CN104887816A - 一种治疗乙型肝炎的藏药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种不含木香马兜铃和牛黄、可用于治疗乙型肝炎的藏药组合物，在九味牛黄丸的基础上选择性去掉了毒性药材木香马兜铃及牛黄，减少了肾脏毒性，同时增加了甘青青兰的使用，调整了红花和獐牙菜的用量，并发现獐牙菜与绿绒蒿的比例关系为2:1时效果佳，以使药方减毒但不降低疗效。

Description

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物

技术领域

本发明属于药物领域，涉及一种治疗乙型肝炎的藏药组合物。

背景技术

九味牛黄丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》第一册，由以下药材组成：红花150g，巴夏嘎100g，木香马兜铃120g，牛黄1g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。其功能主治为清肝热，对肝大，肝区疼痛，恶心，目赤效果较好，用于各种肝炎，培根，木布病。

尽管九味牛黄丸疗效较好，但处方中的木香马兜铃含有马兜铃酸，马兜铃酸可引起以寡细胞性纤维化为特点的马兜铃酸肾病，对人体肾脏有很大的伤害。因此考虑去除或替换方中的木香马兜铃对人体用药安全性有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不含木香马兜铃和牛黄、可用于治疗乙型肝炎(简称：乙肝)的藏药组合物，在九味牛黄丸的基础上选择性去掉了毒性药材木香马兜铃及牛黄，减少了肾脏毒性，同时增加了甘青青兰的使用，调整了红花和獐牙菜的用量，并发现獐牙菜与绿绒蒿的比例关系为2:1时效果佳，以使药方减毒但不降低疗效。

本发明技术方案如下：

一种治疗乙肝的藏药组合物，由以下药材组成：

红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

一种治疗乙肝的藏药组合物，由以下药材组成：

红花150g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

一种治疗乙肝的藏药组合物，由以下药材组成：

红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

一种治疗乙肝的藏药组合物，由以下药材组成：

红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g。

一种治疗乙肝的藏药组合物：为减方，按照九味牛黄丸处方，去除木香马兜铃和牛黄。

红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。将丸粉碎，水提取得提取液，浓缩成生药含量5.9g/mL。

一种治疗乙肝的藏药组合物：为改方1，即在九味牛黄丸配方基础上去除木香马兜铃和牛黄，增加甘青青兰100g。

一种治疗乙肝的藏药组合物：为改方2，即在改方1基础上增加了獐牙菜150g。

本发明的藏药组合物用于清肝热，治疗肝大，治疗肝区疼痛。

本发明的藏药组合物，用于制备治疗乙型肝炎、清肝热，治疗肝大，治疗肝区疼痛、并减少了肾脏毒性的药物。

优选的，上述治疗乙型肝炎的藏药组合物，其体外抗HBsAg最佳浓度为0.097g·ml^-1，体外抗HBV-DNA最佳浓度为0.049g·ml^-1。

有益效果：

1、不含木香马兜铃，减少了肾脏毒性；

2、通过配方的适当调整，增加了甘青青兰的使用，使得配方与九味牛黄丸相比，减毒不减效；

3、初步探索出最佳配方抗乙肝的最佳浓度为0.097g·ml^-1和0.049g·ml^-1。

具体实施方式

为了更详细地说明本发明，给出下述具体实验例和实施例。但本发明的范围并不局限于此。本发明原料未作具体说明的均为市售。

实验例1、不同组方对肾毒性的影响

1、材料：健康Wistar大鼠，体重180～200g，雌性，许可证号：SCXK(鲁)20080002，由山东鲁抗医药股份有限公司提供，正常、自由饮食。

九味牛黄丸，市售，金诃藏药公司生产；

本发明的藏药组合物(简称：改方)，改方:一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g。水提取得提取液，浓缩成生药含量5.9g/mL。

减方：按照九味牛黄丸处方，去除木香马兜铃和牛黄后制备的药物组合物，自制方法如下：药材组成红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。将丸粉碎，水提取得提取液，浓缩成生药含量5.9g/mL。

2、给药方法：将实验动物随机分为空白组、九味牛黄丸组、减方组和改方组，每组10只，将九味牛黄丸、减方和改方研成粉末，加水配成2.5ml/100g(相当于0.675g/kg/d)，灌胃给药，每日2次(上午9：00，下午16：00)，对照组给予相同剂量的自来水灌胃2次。实验共进行7d，实验结束后测定尿蛋白、尿糖、尿潜血等。

3、观测指标：①肉眼观察动物一般情况，称体重；②检测大鼠尿蛋白(UPR)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿糖(GLU)、血尿β2-MG、尿NAG酶，生化指标采取半自动生化分析仪及酶标仪检测。

4、统计学处理：采用SPSS17.0统计学分析软件处理，所有结果以表示，各组均数间行t检验。

5、结果

1)大鼠行为与体重的变化：见表1。

表1大鼠与体重的变化

2)各组大鼠尿常规比较：见表2。

表2各组大鼠尿常规比较

注：九味牛黄丸组个别大鼠的尿常规见尿蛋白和尿糖。

3)各组大鼠肾功能比较：见表3。

表3各组大鼠肾功能比较(n＝10)

注：与空白组比较，*p<0.05

4)各组大鼠尿NAG及β₂-MG比较：见表4。

表4各组大鼠尿NAG及β₂-MG比较(n＝10)

注：与对照组比较，*p<0.05

6、小结

实验发现，与空白组相比，九味牛黄丸组个别大鼠尿中发现尿蛋白和尿糖，该组大鼠的Scr和β₂-MG指标均有明显升高，而BUN、NAG也有升高趋势，表明九味牛黄丸对肾功能有不良影响；而减方组、改方组与空白组相比，无论大鼠日常行为、尿常规还是肾功能制备均无显著性差异(p>0.05)，说明减方、改方组对肾脏无明显毒性。

实验例2、不同组方抗乙型肝炎病毒作用考察

1.实验材料

1)药物和试剂准备

A、九味牛黄丸，市售，金诃藏药公司生产；

B、本发明的藏药组合物(简称：改方)，

改方:一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g。水提取得提取液，浓缩成生药含量5.9g/mL。

C、减方：按照九味牛黄丸处方，去除木香马兜铃和牛黄后制备的药物组合物，自制方法如下：药味组成：红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。将丸粉碎，水提取得提取液，浓缩成生药含量5.9g/mL。

D、改方1：药味组成：红花150g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g，即在九味牛黄丸配方基础上去除木香马兜铃和牛黄，增加甘青青兰100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。将丸粉碎，水提取得提取液，生药含量5.7g/mL。

E、改方2：药味组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g，即在改方1基础上仅增加了獐牙菜150g而未增加红花的用量。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。将丸粉碎，水提取得提取液，生药含量6.0g/mL。

F、试剂：拉米夫定(贺普丁C8H11N3O3S)，葛兰素史克制药(苏州)有限公司；PBS，Sigma公司，干粉剂，以双蒸水配制后高压蒸汽灭菌，于-20℃贮存待用；胎牛血清(美国hyclone公司)，过滤除菌后-20℃贮存待用；G-418，DMEM和胰蛋白酶(美国Gibico公司)；青霉素钠，硫酸链霉素(华北制药厂)；二甲亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO，Gibico公司)，常温保存；HBsAg定量检测酶联反应试剂盒(48T，美国R&D公司，批号:08/2010)；HBeAg定量检测酶联反应试剂盒(48T，HBeAg酶联反应试剂盒，美国R&D公司，批号:08/2010)；HBV-DNA核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法，凯杰生物，批号:08/2010)。

2)细胞:HePG2.2.1.5细胞，购自山东大学医学院。

3)仪器与场所:双人单面净化工作台(SW-CJ-1C，苏州净化)；立式压力蒸汽灭菌锅(LDZX-50FBS，上海申安)；电热恒温鼓风干燥箱(101，上海鹏顺科学仪器有限公司)；酶标仪(Multiskan MK3,Thermo Scientific)；ULT Freezer-86OC超低温冰箱；ABI7500荧光定量PCR检测仪；HC-3018R高速冷冻离心机(中科中佳公司)；MSC1.8A2型生物安全柜；二氧化碳恒温培养箱(BB16UV/BB5060UV，HERAEUS)。

2、试验方法

1)细胞毒性实验

取生长状态良好的HepG2.2.1.5细胞，接种于平底96孔板，每孔100μL，37℃，5％CO₂培养成单层细胞后，加入药物进行实验。拉米夫定组、九味牛黄丸组、改方组、改方1组、改方2组和减方组各组药物以1/2原浸膏质量为起始浓度，依次2倍稀释加入96孔细胞培养板，共取8个浓度。拉米夫定由于有文献报道，其用于HepG2.2.1.5细胞实验中浓度为1×10^-6mol·L^-1，故以16×10^-6mol·L^-1为起始浓度，依次2倍稀释进行实验。加药后24h，显微镜下观察细胞病变，以细胞病变为指标，完全破坏为4，破坏75％为3，破坏50％为2，破坏25％为1，无病变为0。计算每浓度药液平均细胞病变程度和抑制率。计算半数有毒浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀)。

2)体外抗HBV作用

取培养状态良好的HePG2.2.1.5细胞，接种96孔培养板，每孔100μL，37℃，5％CO₂条件下进行培养，细胞长成单层后加入药物进行实验。阳性药物拉米夫定，取最大无毒质量浓度8×10^-6mol·L^-1进行实验。九味牛黄丸组、改方组、改方1组、改方2组和减方组各组药物以细胞毒性实验所确定的最大无毒质量浓度TC₀)为起始浓度，依次2倍稀释加入96孔细胞培养板，每浓度3孔，共4个质量浓度。加药培养24h后收集培养上清。用PBS缓冲液清洗HepG2.2.1.5细胞6遍，最后一遍收集待检。每孔加入无菌三蒸水100μL，将细胞反复-70℃，37℃冻融5次，每次各10min，将所有收集的细胞液-70℃冻存待检。ELISA法检测HBsAg，HBeAg，Taqman探针实时荧光定量PCR检测HePG2.2.1.5培养上清液中HBV-DNA。

3、统计学处理

所有数据以均数±标准差表示，采用SPSS13.0软件包进行统计分析，各组间两两对比，t检验。

4、结果

1)细胞毒性实验，结果见表5。

表5各药物在HePG 2.2.1.5细胞培养中的细胞毒性

2)体外抗HBV作用

结果见表6。

表6体外抗HBV作用试验结果

注：与对照组比较，*p<0.05，**p<0.01

5、小结

阳性药物拉米夫定组的三个指标HBsAg，HBeAg和HBV-DNA与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05)，九味牛黄丸组、改方1组、改方2组和减方组对HepG 2.2.15细胞HBsAg分泌均有一定抑制作用，且各组药物抗病毒效果并不随着药物浓度增加而增强；其中，本发明组合物组(即改方组)的0.025～0.193g剂量组，九味牛黄丸组的0.041～0.163g剂量组，减方组的0.185g剂量组，改方1组0.023g、0.180g剂量组，改方2组0.024g、0.188g剂量组，对HBsAg分泌与细胞对照组比较差异均有统计学意义。表6第4列是九味牛黄丸对HBeAg含量的影响，结果显示：各组对HepG 2.2.15细胞HBeAg分泌均有一定抑制作用，且本发明组合物组的0.049-0.193g剂量组，减方组的0.093g剂量组，改方1组的0.090g、0.180g剂量组，改方2组的0.094-0.188g剂量组对HBeAg分泌与细胞对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。表6第5列是九味牛黄丸对HBV-DNA含量的影响，结果显示：各组对HepG 2.2.1.5细胞HBV-DNA分泌均有一定抑制作用，且本发明组合物组(改方组)的0.049g、0.097g剂量组，九味牛黄丸组的0.041～0.082g剂量组，减方组的0.093g剂量组，改方1组的0.045g剂量组，改方2组的0.047～0.094g剂量组，对HBV-DNA分泌与细胞对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

由表6第三列数据可得，各组中抗HBsAg作用最强的浓度组及抗HBsAg作用强度分别为：

九味牛黄丸组，0.082g·ml^-1，1.65±0.63*；减方组：0.185g·ml^-1，1.82±0.58*；改方1组：0.023g·ml^-1，1.75±0.48*；改方2组：0.188g·ml^-1，1.67±0.58*；由此，改方组抗HBsAg作用趋势最强。

由表6第五列数据可得，各组中抗乙肝病毒作用最强的浓度组及HBV-DNA

作用强度分别为：九味牛黄丸组，0.041g·ml^-1，2.79×10⁶±2.41×10⁶*；减方组：0.024g·ml^-1，1.12×10⁷±6.70×10⁶；改方1组：0.090g·ml^-1，2.55×10⁷±1.92×10⁷；改方2组：0.094g·ml^-1，4.73×10⁶±5.90×10⁶*；由此，对于HBV-DNA，改方1组和减方组作用趋势最弱，改方组与九味牛黄丸组作用趋势最强，且二者效果相当。

综上，本发明增加了甘青青兰药材100g、调整了红花和獐牙菜的用量，使獐牙菜与绿绒蒿的比例关系为2:1时，在抗HBsAg和抗HBV-DNA时效果最佳，其最佳浓度为0.097g·ml^-1和0.049g·ml^-1，且对肾脏无明显毒性。

以下实施例用于理解本发明，但不限于此。

实施例1

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g。

实施例2

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

实施例3

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花150g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

实施例4

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

实施例5

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。

实施例6

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。

实施例7

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花150g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。

实施例8

一种治疗乙型肝炎的藏药组合物，由以下药材组成：红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。以上药材，除渣驯膏外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀，用渣驯膏加适量水泛丸，干燥即得。

Claims (5)

1.一种治疗乙肝的藏药组合物，其特征在于：由以下药材组成：

红花150g，巴夏嘎100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

2.根据权利要求1的一种治疗乙肝的藏药组合物，其特征在于：由以下药材组成：

红花150g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

3.根据权利要求1的一种治疗乙肝的藏药组合物，其特征在于：由以下药材组成：

红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜150g，绿绒蒿150g，木香100g。

4.根据权利要求1的一种治疗乙肝的藏药组合物，其特征在于：由以下药材组成：

红花200g，巴夏嘎100g，甘青青兰100g，渣驯膏50g，波棱瓜子40g，獐牙菜300g，绿绒蒿150g，木香100g。

5.根据权利要求1-4任一的一种藏药组合物，其特征在于：

用于制备治疗乙型肝炎、清肝热，治疗肝大，治疗肝区疼痛、并减少了肾脏毒性的药物。