拌使溶解，制得水相，备用；

3)在高速分散机的搅拌下，将水相加入到油相中，转速为15000rpm，继续搅拌10min，制得初乳，备用；

4)将初乳用盐酸调节pH值至7.5左右，用纯化水定容至全量，冷却至30℃左右，转移至高压均质机中，以1200bar压力均质15次，

5)装瓶，充氮气，封口，121℃高压灭菌15min，取出后降至室温，即得；

其中所述蟾酥脂溶物的制备方法如下：

将蟾酥药材粉碎并过200目筛后得到蟾酥药材细粉，称量细粉，加入5倍量的无水乙醇，在60℃水浴中加热回流1h，放冷至室温，抽滤，滤液蒸干，滤液干燥物置60℃真空干燥箱干燥24h，得到蟾酥提取物，取蟾酥提取物，加入10倍量的纯化水超声混悬1h后，再加入混悬液30倍量的氯仿将提取物萃取，萃取后取有机层将其蒸干，所得干燥物置60℃烘箱中干燥48小时，得到。

10.权利要求1-9所述的蟾酥脂溶物或其药物组合物在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用。