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CN105073781A - 牛融合抗体 - Google Patents

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CN105073781A
CN105073781A CN201480014045.2A CN201480014045A CN105073781A CN 105073781 A CN105073781 A CN 105073781A CN 201480014045 A CN201480014045 A CN 201480014045A CN 105073781 A CN105073781 A CN 105073781A
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CN
China
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antibody
domain
ultralong cdr3
immunoglobulin
sequence
Prior art date
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Application number
CN201480014045.2A
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English (en)
Inventor
峰·王
勇·张
彼得·G·舒尔茨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
California Institute for Biomedical Research
Original Assignee
California Institute for Biomedical Research
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Publication date
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Abstract

本文公开了免疫球蛋白构建体，其包含至少一个免疫球蛋白域或其片段；和连接至或插入所述免疫球蛋白域的治疗性多肽或其衍生物或变体。还提供了免疫球蛋白构建体，其包含哺乳动物免疫球蛋白重链，该重链包含在互补决定区3(CDR3H)或其片段中的结域的至少一部分；和连接至或插入CDR3H的治疗性多肽。还提供了免疫球蛋白构建体，其包含哺乳动物免疫球蛋白重链，该重链包含在互补决定区3(CDR3H)或其片段中的茎域的至少一部分；和连接至或插入CDR3H的所述茎域的治疗性多肽。本文还描述了用于治疗和预防受试者中的疾病或状况的包含本文描述的免疫球蛋白构建体的方法和组合物。

Description

牛融合抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年1月11日提交的美国临时申请61/751,598的权益，其通过引用全文并入本文。
背景技术
抗体是脊椎动物免疫系统响应于外来物质(抗原)形成的天然蛋白质，主要用于防御感染。超过一个世纪以来，抗体已经在人工条件下在动物中诱导，并采集用于疾病状况的治疗或诊断，或用于生物学研究。各个单独的抗体产生细胞产生单一类型的具有在化学上确定的组成的抗体，但是，响应于抗原接种从动物血清直接获得的抗体实际上包含由单独的抗体产生细胞的总体形成的不同分子(例如，多克隆抗体)的总体。
一些牛抗体与其它脊椎动物相比具有通常长的VHCDR3序列。例如，大约10％的IgM包含“超长”CDR3序列，其可以长达61个氨基酸的长度。这些不寻常的CDR3通常具有多个半胱氨酸。功能性VH基因通过被称作V(D)J重组的过程形成，其中D-区编码显著比例的CDR3。编码超长序列的独特D-区已经在牛中确定。超长CDR3部分地在牛基因组中编码，并提供了与人相比独特的其抗体所有组成成分的特征。Kaushik等(美国专利6,740,747和7,196,185)公开了若干种对牛独特的、据称可用作探针的牛种系D-基因序列，和据称可用作疫苗载体的牛VDJ盒。
发明内容
在一些实施方案中是一种重组抗体及其片段，其中该重组抗体或其片段的至少一部分是基于或衍生自超长CDR3的至少一部分。
在一些实施方案中是一种抗体或其片段，其包含：(a)第一抗体序列，其中该第一抗体序列的至少一部分衍生自超长CDR3的至少一部分；(b)非抗体序列；和(c)任选地，第二抗体序列，其中该第二抗体序列的至少一部分衍生自超长CDR3的至少一部分。
本文公开的抗体可以是嵌合的、人工程化的或人源化的抗体。本文公开的抗体可以是牛源化的或完全牛抗体。本文公开的抗体可以包含Fab、scFv、dsFv、双抗体(diabody)、(dsFv)2、微抗体(minibody)、柔性微抗体或双特异性片段。本文公开的抗体可以是分离的抗体。
本文公开的抗体可以进一步包含非抗体序列。该非抗体序列可以来源于哺乳动物。该哺乳动物可以是牛、人或非牛哺乳动物。本文公开的抗体可以包含来源于非牛哺乳动物的非抗体序列。该非牛哺乳动物可以是蝎子。该非牛动物可以是蜥蜴。该蜥蜴可以是毒蜥(gilamonster)。该非抗体序列可以衍生自生长因子。该生长因子可以是GCSF、GMCSF或FGF21。该GCSF可以是牛GCSF。或者，该GCSF可以是人GCSF。该GMCSF和/或FGF21可以来自人。该非抗体序列可以衍生自细胞因子。该细胞因子可以是β-干扰素。该非抗体序列可以衍生自激素。该激素可以是艾塞那肽-4(exendin-4)、GLP-1、甲状旁腺素或促红细胞生成素。该GLP-1和/或促红细胞生成素可以来自人。该非抗体序列可以衍生自毒素。该毒素可以是Moka1、Mamba1、Amgen1、550肽或VM-24。该非抗体序列可以衍生自或基于合成肽。该合成肽可以是胃泌酸调节素。该非抗体区可以包含弹力素(elafin)或其片段。该非抗体区可以包含BCCX2或其片段。本文公开的非抗体序列可以替代超长CDR3的至少一部分。本文公开的非抗体序列可以插入超长CDR3的序列中。
本文公开的抗体可以包含基于或衍生自牛超长CDR3的超长CDR3。本文公开的抗体的至少一部分可以来自哺乳动物。本文公开的抗体的第一抗体序列的至少一部分和/或第二抗体序列的至少一部分可以来自哺乳动物。该哺乳动物可以是牛、人或非牛哺乳动物。
本文公开的抗体可以包含3个或更多个氨基酸的长度。本文公开的抗体可以包含基于或衍生自本文公开的超长CDR3的序列。本文公开的抗体可以包含一个或多个基于或衍生自超长CDR3的茎域(stalkdomain)的氨基酸残基。本文公开的抗体可以包含一个或多个基于或衍生自超长CDR3的结域(knobdomain)的氨基酸残基。
本文公开的抗体的至少一部分可以基于或衍生自本文公开的超长CDR3的至少一部分。基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的抗体的该部分可以是20个或更少的氨基酸的长度。基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的抗体的该部分可以是3个或更多个氨基酸的长度。
本文公开的抗体可以包含1个或多个衍生自超长CDR3的茎域的保守基序。所述1个或多个保守基序衍生自茎。所述衍生自超长CDR3的茎域的1个或多个保守基序可以包含本文公开的任何茎域保守基序。所述衍生自超长CDR3的茎域的1个或多个保守基序可以包含在表4中公开的任何茎域保守基序(SEQIDNO:18-47)。
本文公开的超长CDR3的一部分可以包含超长CDR3的茎域的至少一部分、超长CDR3的结域的至少一部分或其组合。
本文公开的抗体可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任意一个的序列。本文公开的抗体可以包含与选自SEQIDNO:18-24和34-37中的任一个的序列50％或更高同源的序列。
本文公开的任何抗体的一部分可以基于或衍生自单个超长CDR3序列的至少一部分。本文公开的抗体的一部分可以基于或衍生自2个或更多个不同超长CDR3序列的至少一部分。
在本文公开的任何实施方案中，所述超长CDR3的部分基于或衍生自BLV1H12超长CDR3序列。所述超长CDR3的部分可以基于或衍生自与BLV1H12超长CDR3序列50％或更高同源的序列。所述超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18超长CDR3序列。所述超长CDR3的部分可以基于或衍生自与BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18超长CDR3序列50％或更高同源的序列。
本文公开的抗体可以包含长度为3个或更多个氨基酸的第一和/或第二抗体序列。衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的一部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的一部分可以是20个或更少的氨基酸的长度。衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的一部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的一部分可以是3个或更多个氨基酸的长度。
在本文公开的任何实施方案中，第一和/或第二抗体序列包含基于或衍生自超长CDR3的茎域的1个或多个氨基酸残基。第一和/或第二抗体序列包含基于或衍生自超长CDR3的结域的1个或多个氨基酸残基。衍生自超长CDR3的结域的1个或多个氨基酸残基可以是丝氨酸和/或半胱氨酸残基。第一和/或第二抗体序列包含1个或多个衍生自超长CDR3的茎域的保守基序。衍生自超长CDR3的茎域的1个或多个保守基序可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。
在本文公开的任何实施方案中，所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:18-24和34-37中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:18-33中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:18-24中的任一个的序列50％或更高同源的序列。
在本文公开的任何实施方案中，所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分包含选自SEQIDNO:34-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:34-37中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以衍生自相同的超长CDR3序列。
在本文公开的任何实施方案中，所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分衍生自两个或更多个不同的超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV1H12超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自与BLV1H12超长CDR3序列50％或更高同源的序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自与BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18超长CDR3序列50％或更高同源的序列。
在本文公开的任何实施方案中，所述超长CDR3是基于或衍生自长度为35个或更多个氨基酸的超长CDR3。所述超长CDR3可以基于或衍生自包含3个或更多个半胱氨酸残基的超长CDR3。
在本文公开的任何实施方案中，所述超长CDR3基于或衍生自包含一个或多个半胱氨酸基序的超长CDR3。所述一个或多个半胱氨酸基序可以选自SEQIDNO:48-102。所述一个或多个半胱氨酸基序可以选自表5中公开的半胱氨酸基序。
本文公开的抗体可以基于或衍生自长度为35个或更多个氨基酸的超长CDR3。本文公开的抗体可以基于或衍生自包含3个或更多个半胱氨酸残基的超长CDR3。本文公开的抗体可以基于或衍生自包含1个或多个半胱氨酸基序的超长CDR3。
本文公开的抗体可以包含长度为35个或更多个氨基酸的超长CDR3。本文公开的抗体可以包含含有3个或更多个半胱氨酸残基的超长CDR3。本文公开的抗体可以包含含有1个或多个半胱氨酸基序的超长CDR3。
在本文公开的任何实施方案中，所述超长CDR3是重链CDR3。所述超长CDR3包含衍生自或基于非人DH序列的氨基酸序列。所述超长CDR3可以包含衍生自或基于JH序列的氨基酸序列。所述超长CDR3可以包含衍生自或基于非人VH序列的氨基酸序列；衍生自或基于非人DH序列的氨基酸序列；和/或衍生自或基于JH序列的氨基酸序列。所述超长CDR3可以包含额外的氨基酸序列，该氨基酸序列包含位于VH衍生的氨基酸序列和DH衍生的氨基酸序列之间的至少大约2个氨基酸残基。
本文公开的任何抗体可以包含基于或衍生自选自SEQIDNO:9-14或108-113的序列的序列，由基于或衍生自SEQIDNO:2-7或103-107中的任一个的DNA序列编码的抗体或其结合片段。本文公开的任何抗体可以包含基于或衍生自选自SEQIDNO:8的序列的序列，由基于或衍生自SEQIDNO:1的DNA序列编码的抗体或其结合片段。
本文公开的任何超长CDR3可以包含基于或衍生自选自SEQIDNO:9-14或108-113的序列的序列。本文公开的任何抗体可以包含基于或衍生自选自SEQIDNO:8的序列的序列。本文公开的任何超长CDR3可以由衍生自或基于SEQIDNO:2-7或103-107的DNA序列编码。本文公开的任何抗体可以包含由衍生自或基于SEQIDNO:1的DNA序列编码的部分。
本文公开的任何抗体可以包含一个或多个接头(linker)。所述一个或多个接头可以包含表3中公开的序列。本文公开的任何抗体可以包含第一接头序列。本文公开的任何抗体可以包含第二接头序列。第一和第二接头序列包含相同的序列。第一和第二接头序列包含不同的序列。第一和/或第二接头序列可以是相同的长度。第一和/或第二接头序列可以是不同的长度。第一和/或第二接头序列可以是3个或更多个氨基酸的长度。
第一和/或第二接头序列可以将非抗体序列连接至基于或衍生自超长CDR3的部分的部分。第一和/或第二接头序列可以将非抗体序列连接至第一抗体序列。第一和/或第二接头序列可以将非抗体序列连接至第二抗体序列。第一和/或第二接头序列可以邻接于非抗体序列、超长CDR3序列的一部分、切割位点序列、抗体序列或其组合。
第一和/或第二接头序列包含一个或多个甘氨酸残基。第一和/或第二接头序列包含2个或更多个连续的甘氨酸残基。第一和/或第二接头序列包含一个或多个丝氨酸残基。第一和/或第二接头序列包含一个或多个极性氨基酸残基。所述一个或多个极性氨基酸残基可以选自丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。该极性氨基酸残基包含不带电荷的侧链。第一和/或第二接头序列包含序列(GGGGS)n，其中n＝1至5；序列GGGSGGGGS；序列GGGGSGGGS；或其组合。
本文公开的任何抗体可以包含一个或多个切割位点。所述一个或多个切割位点包含蛋白酶的识别位点。该蛋白酶可以是因子Xa或凝血酶。所述一个或多个切割位点包含IEGR的氨基酸序列。
所述一个或多个切割位点可以在第一抗体序列和非抗体序列之间。所述一个或多个切割位点可以在第二抗体序列和非抗体序列之间。所述一个或多个切割位点可以在所述一个或多个接头和非抗体序列之间。所述一个或多个切割位点可以在第一抗体序列和所述一个或多个接头之间。所述一个或多个切割位点可以在第二抗体序列和所述一个或多个接头之间。所述一个或多个切割位点可以邻接于非抗体序列、超长CDR3序列的一部分、接头序列、抗体序列或其组合。
在一些实施方案中，是抗体或其结合片段的文库，其中该抗体或其结合片段包含超长CDR3。
在一些实施方案中，是抗体或其结合片段的文库，其中该抗体或其结合片段包含本文公开的任何抗体。
在一些实施方案中，是包含多种多核苷酸的核酸文库，所述多核苷酸包含编码抗体或其结合片段的序列，其中该抗体或其结合片段包含超长CDR3。
在一些实施方案中，是包含多种多核苷酸的核酸文库，所述多核苷酸包含编码抗体或其结合片段的序列，其中该抗体或其结合片段包含本文公开的任何抗体。
在一些实施方案中，是包含编码可变区的核酸序列的多核苷酸，其中该可变区包含超长CDR3。
在一些实施方案中，是包含多核苷酸的载体，其中该多核苷酸包含编码可变区的核酸序列，其中该可变区包含超长CDR3。
在一些实施方案中，是包含多核苷酸的宿主细胞，其中该多核苷酸包含编码可变区的核酸序列，其中该可变区包含超长CDR3。
在一些实施方案中，是包含核酸序列的多核苷酸，该核酸序列编码本文公开的任何抗体的抗体或其结合片段。
在一些实施方案中，是包含多核苷酸的载体，其中该多核苷酸包含核酸序列，该核酸序列编码本文公开的任何抗体的抗体或其结合片段。
在一些实施方案中，是包含多核苷酸的宿主细胞，其中该多核苷酸包含核酸序列，该核酸序列编码本文公开的任何抗体的抗体或其结合片段。
在一些实施方案中，是产生包含超长CDR3或其片段的抗体或其结合片段的方法，该方法包括在一定条件下培养包含多核苷酸的宿主细胞，其中该多核苷酸包含编码本文公开的任何抗体的抗体或其结合片段的核酸序列，在该条件下该多核苷酸序列得到表达并且产生包含超长CDR3或其片段的抗体或其结合片段。该方法可以进一步包括从宿主细胞培养物中回收包含超长CDR3或其片段的抗体或其结合片段。
在一些实施方案中，是包含本文公开的任何抗体的药物组合物。
在一些实施方案中，是一种药物组合物，其含有(a)包含基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的序列的抗体或其片段；和(b)药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，是治疗有需要的受试者中的疾病或状况的方法，该方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的本文公开的任何抗体。在一些情况下，本文公开的抗体包含超长CDR3序列和非抗体序列。在一些情况下，该非抗体序列选自Moka1、Vm24、人GLP-1、艾塞那肽-4、β-干扰素、人EPO、人FGF21、人GMCSF、人干扰素-β、牛GCSF、人GCSF及其衍生物或变体。
所述疾病或状况可以选自自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病、癌症、血液病症、肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。
所述疾病或状况将会受益于离子通道的调节。该离子通道可以选自钾离子通道、钠离子通道或酸敏感离子通道。该离子通道可以选自Kv1.3离子通道、Nav1.7离子通道和酸敏感离子通道(ASIC)。
所述疾病或状况将会受益于受体的调节。该受体可以选自GLP1R、GCGR、EPO受体、FGFR、FGF21R、CSFR、GMCSFR和GCSFR。
所述疾病或状况可以是乳腺炎。
所述受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是牛或人。
在任意或全部以上或以下的公开内容(例如，抗体、用途或方法)或利用包含超长CDR3的抗体的实施方案中，可以使用包含超长CDR3的任意抗体，包括，例如，任意上述包含超长CDR3的抗体。
附图说明
上述发明内容以及下述发明详述当与所附附图一起阅读时可以被更好地理解。为图示本公开内容的目的，在附图中显示了目前优选的实施方案。但是，应该理解，本公开内容并不限于所示的确切的布置、实例和手段。
图1A-1C描绘了显示治疗性多肽插入牛BLV1H12抗体的重链区的超长CDR3区内以设计本文描述的免疫球蛋白构建体的方案。图1A显示了连接至牛BLV1H12抗体的重链区的结域的牛G-CSF的带状图。图1B显示了描绘BLV1H12抗体的草图。图1C显示了描绘插入到免疫球蛋白重链区的超长CDR3区内的治疗性多肽的草图，所述插入可以使用或不使用序列的接头。
图2A-2B描绘了本文公开的BLV1H12融合抗体的Western印迹和SDS-PAGE。图2A显示了BLV1H12与550肽、Amgen1和Mamba1的融合体的收集上清液的Western印迹。图2B显示了纯化的BLV1H12与550、Amgen1和Mamba的融合体的SDSPAGE。
图3显示了BLV1H12-促代谢因子与单GGGGS接头(L1)或双GGGGS接头(L2)的融合蛋白的SDS-PAGE。
图4A显示了BLV1H12-松弛素-2融合蛋白的SDS-PAGE。
图4B显示了松弛素-2蛋白质和BLV1H12-松弛素-2融合蛋白在松弛素受体(LGR7)过表达的细胞系中的体外活性的图。
图5A显示了BLV1H12-hGH融合蛋白的SDS-PAGE。
图5B显示了BLV1H12-hGH融合蛋白在人IM9细胞中的体外活性的图。bIg-β-hGH的体外活性通过STAT5磷酸化确定。
图6A显示了BLV1H12-人干扰素-β融合蛋白的SDS-PAGE。
图6B显示了BLV1H12-人干扰素-β融合蛋白在HEK-BlueIFN-a/b细胞中的体外活性的图。
图7A显示了基于BLV1H12hLeptin的融合蛋白的SDS-PAGE。
图7B显示了hLeptin蛋白质和基于BLV1H12hLeptin的融合蛋白在Leptin受体过表达的细胞系中的体外活性的图。
图8A显示了基于BLV1H12hrelaxin2的融合蛋白的SDS-PAGE。
图8B显示了松弛素-2蛋白质和基于BLV1H12-hrelaxin2的融合蛋白在松弛素受体(LGR7)过表达的细胞系中的体外活性的图。
发明详述
本文公开了改善多肽及其融合蛋白的一种或多种药效学性质的方法。
在一实施方案中，本公开内容提供了包含超长CDR3的至少一部分的抗体。该超长CDR3的部分可以衍生自或基于长度为35个氨基酸或更长(例如，40个或更多、45个或更多、50个或更多、55个或更多、60个或更多)的超长CDR3。
所述超长CDR3的部分可以包含超长CDR3的结域的至少一部分，超长CDR3的茎域的至少一部分，或其组合。该超长CDR3的结域的部分可以包含衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。该衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序可以包含本文中公开的一个或多个半胱氨酸基序。
所述超长CDR3的茎域的部分可以包含衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。
所述超长CDR3的部分可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。所述超长CDR3的部分可以包含4个或更多、6个或更多、8个或更多、9个或更多、10个或更多、11个或更多、12个或更多、13个或更多、14个或更多或15个或更多个半胱氨酸残基。所述抗体可以包含一个或多个半胱氨酸基序。
所述CDR3可以是35个氨基酸的长度或更长。所述超长CDR3可以包含CDR3的结域的至少一部分、CDR3的茎域的至少一部分或其组合。该CDR3的结域的部分可以包含衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。该CDR3的茎域的部分可以包含衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。可替代地，或附加地，所述抗体包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。该抗体可以包含一个或多个半胱氨酸基序。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了包含超长CDR3的抗体，其中该CDR3是35个氨基酸的长度或更长并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，包括，例如，4个或更多个、6个或更多个和8个或更多个。
在一些情况下，本文公开的抗体进一步包含非超长CDR3抗体序列。非超长CDR3抗体序列一般不包含超长CDR3序列。非超长CDR3抗体序列可以包含重链的至少一部分、轻链的一部分或其组合。非超长CDR3抗体肽序列与超长CDR3肽序列的氨基酸序列同一性是大约40％或更少、大约35％或更低、大约30％或更低、大约25％或更低、大约20％或更低、大约15％或更低、10％或更低、大约5％或更低、大约3％或更低或大约1％或更低。
本文公开的抗体的一部分可以衍生自或基于哺乳动物抗体。可替代地，或附加地，本文公开的抗体的一部分可以衍生自或基于非哺乳动物抗体。例如，本文公开的抗体的一部分可以衍生自或基于牛抗体。该抗体可以包含BLV1H12和/或BLVCV1抗体的至少一部分。可替代地，或附加地，该抗体包含BLV5D3、BLV8C11、BF1H1、BLV5B8和/或F18抗体的至少一部分。该抗体可以包含人抗体的至少一部分。该抗体可以是嵌合的、重组的、工程化的、合成的、人源化的、完全人的或人工程化的抗体。可替代地，或附加地，该抗体可以是牛源化的、牛工程化的或完全牛抗体。
所述超长CDR3的部分可以衍生自或基于牛超长CDR3序列。或者，所述超长CDR3序列的部分可以衍生自或基于骆驼或鲨鱼CDR3序列。
本文公开的抗体可以包含来自两种或更多种不同抗体的抗体序列。所述两种或更多种不同抗体可以来自相同的物种。例如，该物种可以是牛物种、人物种或鼠物种。所述两种或更多种不同抗体可以来自相同类型的动物。例如，所述两种或更多种不同抗体可以来自牛。所述两种或更多种不同抗体可以来自人。或者，所述两种或更多种不同抗体可以来自不同的物种。例如，所述两种或更多种不同抗体来自人物种和牛物种。在另一个实例中，所述两种或更多种不同抗体来自牛物种和非牛物种。在另一个实例中，所述两种或更多种不同抗体来自人物种和非人物种。
在一些情况下，本文公开的抗体进一步包含非抗体序列。在一些实施方案中，本文公开的抗体包含超长CDR3的一部分和非抗体序列。该超长CDR3的部分可以包含本文公开的任意超长CDR3或其部分。非抗体序列可以插入到超长CDR3的部分中。非抗体序列可以邻接于超长CDR3的一部分、非牛序列、接头、切割位点或其任意组合。或者，非抗体序列偶联或连接至所述超长CDR3的部分。
在另一个实施方案中，本文公开的抗体包含超长CDR3，其中该超长CDR3包含非抗体序列。
所述非抗体序列可以衍生自任何蛋白质家族，包括但不限于，趋化因子、生长因子、肽、细胞因子、细胞表面蛋白质、血清蛋白质、毒素、细胞外基质蛋白质、凝血因子、分泌性蛋白质等。非抗体序列可以衍生自治疗性多肽。如本文所用，术语“非抗体序列”、“非抗体肽”和“治疗性多肽”可以互换使用。非抗体序列可以是人的。例如，非抗体序列可以衍生自或基于甲状旁腺素。或者，非抗体序列可以是非人起源的。所述非人起源可以是牛、啮齿动物、蛇、蜥蜴、鸟、鱼、龟等。非抗体序列可以基于或衍生自蛇肽。例如，非抗体序列可以包含Mamba1。非抗体序列可以包含合成序列。例如，非抗体序列可以包含胃泌酸调节素、550肽或Amgen1。
非抗体序列可以包含非抗体蛋白质的一部分例如肽或域。超长CDR3的非抗体序列可以包含来自其天然序列的突变，包括氨基酸变化(例如，置换)、插入或缺失。可以在非抗体序列之间的连接处工程构建额外的氨基酸以促进或增强抗体内的非抗体序列的适当折叠。
在一些情况下，本文公开的抗体可以包含基于或衍生自非牛序列的一部分。基于或衍生自非牛序列的部分可以插入超长CDR3的部分中。或者，基于或衍生自非牛序列的部分可以偶联或连接至超长CDR3的部分。基于或衍生自非牛序列的部分可以邻接超长CDR3的部分。
在一些情况下，本文公开的抗体进一步包含非牛序列。在一些实施方案中，本文公开的抗体包含超长CDR3的一部分和非牛序列。该超长CDR3的部分可以包含在本文中公开的任意超长CDR3或其部分。非牛序列可以插入到超长CDR3的部分中。非牛序列可以邻接于超长CDR3的一部分、非抗体序列、接头、切割位点或其任意组合。或者，非牛序列偶联或连接至超长CDR3序列。
非牛序列可以衍生自或基于抗体序列的至少一部分。抗体序列可以编码可变区的至少一部分、恒定区的至少一部分或其组合。
在一些情况下，本文公开的抗体进一步包含一个或多个接头。所述一个或多个接头可以插入超长CDR3的部分中。所述一个或多个接头可以邻接于超长CDR3、非抗体序列、非超长抗体序列、切割位点或其组合。所述一个或多个接头可以包含(GGGGS)n的氨基酸序列，其中n＝1至5。可替代地，或附加地，所述一个或多个接头包含GGGSGGGGS或GGGGSGGGS的氨基酸序列。
在一些情况下，本文公开的抗体与一个或多个靶标结合。该抗体的非抗体序列可以与一个或多个靶标结合。可替代地，或附加地，该抗体的可变区可以与一个或多个靶标结合。该靶标可以是蛋白质靶标。该蛋白质靶标可以是跨膜蛋白质靶标。这样的跨膜靶标可以包括但不限于GPCR、离子通道、转运体和细胞表面受体。
本文提供了一种免疫球蛋白构建体，其包含：哺乳动物免疫球蛋白重链，该免疫球蛋白重链包含互补决定区3(CDR3H)的至少一部分；和治疗性多肽，其中该治疗性多肽插入或替代CDR3H的至少一部分。该免疫球蛋白构建体可以包含一个或多个接头。所述一个或多个接头可以将治疗性多肽连接至重链。在一些实施方案中，该接头包含(GGGGS)n的氨基酸序列，其中n＝1至5。可替代地，或附加地，该接头包含GGGSGGGGS或GGGGSGGGS的氨基酸序列。该治疗性多肽可以是合成肽。该治疗性多肽可以调节受体。该治疗性多肽可以是受体激动剂。或者，该治疗性多肽是受体拮抗剂。该治疗性多肽可以是激素。在一些情况下，该治疗性多肽选自胃泌酸调节素、550肽、Amgen1、Mamba1和甲状旁腺素。本文提供了这样的免疫球蛋白构建体，其包含：哺乳动物免疫球蛋白重链，该哺乳动物免疫球蛋白重链包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的结域；和连接至CDR3H的所述结域的治疗性多肽，其中所述哺乳动物免疫球蛋白是牛免疫球蛋白。在一些实施方案中，该牛免疫球蛋白是BLV1H12抗体。在本文描述的免疫球蛋白构建体的一些实施方案中，结域的至少一部分被治疗性多肽替代。CDR3H的结域可以包含衍生自超长CDR3H的结域的一个或多个保守基序。该免疫球蛋白构建体可以进一步包含CDR3H中的茎域的至少一部分。该CDR3H的茎域的部分可以包含衍生自超长CDR33H的茎域的一个或多个保守基序。
本文还提供了包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的茎域和治疗性多肽的抗体或其片段。在一些情况下，该互补决定区3(CDR3H)衍生自牛超长CDR3H。该治疗性多肽可以是本文公开的治疗性多肽中的任一种。例如，该治疗性多肽是Moka1。在另一个实例中，该治疗性多肽是松弛素。该治疗性多肽可以是人松弛素。该治疗性多肽可以是人松弛素2。该治疗性多肽可以是瘦素。该治疗性多肽可以是人瘦素。该治疗性多肽可以是Vm24。该治疗性多肽可以是GLP-1。该治疗性多肽可以是艾塞那肽-4。该治疗性多肽可以是促红细胞生成素(EPO)。该EPO可以是人EPO。该治疗性多肽可以是FGF21。该FGF21可以是人FGF21。该治疗性多肽可以是GMCSF。该GMCSF可以是人GMCSF。该治疗性多肽可以是干扰素。该干扰素可以是干扰素-α。该干扰素可以是人干扰素。该干扰素可以是干扰素-β。该干扰素-β可以是人干扰素-β。该治疗性多肽可以是生长激素(GH)。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。该治疗性多肽可以是促代谢因子(betatrophin)。该治疗性多肽可以是合成产生的。该治疗性多肽可以是重组多肽。该治疗性多肽可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体或其片段还包含接头。该接头可以将治疗性多肽连接至茎域。可替代地，或附加地，该抗体或其片段还包含CDR3H中的结域的至少一部分。在一些情况下，该接头将治疗性多肽连接至结域。在一些情况下，该结域连接至茎域。CDR3的结域的部分可以包含衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。CDR3的茎域可以包含衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。
在一些情况下，本文提供了一种抗体或其片段。该抗体或其片段可以包含至少一个免疫球蛋白域或其片段；和治疗性多肽或其衍生物或变体。该治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至该免疫球蛋白域。在一些情况下，该治疗性多肽是Moka1、Vm24、GLP-1、艾塞那肽-4、人EPO、人FGF21、人GMCSF、人干扰素-β或其衍生物或变体。在一些实施方案中，该免疫球蛋白域是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，免疫球蛋白域来自嵌合抗体。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自工程化抗体或重组抗体。在其它情况下，该免疫球蛋白域来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。在一些实施方案中，该哺乳动物抗体是牛抗体。在一些实施方案中，该哺乳动物抗体是人抗体。在一些情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。在一些情况下，该免疫球蛋白域是包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的结域的重链区。该治疗性多肽可以连接至结域。可替代地，或附加地，该免疫球蛋白域是包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的茎域的重链区。在一些情况下，该治疗性多肽连接至茎域。在一些情况下，该抗体或其片段还包含接头。该接头可以将治疗性多肽连接至免疫球蛋白域或其片段。CDR3的结域可以包含衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。CDR3的茎域可以包含衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。
本文提供了一种免疫球蛋白构建体，其包含至少一个免疫球蛋白域或其片段；和连接至所述免疫球蛋白域的G-CSF多肽或其衍生物或变体。在一些实施方案中，该免疫球蛋白域是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。在一些实施方案中，该免疫球蛋白域是免疫球蛋白重链区或其片段。在一实施方案中，该免疫球蛋白域来自哺乳动物或嵌合抗体。在其它情况下，该免疫球蛋白域来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。在一些实施方案中，该哺乳动物抗体是牛抗体。在一些情况下，该哺乳动物抗体是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。在一实施方案中，该免疫球蛋白域是包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的结域的重链区。在一实施方案中，G-CSF多肽连接至结域。该免疫球蛋白域可以是包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的茎域的重链区。G-CSF多肽可以连接至茎域。CDR3的结域可以包含衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。CDR3的茎域可以包含衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。
在某些实施方案中，提供了一种免疫球蛋白构建体，其包含至少一个免疫球蛋白域或其片段；和连接至所述免疫球蛋白域的G-CSF多肽或其衍生物或变体，其中所述G-CSF多肽是牛G-CSF多肽或其衍生物或变体。在某些实施方案中，本文提供了包含本文提供的免疫球蛋白构建体和药学上可接受的载体的药物组合物。在某些实施方案中，提供了预防或治疗有需要的哺乳动物中的疾病的方法，包括向所述哺乳动物施用本文描述的药物组合物。所述免疫球蛋白域可以是包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的结域的重链区。所述G-CSF多肽可以连接至结域。所述免疫球蛋白域可以是包含互补决定区3(CDR3H)或其片段中的茎域的重链区。所述G-CSF多肽可以连接至茎域。CDR3的结域可以包含衍生自超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。CDR3的茎域可以包含衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。
在一些实施方案中是一种抗体或其片段，其包含：(a)第一抗体序列，其中第一抗体序列的至少一部分衍生自超长CDR3的至少一部分；和(b)非抗体序列。该抗体或其片段可以进一步包含第二抗体序列，其中第二抗体序列的至少一部分衍生自超长CDR3的至少一部分。可以衍生出第一抗体序列和/或第二抗体序列的超长CDR3来自反刍动物。该反刍动物可以是牛。第一抗体序列的至少一部分和/或第二抗体序列的至少一部分可以来源于哺乳动物。该哺乳动物可以是牛。或者，该哺乳动物是非牛哺乳动物，例如人。第一和/或第二抗体序列可以是3个或更多个氨基酸的长度。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸可以是非连续氨基酸。第一和/或第二抗体序列可以包含在长度上含有3个或更多个氨基酸的牛抗体序列。该牛抗体可以是BLVH12、BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18抗体。第一和/或第二抗体序列可以包含在长度上含有3个或更多个氨基酸的人抗体序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以是20个或更少的氨基酸的长度。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以是3个或更多个氨基酸的长度。第一和/或第二抗体序列可以包含衍生自超长CDR3的结域的1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、30个或更多个或40个或更多个氨基酸残基。所述1个或多个衍生自超长CDR3的结域的氨基酸残基可以是丝氨酸和/或半胱氨酸残基。第一和/或第二抗体序列可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个或10个或更多个衍生自超长CDR3的茎域的氨基酸残基。第一和/或第二抗体序列可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个或5个或更多个衍生自超长CDR3的茎域的保守基序。所述衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:18-24和34-37中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:18-33中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:18-24中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:22-24中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:34-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:34-37中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以衍生自相同的超长CDR3序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以衍生自两个或更多个不同的超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV1H12超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18超长CDR3序列。该抗体可以进一步包含一个或多个接头序列。
本公开内容还提供了包含重链多肽的抗体，其中该重链多肽包含超长CDR3序列的至少一部分。该重链多肽可以包含SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个的多肽序列。该重链多肽可以包含由SEQIDNO:2-7或103-107中的任一个的DNA编码的多肽序列。还提供了包含重链多肽的抗体，其中该重链多肽包含超长CDR3序列，且该重链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的那些多肽序列。在重链多肽序列与由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的核苷酸序列共有60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高的核酸同一性时，可以认为该重链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的多肽序列。该抗体可以进一步包含轻链多肽。该轻链多肽可以包含SEQIDNO:8的多肽序列。该轻链多肽可以包含由基于或衍生自SEQIDNO:1的DNA序列编码的多肽序列。还提供了进一步包含轻链多肽的抗体，其中该轻链多肽包含超长CDR3序列且该轻链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:8提供的那些多肽序列。在轻链多肽序列与由SEQIDNO:1中的任一个提供的核苷酸序列共有60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高的核酸同一性时，可以认为该轻链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:1提供的多肽序列。该抗体可以在动物中具有治疗活性。该抗体可以对受试者中的传染病具有治疗活性。该抗体可以包含单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、重组抗体、工程化抗体或合成抗体。该抗体可以包含哺乳动物抗体。该抗体可以包含牛抗体。该抗体可以包含G-CSF多肽，或其衍生物或变体。该抗体可以包含哺乳动物G-CSF多肽，或其衍生物或变体。该抗体可以包含牛G-CSF，或其衍生物或变体。在一些实施方案中，治疗性制剂的药物组合物包含本文描述的抗体和药学上可接受的载体。在某些实施方案中，该抗体在用治疗有效量的本文描述的抗体或药物组合物治疗有需要的受试者的方法中使用。在一些实施方案中，核酸分子或其互补体编码本文描述的治疗性免疫球蛋白。
遗传序列
本公开内容提供了编码包含超长CDR3序列或其部分的抗体的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸)。本公开内容提供了编码包含结域和/或超长CDR3序列的结域的抗体的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸)。在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码本文描述的抗体或免疫球蛋白构建体的遗传序列。
本公开内容还提供了编码超长CDR3或其部分的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸)。本公开内容还提供了编码结域和/或超长CDR3的结域的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸)。
在一实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列。该超长CDR3可以是35个氨基酸的长度或更长(例如，40个或更长、45个或更长、50个或更长、55个或更长、60个或更长)。该超长CDR3可以包含CDR3的结域的至少一部分、CDR3的茎域的至少一部分或其组合。这样的抗体可以在超长CDR3内包含至少3个或更多个(例如，4个或更多个、6个或更多个、8个或更多个)半胱氨酸残基。该抗体可以包含一个或多个半胱氨酸基序。该抗体可以在超长CDR3内包含非抗体序列。可替代地，或附加地，该抗体包含非牛序列。该抗体可以进一步包含抗体序列。该抗体可以包含细胞毒性剂或治疗性多肽。该细胞毒性剂或治疗性多肽可以偶联至超长CDR3。该抗体可以与靶标结合。该靶标可以是蛋白质靶标，例如跨膜蛋白质靶标。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该CDR3是35个氨基酸的长度或更长，并且衍生自或基于非人序列。编码超长CDR3的遗传序列可以来源于天然产生超长CDR3抗体的任何物种，包括反刍动物如牛(Bostaurus)。或者，超长CDR3序列可以衍生自骆驼或鲨鱼CDR3序列。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该CDR3包含非抗体蛋白质序列。编码非抗体蛋白质序列的遗传序列可以衍生自任何蛋白质家族，包括但不限于趋化因子、生长因子、肽、细胞因子、细胞表面蛋白质、血清蛋白质、毒素、细胞外基质蛋白质、凝血因子、分泌性蛋白质等。非抗体序列可以衍生自治疗性多肽。非抗体蛋白质序列可以是人或非人起源的。非抗体序列可以包含合成序列。非抗体序列可以包含非抗体蛋白质的一部分例如肽或域。超长CDR3的非抗体蛋白质序列可以包含来自其天然序列的突变，包括氨基酸变化(例如，置换)、插入或缺失。可以在非抗体序列之间的连接处工程构建额外的氨基酸以促进或增强抗体内的非抗体序列的适当折叠。该CDR3可以是35个氨基酸的长度或更长。该超长CDR3可以包含CDR3的结域的至少一部分、CDR3的茎域的至少一部分或其组合。可替代地，或附加地，该抗体包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。该抗体可以包含一个或多个半胱氨酸基序。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3和非牛序列的抗体的遗传序列。该超长CDR3可以来源于反刍动物。该反刍动物可以是牛。所述非牛序列可以衍生自或基于非牛哺乳动物序列。例如，非牛序列可以衍生自或基于人、小鼠、大鼠、绵羊、狗和/或山羊序列。非牛序列可以在超长CDR3内。或者，非牛序列连接或附接至超长CDR3序列。非牛序列可以衍生自或基于抗体序列的至少一部分。该抗体序列可以编码可变区、恒定区或其组合。该CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。该超长CDR3可以包含CDR3的结域的至少一部分、CDR3的茎域的至少一部分或其组合。可替代地，或附加地，该抗体包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。该抗体可以包含一个或多个半胱氨酸基序。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该CDR3是35个或更多个氨基酸的长度并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，包括，例如，4个或更多个、6个或更多个和8个或更多个。
在另一实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该CDR3是35个或更多个氨基酸的长度并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，并且其中该超长CDR3是多特异性抗体的组分。该多特异性抗体可以是双特异性的或包含更高的化合价。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该CDR3是35个或更多个氨基酸的长度并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，其中该超长CDR3是免疫偶联物的组分。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该CDR3是35个或更多个氨基酸的长度并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，并且其中该包含超长CDR3的抗体与跨膜蛋白质靶标结合。此类跨膜靶标可以包括但不限于GPCR、离子通道、转运体和细胞表面受体。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列，其中该包含超长CDR3的抗体与跨膜蛋白质靶标结合。此类跨膜靶标可以包括但不限于GPCR、离子通道、转运体和细胞表面受体。该CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。该超长CDR3可以包含CDR3的结域的至少一部分、CDR3的茎域的至少一部分或其组合。可替代地，或附加地，该抗体包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。该抗体可以包含一个或多个半胱氨酸基序。
在另一个实施方案中，本公开内容提供了编码抗体或其片段的遗传序列，该抗体或其片段包含：(a)第一抗体序列，其中该第一抗体序列的至少一部分衍生自超长CDR3的至少一部分；和(b)非抗体序列。该抗体或其片段可以进一步包含第二抗体序列，其中该第二抗体序列的至少一部分衍生自超长CDR3的至少一部分。可以衍生出第一抗体序列和/或第二抗体序列的超长CDR3来自反刍动物。该反刍动物可以是牛。第一抗体序列的至少一部分和/或第二抗体序列的至少一部分可以来源于哺乳动物。该哺乳动物可以是牛。或者，该哺乳动物是非牛哺乳动物，例如人。第一和/或第二抗体序列可以是3个或更多个氨基酸的长度。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。第一和/或第二抗体序列可以包含在长度上含有3个或更多个氨基酸的牛抗体序列。该牛抗体可以是BLVH12、BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18抗体。第一和/或第二抗体序列可以包含在长度上含有3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、30个或更多个、40个或更多个、50个或更多个、60个或更多个或70个或更多个氨基酸的人抗体序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以是20个或更少的氨基酸的长度。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以是3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个或20个或更多个氨基酸的长度。第一和/或第二抗体序列可以包含1个或更多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、30个或更多个或40个或更多个衍生自超长CDR3的结域的氨基酸残基。所述衍生自超长CDR3的结域的1个或多个氨基酸残基可以是丝氨酸和/或半胱氨酸残基。第一和/或第二抗体序列可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个或10个或更多个衍生自超长CDR3的茎域的氨基酸残基。第一和/或第二抗体序列可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个衍生自超长CDR3的茎域的保守基序。所述衍生自超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和/或衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:18-24和34-37中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:18-33中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:18-24中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:22-24中的任一个的序列50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含选自SEQIDNO:34-47中的任一个的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以包含与选自SEQIDNO:34-47中的任一个的序列可以50％或更高同源的序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以衍生自相同的超长CDR3序列。所述衍生自超长CDR3的至少一部分的第一抗体序列的部分和衍生自超长CDR3的至少一部分的第二抗体序列的部分可以衍生自两个或更多个不同的超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV1H12超长CDR3序列。第一和/或第二抗体序列的超长CDR3的部分可以基于或衍生自BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18超长CDR3序列。该抗体可以进一步包含一个或多个接头序列。
本公开内容还提供了分离的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸、寡核苷酸)，例如编码包含重链多肽的抗体的遗传序列，其中该重链多肽包含超长CDR3序列的至少一部分。该重链多肽可以包含SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个的多肽序列。该重链多肽可以包含由SEQIDNO:2-7或103-107中的任一个的DNA编码的多肽序列。还提供了分离的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸、寡核苷酸)，例如编码包含重链多肽的抗体的遗传序列，其中该重链多肽包含超长CDR3序列，且该重链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的那些多肽序列。在重链多肽序列与由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的核苷酸序列共有60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高的核酸同一性，或者在严格杂交条件下与SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个杂交时，可以认为该重链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的多肽序列。该分离的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸、寡核苷酸)，例如编码抗体的遗传序列，可以进一步包含轻链多肽。该轻链多肽可以包含SEQIDNO:8的多肽序列。该轻链多肽可以包含由基于或衍生自SEQIDNO:1的DNA序列编码的多肽序列。还提供了分离的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸、寡核苷酸)，例如编码抗体的遗传序列，其进一步包含轻链多肽，其中该轻链多肽包含超长CDR3序列，且该轻链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:8提供的那些多肽序列。在轻链多肽序列与由SEQIDNO:1中的任一个提供的核苷酸序列共有60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高的核酸同一性，或者在严格杂交条件下与SEQIDNO:1杂交时，可以认为该轻链多肽序列基本类似于由SEQIDNO:1提供的多肽序列。
细胞
本公开内容提供了包含编码含有超长CDR3序列或其部分的抗体的遗传序列的细胞。本公开内容提供了包含编码抗体的遗传序列的细胞，该抗体包含结域的至少一部分或超长CDR3序列的结域的至少一部分。
本公开内容提供了包含编码超长CDR3或其部分的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸)的细胞。本公开内容还提供了包含编码结域和/或超长CDR3的结域的遗传序列(例如，基因、核酸、多核苷酸)的细胞。
在一实施方案中，本公开内容提供了表达包含超长CDR3的抗体的细胞。该细胞可以是原核的或真核的，并且包含超长CDR3的抗体可以在细胞表面上表达或分泌到培养基中。当在细胞表面上展示时，抗体优选包含用于插入到质粒膜内的基序，例如在C-末端的跨膜域或脂质附着位点。对于细菌细胞，包含超长CDR3的抗体可以分泌到周质中。当细胞是真核细胞时，它们可以用编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列瞬时转染。或者，可以通过本领域技术人员公知的方法通过转染或转导编码包含超长CDR3的抗体的遗传序列产生稳定的细胞系或稳定的集合。可以通过荧光激活细胞分选术(FACS)或通过选择编码抗药性的基因来选择细胞。可用于产生包含超长CDR3序列的抗体的细胞包括原核细胞如大肠杆菌、真核细胞如酵母酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)、昆虫细胞(例如，Sf9，Hi5)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、猴细胞如COS-1或人细胞如HEK-293、HeLa、SP-1。
文库方法
本公开内容提供了制备包含含有超长CDR3序列的抗体的文库的方法。空间寻址文库的文库制备方法在WO2010/054007中描述。在酵母、噬菌体、大肠杆菌或哺乳动物细胞中制备文库的方法在本领域中是公知的。
本公开内容还提供了筛选包含超长CDR3序列的抗体的文库的方法。
一般技术
本公开内容依赖于重组遗传学领域中的常规技术。公开了用于本公开内容中的一般方法的基础文本包括Sambrook和Russell,MolecularCloning:ALaboratoryManual3ded.(2001)；Kriegler,GeneTransferandExpression:ALaboratoryManual(1990)；和Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology(1994)。
对于核酸，大小以千碱基(Kb)或碱基对(bp)给出。这些是源自琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳、源自测序的核酸或源自公开的DNA序列的估计值。对于蛋白质，大小以千道尔顿(kD)或氨基酸残基数给出。蛋白质大小由凝胶电泳、由测序的蛋白质、由衍生的氨基酸序列或由公开的蛋白质序列估计。
不能商购的寡核苷酸可以根据首先由Beaucage和Caruthers,TetrahedronLetters,22:1859-1862(1981)描述的固相亚磷酰胺三酯法使用如VanDevanter等,NucleicAcidsRes.,12:6159-6168(1984)中描述的自动合成仪化学合成。寡核苷酸的纯化是通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳或通过如在Pearson和Reanier,J.Chrom.,255:137-149(1983)中描述的阴离子交换色谱法。克隆的基因和合成的寡核苷酸的序列可以在克隆后使用例如Wallace等,Gene,16:21-26(1981)的用于双链模板测序的链终止法来验证。
编码本公开内容的重组多肽的核酸可以克隆至中间载体中，之后转化至原核或真核细胞中用于复制和/或表达。该中间载体可以是原核生物载体如质粒或穿梭载体。
具有超长CDR3序列的抗体
在一实施方案中，鉴别和/或产生牛抗体。存在多种技术来鉴别和/或产生抗体。
本公开内容的抗体可以通过针对具有所需一种或多种活性的抗体对组合文库的筛查(包括高通量筛查)来分离。例如，在本领域中已知用于生成噬菌体展示文库并针对具有所需结合特性的抗体筛查这类文库的多种方法。这类方法在例如Hoogenboom等，MethodsinMolecularBiology178:1-37(O'Brien等编,HumanPress,Totowa,N.J.,2001)中综述，并且例如在McCafferty等,Nature348:552-554；Clackson等,Nature352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,MethodsinMolecularBiology248:161-175(Lo编,HumanPress,Totowa,N.J.,2003)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004)；和Lee等,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)中进一步描述。此类筛查可以是反复的直到获得命中(hit)。
在一些噬菌体展示方法中，VH和VL基因的所有组成成分通过聚合酶链反应(PCR)分开克隆并在噬菌体文库中随机重组，然后可以如在Winter等,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述针对抗原结合噬菌体对该文库进行筛查。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段形式或以Fab片段形式展示抗体片段。来自免疫的来源的文库提供对免疫原的高亲和力抗体，而并不需要构建杂交瘤。牛抗体的噬菌体展示文库可以是包括超长CDR3序列的牛抗体基因序列的来源。
一般而言，对非人抗体进行人源化以减小对人的免疫原性，同时保持亲本非人抗体的特异性和亲和性。通常，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中CDR(或其部分)衍生自非人抗体，FR(或其部分)衍生自人抗体序列。人源化抗体任选地还会包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，在人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，衍生出CDR残基的抗体)的相应残基置换，例如，以便恢复或改善抗体特异性或亲和性。
人源化抗体及其制备方法例如在Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中综述，并且在以下文献中进一步描述，例如：Riechmann等,Nature332:323-329(1988)；Queen等,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA86:10029-10033(1989)；美国专利5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等,Methods36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)嫁接)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“表面重修”)；Dall'Acqua等,Methods36:43-60(2005)(描述“FR改组”)；和Osbourn等,Methods36:61-68(2005)；Klimka等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述通向FR改组的“指导选择”方法)；和Studnicka等,美国专利5,766,886。
可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”法(参见，例如，Sims等.J.Immunol.151:2296(1993))选择的框架区；自轻链或重链可变区特定亚群的人抗体的共有序列衍生的框架区(参见，例如，Carter等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(参见，例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和从筛查FR文库获得的框架区(参见，例如，Baca等,Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
具有超长CDR3序列的抗体还可以在CDR3区中包括非抗体序列，例如细胞因子、治疗性多肽或生长因子。所得抗体可以在治疗或预防疾病或状况方面是有效的。例如，包含超长CDR3的抗体抑制肿瘤转移。在一些实施方案中，该细胞因子、治疗性多肽或生长因子可以显示对至少一个细胞群体具有抗增殖效应。可替代地，或附加地，所得抗体调节靶标(例如，蛋白质靶标、跨膜蛋白质靶标)的表达或活性。例如，包含超长CDR3的抗体抑制或阻断离子通道。非抗体序列可以是激素、淋巴因子、白细胞介素、趋化因子、细胞因子、肽毒素、生长因子及其组合。该生长因子可以是GCSF。该GCSF可以是牛GCSF。该GCSF可以是人GCSF。该生长因子可以是GMCSF，该GMCSF可以是牛GMCSF。该GMCSF可以是人GMCSF。该生长因子可以是GDF11。该生长因子可以是FGF21。该细胞因子可以是干扰素、白细胞介素或基质细胞衍生因子1(SDF-1)。该干扰素可以是干扰素-β。该干扰素可以是干扰素-α。该干扰素可以是λ-干扰素。该白细胞介素可以是白细胞介素8(IL-8)。该白细胞介素可以是白细胞介素10(IL-10)。该白细胞介素可以是白细胞介素11(IL-11)。该白细胞介素可以是白细胞介素21(IL-21)。该激素可以是艾塞那肽-4。该激素可以是GLP-1。该激素可以是松弛素。该松弛素可以是人松弛素。该激素可以是胃泌酸调节素。该激素可以是胰高血糖素样肽1(GLP-1)。该激素可以是艾塞那肽-4。该激素可以是瘦素。该瘦素可以是人瘦素。该激素可以是促代谢因子。该激素可以是牛生长激素(bGH)。该激素可以是人生长激素(hGH)。该激素可以是甲状旁腺素。该激素可以是促红细胞生成素。该激素可以是促生长素抑制素。该激素可以是艾塞那肽。该毒素可以是Moka1。该毒素可以是VM-24。该毒素可以是Mamba1。该毒素可以是Amgen1。该毒素可以是550肽。该毒素可以是原毒素2。该毒素可以是齐考诺肽。该毒素可以是氯毒素。该蛋白质可以是促血管生成素样3(angiopoeitin-like3)(ANGPTL3)。非抗体区可以包含弹力素或其片段。非抗体区可以包含BCCX2或其片段。
本文公开的抗体融合体可以包含基于或衍生自在表13中公开的一个或多个序列的非抗体序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自选自SEQIDNO:114-132的一个或多个序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约50％同源的序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约60％同源的序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约70％同源的序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约80％同源的序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约90％同源的序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约95％同源的序列。
所述非抗体序列可以基于或衍生自包含10个或更多个核苷酸的序列，该核苷酸选自从SEQIDNO:114-132中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含20个或更多个核苷酸的序列，该核苷酸选自从SEQIDNO:114-132中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含50个或更多个核苷酸的序列，该核苷酸选自从SEQIDNO:114-132中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含70个或更多个核苷酸的序列，该核苷酸选自从SEQIDNO:114-132中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含100个或更多个核苷酸的序列，该核苷酸选自从SEQIDNO:114-132中选出的序列。该核苷酸可以是连续的。或者，该核苷酸是不连续的。
本文公开的抗体融合体可以包含基于或衍生自表14中公开的一个或多个序列的非抗体序列。所述非抗体序列可以基于或衍生自选自SEQIDNO:133-151的一个或多个序列。非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约50％同源的序列。非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约60％同源的序列。非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约70％同源的序列。非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约80％同源的序列。非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约90％同源的序列。非抗体序列可以基于或衍生自与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约95％同源的序列。
所述非抗体序列可以基于或衍生自包含10个或更多个氨基酸的序列，该氨基酸选自从SEQIDNO:133-151中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含20个或更多个氨基酸的序列，该氨基酸选自从SEQIDNO:133-151中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含50个或更多个氨基酸的序列，该氨基酸选自从SEQIDNO:133-151中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含70个或更多个氨基酸的序列，该氨基酸选自从SEQIDNO:133-151中选出的序列。非抗体序列可以基于或衍生自包含100个或更多个氨基酸的序列，该氨基酸选自从SEQIDNO:133-151中选出的序列。该氨基酸可以是连续的。或者，该氨基酸是不连续的。
本文公开的抗体可以包含一个或多个基于或衍生自哺乳动物、禽类、爬行动物、两栖动物、鱼、昆虫、臭虫或蛛形纲动物序列的序列。哺乳动物包括但不限于牛、野牛、水牛、人、小鼠、狗、猫、绵羊、山羊或兔。禽类包括但不限于鸡、鹅、鸽(doves)、鹰、麻雀和鸽子(pidgeon)。爬行动物包括但不限于蜥蜴、鳄、蛇和龟。两栖动物包括但不限于青蛙、蝾螈、蟾蜍和水蜥(newts)。鱼包括但不限于金枪鱼、鲑鱼、鲸和鲨鱼。昆虫、臭虫和蛛形纲动物包括但不限于苍蝇、蚊子、蜘蛛和蝎子。非抗体序列可以基于或衍生自牛或人序列。或者，非抗体序列基于或衍生自蜥蜴或蝎子序列。该蜥蜴可以是毒蜥。
在一些实施方案中，非抗体序列连接至超长CDR3序列的末端。例如，非抗体序列可以连接至超长CDR3核苷酸序列的5’末端或3’末端。在另一个实例中，非抗体序列可以连接至超长CDR3肽序列的N-末端或C-末端。
在另一个实施方案中，非抗体序列插入超长CDR3序列内。例如，非抗体序列插入超长CDR3序列的茎域之间。非抗体序列可以插入超长CDR3序列的茎域内。在另一实例中，非抗体序列插入超长CDR3序列的茎域和结域之间。或者，非抗体序列插入超长CDR3序列的结域内。
非抗体序列向抗体区中的插入可以包括替代抗体区包含的抗体或其片段的至少一部分。非抗体区可以替代重链的至少一部分。非抗体区可以替代轻链的至少一部分。非抗体区可以替代可变域的至少一部分。非抗体区可以替代恒定域的至少一部分。非抗体区可以替代互补决定区(CDR)的至少一部分。非抗体区可以替代CDR1的至少一部分。非抗体区可以替代CDR2的至少一部分。非抗体区可以替代CDR3的至少一部分。该CDR可以是超长CDR3。
非抗体序列可以替代超长CDR3序列的至少一部分。非抗体序列可以替代超长CDR3肽序列的大约1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、45个或更多个、50个或更多个、55个或更多个氨基酸。非抗体序列可以替代超长CDR3肽序列的大约10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多。非抗体序列可以替代超长CDR3的结域的至少一部分。非抗体序列可以替代超长CDR3肽序列的结域的大约5个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、45或更多个氨基酸。非抗体序列可以替代超长CDR3肽序列的结域的大约10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多。非抗体序列可以替代超长CDR3的茎域的至少一部分。非抗体序列可以替代超长CDR3肽序列的茎域的大约1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、20个或更多个氨基酸。非抗体序列可以替代超长CDR3肽序列的茎域的大约10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。该超长CDR3可以包含一个或多个保守基序。该保守基序可以是如本文公开的茎域保守基序。或者，该保守基序可以是如本文公开的结域保守基序。
在一些实施方案中，非抗体序列替代超长CDR3序列的至少一部分。非抗体序列可以替代超长CDR3核苷酸序列的大约5个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、40个或更多个、50个或更多个、55个或更多个、60个或更多个、70个或更多个、80个或更多个、90个或更多个、100个或更多个、110个或更多个、120个或更多个、130个或更多个、140个或更多个、150个或更多个、160个或更多个、170个或更多个核苷酸。非抗体序列可以替代超长CDR3核苷酸序列的大约10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多。非抗体序列可以替代超长CDR3的结域的至少一部分。非抗体序列以替代超长CDR3核苷酸序列的结域的大约5个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、40个或更多个、50个或更多个、55个或更多个、60个或更多个、70个或更多个、80个或更多个、90个或更多个、100个或更多个、110个或更多个、120个或更多个、130个或更多个、140或更多个核苷酸。非抗体序列可以替代超长CDR3核苷酸序列的结域的大约10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多。非抗体序列可以替代超长CDR3的茎域的至少一部分。非抗体序列可以替代超长CDR3核苷酸序列的茎域的大约5个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、45个或更多个、50个或更多个、55个或更多个、60个或更多个、65个或更多个、70个或更多个核苷酸。非抗体序列可以替代超长CDR3核苷酸序列的茎域的大约10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多。该核苷酸可以是连续核苷酸。或者，该核苷酸是非连续核苷酸。该超长CDR3可以包含一个或多个保守基序。该保守基序可以是如本文公开的茎域保守基序。或者，该保守基序可以是如本文公开的结域保守基序。
包含超长CDR3序列和非抗体序列的抗体可以进一步包含在超长CDR3序列和非抗体序列之间的一个或多个切割位点。所述一个或多个切割位点可以在非抗体肽序列的N-末端的前面。例如，切割位点在非抗体肽序列的N-末端处和在超长CDR3肽序列的C-末端处插入。或者，所述一个或多个切割位点在非抗体肽序列的C-末端的后面。例如，切割位点在非抗体肽序列的C-末端处和在超长CDR3肽序列的N-末端处插入。所述一个或多个切割位点可以位于非抗体肽序列的N-末端和C-末端两者的侧翼。所述一个或多个切割位点可以位于非抗体核苷酸序列的上游。例如，所述一个或多个切割位点可以在非抗体核苷酸序列的5’末端和超长CDR3核苷酸序列的3’末端处。所述一个或多个切割位点可以位于非抗体核苷酸序列的下游。例如，所述一个或多个切割位点可以在非抗体核苷酸序列的3’末端和超长CDR3核苷酸序列的5’末端处。所述一个或多个切割位点可以位于非抗体核苷酸序列的5’末端和3’末端两者的侧翼。所述一个或多个切割位点可以直接位于非抗体序列的侧翼。例如，在切割位点序列和非抗体序列之间有0个核苷酸或氨基酸。或者，所述一个或多个切割位点可以间接位于非抗体序列的侧翼。例如，在切割位点核苷酸序列和非抗体核苷酸序列之间有一个或多个核苷酸。在切割位点核苷酸序列和非抗体核苷酸序列之间可以有2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、12个或更多个、15个或更多个、20个或更多个核苷酸。在另一个实例中，在切割位点肽序列和非抗体肽序列之间存在一个或多个氨基酸。在切割位点肽序列和非抗体肽序列之间可以存在2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、12个或更多个、15个或更多个、20个或更多个氨基酸。切割位点可以邻接于基于或衍生自超长CDR3序列、接头序列、非抗体序列、非牛序列或其组合的序列。切割位点可以在基于或衍生自超长CDR3序列的序列和接头序列之间。切割位点可以在基于或衍生自超长CDR3序列的序列和非抗体序列之间。切割位点可以在接头序列和非抗体序列之间。切割位点可以是蛋白酶的切割位点。该蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。该蛋白酶可以包括但不限于因子Xa蛋白酶、胰凝乳蛋白酶样蛋白酶、胰蛋白酶样蛋白酶、弹性蛋白酶样蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶样蛋白酶、猕猴桃蛋白酶(actinidain)、菠萝蛋白酶、钙蛋白酶、胱天蛋白酶、组织蛋白酶、Mir1-CP、木瓜蛋白酶、HIV-1蛋白酶、凝乳酶、肾素、组织蛋白酶D、胃蛋白酶、疟原虫天冬氨酸蛋白酶(plasmepsin)、猪笼草素(nepenthesin)、金属外肽酶(metalloexopeptidase)和金属内肽酶。切割位点可以是因子Xa或凝血酶的切割位点。例如，切割位点可以包含IEGR的氨基酸序列。或者，切割位点是核酸酶的切割位点。包含超长CDR3序列和非抗体序列的抗体可以被一种或多种蛋白酶切割。一种或多种蛋白酶切割抗体可以导致非抗体肽的一个或多个末端从抗体的超长CDR3区释放。例如，抗体的切割导致非抗体肽的N-末端从超长CDR3区释放。或者，抗体的切割导致非抗体肽的C-末端从超长CDR3区释放。
所述非抗体序列可以通过一个或多个接头连接至超长CDR3序列。非抗体序列可以插入超长CDR3序列内。在一些情况下，使用两个或更多个接头将非抗体序列连接至超长CDR3序列。所述两个或更多个接头可以包含相同的序列。或者，所述两个或更多个接头包含不同的序列。所述一个或多个接头序列可以是相同的长度。所述一个或多个接头序列可以是不同的长度。所述一个或多个接头序列可以是3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个或10个或更多个氨基酸的长度。所述一个或多个接头序列可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个或10个或更多个甘氨酸残基。所述一个或多个接头序列可以包含2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个连续甘氨酸残基。所述一个或多个接头序列可以包含1个或多个丝氨酸残基。所述一个或多个接头序列可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个或5个或更多个极性氨基酸残基。该极性氨基酸残基可以选自丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。该极性氨基酸残基可以包含不带电荷的侧链。接头可以连接至非抗体肽序列的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端两者。接头可以连接至非抗体核苷酸序列的5’-末端、3’-末端或5’-末端和3’末端两者。在一些实施方案中，接头可以包含氨基酸残基。示例性氨基酸接头组分包括二肽、三肽、四肽或五肽。示例性二肽包括：缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。示例性三肽包括：甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。或者，接头包含(GGGGS)n(SEQIDNO:17)的氨基酸序列，其中n＝1至5。接头可以包含GGGSGGGGS(SEQIDNO:15)或GGGGSGGGS(SEQIDNO:16)的氨基酸序列。构成氨基酸接头组分的氨基酸残基包括天然存在的氨基酸以及次要氨基酸和非天然存在的氨基酸，包括类似物，如瓜氨酸。可以在其对于被特定酶，例如肿瘤相关蛋白酶、组织蛋白酶B、C和D或纤溶酶蛋白酶的酶切的选择性方面设计并优化氨基酸接头组分。
超长CDR3可以基于或衍生自单个超长CDR3序列。或者，超长CDR3是基于或衍生自两个或更多个超长CDR3序列。所述两个或更多个超长CDR3序列可以来自相同的动物。或者，所述两个或更多个超长CDR3序列是来自两种或更多种不同的动物。
超长CDR3可以包含超长CDR3的茎域的至少一部分。本文公开的抗体可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个或10个或更多个衍生自或基于超长CDR3的茎域的氨基酸。本文公开的抗体可以包含20个或更少、19个或更少、18个或更少、17个或更少、16个或更少、15个或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少或2个或更少的衍生自或基于超长CDR3的茎域的氨基酸。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。本文公开的抗体可以包含与超长CDR3的茎域的序列50％或更高、60％或更高、70％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、97％或更高、99％或更高或100％同源的序列。该超长CDR3可以包含衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序。本文公开的抗体可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个或5个或更多个衍生自或基于超长CDR3的茎域的保守基序。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含选自SEQIDNO:18-47中的任一个的序列。本文公开的抗体可以包含与选自SEQIDNO:18-24和34-37中的任一个的序列50％或更高、60％或更高、70％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、97％或更高、99％或更高或100％同源的序列。本文公开的抗体可以包含与选自SEQIDNO:22-24中的任一个的序列50％或更高、60％或更高、70％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、97％或更高、99％或更高或100％同源的序列。
所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含CT(T/S)VHQ基序。或者，所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序包含CT(T/S)VHQXn基序。N可以是1至8、1至7、1至6、1至5、1至4或1至3。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含CX1X2X3X4Q基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。X3可以是V或K残基。X4可以是H、K或Y残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含X1X2VHQ基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含CX1X2VHQ基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含X1X2VX3Q基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。X3可以是H、Y或K残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含CX1X2VX3Q基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。X3可以是H、Y或K残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含X1X2KKQ基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含CX1X2KKQ基序。X1可以是T、S、A或G残基。X2可以是T、S、A、P或I残基。
所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含YX1YX2基序。X1可以是T、S、N或I残基。X2可以是E或D残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含YX1YX2Y基序。X1可以是L、S、T或R残基。X2可以是T、S、N或I残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含YX1YX2YX3基序。X1可以是L、S、T或R残基。X2可以是T、S、N或I残基。X3可以是E或D残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含YX1YX2YX3X4基序。X1可以是L、S、T或R残基。X2可以是T、S、N或I残基。X3可以是E或D残基。X4可以是H、W、N、F、I或Y残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含Y(E/D)X基序。X可以是H、W、N、F、I或Y残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含XY(E/D)基序。X可以是T、S、N或I残基。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含Y(E/D)X1XnW基序。X1可以是H、W、N、F、I或Y残基。N为1至4、1至3或1至2。所述衍生自或基于超长CDR3的茎域的一个或多个保守基序可以包含Y(E/D)X1X2X3X4X5W基序。X1可以是H、W、N、F、I或Y残基。X2可以是Y、H、G或N残基。X3可以是V、I或A残基。X4可以是D、N、T或E残基。X5可以是A、V、S或T残基。
本文公开的抗体可以包含选自SEQIDNO:18-33中任一个的衍生自或基于超长CDR3的茎域的第一保守基序和选自SEQIDNO:34-47中任一个的衍生自或基于超长CDR3的茎域的第二保守基序。本文公开的抗体可以包含选自CT(T/S)VHQXn、CX1X2X3X4Q、X1X2VHQ、CX1X2VHQ、X1X2VX3Q、CX1X2VX3Q、X1X2KKQ和CX1X2KKQ的衍生自或基于超长CDR3的茎域的第一保守基序和选自YX1YX2、YX1YX2Y、YX1YX2YX3、YX1YX2YX3X4、Y(E/D)X、XY(E/D)、Y(E/D)X1XnW和Y(E/D)X1X2X3X4X5W的衍生自或基于超长CDR3的茎域的第二保守基序。
所述超长CDR3可以包含超长CDR3的结域的至少一部分。本文公开的抗体可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个或10个或更多个衍生自或基于超长CDR3的结域的氨基酸。本文公开的抗体可以包含20个或更少、19个或更少、18个或更少、17个或更少、16个或更少、15个或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少或2个或更少的衍生自或基于超长CDR3的结域的氨基酸。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。本文公开的抗体可以包含与超长CDR3的结域的序列50％或更高、60％或更高、70％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、97％或更高、99％或更高或100％同源的序列。该超长CDR3可以包含衍生自或基于超长CDR3的结域的一个或多个保守基序。本文公开的抗体可以包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个或5个或更多个衍生自或基于超长CDR3的结域的保守基序。所述衍生自或基于结域的一个或多个保守基序可以包含如本文公开的半胱氨酸基序。可替代地，或附加地，所述衍生自或基于结域的一个或多个保守基序包含C(P/S)DG基序。
本文公开的抗体可以包含基于或衍生自哺乳动物的序列。该哺乳动物可以是牛。或者，该哺乳动物是非牛哺乳动物，例如人。抗体序列可以是3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、45个或更多个、50个或更多个、55个或更多个、60个或更多个、65个或更多个、70个或更多个、80个或更多个、90个或更多个、100个或更多个、110个或更多个、120个或更多个、130个或更多个、140个或更多个、150个或更多个、160个或更多个、170个或更多个、180个或更多个、190个或更多个、200个或更多个、220个或更多个、230个或更多个、240个或更多个、250个或更多个、260个或更多个、270个或更多个、280个或更多个、290个或更多个或300个或更多个氨基酸的长度。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。
抗体序列可以包含在长度上含有3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、45个或更多个、50个或更多个、55个或更多个、60个或更多个、65个或更多个、70个或更多个、80个或更多个、90个或更多个、100个或更多个、110个或更多个、120个或更多个、130个或更多个、140个或更多个、150个或更多个、160个或更多个、170个或更多个、180个或更多个、190个或更多个、200个或更多个、220个或更多个、230个或更多个、240个或更多个、250个或更多个、260个或更多个、270个或更多个、280个或更多个、290个或更多个或300个或更多个氨基酸的牛抗体序列。该牛抗体可以是BLVH12、BLV5B8、BLVCV1、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1或F18抗体。抗体序列可以包含在长度上含有3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、45个或更多个、50个或更多个、55个或更多个、60个或更多个、65个或更多个、70个或更多个、80个或更多个、90个或更多个、100个或更多个、110个或更多个、120个或更多个、130个或更多个、140个或更多个、150个或更多个、160个或更多个、170个或更多个、180个或更多个、190个或更多个、200个或更多个、220个或更多个、230个或更多个、240个或更多个、250个或更多个、260个或更多个、270个或更多个、280个或更多个、290个或更多个或300个或更多个氨基酸的人抗体序列。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。
基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的抗体序列可以是20个或更少、19个或更少、18个或更少、17个或更少、16个或更少、15个或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少或5个或更少的氨基酸的长度。基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的抗体序列可以是3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个或15个或更多个氨基酸的长度。该氨基酸可以是连续氨基酸。或者，该氨基酸是非连续氨基酸。
基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的抗体序列可以在其基于或衍生自的超长CDR3的核苷酸序列中包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、50个或更多个、60个或更多个、70个或更多个、80个或更多个、90个或更多个或100个或更多个核酸修饰或改变。该修饰和/或改变可以包括置换、缺失和/或插入。置换可以包括用另一种核酸替代一种核酸。该核酸可以是天然核酸或非天然核酸。
基于或衍生自超长CDR3的至少一部分的抗体序列可以在其基于或衍生自的超长CDR3的肽序列中包含1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、35个或更多个、40个或更多个、50个或更多个或60个或更多个核酸修饰或改变。该修饰和/或改变可以包括置换、缺失和/或插入。置换可以包括用另一种氨基酸替代一种氨基酸。将被置换的氨基酸可以包含一个或多个与取代其的氨基酸相似的特征。该特征可以包括但不限于大小、极性、疏水性、酸性、侧链和键形成。该氨基酸可以是天然氨基酸或非天然氨基酸。
双特异性抗体
双特异性抗体可以是单克隆的、优选人或人源化的、具有针对至少两种不同抗原的结合特异性的抗体。例如，结合特异性之一可以针对第一抗原，而另一个可以针对任何其它抗原。示例性双特异性抗体可以与同一蛋白质的两个不同表位结合。双特异性抗体还可以用于将细胞毒性剂定位于表达特定蛋白质的细胞。这些抗体具有对特定蛋白质为特异性的结合臂和结合细胞毒性剂(例如，皂草素、抗干扰素-α、长春花生物碱、蓖麻毒素A链、氨甲蝶呤或放射性同位素半抗原)的臂。双特异性抗体可以被制备为全长抗体或抗体片段(例如，F(ab')2双特异性抗体)。
制备双特异性抗体的方法在本领域中是已知的。传统上，双特异性抗体的重组产生是基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两个重链具有不同的特异性(Milstein和Cuello,Nature,305:537(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadromas))产生10种不同抗体分子的潜在混合物，其中仅一种具有正确的双特异性结构。正确分子的纯化(其通常通过亲和色谱法步骤进行)是相当麻烦的，且产物产率很低。相似的程序在WO93/08829和Traunecker等,EMBOJ.,10:3655(1991)中公开。
多价抗体
多价抗体可以比二价抗体更快地被表达抗体所结合的抗原的细胞内在化(和/或分解代谢)。本公开内容的抗体可以是具有三个或更多个抗原结合位点(例如，四价抗体)的多价抗体(其不同于IgM类别)，其可以通过编码抗体的多肽链的核酸的重组表达而产生。多价抗体可以包含二聚化域和三个或更多个抗原结合位点。优选的二聚化域可以包含Fc区或铰链区(或由Fc区或铰链区组成)。在此情况下，抗体将包含Fc区和位于Fe区的氨基末端的三个或更多个抗原结合位点。优选的多价抗体可以包含三个至大约八个，但优选四个抗原结合位点(或由三个至大约八个，但优选四个抗原结合位点组成)。多价抗体包含至少一个多肽链(优选两个多肽链)，其中该多肽链包含两个或更多个可变域。例如，多肽链可以包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变域，VD2是第二可变域，Fc是Fc区的一个多肽链，X1和X2表示氨基酸或多肽，n是0或1。例如，多肽链可以包含：VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。多价抗体可以优选地进一步包含至少两个(优选四个)轻链可变域多肽。多价抗体可以，例如，包含大约两个至大约八个轻链可变域多肽。该轻链可变域多肽可以包含轻链可变域，且任选地，还包含CL域。
抗体变体
在一些实施方案中，考虑如本文描述的包含超长CDR3的抗体的氨基酸序列修饰。例如，改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学性质可能是期望的。通过将合适的核苷酸改变引入抗体核酸中，或通过肽合成，制备抗体的氨基酸序列变体，包括，例如，保守修饰的变体。这样的修饰包括，例如，抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或置换。进行缺失、插入和置换的任意组合以获得最终构建体，只要最终构建体具有所需的特性。可以在制备序列时将氨基酸改变引入主题抗体氨基酸序列中。
抗体衍生物
如本文公开的包含超长CDR3的抗体可以进一步经修饰以包含在本领域中已知并容易获得的额外非蛋白质部分。优选地，适于抗体的衍生化的部分是水溶性聚合物。该水溶性聚合物的非限制实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三氧杂环己烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化的多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性可以在生产上具有优势。聚合物可以具有任何分子量，并可以是分支的或非分支的。连接至抗体的聚合物的数目可以变化，并且如果连接多于一个聚合物，它们可以是相同或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可以基于包括但不限于待改善的抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否会在限定的条件下用于治疗等考虑因素来确定。
载体、宿主细胞和重组方法
为了重组产生如本文公开的抗体或其片段，将其编码核酸分离并插入用于进一步克隆(DNA的扩增)或用于表达的可复制载体中。使用常规程序(例如，通过使用寡核苷酸探针，其能够特异性结合编码抗体的重链和轻链的基因)容易地分离编码抗体的DNA并对其测序。在示例性实施方案中，将编码包含超长CDR3的抗体、包含超长CDR3的可变区或超长CDR3的核酸分离并插入用于进一步克隆(DNA的扩增)或用于表达的可复制载体中。许多载体是可获得的。载体的选择部分地取决于待使用的宿主细胞。通常，优选的宿主细胞是原核或真核(通常是哺乳动物)起源的。应当理解，任何同种型的恒定区可以用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定区，并且此类恒定区可以从任意人或动物物种获得。
含有来自真核病毒的调节元件的表达载体一般用于真核表达载体，例如SV40载体、乳头瘤病毒载体和来源于EB病毒的载体中。其它示例性真核载体包括pMSG、pAV009/A+、pMTO10/A+、pMAMneo-5、杆状病毒pDSVE和任何其它载体，所述任何其它载体允许在CMV启动子、SV40早期启动子、SV40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳房肿瘤病毒启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、多角体蛋白启动子或对在真核细胞中的表达显示有效的其它启动子的指导下的蛋白质的表达。
一些表达体系具有提供基因扩增的标记，例如胸苷激酶和二氢叶酸还原酶。或者，利用在多角体蛋白启动子或其它强杆状病毒启动子的指导下的编码部分人超长CDR3抗体链的核酸序列，不涉及基因扩增的高产率表达体系也是合适的，例如在昆虫细胞中使用杆状病毒载体。
工程化的杂交瘤
杂交瘤细胞可以如下生成：将产生所需抗体的B细胞与永生化细胞系，通常是骨髓瘤细胞系融合，以使所得融合细胞成为分泌特定抗体的永生化细胞系。通过相同的原理，骨髓瘤细胞可以首先用编码种系抗体V区的核酸转染，并可以针对种系V区的表达进行筛查。具有最高水平的蛋白水解轻链表达的那些骨髓瘤细胞随后可以与产生具有所需靶蛋白质特异性的抗体的B细胞融合。融合细胞会产生两种类型的抗体：一种是包含有效连接至重组种系V区(重链或轻链)的内源抗体链(重链或轻链)的异源抗体，另一种是亲本B细胞将分泌的相同抗体(例如，内源重链和轻链两者)。有效连接的异源重链和轻链可以通过常规方法如色谱法分离，并且可以通过靶蛋白质结合试验、鉴别种系多肽的独特标签的试验或在本公开内容的其它部分描述的内肽酶活性试验证实鉴别。在其中异源抗体是两种类型的抗体中在量上占主导的类型的一些情况下，可以不需要这样的分离。杂交瘤，包括牛杂交瘤，可以是包括超长CDR3序列在内的牛抗体基因序列的来源。
转基因哺乳动物
可以将编码本公开内容的种系抗体多肽的核酸序列引入非人哺乳动物中以产生表达该种系抗体多肽的转基因动物。不同于更常见的转基因动物模型，由本公开内容的转基因哺乳动物表达的转基因不需要在体细胞重组后替代负责抗体链可变区的内源编码序列的至少一个等位基因。由于等位基因排斥，外源、体细胞重排后形式的种系V区DNA的存在将会抑制体细胞重排前V小基因的内源等位基因经历体细胞重排及帮助此哺乳动物可以产生的抗体链的组成。因此，当暴露于特定抗原时，哺乳动物会产生包含一个内源重排的抗体链和一个先验(apriori)重排的转基因基因的异源抗体。这样的异源抗体在研究和治疗活的受试者中的特定状况方面是无价的。在另一方面，引导转基因整合至内源等位基因的基因座的方法也将完全用于实施本公开内容的目的。
产生转基因动物的一般方法已经良好地建立并频繁使用。关于生成转基因动物和用于遗传操作的相关方法的综述和方案，参见，例如Mansour等,Nature336:348-352(1988)；Capecchi等,TrendsGenet.5:70-76(1989)；Capecchi,Science244:1288-1292(1989)；Capecchi等,CurrentCommunicationsinMolecularBiology,pp45-52,Capecchi,M.R.(ed.),ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989)；Frohman等,Cell56:145-147(1989)；Brinster等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:4438-4442(1985)；Evans等,Nature292:154-156(1981)；Bradley等,Nature309:255-258(1984)；Gossler等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA83:9065-9069(1986)；Robertson等,Nature322:445-448(1986)；JaenischScience240:1468-1474(1988)；和Siedel,G.E.,Jr.,"Criticalreviewofembryotransferprocedureswithcattle”inFertilizationandEmbryonicDevelopmentinVitro,page323,L.Mastroianni,Jr.andJ.D.Biggers,ed.,PlenumPress,NewYork,N.Y.(1981)。
本公开内容的示例性转基因动物是小鼠，也可以使用相同的一般方法产生许多其它转基因动物。这些动物包括但不限于：兔、绵羊、牛和猪(JaenischScience240:1468-1474(1988)；Hammer等,J.Animal.Sci.63:269(1986)；Hammer等，Nature315:680(1985)；Wagner等,Theriogenology21:29(1984))。
药物组合物
本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体可以配制成组合物，尤其是药物组合物。具有包含超长CDR3的抗体的此类组合物包含治疗或预防有效量的本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体与合适的载体，例如药学上可接受的试剂的混合物。一般而言，本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体在配制成药物组合物前充分纯化以供施用。
用于本药物组合物中的药学上可接受的盐、赋形剂或载体包括载体、赋形剂、稀释剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂、调味剂和稀释剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、填充剂、膨胀剂、缓冲液、递送载体、张度剂、共溶剂、润湿剂、络合剂、缓冲剂、抗微生物剂和表面活性剂。
中性缓冲盐水或混有血清白蛋白的盐水是示例性的合适的载体。药物组合物可以包含抗氧化剂如抗坏血酸；低分子量多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、糊精；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐平衡离子如钠；和/或非离子型表面活性剂如吐温(Tween)、普朗尼克(pluronics)或聚乙二醇(PEG)。还举例来说，合适的张度增强剂包括碱金属卤化物(优选氯化钠或氯化钾)、甘露糖醇、山梨糖醇等。合适的防腐剂包括苯扎氯铵、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸等。过氧化氢也可以用作防腐剂。合适的共溶剂包括甘油、丙二醇和PEG。合适的络合剂包括咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟基-丙基-β-环糊精。合适的表面活性剂或润湿剂包括失水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯如聚山梨醇酯80、氨基丁三醇、卵磷脂、胆固醇、四丁酚醛(tyloxapal)等。缓冲液可以是常规缓冲液如乙酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或Tris-HCl。乙酸盐缓冲液可以是大约pH4-5.5，而Tris缓冲液可以是大约pH7-8.5。另外的药剂在Remington'sPharmaceuticalSciences,18thEdition,A.R.Gennaro,ed.,MackPublishingCompany,1990中阐述。
所述组合物可以是液体形式或是冻干或冷冻干燥形式，并可以包含一种或多种冻干保护剂、赋形剂、表面活性剂、高分子量结构添加剂和/或膨胀剂(参见，例如，美国专利6,685,940、6,566,329和6,372,716)。在一个实施方案中，包括冻干保护剂，其为非还原糖如蔗糖、乳糖或海藻糖。通常包含的冻干保护剂的量使得，经重建，所得制剂将是等渗的，尽管高渗或略微低渗的制剂也可能是合适的。此外，冻干保护剂的量应足以防止蛋白质在冻干时不可接受的程度的降解和/或聚集。预冻干制剂中的糖(例如，蔗糖、乳糖、海藻糖)的示例性冻干保护剂浓度为大约10mM至大约400mM。在另一个实施方案中，包括表面活性剂，例如，非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂如聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；聚(乙二醇)苯基醚(例如，Triton)；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠(sodiumoctylglycoside)；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基(cocamidopropyl)-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如，月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油基牛磺酸钠或甲基油酰基(ofeyl)牛磺酸二钠；和MONAQUATTM系列(MonaIndustries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇，和乙二醇和丙二醇的共聚物(例如，普朗尼克(Pluronics)、PF68等)。可以存在于预冻干制剂中的表面活性剂的示例量为大约0.001-0.5％。高分子量结构添加剂(例如，填充剂、粘合剂)可以包括，例如，阿拉伯胶、白蛋白、藻酸、磷酸钙(二碱式)、纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、糊精、葡萄糖结合剂、蔗糖、侵填体(tylose)、预胶化淀粉、硫酸钙、直链淀粉、甘氨酸、膨润土、麦芽糖、山梨糖醇、乙基纤维素、磷酸氢二钠、磷酸二钠、焦亚硫酸二钠、聚乙烯醇、明胶、葡萄糖、瓜尔胶、液体葡萄糖、可压缩糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精、聚环氧乙烷、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮、藻酸钠、黄耆胶、微晶纤维素、淀粉和玉米醇溶蛋白。高分子量结构添加剂的示例浓度为0.1重量％至10重量％。在其它实施方案中，可以包括膨胀剂(例如，甘露糖醇、甘氨酸)。
组合物可以适合于肠胃外给药。示例性组合物适合于通过技术人员可用的任何途径注射或输注到动物中，该途径例如是关节内、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、肌肉内、眼内、动脉内或病灶内途径。肠胃外制剂通常是无菌的、无热原的、等渗的水溶液，任选地含有药学上可接受的防腐剂。
非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏(Ringers’)右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格氏右旋糖的那些，等等。还可以存在防腐剂和其它添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。总体上参见Remington'sPharmaceuticalScience,16thEd.,MackEds.,1980。
本文描述的药物组合物可以以提供产物的局部浓度(例如，团注、贮库型(depot)效果)和/或提高在特定局部环境中的稳定性或半衰期的方式配制用于控制的或持续的递送。该组合物可以包括以下成分的制剂：本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体，与聚合化合物如聚乳酸、聚乙醇酸等的特定制品，以及诸如可生物降解的基质、可注射微球、微囊颗粒、微囊、可生物蚀解的颗粒珠、脂质体等试剂，和提供活性剂的控制或持续释放的可植入递送装置，其随后可以作为贮库型注射剂递送。用于配制此类持续或控制递送装置的技术是已知的，并且已经开发和使用了多种聚合物用于药物的控制释放和递送。这类聚合物一般是可生物降解的和生物相容的。聚合物水凝胶，包括通过对映体聚合物或多肽片段的复合而形成的聚合物水凝胶，以及具有温度或pH敏感性质的水凝胶，由于参与捕获生物活性蛋白剂(例如，包含超长CDR3的抗体)的温和和水性条件，可以是提供药物贮库型效果所期望的。参见，例如，WO93/15722中用于递送药物组合物的控制释放多孔聚合物微粒的描述。
用于此目的的合适的材料包括聚交酯(参见，例如美国专利3,773,919)，聚-(a-羟基羧酸)的聚合物，如聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP133,988A)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等,Biopolymers,22:547-556(1983))、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等,J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277(1981)，和Langer,Chem.Tech.,12:98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯或聚-D(-)-3-羟基丁酸。其它可生物降解的聚合物包括聚(内酯)、聚(缩醛)、聚(原酸酯)和聚(原碳酸酯)。持续释放组合物还可以包含脂质体，其可以通过本领域已知的若干种方法中的任一种(参见，例如，Eppstein等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-92(1985))制备。载体本身或其降解产物在靶组织内应是无毒的并且不应进一步加剧病状。这可以在目标病症的动物模型中，或者如果此类模型无法获得，则在正常动物中，通过常规筛查来确定。
用于持续释放的重组蛋白的微囊化已经使用人生长激素(rhGH)、干扰素-(rhIFN-)、白细胞介素-2和MNrgp120成功地进行。Johnson等,Nat.Med.,2:795-799(1996)；Yasuda,Biomed.Ther.,27:1221-1223(1993)；Hora等,Bio/Technology.8:755-758(1990)；Cleland,"DesignandProductionofSingleImmunizationVaccinesUsingPolylactidePolyglycolideMicrosphereSystems,"inVaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach,PowellandNewman,eds,(PlenumPress:NewYork,1995),pp.439-462；WO97/03692，WO96/40072，WO96/07399；和美国专利5,654,010。由于其生物相容性和宽范围的可生物降解性质，使用聚-乳酸-共-乙醇酸(PLGA)聚合物开发这些蛋白质的持续释放制剂。PLGA的降解产物乳酸和乙醇酸可以在人体内快速清除。而且，此聚合物的可降解性可以取决于其分子量和组成。Lewis,"Controlledreleaseofbioactiveagentsfromlactide/glycolidepolymer,"in:M.ChasinandR.Langer(Eds.),BiodegradablePolymersasDrugDeliverySystems(MarcelDekker:NewYork,1990),pp.1-41。持续释放组合物的其它实例包括，例如，EP58,481A，美国专利3,887,699，EP158,277A，加拿大专利1176565，U.Sidman等,Biopolymers22,547[1983]，R.Langer等,Chem.Tech.12,98[1982]，Sinha等,J.Control.Release90,261[2003]，Zhu等,Nat.Biotechnol.18,24[2000]，和Dai等,ColloidsSurfBBiointerfaces41,117[2005]。
也考虑生物粘附性聚合物用于本公开内容的组合物中或与本公开内容的组合物一起使用。生物粘附性材料是能够附着到生物基底上延长的时间段的合成的和天然存在的材料。例如，卡波姆(Carbopol)和聚卡波非都是聚(丙烯酸)的合成交联衍生物。基于天然存在的物质的生物粘附性递送系统包括例如透明质酸，也称为乙酰透明质酸(hyaluronan)。透明质酸是由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-葡糖胺的残基组成的天然存在的粘多糖。透明质酸见于脊椎动物的细胞外组织基质中，包括结缔组织中，以及滑液中和眼的玻璃体液和房水中。透明质酸的酯化衍生物已经用于产生用于递送的生物相容和可生物降解的微球(参见，例如，Cortivo等,Biomaterials(1991)12:727-730；EP517,565；WO96/29998；Illum等,J.ControlledRel.(1994)29:133-141)。本公开内容的包含透明质酸的示例性组合物以包含超长CDR3的抗体与透明质酸聚合物之比为大约0.1％至大约40％(w/w)的量包含透明质酸酯聚合物。
可生物降解和不可生物降解的聚合物基质均可用于递送本公开内容的组合物，并且这些聚合物基质可以包含天然或合成聚合物。可生物降解的基质是优选的。释放发生所经过的时间段取决于聚合物的选择。通常，经过数小时至3到12个月的时间段的释放是最理想的。可以用于形成可生物降解的递送系统的示例性合成聚合物包括：乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酰胺、聚碳酸酯、聚亚烷基、聚亚烷基二醇、聚环氧烷、聚对苯二甲酸亚烷基酯、聚乙烯醇、聚乙烯基醚、聚乙烯基酯、聚乙烯基卤化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙交酯、聚硅氧烷、聚酐、聚氨酯及其共聚物、聚(丁酸)、聚(戊酸)、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、乙酸纤维素、丙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三乙酸纤维素、硫酸纤维素钠盐、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)、聚(乙烯醇)、聚乙酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。示例性天然聚合物包括藻酸盐和其它多糖，包括葡聚糖和纤维素、胶原、其化学衍生物(化学基团如烷基、亚烷基的取代、添加，羟基化，氧化，和本领域技术人员常规进行的其它修饰)、白蛋白和其它亲水性蛋白质、玉米醇溶蛋白和其它谷醇溶蛋白和疏水性蛋白质、其共聚物和混合物。通常，这些材料通过酶水解或在体内暴露于水，通过表面或本体溶蚀而降解。聚合物任选地是水凝胶的形式(参见，例如WO04/009664，WO05/087201，Sawhney等,Macromolecules,1993,26,581-587)，该水凝胶可以吸收高达其在水中的重量的大约90％，并进一步任选地与多价离子或其它聚合物交联。
递送系统还包括是脂质的非聚合物体系，该脂质包括甾醇如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；水凝胶释放体系；硅橡胶体系；肽基体系；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压缩片剂；部分融合的植入物；等等。具体的实例包括但不限于：(a)溶蚀体系，其中产物以一种形式包含在基质中，例如在美国专利4,452,775、4,675,189和5,736,152中描述的那些，和(b)扩散体系，其中产物以受控的速率从聚合物中透过，例如在美国专利3,854,480、5,133,974和5,407,686中所描述的。包含产物的脂质体可以通过已知的方法制备，例如(DE3,218,121；Epstein等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-3692(1985)；Hwang等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4030-4034(1980)；EP52,322；EP36,676；EP88,046；EP143,949；EP142,641；JP83-118008；美国专利4,485,045和4,544,545；和EP102,324)。
可替代地，或附加地，所述组合物可以通过向患区中植入本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体已经吸附或包封于其上的膜、海绵或其它合适的物质而局部施用。当使用植入装置时，该装置可以植入到任何合适的组织或器官中，并且本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体的递送可以经由团注或经由连续施用或经由使用连续输注的导管通过该装置直接进行。
包含本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体的药物组合物可以配制用于吸入，例如作为干粉。也可以在液化推进剂中配制吸入溶液以供气雾剂递送。在又另一种制剂中，溶液可以雾化。用于肺给药的其它药物组合物包括例如在WO94/20069中描述的那些，该申请公开了化学修饰的蛋白质的肺递送。对于肺递送，颗粒大小应适于递送至肺远侧。例如，颗粒大小可以是1μm至5μm；但是，可以使用较大的颗粒，例如，如果每个颗粒是相当多孔的话。
一些含有本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体的制剂可以口服施用。以此方式施用的制剂可以与或不与在固体剂型如片剂和胶囊的配混中惯常使用的那些载体一起配制。例如，可以将胶囊设计成在胃肠道中的某点释放制剂的活性部分，这时生物利用度最大化且系统前降解最小化。可以包括另外的试剂以促进选择性结合剂的吸收。还可以使用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。
另一种制剂可以包含与适于片剂制造的无毒赋形剂混合的有效量的本文公开的包含超长CDR3的抗体、抗体片段、核酸或载体。通过将片剂溶解在无菌水中，或另外的合适载体中，可以以单位剂量的形式制备溶液。合适的赋形剂包括但不限于：惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
基于本公开内容和配制技术的常识，取决于拟定的给药途径、递送形式和所需剂量，可以确定合适的和/或优选的药物制剂。无论给药方式如何，可以根据患者体重、体表面积或器官大小来计算有效剂量。对于涉及本文描述的各制剂的治疗，用于确定其适当剂量的计算的进一步细化在本领域中常规进行，并且处于本领域中常规实施的任务的范围内。适当的剂量可以通过使用合适的剂量-响应数据来确定。
在一些实施方案中，包含超长CDR3的抗体或其片段具有修饰的Fc区，其中对天然存在的Fc区进行修饰以提高该抗体或片段在生物环境中的半衰期，例如血清半衰期或通过体外试验测得的半衰期。改变IgG的Fc区的初始形式的方法也描述在美国专利6,998,253中。
在某些实施方案中，可能希望修饰抗体或片段以提高其血清半衰期，例如，向抗体片段添加分子如PEG或其它水溶性聚合物，包括多糖聚合物，以提高半衰期。这还可以例如通过将挽救受体(salvagereceptor)结合表位引入抗体片段中(例如，通过抗体片段中的适当区域的突变，或通过将表位引入肽标签中，该肽标签随后例如通过DNA或肽合成在末端或在中间与抗体片段融合)(参见，国际公开号WO96/32478)来实现。挽救受体结合表位是指负责提高IgG分子的体内血清半衰期的IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc区的表位。
挽救受体结合表位可以包括这样的区域，其中来自Fc域的一个或两个环的任意一个或多个氨基酸残基被转移至抗体片段的类似位置。甚至更优选地，转移来自Fc域的一个或两个环的3个或更多个残基。再更优选地，表位取自(例如，IgG的)Fc区的CH2域并转移至抗体的CH1、CH3或VH区或多于一个这样的区。或者，表位取自Fc区的CH2域并转移至抗体片段的CL区或VL区或两者。还参见WO97/34631和WO96/32478，其描述了Fc变体和它们与挽救受体的相互作用。
Fc受体结合位点内的残基的突变可以导致改变的效应子功能，例如改变的ADCC或CDC活性，或改变的半衰期。可能的突变包括一个或多个残基的插入、缺失或置换，包括用丙氨酸置换、保守置换、非保守置换或在相同位置用来自不同IgG亚类的相应的氨基酸残基替代(例如，在该位置用相应的IgG2残基替代IgG1残基)。例如，已经报道了将IgG4中的氨基酸位置241处的丝氨酸突变成脯氨酸(在IgG1和IgG2中的该位置处发现)导致同质性抗体的产生，以及与初始嵌合IgG4相比延长的血清半衰期和改善的组织分布(Angal等,Mol.Immunol.30:105-8,1993)。
在一些实施方案中，是包含含有超长CDR3的抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。该治疗性多肽可以是非抗体序列。该治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。在一些情况下，该治疗性多肽是Moka1、Vm24、GLP-1、艾塞那肽-4、人EPO、人FGF21、550肽、人GMCSF、人干扰素-β、人GCSF、牛GCSF或其衍生物或变体。或者，该抗体是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。在一些实施方案中，该免疫球蛋白域是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自工程化抗体或重组抗体。在其它情况下，该免疫球蛋白域来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以包含CDR3中的结域的至少一部分。治疗性多肽可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含CDR3中的茎域的至少一部分。治疗性多肽可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体进一步包含接头。该接头可以在超长CDR3内。该接头可以将治疗性多肽连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽连接至结域或茎域。在某些实施方案中，是预防或治疗有需要的受试者中的疾病的方法，其包括将该药物组合物施用至受试者。在一些实施方案中，该药物组合物包含免疫球蛋白构建体和药学上可接受的载体，该免疫球蛋白构建体包含：重链多肽，其包含选自SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个的序列和由SEQIDNO:2-7或103-107中的任一个的DNA编码的多肽序列；和轻链多肽，其包含选自SEQIDNO:8的序列和由SEQIDNO:1的DNA编码的多肽序列。在某些实施方案中，是预防或治疗有需要的哺乳动物中的疾病的方法，其包括向哺乳动物施用此药物组合物。在一些实施方案中，所述疾病是传染病如乳腺炎。在某些实施方案中，有需要的哺乳动物是选自牛、骆驼、驴、山羊、马、驯鹿、绵羊、水牛、驼鹿和牦牛的食乳动物。在一些实施方案中，有需要的哺乳动物是牛。
在一些实施方案中，本文公开的药物组合物可以用于提供预后或提供诊断信息。
药剂盒/制品
作为附加方面，本公开内容包括药剂盒，该药剂盒包含以促进其用于实施本公开内容的方法的用途的方式包装的一种或多种化合物或组合物。在一个实施方案中，这样的药剂盒包括包装在容器中的本文中描述的化合物或组合物(例如，包含单独的或与第二药剂组合的含有超长CDR3的抗体的组合物)，具有贴附至容器上的标签或包装插页，其描述所述化合物或组合物在实施该方法中的用途。合适的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料如玻璃或塑料形成。容器可以具有无菌进入孔(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。制品可以包含(a)其中容纳有组合物的第一容器，其中该组合物包含如本文公开的包含超长CDR3的抗体；和(b)其中容纳有组合物的第二容器，其中该组合物包含其它治疗剂。本文公开的该实施方案中的制品可以进一步包含指示第一或第二组合物可以用于治疗特定病状的包装插页。可替代地，或附加地，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。还可以包括从商业和用户立场出发所需的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针和注射器。优选地，所述化合物或组合物以单位剂型包装。药剂盒还可以包括适于根据具体的给药途径施用组合物或实施筛查试验的装置。优选地，药剂盒包括描述包含超长CDR3的抗体的组合物的用途的标签。
在某些实施方案中，包含抗体的组合物根据常规程序配制为适于静脉内施用至哺乳动物如人、牛、猫、犬和鼠的药物组合物。一般而言，用于静脉内给药的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。当需要时，该组合物还可以包含增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因以减轻注射部位的疼痛。通常，成分分开供应或混合在一起以单位剂型供应，例如，作为在指示活性剂的量的密封容器如安瓿或小药囊(sachette)中的干冻干粉或无水浓缩物。当通过输注施用组合物时，其可以用含有无菌药物级水或盐水的输注瓶分配。当通过注射施用组合物时，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿以使成分可以在施用前混合。
在治疗、抑制和预防与治疗性蛋白质的异常表达和/或活性相关的疾病或病症中有效的本文描述的组合物的量可以通过标准临床技术确定。此外，可以任选地利用体外试验来帮助确定最佳剂量范围。将在制剂中使用的确切剂量还将取决于给药途径以及疾病或病症的严重度，并应根据医师的判断和每个患者的情况来确定。由得自体外或动物模型测试系统的剂量-响应曲线外推得出有效剂量。
下面是本公开内容的方法和组合物的实例。可以理解，考虑以上提供的一般性描述，可以实施多种其它实施方案。
药理学性质
本文还公开了改善治疗肽的一种或多种药理学性质的方法。该方法可以包括制备本文公开的抗体。药理学性质的实例包括但不限于半衰期、稳定性、溶解度、免疫原性、毒性、生物利用度、吸收、释放、分布、代谢和排泄。释放可指治疗肽从药物制剂中释放的过程。吸收可指物质进入血液循环的过程。分布可指物质遍布身体的体液和组织的分散或散布。代谢(或生物转化，或失活)可指被存在外来物质的生物体的识别以及母体化合物向子代谢物的不可逆转化。排泄可指物质从身体的去除。
治疗肽的半衰期可以大于非偶联治疗肽的半衰期。当施用于受试者时，治疗肽的半衰期可以大于4小时、大于6小时、大于12小时、大于24小时、大于36小时、大于2天、大于3天、大于4天、大于5天、大于6天、大于7天、大于8天、大于9天、大于10天、大于11天、大于12天、大于13天或大于14天。当施用于受试者时，治疗肽的半衰期可以大于4小时。当施用于受试者时，治疗肽的半衰期可以大于6小时。
治疗肽的半衰期可以增加至少大约2、4、6、8、10、12、14、16、18或20或更多小时。治疗肽的半衰期可以增加至少大约2小时。治疗肽的半衰期可以增加至少大约4小时。治疗肽的半衰期可以增加至少大约6小时。治疗肽的半衰期可以增加至少大约8小时。
本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以是非偶联治疗肽的半衰期的至少大约1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以是非偶联治疗肽的半衰期的至少大约15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50倍。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以是非偶联治疗肽的半衰期的至少大约2倍。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以是非偶联治疗肽的半衰期的至少大约5倍。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以是非偶联治疗肽的半衰期的至少大约10倍。
本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以比非偶联治疗肽的半衰期长至少大约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以比非偶联治疗肽的半衰期长至少大约10％。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以比非偶联治疗肽的半衰期长至少大约20％。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以比非偶联治疗肽的半衰期长至少大约30％。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以比非偶联治疗肽的半衰期长至少大约40％。本文描述的治疗肽抗体的半衰期可以比非偶联治疗肽的半衰期长至少大约50％。
可以修饰或改变抗体以降低免疫原性。例如，可以修饰或改变部分牛或非牛抗体的序列以降低对人的免疫原性。可以对非人抗体进行人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和性。通常，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如CDR，(或其部分)衍生自非人抗体，而FR(或其部分)衍生自人抗体序列。人源化抗体任选地还包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如，衍生HVR残基的抗体)的相应残基置换以恢复或改善抗体特异性或亲和性。
治疗方法
本文进一步公开了预防或治疗有需要的受试者中的疾病或状况的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。该治疗性多肽可以由非抗体序列编码。该治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。该治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，该治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，该治疗性多肽是胃泌酸调节素、550肽、Amgen1、Mamba1、甲状旁腺素或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽连接至结域或茎域。在一些情况下，该疾病或状况是自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病或癌症。在其它情况下，该疾病或状况是血液病症。在一些情况下，该疾病或状况是肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。
在一些实施方案中，是预防或治疗有需要的受试者中的疾病或状况的方法，其包括向受试者施用一种组合物，该组合物包含：免疫球蛋白构建体，该免疫球蛋白构建体包含含有与选自SEQIDNO:9-14或108-113的序列基本相似的序列的重链多肽；和含有与SEQIDNO:8的序列基本相似的序列的轻链多肽。该重链多肽序列可以与由SEQIDNO:9-14或108-113中的任一个提供的重链序列共有50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性。该轻链多肽序列可以与由SEQIDNO:8提供的轻链序列共有50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性。在一些情況中，该疾病或状况是自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病或癌症。在其它情况下，该疾病或状况是血液病症。在一些情况下，该疾病或状况是肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。
在一实施方案中，提供了预防或治疗有需要的受试者中的疾病或状况的方法，其包括向受试者施用一种组合物，该组合物包含：免疫球蛋白构建体，该免疫球蛋白构建体包含含有由与选自SEQIDNO:2-7或103-107的序列基本相似的DNA序列编码的多肽序列的重链多肽；和含有由与SEQIDNO:1的序列基本相似的DNA序列编码的多肽序列的轻链多肽。该重链核苷酸序列可以与由SEQIDNO:2-7或103-107中的任一个提供的重链序列共有50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的同源性。该轻链核苷酸序列可以与由SEQIDNO:1提供的轻链序列共有50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的同源性。在一些情况下，该疾病或状况是自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病或癌症。在其它情况下，该疾病或状况是血液病症。在一些情况下，该疾病或状况是肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。
在一些实施方案中本文公开了预防或治疗有需要的受试者中的自身免疫性疾病的方法，其包括向所述受试者施用包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物还可以包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是Moka1、VM-24或β-干扰素或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文所述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含一个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。Moka1、VM-24或β-干扰素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。Moka1、VM-24或β-干扰素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将Moka1、VM-24或β-干扰素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将Moka1、VM-24或β-干扰素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该自身免疫性疾病是T-细胞介导的自身免疫性疾病。T-细胞介导的自身免疫性疾病包括但不限于多发性硬化、1-型糖尿病和牛皮癣。在其它情况下，该自身免疫性疾病是狼疮、舍格伦综合征、硬皮病、类风湿性关节炎、皮肌炎、桥本甲状腺炎(Hasmimoto’sthyroiditis)、阿狄森病(Addison’sdisease)、乳糜泻、克罗恩病(Crohn’sdisease)、恶性贫血、寻常型天疱疮、白癜风、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、奥德甲状腺炎(Ord'sthyroiditis)、格雷夫斯病(Graves'disease)、格林-巴利综合征(Guillain-Barresyndrome)、急性播散性脑脊髓炎、眼球斜视痉挛综合征、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、古德帕斯彻综合征(Goodpasture’ssyndrome)、莱特尔综合征(Reiter'ssyndrome)、高安动脉炎(Takayasu'sarteritis)、颞动脉炎、韦格纳肉芽肿、普秃、贝切特病(Behcet'sdisease)、慢性疲劳、家族性自主神经异常、子宫内膜异位症、间质性膀胱炎、神经性肌强直、硬皮病和外阴痛。狼疮可以包括但不限于急性皮肤红斑狼疮、亚急性皮肤红斑狼疮、慢性皮肤红斑狼疮、盘状红斑狼疮、儿童盘状红斑性狼疮、全身性盘状红斑性狼疮(generalizeddiscoidlupuserythematosus)、局部盘状红斑性狼疮、冻疮样红斑狼疮(hutchinson)、红斑狼疮-扁平苔藓重叠综合征(lupuserythematosus-lichenplanusoverlapsyndrome)、红斑狼疮性脂膜炎(深在性红斑狼疮)、肿胀性红斑狼疮、疣状红斑狼疮(增殖性红斑狼疮)、补体缺陷综合征(complementdeficiencysyndrome)、药物诱发的红斑狼疮、新生儿红斑狼疮和系统性红斑狼疮。
本文还公开了预防或治疗有需要的受试者中将会受益于钾电压门控通道调节的疾病或状况的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。在一些情况下，该钾电压门控通道是KCNA3或Kv1.3通道。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是Moka1、VM-24或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含一个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。Moka1、VM-24或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。Moka1、VM-24或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将Moka1、VM-24或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将Moka1、VM-24、β-干扰素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该疾病或状况是自身免疫性疾病。该自身免疫性疾病可以是T-细胞介导的自身免疫性疾病。在一些情况下，调节钾电压门控通道包括抑制或阻断钾电压门控通道。在一些情况下，该疾病或状况是发作性共济失调、癫痫发作或神经性肌强直。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的代谢病或状况的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物还可以包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体。该GLP-1可以是人GLP-1。在一些情况下，该FGF21是人FGF21。治疗性多肽可以是促代谢因子。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。该代谢病和/或状况可以包括碳水化合物代谢、氨基酸代谢、有机酸代谢(有机酸尿症)、脂肪酸氧化和线粒体代谢、卟啉代谢、嘌呤或嘧啶代谢、类固醇代谢、线粒体功能、过氧化物酶体功能、尿素循环障碍、尿素循环缺陷或溶酶体贮积病症。在一些情况下，该代谢病或状况是糖尿病。在其它情况下，该代谢病或状况是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿症、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏(MCADD)、急性间歇性卟啉病、莱施-奈恩综合征(Lesch-Nyhansyndrome)、类脂先天性肾上腺增生、先天性肾上腺增生、卡恩斯-塞尔综合征(Kearns-Sayresyndrome)、脑肝肾综合征(Zellwegersyndrome)、高歇病(Gaucher'sdisease)或尼曼-皮克病(NiemannPickdisease)。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的中枢神经系统(CNS)障碍的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是GLP-1、艾塞那肽-4或其衍生物或变体。该GLP-1可以是人GLP-1。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。GLP-1、艾塞那肽-4或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。GLP-1、艾塞那肽-4或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将GLP-1、艾塞那肽-4或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将GLP-1、艾塞那肽-4或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该CNS障碍是阿尔茨海默病(AD)。另外的CNS障碍包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病(Huntington'sdisease)、闭锁综合征、帕金森病、图雷特病(Tourett)和多发性硬化。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中将会受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是GLP-1、艾塞那肽-4、胃泌酸调节素或其衍生物或变体。该GLP-1可以是人GLP-1。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。GLP-1、艾塞那肽-4、胃泌酸调节素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。GLP-1、艾塞那肽-4、胃泌酸调节素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将GLP-1、艾塞那肽-4、胃泌酸调节素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将GLP-1、艾塞那肽-4、胃泌酸调节素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。该疾病或状况可以是代谢病或病症。在一些情况下，该疾病或状况是糖尿病。在其它情况下，该疾病或状况是肥胖。将会受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的另外的疾病和/或病症包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的血液病症的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。该GMCSF可以是人GMCSF。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该血液病症是贫血。贫血的实例包括但不限于，遗传性干瘪细胞增多症(herditaryxerocytosis)、先天性红细胞生成障碍性贫血、无Rh抗原病、传染性单核细胞增多相关贫血、药物相关贫血、再生障碍性贫血、小红细胞性贫血、大细胞性贫血、正常红细胞性贫血、溶血性贫血、异形红细胞性贫血(poikilocyticanemia)、球形红细胞性贫血、镰状细胞性贫血、正常色素性贫血、高色性贫血、低色素性贫血、大红细胞-正常色素性贫血、小红细胞-低色素性贫血、正常红细胞正常色素性贫血、缺铁性贫血、恶性贫血、叶酸盐缺乏性贫血、地中海贫血、铁粒幼红细胞性贫血、失血后贫血、镰状细胞贫血、慢性贫血、失利用性贫血、自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehaemolyticanemia)、库利贫血(Cooley'sanemia)、药物诱发的免疫溶血性贫血、成红细胞性贫血、再生不良性贫血、戴-布二氏贫血(Diamond-Blackfananemia)、皮尔森贫血(Pearson'sanemia)、短暂性贫血、范科尼贫血(Fanconi'sanemia)、莱德勒贫血(Lederer'sanemia)、骨髓病性贫血(myelpathicanemia)、营养性贫血、刺状细胞性贫血、VonJaksh贫血、铁粒幼红细胞贫血(sideroblaticanemia)、铁缺乏性贫血、α地中海贫血、β地中海贫血、血红蛋白H病、急性后天性溶血性贫血、温性自身免疫性溶血性贫血、冷性自身免疫性溶血性贫血、原发性冷性自身免疫性溶血性贫血、继发性冷性自身免疫性溶血性贫血、继发性自身免疫性溶血性贫血、原发性自身免疫性溶血性贫血、x-连锁的铁粒幼红细胞性贫血、吡哆醇有效性贫血、营养铁粒幼红细胞性贫血、吡哆醇缺乏诱导的铁粒幼红细胞性贫血、铜缺乏诱导的铁粒幼红细胞性贫血、环丝氨酸诱导的铁粒幼红细胞性贫血、氯霉素诱导的铁粒幼红细胞性贫血、乙醇诱导的铁粒幼红细胞性贫血、异烟肼诱导的铁粒幼红细胞性贫血、药物诱导的铁粒幼红细胞性贫血、毒素诱导的铁粒幼红细胞性贫血、小红细胞高色性贫血(microcytichyperchromicanemia)、大红细胞高色性贫血、巨红细胞正常色素性贫血、药物诱导的免疫性溶血性贫血、非遗传性球形红细胞性贫血、遗传性球形红细胞性贫血和先天性球形红细胞性贫血。在其它情况下，该血液病症是疟疾。或者，该血液疾病是淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤或骨髓增生异常综合征。在一些情况下，该血液病症是嗜中性粒细胞减少症、Shwachmann-Daimond综合征、科斯特曼综合征(Kostmannsyndrome)、慢性肉芽肿病、白细胞粘附缺陷、髓过氧化物酶缺乏症(meyloperoxidasedeficiency)或切-东二氏综合征(ChediakHigashisyndrome)。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中将会受益于刺激或增加白细胞产生的疾病或病症的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是GMCSF或其衍生物或变体。该GMCSF可以是人GMCSF。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。GMCSF或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。GMCSF或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将GMCSF或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将GMCSF或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该疾病或病症是嗜中性粒细胞减少症、Shwachmann-Daimond综合征、科斯特曼综合征、慢性肉芽肿病、白细胞粘附缺陷、髓过氧化物酶缺乏症或切-东二氏综合征。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中将会受益于刺激或增加红细胞产生的疾病或病症的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是促红细胞生成素或其衍生物或变体。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。促红细胞生成素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。促红细胞生成素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将促红细胞生成素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将促红细胞生成素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该疾病或病症是贫血。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的肥胖的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体。该GLP-1可以是GLP-1。在一些情况下，该FGF21是人FGF21。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将GLP-1、艾塞那肽-4、FGF21、胃泌酸调节素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的疼痛的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是原毒素2、550肽、Amgen1、Mamba1或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可以包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。原毒素2、550肽、Amgen1、Mamba1或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。原毒素2、550肽、Amgen1、Mamba1或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将原毒素2、550肽、Amgen1、Mamba1或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将原毒素2、550肽、Amgen1、Mamba1或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该疼痛是慢性疼痛。或者，该疼痛是急性疼痛。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中将会受益于调节钠离子通道的疾病或状况的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是原毒素2、550肽、Amgen1或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。原毒素2、550肽、Amgen1或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。原毒素2、550肽、Amgen1或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将原毒素2、550肽、Amgen1或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将原毒素2、550肽、Amgen1或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该钠离子通道是Nav通道。在一些情况下，该Nav通道是Nav1.7通道。在一些情况下，调节钠离子通道包括抑制或阻断钠离子通道。在一些情况下，该疾病或状况是Dravet综合征、全身型癫痫伴发热性惊厥+(GEFS+)、先天性肌强直病或红斑性肢痛症。在一些情况下，该疾病或状况是疼痛。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中将会受益于调节酸敏感离子通道(ASIC)的疾病或状况的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是原毒素2、Mamba1或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。原毒素2、Mamba1或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。原毒素2、Mamba1或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将原毒素2、Mamba1或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将原毒素2、Mamba1或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，调节ASIC包括抑制或阻断ASIC。在一些情况下，该疾病或状况是中枢神经系统障碍。在其它情况下，该疾病或状况是疼痛。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的病原体感染的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是β-干扰素或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。β-干扰素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。β-干扰素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将β-干扰素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将β-干扰素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该病原体感染是病毒、细菌、真菌或寄生虫感染。在一些情况下，该病毒感染是疱疹病毒。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的癌症的方法，其包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是β-干扰素或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。β-干扰素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。β-干扰素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将β-干扰素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将β-干扰素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。在一些情况下，该癌症是恶性血液肿瘤。该恶性血液肿瘤可以是白血病或淋巴瘤。在一些情况下，该恶性血液肿瘤是B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、多毛细胞白血病、慢性髓样白血病、套细胞淋巴瘤、结节状淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病或小淋巴细胞性白血病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的骨病的方法，其包括向所述受试者施用本文描述的包含一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体的组合物。在一些情况下，该受试者是哺乳动物。在一些情况下，该哺乳动物是人。或者，该哺乳动物是牛。在一些情况下，所述一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体包含甲状旁腺素。可替代地，或附加地，所述一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体包含CDR3H的至少一部分。所述CDR3H的部分可以是CDR3H中的茎域或结域。在一些情况下，所述一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将甲状旁腺素连接至CDR3H的部分。在一些情况下，该骨病是骨质疏松症。另外的骨病包括但不限于，低骨密度、成骨不全、髂骨致密性骨炎、剥脱性骨软骨炎、骨软骨瘤(骨肿瘤)、骨软化症、骨髓炎、骨质减少、骨硬化症、骨肉瘤(骨肿瘤)、骨坏死、骨关节炎、耻骨骨炎和佩吉特骨病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中的疾病或状况的方法，该方法包括向所述受试者施用如本文公开的包含一种或多种包含超长CDR3的抗体的组合物。该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。该受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。该抗体可以包含治疗性多肽或其衍生物或变体。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。在一些情况下，治疗性多肽是松弛素或其衍生物或变体。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。松弛素或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。松弛素或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将松弛素或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将松弛素或其衍生物或变体连接至结域或茎域。该疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。另外的心血管疾病包括但不限于，充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。该疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥散性硬皮病或系统性硬皮病。该疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。该疾病或状况可以是纤维化。或者，该疾病或状况是妊娠。该抗体融合蛋白可以用于治疗先兆子痫或诱发分娩。
本文提供了预防或治疗有需要的哺乳动物中的疾病的方法，其包括向所述哺乳动物施用本文描述的药物组合物。在一些实施方案中，该疾病是传染病。在一些实施方案中，该传染病是乳腺炎。在一些实施方案中，该传染病是呼吸系统疾病。在一些实施方案中，该呼吸系统疾病是航运热的牛呼吸系统疾病。在一些实施方案中，有需要的哺乳动物是选自牛、骆驼、驴、山羊、马、驯鹿、绵羊、水牛、驼鹿和牦牛的食乳动物。在一些实施方案中，有需要的哺乳动物是牛。
提供了通过向受试者施用有效量的本文描述的抗体或药物组合物来治疗、抑制并预防的方法。该抗体可以是基本上纯化的(例如，基本上不含有限制其效应或产生不期望的副作用的物质)。该受试者可以是动物，包括但不限于，例如牛、猪、绵羊、山羊、兔、马、鸡、猫、狗、鼠等。该受试者可以是哺乳动物。在一些情况下，该受试者是人。或者，该受试者是牛。
本文进一步公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗疾病或状况的药物中的用途。本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗疾病或状况的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以包含GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗性多肽可以是Moka1。治疗性多肽可以是VM24。治疗性多肽可以是艾塞那肽-4。治疗性多肽可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗性多肽可以是瘦素。治疗性多肽可以是生长激素(GH)。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。治疗性多肽可以是干扰素-α。治疗性多肽可以是干扰素-β。治疗性多肽可以是GLP-1。治疗性多肽可以是松弛素。治疗性多肽可以是550肽。治疗性多肽可以是Mamba1。治疗性多肽可以是BCCX2。治疗性多肽可以是弹力素。治疗性多肽可以是促代谢因子。治疗性多肽可以是GDF11。治疗性多肽可以是GMCSF。该疾病或状况可以是自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病或癌症。在其它情况下，该疾病或状况是血液病症。在一些情况下，该疾病或状况是肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。该疾病或状况可以是生长障碍。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗细胞增殖病症的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。该细胞增殖病症可以是癌症。治疗性多肽可以是BCCX2。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗代谢病症的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。该代谢病症可以是糖尿病。该糖尿病可以是I型糖尿病。该糖尿病可以是II型糖尿病。治疗性多肽可以是艾塞那肽-4。治疗性多肽可以是GLP-1。治疗性多肽可以是瘦素。治疗性多肽可以是促代谢因子。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗自身免疫性疾病或状况的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是Moka1。治疗性多肽可以是VM24。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗炎性疾病或状况的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是弹力素。治疗性多肽可以是干扰素-β。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗中枢神经系统疾病或状况的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是550肽。治疗性多肽可以是Mamba1。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗心血管疾病或状况的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是松弛素。治疗性多肽可以是GDF11。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗血液系统疾病或状况的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗性多肽可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗性多肽可以是GMCSF。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗病原体感染的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是干扰素-α。
本文公开了抗体融合蛋白在制备用于治疗生长障碍的药物中的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是生长激素。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。
本文还公开了抗体融合蛋白用于治疗疾病或状况的用途。本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的疾病或状况的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以包含GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗性多肽可以是Moka1。治疗性多肽可以是VM24。治疗性多肽可以是艾塞那肽-4。治疗性多肽可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗性多肽可以是瘦素。治疗性多肽可以是生长激素(GH)。生长激素可以是人生长激素(hGH)。治疗性多肽可以是干扰素-α。治疗性多肽可以是干扰素-β。治疗性多肽可以是GLP-1。治疗性多肽可以是松弛素。治疗性多肽可以是550肽。治疗性多肽可以是Mamba1。治疗性多肽可以是BCCX2。治疗性多肽可以是弹力素。治疗性多肽可以是促代谢因子。治疗性多肽可以是GDF11。治疗性多肽可以是GMCSF。该疾病或状况可以是自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病或癌症。在其它情况下，该疾病或状况是血液病症。在一些情况下，该疾病或状况是肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。该疾病或状况可以是生长障碍。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的细胞增殖病症的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是BCCX2。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的代谢病症的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是艾塞那肽-4。治疗性多肽可以是GLP-1。治疗性多肽可以是瘦素。治疗性多肽可以是促代谢因子。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的自身免疫性疾病或状况的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是Moka1。治疗性多肽可以是VM24。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的炎性疾病或状况的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是弹力素。治疗性多肽可以是干扰素-β。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的中枢神经系统疾病或状况的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是550肽。治疗性多肽可以是Mamba1。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的心血管疾病或状况的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是松弛素。治疗性多肽可以是GDF11。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的血液系统疾病或状况的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是GCSF。该GCSF可以是人GCSF。该GCSF可以是牛GCSF。治疗性多肽可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗性多肽可以是GMCSF。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的病原体感染的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。治疗性多肽可以是干扰素-α。
本文公开了抗体融合蛋白用于治疗有需要的受试者中的生长障碍的用途，该抗体融合蛋白包含(a)超长CDR3的至少一部分；和(b)治疗性多肽。该抗体可以是如本文描述的免疫偶联物。该抗体可以包含一个或多个免疫球蛋白域。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白域可以来自人源化的、人工程化的或完全人抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。在其它情况下，该哺乳动物抗体是鼠抗体。超长CDR3可以是35个或更多个氨基酸的长度。超长CDR3可以包含至少3个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含1个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3包含结域的至少一部分。结域可以包含在超长CDR3的结域内的保守基序。例如，结域可以包含本文公开的半胱氨酸基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至结域。可替代地，或附加地，超长CDR3包含茎域的至少一部分。茎域可以包含在超长CDR3的茎域内的保守基序。例如，茎域可以包含T(S/T)VHQ基序。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至茎域。在一些情况下，该抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体进一步包含接头。该接头可以将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至免疫球蛋白域或其片段。在其它情况下，该接头将治疗性多肽或其衍生物或变体连接至结域或茎域。治疗性多肽可以由非抗体序列编码。治疗性多肽或其衍生物或变体可以连接至免疫球蛋白域。治疗性多肽或其衍生物或变体可以在超长CDR3内。或者，治疗性多肽或其衍生物或变体偶联至超长CDR3。生长障碍的实例包括但不限于，软骨发育不全、儿童软骨发育不全、肢端肥大症、肥胖性生殖器退化、侏儒症、巨人症、BrookeGreenberg、偏侧肥大、软骨发育不良、詹森氏干骺端软骨发肩异常(Jansen'smetaphysealchondrodysplasia)、科瓦尔斯基综合征(Kowarskisyndrome)、Léri–Weill软骨骨生成障碍、局部巨人症、脂瘤性营养异常性巨大发育、Majewski多指综合征、II型小头骨发育不良先天性侏儒、侏儒、生长过度综合征、类扭伤性侏儒、先天性矮小、假性软骨发育不全、心理社会性身材矮小、塞克尔综合征(Seckelsyndrome)、短肋-多指综合征和Silver–Russell综合征。治疗性多肽可以是生长激素。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。
多种递送系统是已知的并可以用于施用本文描述的抗体制剂，例如，包封在脂质体、微粒、微囊、能够表达化合物的重组细胞中，受体介导的胞吞(参见，例如Wu和Wu,J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))，将核酸构建为逆转录病毒或其它载体的一部分，等等。引入方法包括但不限于皮内、肌肉内、腹膜內、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。化合物或组合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或团注、通过经由上皮或粘膜皮肤内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其它生物活性剂一起施用。施用可以是全身性的或局部的。此外，在某些实施方案中，通过任何合适的途径，包括心室内和鞘内注射，将本文描述的异源多聚体(heteromultimer)组合物引入中枢神经系统中是理想的；例如连接至贮器如奥马耶贮器(Ommayareservoir)的心室内导管可以促进心室内注射。
在特定的实施方案中，将本文描述的抗体或组合物局部施用至需要治疗的区域是理想的；这可以通过以下方式实现，例如但不限于：局部输注，局部涂敷，例如在手术后与创伤敷料一起，通过注射，借助于导管，借助于栓剂，或借助于植入物，所述植入物是多孔的、无孔的或胶凝的材料，包括膜如硅橡胶(sialastic)膜，或纤维。优选地，当施用本发明的包括抗体在内的蛋白质时，必须注意使用不吸收蛋白质的材料。
在另一个实施方案中，所述抗体或药物组合物在小囊中，尤其在脂质体中递送(参见Langer,Science249:1527-1533(1990)；Treat等,LiposomesintheTherapyofInfectiousDiseaseandCancer,Lopez-BeresteinandFidler(eds.),Liss,NewYork,pp.353-365(1989)；Lopez-Berestein,同上,pp.317-327；总体上参见以上)。
在又一个实施方案中，可以在控制释放系统中递送异源多聚体或组合物。在一个实施方案中，可以使用泵(参见Langer,同上；Sefton,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201(1987)；Buchwald等,Surgery88:507(1980)；Saudek等,N.Engl.J.Med.321:574(1989))。在另一个实施方案中，可以使用聚合材料(参见MedicalApplicationsofControlledRelease,LangerandWise(eds.),CRCPres.,BocaRaton,Fla.(1974)；ControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignandPerformance,SmolenandBall(eds.),Wiley,NewYork(1984)；Ranger和Peppas,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61(1983)；还参见Levy等,Science228:190(1985)；During等,Ann.Neurol.25:351(1989)；Howard等,J.Neurosurg.71:105(1989))。在又一个实施方案中，控制释放系统可以置于治疗靶标如大脑附近，由此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如,Goodson,MedicalApplicationsofControlledRelease,同上,vol.2,pp.115-138(1984))。其他控制释放系统在Langer的综述(Science249:1527-1533(1990))中讨论。
在包含编码本文描述的抗体的核酸的特定的实施方案中，通过将其构建为合适的核酸表达载体的一部分并施用以使其成为细胞内的，例如通过使用逆转录病毒载体(参见美国专利4,980,286)，或通过直接注射，或通过利用微粒轰击(例如，基因枪；Biolistic,Dupont)，或涂覆脂质或细胞表面受体或转染剂，或通过与已知将进入细胞核的同源异型框样肽连接地施用(参见，例如，Joliot等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:1864-1868(1991))，等等，可以在体内施用该核酸以促进其编码的蛋白质的表达。或者，可以通过同源重组将核酸在细胞内引入并掺入宿主细胞DNA中以供表达。
在一些实施方案中，在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期比游离治疗性多肽的半衰期长。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以是游离治疗性多肽的半衰期的至少大约1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以是游离治疗性多肽的半衰期的至少大约2倍。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以是游离治疗性多肽的半衰期的至少大约3倍。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以是游离治疗性多肽的半衰期的至少大约5倍。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以比游离治疗性多肽的半衰期长至少大约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以比游离治疗性多肽的半衰期长至少大约10％。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以比游离治疗性多肽的半衰期长至少大约15％。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以比游离治疗性多肽的半衰期长至少大约20％。在本文公开的抗体融合蛋白中的治疗性多肽的半衰期可以比游离治疗性多肽的半衰期长至少大约30％。在一些实施方案中，当施用至受试者时，本文提供的免疫球蛋白构建体的半衰期长于4小时。在一些实施方案中，当施用至受试者时，本文提供的免疫球蛋白构建体的半衰期长于4小时、长于6小时、长于12小时、长于24小时、长于36小时、长于2天、长于3天、长于4天、长于5天、长于6天、长于7天、长于8天、长于9天、长于10天、长于11天、长于12天、长于13天或长于14天。在一些情况下，该受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，该受试者是小鼠或牛。在其它情况下，该受试者是人。在某些实施方案中，包含免疫球蛋白构建体的药物组合物1天1次、每2天1次、每3天1次、每4天1次、每7天1次、每10天1次、每14天1次、每21天1次、每28天1次、每2个月1次或每3个月天1次施用至受试者。
实施例
下面的具体的非限制性实施例应解释为仅是说明性的，并非以任何方式限制本公开内容。在没有进一步详述的情况下，相信本领域技术人员可以基于本文的描述最大限度地利用本公开内容。本文引用的所有出版物通过引用而全文并入本文。
实施例1.构建用于在哺乳动物细胞中表达的BLV1H12-胃泌酸调节素融合蛋白的载体。
编码胃泌酸调节素的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将(GGGGS)的柔性接头添加到胃泌酸调节素片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将胃泌酸调节素的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域。BLV1H12-胃泌酸调节素融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12-胃泌酸调节素融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例2.BLV1H12-胃泌酸调节素融合抗体的表达和纯化。
BLV1H12-胃泌酸调节素融合抗体通过用编码BLV1H12-原毒素2融合重链和BLV1H12轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的BLV1H12-胃泌酸调节素融合抗体分泌到培养基中并在转染后48小时和96小时收集。BLV1H12-胃泌酸调节素融合蛋白可以通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析。
实施例3.构建用于在哺乳动物细胞中表达的BLV1H12-550融合蛋白的载体。
编码550的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到550片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将550的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域。BLV1H12-550融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12-550融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例4.BLV1H12-550融合抗体的表达和纯化。
BLV1H12-550融合抗体通过用编码BLV1H12-融合重链和BLV1H12轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的BLV1H12-550融合抗体分泌到培养基中并在转染后每48小时收集共2次。BLV1H12-550融合抗体通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析。图2A显示了550肽的Western印迹(泳道1＝550肽，还原条件；泳道2＝550肽，非还原条件)。图2B显示了550肽的SDSPAGE(泳道1＝蛋白质标准；泳道2＝550肽，非还原条件；泳道3＝550肽，还原条件)。
实施例5.构建用于在哺乳动物细胞中表达的BLV1H12-Amgen1融合蛋白的载体。
编码Amgen1的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到Amgen1片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将Amgen1的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域。BLV1H12-Amgen1融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12-Amgen1融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例6.BLV1H12-Amgen1融合抗体的表达和纯化。
BLV1H12-Amgen1融合抗体通过用编码BLV1H12-Amgen1融合重链和BLV1H12轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的BLV1H12-Amgen1融合抗体分泌到培养基中并在转染后48小时和96小时收集。BLV1H12-Amgen1融合抗体通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析。图2A显示了Amgen1的Western印迹(泳道3＝Amgen1，还原条件；泳道4＝Amgen1，非还原条件)。图2B显示了Amgen1的SDSPAGE(泳道1＝蛋白质标准；泳道4＝Amgen1，非还原条件；泳道5＝Amgen1，还原条件)。
实施例7.构建用于在哺乳动物细胞中表达的BLV1H12-Mamba1融合蛋白的载体。
编码Mamba1的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到Mamba1片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将Mamba1的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域。BLV1H12-Mamba1融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12-Mamba1融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例8.BLV1H12-Mamba1融合抗体的表达和纯化。
BLV1H12-Mamba1融合抗体通过用编码BLV1H12-Mamba1融合重链和BLV1H12轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的BLV1H12-Mamba1融合抗体分泌到培养基中并在转染后每48小时收集共2次。BLV1H12-Mamba1融合抗体通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析。图2A显示了Mamba1的Western印迹(泳道5＝Mamba1，非还原条件；泳道6＝Mamba1，还原条件)。图2B显示了Mamba1的SDSPAGE(泳道1＝蛋白质标准；泳道6＝Mamba1，非还原条件；泳道7＝Mamba1，还原条件)。
实施例9.构建用于在哺乳动物细胞中表达的BLV1H12-甲状旁腺素融合蛋白的载体。
编码人甲状旁腺激素(hPTH)的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到人甲状旁腺激素(hPTH)片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将人甲状旁腺激素(hPTH)的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域。BLV1H12-hPTH融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12-hPTH融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例10.BLV1H12-甲状旁腺素融合抗体的表达和纯化。
BLV1H12-甲状旁腺素(PTH)融合抗体通过用编码BLV1H12-hPTH融合重链和BLV1H12轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的BLV1H12-甲状旁腺素(PTH)融合抗体分泌到培养基中并在转染后每48小时收集共2次。BLV1H12-甲状旁腺素(PTH)融合抗体通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析。
实施例11.构建用于在哺乳动物细胞中表达的BLV1H12-治疗性多肽融合蛋白的载体。
编码多种治疗治疗性多肽的基因由Genscript(NJ,USA)合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化免疫球蛋白构建体的折叠和稳定性，将(GGGGS)n(n＝0、1)、GGGSGGGGS和/或GGGGSGGGS的一种或多种柔性接头添加到基因片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12-bGCSF融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12-融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
BLV1H12-融合蛋白的核酸序列显示在表1和6中。BLVH12-融合蛋白的肽序列显示在表2和7中。如表中所示，牛重链序列以粗体显示；人重链序列以突出显示；非抗体序列以斜体显示；茎域以带显示；结域以带显示；接头序列以带 显示。
实施例12.BLV1H12-治疗性多肽融合抗体的表达和纯化。
BLV1H12-治疗性多肽融合抗体可以通过用编码BLV1H12-融合蛋白重链和BLV1H12轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的BLV1H12-蛋白融合抗体分泌到培养基中并在转染后48小时和96小时收集。BLV1H12-治疗性多肽融合抗体通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析。包含切割位点的BLV1H12-治疗性多肽融合抗体可以进一步用蛋白酶处理以释放融合的治疗性多肽的N-末端和/或C-末端。在处理后，BLV1H12-治疗性多肽融合抗体可以通过蛋白A/G亲和柱再纯化以去除蛋白酶并通过SDS-PAGE凝胶来分析。
实施例13：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12促代谢因子的融合蛋白载体的构建。
编码促代谢因子的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS或GGGGSGGGGS的柔性接头添加到促代谢因子片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12-促代谢因子融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例14.基于BLV1H12促代谢因子的融合蛋白的表达和纯化
基于BLV1H12促代谢因子的融合蛋白通过用编码BLV1H12促代谢因子融合蛋白重链和牛抗体轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收集。融合蛋白通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析(图3)。如图3中所示，泳道1包含蛋白梯；泳道2包含BLV1H12-L1促代谢因子融合蛋白；泳道3包含用DTT处理的BLV1H12-L1促代谢因子融合蛋白；泳道4包含BLV1H12-L2促代谢因子融合蛋白；泳道5包含用DTT处理的BLV1H12-L2促代谢因子融合蛋白。
实施例15：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12松弛素的融合蛋白载体的构建。
编码松弛素的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS接头添加到松弛素片段的各末端上。此外，将两个天然切割位点(在B链和连接肽之间的KR，在连接肽和A链之间的RKKR)构建成用于因子Xa处理的IEGR。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12-松弛素融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例16：基于BLV1H12松弛素的融合蛋白的表达和纯化。
基于BLV1H12松弛素的融合蛋白通过用编码BLV1H12松弛素融合蛋白重链和牛抗体轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收集。融合蛋白通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化。纯化的BLV1H12松弛素融合蛋白用因子Xa(GEHealthcare,1ug因子Xa～100ug融合蛋白，20mMTris-HCl，100mMNaCl，2mMCaCl2，pH8.0)在室温下处理14小时。处理后的融合蛋白通过蛋白G树脂再次纯化(3、4：+/-DTT)，更换PBS缓冲液，并通过SDS-PAGE凝胶来分析(图4A)。如图4A中所示，泳道1包含蛋白梯；泳道2包含用因子Xa蛋白质处理的BLV1H12-松弛素融合蛋白；泳道3包含用因子Xa处理并用DTT处理的BLV1H12-松弛素融合蛋白；泳道4包含用因子Xa蛋白质处理并纯化2次的BLV1H12-松弛素融合蛋白；泳道5包含用因子Xa处理、纯化2次并用DTT处理的BLV1H12-松弛素融合蛋白。
实施例17：BLV1H12hRelaxin融合蛋白的体外活性
将过表达松弛素受体(LGR7)和CRE-响应性萤光素酶的293稳定细胞接种到384-孔板中24小时。随后用不同剂量的松弛素-2或抗体融合的松弛素-2蛋白质处理细胞24小时。进行萤光素酶试验并使用GraphPadPrism6分析数据。萤光素酶试验的结果显示在表8和图4B中。如图4B中所示，圆圈表示松弛素-2，倒三角表示已经被因子Xa切割并纯化的BLV1H12hRelaxin融合蛋白。
实施例18：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12人生长激素(hGH)的融合蛋白载体的构建。
编码人生长激素(hGH)的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到hGH片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12-hGH融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例19：基于BLV1H12hGH的融合蛋白的表达和纯化。
基于BLV1H12hGH的融合蛋白通过用编码BLV1H12hGH融合蛋白重链和牛抗体轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收集。融合蛋白通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析(图5A)。如图5A中所示，泳道1包含BLV1H12-hGH单接头融合蛋白；泳道2包含用DTT处理的BLV1H12-hGH单接头融合蛋白；泳道3包含蛋白梯。
实施例20：BLV1H12hGH融合蛋白在IM9细胞中的体外活性。
人IM9细胞(来自ATCC)在测定介质(在RPMI中的1％活性炭处理的FBS)中饥饿过夜，之后用不同浓度的hGH融合蛋白在37℃下刺激10分钟。按照制造商的说明(CellSignalingTechnology,#3939)固定、透化并针对pSTAT5染色该刺激的细胞。在进行FACS后使用Flowjo软件(TreeStarInc.)分析磷酸化的百分比。pSTAT5磷酸化的百分比显示在表9和图5B中。BLV1H12hGH的EC50是0.44nM。
实施例21：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12人干扰素β(IFN-β)的融合蛋白载体的构建。
编码人干扰素β(IFN-β)的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到IFN-β片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12-IFN-β融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例22：基于BLV1H12IFN-β的融合蛋白的表达和纯化。
基于BLV1H12IFN-β的融合蛋白通过用编码BLV1H12IFN-β融合蛋白重链和牛抗体轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收集。融合蛋白通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析(图6A)。如图6A中所示，泳道1包含蛋白梯；泳道2包含BLV1H12-IFN-β单接头融合蛋白；泳道3包含用DTT处理的BLV1H12-IFN-β单融合蛋白。
实施例23：BLV1H12IFN-β融合蛋白在HEK-BlueIFN-a/b细胞中的活性。
按照制造商建议的方案，通过HEK-BlueIFN-a/b细胞(来自invivoGen)评价hIFN-β活性。简言之，用胰蛋白酶(tryspin)使细胞脱壁，用PBS洗涤，并重悬浮于HEK-Blue检测介质中。在浓度渐增的BLV1H12hIFNb融合蛋白下，将细胞接种到96孔板中，并在37℃下孵育过夜。通过用微板阅读器在650nm下读数来评价SEAP活性。表10和图6B显示BLV1H12IFN-β的SEAP活性。BLV1H12IFN-β的EC50是350pM。
实施例24：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12人瘦素的融合蛋白载体的构建。
编码人瘦素(hLeptin)的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到hLeptin片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12-hLeptin融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例25：基于BLV1H12hLeptin的融合蛋白的表达和纯化。
基于BLV1H12hLeptin的融合蛋白通过用编码BLV1H12hLeptin融合蛋白重链和牛抗体轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收集。融合蛋白通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析(图7A)。如图7A中所示，泳道1包含蛋白梯；泳道2包含BLV1H12hLeptin融合蛋白；泳道3包含用DTT处理的BLV1H12hLeptin融合蛋白。
实施例26：BLV1H12hLeptin在瘦素受体过表达的细胞系中的体外活性
用PBS洗涤Baf3-LepR稳定细胞系3次以去除hLeptin，并以5000个细胞/孔接种至96-孔板(在RPMI1640+2％FBS中，100ul/孔)。将BLV1H12hLeptin融合蛋白或人瘦素(R&D，用作对照)以平行重复的0.01pg/ml至100ug/ml(在剂量上浓缩10倍)添加到各孔中。多孔板在37℃下孵育72小时。将AlamarBlue试剂(lifetechnologies)添加到各孔(10ul/孔)中并在37℃下孵育4小时。在560nm激发下检测590nm处的发射。通过GraphpadPrizm分析数据。表11显示了瘦素和BLV1H12hLeptinIgG的荧光强度。图7B显示了表11中的数据的图形表示。如图7B中所示，瘦素以圆圈表示，瘦素融合蛋白以正方形表示。瘦素的EC50是352±217.38pM，瘦素融合蛋白的EC50是57.45±23.65pM。
实施例27：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12人松弛素2的融合蛋白载体的构建。
编码人松弛素(hRelaxin2)的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为优化融合蛋白的折叠和稳定性，将GGGGS的柔性接头添加到hRelaxin2片段的两端上。随后，通过利用重叠延伸PCR将具有不同接头长度的基因的PCR片段嫁接到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替代如在BLV1H12的晶体结构中显示的“结”域的至少一部分(图1A)。BLV1H12hRelaxin2融合蛋白的表达载体通过扩增的BLV1H12融合基因与pFuse-hIgG1-Fc骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接而生成。类似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因克隆到没有hIgG1Fc片段的pFuse载体中。所获得的表达载体通过测序来确认。
实施例28：基于BLV1H12hRelaxin2的融合蛋白的表达和纯化。
基于BLV1H12hRelaxin2的融合蛋白通过用编码BLV1H12hRelaxin2融合蛋白重链和牛抗体轻链的载体瞬时转染游离型HEK293细胞来表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收集。融合蛋白通过蛋白A/G色谱法(ThermoFisherScientific,IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶来分析(图8A)。如图8A中所示，泳道1包含蛋白梯；泳道2包含用因子Xa蛋白质处理的BLV1H12hRelaxin2融合蛋白；泳道3包含用因子Xa处理并用DTT处理的BLV1H12hRelaxin2融合蛋白；泳道4包含用因子Xa蛋白质处理并纯化两次的BLV1H12hRelaxin2融合蛋白；泳道5包含用因子Xa处理、纯化两次并用DTT处理的BLV1H12hRelaxin2融合蛋白。
实施例29：BLV1H12hRelaxin融合蛋白在松弛素受体(LGR7)过表达的细胞系中的体外活性。
将过表达松弛素受体(LGR7)和CRE-响应性萤光素酶的293稳定细胞接种到384-孔板中24小时。随后用不同剂量的松弛素-2或BLV1H12hRelaxin2融合蛋白处理细胞24小时。进行萤光素酶试验并使用GraphPadPrism6分析数据。萤光素酶试验的结果显示在表12和图8B中。如图8B中所示，圆圈表示松弛素2，倒三角表示已经被因子Xa切割并纯化的BLV1H12hRelaxin2融合蛋白。
前面仅说明了本发明的原理。应理解，本领域技术人员将能够设计多种布置，这些布置尽管没有在本文中明确地描述或显示，但其体现了本发明的原理并包括在其精神和范围内。此外，本文描述的所有实例和条件性语言主要旨在帮助读者理解本发明的原理和由发明人贡献的概念以促进本领域发展，并应解释为不限于这些具体描述的实例和条件。而且，本文描述本发明的原理、方面和实施方案的所有声明以及其具体实例，旨在涵盖其结构和功能上的等同物。另外，这样的等同物旨在包括目前已知的等同物和将来研发的等同物，即，无论结构如何，研发的执行相同功能的任何元件。因此，发明的范围并非旨在限于本文所示和描述的示例性实施方案。相反，本发明的范围和精神通过所附权利要求来体现。
尽管本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将会明白，这些实施方案仅通过举例提供。在不偏离本发明的情况下，本领域技术人员现在将会想到许多变换、改变和替代。应理解，本文描述的本发明实施方案的多种替代方案可以用于实施本发明。下面的权利要求旨在限定本发明的范围，由此涵盖在这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
本文引用的所有参考文献均为所有目的通过引用而全文并入，其程度如同特别地和单独地指出各单独的出版物或专利或专利申请均为所有目的通过引用而全文并入。
“抗体片段”包含仅完整抗体的一部分，其中该部分优选保留当该部分存在于完整抗体中时与之通常相关的至少一种，优选大部分或全部功能。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab’)2、单链Fvs(scFv)、Fv、dsFv、双抗体(例如，(dsFv)2)、Fd和Fd’片段、Fab片段、Fd片段、scFv片段、线性抗体、单链抗体分子、微抗体、柔性微抗体、双特异性片段和由抗体片段形成的多特异性抗体(参见，例如，MethodsinMolecularBiology,Vol207:RecombinantAntibodiesforCancerTherapyMethodsandProtocols(2003)；Chapter1；p3-25,Kipriyanov)。其它已知的片段包括但不限于scFab片段(Hust等,BMCBiotechnology(2007),7:14)。
“靶蛋白质”或“蛋白质靶标”可以指被抗体或其部分特异性识别的和/或其活性被抗体或其部分调节的候选蛋白质或肽。调节活性可以包括增加、减少、刺激或防止靶蛋白质的活性或表达。靶蛋白质包括含有抗体识别表位的任何肽或蛋白质。靶蛋白质包括由于表达或活性而参与疾病或病症的病因学的蛋白质。示例性靶蛋白质在本文中描述。在一些情况下，靶蛋白质是跨膜蛋白质靶标。跨膜蛋白质靶标包括但不限于GPCR、离子通道、转运体和细胞表面受体。离子通道可以是钾离子通道、钠离子通道、钙离子通道和电压门控通道。在一些情况下，本文公开的抗体调节Kv1.3离子通道、Nav1.7离子通道或酸敏感离子通道(ASIC)。本文公开的抗体可以调节细胞表面受体如GLP1R、GCGR、EPO受体、FGFR、FGF21R、CSFR、GMCSFR和GCSFR。另外的靶蛋白质包括但不限于细胞因子、激酶、干扰素、激素和生长因子。靶蛋白质可以来自哺乳动物或非哺乳动物。靶蛋白质可以来自人。或者，靶蛋白质来自牛。

Claims (39)

1.一种融合蛋白，其包含：
a.包含多肽的非抗体区；和
b.包含抗体或其片段的抗体区，
其中所述多肽插入至所述抗体区中；且
其中所述多肽选自Mamba1、胃泌酸调节素、550肽、Amgen1、甲状旁腺素、瘦素、人生长激素(hGH)、松弛素、促代谢因子、弹力素和BCCX2。
2.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是Mamba1。
3.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是胃泌酸调节素。
4.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是550肽。
5.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是Amgen1。
6.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是甲状旁腺素。
7.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是瘦素。
8.权利要求7的融合蛋白，其中所述瘦素是人瘦素。
9.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是hGH。
10.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是松弛素。
11.权利要求10的融合蛋白，其中所述松弛素是人松弛素2。
12.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽是促代谢因子。
13.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽或其片段是弹力素。
14.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽或其片段是BCCX2。
15.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽或其片段替代所述抗体或其片段的至少一部分。
16.权利要求1的融合蛋白，其中所述抗体区包含人抗体或其片段。
17.权利要求1的融合蛋白，其中所述抗体区包含牛抗体或其片段。
18.权利要求1的融合蛋白，其中所述抗体区包含嵌合抗体或其片段。
19.权利要求1的融合蛋白，其中所述多肽向所述抗体区中的插入可以包括替代所述抗体或其片段的至少一部分。
20.一种融合蛋白，其由与选自SEQIDNO:3-7和103-107中的任一个的序列至少大约50％同源的多核苷酸序列编码。
21.权利要求20的融合蛋白，其中所述多核苷酸序列与选自SEQIDNO:3-7和103-107中的任一个的序列至少大约70％同源。
22.一种融合蛋白，其包含与选自SEQIDNO:10-14和108-113中的任一个的序列至少大约50％同源的氨基酸序列。
23.权利要求22的融合蛋白，其中所述氨基酸序列与选自SEQIDNO:10-14和108-113中的任一个的序列至少大约70％同源。
24.一种融合蛋白，其包含：
a.包含多肽的非抗体区；和
b.包含抗体或其片段的抗体区，
其中所述多肽插入至所述抗体区中；且
其中所述多肽由与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约50％同源的多核苷酸编码或包含与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约50％同源的氨基酸序列。
25.权利要求24的融合蛋白，其中所述多肽由与选自SEQIDNO:114-132的序列至少大约70％同源的多核苷酸编码。
26.权利要求25的融合蛋白，其中所述多肽包含与选自SEQIDNO:133-151的序列至少大约70％同源的氨基酸序列。
27.权利要求24的融合蛋白，其中所述多肽向所述抗体区中的插入可以包括替代所述抗体或其片段的至少一部分。
28.一种改善多肽的一种或多种药效学性质的方法，该方法包括将该多肽插入到抗体或其片段中。
29.权利要求28的方法，其中将所述多肽插入到抗体或其片段中包括用所述多肽替代该抗体或其片段的至少一部分。
30.权利要求28的方法，其中所述多肽插入到所述抗体或其片段的互补决定区(CDR)中。
31.权利要求30的方法，其中所述多肽插入到所述抗体或其片段的CDR3中。
32.一种治疗有需要的受试者中的疾病或状况的方法，其包括向该受试者施用治疗有效量的权利要求1-25中任一项的融合蛋白。
33.权利要求32的方法，其中所述疾病或状况选自自身免疫性疾病、异种免疫性疾病或状况、炎性疾病、病原体感染、血栓栓塞性病症、呼吸系统疾病或状况、代谢病、中枢神经系统(CNS)障碍、骨病、癌症、血液病症、肥胖、糖尿病、骨质疏松症、贫血和疼痛。
34.权利要求32的方法，其中所述疾病或状况将受益于离子通道的调节。
35.权利要求34的方法，其中所述离子通道选自钾离子通道、钠离子通道和酸敏感离子通道。
36.权利要求34的方法，其中所述离子通道选自Kv1.3离子通道、Nav1.7离子通道和酸敏感离子通道(ASIC)。
37.权利要求32的方法，其中所述疾病或状况将受益于受体的调节。
38.权利要求33的方法，其中所述受体选自GLP1R、GCGR和甲状旁腺素受体。
39.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-27中任一项的融合蛋白和药学上可接受的载体。
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