CN104725367B - 四氢苯并噻唑‑7‑酮肟药物，制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及四氢苯并噻唑‑7‑肟化合物，该药物的结构式包括四氢苯并噻唑‑7‑酮肟的顺式异构体及反式异构体：药物还包括上述顺反异构体药学上可接受的盐(HX)。具体制备步骤为2‑溴代‑1,3‑环己二酮(原料1)和硫代酰胺在乙醇作溶剂的条件下回流过夜，得到2‑取代四氢苯并噻唑‑7‑酮(中间体2)；将中间体2与盐酸羟胺在冰乙酸钠作用下无水乙醇溶剂中回流，得到2‑取代四氢苯并噻唑‑7‑酮肟(中间体3)；将中间体3和溴丙炔溶解在无水乙腈中，在氢化钠的作用下，搅拌反应得到2‑取代四氢苯并噻唑‑7‑酮肟醚(中间体4)；将中间体4在CuI作催化剂与叠氮中间体发生1,3‑偶极环加成反应得到四氢苯并噻唑‑7‑酮肟类药物。并将其应用于制备治疗抗胃癌药物上。
Description
技术领域
本发明主要关于一种四氢苯并噻唑-7-酮肟类化合物抗肿瘤方面的生物活性，并对其进行合成、结构鉴定、活性测试及分析，最终确定此类化合物具有一定的体外抗胃癌活性。
背景技术
据世界卫生组织(WHO)在《世界癌症报告2014》中研究表明，恶性肿瘤已成为危害人类公共健康的主要问题，其中肺癌、乳腺癌和胃癌在全球范围内的发病率和死亡率一直是排在前三。自20世纪70年代以来，我国恶性肿瘤发病率和死亡率呈现出持续增长趋势。全国肿瘤登记中心的陈万青对我国肿瘤登记数据及第三次全国死因调查资料的汇总和分析发现，我国恶性肿瘤发病率在近20年间呈明显上升趋势，特别是后10年变化尤其显著，目前每年肿瘤新发病例约309万，死亡196万，肺癌、女性乳腺癌、胃癌、肝癌和食管癌是最常见的恶性肿瘤，占肿瘤死亡占全部死因的1/4(陈万青,郑荣寿,曾红梅,邹小农,张思维,赫捷.2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析中国肿瘤,2015,24,1-10)。面对如此严峻的抗癌形势，研究及开发抗肿瘤的新型药物是医药工作者的重要任务。
苯并噻唑类化合物是一类具有广泛生物活性的含氮、硫杂环化合物，在农业生产上可用于抗真菌(如：2-氨基-4-氯代苯并噻唑)、除草(例如：苯噻草胺)、植物生长调节剂(如2-三氯甲基苯并噻唑)等。例如侯仲柯等在《精细化工中间体》上报道了“N-苯并噻唑N’-特丁基酰肼类化合物的合成及生物活性研究”(2002年第32卷，第4期，19-20页)，合成了一系列苯并噻唑基酰胼类化合物并进行了杀虫、杀菌生物活性测试，发现该类化合物通过影响和干扰害虫的正常生理活动来控制病害虫的发生。苯并噻唑类化合物在材料领域可用于橡胶硫化促进剂、紫外吸收剂、液晶显示材料、电致发光材料以及突光探针等。苯并噻唑类化合物在医学上可用于抗菌(如头孢噻肟钠)、抗结核病、抗寄生虫、抗风湿病和抗病毒等广泛的生物活性。李娜等通过化学合成得到2-氰基-3-(4-甲基苯并[d]噻唑-2-氨基)-3-苯基丙烯酸酯类化合物，发现其对黄瓜花叶病毒及烟草花叶病毒具有治疗活性，抑制率达到56.31％(李娜,魏学,范会涛,毕亮,李向阳,杨松,胡德禹,宋宝安.2-氰基-3-(4-甲基苯并[d]噻唑-2-氨基)-3-苯基丙烯酸酯类化合物的合成及抗病毒活性,有机化学，2011年第31卷第8期1300-1311页)。孙芳在硕士学位论文中对治疗帕金森药物普拉克索的关键中间体2,6-二氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻唑进行了化学合成，(长江大学硕士学位论文，2,6-二氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻唑的合成工艺研究，2012)。郦剑勇设计合成了一系列苯并噻唑类化合物，并筛选了它们的抗肿瘤活性，发现3-(4-(benzo[d]thiazol-2-y1)-1-phenyl-1H-pyrazol-3-y1)phenyl acetate(DPB-5)具有较高的细胞毒性，其作用机制是通过ROS介导的AIF信号通路诱导细胞凋亡(浙江大学博士学位论文，苯并噻唑抗肿瘤药物的合成、筛选及其作用机理，2010)。综上所述，苯并噻唑的衍生物具有良好的生物活性，而且随着越来越多的苯并噻唑抗肿瘤药物的研发，苯并噻唑己经成为抗肿瘤药物研究中一个不可缺少的母环。
四氢苯并噻唑类杂环的合成方法主要包括以下两大类：一是通过分子间反应合成苯并噻唑衍生物，最常用的原料是邻氨基硫酚，目前较常见的是将其与醛、酰氯、酯、羧酸、酸酐和腈等作用得到目的物，反应过程中大多需要使用催化剂，如多聚磷酸、多聚磷酸酯//五氧化二磷、甲磺酸和三氯化磷等。二是通过分子内自身环化合成苯并噻唑衍生物，采用硫代酰胺或硫脲以及相应衍生物作为原料，由于硫代酰胺或硫脲可以根据实际需要自行设计，故产物中的取代基可选择范围更大、结构多样，但缺点是反应需多步完成，反应时间一般较长。例如，侯益华等研究了2-氨基四氢苯并噻唑和芳香醛的缩合反应，合成了5个N-四氢苯并噻唑亚胺化合物，再分别与巯基乙酸反应制备了5个4-噻唑烷酮类化合物(侯益华,白银娟,路军,杨秉勤,马怀让.N-四氢苯并噻唑亚胺的合成及反应研究,西北大学学报(自然科学版),1999年第29卷第1期27-29页)。李凯以4-苯二甲酰亚胺环己醇为起始原料，经Ca(ClO)2/TEMPO/NaBr体系氧化、HBr/H2O2体系溴代、Hantzsch环合、水解合成抗帕金森药物盐酸普拉克索的重要中间体2,6-二氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻唑(李凯,牛杰.2,6-二氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻唑的合成工艺改进，浙江化工，2013年第44卷第9期4-6页)。
文献研究表明，四氢苯并噻唑是一类具有中药生物活性的化合物，已在农药、医药和材料领域重要用途，但利用该类化合物作为抗胃癌药物用途未见文献报道。本专利旨在通过有机合成方式制备四氢苯并噻唑-4-酮肟醚类化合物，开发其作为抗胃癌药物的用途，以药理学实验和计算化学方式探明其抗胃癌机制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种四氢苯并噻唑-7-酮肟药物，该药物的结构式为：
该结构式包括四氢苯并噻唑-7-酮肟的顺式异构体及反式异构体；
该药物还包括药学上可接受的盐(HX)，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、草酸盐或硫酸盐等。
本发明还公开了一种四氢苯并噻唑-7-酮肟衍生物药物，该药物的结构式为：
其中，该衍生物的结构式包括顺式异构体及反式异构体，R1为烷基(如甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基、苄基等)，R2为烷基或芳基(如甲基、乙基、苄基、苯基、对氯苯基等)，例如 中的任意一种。
进一步优选为R1为CH3-、R2为
本发明的药物还包括含四氢苯并噻唑-7-酮肟的药物的组合物，该组合物包括上述药物的任意一种，以及药学上可接受的辅料或载体。
上述中四氢苯并噻唑-7-酮肟药物的制备方法如下
实验材料
实验试剂
1,3-环己二酮(分析纯，上海晶纯实业有限公司)、硫代乙酰胺(分析纯，上海晶纯实业有限公司)、溴单质(分析纯，天津市光复精细化工研究所)、盐酸羟胺(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、醋酸钠(分析纯，上海晶纯实业有限公司)、石油醚(沸程60-90℃，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、乙酸乙酯(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限司)、乙腈(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、乙醇(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、无水硫酸钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、吡啶(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、氢化钠(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、碘化亚铜(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、炔丙基溴(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、薄层预制板(青岛高达化工有限公司)、硅胶GF-254(青岛高达化工有限公司)。
实验仪器
ZXZ-4型旋片式真空泵(临海市谭氏真空设备有限公司)、DZF-6020型真空干燥箱(上海新苗医疗器械制造有限公司)、SHB-IIIA循环水式多用途真空泵(上海豫康科教仪器设备有限公司)、CL-4型平板磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司)、EYELA SB-1100旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)、FA2104B分析天平(上海越平科技仪器有限公司)、XRC-1型微熔点测定仪(四川大学科仪厂)、DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂)、GZX-9240MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、ZF-6型三用紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)
制备过程
合成路线
2-溴代-1,3-环己二酮(原料1)和硫代酰胺在乙醇作溶剂的条件下回流过夜，得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮(中间体2)；将中间体2与盐酸羟胺在冰乙酸钠作用下无水乙醇溶剂中回流，得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮肟(中间体3)；将中间体3和溴丙炔溶解在无水乙腈中，在氢化钠的作用下，搅拌反应得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮肟醚(中间体4)；将中间体4在CuI作催化剂与叠氮中间体发生1,3-偶极环加成反应得到四氢苯并噻唑-7-酮肟类药物(目标产物5)。合成路线如下：
合成条件：(a)R1C(S)NH2,pyridine,80℃,2小时；(b)NH2OH-HCl,吡啶,110℃,2小时；(c)BrCH2C≡CH,K2CO3,CH3CN,80℃,1小时；(d)R2N3,CuI,20℃,10分钟。
具体包括如下步骤：
1)将2-溴环己烷-1,3-二酮(原料1)和烷基硫代酰胺R1C(S)NH2溶于吡啶溶液，在氮气保护下，搅拌、混匀，加热至70-90℃，反应1.5-3h后，洗涤、真空除吡啶，得到产物，将产物用二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，纯化后得到2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮(中间体2)；
2)在氮气保护下，将中间体2在干燥的吡啶中溶解，加热至100-120℃，搅拌1.5-3h后冷却至常温后倒入冰-水混合物中，得到白色沉淀物，过滤沉淀物并干燥，分离，得到2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮肟的顺反异构体混合物(中间体3)，为白色固体，分离纯化得到反式异构体(中间体3a)和顺式异构体(中间体3b)；
3)将中间体3溶解于无水乙腈中，加入无水碳酸钾和炔丙基溴，在70-90℃下搅拌0.5-1.5h，除去溶剂乙腈，将产物用乙酸乙酯萃取后，干燥，真空浓缩，得到黄色粗产物，分离纯化得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮肟醚(中间体4)；
4)取中间体4和叠氮化合物(R2N3)在研钵中混合均匀，加入碘化亚铜，室温下研磨10分钟直到反应物完全消耗，将反应混合物用冷却水稀释，加乙酸乙酯提取有机物，经无水硫酸钠干燥，蒸干后得到白色固体，即为四氢苯并噻唑-7-酮肟药物。
合成步骤中，中间体2可用的溶剂为甲醇、乙醇、甲苯、吡啶，其中以吡啶为溶剂的产率最高；中间体3可用的溶剂为甲苯、苯、四氢呋喃、乙腈、二氧六环等，其中以乙腈为溶剂的产率最高；目标产物的萃取溶剂可为氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇、甲醇等，以乙酸乙酯的提取产率最高，杂质较少，优选乙酸乙酯。
上述的步骤1)中，原料1与硫代酰胺的摩尔比为1：1-1.3；步骤3)中，中间体3、无水碳酸钾、炔丙基溴的摩尔比为1：1.2-2.5：1-1.5；步骤4)中，中间体4、叠氮、碘化亚铜的摩尔比为：10：8-15：0.8-1.5。
进一步优选为步骤1)中，原料1与硫代酰胺的摩尔比为1：1；步骤3)中，中间体3、无水碳酸钾、炔丙基溴的摩尔比为1：2：12；步骤4)中，中间体4、叠氮、碘化亚铜的摩尔比为：10：10：1。
本发明还公开了一种四氢苯并噻唑-7-酮肟衍生物药物的制备方法，包括如下步骤，一种四氢苯并噻唑-7-酮肟药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将2-溴环己烷-1,3-二酮(原料1)和烷基硫代酰胺R1C(S)NH2溶于吡啶溶液，在氮气保护下，搅拌、混匀，加热至70-90℃，反应1.5-3h后，洗涤、真空除吡啶，得到产物，将产物用二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，纯化后得到2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮(中间体2)；
2)在氮气保护下，将中间体2在干燥的吡啶中溶解，加热至100-120℃，搅拌1.5-3h后冷却至常温后倒入冰-水混合物中，得到白色沉淀物，过滤沉淀物并干燥，分离，得到2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮肟的顺反异构体混合物(中间体3)，为白色固体，分离纯化得到反式异构体(中间体3a)和顺式异构体(中间体3b)；
3)将中间体3溶解于无水乙腈中，加入无水碳酸钾和炔丙基溴，在70-90℃下搅拌0.5-1.5h，除去溶剂乙腈，将产物用乙酸乙酯萃取后，干燥，真空浓缩，得到黄色粗产物，分离纯化得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮肟醚(中间体4)；
4)取中间体4和叠氮(R2N3)在研钵中混合均匀，加入碘化亚铜，室温下研磨10分钟直到反应物完全消耗，将反应混合物用冷却水稀释，加乙酸乙酯提取有机物，经无水硫酸钠干燥，蒸干后得到白色固体，即为四氢苯并噻唑-7-酮肟衍生物药物。
其中，步骤1)中，原料1与硫代酰胺的摩尔比为1：1-1.3；步骤3)中，中间体3、无水碳酸钾、炔丙基溴的摩尔比为1：1.2-2.5：1-1.5；步骤4)中，中间体4、叠氮、碘化亚铜的摩尔比为：10：8-15：0.8-1.5。
进一步优选为步骤1)中，原料1与硫代酰胺的摩尔比为1：1；步骤3)中，中间体3、无水碳酸钾、炔丙基溴的摩尔比为1：2：12；步骤4)中，中间体4、叠氮、碘化亚铜的摩尔比为：10：10：1。
采用上述工艺步骤，本发明进一步合成得到如下四氢苯并噻唑-7-酮肟衍生物药物：
化合物的结构分析如下：
实验试剂
氘代氯仿-d(氘原子含量99.8％，TMS含量0.03％V/V，10*0.5mL/盒，瑞士ARMAR公司)；色谱纯乙腈(含量99.99％，4L瓶装，德国MILAK公司)；蒸馏水(4.5L/桶，屈臣氏Watsons公司)；核磁管(5mm 100/pk 2ST500-8，美国Norell公司)。
实验仪器
Ultrashied 400MHz Plus核磁共振仪(瑞士Bruker公司)、API 4000LC-MS/MS质谱仪(德国布鲁克道尔顿公司)
测试过程
精确称取10mg目标化合物，在核磁管中用0.5mL氘代氯仿溶解，通过核磁共振仪测试其化学结构。核磁共振氢谱图、碳谱图、电喷雾质谱图如图1、2、3所示。
核磁数据：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.56(s,2H),7.26(d,J＝5.6Hz,4H),5.54(s,4H),5.30(s,4H),2.93(t,J＝6.0Hz,4H),2.65(s,6H),2.58(t,J＝6.4Hz,4H),2.04-1.98(m,4H).13C NMR(400MHz,CDCl3)δ:170.1,159.2,149.1,145.0,135.2,128.5,123.0,118.5,67.2,53.5,29.2,27.9,22.6,18.7.结果分析：化学位移值在2.65处的6H是单峰，应该是两个甲基峰，受旁边连接的C＝N双键的影响使其位移值向低场移动；在δ＝2.93、2.58处都是三重峰，可以推断，与之相连的旁边碳上应该有两个氢使其产生裂分，且δ＝2.04-1.98处是四个氢的多重峰，根据化合物的结构预期结构可以推断出，结构中有三个CH2相连，与其预期结构吻合。δ＝7.26处的四个氢，耦合常数是5.6Hz，因此是苯环上的氢，裂分相同，都是二重峰，可以推断苯环上是对位取代的；δ＝7.56处的两个氢是单峰，根据其化学位移值和质子峰可以判断应该是三唑环上的烯氢；而δ＝5.54、5.30处也都是单峰，分别应该是两个单独连接的CH2，其化学位移值都较一般的CH2大，所以其两端分别连接的应该是N、O等杂原子或苯环、双键等吸电子基团。碳谱中处于高场的δ＝29.2、27.9、22.6、18.7处是既没有连接杂原子又没有连接双键的CH2、CH3的碳，δ＝67.2、53.5处是旁边相连的是杂原子以及苯环的碳，受到吸电子基团的去屏蔽作用，化学位移值向低场移动；δ＝170.1、159.2是C＝N双键的两个季碳；其余碳是烯碳和苯环上碳。
电喷雾质谱图分析：化合物分子式C30H32N10O2S2，分子量628.77，质谱测试结果651.85(M+Na)为离子加合峰，与分子量加钠峰吻合，分子量正确。
本发明还公开了将所述的四氢苯并噻唑-7-酮肟及其组合物、四氢苯并噻唑-7-酮肟衍生物及其组合物、或其盐在制备治疗抗胃癌药物上的应用。
四氢苯并噻唑-7-酮肟类药物的体外胃癌细胞毒活性测试
试剂及仪器
实验试剂
实验仪器
| 仪器名称 | 型号 | 生产厂家 |
| 低速离心机 | TDZ4-WS | 长沙平凡仪器仪表有限公司 |
| 高速离心机 | TGL-16C | 上海安亭科学仪器厂 |
| 电热恒温水槽 | DK-8A | 上海精宏实验设备有限公司 |
| 恒温恒湿培养箱 | HTC-100A | 上海三腾仪器有限公司 |
| 立式压力蒸汽灭菌器 | LDZX-30KBS | 上海申安医疗器械厂 |
| 电脑型倒置显微镜 | XDS-113 | 上海豫光仪器有限公司 |
| 涡旋振荡器 | Vortex-Genie2 | 美国奥然科技有限公司 |
| 酶联免疫检测仪 | StatFax-2100 | 美国Awareness |
| 日本三洋公司 | ||
| 自动双蒸水蒸馏器 | 上海亚荣生化设备仪器有限公司 | |
| 超净工作台 | 北京东联哈尔仪器制造有限公司 | |
| 超声波清洗仪 | 凌波新芝生物科技股份有限公司 |
实验部分
采用MTT法测试了化合物对HGC-27(人类胃癌细胞)的体外抗肿瘤活性，以抗肿瘤药物紫杉醇(Paclitaxel)为阳性对照。
接种细胞步骤如下：
(1)用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。
(2)离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。
(3)将细胞稀释至2.5×103-50×103个/mL，每个微滴定板可容纳20mL细胞重悬液。
(4)用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μL细胞悬液，每孔加0.5×103-10×103个细胞。
(5)将200μL培养基加至第1列和第12列的8个孔中。第1列作读板议的空白对照。
(6)将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物。加药：
(1)用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度。
(2)对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基。
(3)在第2列和第11列的8个孔中加入200μL新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照。
(4)在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物。每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D行可用于第一种药物，E-H行用于第二种药物。
(5)向每组4孔中各加入200μL药物溶液。
(6)将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间。
生长期：
(1)在药物作用期结束时，去除所有含有细胞的孔中的培养基，加入200μL新鲜的培养基。
(2)每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]。
存活细胞数的估算：
(1)在生长期末，每孔中各加入200μL新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μL MTT。
(2)用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4h。
(3)弃去孔中的培养基和MTT，在第1-11列所有孔中各加入150μL DMSO，以溶解残留的MTT-甲臜结晶。
(4)将培养板放在振荡器上震荡，使反应液均匀。
(5)立即在492nm处记录吸光值。读板仪用第1列中含培养基和MTT但不含细胞的各孔调零。酶标仪492nm处检测吸光度值,计算抑制率,计算公式如下:
抑制率＝(1－给药组吸光度值/空白组吸光度值)×100％
选择50μg/mL时抑制率大于50％的样品,重新设置浓度进行细筛.即将待测样品以1、2、4、8、16、32、64μg/mL浓度加入96孔板中,培养48小时,检测抑制率，采用SPSS软件计算IC50值。
附图说明
图1为的核磁共振氢谱图。
图2为的核磁共振碳谱图。
图3为的电喷雾质谱图。
具体实施方式
实施例1
合成路线：
2-溴代-1,3-环己二酮(原料1)和硫代酰胺在乙醇作溶剂的条件下回流过夜，得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮(中间体2)；将中间体2与盐酸羟胺在冰乙酸钠作用下无水乙醇溶剂中回流，得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮肟(中间体3)；将中间体3和溴丙炔溶解在无水乙腈中，在氢化钠的作用下，搅拌反应得到2-取代四氢苯并噻唑-7-酮肟醚(中间体4)；将中间体4在CuI作催化剂与叠氮中间体发生1,3-偶极环加成反应得到四氢苯并噻唑-7-酮肟类药物(目标产物5)。合成路线如下：
合成条件：(a)烷基硫代酰胺R1C(S)NH2,pyridine,80℃,2小时；(b)NH2OH-HCl,吡啶,110℃,2小时；(c)BrCH2C≡CH,K2CO3,CH3CN,80℃,1小时；(d)叠氮R2N3,CuI,20℃,10分钟。
合成过程：
中间体2的制备：用电子天平准确称取3.80g,20mmol的2-溴环己烷-1,3-二酮(1)和20mmol烷基硫代酰胺R1C(S)NH2于50mL的吡啶溶液，充入氮气作为保护气，搅拌混合均匀，加热至80℃，反应2小时。反应完成后，将溶剂在真空下除去，并将残余物用50mL饱和食盐水洗涤。将产物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将有机萃取液合并，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到暗粘稠油状物，将其通过快速柱色谱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:4，V/V)，得到2.40g 2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮(2)，为黄色油状物。
中间体3的制备：准确称取10.0mmol 2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮(中间体2)于40mL干燥的吡啶中溶解，在氮气保护下用10mL干燥的吡啶溶解，加热至110℃搅拌2小时，然后冷却并倒入250mL冰-水混合物中，得到白色沉淀物。过滤沉淀物并干燥，用柱色谱法进行分离，得到1.80g 2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮肟的顺反异构体混合物，为白色固体。通过柱层析分离纯化得到0.81g反式异构体(中间体3a)和0.85g顺式异构体(中间体3b)。
中间体4的制备：准确称取20mmol中间体3，溶解于20mL无水乙腈中，加入4.1g无水碳酸钾(30mmol)和2.4g炔丙基溴(20mmol)，在80℃下搅拌1小时。除去溶剂，将产物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将有机萃取液合并，干燥并在真空下浓缩，得到黄色粗产物。经快速柱色谱法(正己烷：乙酸乙酯＝3:1，V/V)，得到4.1g中间体4。
目标产物5的制备：准确称取1.0mmol中间体4和1.0mmol叠氮R2N3在研钵中混合均匀，加入0.01mmol碘化亚铜，室温下研磨10分钟直到反应物完全消耗。将反应混合物用10mL冷却水稀释，加乙酸乙酯提取有机物，经无水硫酸钠干燥，蒸干后得到白色固体，即为四氢苯并噻唑-7-酮肟类药物。
中间体2的制备中，吡啶溶剂还可以为甲醇、乙醇或甲苯中的任意一种，
中间体4的制备中，乙腈溶剂还可以为甲苯、苯、四氢呋喃、或二氧六环中的任意一种；
目标产物5的制备中，乙酸乙酯萃取剂还可以为氯仿、二氯甲烷、乙醇或甲醇中的任意一种。
抗胃癌药物的实验结果如下：
细胞毒活性评价结果：四氢苯并噻唑-7-酮肟类药物具有较好的抗胃癌细胞毒活性，与市售紫杉醇的抗胃癌活性(IC50：4.16μM)比较，化合物5j、5k的半数抑制浓度低达10μM以下，与紫杉醇的抗胃癌活性相当；化合物5d、5f和5i的半数抑制浓度在20～30μM之间，也具有较好的抗胃癌活性。综上所述，化合物具有深入的抗胃癌药物开发价值。
Claims (1)
1.一种四氢苯并噻唑-7-酮肟衍生物药物的制备方法，该衍生物药物的结构式为：
其特征在于，包括如下步骤：
中间体2的制备：用电子天平准确称取3.80g，20mmol的2-溴环己烷-1,3-二酮和20mmol烷基硫代酰胺CH3C(S)NH2于50mL的吡啶溶液，充入氮气作为保护气，搅拌混合均匀，加热至80℃，反应2小时，反应完成后，将溶剂在真空下除去，并将残余物用50mL饱和食盐水洗涤，将产物用二氯甲烷3×30mL萃取，将有机萃取液合并，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到暗粘稠油状物，将其通过快速柱色谱纯化，洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:4，V/V，得到2.40g2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮，即中间体2，为黄色油状物；
中间体3的制备：准确称取10.0mmol 2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮于40mL干燥的吡啶中溶解，在氮气保护下用10mL干燥的吡啶溶解，与盐酸羟胺在冰乙酸作用下，在无水乙醇溶剂中回流加热至110℃搅拌2小时，然后冷却并倒入250mL冰-水混合物中，得到白色沉淀物，过滤沉淀物并干燥，用柱色谱法进行分离，得到1.80g2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮肟的顺反异构体混合物，为白色固体，通过柱层析分离纯化得到0.81g反式异构体中间体3a和0.85g顺式异构体中间体3b；
中间体4的制备：准确称取20mmol 2-取代-5,6-二氢苯并[d]噻唑-7(4H)-酮肟的顺反异构体混合物，溶解于20mL无水乙腈中，加入4.1g无水碳酸钾30mmol和2.4g炔丙基溴20mmol，在80℃下搅拌1小时，除去溶剂，将产物用乙酸乙酯3×20mL萃取，将有机萃取液合并，干燥并在真空下浓缩，得到黄色粗产物，经快速柱色谱法正己烷：乙酸乙酯＝3:1，V/V，得到4.1g中间体4；
目标产物5的制备：准确称取1.0mmol中间体4和1.0mmol叠氮R2N3，所述的R2的结构为在研钵中混合均匀，加入0.01mmol碘化亚铜，室温下研磨10分钟直到反应物完全消耗，将反应混合物用10mL冷却水稀释，加乙酸乙酯提取有机物，经无水硫酸钠干燥，蒸干后得到白色固体，即为四氢苯并噻唑-7-酮肟类药物。
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