CN104818270B

CN104818270B - 焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

Info

Publication number: CN104818270B
Application number: CN201410848780.5A
Authority: CN
Inventors: 张理义; 卢正斌
Original assignee: Changzhou Jie Ao Pathological Diagnosis Technology Co Ltd
Current assignee: Changzhou Gopath Pathological Diagnosis Technology Co ltd; 904th Hospital of the Joint Logistics Support Force of PLA
Priority date: 2014-12-31
Filing date: 2014-12-31
Publication date: 2017-11-10
Anticipated expiration: 2034-12-31
Also published as: CN104818270A

Abstract

本发明属于生物技术领域，涉及焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒。本发明提供了一种焦虑症生物标记物，包括miRNA‑1301、miRNA‑4484、miRNA‑4674、miRNA‑501‑3p、miRNA‑663B和miRNA‑4505，上述标记物的筛选方法以及检测上述标记物含量的试剂盒；同时还提供了一种预测抗抑郁药疗效的生物标记物，包括miRNA‑1301、miRNA‑4484、miRNA‑663B和miRNA‑4505，上述标记物的筛选方法以及检测上述标记物含量的试剂盒。本发明的有益效果在于首次提供了焦虑症生物标记物和预测抗焦虑药物疗效的生物标记物，具有较高的特异性和敏感值，有较高的诊断参考价值。

Description

焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒。

背景技术

广泛焦虑障碍(GAD)是一种以对许多事件或情境过分的和不可控制的担忧为特征的慢性疾病，同时伴有躯体症状，例如坐立不安，肌紧张，易激惹，注意集中困难和睡眠障碍等。GAD在普通人群中的年患病率为0.8–2.7％，已成为主要的公众健康问题。此外，GAD通常还伴有其他精神障碍(如：抑郁、其他焦虑障碍等)和躯体疾病(如：心血管疾病、神经系统疾病等)。50％的焦虑症患者合并其它精神障碍，例如抑郁。

已有研究表明，焦虑症病人若能早期明确诊断并及时得到有效治疗，可以显著改善患者的心理、生理、社会功能以及工作效率，并大大减少治疗费用。然而，目前对焦虑症的诊断仍是依靠其临床症状的主观评估，缺乏有效的客观诊断“金标准”，因而在临床上误诊、误治时有发生。另一方面，由于事先未知患者对哪种药物敏感，临床上不得不用“试错法”给药，这不仅影响患者的治疗效果，而且降低其服药依从性，并造成巨大的资源浪费。因此，有必要研发一种具有敏感性和特异性的生物标志物，来提高焦虑症的诊断科学性，并对其亚型加以区分，以便于有针对性地进行药物干预和开展临床科学研究。

miRNA是一种小分子的非编码RNA，长度为大约为22个碱基。miRNA的生成包括两步剪切：首先细胞核内的miRNA基因转录成pri-miRNA，由细胞核内的酶DroshaRNase将其剪切成miRNA前体pre-miRNA。核内的转运蛋白将pre-miRNA转运到细胞质中，然后在细胞质中的另一种酶Dicer把miRNA前体剪切成双链miRNA，通过部分或完全地与靶mRNA的3'非翻译区(3'UTR)互补配对，阻止其翻译或使其降解，从而起到基因转录后调节的作用。约有50％的蛋白质编码基因受到miRNA的精确调控，多个miRNA分子可以共同调节一个基因的表达，一个miRNA分子亦可调控数百、上千个基因的表达。越来越多的研究证明，在大脑的发育、神经发生、神经元成熟及突触形成过程中，miRNA起关键的调控作用。进一步的研究表明，焦虑症的发生、发展中，miRNA亦起重要作用，并与抗焦虑药物的疗效有相关性。因此，某些MicroRNA可成为焦虑症诊断和预测抗焦虑药物治疗效果的生物标记物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供焦虑症生物标记物。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：焦虑症生物标记物，所述标记物包括miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505。

在本发明的第二方面，提供了上述焦虑症生物标记物的筛选方法，包括以下步骤：取适量受试者血液，从中提取总RNA，并检测提取到的总RNA浓度；通过miRNA芯片筛查出差异性表达的7种miRNA；选取若干例焦虑症患者，设为病例组；选取若干例健康对照者，设为对照组；分别采集血样，提取出单核淋巴细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测，所得数据使用统计学方法进行分析，得到两组间表达水平有显著性差异的miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505。

在本发明的第三方面，提供了一种焦虑症诊断试剂盒，其能够测定血液中miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505的表达水平。

在本发明的一个优选例中，上述试剂盒含有miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505的引物探针。

在本发明的一个优选例中，上述引物探针的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

所述诊断试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。

在本发明的一个优选例中，提供了序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示引物探针的用途，其用于制备焦虑症诊断试剂盒。

在本发明的第四方面，提供了一种预测抗焦虑药物疗效的生物标记物，所述标记物包括miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-663B和miRNA-4505。

在本发明的第五方面，提供了上述预测抗焦虑症药物疗效生物标记物的筛选方法，包括以下步骤：取适量受试者血液，从中提取总RNA，并检测提取到的总RNA浓度；通过miRNA芯片筛查出差异性表达的miRNA；选取若干例焦虑症患者进行临床药物干预随访观察，对选取得到的患者分别施以临床常用的抗焦虑药，在用药前和用药六周后分别采集血样，提取出单核淋巴细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测，所得数据使用统计学方法进行分析，得到用药前后表达水平有显著性差异的miRNA。

在本发明的第六方面，提供了一种预测抗焦虑症药物疗效的生物标记物检测试剂盒，其能够测定血液中miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-663B和miRNA-4505的表达水平。

在本发明的一个优选例中，上述试剂盒含有miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-663B和miRNA-4505的引物探针。

在本发明的一个优选例中，上述引物探针的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

所述试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。

在本发明的一个优选例中，提供了序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示引物探针的用途，其用于制备预测抗焦虑症药物疗效的试剂盒。

本发明的有益效果在于：

1、焦虑症的诊断将不再只是主观经验判断，而是可以通过microRNA这种客观指标检查，进行确诊，提高诊断准确率，简化诊断过程；

2、有望通过miRNA模拟物和拮抗物(修饰寡核苷酸)改变特定miRNA表达水平能够使异常的基因调控网络和信号通路正常化，进而治疗焦虑症；

3、有望通过检测特定miRNA表达水平对焦虑症的用药疗效进行预测；

4、有望通过检测特定miRNA表达水平对焦虑症患者转归及预后情况进行预测；

5、有望通过miRNA模拟物和拮抗物对特定焦虑症某种特定症状进行针对性治疗。

附图说明

图1为焦虑症与抑郁症患者miRNA-26b的ROC曲线。

具体实施方式

一、研究对象

1.病例组：2012年8月至2014年6月于中国人民解放军第102医院门诊以及精神科病房连续收治的病人。入组标准：①符合美国精神疾病诊断和统计手册第4版(DSM-IV)GAD标准；②首发病人或入组前3个月未服抗焦虑药物；③年龄15～80岁。排除标准：①患有其他精神疾病；②患有脑外伤等躯体或神经系统疾病；③有酗酒或药物滥用史；④入组前1个月内有输血史；⑤入组前3个月内使用过无抽搐电休克治疗者(MECT)。共入组76例患者，其中男性19例，女性57例。

2.对照组：来自解放军第102医院工作人员、健康体检人员，除一例性别不匹配外，其余与病例组年龄、性别和民族一一匹配，最大限度排除了性别、年龄和民族等因素带来的误差。纳入标准:①无精神疾病家族史；②近1个月内无重大创伤事件；③近1月内无输血史。共入组39例，其中男性10例，女性29例。

在开展研究前，首先对参加本课题的精神专科医师和研究生进行培训。采用汉密顿焦虑量表(HAMA)、大体评定量表(GAS)在病例入组前、药物治疗3周后、药物治疗6周后分别进行评估。由两位精神科主治医师根据DSM-IV-TR对患者进行诊断，如果出现不一致情况，则请一位精神科主任医师共同讨论后确定诊断。

入组时记录一般情况(姓名、性别、年龄、民族、文化程度、职业、收入水平、婚姻状况、药物成瘾史及精神疾病家族史等)。同样，记录正常对照组一般情况。

本研究获得中国人民解放军第102医院医学伦理委员会批准，所有受试者或受试家属(监护人)均签署知情同意书。。

二、研究方法

①使用量表

汉密顿焦虑量表(HAMA)：由Hamilton于1959年编制，是目前最经典的焦虑量表，能够很好地衡定治疗效果，现已在临床和研究中广泛应用。该量表主要用于评定神经症及其他病人焦虑症状的严重程度，共有14个条目，分为5级评分(0～4分)，能够较好地反映病情严重程度。本研究中使用HAMA量表的中文版本进行评估，该版本经信效度检验分析，达到心理测量学标准。本文使用HAMA总分进行统计分析。

大体评定量表(GAS)：大体评定量表是评价各类精神疾病症状的量表，在同类量表中是应用最广泛的一种。本研究使用的是美国心理卫生研究所(NIMH)1976年的Spitzer版本，共有10级评定分(1～10分)，根据患者临床症状进行评定。总分越高，说明病情越轻。本研究中使用GAS量表的中文版本进行评估，该版本经信效度检验分析，达到心理测量学标准。

临床疗效总评量表(CGI)：临床疗效总评量表由WHO设计，用于国际精神疾病试点调查(IPSS)的研究，现用以评定临床疗效，适用于任何精神科治疗和研究对象。量表分为病情严重程度(severity of illness，SI)，疗效总评(global improvement，GI)和疗效指数(efficacy index，EI)三个分量表。本研究中使用CGI量表的中文版本进行评估，该版本经信效度检验分析，达到心理测量学标准。本研究中使用疾病严重程度分(severity ofillness，SI)和疗效总评分(global improvement，GI)进行统计分析。

②资料收集

入组时记录一般情况(姓名、性别、年龄、民族、文化程度、职业、收入水平、婚姻状况、药物成瘾史及精神疾病家族史等)。由3名精神科主治医师或医师使用汉密顿焦虑量表(HAMA)和临床疗效总评量表(CGI)于用药前及用药6周以上对病例组被试进行评定。评定前，所有参与研究人员进行统一培训，统一方法等，标准化施测过程。其中HAMD使用总分和因子分统计，CGI使用疗效总评分(global improvement,GI)统计。

③药物干预

在76例病例中，随机选取11例进行临床药物干预随访观察。对其采用每日服用文拉法辛(剂量范围150mg-225mg)、舍曲林(剂量范围50mg-150mg)、氯硝西泮(剂量范围1mg-4mg)口服治疗。

④主要试剂和耗材

RNA提取试剂盒：miRNeasy血清/血浆提取试剂盒(德国凯杰公司，货号NO.217184)；外参试剂：miRNeasy血清/血浆外参(德国凯杰公司，货号.NO.219610)；荧光定量PCR引物：TaqMan MicroRNA Assays(美国ABI公司)；荧光定量PCR试剂：TaqMan通用混合试剂盒Ⅱ(美国ABI公司，货号NO.121207)；反转录试剂盒：TaqMan MicroRNA反转录试剂盒(美国ABI公司，货号NO.1302146R)。

扫描仪(仪器来源：Affymetrix，型号：Scanner 3000)；杂交炉(仪器来源：Affymetrix，型号：Hybridization Oven 640)；洗涤工作站(仪器来源：Affymetrix，型号：Fluidics Station 450)；2100(仪器来源：Agilent，型号：G2939A)；2100振荡器(仪器来源：Agilent，型号：9600)；NanoDrop(Thermo，2000)；PCR仪(ABI，9700)；离心机(eppendorf，5418)；浓缩仪(eppendorf，5301)；离心机(其林贝尔，LX-200)；离心机-1(其林贝尔，LX-300)；振荡器-1(其林贝尔，GL-88B)；磁力搅拌器(其林贝尔，GL-3250B)；金属浴-2(博日，HB-100)；金属浴-3(博日，CHB-100)；电热恒温培养箱(精宏实验设备，XMTD-8222)；冰箱(荣事达，BCD-265F)；ABI9700型PCR仪(美国ABI公司)；天美CT14RD型台式高速冷冻离心机(上海天美生化仪器设备工程有限公司)；NanoDrop1000超微量紫外分光光度计(附电脑1套)(美国Thermo公司)；ABI7900HT Fast Read-Time PCR System(附电脑1套)(美国ABI公司)；WH-2微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)；JS-400A恒温金属浴(上海培清科技有限公司)；DK-8D数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)；SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台(苏净净化设备有限公司)；-81℃超低温冰箱(日本三洋公司)；

⑥基因芯片筛查

用AffymetrixmiRNA 3.0芯片,对GAD患者3人，正常对照3人共6个样本检测和分析。样品总RNA利用NanoDrop ND-2100(Thermo Scientific)定量并经Agilent 2100(Agilent Technologies)检测RNA完整性。RNA质检合格后，样本的标记、芯片的杂交以及洗脱参照芯片标准流程。首先，总RNA经过Ploly A加尾，再进一步用生物素标记。标记好的RNA和芯片杂交，洗涤和染色后利用AffymetrixScanner 3000(Affymetrix)扫描得到原始图像。数据分析：将原始数据导入Expression Console软件(version 1.3.1,Affymetix)，利用RMA的方法进行标准化后得到的结果，包含原始信号值，标准化信号值，检出情况以及详细的注释信息。在筛选差异miRNA之前，先进行探针过滤，每一个探针至少有一个样品标记为“Detected”则保留用于后续筛选。对生物学重复分析，则利用T检验得到的差异显著性P值和标准化信号值的差异倍数Fold change值进行筛选，标准为Fold change值≥2.0且P值≤0.05。对于没有生物学重复的分析，仅利用差异倍数Fold change值进行筛选，标准为Fold change值≥2.0。

⑦总RNA抽提与荧光定量PCR：对芯片筛查结果中的7种差异表达的miRNA进行后续的PCR验证。所有被试使用EDTA抗凝管采肘静脉血5ml，采血后轻轻摇动抗凝管使抗凝剂与血液混匀，所有血样在采血后2小时内进行RNA提取。先将Ficoll-Paque PLUS液室温(15-20℃)放置，所有离心过程也应在室温完成。取2mlEDTA抗凝血与等体积平衡液在15ml离心管中用移液管(或移液器)充分混匀(总体积4ml)。用针管抽取3mlFicoll Paque PLUS溶液到新的15ml离心管中，轻轻用移液管(或移液器)沿管壁缓慢滴加准备好的样品(4ml)于分层液面上，注意保持清楚的液面。室温(18-20℃)以400×g离心30-40分钟。用新移液管(或移液器)吸取最上层的血浆与血小板。将单核淋巴细胞置于冻存管中，-80℃保存备用。由实验员每天定时记录冰箱温度。TRIzol(,USA)法提取出血液单核淋巴细胞中的总RNA(包括miRNA)，具体操作按照试剂盒说明书进行。按照RNA逆转录试剂盒(TaqMan RNA反转录试剂盒，美国ABI公司)说明书进行逆转录反应。反应总体积为15μL(总RNA5μL，TaqManMicroRNA Assay 3μL,核酸酶free水4.16ul，RNase抑制剂0.19μL，缓冲液1.5μL，Multiscribe逆转录酶1μL和dNTP0.15μL)，在不同温度下(16℃，42℃，85℃，4℃)进行不同时长(30mins，30mins，5mins，10mins)反应。实时荧光定量PCR按照TaqMan试剂盒(TaqMan通用混合试剂盒II，美国ABI公司)说明书进行。PCR扩增体系总体积为10μL，反应共40个循环。PCR反应Ct值通过7900实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)测定，每个反应重复两次。使用SDS 2.4和DataAssist v3.0软件进行数据读取和分析，在剔除掉不合格样本后选择RNU48为内参进行数据标准化，将病例组与对照组进行miRNA差异表达分析。

实时定量PCR部分由美国GOPATH公司常州基地完成。

⑧统计学处理

全部数据使用DataAssist v3.0、SPSS v17.0和Graphpad Prism5.01(GraphpadSoftware Inc.,San Diego,CA,USA)统计软件进行统计分析。以miRNA与内参RNU48之间阈值环(threshold cycle,Ct)之差计算ΔCT值。使用Wilcoxon秩和检验分别对比分析7种miRNA病例组与对照组是否有差异。以miRNA与外参miR-39之间阈值环(threshold cycle,Ct)之差计算ΔCt值，以2-ΔCt表示miRNA的相对表达水平；使用Mann-Whitney U秩和检验分别对比分析用药前、用药3周和用药6周后与对照组的miRNA相对表达水平；使用单变量重复测量方差检验和LSD检验分析病例组miRNA表达水平在用药前、用药3周和用药6周后之间的多重比较及两两比较；使用Spearman相关分析HAMA、GAS和CGI量表分与miRNA表达水平的相关性；利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC曲线)及曲线下面积(Area Under The Curve，AUC)评价差异性表达miRNA的诊断价值。以P﹤0.05(two-tailed)为差异有统计学意义。

三、研究结果

1、病例组基因芯片筛查结果显示，有7种成熟miRNA在病例组和对照组间存在差异表达，其中2种下调，5种上调。见表1。

表1 病例组差异表达的7种miRNA

用于诊断焦虑症的试剂盒包括如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物探针，可由Life Technologies公司购得；还可以有可以有相应PCR技术所需的常用试剂，如：Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2和DEPC水等，这些都是本领域技术人员熟知的；另外还可以含有标准品和/或对照品。

2、对病例组与对照组7种miRNA表达水平采用wilcoxon秩和检验，结果如表2所示:与正常人相比焦虑症患者中6种miRNA(miR-1301,miR-4484,miR-4674,miR-501-3p,miR-663B,miR-4505)表达水平显著上调。见表2。

表2 焦虑症患者与正常人miRNA表达水平比较()

用于预测抗焦虑药物疗效的试剂盒包括如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示的引物探针，可由Applied Biosystems公司购得；还可以有可以有相应PCR技术所需的常用试剂，如：Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等，这些都是本领域技术人员熟知的；另外还可以含有标准品和/或对照品。

3、焦虑症与抑郁症中miRNA-26b的ROC曲线显示，miR-26b的ROC曲线下面积为0.626(P＝0.031)，临界值为0.39；敏感度为0.63，特异度为0.67。ROC曲线下面积越大，表明miRNA对抑郁症和焦虑症的诊断区分度较大。见附图1。

临床上，焦虑症和抑郁症常常并发，而且存在诊断的有限性问题，因此，如果以抑郁为主，伴发焦虑，会优先诊断为抑郁症，因此，焦虑症和抑郁症的鉴别诊断对临床治疗方法的选择和疗效至关重要，此处以miRNA-26b作为二者的鉴别诊断指标对于指导临床实践意义重大。

4、用药3周后，病例组miRNA的表达水平与用药前、用药6周后相比无明显差异(P>0.05)；但用药6周后与用药前相比，miR-1301、miR-4484、miR-663B和miR-4505表达水平有显著差异(P<0.05)。见表3。

表3 病例组用药前后miRNA相对表达水平变化比较(ΔCT)

注：与用药前相比，*P<0.05

5、has-miR-1301、has-miR-4484、has-miR-4674、has-miR-501-3p、has-miR-663B等5个miRNA的靶基因的合集为178个；靶基因参与调控转录过程及其调控、神经元移行、中枢神经系统投射神经元轴突发生、轴突延伸、树突形态发生等生物学过程(P﹤0.05)，其中与中枢神经系统功能相关的生物学过程见表4；

表4 与中枢神经系统有关的GO生物学过程的显著性富集条目

以cytoscape软件构建miRNA-基因网络图描述miRNA与其靶基因之间的关系。所涉及的KEGG信号通路包括Wnt信号通路、钙信号通路、MAPK信号通路、GnRH信号通路、VEGF信号通路、长时程增强、mTOR信号通路、Gap junction等与焦虑症存在密切联系，见表5。

表5 焦虑症miRNA靶基因的KEGG信号通路的显著性富集条目

表6 miRNA引物探针信息及目标序列

本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。

序列表

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>1

<211>24

<212>RNA

<213>人工序列

<400>1

UUGCAGCUGC CUGGGAGUGA CUUC

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>2

<211>20

<212>RNA

<213>人工序列

<400>2

AAAAGGCGGG AGAAGCCCCA

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>3

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<400>3

GAUUUCAGUG GAGUGAAGUU C

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>4

<211>22

<212>RNA

<213>人工序列

<400>4

AAUGCACCCG GGCAAGGAUU CU

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>5

<211>22

<212>RNA

<213>人工序列

<400>5

GGUGGCCCGG CCGUGCCUGA GG

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>6

<211>18

<212>RNA

<213>人工序列

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AGGCUGGGCUGGGACGGA

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>1

<211>24

<212>RNA

<213>人工序列

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UUGCAGCUGC CUGGGAGUGA CUUC

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

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<212>RNA

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AAAAGGCGGG AGAAGCCCCA

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

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<210>3

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<400>3

GAUUUCAGUG GAGUGAAGUU C

<110>张理义；常州杰傲病理诊断技术有限公司

<120>焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

<160>6

<210>4

Claims

1.焦虑症生物标记物，所述标记物包括miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505。

2.一种焦虑症诊断试剂盒，其能够测定血液中miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505的表达水平。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于含有miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505的引物探针，所述引物探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

4.一种引物探针的用途，所述引物探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，其用于制备焦虑症诊断试剂盒。

5.预测抗焦虑药物疗效的生物标记物，所述标记物包括miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-663B和miRNA-4505。

6.一种预测抗焦虑症药物疗效的生物标记物检测试剂盒，其能够测定血液中miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-663B和miRNA-4505的表达水平。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于含有miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-663B和miRNA-4505的引物探针，所述引物探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

8.一种引物探针的用途，所述引物探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示，其用于制备预测抗焦虑症药物疗效的试剂盒。