CN105012455A

CN105012455A - 一种镇痛止血药物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN105012455A
Application number: CN201510508482.6A
Authority: CN
Inventors: 刘志刚; 谢晓林
Original assignee: Guiyang University
Current assignee: Guiyang University
Priority date: 2015-08-19
Filing date: 2015-08-19
Publication date: 2015-11-04

Abstract

本发明一种镇痛止血药物及其制备方法和应用提供了一种以传统民族药物飞龙掌血（<i>Toddalia？asiatica</i>？(？L.)？Lam．）为原料深加工所得的镇痛止血药物及其制备方法和应用，属于中药深加工技术领域，飞龙掌血分别经水和乙醇溶液提取，再经提纯和分离而制得的一种黄棕色颗粒，其主要成份香豆素类化学物质含量不低于25%，生物碱类物质低于5%，其余主要为淀粉、糖类、鞣制、萜类和甾醇类物质。该药物具有良好的镇痛止血效果，并可应用于符合现代制剂工艺的药物及制剂，药效学研究表明其镇痛效果堪比阿司匹林，止血效果与云南白药相近，本发明工艺简便、操作方便、可工业化生产，市场前景良好。

Description

一种镇痛止血药物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药深加工领域，具体涉及一种以民族药飞龙掌血深加工所得到的一种镇痛止血药物及其制备方法和应用。

背景技术

止血是一个复杂的生理过程，主要受血液凝固、血小板聚集和血管收缩等重要因素影响。当血管损伤发生出血，组织自身的凝血机制充分表现出来，凝血酶原激活物活性增强，形成增多，继而凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶再催化纤维蛋白原转变为纤维蛋白，同时也使机体产生对抗纤维蛋白溶解过程的因素。凡是能够促使出血停止的药物均称为止血药，止血药主要是通过增强体内凝血因素或抑制凝因素，促使凝血，从而达到止血的目的。临床上使用的天然止血药物主要通过缩短凝血时间、促进局部血管收缩、增强毛细血管抵抗力并降低通透性、抑制纤溶过程、增加血小板数目、缩短凝血酶生成时间、增强血小板第三因子活性等作用达到止血的功效。目前常用的多数止血药物功效单一，不能完全满足临床需要，一些天然止血药物既有止血作用，又能够促进血液溶解、抑制血小板聚集，在临床上表现出止血活血、行血祛瘀的奇特功效。

飞龙掌血为芸香科飞龙掌血属植物飞龙掌血Toddalia asiatica ( L.) Lam．的干燥根或根皮，是一种重要的民族药物，在我国南方众多少数民族地区有广泛应用，被《中华本草﹒苗药卷》、《中华本草﹒傣药卷》等民族医药典籍收载，苗族民间用其水煎剂及药酒治疗跌打损伤、风湿性关节炎、毒蛇咬伤和外伤出血等多种病症^[1]。

虽然飞龙掌血具有良好的镇痛止血效果^[2]，但要发挥镇痛止血作用日服量用要达到20-30g左右，由于飞龙掌血中含有较多生物碱毒性成分，如所含白屈菜红碱为神经肌肉毒素，对心脏有强烈抑制作用，摄入过量可导致麻痹和死亡^[3]，因此，用飞龙掌血镇痛止血一方面要服用较高剂量才能达到很好的治疗效果，另一方面，服药量大又会摄入较多毒素，为解决这一矛盾，很有必要通过对飞龙掌血进行提取、分离和纯化，将飞龙掌血中具有止血活性的香豆素类有效成分提取出来，将其中毒性生物碱成分分离出去，开发一种用药量少，镇痛止血有效成分含量高，毒性作用低的药物。

[1] 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草, 苗药卷. 贵阳, 贵州科技出版社, 2005.

[2] 郝小燕, 彭琳, 叶兰, 等. 飞龙掌血生物总碱抗炎镇痛作用的研究. 中西医结合学报, 2004, 2(6): 450-452.

[3] 贾敏如, 李星炜. 中国民族药志要. 北京, 中国医药科技出版社, 2005。

发明内容

本发明的目的，在于针对飞龙掌血镇痛止血有效成分含量低，毒性成分含量较高，大量内服易引起中毒的问题，开发一种镇痛止血有效成分含量高，用药量少，毒副作用低的药物，通过对飞龙掌血的提取、分离和纯化等方法，将飞龙掌血中具有镇痛止血作用的有效成分提取、富集，将毒性成分分离出去，并将制得的药物应用于制备镇痛止血的药剂或药物。

本发明一种镇痛止血药物，是以飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam．）的根或根皮为原料，分别经水和乙醇溶液提取，再经提纯和分离而制得的一种黄棕色固体颗粒，其主要成分香豆素类化学物质含量不低于25%，生物碱类物质低于5%，其余主要为淀粉、糖类、鞣制、萜类和甾醇类等物质，该药物具有良好的镇痛止血效果，镇痛效果堪比阿司匹林，止血效果与云南白药相近。

上述所指的香豆素类化合物是指茴芹香豆素、异茴芹香豆素、8-羟基-6-甲氧基香豆素和珊瑚菜内酯等。

上述所指的生物碱指白屈菜红碱。

本发明所述的一种镇痛止血药物的制备方法，是按下列步骤制备：

（1）将飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam．）的根或根皮洗净、晾干、粉碎过80目筛；

（2）分别加入水、乙醇溶液：10%（v/v）、20%（v/v）、30%（v/v）、40%（v/v）、50%（v/v）、60%（v/v）、70%（v/v）、80%（v/v）和95%（v/v）回流提取3次，每次1小时，料液比第一次为1：12，第二和三次为1：10；

（3）将全部提取液合并，过滤，取滤液减压蒸馏蒸去溶剂，得提取浸膏，向浸膏中加入1-2倍重的40-60℃热水，搅拌悬浮，得悬浮液；

（4）依次用0.5-2倍体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取1-3次；

（5）分别减压蒸馏蒸去溶剂，得石油醚萃取浸膏、氯仿萃取浸膏、乙酸乙酯萃取浸膏和正丁醇萃取浸膏；

（6）合并氯仿和乙酸乙酯层浸膏，转移至AB-8型大孔吸附树脂柱上；

（7）分别以水、10%（v/v）、20%（v/v）、30%（v/v）、40%（v/v）、50%（v/v）、60%（v/v）、70%（v/v）、80%（v/v）和95%（v/v）乙醇梯度洗脱，每个梯度洗脱5-8个柱体积，取50%-70%乙醇洗脱液；

（8）将50%-70%乙醇洗脱液合并，采用喷雾干燥技术干燥后得到产品。

上述步骤（2）所述的提取方式除了回流提取外还包括煎煮提取、索式提取、渗辘提取或超临界流体萃取等。

上述步骤（8）所述干燥方法还包括常温减压干燥、冷冻干燥和真空微波干燥等。

本发明一种镇痛止血药物的应用，是用于制备镇痛止血的药物或制剂。

上述所指的药剂包括外用散剂、巴布剂、口服颗粒剂、胶囊剂和片剂等。

本发明镇痛止血药物可与三七提取物或者市售三七总皂苷等具有活血化淤作用的植物药提取物制成复方镇痛止血药物。

本发明镇痛止血药物采用HPLC法进行分析检测，建立了其HPLC指纹图谱，同时测定了药物中茴芹香豆素、异茴芹香豆素、珊瑚菜内酯、毛两面针素、8-羟基-6-甲氧基-香豆素等香豆素类活性成分的含量，结果表明药物中香豆素类成分不低于25%，白屈菜红碱等生物碱物质低于5%，其中白屈菜红碱含量低于0.5%，大幅降低了毒性物质摄入量。

本发明镇痛止血药物采用断尾法测定小鼠出血时间，以小鼠给药前后出血时间的缩短为指标，来判断药物止血的效果。按体重分别口服灌胃给药，每日灌胃一次，连续7天，于第7天给药30分钟后采用毛细玻管法测定小鼠凝血时间CT，次日采用剪尾法测定出血时间BT，以小鼠给药前后凝血时间的缩短为指标，来判断止血药的效果，结果表明本发明产品能显著缩短小鼠的出血时间和凝血时间，显示了良好的止血活性，表明其可能对内源性凝血途径有促进作用。由给药剂量折算日均人用剂量约为5g生药，大大降低了服用生药量。

本发明镇痛止血药物中加入淀粉、糊精、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、微晶纤维素、乳糖、滑石粉、硬脂酸镁等常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的剂型，如外用散剂、巴布剂，口服颗粒剂、胶囊剂、丸剂和片剂等。

本发明镇痛止血药物还可以与三七提取物或市售三七总皂苷等具有活血化淤作用的植物药提取物按1-100%的比例混合，照常规制剂方法将混合而成的原料药制成外用散剂、巴布剂、口服颗粒剂、胶囊剂、丸剂和片剂等。

附图说明

图1是本发明镇痛止血药物的HPLC色谱图，

其中3号峰为绿原酸，7号峰为两面针碱，11号峰为毛两面针素，12号峰为8-羟基-6-甲氧基香豆素，13号峰为白屈菜红碱，14号峰为茵芋碱，15号峰为异茴芹香豆素，16号峰为茴芹香豆素，20号峰为珊瑚菜内酯，香豆素类成分约占提取物的35.2%，白屈菜红碱等生物碱类物质降低到2.0%以下。

具体实施方式

实施例一（镇痛止血药物的制备）：

（1）取飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam．）的根或根皮6.0公斤，洗净、晾干、粉碎过80目筛；

（3）将全部提取液合并，过滤，取滤液减压蒸馏蒸去溶剂，得乙醇浸膏1.2公斤，向浸膏中加入2.5公斤60℃热水，搅拌悬浮，得悬浮液；

（4）依次用2倍体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次；

（5）分别减压蒸馏蒸去溶剂，得氯仿萃取浸膏281g、乙酸乙酯萃取浸膏46和正丁醇萃取浸膏402g；

（7）分别以水、体积比10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%和95%乙醇以1-3BV/h的流速梯度洗脱，每个梯度洗脱5-8个柱体积，取50%-70%乙醇洗脱液；

（8）将50%-70%乙醇洗脱液合并，采用喷雾干燥技术干燥，进料速度5mL/min，进风口温度150-160℃，出风口温度60-70℃，喷雾干燥得到产品。

实施例二（本药物HPLC分析）：

取实施例1所述镇痛止血粉末（过三号筛）进行HPLC分析。

（1）色谱条件

色谱柱 Diamonsil C₁₈ (250 mm×4.6 mm，5μm)

流动相 A：乙腈 B：0.75%冰醋酸水溶液

洗脱方式梯度洗脱

流速 1.0 mL/min 检测波长 320 nm

柱温 25 ℃ 进样量 20 μL

色谱运行时间为90分钟，梯度洗脱程序见表1，在此色谱条件下本发明镇痛止血药物的HPLC色谱图见附图1。

（2）样品制备方法

约提取物约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇超声溶解，滤过，滤液置100 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。

（3）测定结果

根据测定结果建立飞龙掌血提取物的色谱指纹图谱共有模式，标定了飞龙掌血提取物中20个共有峰（见附图1），其中3号峰为绿原酸，7号峰为两面针碱，11号峰为毛两面针素，12号峰为8-羟基-6-甲氧基香豆素，13号峰为白屈菜红碱，14号峰为茵芋碱，15号峰为异茴芹香豆素，16号峰为茴芹香豆素，20号峰为珊瑚菜内酯，香豆素类成分约占提取物的35.2%，白屈菜红碱等生物碱类物质降低到2.0%以下。

实施例三（口服本药物后小鼠醋酸扭体镇痛实验）：

（1）实验目的：通过小鼠醋酸扭体法对本发明镇痛止血药物的镇痛作用进行研究。

（2）实验对象：昆明种小鼠，雌雄各半。

（3）药材与仪器：本发明镇痛止血药物由实验室自制，加蒸馏水制成混悬液；秒表。

（4）动物分组及给药：健康小鼠40只随机分为4组，每组10只，分为3% CMC-Na溶液（模型组）、阿司匹林组、本发明药物低剂量组（折合生药量为0.65g/kg）和本发明药物高剂量组（折合生药量为1.3g/kg），每日灌胃一次，连续给药5天，于第5天给药30分钟后腹腔注射0.6%醋酸（0.2ml/只），观察20分钟内各组实验动物由醋酸引起的扭体次数，结果如表2：

（5）实验结果：经one-way ANOVA统计分析结果表明：模型组、阿司匹林组及本发明药物给药组小鼠开始扭体时间和扭体次数之间均存在显著性差异(p<0.05)，说明本发明镇痛止血药给药组均表现出不同程度镇痛作用，其中以提取物高剂量给药组的镇痛作用最为显著。

实施例四（口服本药物止血活性实验）：

（1）实验目的：采用断尾法测定小鼠出血时间，以小鼠给药前后出血时间的缩短为指标，来判断药物止血的效果。

（2）实验对象：昆明种小鼠，雌雄各半。

（3）动物分组及给药：取健康小鼠40只，饲养一周后随机分为4组，即空白组、阳性药组（云南白药）、本发明药物低剂量组和本发明药物高剂量组。参考文献给药剂量并根据人每日服用飞龙掌血和云南白药胶囊的剂量进行折算，按体重分别按低剂量组（折合生药量为0.65g/kg）和高剂量组（折合生药量为1.3g/kg）口服灌胃给药，阳性药云南白药的给药剂量为0.2 g/kg，每日灌胃一次，连续7天，于第7天给药30分钟后采用毛细玻管法测定小鼠凝血时间，次日采用剪尾法测定出血时间，结果见表3和表4。

（4）实验结果：实验结果采用统计学软件SPSS 17.0处理，所有数据经one-way ANOVA统计分析结果表明：空白组与阳性对照组及本发明镇痛止血药物给药组小鼠出血时间（BT）值和小鼠凝血时间（CT）之间均存在显著性差异(p<0.05)，说明本发明药物给药组均表现出不同程度缩短小鼠出血时间和凝血时间的作用，其中以提取物高剂量给药组的止血作用最为显著。

实施例五（片剂的制备）：

取实施例1所述药物，加入淀粉、麦芽糖等药用辅料后采用湿法制粒，整粒后加入滑石粉等润滑剂，按常规方法压片，即得本发明镇痛止血片。

Claims

1.一种镇痛止血药物，其特征是以飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam．）的根或根皮为原料，分别经水和乙醇溶液提取，再经提纯和分离而制得的一种黄棕色固体颗粒，其主要成份香豆素类化学物质含量不低于25%，生物碱类物质低于5%，其余为淀粉、糖类、鞣制、萜类和甾醇类物质，该药物具有良好的镇痛止血效果，镇痛效果堪比阿司匹林，止血效果与云南白药相近。

2.根据权利要求1所述一种镇痛止血药物，其特征是所指的香豆素类化学物质包括茴芹香豆素、异茴芹香豆素、毛两面针素、8-羟基-6-甲氧基香豆素和珊瑚菜内酯。

3.根据权利要求1所述一种镇痛止血药物，其特征是生物碱指白屈菜红碱毒性生物碱物质。

4.根据权利要求1所述一种镇痛止血药物的制备方法，其特征是按下列步骤制备：

（1）将飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam．）的根或根皮洗净、晾干、粉碎过80目筛；

（3）将全部提取液合并，过滤，取滤液减压蒸馏蒸去溶剂，得乙醇浸膏，向浸膏中加入1-2倍重的40-60℃热水，搅拌悬浮，得悬浮液；

（6）将全部浸膏转移至AB-8型大孔吸附树脂柱上；

（7）分别以水、体积比10%、20%、、30%、40%、50%、60%、70%、80%和95%的乙醇梯度洗脱，每个梯度洗脱5-8个柱体积，取50%-70%乙醇洗脱液；

5.根据权利要求4所述一种镇痛止血药物的制备方法，其特征是步骤（2）提取方式除了回流提取外还包括煎煮提取、索式提取、渗辘提取或超临界流体萃取。

6.根据权利要求4所述一种镇痛止血药物的制备方法，其特征是步骤（8）干燥方法还包括常温减压干燥、冷冻干燥和真空微波干燥。

7.根据权利要求1所述一种镇痛止血药物的应用，其特征是用于制备镇痛止血的药物或药剂。

8.根据权利要求7所述一种镇痛止血药物的应用，其特征是所指的药剂包括外用散剂、巴布剂，口服颗粒剂、胶囊剂或片剂。

9.根据权利要求7所述一种镇痛止血药物的应用，其特征是可将本药物与三七提取物或者市售三七总皂苷等具有活血化淤作用的植物药提取物制成复方镇痛、止血药物。