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CN104470903B - 杂环化合物和它们的使用方法 - Google Patents

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CN104470903B CN201380016259.9A CN201380016259A CN104470903B CN 104470903 B CN104470903 B CN 104470903B CN 201380016259 A CN201380016259 A CN 201380016259A CN 104470903 B CN104470903 B CN 104470903B
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Abstract

本发明涉及适用于拮抗血管紧张素II2型(AT2)受体的杂环化合物。更具体来说，本发明涉及哌嗪和二氮杂化合物、含有它们的组合物以及它们在治疗或预防与AT2受体功能相关的病症或疾病的方法中的用途，所述病症或疾病包括神经病变性疼痛、炎症性疼痛、与神经元超敏性相关的病状、神经传导速度受损、细胞增殖病症、与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症和与神经再生异常相关的病症。

Description

杂环化合物和它们的使用方法
发明领域
本发明大体上涉及适用于拮抗血管紧张素II2型(AT2)受体的化合物。更具体来说，本发明涉及式(I)杂环化合物和它们作为AT2受体拮抗剂的用途。描述包含所述化合物的药物组合物和它们在调节AT2受体方面及在需要调节AT2受体的疗法中的用途。
发明背景
尽管自1980年代开始就已知AT2受体，但关于它的生物功能的了解却比血管紧张素II1型(AT1)受体要少得多，已研究所述血管紧张素II1型受体对血管收缩、醛固酮释放及心血管生长的功能性影响[Wexler等，1996]。然而，更新近地，AT2受体已牵涉于神经元组织的分化和再生[Steckelings等，2005；Chakrabarty等，2008]、细胞增殖和血管生成[Clere等，2010]以及骨质的维持[Izu等，2009]中。
AT2受体拮抗剂新近也已与对疼痛，特别是炎症性疼痛[WO 2007/106938]和神经病变性疼痛[WO 2006/066361]的治疗相关联，所述疼痛是难以治疗或减轻的两种类型的疼痛。神经传导速度受损也与神经损伤相关且已牵涉于外周神经病变、腕管综合征、尺骨神经病变、吉兰-巴雷综合征(Guillian-Barré Syndrome)、面肩胛肱骨肌肉萎缩(fascioscapulohumeral muscular dystrophy)和椎间盘突出中。神经传导速度受损可导致反射反应削弱和外周感觉改变，如感觉异常以及在一些情况下疼痛，且AT2受体拮抗剂已显示会恢复神经传导速度[WO 2011/088504]。
尽管存在有效治疗伤害感受性疼痛的疗法，但炎症性疼痛和神经病变性疼痛常对这些疗法具有抗性。此外，神经病变性疼痛、炎症性疼痛、神经传导速度受损和难以治疗的其它类型的疼痛的当前疗法具有严重副作用，例如认知变化、镇静、恶心以及在麻醉药物的情况下耐受性和依赖性。对治疗或预防神经病变性疼痛、炎症性疼痛、神经传导速度受损和当前难以治疗的其它疼痛病状的其它疗法存在需要。
细胞增殖和血管生成是正常组织中的重要生物功能。然而，细胞增殖和血管生成不受控制可导致肿瘤和其它增生性病症。尽管存在一些可用于肿瘤的有效化学疗法，但许多化学疗法产生不合意的副作用及/或对正常细胞具有较高毒性。需要用于以受控方式降低或防止异常细胞增殖的其它疗法且AT2受体拮抗剂已显示具有抗增生活性[Clere等，2010]。
骨质疏松是年长群体中的一个显著问题，尤其是在绝经后女性中。用于骨质疏松的当前疗法依赖钙补充。然而，对骨形成和骨再吸收的控制是复杂的且需要用于改善骨质的其它疗法，且AT2受体拮抗剂已显示会增加骨质[Izu等，2009]。
AT2受体在调节神经元外生长方面的作用以及AT2受体拮抗剂对降低神经元外生长的相关影响指示AT2受体拮抗剂可为特征在于神经再生异常的疾病中的适用治疗剂[Chakrabarty等，2008]。
本发明部分地基于发现具有AT2受体拮抗剂活性的杂环氮杂环丁烷和吡咯烷化合物。
发明概述
在本发明的第一方面，提供一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中
X是-CHR4-、-CH2CHR4-或-C(＝O)-；
R1是-C(＝O)CHR5R6、-C(＝O)NR5R6、-C(＝O)CH2CHR5R6、-C(＝O)CH＝CR5R6、-C(＝S)CHR5R6、-C(＝S)NR5R6、-C(＝S)CH2CHR5R6、-C(＝S)CH＝CR5R6、-C(＝NR7)CHR5R6、-C(＝NR7)NR5R6、-C(＝NR7)CH2CHR5R6或-C(＝NR7)CH＝CR5R6；
R2是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C(＝O)R8、-C(＝O)NHR7、-SO2N(R7)2、-W-环烷基、-W-环烯基、-W-芳基、-W-杂环基、-W-杂芳基、-W-Z-Y-环烷基、-W-Z-Y-环烯基、-W-Z-Y-芳基、-W-Z-Y-杂环基或-W-Z-Y-杂芳基；
R3是羧酸、-CH2CO2H、-C(＝O)C(＝O)OH、-CH2OH、-C(＝O)NH2、-CH2C(＝O)NH2、-CN、-CH2CN、羧酸生物电子等排体或-CH2-羧酸生物电子等排体；
R4是氢或连同R2一起形成任选被一个或两个选自以下的取代基取代的稠合环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基环：-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-C1-6亚烷基R9、-C2-6亚烯基R9、-C2-6亚炔基R9、-OC0-6亚烷基R9、-OC2-6亚烯基R9、-OC2-6亚炔基R9、-C(＝O)C0-6亚烷基R9、-C(＝O)C2-6亚烯基R9、-C(＝O)C2-6亚炔基R9、-C(＝O)OC0-6亚烷基R9、-C(＝O)OC2-6亚烯基R9、-C(＝O)OC2-6亚炔基R9、-SO2NHC0-6亚烷基R9、-SO2NHC2-6亚烯基R9、-SO2NHC2-6亚炔基R9、-NHSO2C0-6亚烷基R9、-NHSO2C2-6亚烯基R9、-NHSO2C2-6亚炔基R9、-NH(＝O)NHR10、-NHC(＝O)OR10或-CH(OH)CH(OH)R10；
R5和R6独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-CH2环烷基、-CH2环烯基、-CH2芳基、-CH2杂环基和-CH2杂芳基；前提是R5与R6两者都不是氢；
R7是氢、-C1-6烷基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R8是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R9是环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基；
R10是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基；
W是共价键、-SO-、-SO2- -C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-4亚烷基-、-C2-4亚烯基-、-C2-4亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-或-C2-4亚炔基Q-；
Z是-环烷基-、-环烯基-、-芳基-、-杂环基-或-杂芳基-；
Y是共价键、-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-3亚烷基-、-C2-3亚烯基-、-C2-3亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-QC1-4亚烷基-、-QC2-4亚烯基-、-QC2-4亚炔基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-、-C2-4亚炔基Q- -QC1-4亚烷基Q-、-QC2-4亚烯基Q-或-QC2-4亚炔基Q-；且
Q是-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-或-C(＝O)N(R7)-；
其中各环烷基、环烯基、芳基、杂环基和杂芳基任选被取代。
在另一方面，本发明提供一种包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的神经病变性疼痛的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的特征在于神经元超敏性的病状的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的炎症性疼痛的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供一种治疗或预防受试者的神经传导速度受损的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的另一方面，提供一种在受试者中产生镇痛的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的细胞增生性病症的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供一种治疗或预防受试者的与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供一种治疗受试者的与神经再生异常相关的病症的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
发明描述
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与由本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管在实施或测试本发明时可使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但描述优选方法和材料。出于本发明的目的，下文定义以下术语。
冠词“一”在本文中用于指代冠词的一个或一个以上(即至少一个)语法对象。举例来说，“要素”是指一个要素或一个以上要素。
如本文所用，术语“约”是指数量、含量、数值、大小、尺寸或量相对于参照数量、含量、数值、大小、尺寸或量变化多达30％、25％、20％、15％或10％。
如本文所用，术语“AT2受体”是指可结合血管紧张素II及/或一种或多种其它配体的血管紧张素II2型(AT2)受体多肽。术语“AT2受体”涵盖AT2受体家族成员的脊椎动物同源物，包括但不限于哺乳动物、爬行动物和禽类同源物。AT2受体家族成员的代表性哺乳动物同源物包括但不限于鼠类和人同源物。
如本文所用的术语“拮抗剂”是指降低或抑制AT2受体的生物活性和/或功能的化合物，包括结合AT2受体和阻断到达血管紧张素II的通路，抑制表达AT2受体的基因，或抑制该基因的表达产物。就术语“选择性”来说，其是指化合物结合和/或抑制AT2受体活性的程度大于结合和抑制AT1受体。在一些情况下，选择性是指在AT1受体处少许结合或不结合下结合和/或抑制AT2受体。
如本文所用的术语“异常性疼痛”是指由非有害刺激物引起的疼痛，即归因于通常不激起疼痛的刺激物的疼痛。异常性疼痛的实例包括但不限于冷异常性疼痛、触觉异常性疼痛(归因于轻微压力或触摸的疼痛)等。
术语“镇痛”在本文中用于描述疼痛感知减轻状态，包括不存在疼痛感觉以及对有害刺激物的敏感性降低或不存在状态。所述疼痛感知减轻或不存在状态是由施用一种或多种疼痛控制剂诱导且在不丧失意识下发生，如本领域中通常所了解。术语镇痛涵盖在本领域中用作动物模型中的镇痛或疼痛敏感性降低的定量量度的术语“抗伤害感受”。
术语“抗异常性疼痛”在本文中用于描述疼痛感知减轻状态，包括不存在疼痛感觉以及对非有害刺激物的敏感性降低或不存在状态。所述疼痛感知减轻或不存在状态是由施用一种或多种疼痛控制剂诱导且在不丧失意识下发生，如本领域中通常所了解。
如本文所用的术语“灼痛”是指在创伤性神经病变之后的灼伤疼痛、异常性疼痛和痛觉过敏，常连同有血管舒缩和催汗功能障碍以及随后营养变化。
就“复杂区域疼痛综合征”来说，其是指包括但不限于反射交感神经性营养不良、灼痛、交感神经维持性疼痛等的疼痛。
就“特征在于神经元超敏性的病状”来说，其是指具有与神经元超敏性和/或异常性疼痛相关的疼痛症状的病状。该类型的病状的实例包括纤维肌痛和肠易激综合征。
就“与神经再生异常相关的病症”来说，其是指神经元中存在异常轴索外生长的病症。这种异常外生长可与疼痛病状，包括乳房疼痛、间质性膀胱炎、外阴痛和癌症化学疗法诱发的神经病变相关。
在整篇本说明书中，除非上下文另外需要，否则用词“包含”将被理解成暗示包括一个所述步骤或要素或一组步骤或要素，但不排除任何其它步骤或要素或任何其它组步骤或要素。
就“痛觉过敏”来说，其是指对通常引起疼痛的刺激物的反应增加。痛觉过敏病状是与由通常不引起疼痛的刺激物引起的疼痛相关的病状。
就“神经病变性疼痛”来说，其是指由外周或中枢神经系统中的原发性病变或功能障碍引发或引起的任何疼痛综合征。神经病变性疼痛的实例包括但不限于热或机械痛觉过敏、热或机械异常性疼痛、糖尿病性疼痛、卡压疼痛等。
术语“伤害感受性疼痛”是指在不存在致敏作用下由位于非损伤皮肤、内脏和其它器官中的伤害感受器的活化所激起的正常急性疼痛感觉。
如本文所用，“炎症性疼痛”是指由炎症诱发的疼痛。所述类型的疼痛可为急性或慢性的，且可归因于特征在于炎症的许多病状，不加限制地包括灼伤，包括化学、摩擦或热灼伤；自体免疫性疾病，如类风湿性关节炎、骨关节炎和炎症性肠病(包括克罗恩氏病(Crohn′s disease)和结肠炎)；以及其它炎症性疾病，包括心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎和胶原蛋白血管疾病。
如本文所用的术语“疼痛”是以它的广义给出且包括与实际或潜在组织损伤相关或以所述损伤描述的不合意感觉和情绪感受，且包括由刺激专门化神经末梢引起的或多或少的局部不适、苦恼或痛苦感觉。存在许多类型的疼痛，包括但不限于闪电样疼痛、幻觉疼痛、射痛、急性疼痛、炎症性疼痛、神经病变性疼痛、复杂区域疼痛、神经痛、神经病变等(Dorland’s Illustrated Medical Dictionary，第28版，W.B.Saunders Company，Philadelphia，Pa.)。疼痛治疗的目标在于降低由治疗受试者感知的疼痛的严重程度。
就短语“NCV受损”或“神经传导速度受损”等来说，其是指可证明在相对于正常神经信号传导评估的任一参数方面存在异常的任何神经传导。通常由相关经过训练的临床医师对NCV的各种参数是否正常进行评估。为本领域人员所知的用于评估NCV的一般背景、术语和程序描述于以下中：″Proper performance and interpretation ofelectrodiagnostic studies′Muscle Nerve.(2006)33(3)：436-439和“Electrodiagnostic medicine listing of sensory，motor，and mixed nerves.”Appendix J of Current Procedural Terminology(CPT)2007，由美国神经肌肉和电诊断医学协会(The American Association of Neuromuscular&ElectrodiagnosticMedicine)编写，且由美国医学协会(American Medical Association)出版。神经传导速度受损或异常是神经功能障碍或损伤的症状，且可为许多疾病或病症(特别是展现反射反应削弱以及外周感觉改变，包括感觉异常的疾病或病症)的病因或症状。如本文所用，“感觉异常”是指受试者的皮肤的震颤、刺痛、衰弱或麻木感觉。其也称为“发麻(pin and needle)”或肢体“入睡(falling asleep)”。感觉异常可为短暂、急性或慢性的，且可单独发生或伴随有如疼痛的其它症状。
如本文所用，术语“细胞增生性病症”是指非所要或损伤细胞不由正常细胞过程移除的疾病或病状，或细胞经受异常、非所要或不当增殖的疾病或病状。特征在于不当细胞增殖的病症包括例如炎症性病状，如由包括例如急性肺损伤的急性组织损伤引起的炎症；癌症，包括特征在于肿瘤的癌症；自体免疫性病症；组织肥大等。
术语“与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症”包括在再成型(remodelling)期间存在骨量产生不足、骨再吸收过度及骨形成不足的病症。与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的示例性病症是骨质疏松。
如本文所用，术语“烷基”是指具有1至10个碳原子的直链或支链饱和烃基团。适当时，烷基可具有指定数目的碳原子，例如C1-6烷基包括具有1、2、3、4、5或6个呈直链或支链配置的碳原子的烷基。适合烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、4-甲基丁基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、5-甲基戊基、2-乙基丁基、3-乙基丁基、庚基、辛基、壬基和癸基。
如本文所用，术语“烯基”是指在碳原子之间具有一个或多个双键且具有2至10个碳原子的直链或支链烃基团。适当时，烯基可具有指定数目的碳原子。举例来说，如“C2-C6烯基”中的C2-C6包括具有2、3、4、5或6个呈直链或支链配置的碳原子的基团。适合烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基、己二烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基和癸烯基。
如本文所用，术语“炔基”是指具有一个或多个三键且具有2至10个碳原子的直链或支链烃基团。适当时，炔基可具有指定数目的碳原子。举例来说，如“C2-C6炔基”中的C2-C6包括具有2、3、4、5或6个呈直链或支链配置的碳原子的基团。适合炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
如本文所用，术语“环烷基”是指饱和环烃。环烷基环可包括指定数目的碳原子。举例来说，3至8元环烷基包括3、4、5、6、7或8个碳原子。适合环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
如本文所用，术语“环烯基”是指不饱和环烃。环烯基环可包括指定数目的碳原子。举例来说，5至8元环烯基包括5、6、7或8个碳原子。环烯基具有一个或多个双键且当存在一个以上双键时，所述双键可为非共轭或共轭双键，然而，环烯基不是芳族。适合环烯基的实例包括但不限于环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环庚二烯基、环庚三烯基、环辛烯基、环辛二烯基和环辛三烯基环。
如本文所用，术语“芳基”意指在各环中具有多达7个原子的任何稳定单环、双环或三环碳环系统，其中至少一个环是芳族。所述芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、芴基、菲基、联苯和联萘。
如本文所用，术语“亚烷基”是指具有1至6个碳原子的二价饱和烃链。适当时，亚烷基可具有指定数目的碳原子，例如C1-6亚烷基包括具有1、2、3、4、5或6个呈直链配置的碳原子的亚烷基。适合亚烷基的实例包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-和-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-。
如本文所用，术语“亚烯基”是指具有2至6个碳原子和至少一个双键的二价不饱和烃链。适当时，亚烯基可具有指定数目的碳原子，例如C2-6亚烯基包括具有2、3、4、5或6个呈直链配置的碳原子的亚烯基。双键可呈E或Z构型。适合亚烯基的实例包括但不限于-CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH2CH＝CH-、-CH＝CHCH2CH2-、-CH2CH＝CHCH2-、-CH2CH2CH＝CH-、-CH＝CHCH2CH2CH2-、-CH2CH＝CHCH2CH2-、-CH2CH2CH＝CHCH2-、-CH2CH2CH2CH＝CH-、-CH＝CHCH2CH2CH2CH2- -CH2CH＝CHCH2CH2CH2-、-CH2CH2CH＝CHCH2CH2-、-CH2CH2CH2CH＝CHCH2-和-CH2CH2CH2CH2CH＝CH-。
如本文所用，术语“亚炔基”是指具有2至6个碳原子和至少一个三键的二价不饱和烃链。适当时，亚炔基可具有指定数目的碳原子，例如C2-6亚炔基包括具有2、3、4、5或6个呈直链配置的碳原子的亚炔基。适合亚炔基的实例包括但不限于-C≡C-、-C≡CCH2-、-CH2C≡C-、-C≡CCH2CH2-、-CH2C≡CCH2-、-CH2CH2C≡C-、-C≡CCH2CH2CH2-、-CH2C≡CCH2CH2-、-CH2CH2C≡CCH2-、-CH2CH2CH2C≡C-、-C≡CCH2CH2CH2CH2- -CH2C≡CCH2CH2CH2-、-CH2CH2C≡CCH2CH2-、-CH2CH2CH2C≡CCH2-和-CH2CH2CH2CH2C≡C-。
在一些实施方案中，亚烷基、亚烯基或亚炔基中的一个或多个“-CH2-”基团可被包括-O-、-S-、-NH-、-NR-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(＝O)-、-C(＝O)NH-和-NHC(＝O)-的杂原子或含有杂原子的基团置换。
术语“苯甲基”在本文中使用时是指苯基亚甲基C6H5CH2-。
如本文所用，术语“卤素”或“卤代”是指氟(氟代)、氯(氯代)、溴(溴代)和碘(碘代)。
如本文所用的术语“杂环”或“杂环基”是指1至4个碳原子已被独立地选自由N、N(R)、S、S(O)、S(O)2和O组成的组的杂原子置换的环烃。杂环可为饱和或不饱和的，但不为芳族。杂环基团也可为含有1、2或3个环，其中两个环呈“螺”配置的螺环基团的一部分。适合杂环基的实例包括氮杂环丁烷、四氢呋喃基、四氢苯硫基、吡咯烷基、2-氧代吡咯烷基、吡咯啉基、吡喃基、二氧杂戊环烷基、哌啶基、2-氧代哌啶基、吡唑啉基、咪唑啉基、噻唑啉基、二硫杂环戊二烯基、氧硫杂环戊二烯基、二氧杂环己烷基、二氧杂环己烯基、二噁唑基、噁噻唑基、噁唑酮基、哌嗪基、吗啉代、硫代吗啉基、3-氧代吗啉基、二硫杂环己基、三硫杂环己基和噁嗪基。
如本文所用的术语“杂芳基”表示在各环中具有多达7个原子的稳定单环、双环或三环，其中至少一个环是芳族且至少一个环含有1至4个选自由O、N和S组成的组的杂原子。在该定义的范围内的杂芳基包括但不限于吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、吡唑基、吲哚基、异吲哚基、1H，3H-1-氧代异吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯硫基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并二噁烷、苯并二氧杂环己烯、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氢喹啉基、噻唑基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，3，5-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，2，4，5-四嗪基和四唑基。特定杂芳基具有5或6元环，如吡唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、吲哚基、异吲哚基、1H，3H-1-氧代异吲哚基、异噁唑基、咪唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基以及1，2，4-噁二唑基和1，2，4-噻二唑基。
各烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基和杂芳基无论是个别实体或作为较大实体的一部分都可任选被一个或多个选自由以下组成的组的任选取代基取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6环烷基、氧代(＝O)、-OH、-SH、C1-6烷基O-、C2-6烯基O-、C3-6环烷基O-、C1-6烷基S-、C2-6烯基S-、C3-6环烷基S-、-CO2H、-CO2C1-6烷基、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(苯基)、-N(苯基)2、氧代、-CN、-NO2、-卤素、-CF3、-OCF3、-SCF3、-CHF2、-OCHF2、-SCHF2、-苯基、-杂环基、-杂芳基、-O杂芳基、-O杂环基、-O苯基、-C(＝O)苯基、-C(＝O)C1-6烷基。适合取代基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、乙烯基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、羟基、羟基甲基、羟基乙基、羟基丙基、羟基丁基、氟基、氯基、溴基、碘基、氰基、硝基、-CO2H、-CO2CH3、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、二氟甲基、二氟甲氧基、二氟甲硫基、吗啉代、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、苯基、苯氧基、苯基羰基、苯甲基和乙酰基。
术语“羧酸生物电子等排体”是指在物理化学方面或在拓扑学方面与羧酸或羧酸酯基团类似的基团。适合羧酸或羧酸根电子等排体的实例包括但不限于四唑、四唑根、-CONH-四唑、噁二唑、磷酸酯基(-PO3H2)、-C(OH)(CF3)2、N-(芳基或杂芳基)-磺酰胺、酰基磺酰胺和磺酸(-SO3H)[参见Patani和LaVoie，1996]。羧基的磺酰胺电子等排等效物的实例包括-C(＝O)NHSO2Ra、-C(＝O)NHSO2N(Ra)2、-C(＝O)NHSO2NH(Ra)、-SO2NHC(＝O)Ra、-SO2NHC(＝O)NHRa、-SO2NHRa和-NHS O2Ra，其中Ra选自由C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、芳基、杂环基、杂芳基和-CF3组成的组。
本发明化合物可呈药学上可接受的盐形式。然而，应了解非药学上可接受的盐也属于本发明的范围，因为这些盐可适用作制备药学上可接受的盐的中间体或可在储存或运输期间适用。适合药学上可接受的盐包括但不限于药学上可接受的无机酸的盐，所述无机酸如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸；或药学上可接受的有机酸的盐，所述有机酸如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、反丁烯二酸、柠檬酸、乳酸、粘液酸、葡萄糖酸、苯甲酸、丁二酸、草酸、苯乙酸、甲烷磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸和戊酸。
碱盐包括但不限于用药学上可接受的阳离子，如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵形成的那些盐。
碱性含氮基团可用如低级烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物，溴化物和碘化物)；硫酸二烷酯(如硫酸二甲酯和硫酸二乙酯)；等的试剂季铵化。
也将认识到本发明化合物可具有不对称中心且因此能够以一种以上立体异构形式存在。因此，本发明也涉及在一个或多个不对称中心处呈大致上纯的异构形式(例如大于约90％ee，如约95％或97％ee或大于99％ee)的化合物以及其混合物，包括外消旋混合物。所述异构体可通过例如使用手性中间体进行不对称合成，或通过手性拆分来制备。本发明化合物可以几何异构体形式存在。本发明也涉及呈大致上纯的顺式(Z)或反式(E)形式的化合物或其混合物。
本发明化合物
在本发明的第一方面，提供一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中
X是-CHR4-、-CH2CHR4-或-C(＝O)-；
R1是-C(＝O)CHR5R6、-C(＝O)NR5R6、-C(＝O)CH2CHR5R6、-C(＝O)CH＝CR5R6、-C(＝S)CHR5R6、-C(＝S)NR5R6、-C(＝S)CH2CHR5R6、-C(＝S)CH＝CR5R6、-C(＝NR7)CHR5R6、-C(＝NR7)NR5R6、-C(＝NR7)CH2CH R5R6或-C(＝NR7)CH＝CR5R6；
R2是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C(＝O)R8、-C(＝O)NHR7、-SO2N(R7)2、-W-环烷基、-W-环烯基、-W-芳基、-W-杂环基、-W-杂芳基、-W-Z-Y-环烷基、-W-Z-Y-环烯基、-W-Z-Y-芳基、-W-Z-Y-杂环基或-W-Z-Y-杂芳基；
R3是羧酸、-CH2CO2H、-C(＝O)C(＝O)OH、-CH2OH、-C(＝O)NH2、-CH2C(＝O)NH2、-CN、-CH2CN、羧酸生物电子等排体或-CH2-羧酸生物电子等排体；
R4是氢或连同R2一起形成任选被一个或两个选自以下的取代基取代的稠合环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基环：-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-C1-6亚烷基R9、-C2-6亚烯基R9、-C2-6亚炔基R9、-OC0-6亚烷基R9、-OC2-6亚烯基R9、-OC2-6亚炔基R9、-C(＝O)C0-6亚烷基R9、-C(＝O)C2-6亚烯基R9、-C(＝O)C2-6亚炔基R9、-C(＝O)OC0-6亚烷基R9、-C(＝O)OC2-6亚烯基R9、-C(＝O)OC2-6亚炔基R9、-SO2NHC0-6亚烷基R9、-SO2NHC2-6亚烯基R9、-SO2NHC2-6亚炔基R9、-NHSO2C0-6亚烷基R9、-NHSO2C2-6亚烯基R9、-NHSO2C2-6亚炔基R9、-NH(＝O)NHR10、-NHC(＝O)OR10或-CH(OH)CH(OH)R10；
R5和R6独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-CH2环烷基、-CH2环烯基、-CH2芳基、-CH2杂环基和-CH2杂芳基；前提是R5与R6两者都不是氢；
R7是氢、-C1-6烷基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R8是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R9是环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基；
R10是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基；
W是共价键、-SO-、-SO2- -C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-4亚烷基-、-C2-4亚烯基-、-C2-4亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-或-C2-4亚炔基Q-；
Z是-环烷基-、-环烯基-、-芳基-、-杂环基-或-杂芳基-；
Y是共价键、-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-3亚烷基-、-C2-3亚烯基-、-C2-3亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-QC1-4亚烷基-、-QC2-4亚烯基-、-QC2-4亚炔基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-、-C2-4亚炔基Q- -QC1-4亚烷基Q-、-QC2-4亚烯基Q-或-QC2-4亚炔基Q-；且
Q是-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-或-C(＝O)N(R7)-；
其中各环烷基、环烯基、芳基、杂环基和杂芳基任选被取代。
在本发明的一些实施方案中，式(I)化合物是式(IA)化合物或其药学上可接受的盐：
其中
X是-CHR4-、-CH2CHR4-或-C(＝O)-；
R1是-C(＝O)CHR5R6、-C(＝O)NR5R6、-C(＝O)CH2CHR5R6、-C(＝O)CH＝CR5R6、-C(＝S)CHR5R6、-C(＝S)NR5R6、-C(＝S)CH2CHR5R6、-C(＝S)CH＝CR5R6、-C(＝NR7)CHR5R6、-C(＝NR7)NR5R6、-C(＝NR7)CH2CH R5R6或-C(＝NR7)CH＝CR5R6；
R2是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C(＝O)R8、-C(＝O)NHR7、-SO2N(R7)2、-W-环烷基、-W-环烯基、-W-芳基、-W-杂环基、-W-杂芳基、-W-Z-Y-环烷基、-W-Z-Y-环烯基、-W-Z-Y-芳基、-W-Z-Y-杂环基或-W-Z-Y-杂芳基；
R3是羧酸、-CH2CO2H、-C(＝O)C(＝O)OH或羧酸生物电子等排体；
R4是氢或连同R2一起形成任选被一个或两个选自以下的取代基取代的稠合环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基环：-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-C1-6亚烷基R9、-C2-6亚烯基R9、-C2-6亚炔基R9、-OC0-6亚烷基R9、-OC2-6亚烯基R9、-OC2-6亚炔基R9、-C(＝O)C0-6亚烷基R9、-C(＝O)C2-6亚烯基R9、-C(＝O)C2-6亚炔基R9、-C(＝O)OC0-6亚烷基R9、-C(＝O)OC2-6亚烯基R9、-C(＝O)OC2-6亚炔基R9、-SO2NHC0-6亚烷基R9、-SO2NHC2-6亚烯基R9、-SO2NHC2-6亚炔基R9、-NHSO2C0-6亚烷基R9、-NHSO2C2-6亚烯基R9、-NHSO2C2-6亚炔基R9、-NH(＝O)NHR10、-NHC(＝O)OR10或-CH(OH)CH(OH)R10；
R5和R6独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-CH2环烷基、-CH2环烯基、-CH2芳基、-CH2杂环基和-CH2杂芳基；前提是R5与R6两者都不是氢；
R7是氢、-C1-6烷基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R8是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R9是环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基；
R10是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基；
W是共价键、-SO-、-SO2- -C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-4亚烷基-、-C2-4亚烯基-、-C2-4亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-或-C2-4亚炔基Q-；
Z是-环烷基-、-环烯基-、-芳基-、-杂环基-或-杂芳基-；
Y是共价键、-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-3亚烷基-、-C2-3亚烯基-、-C2-3亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-QC1-4亚烷基-、-QC2-4亚烯基-、-QC2-4亚炔基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-、-C2-4亚炔基Q- -QC1-4亚烷基Q-、-QC2-4亚烯基Q-或-QC2-4亚炔基Q-；且
Q是-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-或-C(＝O)N(R7)-；
其中各环烷基、环烯基、芳基、杂环基和杂芳基任选被取代。
在式(I)的特定实施方案中，以下一者或多者适用：
X是-CHR4-，尤其-CH2-；
R1是-C(＝O)CHR5R6、-C(＝O)NR5R6，尤其-C(＝O)CH(芳基)(芳基)、-C(＝O)CH(芳基)(环烷基)、-C(＝O)CH(环烷基)(环烷基)、-C(＝O)N(芳基)(芳基)、-C(＝O)N(芳基)(环烷基)或-C(＝O)N(环烷基)(环烷基)，更尤其-C(＝O)CH(苯基)(苯基)、-C(＝O)CH(苯基)(环己基)、-C(＝O)CH(环己基)(环己基)、-C(＝O)N(苯基)(苯基)、-C(＝O)N(苯基)(环己基)或-C(＝O)N(环己基)(环己基)，甚至更尤其-C(＝O)CH(苯基)(苯基)或-C(＝O)N(苯基)(苯基)，最尤其-C(＝O)CH(苯基)(苯基)；
R2是-C1-6烷基、-C2-6烯基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、杂环基芳基、-C1-4亚烷基环烷基、-C1-4亚烷基环烯基、-C1-4亚烷基芳基、-C1-4亚烷基杂环基、-C1-4亚烷基杂芳基、-C2-4亚烯基环烷基、-C2-4亚烯基环烯基、-C2-4亚烯基芳基、-C2-4亚烯基杂环基、-C2-4亚烯基杂芳基、-C2-4亚炔基环烷基、-C2-4亚炔基环烯基、-C2-4亚炔基芳基、-C2-4亚炔基杂环基、-C2-4亚炔基杂芳基、-杂环基芳基、-杂芳基芳基、-杂环基C1-3亚烷基芳基、-C1-3亚烷基杂环基芳基、-C1-3亚烷基杂芳基芳基-CH2C(＝O)NHCH2环烷基、-CH2C(＝O)NHCH2环烯基、-CH2C(＝O)NHCH2芳基、-CH2C(＝O)NHCH2杂环基、-CH2C(＝O)NHCH2杂芳基、-C(＝O)NHC1-3亚烷基环烷基、-C(＝O)NHC1-3亚烷基环烯基、-C(＝O)NHC1-3亚烷基芳基、-C(＝O)NHC1-3亚烷基杂环基、-C(＝O)NHC1-3亚烷基杂芳基、-CH2SO2C1-3亚烷基环烷基、-CH2SO2C1-3亚烷基环烯基、-CH2SO2C1-3亚烷基芳基、-CH2SO2C1-3亚烷基杂环基、-CH2SO2C1-3亚烷基杂芳基、-CH2OC1-3亚烷基环烷基、-CH2OC1-3亚烷基环烯基、-CH2OC1-3亚烷基芳基、-CH2OC1-3亚烷基杂环基或-CH2OC1-3亚烷基杂芳基；尤其-C1-6烷基、-C2-6烯基、-环烷基、-环烯基、-芳基、-杂环基、-杂芳基、-C1-4亚烷基环烷基、-C1-4亚烷基环烯基、-C1-4亚烷基芳基、-C1-4亚烷基杂环基、-C1-4亚烷基杂芳基、-C2-4亚烯基环烷基、-C2-4亚烯基环烯基、-C2-4亚烯基芳基、-C2-4亚烯基杂环基、-C2-4亚烯基杂芳基、-杂环基芳基、-杂芳基芳基、-杂环基C1-3亚烷基芳基、-杂芳基C1-3亚烷基芳基、-C1-3亚烷基杂环基芳基或-C1-3亚烷基杂芳基芳基，其中各环烷基、环烯基、芳基、杂环基和杂芳基任选被一个或两个选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基或-卤基的取代基取代；尤其其中R2是苯基、苯甲基、-CH2CH2苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-4-氟-苯基、-CH2CH2C≡C苯基、-CH2CH2C≡C-4-氟苯基、-CH2CH2CH2苯基、-2-甲基丁基、-5-(3-甲基-1-苯基吡唑)、-3-(1，5-二苯基吡唑)、-3-(5-苯基吡唑)、-3-(5-甲基-1-苯基吡唑)、3-(5-(1-甲基乙基)-1-苯基吡唑、-2-(5-苯基噁唑)、-5-(5-苯甲基噁唑)、-5-(1-苯甲基-3-甲基吡唑)、-3-(1-苯甲基-5-甲基吡唑、-CH2-4-(2-苯基噁唑)、-5-(1-苯甲基)-3-三氟甲基吡唑和-5-(1-苯甲基-3-甲基吡唑)；
R3是-CO2H、-CH2CO2H、-C(＝O)C(＝O)OH、-C(＝O)NH2、-CN、-C(＝O)NHSO2C1-6烷基、-C(＝O)NHSO2苯基、-C(＝O)NHSO2N(C1-6烷基)2或-C(＝O)NHSO2CF3，尤其-CO2H、-CH2CO2H、-C(＝O)NHSO2C1-4烷基、-C(＝O)NHSO2N(C1-3烷基)2、-C(＝O)NHSO2苯基或-C(＝O)NHS O2CF3，更尤其-CO2H；
R4是氢或R4和R2一起形成任选被一个或两个选自-芳基、-C1-3亚烷基芳基、-O芳基、-OC1-3亚烷基芳基和-C(＝O)OC1-3亚烷基芳基的取代基取代的稠合芳基、杂环基或杂芳基环；尤其任选被苯基、苯甲基、-O苯甲基或-CO2苯甲基取代的稠合杂环基或杂芳基环；
R5和R6独立地选自苯基和环己基，尤其其中R5与R6两者都是苯基；
R7是氢、甲基、乙基或苯基。
在一些实施方案中，R3具有S立体化学。
在一个实施方案中，式(I)或(IA)化合物是式(II)化合物或其药学上可接受的盐：
其中
R1是-C(＝O)CHR5R6、-C(＝O)NR5R6、-C(＝O)CH2CHR5R6、-C(＝O)CH＝CR5R6、-C(＝S)CHR5R6、-C(＝S)NR5R6、-C(＝S)CH2CHR5R6、-C(＝S)CH＝CR5R6、-C(＝NR7)CHR5R6、-C(＝NR7)NR5R6、-C(＝NR7)CH2CH R5R6或-C(＝NR7)CH＝CR5R6；
R2是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C(＝O)R8、-C(＝O)NHR7、-SO2N(R7)2、-W-环烷基、-W-环烯基、-W-芳基、-W-杂环基、-W-杂芳基、-W-Z-Y-环烷基、-W-Z-Y-环烯基、-W-Z-Y-芳基、-W-Z-Y-杂环基或-W-Z-Y-杂芳基；
R3是羧酸、-CH2CO2H、-C(＝O)C(＝O)OH、-C(＝O)NH2、-CN或羧酸生物电子等排体；
R4是氢或连同R2一起形成任选被一个或两个选自以下的取代基取代的稠合环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基环：-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-C1-6亚烷基R9、-C2-6亚烯基R9、-C2-6亚炔基R9、-OC0-6亚烷基R9、-OC2-6亚烯基R9、-OC2-6亚炔基R9、-C(＝O)C0-6亚烷基R9、-C(＝O)C2-6亚烯基R9、-C(＝O)C2-6亚炔基R9、-C(＝O)OC0-6亚烷基R9、-C(＝O)OC2-6亚烯基R9、-C(＝O)OC2-6亚炔基R9、-SO2NHC0-6亚烷基R9、-SO2NHC2-6亚烯基R9、-SO2NHC2-6亚炔基R9、-NHSO2C0-6亚烷基R9、-NHSO2C2-6亚烯基R9、-NHSO2C2-6亚炔基R9、-NH(＝O)NHR10、-NHC(＝O)OR10或-CH(OH)CH(OH)R10；
R5和R6独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-CH2环烷基、-CH2环烯基、-CH2芳基、-CH2杂环基和-CH2杂芳基；前提是R5与R6两者都不是氢；
R7是氢、-C1-6烷基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R8是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、芳基或-C1-6亚烷基芳基；
R9是环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基；
R10是-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基；
W是共价键、-SO-、-SO2- -C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-4亚烷基-、-C2-4亚烯基-、-C2-4亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-或-C2-4亚炔基Q-；
Z是-环烷基-、-环烯基-、-芳基-、-杂环基-或-杂芳基-；
Y是共价键、-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-、-C(＝O)N(R7)-、-C1-3亚烷基-、-C2-3亚烯基-、-C2-3亚炔基-、-C1-3亚烷基QC1-3亚烷基-、-QC1-4亚烷基-、-QC2-4亚烯基-、-QC2-4亚炔基-、-C1-4亚烷基Q-、-C2-4亚烯基Q-、-C2-4亚炔基Q- -QC1-4亚烷基Q-、-QC2-4亚烯基Q-或-QC2-4亚炔基Q-；且
Q是-O-、-S-、-SO-、-SO2- -N(R7)-、-C(＝O)-、-N(R7)C(＝O)-或-C(＝O)N(R7)-；
其中各环烷基、环烯基、芳基、杂环基和杂芳基任选被取代。
特定式(I)化合物是：
特定式(I)化合物包括化合物4、5、6、7、8、9、10、16、23、24、25和26，尤其化合物4、5、7、10、16和23。
在一些实施方案中，式(I)化合物是选择性AT2受体拮抗剂。在特定实施方案中，使用生物实施例1和2中所述的测定方法，选择性AT2受体拮抗剂在AT2受体下具有IC50≤100nM以及在AT1受体下具有IC50＞100,000nM(10μM)。
本发明化合物是通过本领域中已知的方法自可商购获得的起始物质制备。
对于制备哌嗪化合物，适合起始物质是1N保护的哌嗪-2-甲酸或它的甲酯，其对映异构体是可商购获得的。
R1可在引入R2之前或在引入R2之后，或在形成稠合杂环基或杂芳基环之后引入。如果R2是在引入R1之前引入，那么可能必须在烷基化反应期间保护环氮。适合氮保护基在本领域中是已知的，例如在Greene和Wutz，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，1999中。适合氮保护基是叔丁氧基羰基(Boc)。
R1可通过用适合羧酸和环氮形成酰胺加以引入。酰胺形成在本领域中是熟知的且可涉及羧酸的活化，例如通过形成非亲核阴离子的酰氯、碳二亚胺、三唑或脲或磷鎓盐或来活化羧基。适合活化基团在本领域中是熟知的，包括二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)、2-氰基-2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯(Oxyma Pure)、O-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、O-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟磷酸盐(HCTU)、O-苯并三唑-1-基-N，N，N’N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基磷鎓(PyBOP)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)-三-(二甲基氨基)磷鎓(BOP)、六氟磷酸(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代-碳鎓(COMU)和O-[(乙氧基羰基)-氰基亚甲基氨基]-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)。
R2可通过如本领域中已知的烷基化或芳基化反应引入。举例来说，烷基卤化物或芳基烷基卤化物可用于使未保护的哌嗪氮原子烷基化。芳基可例如使用芳基硼酸在如二乙酸铜(Cu(OAc)2)的铜催化剂存在下通过铜催化的芳基化直接键结于未保护的哌嗪氮。
当R2是杂芳基或杂环基时，它可借助于适当卤化物或杂芳基硼酸直接引入或可原位制备。举例来说，未保护的哌嗪氮可用适合官能化的烷基或烷基芳基烷基化例如以提供1，3-二酮基丁基取代基或3-苯基-3-酮基-1-硫代甲基-1-丙烯基取代基。添加肼或取代的肼得到吡唑取代基作为R2。
当R2与哌嗪环氮原子形成酰胺时，R2可通过已知用于形成酰胺的方法(如对于引入R1所述的那些方法)引入。
稠合环系统也可易于通过文献程序制备。举例来说，咪唑并[1，2-a]哌嗪羧酸和三唑并[4，3-a]哌嗪羧酸可自适合N保护的哌嗪羧酸亚氨醚通过分别与取代或未取代的炔丙基胺或乙炔基胺或乙酸酰肼或芳酰基酰肼反应而制备[McCort和Pascal，Tet.Lett.，1992，33(31)：4443-4446以及WO 2009/158394]。
或者，可使2-(氨基甲基)吡嗪与芳酰氯(如PhCOCl)反应以提供芳基酰胺，其随后用POCl3环化以得到芳基取代的咪唑并[1，2-a]吡嗪环系统，其可随后用H2还原以得到咪唑并[1，2-a]哌嗪环系统[WO2009/158394]。
另一方法包括用适合N保护的2-羟乙基胺使咪唑-2-甲醛烷基化。使用亚硫酰氯用氯置换所得的5-(2-羟乙基-氨基甲基)咪唑羟基且进行环环化以产生咪唑并[1，2-a]哌嗪环系统[WO 2009/158394]。
当R2或由R2和R4形成的环上的取代基含有反应性官能团(如双键或三键、羟基、胺和羧酸)时，这些基团可通过本领域中已知的方法(如氧化、还原、烷基化、卤化等)加以操作。举例来说，双键可还原成烷基或例如用间-氯-过氧苯甲酸(MCPBA)氧化以提供环氧化物。三键可立体选择性还原以得到具有所需顺式或反式立体化学的双键。羟基可被氧化成酮、醛或羧酸。
可使用可商购获得的二氮杂，如R-或S-六氢-4-[(4-甲基苯基磺酰基]-2-氧代-1H-1，4-二氮杂-5-甲酸甲酯、2-Cbz-8-Boc-十氢吡嗪并[1，2-g][1，4]二氮杂-7-甲酸和2-Cbz-十氢吡嗪并[1，2-g][1，4]二氮杂-7-甲酸进行类似反应。
本发明方法
在本发明的一个方面，提供一种治疗或预防受试者的神经病变性病状的症状的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
式(I)化合物有效预防或减弱包括原发性和继发性神经病变性病状的神经病变性病状的症状。根据本发明，式(I)化合物可用于治疗、预防或减弱一种或多种与神经病变性病状相关的症状，包括但不限于感觉过敏、痛觉过敏、异常性疼痛和/或自发灼伤疼痛。在一些实施方案中，式(I)化合物用于预防或减弱一种或多种与外周神经病变性病状相关的症状，所述症状的说明性实例包括麻木、衰弱、灼伤疼痛、射痛和反射丧失。疼痛可为严重的和失能性的。在一些实施方案中，作为预防和/或减弱的对象的症状是神经病变性疼痛。因此，在一相关方面，本发明提供用于预防和/或减弱个体的神经病变性疼痛的方法，所述方法包括向所述个体施用疼痛预防或减弱有效量的适合地呈药物组合物形式的AT2受体拮抗剂。
神经病变和神经病变性疼痛存在许多可能病因，且应了解本发明涵盖治疗或预防无论病因如何的任何神经病变性病状的症状。在一些实施方案中，神经病变性病状是神经疾病(原发性神经病变)和如但不限于以下的由全身疾病引起的神经病变(继发性神经病变)的结果：糖尿病性神经病变；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病变；尿毒症相关神经病变；淀粉样变性神经病变；HIV感觉神经病变；遗传性运动和感觉神经病变(HMSN)；遗传性感觉神经病变(HSN)；遗传性感觉和自主神经病变；伴有溃疡残毁的遗传性神经病变；硝呋妥因(nitrofurantoin)神经病变；腊肠样肿胀神经病变；由营养缺乏引起的神经病变；由肾衰竭引起的神经病变和复杂区域疼痛综合征。其它病因包括重复活动(如打字或在装配线上工作)、已知会引起外周神经病变的药物，如若干抗反转录病毒药物(ddC(扎西他滨(zalcitabine))和ddI(地达诺新(didanosine))、抗生素(用于克罗恩氏病的抗生素甲硝哒唑(metronidazole)、用于结核的异烟肼(isoniazid))、金化合物(用于类风湿性关节炎)、一些化学疗法药物(如长春新碱(vincristine)等)和许多其它药物。也已知化合物会引起外周神经病变，所述化合物包括醇、铅、砷、汞和有机磷酸酯杀虫剂。一些外周神经病变与感染过程相关(如吉兰-巴雷综合征)。在某些实施方案中，神经病变性病状是外周神经病变性病状，其适合地是继发于机械神经损伤或疼痛糖尿病性神经病变(PDN)或相关病状的疼痛。
神经病变性病状可为急性或慢性的，且就此而论，本领域技术人员将了解神经病变的时程将基于它的潜伏病因而变化。就创伤而言，症状的发作可为急性的或突然的；然而，最严重症状可随时间且持续多年显现。炎症性和一些代谢神经病变具有延续数天至数周的亚急性病程。历经数周至数月的慢性病程通常指示毒性或代谢神经病变。历经许多年的慢性缓慢进展神经病变如与疼痛糖尿病性神经病变一起，或与大多数遗传性神经病变一起，或与称为慢性炎症性脱髓鞘多神经根神经病变(CIDP)一起发生。具有会复发和缓解的症状的神经病变性病状包括吉兰-巴雷综合征。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的特征在于神经元超敏性的病状的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，特征在于神经元超敏性的病状是痛觉过敏病状，如纤维肌痛。在其它实施方案中，病状是特征在于肠管中的神经元超敏性的肠易激综合征。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防与神经再生异常相关的病症的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，与神经再生异常相关的病症也包括神经元超敏性。与神经再生异常相关的病症的实例是乳房疼痛、间质性膀胱炎和外阴痛。在其它实施方案中，病症是癌症化学疗法诱发的神经病变。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的炎症性疼痛的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
与炎症相关的疼痛可为急性或慢性的，且可归因于特征在于炎症的许多病状，不加限制地包括灼伤，如化学、摩擦或化学灼伤；自体免疫性疾病，如类风湿性关节炎和骨关节炎；炎症性肠病(如克罗恩氏病和结肠炎)；和其它炎症性疾病，如炎症性肠病、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎和胶原蛋白血管疾病。
在另一方面，本发明提供一种治疗或预防受试者的神经传导速度受损的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
神经元传导速度受损是神经功能障碍或损伤的一种症状且可作为许多疾病或病症(特别是展现感觉异常作为症状的疾病或病症)的症状存在。在一些实施方案中，神经传导速度受损与如上所述的神经病变性病状相关。在其它实施方案中，神经传导速度受损与腕管综合征、尺骨神经病变、吉兰-巴雷综合征、面肩胛肱骨肌肉萎缩和椎间盘突出相关。
通过评估运动和感觉神经在体内的电传导来评估神经传导速度。运动神经传导速度是通过刺激外周神经及测量在与神经相关的肌肉中检测到电脉冲所花费的时间来测量。花费的时间是以毫秒进行测量且通过考虑行进距离来转换成速度(m/s)。在刺激外周神经及在如指或爪垫的感觉部位处进行记录下，以类似方式评估感觉神经传导。
在本发明的另一方面，提供一种在受试者中产生镇痛的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，受试者是患有神经病变性病状、炎症性病状、神经传导速度受损、特征在于神经元超敏性的病状或与神经再生异常相关的病症的受试者。在其它实施方案中，受试者是处于显现神经病变性疼痛、炎症性疼痛、与神经传导速度受损相关的疼痛、特征在于神经元超敏性的病状或与神经再生异常相关的病症的风险下的受试者。
在本发明的另一方面，提供一种治疗或预防受试者的细胞增生性病症的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，细胞增生性病症是癌症，尤其当癌症选自白血病、黑素瘤、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、肉样瘤、纤维肉瘤、结肠癌、肺癌和其它实体肿瘤癌症时。
在其它实施方案中，细胞增生性病症是非癌性增生性病症。所述非癌性增生性病症的实例包括皮肤学病症，如疣、疤痕疙瘩、牛皮癣、疤病症以及疤痕组织减少和美容重塑。
在另一方面，本发明提供一种治疗或预防受试者的与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症的方法，所述方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症是骨质疏松。
待治疗的受试者、个体或患者是哺乳动物受试者，包括但不限于人、灵长类动物、家畜动物，如绵羊、牛、猪、马、驴和山羊；实验室测试动物，如小鼠、大鼠、兔和天竺鼠；伴侣动物(如猫和狗)或捕获野生动物(如在动物园中饲养的那些动物)。在特定实施方案中，受试者是人。
“有效量”是指至少部分获得所需反应或延迟发作或抑制进展或完全停止所治疗的特定病状的发作或进展所需的量。所述量视待治疗的个体的健康和身体状况、待治疗的个体的分类组、所需防护程度、组合物的配制、医学情况的评估和其它相关因素而变化。预期所述量将属于可通过常规试验确定的相对宽泛范围。关于人患者的有效量例如可处于每剂每千克体重约0.1ng至1g的范围。剂量优选在每剂每千克体重1μg至1g的范围内，如在每剂每千克体重1mg至1g的范围内。在一个实施方案中，剂量在每剂每千克体重1mg至500mg的范围内。在另一实施方案中，剂量在每剂每千克体重1mg至250mg的范围内。在另一实施方案中，剂量在每剂每千克体重1mg至100mg的范围内，如每剂每千克体重多达50mg。在另一实施方案中，剂量在每剂每千克体重1μg至1mg的范围内。可调整剂量方案以提供最优治疗反应。举例来说，可每日、每周、每月或根据其它适合时间间隔施用若干分次剂量，或可如由情况的紧急性所指示，按比例降低剂量。
在本文中提及“治疗”和“预防”，应在它的最广泛情形下考虑。术语“治疗”未必暗示治疗受试者直至完全康复。“治疗”也可减轻现存病状的严重性。术语“预防”未必是指受试者将不最终染上疾病状况。术语“预防”可考虑为包括延迟特定病状的发作。因此，治疗和预防包括改善特定病状的症状或预防或另外降低显现特定病状的风险。
在一些实施方案中，式(I)化合物或它们的药学上可接受的盐可连同另一疗法一起施用。施药可以单一组合物进行或以单独组合物同时或依序进行以使两种化合物或疗法同时在体内具有活性。
在一些实施方案中，式(I)化合物或它们的药学上可接受的盐是连同用以治疗神经病变性或炎症性疼痛或引起神经病变性或炎症性疼痛的潜伏病状的另一疗法或用以治疗特征在于神经元超敏性的病状、与神经再生异常相关的病症、增生性病症或与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症的另一疗法一起施用。在一些实施方案中，当连同式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用时，可降低第二药物的量。
适用以治疗疼痛的其它药物包括鸦片剂，如吗啡碱(morphine)、可待因(codeine)、二氢可待因(dihydrocodeine)、氢可酮(hydrocodone)、乙酰基二氢可待因(acetyldihydroeodeine)、氧可酮(oxycodone)、氧吗啡酮(oxymorphone)和丁丙诺啡(buprenorphine)；以及非甾族抗炎药物(NSAID)，如阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、对乙酰氨基酚(acetaminophen)、二氟苯水杨酸(dmunisal)、双水杨酯(salsalate)、非那西汀(phenacetin)、非诺洛芬(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、奥沙普秦(oxaprozin)、氯索洛芬(loxoprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、依托度酸(etodolac)、酮咯酸(ketorolac)、双氯芬酸(diclofenac)、萘普酮(nabumetone)、甲灭酸(mefenamic acid)、甲氯灭酸(meclofenamic acid)、氟灭酸(flufenamic acid)、托芬那酸(tolfenamicacid)、塞来昔布(celecoxib)、帕瑞昔布(parecoxib)、鲁玛昔布(lumaricoxib)、依托昔布(etoricoxib)、非罗昔布(hrocoxib)、里梅舒得(rimesulide)和利克飞龙(licofelone)。
用以治疗神经病变的药物的实例包括度洛西汀(duloxetine)、普加巴林(pregabalin)、加巴喷丁(gabapentin)、苯妥英(phenytoin)、卡马西平(carbamazebine)、左卡尼汀(levocamitine)、三环抗抑郁剂(如阿米替林(amitryptiline))和钠通道阻断剂(如利多卡因(lidocaine))。
用于增生性病症的化学疗法药物的实例包括顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、喜树碱(camptothecin)、卡莫司汀(carmustine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunombicin)、地塞米松(dexamethasone)、多西他赛(docetaxel)、小红莓(doxombicin)、依托泊苷(etoposide)、表柔比星(epimbicin)、依维莫司(everolimus)、吉西他滨(gemcitibine)、戈舍瑞林(goserelin)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(Herceptin)、伊达比星(idarubicin)、干扰素-α、伊立替康(irinotecan)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素(mitomycin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、雷洛昔芬(raloxifene)、链脲霉素(streptozocin)、他莫昔芬(tamoxifen)、拓扑替康(topotecan)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、阿比特龙(abiraterone)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、地诺单抗(denosumab)、伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(geftinib)、拉帕替尼(lapatinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、利妥昔单抗(rituximab)、舒尼替尼(sunitinib)、埃罗替尼(erlotinib)和沃瑞塞特(vorinistat)。
用以治疗与骨形成与骨再吸收之间的不平衡相关的病症的药物的实例包括双膦酸盐(如阿仑膦酸钠(sodium alendronate)、利塞膦酸钠(sodium risedronate)和伊班膦酸钠(sodium ibandronate))、雷洛昔芬(raloxifene)、降血钙素(calcitonin)、特立帕肽(teriparatide)、雷尼酸锶(strontium ranelate)或钙补充剂。
用于治疗特征在于神经元超敏性的病状(如肠易激综合征)的药物的实例包括5HT3受体拮抗剂，如阿洛司琼(alosetron)(Lotronex)。
本发明的AT2受体拮抗剂也适于与放射疗法组合用于癌症患者中。
本发明的组合物
尽管有可能的是对于在疗法中使用，本发明化合物可以纯化学品形式施用，但优选的是以药物组合物形式呈现活性成分。
因此，在本发明的另一方面，提供一种包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。
载体在可与组合物的其它成分相容以及不对其接受者有害的意义上必须是“可接受的”。
药物制剂包括适于经口、经直肠、经鼻、表面(包括经颊和舌下)、经阴道或胃肠外(包括肌肉内、皮下和静脉内)施用或呈适于通过吸入或吹入施用的形式的那些制剂。因此，可将本发明化合物连同常规佐剂、载体、赋形剂或稀释剂一起处置成药物组合物及其单位剂量的形式，且在所述形式的情况下，可以以下形式加以采用：都供经口使用的固体(如片剂或填充胶囊)或液体(如溶液、混悬液、乳剂、酏剂或用所述液体填充的胶囊)；供经直肠施用的栓剂；或供胃肠外(包括皮下)使用的无菌可注射溶液。所述药物组合物及其单位剂型可以常规比例包含常规成分，有或无其它活性化合物或成分，且所述单位剂型可含有与待采用的预定每日剂量范围相称的任何适合有效量的活性成分。每片含有十(10)毫克活性成分或更广泛地0.1至两百(200)毫克的制剂是相应适合代表性单位剂型。本发明化合物可以广泛多种经口和胃肠外剂型施用。将为本领域技术人员显而易知的是以下剂型可包含本发明化合物或本发明化合物的药学上可接受的盐或衍生物作为活性组分。
对于自本发明化合物制备药物组合物，药学上可接受的载体可为固体或液体。固体形式制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可为一种或多种也可充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、混悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或囊封物质的物质。
在粉末的情况下，载体是处于与微细活性组分的混合物中的微细固体。
在片剂的情况下，以适合比例使活性组分与具有必要粘合能力的载体混合且以所需形状和尺寸加以压制。
粉末和片剂优选含有5％或10％至约70％的活性化合物。适合载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制备”意图包括配制活性化合物与作为载体的囊封物质，从而提供活性组分与或不与载体一起由载体(其因此与活性组分缔合)围绕的胶囊。类似地，包括扁囊剂和口含锭。片剂、粉末、胶囊、丸剂、扁囊剂和口含锭可用作适于经口施用的固体形式。
对于制备栓剂，首先熔融低熔点蜡，如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物，且如通过搅拌将活性组分均质分散于其中。接着将熔融均质混合物倾入适宜尺寸化模具中，使所述混合物冷却，且由此固化。
适于经阴道施用的制剂可呈现为除活性成分之外也含有如本领域中已知为适当的载体的子宫托、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾剂。
液体形式制剂包括溶液、混悬液和乳剂，例如水溶液或水-丙二醇溶液。举例来说，胃肠外注射液体制剂可配制成于聚乙二醇水溶液中的溶液。
因此，本发明化合物可被配制来供胃肠外施用(例如通过注射，例如团式注射或连续输注)且可以单位剂型提供于安瓿、预填充注射器、小体积输液或添加有防腐剂的多剂量容器中。组合物可采用如于油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳剂的形式，且可含有配制剂，诸如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可呈用于在使用之前用适合媒介物，例如无菌无热原水复原的粉末形式，其通过无菌分离无菌固体或通过自溶液冻干获得。
适于经口使用的水溶液可通过将活性组分溶解于水中及根据需要添加适合着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。
适于经口使用的水性混悬液可通过将微细活性组分与粘稠物质(如天然或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其它熟知助悬剂)一起分散于水中来制备。
也包括意图在使用之前即刻转换成供经口施用的液体形式制剂的固体形式制剂。所述液体形式包括溶液、混悬液和乳剂。除活性组分之外，这些制剂也可含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
对于向表皮进行表面施药，本发明化合物可配制成软膏剂、霜剂或洗剂或经皮贴片。软膏剂和霜剂可例如用水性或油性基质在添加适合的增稠剂和/或胶凝剂下配制。洗剂可用水性或油性基质配制且将通常也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、混悬剂、增稠剂或着色剂。
适于在口中进行表面施药的制剂包括口含锭，其包含活性剂于通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶的调味基质中；软锭剂，其包含活性成分于如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶的惰性基质中；以及嗽口剂，其包含活性成分于适合液体载体中。
溶液或混悬液是通过常规手段，例如用滴管、吸移管或喷雾器直接施用至鼻腔。制剂可以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸移管的后述情况下，这可通过患者施用适当预定体积的溶液或混悬液来达成。在喷雾器的情况下，这可例如借助于计量雾化喷雾泵来达成。为改进经鼻递送和滞留，本发明化合物可用环糊精囊封，或与它们的预期会增强在鼻粘膜中的递送和滞留的试剂一起配制。
向呼吸道施药也可借助于气雾剂制剂来达成，其中活性成分是提供于具有适合推进剂，如氯氟烃(CFC)(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)、二氧化碳或其它适合气体的加压包装中。气雾剂可宜也含有如卵磷脂的表面活性剂。药物的剂量可通过提供计量阀来控制。
或者，活性成分可以干燥粉末形式提供，例如化合物于适合粉末基质(如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(如羟丙基甲基纤维素)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))中的粉末混合物。
粉末载体宜将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以单位剂型提供，例如以例如明胶胶囊或药筒、或粉末可借助于吸入器自其施用的泡罩包装提供。
在意图向呼吸道施用的制剂，包括鼻内制剂的情况下，化合物将通常具有例如约1至10微米或1微米以下的小粒度。所述粒度可通过本领域中已知的手段，例如通过微粉化获得。
当需要时，可采用适合于持续释放活性成分的制剂。
药物制剂优选呈单位剂型。在所述形式的情况下，制剂被再分成含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可为包装制剂，所述包装含有个别量的制剂，如在小瓶或安瓿中的包装片剂、胶囊和粉末。此外，单位剂型可为胶囊、片剂、扁囊剂或口含锭自身，或它可为适当数目的呈包装形式的任何这些单位剂型。
药物组合物可包含其它活性成分，如其它用以治疗神经病变性或炎症性疼痛或引起神经病变性或炎症性疼痛的潜伏病状的疗法或用以治疗特征在于神经元超敏性的病状、与神经再生异常相关的病症、增殖病症或与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症的疗法。
本发明现将参照以下实施例加以描述，所述实施例说明本发明的一些优选方面。然而，应了解本发明的以下描述的特定性不应优先于本发明的先前描述的一般性。
实施例
缩写：
DCM 二氯甲烷
DBAD 偶氮二甲酸二苯甲酯
RT 室温
PE 石油醚
EA或EtOAc 乙酸乙酯
THF 四氢呋喃
Et2O 乙醚
MeOH 甲醇
Et3N 三乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DIPEA N，N-二异丙基乙胺
Bn 苯甲基
Bz 苯甲酰基
TLC 薄层色谱
DABCO 1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷
DMF 二甲基甲酰胺
LR 劳森氏试剂
TFA 三氟乙酸
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Py 吡啶
EtOH 乙醇
Boc 叔丁基氧基羰基
IPA 异丙醇
合成实施例中使用的一般性方法
LC-MS(Agilent)：
1.LC：Agilent Technologies 1200系列，二元泵，二极管阵列检测器。UltimateAQ-C18，3μm，2.1×50mm柱。流动相：B(MeOH)和A(0.07％HCOOH水溶液)。流速：0.4mL/min，在25℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间，5分钟。时间表：
T(分钟) B(％) A(％)
0 10 90
0.2 10 90
1.2 95 5
2.8 95 5
3 10 90
5 10 90
2.MS：G6110A，四极LC/MS，离子源：ES-API，TIC：50～900m/z，碎裂器：60，干燥气体流量：10L/min，喷雾器压力：35psi，干燥气体温度：350℃，Vcap：3500V。
3.样本制备：将样本在1～10μg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
LC-MS(Waters)：
1.LC：Waters 2695，四元泵，Waters 2996光电二极管阵列检测器。Xbridge-C18，3.5μm，2.1×50mm管。流动相：B(MeOH)和A(0.07％HCOOH水溶液)。流速：0.3mL/min，在30℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间，10分钟。时间表：
T B(％) A(％)
0 10 90
2.5 75 25
5.0 95 5
7.5 95 5
7.6 10 90
10 10 90
2.MS：Micromass QZ，TIC：100～900m/z，离子源：ES，毛细管电压：3kV，锥孔电压：3V，萃取电压：3V，干燥气体流量：600L/h，锥孔：50L/h，去溶剂化温度：300℃，源温度：100℃。
3.样本制备：将样本在1～10μg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
LC-MS(Agilent，P-2)(正离子模式)或LC-MS(Agilent，N-2)(负离子模式)：
1.LC：Agilent Technologies 1200系列，二元泵，二极管阵列检测器。Xbridge-C18，2.5μm，2.1×30mm柱。流动相：B(MeOH)和A(0.07％HCOOH水溶液)。流速：0.5mL/min，在30℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间，5分钟。时间表：
T(分钟) B(％) A(％)
0 80 20
0.2 80 20
0.8 5 95
2.8 5 95
3 80 20
5 80 20
2.MS：G6110A，四极LC/MS，离子源：ES-API，TIC：50～900m/z，碎裂器：60，干燥气体流量：10L/min，喷雾器压力：35psi，干燥气体温度：350℃，Vcap：3500V。
1.样本制备：将样本在1～10μg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
LC-MS(Agilent，P-1)(正离子模式)或LC-MS(Agilent，N-1)(负离子模式)(低极性样本)：
1.LC：Agilent Technologies 1200系列，二元泵，二极管阵列检测器。Xbridge-C18，2.5μm，2.1×30mm柱。流动相：B(MeOH)和A(0.07％HCOOH水溶液)。流速：0.4mL/min，在30℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间，6分钟。时间表：
T(分钟) B(％) A(％)
0 80 20
0.2 80 20
0.8 5 95
3.8 5 95
4 80 20
6 80 20
2.MS：G6110A，四极LC/MS，离子源：ES-API，TIC：50～900m/z，碎裂器：60，干燥气体流量：10L/min，喷雾器压力：35psi，干燥气体温度：350℃，Vcap：3500V。
3.样本制备：将样本在1～10μg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
分析型HPLC：
1.(称为“Aligent”)Agilent Technologies 1200系列，四元泵，二极管阵列检测器。Ultimate AQ-C18，5μm，4.6×250mm柱。流动相：B(MeOH)和A(0.07％TFA水溶液)。流速：1.00mL/min，在30℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间：20分钟。时间表：
T(分钟) B(％) A(％)
0 40 60
3 40 60
5 60 40
7 80 20
8 95 5
15 95 5
17 40 60
20 40 60
2.样本制备：将样本在～1mg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
称为“JULY-L”或“SYN-001”
1.Agilent Technologies 1200系列，四元泵，二极管阵列检测器。Waters Nova-pak C18，4μm，3.9×150mm柱。流动相：C(MeOH)和D(0.07％TFA水溶液)。流速：1.00mL/min，在30℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间：15分钟。时间表：
方法名称：SYN-001(高极性)
T(分钟) C(％) D(％)
0 5 95
2 5 95
5 12 88
6 40 60
7 95 5
10 95 5
12 60 40
13 5 95
15 5 95
方法名称：JULY-L(平均极性和低极性)
T(分钟) C(％) D(％)
0 20 80
2 20 80
4 40 60
5 70 30
6 95 5
10 95 5
11 70 20
12 20 80
15 20 80
2.样本制备：将样本在～1mg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
称为“ZSJ-2”
1.Agilent Technologies 1200系列，四元泵，二极管阵列检测器。Waters Nova-pak C18，4μm，3.9×150mm柱。流动相：C(MeOH)和D(0.07％TFA水溶液)。流速：1.00mL/min，在30℃下。检测器：214nm、254nm。梯度停止时间：30分钟。时间表：
方法名称：ZSJ-2
T(分钟) C(％) D(％)
0 20 80
28 95 5
30 70 30
2.样本制备：将样本在～1mg/mL下溶解于甲醇中，接着经0.22μm过滤膜过滤。注射体积：1～10μL。
实施例1：化合物4(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-苯基哌嗪-2-甲酸
1.用于制备4b的程序
在室温下向化合物4a(100mg，0.41mmol)和PhB(OH)2(75mg，0.61mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加Cu(OAc)2(22mg，0.12mmol)且将混合物搅拌过夜，TLC(MeOH∶DCM＝1∶10)显示大多数起始物质被消耗。对较大批化合物4a(1.0g，4.1mmol)重复反应且合并反应混合物并依次用冷水(20mL)和盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(EA∶PE＝1∶50)纯化以得到呈无色油状的4b(450mg，31％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.35分钟；C17H24N2O4的m/z计算值：[M+H]+321.2，[M+Na]+343.2，实测值：[M+H]+321.1，[M+Na]+343.1。
2.用于制备4c的程序
在室温下向4b(0.45g，1.4mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加CF3COOH(0.96g，8.4mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(MeOH∶DCM＝10∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于EA(5mL)中，用饱和NaHCO3水溶液、盐水(3mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到呈无色油状的4c(280mg，90％)。LC-MS(Agilent)：Rt2.57分钟；C12H17N2O2的m/z计算值：[M+H]+221.1，实测值：[M+H]+221.1。
3.用于制备4d的程序
在0℃下向4c(260mg，1.18mmol)和Et3N(238mg，2.36mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加自二苯基乙酸和亚硫酰氯制备的二苯基乙酰氯(408mg，1.77mmol)且在室温下搅拌混合物10分钟，TLC(MeOH∶DCM＝1∶10)显示起始物质被消耗。添加DCM/水(5mL/10mL)，分离有机层，用盐水(5mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝20∶1至10∶1)纯化以得到呈灰白色固体状的4d(350mg，71％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.30分钟；C26H27N2O3的m/z计算值：[M+H]+415.2，[M+Na]+437.2，实测值：[M+H]+415.2，[M+Na]+437.2。
4.用于制备4的程序
在0℃下向4d(350mg，0.84mmol)于THF(7mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(53mg，1.27mmol)于水(3mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(MeOH∶DCM＝1∶10)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物以移除大多数THF。将残余物分配于EA(3mL)与水(10mL)之间且混合物用1M HCl酸化至pH3-4。有机相用盐水(5mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。粗4用正己烷洗涤以得到呈灰白色固体状的纯4(280mg，82％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.25分钟；C25H24N2O3的m/z计算值：[M+H]+401.2，[M+Na]+423.2，实测值：[M+H]+401.2，[M+Na]+423.2。HPLC(214和254nm)：Rt13.53分钟。
实施例2：化合物5(S)-4-苯甲基-1-(2，2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备化合物5a的程序
在0℃下向4a(0.5g，2.0mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加DIPEA(317.4mg，2.45mmol)和苄基溴(359.1mg，2.1mmol)且在室温下搅拌混合物40分钟，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示起始物质被消耗。添加水(30mL)且混合物用EA(30mL)萃取。有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩以得到呈黄色油状的5a(650mg，97％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.28分钟；C18H26N2O4的m/z计算值：[M+H]+335.1，实测值：[M+H]+355.1。
2.用于制备化合物5b的程序
向5a(650mg，1.95mmol)于DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(1.34g，11.7mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示起始物质被消耗。真空移除溶剂，添加水(15mL)和Et2O(15mL)且分离有机层。水相用饱和Na2CO3水溶液调整至pH8且用DCM(15mL x2)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩以得到呈黄色油状的5b(300mg，65％)。LC-MS(Agilent)：Rt0.77分钟；C13H18N2O2的m/z计算值：[M+H]+235.1，实测值：[M+H]+235.1。
3.用于制备化合物5c的程序
向化合物5b(300mg，1.28mmol)于DCM(6mL)中的溶液中添加Et3N(194mg，1.92mmol)和二苯基乙酰氯(354mg，1.54mmol)于DCM(2mL)中的溶液且在室温下搅拌混合物30分钟，TLC显示起始物质被消耗。添加水(10mL)，分离各层且水相用DCM(10mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩。通过二氧化硅柱(PE∶EA＝1∶0至3∶1)纯化得到呈白色固体状的5c(470mg85％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.30分钟；C27H28N2O3的m/z计算值：[M+H]+429.2，实测值：[M+H]+429.2。
4.用于制备5的程序
向化合物5c(250mg，0.58mmol)于THF/水(6mL/2mL)中的溶液中添加LiOH(73.5mg，1.75mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF，添加水(20mL)和Et2O(10mL)且移除Et2O相。添加DCM(10mL)且水层用1M HCl水溶液调整至pH2-3。分离各层且水层用DCM(2x10mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩以得到呈白色固体状的5(220mg，91％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.30分钟；C26H26N2O3的m/z计算值：[M+H]+415.2，实测值：[M+H]+415.2。HPLC(214和254nm)：Rt14.18分钟。
实施例3：化合物6(S)-4-(1，5-二苯基-1H-吡唑-3-基)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-哌嗪-2-甲酸
1.用于制备6b的程序
在130℃下在密封管中加热4a(2.00g，13.8mmol)和6a(9.34g，41.6mmol)(根据Tetrahedron，2010，66，2843中的程序制备)于甲苯(40mL)中的混合物3小时，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示起始物质被消耗。真空移除溶剂且残余物通过Al2O3柱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈稠密黄色油状的6b(600mg，16％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.27分钟；C21H28N2O5S的m/z计算值：[M+H]+421.2，[M+Na]+443.2，实测值：[M+H]+421.2，[M+Na]+443.2。
2.用于制备化合物6c的程序
将6b(600mg，1.42mmol)、DABCO(192mg，1.71mmol)和P hNHNH2(185mg，1.71mmol)于t-BuOH(30mL)中的混合物在回流下加热过夜，TLC(PE∶EtOAc＝2∶1)显示大多数起始物质被消耗。冷却混合物至室温且真空浓缩。将残余物溶解于EA(30mL)中且用0.1M HCl水溶液(20mL x 2)和盐水洗涤，接着经Na2SO4干燥且真空浓缩。通过色谱(PE∶EA＝50∶1至20∶1)纯化得到呈黄色固体状的6c(200mg，30％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.44分钟；C26H30N4O4的m/z计算值：[M+H]+463.2，[M+Na]+485.2，[M+H]+463.2，[M+Na]+485.2。
3.用于制备化合物6d的程序
在室温下搅拌6c(200mg，0.43mmol)于4M HCl/EtOH(5mL)中的溶液3小时，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示反应完成。真空浓缩混合物且将残余物分配于DCM(20mL)与水(20mL)之间。水层用饱和Na2CO3水溶液碱化至pH7-8且分离各层。水层用DCM(20mL)萃取且合并的有机萃取物用盐水(20mL x1)洗涤，经Na2SO4干燥且过滤。向滤液中添加Et3N(53mg，0.52mmol)和二苯基乙酰氯(109mg，0.47mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示反应完成。混合物用盐水(8mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩且残余物通过色谱(PE∶EA＝50∶1至4∶1)纯化以得到呈白色固体状的6d(140mg，58％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.50分钟；C35H32N4O3的m/z计算值：[M+H]+557.3，实测值：[M+H]+557.3。
4.用于制备6的程序
向6d(130mg，0.23mmol)于THF(5mL)和H2O(1mL)中的混合物中添加LiOH.H2O(24mg，0.58mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF且将残余物溶解于水(30mL)中并用PE(20mL)洗涤。水层用3M HCl水溶液酸化至pH 2-3且通过过滤收集所得沉淀。将固体溶解于DCM中，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到120mg固体，其自EA/PE重结晶以得到呈白色固体状的6(80mg，64％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.52分钟；C34H30N4O3的m/z计算值：[M+H]+543.2，实测值：[M+H]+543.2。HPLC(214和254nm)：Rt8.55分钟。
实施例4：化合物7(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备化合物7a的程序
将化合物4a(600mg，2.5mmol)和乙酰乙酸叔丁酯(427mg，2.7mmol)于甲苯(10mL)中的混合物在100℃下加热过夜，TLC(PE∶EA＝1∶1)显示大多数起始物质被消耗。冷却混合物至室温，真空浓缩且残余物通过快速色谱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈黄色油状的7a(770mg，95％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.19分钟；C15H24N2O6的m/z计算值：[M+H]+329.2，[M+Na]+351.2，[M+H-t-Bu]+272.2，实测值：[M+H]+329.2，[M+Na]+351.2，[M+H-t-Bu]+272.2。
2.用于制备化合物7b的程序
在室温下搅拌7a(600mg，1.8mmol)、PhNHNH2(217mg，2.0mmol)和劳森氏试剂(808mg，2.0mmol)于THF/吡啶(10mL/1mL)中的混合物30分钟且接着在55℃下加热4小时，TLC(PE∶EA＝1∶1)显示起始物质被消耗。冷却反应至室温且分配于EA(20mL)与水(20mL)之间。分离有机层，用1M HCl水溶液、盐水洗涤且经Na2SO4干燥，接着过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈黄色油状的7b(400mg，54％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.47分钟；C21H28N4O4的m/z计算值：[M+H]+401.2，实测值：[M+H]+401.2。
3.用于制备化合物7c的程序
在室温下搅拌化合物7b(400mg，1.0mmol)于4M HCl/EtOH溶液(10mL)中的混合物4小时，TLC(PE∶EA＝1∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且将残余物分配于DCM(10mL)与水(10mL)之间且水层用饱和NaHCO3水溶液碱化至pH 8-9。分离有机层且水层用DCM(10mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到呈无色油状的脱保护的胺(250mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。LC-MS(Waters)：Rt4.16分钟；C16H20N4O2的m/z计算值：[M+H]+301.2，[M+Na]+323.1，实测值：[M+H]+301.2，[M+Na]+323.2。
4.用于制备化合物7d的程序
将7c(250mg)溶解于DCM(15mL)中且依次添加二苯基乙酸(195mg，0.92mmol)、EDCI.HCl(238mg，1.24mmol)和DMAP(催化剂)。接着将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示反应完成。混合物用DCM(15mL)稀释且用盐水(20mL)洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝1∶0至10∶1)纯化以得到呈白色固体状的7d(250mg，50％(针对两步而言))。LC-MS(Agilent)：Rt3.40分钟；C30H30N4O3的m/z计算值：[M+H]+495.2，[M+Na]+517.2，实测值：[M+H]+495.3，[M+Na]+517.3。
5.用于制备化合物7的程序
向7d(250mg，0.51mmol)于THF/H2O(5mL/1mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(53mg，1.26mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝1∶2)显示反应完成。真空浓缩混合物且将残余物溶解于水(30mL)中并用Et2O(20mL)洗涤。在冰水浴中冷却水层且用1M HCl水溶液酸化至pH 4-5。通过过滤收集所得白色沉淀，用水(15mL x 2)洗涤且在50℃下干燥过夜以得到呈白色固体状的7(190mg，78％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.43分钟；C29H28N4O3的m/z计算值：[M+H]+481.2，实测值：[M+H]+481.2。HPLC(214和254nm)：Rt8.15分钟。
实施例5：化合物8(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-苯乙基哌嗪-2-甲酸
1.用于制备8a的程序
向4a(500mg，2.05mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(310mg，2.4mmol)和2-溴乙基苯(359mg.2.1mmol)且将混合物在70℃下加热过夜，TLC(PE∶EA＝1∶1)显示起始物质被消耗。添加水(15mL)且混合物用EA(10mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(10mLx 2)洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩以得到呈无色油状的粗8a(1.0g)，其直接用于下一步骤中。LC-MS(Agilent)：Rt3.32分钟；C29H28N2O4的m/z计算值：[M+H]+349.2，实测值：[M+H]+349.2。
2.用于制备化合物8b的程序
向8a(700mg，1.93mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加TFA(1.32g，11.58mmol)且在室温下搅拌混合物5小时，TLC(PE∶EA＝1∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且残余物用水(10mL)稀释并用Et2O(5mL x 2)洗涤。水层用饱和Na2CO3水溶液碱化至pH 9-10且用DCM(10mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩以得到呈无色油状的8b(300mg)，其直接用于下一步骤中。
3.用于制备8c的程序
在0℃下向8b(300mg，1.2mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(243mg，2.4mmol)和二苯基乙酰氯(331mg，1.44mol)且接着在室温下搅拌混合物1小时，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示起始物质被消耗。添加DCM(5mL)和水(5mL)，分离有机层，用盐水(10mL x2)洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩。残余物通过色谱(DCM∶MeOH＝1∶0至20∶1)纯化以得到呈无色油状的8c(300mg，62％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.38分钟；C28H30N2O3的m/z计算值：[M+Na]+465.2，实测值：[M+Na]+465.2。
4.用于制备8的程序
在0℃下向8c(300mg，0.67mmol)于THF(7mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(42mg，1.0mmol)于水(3mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝1∶1)显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF且所得水溶液用乙醚(5mL x 2)洗涤。添加EA(5mL)且水层用1M HCl水溶液酸化至pH 2～3。收集有机层且用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到粗8，其用己烷洗涤以得到呈白色固体状的纯8(90mg，31％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.13分钟；C27H28N2O3的m/z计算值：[M+H]+429.2，实测值：[M+H]+429.2。HPLC(214和254nm)：Rt11.49分钟。
实施例6：化合物9(S)-4-肉桂基-1-(2，2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备9a的程序
在0℃下向化合物4a(500mg，2.05mmol)于DMF(8mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(318mg，2.46mmol)和反式-肉桂基溴化物(444mg，2.25mmol)且在室温下搅拌混合物5小时，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。添加水(30mL)且混合物用EA(20mL x 2)萃取。分离各层且合并的有机萃取物用水、盐水洗涤并经Na2SO4干燥。真空移除溶剂以得到呈黄色油状的粗9a(0.8g)，其直接用于下一步骤中。LC-MS(Agilent)：Rt3.11分钟；C20H28N2O4的m/z计算值：[M+H]+361.2，实测值：[M+H]+361.2。
2.用于制备化合物9b的程序
向化合物9a(0.8g，2.2mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加T FA(1.5g，13.3mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且将残余物溶解于水(20mL)中并用Et2O(15mL)洗涤。添加DCM(15mL)且水层用饱和Na2CO3水溶液碱化至pH7-8。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到呈黄色油状的9b(600mg，100％)。LC-MS(Agilent)：Rt2.78分钟；C15H20N2O2的m/z计算值：[M+H]+261.1，实测值：[M+H]+261.1。
3.用于制备9c的程序
在0℃下向9b(600mg，2.3mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加Et3N(354mg，3.5mmol)和二苯基乙酰氯(650.0mg，2.8mmol)且在室温下搅拌混合物10分钟，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。添加水(20mL)，分离各层且有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过二氧化硅柱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化得到呈白色固体状的9c(700mg，70％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.17分钟；C29H30N2O3的m/z计算值：[M+H]+455.2，实测值：[M+H]+455.2。
4.用于制备9的程序
向9c(700mg，1.5mmol)于THF/水(10mL/3mL)中的搅拌混合物中添加LiOH.H2O(194mg，4.5mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF且将残余物溶解于水(20mL)中并用Et2O(15mL)洗涤。添加DCM(15mL)且水层用1M HCl水溶液酸化至pH2-3。分离有机层且用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。自EA/PE重结晶得到呈白色固体状的9(500mg，75％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.18分钟；C28H28N2O3的m/z计算值：[M+H]+441.2，实测值：[M+H]+441.2。HPLC(214和254nm)：Rt11.87分钟。
实施例7：化合物10(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-(3-苯基丙基)哌嗪-2-甲酸
向化合物9(300mg，0.68mmol)于EA(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(30mg)且将混合物在室温下在H2气氛(1atm压力)下搅拌过夜，LCMS分析显示起始物质被消耗。通过经硅藻土过滤移除催化剂且真空浓缩滤液。通过二氧化硅柱(DCM∶MeOH＝1∶0至20∶1)纯化得到呈白色固体状的10(100mg，33％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.15分钟；C28H30N2O3的m/z计算值：[M+H]+443.2，实测值：[M+H]+443.2。HPLC(214和254nm)：Rt11.72分钟。
实施例8：化合物16(S)-4-(1-苯甲基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-(2，2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备化合物16a的程序
向7a(400mg，1.2mmol)于甲苯(10mL)中的溶液中添加劳森氏试剂(747mg，0.6mmol)且将混合物在75℃下加热过夜，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且残余物通过二氧化硅柱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈黄色油状的16a(120mg，29％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.33分钟；C15H24N2O5的m/z计算值：[M+Na]+367.1，实测值：[M+Na]+367.1。
2.用于制备16b的程序
向16a(120mg，0.35mmol)于甲苯(10mL)中的溶液中添加Bn NHNH2.2HCl(81.6mg，0.42mmol)。添加2滴吡啶且将混合物在90℃下加热过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且残余物通过二氧化硅柱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈黄色油状的16b(100mg，69％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.66分钟；C22H30N4O4的m/z计算值：[M+H]+415.2，[M+Na]+437.3，[M+H]+415.2，[M+Na]+437.2。
3.用于制备16c的程序
在室温下搅拌16b(100mg，0.24mmol)于4M HCl/EtOH溶液(5mL)中的混合物3小时，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示大多数起始物质被消耗。真空移除大多数乙醇且残余物用水(10mL)稀释且用Et2O(10mL)洗涤。水层用饱和Na2CO3水溶液碱化至pH7-8且用DCM(10mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到呈黄色油状的16c(75mg，100％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.33分钟；C17H22N4O2的m/z计算值：[M+H]+315.2，[M+Na]+337.2，[M+H]+315.2，[M+Na]+337.1。
4.用于制备化合物16d的程序
向16c(70.0mg，0.22mmol)和二苯基乙酸(52.0mg，0.25mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加EDCI.HCl(85.5mg，0.44mmol)和DMAP(5mol％)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。混合物用DCM稀释且用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩。通过二氧化硅柱(PE∶EA＝10∶1至5∶1)纯化得到呈黄色固体状的16d(95mg，86％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.53分钟；C31H32N4O3的m/z计算值：[M+H]+509.2，[M+Na]+531.3，[M+H]+509.2，[M+Na]+531.2。
5.用于制备16的程序
向16d(90.0mg，0.18mmol)于THF/水(6mL/2mL)中的混合物中添加LiOH.H2O(22.3mg，0.53mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF且将残余物溶解于水(20mL)中并用Et2O(15mL)洗涤。水层用1M HCl水溶液酸化至pH3且通过过滤收集所得沉淀并干燥以得到呈白色固体状的16(55mg，63％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.48分钟；C30H30N4O3的m/z计算值：[M+H]+495.2，实测值：[M+H]+495.2。HPLC(JULY-L)(214和254nm)：Rt8.21分钟。
实施例9：化合物17(S)-4-(1-苯甲基-5-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-(2，2-二苯基乙酰基)哌啶-2-甲酸
1.用于制备17a的程序
向16a(450mg，1.3mmol)于甲苯(10mL)中的溶液中添加N2HN H2.H2O(85％水溶液，197mg，3.4mmol)且将混合物在70℃下加热过夜，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且残余物通过柱色谱(DCM∶MeOH＝100∶1至50∶1)纯化以得到呈黄色固体状的17a(350mg，83％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.64分钟；C15H24N4O4的m/z计算值：[M+H]+325.2，实测值：[M+H]+325.2。
2.用于制备17b的程序
将17a(320mg，0.99mmol)、苄基溴(186mg，1.09mmol)和C s2CO3(387mg，1.2mmol)于DMF(8mL)中的混合物在45℃下加热过夜，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示大多数起始物质被消耗。冷却混合物至室温，倾入冰水(30mL)中且用EA(20mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过柱色谱(DCM∶MeOH＝1∶0至20∶1)纯化得到呈黄色油状的17b(300mg，73％)和回收的起始物质(60mg，19％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.93分钟；C22H30N4O4的m/z计算值：[M+H]+415.2，实测值：[M+H]+415.2。
3.用于制备17c的程序
在室温下搅拌17b(300mg，0.72mmol)于4M HCl/MeOH溶液中的混合物3小时，TLC显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且将残余物分配于DCM(20mL)与饱和NaHCO3水溶液(30mL)之间。分离各层且水层进一步用DCM(20mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到呈黄色油状的粗17c(240mg，＞100％)，其直接用于下一步骤中。LC-MS(Agilent)：Rt3.32分钟；C17H22N4O2的m/z计算值：[M+H]+315.2，[M+Na]+337.2，实测值：[M+H]+315.2，[M+Na]+337.2。
4.用于制备17d的程序
向17c(240mg，0.76mmol)和二苯基乙酸(195mg，0.92mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加EDCI.HCl(190mg，0.99mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。混合物用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过柱色谱(DCM∶MeOH＝1∶0至20∶1)纯化以得到呈稠密无色油状的17d(320mg，82％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.98分钟；C31H32N4O3的m/z计算值：[M+H]+509.3，[M+Na]+531.3，[M+H]+509.3，[M+Na]+531.2。
5.用于制备17的程序
向17d(160mg，0.31mmol)于THF/水(10mL/1.5mL)中的混合物中添加LiOH.H2O(40mg，0.94mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，LCMS分析显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF且将残余物溶解于水(10mL)中，用3M HCl水溶液酸化至pH 4-5且用DCM(15mL x2)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩以得到呈白色固体状的呈4∶1比率的17和16(150mg，98％)。比率是通过对1H NMR光谱积分所测定。LC-MS(Agilent)：Rt4.01分钟；C30H30N4O3的m/z计算值：[M+H]+495.2，实测值：[M+H]+495.3。HPLC(214和254nm)：Rt9.21分钟。
实施例10：化合物23(S)-4-(1-苯甲基-3-(-三氟甲基)-1H-吡唑-5-基)-1-(2，2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备23a的程序
将4，4，4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(4.72g，25.6mmol)、苯甲基-肼二盐酸盐(5.00g，25.63mmol)和TsOH.H2O(490mg，2.56mmol)于EtOH(30mL)中的混合物在回流下加热过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且将残余物分配于EA(15mL)与水(15mL)之间。分离有机层，用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物自Et2O重结晶以得到呈白色固体状的23a(2.22g，36％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.75分钟；C11H9F3N2O的m/z计算值：[M+H]+243.1，[M+Na]+265.1，实测值：[M+H]+243.1，[M+Na]+265.1。
2.用于制备23b的程序
在0℃下向23a(2.22g，9.17mmol)和DMF(2.68g，36.7mol)的混合物中逐滴添加POCl3(10mL)。接着在80℃下在N2气氛下加热混合物5小时，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。使混合物冷却至室温，倾入冰水(150mL)中且用EA(50mL)萃取。向有机层中添加水(40mL)且水层用K2CO3调整至pH 7。收集有机层，用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝1∶0至10∶1)纯化以得到呈稠密黄色油状的23b(1.78g，67％)。LC-MS(Agilent)：Rt4.08分钟；C12H8ClF3N2O的m/z计算值：[M+H]+289.0.[M+Na]+311.0，实测值：[M+H]+289.0.[M+Na]+311.0。
3.用于制备23c的程序
将23b(1.78g，6.16mmol)、4a(1.81g，7.40mmol)和CsF(6.55g，43.2mmol)于DMF(30mL)中的混合物在80℃下在N2气氛下加热过夜，TLC(PE∶EA＝10∶1)显示起始物质被消耗。使混合物冷却至室温，倾入冰水(250mL)中且用EA(80mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝25∶1至10∶1)纯化以得到呈红色固体状的23c(1.29g，42％)。LC-MS(Agilent)：Rt4.43分钟；C23H27F3N4O5的m/z计算值：[M-Boc+H]+397.1.[M+Na]+519.2，实测值：[M-Boc+H]+397.1.[M+Na]+519.2。
4.用于制备23d的程序
在0℃下向23c(1.29g，2.60mmol)于丙酮(30mL)中的溶液中逐滴添加琼斯试剂(7.0mL，5.2mmol)且在0℃下搅拌混合物2小时，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示大多数起始物质被消耗。反应用异丙醇(3mL)淬灭，搅拌5分钟，接着过滤以移除沉淀且真空浓缩滤液。将残余物溶解于水(20mL)中，用Et3N碱化至pH 8且用DCM(15mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(30mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈白色固体状的23d(450mg，34％)。LC-MS(Agilent)：Rt4.25分钟；C23H27F3N4O6的m/z计算值：[M-Boc+H]+413.1，[M+H]+513.2，[M+Na]+535.2，实测值：[M-Boc+H]+413.1，[M+H]+513.2，[M+Na]+535.2。
5.用于制备23e的程序
在180℃下在N2气氛下加热23d(380mg，0.74mmol)2小时，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗，接着冷却至室温以得到呈灰色油状的23e(300mg)，其直接用于下一步骤中。LC-MS(Agilent)：Rt3.96分钟；C22H27F3N4O4的m/z计算值：[M+H]+469.2，[M+Na]+491.2，实测值：[M+H]+469.2，[M+Na]+491.2。
6.用于制备23f的程序
向23e(300mg)于MeOH(5mL)中的溶液中添加4M HCl/MeOH溶液(25mL)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且将残余物溶解于水(20mL)中并用Et2O洗涤。水相用K2CO3碱化至pH 7～8且用EA(15mL x 2)萃取。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝7∶1至1∶1)纯化以得到呈无色油状的23f(100mg，42％)。LC-MS(Agilent)：Rt3.76分钟；C17H19F3N4O2的m/z计算值：[M+H]+369.2，[M+Na]+391.2，实测值：[M+H]+369.2，[M+Na]+391.2。
7.用于制备23f的程序
在0℃下向23f(90mg，0.24mmol)和Et3N(32mg，0.32mmol)于DCM(20mL)中的溶液中添加二苯基乙酰氯(68mg，0.29mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示形成主要新产物。混合物用盐水(15mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至5∶1)纯化以得到呈白色固体状的23g(100mg，73％)。LC-MS(Agilent)：Rt4.01分钟；C31H29F3N4O3的m/z计算值：[M+H]+563.3，[M+Na]+585.2，实测值：[M+H]+563.3，[M+Na]+585.2。
8.用于制备23的程序
将23g(100mg，0.18mmol)和LiOH.H2O(23mg，0.53mmol)于THF/水(8mL/2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。真空移除大多数THF且将残余物溶解于水(10mL)中并用3M HCl水溶液酸化至pH 4～5。通过过滤收集所得沉淀且在60℃下干燥以得到呈白色固体状的23(78mg，80％)。LC-MS(Agilent)：Rt4.51分钟；C30H27N4O3的m/z计算值：[M+H]+549.2，[M+Na]+571.2，实测值：[M+H]+499.2，[M+Na]+571.2。HPLC(JULY-L)(214和254nm))：Rt9.27分钟。
实施例11：化合物24(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-(3-苯基丙-2-炔-1-基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备24b的程序
向4a(150mg，0.61mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(102mg，0.74mmol)和24a(144mg，0.74mmol)且将混合物在70℃下加热过夜，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。将混合物倾入冰水(20mL)中且用EA(15mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至8∶1)纯化以得到呈无色油状的24b(70mg，31％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.19分钟；C20H26N2O4的m/z计算值：[M+H]+359.2，[M+Na]+381.2，实测值：[M+H]+359.2，[M+Na]+381.2。
2.用于制备24c的程序
将24b(70mg，0.20mmol)和4M HCl/MeOH溶液(5mL)的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于水(10mL)中，用K2CO3碱化至pH 9且用DCM(10mL x 2)萃取。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。将残余物溶解于DCM(5mL)中，添加二苯基乙酸(45mg，0.22mmol)和EDCI(45mg，0.23mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。混合物用水(5mL)、盐水(5mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至4∶1)纯化以得到呈无色油状的24c(37mg，42％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.10分钟；C29H28N2O3的m/z计算值：[M+H]+453.2，实测值：[M+H]+453.2。
3.用于制备24的程序
将24c(37mg，0.081mmol)和LiOH.H2O(10mg，0.245mmol)于THF/H2O(2mL/0.5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于水(2mL)中，用4M HCl水溶液酸化至pH 4～5且用DCM(5mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体状的24(15mg，41％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.10分钟；C28H26N2O3的m/z计算值：[M+H]+439.2，实测值：[M+H]+439.2。HPLC(JULY-L)(214和254nm)：Rt9.04分钟。
实施例12：化合物25(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-(3-氟苯基丙-2-炔-1-基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备25a的程序
向4a(200mg，0.82mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(170mg，1.23mmol)和25a(170mg，0.81mmol)且将混合物在30℃下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。将混合物分配于EA(20mL)与H2O(20mL)之间，分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至2∶1)纯化以得到呈棕色油状的25b(100mg，32％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.277分钟；C20H25FN2O4的m/z计算值：[M+H]+377.2，[M+Na]+399.2，实测值：[M+H]+377.2，[M+Na]+399.2。
2.用于制备25c的程序
将25b(100mg，0.27mmol)和4M HCl/MeOH溶液(5mL)的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于水中，用K2CO3碱化至pH 9-10且用DCM(20mL x 3)萃取。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将残余物溶解于DCM(5mL)中，在0℃下添加TEA(42mg，0.41mmol)和2，2-二苯基乙酰氯(74mg，0.32mmol)且使混合物升温至室温并搅拌10分钟，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。反应用水淬灭且分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至1∶1)纯化以得到呈黄色油状的25c(100mg，77％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.449分钟；C29H27FN2O3的m/z计算值：[M+H]+471.2，实测值：[M+H]+471.2。
3.用于制备25的程序
将25c(100mg，0.21mmol)和LiOH.H2O(36mg，0.85mmol)于THF/H2O(3mL/1mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝1∶2)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于水(5mL)中且用3M HCl水溶液酸化至pH 3～4。通过过滤收集所得沉淀且干燥以得到呈白色固体状的25(66mg，69％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.206分钟；C28H25FN2O3的m/z计算值：[M+H]+457.2，实测值：[M+H]+457.2。HPLC(JULY-L)(214和254nm)：Rt9.071分钟。
实施例13：化合物26(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-(4-苯基丁-3-炔-1-基)哌嗪-2-甲酸
1.用于制备26a的程序
将4a(500mg，2.05mmol)、K2CO3(339mg，2.46mmol)和4-溴-1-丁炔(273mg，2.05mmol)于DMF(5mL)中的混合物在60℃下加热过夜。再添加4-溴-1-丁炔(273mg，2.05mmol)且在60℃下继续加热6小时，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。将混合物倾入冰水(30mL)中且用EA(10mL x 2)萃取，合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝1∶0至9∶1)纯化以得到呈无色油状的26a(367mg，60％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.85分钟；C15H24N2O4的m/z计算值：[M+H]+296.2，[M+Na]+319.2，实测值：[M+H]+296.2，[M+Na]+319.2。
2.用于制备26b的程序
将26a(367mg，1.24mmol)于4M HCl/MeOH(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于水(10mL)中，用K2CO3碱化至pH 9～10且用IPA/CHCl3(1/3v/v，8mL x 7)萃取。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。将残余物溶解于DCM(10mL)中且冷却至0℃。添加Et3N(205mg，1.49mmol)，随后缓慢添加二苯基乙酰氯(343mg，1.49mmol)。在室温下搅拌混合物10分钟，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。混合物用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝10∶1至5.5∶1)纯化以得到呈无色油状的26b(331mg，68％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.07分钟；C24H26N2O3的m/z计算值：[M+H]+391.2，[M+Na]+413.2，实测值：[M+H]+391.2，[M+Na]+413.2。
3.用于制备26c的程序
在90℃下在微波辐射下加热26b(50mg，0.13mmol)、碘苯(31mg，0.15mmol)、CuI(2mg，0.006mmol)、Pd(PPh3)Cl2(9mg，0.013mmol)和Et3N(39mg，0.39mmol)于THF(5mL)中的混合物30分钟，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。重复反应(使用50mg 26b)且合并两个反应混合物并分配于EA/盐水(20mL/20mL)之间。收集有机层，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝1∶0至4∶1)纯化以得到呈无色油状的26c(60mg，50％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.26分钟；C30H30N2O3的m/z计算值：[M+H]+467.2，实测值：[M+H]+467.3。
4.用于制备26的程序
将26c(60mg，0.12mmol)和LiOH.H2O(19mg，0.45mmol)于THF/H2O(3mL/1mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，将残余物溶解于水(10mL)中，用4M HCl水溶液酸化至pH 4～5且用DCM(10mL x2)萃取。合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体状的26(55mg，94％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.06分钟；C29H28N2O3的m/z计算值：[M+H]+453.2，实测值：[M+H]+453.2。HPLC(JULY-L)(214和254nm)：Rt9.31分钟。
实施例14：化合物27(S)-1-(2，2-二苯基乙酰基)-4-(4-(4-氟苯基)丁-3-炔-1-基)哌啶-2-甲酸
1.用于制备27a的程序
向1-溴-4-氟苯(2.00g，11.0mmol)于THF(30mL)中的溶液中添加丁-3-炔-1-醇(0.88g，12mmol)、Et3N(2.22g，22.0mmol)、CuI(104mg，0.55mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(700mg，1.1mmol)且将混合物在回流下在N2气氛下加热过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示形成新产物。冷却混合物至室温，分配于EA/H2O(30mL/40mL)之间且分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝1∶0至3∶1)纯化以得到呈白色固体状的27a(200mg，9％)。
2.用于制备27b的程序
在0℃下在N2气氛下向27a(200mg，1.22mmol)和PPh3(319mg，1.22mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加CBr4(424mg，1.28mmol)且使混合物缓慢升温至室温并搅拌3小时。添加另一批PPh3(160mg，0.61mmol)和CBr4(212mg，0.64mmol)且在室温下继续搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示大多数起始物质被消耗。依次添加EA(2mL)和PE(5mL)至混合物中且通过过滤移除所得沉淀。真空浓缩滤液且残余物通过色谱(100％PE)纯化以得到呈无色油状的27b(200mg，72％)。
3.用于制备27c的程序
将4a(215mg，0.88mmol)、27b(200mg，0.88mmol)和K2CO3(146mg，1.06mmol)于DMF(10mL)中的混合物在60℃下加热过夜，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示大多数起始物质被消耗。将混合物倾入冰水(50mL)中，用EA(15mL x 2)萃取且合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝1∶0至8∶1)纯化以得到呈无色油状的27c(13mg，4％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt3.11分钟；C21H27FN2O4的m/z计算值：[M+H]+391.2，实测值：[M+H]+391.2。
4.用于制备27d的程序
在室温下搅拌27c(13mg，0.033mmol)于4M HCl/MeOH溶液(5mL)中的混合物30分钟，TLC(PE∶EA＝4∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物，添加DCM(10mL)至残余物中且接着再次真空浓缩。将残余物溶解于DCM(5mL)中且溶液用Et3N碱化至pH约7。再添加Et3N(10mg，0.1mmol)，随后添加二苯基乙酰氯(8mg，0.033mmol)且将混合物在室温下搅拌过夜，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示形成主要新产物。混合物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(PE∶EA＝6∶1至4∶1)纯化以得到呈无色油状的27d(11mg，66％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.87分钟；C30H29FN2O3的m/z计算值：[M+H]+485.2，实测值：[M+H]+485.2。
5.用于制备27的程序
将27d(11mg，0.023mmol)和LiOH.H2O(3mg，0.068mmol)于THF/H2O(3mL/1mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，接着在27℃下搅拌5小时，TLC(PE∶EA＝2∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物以移除THF且将残余物溶解于水(10mL)中，用4M HCl水溶液酸化至pH 4～5且用DCM(10mL x 3)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体状的27(7mg，66％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.55分钟；C29H27FN2O3的m/z计算值：[M+H]+471.2，实测值：[M+H]+471.2。HPLC(JULY-L)(214和254nm)：Rt9.19分钟。
实施例15：化合物28(S)-4-(1-苯甲基-3-甲基-1H-吡唑基)-N-(N，N-二甲基氨磺酰基)-1-(2，2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酰胺
1.用于制备28b的程序.
向28a(400mg，1.18mmol)于甲苯(10mL)中的溶液中添加3-氧代丁酸叔丁酯(187mg，1.18mmol)且将混合物在100℃下加热过夜，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示起始物质被消耗。冷却混合物至室温且真空浓缩以得到呈无色油状的28b(445mg，89％)，其直接用于下一步骤中。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.592分钟；C24H26N2O5的m/z计算值：[M+H]+423.2，[M+Na]+445.2，实测值：[M+H]+423.2，[M+Na]+445.2。
2.用于制备28c的程序
向28b(445mg，1.05mmol)于甲苯(5mL)中的搅拌溶液中添加劳森氏试剂(213mg，0.527mmol)且将混合物在75℃下加热过夜，TLC(PE∶EA＝1∶2)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且残余物通过色谱(PE∶EA＝5∶1至1∶2)纯化以得到呈浅黄色固体状的28c(180mg，39％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.522分钟；C24H26N2O4S的m/z计算值：[M+Na]+461.1，实测值：[M+Na]+461.1。
3.用于制备28d的程序
向28c(180mg，0.41mmol)于甲苯(10mL)中的溶液中添加Bn NHNH2.2HCl(96mg，0.49mmol)且将混合物在90℃下加热过夜，TLC(DCM∶MeOH＝50∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物且残余物通过色谱(DCM∶MeOH＝1∶0至50∶1)纯化以得到呈黄色固体状的28d(105mg，50％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.74分钟；C31H32N4O3的m/z计算值：[M+H]+509.3，[M+Na]+531.3，实测值：[M+H]+509.2，[M+Na]+531.2。
4.用于制备28e的程序
将28d(105mg，0.21mmol)和LiOH.H2O(34mg，0.84mmol)于THF/H2O(3mL/1mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)显示起始物质被消耗。真空浓缩混合物以移除THF，将残余物溶解于水(30mL)中，用3M HCl水溶液酸化至pH约4且用DCM(20mL x 2)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(DCM∶MeOH＝1∶0至20∶1)纯化以得到呈黄色固体状的16(75mg，72％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.80分钟；C30H30N4O3的m/z计算值：[M+H]+495.2，实测值：[M+H]+495.3。
5.用于制备28的程序
将16(70mg，0.14mmol)、N，N-二甲基磺酰胺(17mg，0.17mmol)、DMAP(5mg，0.042mmol)和DCC(35mg，0.17mmol)于DCM(1mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示起始物质被消耗。将混合物分配于DCM(20mL)与盐水(20mL)之间且分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过色谱(DCM∶MeOH＝1∶0至50∶1)纯化以得到呈黄色固体状的28(40mg，47％)。LC-MS(Agilent，P-2)：Rt2.77分钟；C32H36N6O4S的m/z计算值：[M+H]+601.3，实测值：[M+H]+601.3。HPLC(JULY-L)(214和254nm)：Rt9.41分钟。
生物实施例1：AT2受体结合
培养基和溶液
1.胰蛋白酶-EDTA(针对100mL制剂)
胰蛋白酶 0.25g
2％EDTA 2mL
PBS 98mL
将胰蛋白酶完全溶解于2％EDTA和PBS中；通过穿过0.20μM膜过滤器来将溶液灭菌；储存在4℃下。
2.DMEM培养基(针对1L制剂)
在温和搅拌下将粉末溶解入950mL蒸馏水中直至溶液变澄清。
添加1.176g NaHCO3以制备DMEM培养基。
使用1M NaOH或1M HCl调整培养基的pH至低于最终工作pH0.2-0.3。在搅拌下缓慢添加。
用ddH2O稀释至1升。
即刻通过过滤将培养基灭菌。
储存在4℃下。
3.TE缓冲液
20mM Tris-HCl，pH 7.4，
5mM EDTA
4.结合测定缓冲液
50mM Hepes，pH 7.4
5mM MgCl2
1mM CaCl2
0.2％BSA
5.洗涤缓冲液
50mM Hepes，pH 7.4
用于HEK293/AT2受体短暂细胞的程序
转染
●将细胞在50％密度下接种至150mm培养皿中以进行短暂转染。在过夜孵育之后(汇合达到约80％)，细胞准备进行转染。
●温和混合于6.25mL OptiMEM I降血清培养基(Reduced Serum Medium)中稀释的75μL LipofectamineTM2000，且在室温下孵育5分钟。温和混合在无血清下于6.25mLOptiMEM I降血清培养基中稀释的50μg表达质粒DNA。
●在孵育5分钟之后，将稀释DNA与稀释LipofectamineTM2000组合(总体积是12.5mL)。温和混合混合物且在室温下孵育30分钟以使形成DNA-LipofectamineTM2000复合物。
●添加12.5mL DNA-LipofectamineTM2000复合物至150mm培养皿中且通过来回摇动培养皿加以温和混合。
●在37℃下在5％CO2下孵育细胞48小时。
●收集细胞且在-80℃下冷冻储存。
用于HEK293/AT2受体细胞膜制剂的程序
●在冰冷TE缓冲液中将冷冻HEK293/AT2受体(短暂转染)细胞均质化10秒。
●在25,000g下离心组织均浆30分钟。
●将离心块再混悬于冰冷组织缓冲液中。
●使用Bradford测定方法，以BSA作为标准物来测定蛋白质浓度。
●在-80℃下冷冻膜蛋白。
化合物制剂
所有化合物的溶液都是通过如Janus或Precision 2000的微板液体处理设备制备。溶解于DMSO中的化合物被储存在冰箱中。自于100％DMSO中的30mM制备化合物。
步骤1：剂量板制备(96孔板)
●添加3μL[30mM]化合物储备物至板上的第1列中。
●添加15μL 100％DMSO至第1列中。
●添加10.81μL 100％DMSO至第2-12列中。
●自第1列转移5μL至第2列中(半对数稀释)。
●自第2列转移5μL至第3列中(半对数稀释)。
●自第3列转移5μL至第4列中(半对数稀释)。
●自第4列转移5μL至第5列中(半对数稀释)。
●自第5列转移5μL至第6列中(半对数稀释)。
●自第6列转移5μL至第7列中(半对数稀释)。
●自第7列转移5μL至第8列中(半对数稀释)。
●自第8列转移5μL至第9列中(半对数稀释)。
●自第9列转移5μL至第10列中(半对数稀释)
●自第10列转移5μL至第11列中(半对数稀释)
●自第11列转移5μL至第12列中(半对数稀释)。
所有化合物都是使用Precision 2000微板液体处理设备稀释。最高化合物浓度是用100％DMSO获得的5mM。
步骤2：工作板制备(96孔板)
●化合物用缓冲液稀释50倍。
●添加49μL缓冲液至96孔板的孔中。
●将1μL化合物溶液自剂量板转移至工作板的相应孔中。
●最高化合物浓度是用2％DMSO获得的100μM。
步骤3：测定板制备(96孔板)
通过Janus将15μL化合物溶液自工作板的各孔转移至测定板的孔中。在各板中一式两份测定各化合物且每板有4种化合物。
用于AT2受体结合测定的程序
●使120μL膜(5mg蛋白质/孔)与15μL[125I]-CGP42112A和15μL化合物一起在室温下孵育1.5小时。
●通过经Unifilter GF/C板(于0.3％(v：v)BSA中预浸渍)快速过滤来终止结合反应。
●用冰冷洗涤缓冲液将板洗涤三次。
●在37℃下将过滤板干燥过夜。
●添加50μL闪烁混合物至各孔中。
●使用MicroBetaTrilux微板闪烁计数器测定放射性。
数据分析
使用Prism 5.0软件通过4参数逻辑分析数据。
结果显示于下表中：
化合物 IC50(nM)
4 408
5 383.2
6 3045
7 155
8 1267
9 4105
10 517.1
16 40.26
23 93.85
24 4161
25 3923
26 1319
生物实施例2：AT1受体结合
在放射性配体测定中测定对测试化合物对转染的HEK-293细胞中的人血管紧张素-II AT1受体的亲和力的评估(Le等，Eur.J.Pharmacol.，2005，513：35)。
在37℃下使细胞膜组织均浆(8μg蛋白质)与0.005nM[125][Sar1-Ile8]血管紧张素-II一起在不存在或存在测试化合物下在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、5mM MgCl2、1mMEDTA和0.1％BSA的缓中液中孵育120分钟。在10mM血管紧张素-II存在下测定非特异性结合。
在孵育之后，样本在真空下经用0.3％PEI预浸渍的玻璃纤维过滤器(GF/B，Packard)快速过滤且使用96样本槽收集器(Unifilter，Packard)用冰冷50mM Tris-HCl冲洗数次。干燥过滤器，接着使用闪烁混合物(Microscint 0，Packard)在闪烁计数器(Topcount，Packard)中对放射性进行计数。结果表示为对照放射性配体特异性结合的抑制百分比。
标准参照化合物是肌丙抗增压素(saralasin)，其在各实验中在若干浓度下测试以获得计算它的IC50所依据的竞争曲线。
以体积200μL在96孔板中进行测定。所用测试化合物是化合物16和23。
化合物对AT1受体都不具有足以允许测定IC50的结合活性。所用测试化合物的最大浓度是10μM。
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Claims (10)

1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中
X是-CHR4-、-CH2CHR4-或-C(＝O)-；
R1是-C(＝O)CH(苯基)(苯基)、-C(＝O)CH(苯基)(环己基)、-C(＝O)CH(环己基)(环己基)、-C(＝O)N(苯基)(苯基)、-C(＝O)N(苯基)(环己基)或-C(＝O)N(环己基)(环己基)，其中各苯基或环己基任选被一个或多个选自-C1-3烷基、-OC1-3烷基和卤基的取代基取代；
R2是苯基、苯甲基、-CH2CH2苯基、-CH2CH2CH2苯基、-CH2CH＝CH-苯基、-CH2C≡C-苯基、-CH2C≡C-4-氟苯基、-CH2CH2C≡C-苯基、-(1,5-二苯基-1H-吡唑-3-基)、-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)、-(1-苯甲基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)或-[1-苯甲基-3-(-三氟甲基)-1H-吡唑-5-基]；
R3是-CO2H、-CH2CO2H、-C(＝O)NH2、-CN、-C(＝O)C(＝O)OH、-C(＝O)NHSO2C1-6烷基、-C(＝O)NHSO2苯基、-C(O)NHSO2N(CH3)2、-C(＝O)NHSO2CF3、-SO3H或-PO3H2；
R4是氢。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是-CH2-或-CH2CH2-。
3.如权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是-CH2-。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是-CO2H。
5.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X是-CHR4-；
R1是-C(＝O)CH(苯基)(苯基)；
R3是-CO2H；
R4是氢。
6.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自下组：
(S)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-4-苯基哌嗪-2-甲酸；
(S)-4-苯甲基-1-(2,2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-4-(1,5-二苯基-1H-吡唑-3-基)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-哌嗪-2-甲酸；
(S)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-4-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-4-苯乙基哌嗪-2-甲酸；
(S)-4-肉桂基-1-(2,2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-4-(3-苯基丙基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-4-(1-苯甲基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-(2,2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-4-(1-苯甲基-3-(-三氟甲基)-1H-吡唑-5-基)-1-(2,2-二苯基乙酰基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-4-(3-苯基丙-2-炔-1-基)哌嗪-2-甲酸；
(S)-1-(2,2-二苯基乙酰基)-4-(4-苯基丁-3-炔-1-基)哌嗪-2-甲酸；以及
7.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1至6中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
8.权利要求1至6中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防受试者的神经病变性疼痛的药物中的应用。
9.权利要求1至6中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防受试者的炎症性疼痛的药物中的应用。
10.权利要求1至6中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防受试者的特征在于神经元超敏性的病状、神经传导速度受损、细胞增生性病症、与骨再吸收与骨形成之间的不平衡相关的病症和与神经再生异常相关的病症、或者用于在受试者中产生镇痛的药物中的应用。
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