CN105060499B - 一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂及其应用，该微生态制剂是由不同菌株与载体复配而成，其中解淀粉芽孢杆菌菌含量不低于5×109 CFU/g、简单芽孢杆菌菌含量不低于1×1010 CFU/g、植物乳杆菌含量不低于2×109 CFU/g。该复合微生态制剂具有较强的分解能力，能够有效分解池塘中的残饵、粪便等有机物，显著提高水体透明度，稳定水体pH，调节藻相平衡，净化水质。
Description
技术领域
本发明属于微生态技术领域，涉及一种复合微生态制剂，具体涉及一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂及其应用。
背景技术
“养鱼先养水”，水色和透明度是池塘养殖的重要指标。透明度能够影响整个水体的稳定性以及水的肥力，对于整个水体的稳定、鱼虾健康成长、病害的防治有着积极的作用。随着水产养殖密度增加，投饵量的增加，代谢产物，粪便、残饵等有机物会大量堆积，水体会出现浑浊水、黄泥巴水、黑水等透明度较低的恶化水质。
微生物作为一种生态调节剂能够增加溶氧、降低氨氮与亚硝酸盐氮、抑制有害微生物的繁殖并迅速降解有机物、维持水生生态平衡。目前应用的净水微生物主要种类有光合细菌、芽孢杆菌、硝化细菌、酵母菌等。在高密度的水产养殖过程中，适时加入芽孢杆菌等微生物制剂等，能加快水体的物质循环，降低养殖水体中氨氮、亚硝酸盐等，经常使用有助于水体保持稳定，水既不太“肥”也不易变“清”，水环境长时间处于良好水平。
发明内容
针对降解有机物、降低氨氮，改善养殖水体环境，本发明提供了一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂及其应用，本发明将两种芽孢杆菌与乳酸菌复配使用，可显著提高水体透明度，净化水质。
为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现：
一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括菌含量不低于5×109 CFU/g的解淀粉芽孢杆菌、菌含量不低于1×1010 CFU/g的简单芽孢杆菌和菌含量不低于2×109 CFU/g的植物乳杆菌和载体。
所述简单芽孢杆菌选用保藏编号为：CGMCC No. 10051的简单芽孢杆菌f5。
所述解淀粉芽孢杆菌选用保藏编号为：CGMCC No. 10011的解淀粉芽孢杆菌HFJ-7。
所述的载体为滑石粉，60目筛上物为0。
本发明提供了所述的复合微生态制剂在提高养殖水体透明度中的应用。
所述复合微生态制剂兑水全池泼洒，用量为200～250g/亩，10～15天泼洒一次。
所述养殖水体包括对虾、草鱼、鲢鱼、鲤鱼和泥鳅的养殖水体。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和技术效果：本发明选用的简单芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、植物乳杆菌对养殖后期的有机物、氨氮、亚硝酸等具有显著的降解效果，降低有机耗氧量，间接增氧，维持藻相、菌相平衡，降低水体pH，净化改善水质，促进养殖动物良好生长。将本发明所述复合微生物制剂施加于水体，可以提高养殖水体的透明度，具有广泛的市场应用前景。
附图说明
图1为所述复合微生态制剂对水体透明度的影响；
图2为所述复合微生态制剂对水体氨氮的影响。
具体实施方式
本发明结合以下具体实例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1、菌株的筛选
一、简单芽孢杆菌f5的分离筛选
2014年7月，从胶南沿海多处采集对虾养殖区域的水样、底泥为样品筛选芽孢菌。底泥通过常规倍比稀释取上清为样品；水样可直接作为样品；样品液保温于75℃ 20min后，涂布于营养琼脂平板进行菌株的分离、纯化，得到4株芽孢杆菌。
已纯化的单菌株进行氨氮降解测定。将单菌株接种于LB种子培养基中，37℃ 180rpm培养约20h至菌体浓度为108 CFU/mL。按1%接种量（体积比）转接至氨氮培养基中（葡萄糖5g，MgSO4·7H2O 0.25g，K2HPO4 0.5g， (NH4)2SO4 0.1g，水1L，pH 7.2～7.4，20℃ 150rpm培养），定时取样测定氨氮浓度，该菌（编号f5）对氨氮降解效果最好，36h时降解率为99%。
经生理生化方法初步鉴定，菌株f5为芽孢杆菌属，其生物学特性：革兰氏阳性、好氧杆状菌，生长温度15℃～40℃。菌落圆形，边缘整齐，乳白色，菌落光滑平整，较湿润。
以菌株f5的DNA为模板，16S rRNA通用引物为引物进行扩增，扩增片段进行序列测定。测序结果用Blast软件与GenBank中相关属种的16S rRNA序列进行比对，显示该菌株16SrRNA序列与GenBank基因库中芽孢杆菌属中的Bacillus simlpe的16s rRNA序列同源度最高，同源率达到99%。通过DNAMAN6.0对Genbank中已有的芽孢杆菌属的16S rRNA序列进行遗传进化分析，结果显示，菌株f5 16S rRNA与Bacillus simple同源性最高，判定该菌株为芽孢杆菌属的简单芽孢杆菌。
将筛选到的菌株f5进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2014年11月25日；简单芽孢杆菌Bacillus simplex的保藏编号为CGMCCNo.10051。
二、解淀粉芽孢杆菌HFJ-7的分离筛选
2012年1月至2012年3月，从山东省潍坊市寿光市上口镇10家辣椒蔬菜大棚取30个辣椒根际土样本。土样分别充分研磨，于75℃水浴内加热处理20min，然后用无菌生理盐水中1000倍稀释，于营养琼脂NA平板上稀释涂布，挑取单菌落划线纯化，共筛选出68株纯菌，经镜检均为芽孢杆菌，其中包括菌株HFJ-7。
经细菌生理生化方法初步鉴定，菌株HFJ-7为芽孢杆菌属，其生物学特性：革兰氏染色阳性，在营养琼脂平板上形成的菌落直径约3-3.5mm，边缘不整齐，中间褶皱，淡黄色。菌体形态呈杆状，芽孢椭圆形，端生，尺寸为0.84×0.52μm。
采用分子遗传学方法对菌株芽孢杆菌HFJ-7进一步分类鉴定。首先提取菌株HFJ-7的DNA，以该DNA为模板，16S rRNA通用引物为引物，对16S rRNA片段进行扩增，扩增片段进行序列测定。测序结果用Blast软件与GenBank中相关属种的16S rRNA序列进行比对，结果显示该菌株16S rRNA序列与GenBank基因库中芽孢杆菌属中的Bacillus pumilus的16srRNA序列同源度最高，同源率达到99%。通过DNAMAN6.0对Genbank中已有的芽孢杆菌属的16S rRNA序列进行遗传进化分析，结果显示，菌株S3 16S rRNA与Bacillus amyloliquefaciens同源性最高，判定该菌株为芽孢杆菌属的解淀粉芽孢杆菌。
将筛选到的解淀粉芽孢杆菌HFJ-7进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2014年11月19日；解淀粉芽孢杆菌 Bacillus amyloliquefaciens的保藏编号为CGMCC No. 10011。
实施例2、简单芽孢杆菌的培养
将f5单菌落接种于LB种子培养基中，37℃ 180rpm培养约20h至菌体浓度为108 CFU/mL；按1%接种量（体积比）转接至发酵培养基，所述发酵培养基配方为：玉米浆1g，葡萄糖3 g，酵母膏0.5 g，KH2PO4 0.1 g，K2HPO4 0.15 g，( NH4)2SO4 0.5 g，NaC1 0.1 g，MgSO4·7H2O 0.05 g，H2O 100 mL，pH 7.0～7.2。
37℃ 180rpm 培养24h，镜检芽孢成熟率>90%；采用营养琼脂平板计数，菌量>150×108 CFU/mL。
实施例3、在南美白对虾养殖池中的应用
本发明所述提高养殖水体透明度的复合微生态制剂含有菌含量不低于5×109CFU/g的解淀粉芽孢杆菌、菌含量不低于1×1010 CFU/g的简单芽孢杆菌、菌含量不低于2×109 CFU/g的植物乳杆菌和载体。所述简单芽孢杆菌选用保藏编号为：CGMCC No. 10051的简单芽孢杆菌f5，所述解淀粉芽孢杆菌选用保藏编号为：CGMCC No. 10011的解淀粉芽孢杆菌HFJ-7，所述植物乳杆菌采用市售菌种即可，载体为为滑石粉，60目筛上物为0。
选择4个4亩左右、水质较浑浊的对虾土塘为研究对象。晴天上午按照1亩200g菌剂兑水全池均匀泼洒，泼洒完毕后开启增氧机2小时，连续跟踪检测指标7天，每天定时观察水色变化，测定水体透明度、氨氮、亚硝酸等指标。水体透明度采用黑白盘法测量。为保证试验进行的准确性，试验期间不添加影响试验结果的其他化学类、生物类、消毒剂类等产品。
结果如图1所示，1～4#池塘水体的透明度随观察时间有所提高，逐渐趋于稳定。通过对水体的现场观测和显微镜初检，发现泼洒复合微生态制剂后，浮游微藻数量同样相应有所增加。从图2中可以看出，芽孢杆菌对氨氮具有显著的降解效果，4个池塘氨氮降解量均>50%，后期效果维持稳定。试验期间，泼洒微生态制剂对水体pH影响不大，每个池塘pH的变化幅度维持在0.2～0.3，pH均维持在8.2～8.4之间。
实施例4、在草鱼养殖中的应用
试验地点在湖北某草鱼养殖场，按1亩200g的用量泼洒复合微生态制剂，每10天泼洒一次，同时测定养殖池塘水体的氨氮、亚硝酸、pH、透明度等指标。对照组整个养殖过程中不使用微生态制剂。
结果表明，施用该微生态制剂可在一定程度上使水体环境和养殖生产性能得到优化，降低养殖草鱼的死亡率，显著降低氨氮、亚硝酸盐含量，分别为72.5%、55.9%(P<0.05)；水体透明度平均提高了31.2%，pH稳定维持在8.2～8.6之间。
所述复合微生态制剂兑水全池泼洒，用量为200～250g/亩，10～15天泼洒一次；水体浑浊严重的可视情况连续泼洒3～5天。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (4)
1.一种提高养殖水体透明度的复合微生态制剂，其特征在于：所述复合微生态制剂由以下组分组成：菌含量不低于5×109 CFU/g的解淀粉芽孢杆菌、菌含量不低于1×1010 CFU/g的简单芽孢杆菌和菌含量不低于2×109 CFU/g的植物乳杆菌和载体；所述简单芽孢杆菌选用保藏编号为：CGMCC No. 10051的简单芽孢杆菌f5；
所述解淀粉芽孢杆菌选用保藏编号为：CGMCC No. 10011的解淀粉芽孢杆菌HFJ-7。
2.根据权利要求1所述的提高养殖水体透明度的复合微生态制剂，其特征在于：所述的载体为滑石粉，60目筛上物为0。
3.权利要求1所述的复合微生态制剂在提高养殖水体透明度中的应用，其特征在于，将所述复合微生态制剂兑水全池泼洒，用量为200～250g/亩，10～15天泼洒一次。
4.根据权利要求3所述的复合微生态制剂在提高养殖水体透明度中的应用，其特征在于，所述养殖水体为包括对虾、草鱼、鲢鱼、鲤鱼和泥鳅的养殖水体。
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