CN104782675A - 新型植物病害抗生剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
新型植物病害抗生剂及其制备方法，是应用生物发酵工程技术及生化工程技术汲取三七、龙胆草、银柴胡、苦参、大黄、升麻、蒲公英等中药原料中的有效成分，并按特定工艺和配方配制成的一种新型多功效植物病害抗生剂。该抗生剂能同时有效抗杀引起植物病害的真菌、细菌和病毒等致病微生物，但对植物组织培养、细胞工程培养中的外植体和细胞以及大棚中的作物幼苗和外植体的生长均无危害作用。而且无论在生产还是使用过程中，均无污染物产生。是目前在组织培养和细胞培养中广泛使用的同类药物制剂的理想替代产品。本发明具有效果好，无毒副作用的特点。能安全、高效、快速、广泛地杀灭由致病微生物引起的植物、中药材、反季果蔬的植物病害，是国家社会种植业急需的新型植物病害抗生剂产品，市场前景非常广阔。
Description
技术领域
本发明属于应用生物发酵工程技术和生化工程技术的现代中药制造技术领域，特别涉及以中药材为原料的新型植物病害抗生剂及其制备方法。
背景技术
新型植物病害抗生剂具有安全、高效、快速的特点，还具有能同时抗杀多种引起植物病害的真菌、细菌和病毒等致病微生物的功能。可广泛用于抗杀植物组织培养，细胞培养和大棚栽培经济价值高的中药材和反季果蔬的植物病害。它优于目前在组织培养，细胞培养和大棚中使用的抗菌农药与制剂。且杀菌功效也优于目前广泛使用的用于植物组织培养，细胞培养及美国PPM抗杀剂产品。
新型植物病害抗生剂具有以下的优势：①用量小；②对植物外植体、愈伤组织和细胞的损伤小；③无残留。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型植物病害抗生剂及制备方法。以求用该抗生剂替代市场上现有的用于植物抗菌素，来抗杀引起植物病害的真菌、细菌和病毒等致病微生物，并对植物细胞工程培养中的外植体和细胞以及大棚中的作物幼苗和外植体均无危害作用。
本发明的具体工艺制备步骤是这样的：
步骤一，先将清洗好的主原料三七、龙胆草、银柴胡分别放入蒸煮器里浸泡、煮沸，之后将三种所得药液经过滤、灭菌后按1∶4∶2重量比例混合均匀制成培养液，然后在培养液中按特定“容积/重量”配比加入(NH4)2HPO4、KH2PO4、MgSO47H2O、NaC1、FeSO47H2O、蔗糖和葡萄糖；再将培养液进行接种培养发酵，从而产生能杀灭致病微生物的核心抗生液，再对该抗生液进行灭菌处理获得主原料提取液---“生物发酵抗生液”；
生物发酵抗生液的发酵菌种为：“米曲霉Aspergillus oryzae”。
在该步骤所述的接种培养发酵操作中，每1000ml培养液加入(NH4)2HPO40.5g～1g，KH2PO40.3g～0.8g，MgSO40.03g～0.08g，NaC10.5g～1.5g，FeSO40.02g～0.05g，蔗糖2g～6g和葡萄糖0.5g～1.5g；培养温度30±1℃，培养时间7～14天。
步骤二，将清洗好的辅原料苦参、大黄、升麻、蒲公英，分别放入蒸煮器里浸泡、煮沸，之后过滤、灭菌处理获得四种辅料提取液。
步骤三，将步骤一和步骤二所获得的生物发酵抗生液、苦参、大黄、升麻、蒲公英提取液按3∶2∶2∶1∶1的重量配比混合均匀。
由上述制备方法制成的“新型植物病害抗生剂”，是以中药材为原料，应用生物发酵工程技术及生化工程技术制备的一种多功效植物病害抗生剂，能同时有效抗杀引起植物病害的真菌、细菌和病毒等致病微生物，且对植物细胞工程培养中的外植体和细胞以及大棚中的作物幼苗和外植体的生长均无危害作用，安全可靠。而且无论在生产及使用过程中，均无污染物产生。是目前在组织培养和细胞培养中广泛使用的同类药物制剂的理想替代产品。
本发明具有效果好，无毒副作用的特点。能安全、高效、快速、广泛地杀灭由致病微生物引起的植物、中药材、反季果蔬的植物病害，是国家社会种植业急需的新型植物病害抗生剂产品，市场前景非常广阔。
附图说明
图1为本发明实施例的工艺流程图
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施例进行说明：
参考附图1，在本发明实施例中，首先将主原料三七、龙胆草、银柴胡分别洗涤、浸泡24小时后，放入蒸煮器里按10％的原材料加入90％的纯净水煮沸，之后将三种所得药液经过滤、灭菌后按1∶4∶2重量比例混合均匀制成培养液，然后在每1000ml培养液中加入(NH4)2HPO40.8g，KH2PO40.5g，MgSO40.05g，NaCl 1g，FeSO40.03g，蔗糖3g和葡萄糖1g。分装在5瓶500ml三角瓶中，每瓶200ml。高压灭菌，冷却后，再接种“米曲霉Aspergillus oryzae”并培养发酵，培养温度30±1℃，培养时间12天。从而产生能杀灭致病微生物的核心抗生液，再对该抗生液进行灭菌处理获得主原料提取液---“生物发酵抗生液”；
然后，将辅原料苦参、大黄、升麻、蒲公英分别洗涤、浸泡24小时，放入蒸煮器里浸泡、煮沸，之后过滤、灭菌处理获得四种辅料提取液。最后，再将所获得的生物发酵抗生液、苦参、大黄、升麻、蒲公英提取液按3∶2∶2∶1∶1的重量配比混合均匀，灭菌后获得新型植物病害抗生剂。
本发明的实施例是应用生物发酵工程技术及生化工程技术汲取三七、龙胆草、银柴胡、苦参、大黄、升麻、蒲公英等中药原料中的有效成分，所配制成的这种多功效新型植物病害抗生剂，能同时有效抗杀引起植物病害的真菌、细菌和病毒等致病微生物，但对植物细胞工程培养中的外植体和细胞以及大棚中的作物幼苗和外植体均无危害作用。对由致病微生物引起的植物、中药材、反季果蔬的植物病害，能安全、高效、快速、广泛地予以杀灭，是当前种植业急需的新抗生剂产品，也是目前在组织培养和细胞培养中广泛使用的同类药物制剂的理想替代产品。
本发明的实施例已经用于植物组培和细胞培养，如豆科植物、兰科植物、木兰科植物和桦木科类植物等的植物病害处理。用于三七，铁皮石斛，反季黄瓜，西红柿，彩椒等反季果蔬及名贵中药材等。
以下是三个具体应用案例：
1.种子消毒
植物种子消毒采用双因素处理，浓度梯度为1％，2％，3％，时间采用分别消毒3min，5min，8min，12min，20min寻找最优消毒浓度及时间。该药现配现用，需用无菌水配，每次种子消毒后都要用无菌水浸泡洗涤三次，不要使抗生剂残留。种子消毒标准既要彻底，又不影响其发芽率，只有看种子萌发后是否染菌，才能辨别。
具体设计表格如下：
| 1％ | 2％ | 3％ | |
| 3min | 1 | 2 | 3 |
| 5min | 4 | 5 | 6 |
| 8min | 7 | 8 | 9 |
| 12min | 10 | 11 | 12 |
| 20min | 13 | 14 | 15 |
共设计15组实验，每组实验消毒20粒种子，播种5瓶。
2.外植体(茎段)消毒
茎段消毒采用双因素试验，浓度为1％，2％，3％，消毒时间分别为3mi n，5min，8min，12min，20min寻找最优消毒浓度及时间。该药现配现用，需用无菌水配，每次茎段消毒后都要用无菌水浸泡洗涤三次，不要使抗生剂残留。茎段消毒的标准，是用肉眼观察茎段被抗生剂处理后，茎段嫩叶和茎尖不被褐化为度，对茎段的消毒还要做重复试验两次，即待上述方法完成后，隔三天和八天再重复一次上述处理。主要目的是要杀死对比较顽固的、未死亡的孢子，待其萌发成菌丝体后，再行杀灭。
| 1％ | 2％ | 3％ | |
| 3min | 1 | 2 | 3 |
| 5min | 4 | 5 | 6 |
| 8min | 7 | 8 | 9 |
| 12min | 10 | 11 | 12 |
| 20min | 13 | 14 | 15 |
共设计15组实验，每组接5瓶，每瓶接5个茎段。
3.大棚栽培
大棚栽培，配置量为1∶800，1∶900，1∶1000三个浓度，喷洒5平方米的苗床，加一块5m2正常培养为CK。共四块试验田。喷洒对象为刚出瓶的小苗，培养期为6个月，观察其苗病害情况。消毒的标准，是用肉眼观察小苗被抗生剂处理后，苗叶不被褐化为度。
| 1∶800，5m2 | 1∶900，5m2 | 1∶1000，5m2 | Ck，5m2 |
备注：每10天喷洒一次，喷药当天不可浇水。
Claims (5)
1.新型植物病害抗生剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
步骤一，先将清洗好的主原料三七、龙胆草、银柴胡分别放入蒸煮器里浸泡、煮沸，之后将三种所得药液经过滤、灭菌后按规定的重量比例混合均匀制成培养液，然后在培养液中按特定“容积/重量”配比加入(NH4)2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl、FeSO4、蔗糖和葡萄糖；并将培养液进行接种培养发酵，从而产生能杀灭致病微生物的核心抗菌液，再对该抗菌液进行灭菌处理获得主原料提取液---“生物发酵抗生液”；
步骤二，将清洗好的辅原料苦参、大黄、升麻、蒲公英，分别放入蒸煮器里浸泡、煮沸，之后过滤、灭菌处理获得四种辅料提取液；
步骤三，将步骤一和步骤二所获得的主、辅原料提取液按重量配比混合均匀。
2.根据权利要求1所述的新型植物病害抗生剂制备方法，其特征在于：步骤一所述制成培养液的三七、龙胆草、银柴胡三种提取液按重量混合比例为三七1份、龙胆草4份、银柴胡2份。
3.根据权利要求1所述的新型植物病害抗生剂制备方法，其特征在于：在步骤一接种培养发酵操作中，每1000ml培养液加入(NH4)2HPO4 0.5g～1g，KH2PO4 0.3g～0.8g，MgSO4 0.03g～0.08g，NaCl 0.5g～1.5g，FeSO40.02g～0.05g，蔗糖2g～6g和葡萄糖0.5g～1.5g；培养温度30±1℃，培养时间7～14天。
4.根据权利要求1所述制备方法制成的新型植物病害抗生剂，其特征在于，该抗生剂由下列原料按重量配比混合制成：生物发酵抗生液3份、苦参提取液2份、大黄提取液2份、升麻提取液1份、蒲公英提取液1份。
5.根据权利要求4所述的新型植物病害抗生剂，其特征在于：生物发酵抗生液的发酵菌种为：“米曲霉Aspergillus oryzae”。
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