CN104428317B - 修饰的抗体区及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗体的修饰Fc区及其在例如含有本发明的Fc区的抗体中的用途。

Description

修饰的抗体区及其用途

发明背景与内容

已公开并知晓关于单克隆抗体及其在研究、诊断以及多种疾病包括癌症的治疗中的用途的大量信息。许多种单克隆抗体对患者的治疗用途已得到政府监管批准。

实验室中使用分子生物学技术如克隆、噬菌体展示、转基因小鼠和诱变已构建具有不同性质(例如改善的亲和性(affinity)、亲和力(avidity)和药代动力学)和结构(包括全人源抗体、具有人源和非人源元素的抗体、Fab抗体和其它抗体结构)的抗体。改进治疗性抗体的目的包括克服宿主抗抗体应答和延长治疗性抗体的半衰期，并且持续需要改进的抗体。

本发明涉及抗体的修饰Fc区及其例如在含有本发明的Fc区的抗体(例如在包括全长IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的全长IgG抗体、嵌合抗体或人源化抗体中)中或在含有本发明的Fc区或部分Fc区的融合蛋白(称为“免疫球蛋白(Ig)融合蛋白”、“Fc融合蛋白”或“Fc融合多肽”)中的用途。现有技术包括美国专利申请号US2006/104989中已描述了抗体的修饰Fc区。本发明的修饰Fc区相对于对应未修饰的(野生型或亲本)Fc区在本文公开的位置具有单氨基酸取代(本文中也称为Fc变体)，且具有与对应的未修饰Fc区以及本领域中已描述的其它修饰Fc区不同的一种或多种性质，如对一种或多种Fc受体的结合增强和/或改善不同pH条件下的结合。使用标准分子生物学技术可将本发明的修饰Fc区并入任何抗体或Fc融合多肽，并且意图将所有这类修饰的抗体和Fc融合多肽包括在本发明中。Fc指的是IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区Ig域和IgE和IgM的最后三个恒定区Ig域，以及这些域N端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可包括J链。Fc受某些细胞上存在的受体FcR的约束。由于Fc和特定细胞上存在的某些FcR之间相互作用的亲和力与靶向细胞毒性相关，以及人类的临床疗效与同种异型的高或低亲和力多态形式的某些FcR相关，因此具有为结合一种或多种FcR而优化的Fc区的抗体或融合多肽可更有效地破坏癌细胞。

在某些实施方案中，本发明的修饰Fc区将改善的性质赋予多肽或包括其中并入Fc区的多肽的复合物，例如复合物如包括具有修饰Fc区的Ig重链的全长抗体、嵌合抗体或人源化抗体，所述改善的性质如相对于相应多肽或复合物如并入相应未修饰的(野生型或亲本)Fc区或不同修饰Fc区的抗体，与一种或多种FcR的结合增强或改善，和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)增强或改善。因此，相比并入本发明的Fc区的多肽或抗体，缺少本文公开的一种或多种Fc区修饰且FcR结合不同的相应多肽或抗体，可具有天然(野生型)FcA区序列，或可具有除本文中公开的导致与至少一种FcR的结合增强或改善的修饰之外的氨基酸序列修饰(如增添、缺失和/或取代)的Fc区序列。在本发明的一些实施方案中，本发明的修饰Fc区赋予分子延长或缩短的半衰期。

在本发明的一个实施方案中，本发明的修饰Fc区含有本文中描述的取代中的一种。在其它实施方案中，本发明的修饰Fc区含有本文中描述的两种、三种、四种、五种或更多种取代的组合，其可附加地或协同地增强本发明的修饰Fc区的性质。在另一实施方案中，本发明包括具有本发明的修饰Fc区的多肽，即其是含有本文中描述的取代中的一种的融合多肽。在一个实施方案中，融合多肽的非Fc区包括靶结合分子。在其它实施方案中，本发明包括具有本发明的修饰Fc区的多肽，所述修饰Fc区含有本文中描述的两种、三种、四种、五种、六种、十种、十二种或更多种取代的组合。在一个实施方案中，本发明包括具有本发明的含本文所述取代中的一种的修饰Fc区的抗体或抗原结合抗体片段。在其它实施方案中，本发明包括具有含本文所述的两种、三种、四种、五种、六种、十种、十二种或更多种取代的组合的本发明的修饰Fc区的抗体或抗原结合抗体片段。

在另一实施方案中，本发明包括具有含有本文所述的取代之一的本发明的修饰Fc区的多肽(例如，在多肽复合物如抗体或Fc融合多肽中的多肽)或缀合物，所述缀合物包括与另一分子缀合的Fc区(Fc融合缀合物)。在其它实施方案中，本发明包括具有含有本文所述的两种、三种、四种、五种或更多种取代的组合以及一种或多种其它取代的本发明的修饰Fc区的多肽(例如，在多肽复合物如抗体或Fc融合多肽中的多肽)或缀合物，所述缀合物包括与另一分子缀合的Fc区，所述其它取代可赋予除与本发明的修饰Fc区中的取代位置和/或取代有关的性质之外的性质，或可附加地或协同地增强本发明的修饰Fc区的性质。在本发明的一些实施方案中，具有本发明的修饰Fc区的多肽具有一种或多种本文描述的功能性质。对于还包括非FcR靶结合分子结构域的、具有本发明的修饰Fc区的多肽，其可选地可与其它多肽一起形成抗体，该抗体的靶结合分子结构域或可变区可特异性地结合几乎任何靶分子或抗原。因此，在一方面，本发明涉及具有下述Fc区(例如IgG Fc区，如IgGl Fc区)的多肽，所述Fc区在Fc区的以下氨基酸残基(位置)处具有以下氨基酸取代：M252I、P257C、P257I、P257T、E258D、E258F、E258G、E258I、E258K、E258L、E258Q、E258S、E258V、E258W、V259E、V259G、V259I、V259R、T260A、T260C、T260F、T260L、T260N、T260S、T260W、S426C、S426N、V427S、V427T、M428F、M428Y、E430I、E430L、E430Q、A431F、A431H、A431P、H433A、H433E、H433R、N434A、N434D、N434F、N434G、N434H、N434I、N434M、N434R、N434V、N434W、N434Y、H435K或在这些位置的任何组合处的那些取代。对于本文中讨论的所有位置，根据Kabat的EU索引进行编号(Kabat et al.,1991)。抗体领域的技术人员将知道这种惯例由Ig序列的特定区中的非顺序编号组成，使得对Ig家族中的保守位置进行标准化参考。因此，由EU索引定义的任何给定的Ig位置并不是必须与其顺序次序相对应。

除了多肽、蛋白质或其它复合物例如本文中描述的并入本发明的修饰Fc区的缀合物之外，本发明还包括：编码修饰Fc区或有修饰Fc区的多肽的多核苷酸和表达载体，包括此类多核苷酸和表达载体的文库，已引入此类多核苷酸或表达载体的宿主细胞(例如从而使宿主细胞产生具有修饰Fc区的多肽)，宿主细胞库，以及制造、培养或操控宿主细胞或宿主细胞库的方法。例如，本发明包括培养这些宿主细胞，从而由宿主细胞生产例如分泌或释放具有修饰Fc区的多肽。还包括药物组合物和试剂盒，其包括具有本发明的修饰Fc区的多肽、蛋白质或其它复合物，和/或编码具有这种修饰Fc区的多肽的多核苷酸、表达载体或宿主细胞。此外，本发明还包括具有本发明的修饰Fc区的多肽、蛋白质或缀合物例如在Fc受体结合试验中或在体外或体内诱导ADCC活性的用途。本发明还提供了本发明用于药物治疗的多肽、蛋白质、缀合物、多核苷酸、表达载体和/或宿主细胞，以及本发明的多肽、蛋白质或其它复合物、多核苷酸、表达载体和/或宿主细胞用于制造例如对在体外或体内诱导ADCC活性有用的药物的用途。

本文中使用的抗体是具有由所有或部分哺乳动物Ig基因编码的一种或多种多肽的蛋白质，包括多克隆或单克隆抗体，其与一种或多种Fc受体(FcR)特异性结合，并且如果存在一个或多个可变区的话，该蛋白质与抗原结合，其中可选地，所述蛋白质是糖基化的。全长抗体具有与大自然中发现的天然生物形式的抗体对应的结构，包括可变区和恒定区。例如，全长抗体可以是四聚物，一般有2对相同的两个Ig链，每对具有一条轻链和一条重链。每条轻链包括免疫球蛋白功能区VL和CL，并且对于IgG，每条重链包括免疫球蛋白功能区VH和CH，其中CH包括Cγl、Cγ2和Cγ3。人类中，Ig基因包括K(kappa)和λ(lambda)轻链基因座和重链基因座，其对于IgM、IgD、IgG、IgE和IgA同型而言分别包括恒定区基因μ(mu)、δ(delta)、γ(gamma)、σ(sigma)和α(alpha)。

除非另有说明，本文中使用的抗体还包括全长抗体及其片段，包括天然产生的抗体、嵌合抗体，包括人源化抗体的重组抗体或经历其它体外变化的抗体以及其抗原结合片段。

本文中使用的“亲本Fc”可以是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM类抗体天然存在的Fc区。或者，亲本Fc来源是来自天然存在的抗体包括IgGl、IgGl、IgG3、IgG4、IgAl或IgA2的Fc区。待修饰的亲本Fc区可按其FcR结合亲和性和/或FcR结合模式选择，并且本发明的修饰Fc区至少具有对至少一种FcR的增强的亲和性，但另外可具有与亲本Fc区相同的FcR结合模式。

亲本Fc区优选是与一种或多种FcR相互作用的一种，所述RcR包括但不限于FcγR、FcαR、FcμR、FcδR、FcRn和病毒性FcγR。相对于亲本Fc区，本发明的衍生自这种亲本Fc区的修饰Fc区，相对于亲本Fc区，与一种或多种FcR的相互作用增强，且具有增强的ADCC。ADCC一般需要Fc区与结合结构域(例如抗体可变结构域)结合。检测FcR结合和ADCC的方法是本领域已知的。

通过对免疫球蛋白同型的特异性定义FcR，且其在本领域中是众所周知的。

含Fc的融合包括多肽，其中将具有有利的FcR结合和可选的有利的药代动力学的Fc区与一个或多个分子连接。该连接可以是大自然中合成的，例如通过化学轭合，或通过重组表达，即形成融合多肽。因此，与Fc区连接的分子可以是对分离或纯化Fc区有用的分子，例如标签如Flag-标签、Strep-标签、谷胱甘肽S转移酶、麦芽糖结合蛋白(MBP)或His-标签，或其它异源多肽例如用于受体的配体、受体的胞外域或重Ig链的可变区，和/或其它分子。

如果载体编码本发明的修饰Fc区或含有Fc区的多肽如具有修饰Fc区的Ig重链或其它Fc融合多肽，可将该载体可选地与其它载体，例如编码Ig轻链的载体一起引入宿主细胞中，或引入经修饰而表达另一种多肽如Ig轻链的宿主细胞，或引入体外转录/转录反应中，以表达编码的多肽。该修饰Fc区、Ig重链和Ig轻链还可在相同载体中表达并引入宿主细胞中。对于一些表达系统，可视情况在被改良适用于诱导启动子、筛选转化体或扩增所需序列的常规营养培养基中培养宿主细胞。将生成的有修饰Fc区的多肽可选地从例如宿主细胞上清液分离，并根据一种或多种活性对其进行筛选。

在一个实施方案中，Fc区例如通过与跨膜区融合而固定在细胞如宿主细胞表面上。

用于表达载体中的多核苷酸的适合的宿主细胞是原核细胞、酵母细胞或高级真核细胞。用于这种目的的适合的原核生物包括真细菌如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，例如肠杆菌科如埃希氏杆菌属例如大肠杆菌(E.coli)、肠杆菌属、欧文氏菌属、克雷白氏杆菌属、变形杆菌属、沙门氏菌属例如鼠伤寒水门氏菌、沙雷氏菌属例如粘质沙雷氏菌和志贺氏菌属以及杆菌属如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、假单胞菌属如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)和链霉菌属。真核微生物如丝状真菌或酵母也是编码多肽变体的载体的适合的克隆或表达宿主。可使用酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、克鲁维酵母菌宿主如乳酸克鲁维酵母(K.lactis)、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)、威克克鲁维酵母(K.wickeramii)、沃尔蒂克鲁维酵母(K.waltii)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)和马克斯克鲁维酵母(K.marxianus)、毕赤酵母、假丝酵母、瑞氏木霉(Trichoderma reesia)、许旺酵母属如许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)，以及丝状真菌如脉孢菌属、青霉菌属、弯颈霉属和曲霉属宿主。表达糖基化的多肽的适合的宿主细胞衍生自多细胞生物。表达糖基化多肽的无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。生成、筛选和生产真核细胞的宿主的实例包括3T3鼠成纤维细胞、BHK21叙利亚仓鼠成纤维细胞、MDCK、狗上皮细胞、Hela人上皮细胞(Hela human epithelial cell)、PtK1袋鼠上皮细胞、SP2/0鼠浆细胞和NS0鼠鼠浆细胞(NS0mouse mouse plasma cell)、HEK 293人胚胎肾细胞、COS猴肾细胞、CHO、CHO-S中国仓鼠卵巢细胞、R1鼠胚胎细胞、E14.1鼠胚胎细胞、H1人胚胎细胞、H9人胚胎细胞、PER C.6以及人胚胎细胞。可以使用大量杆状病毒菌种和变体以及来自宿主如草地贪夜蛾、埃及伊蚊、白纹伊蚊、黑腹果蝇和家蚕的相应的相容性昆虫宿主细胞。例如病毒载体可用于引入本发明的多核苷酸，特别是用于转染草地贪夜蛾的细胞。棉花、玉米、土豆、大豆、矮牵牛花、番茄和烟草的植物细胞培养物也可用作宿主。有用的脊椎动物细胞的实例包括哺乳动物细胞例如人、猴、犬、猫、牛、马、山羊、绵羊、猪或啮齿动物例如兔子、大鼠、貂或小鼠的细胞如CHO细胞。可使用转基因植物和动物作为表达系统，尽管那些细胞中的糖基化模式可能与人类糖蛋白不同。在一个实施方案中，将转基因啮齿动物用作表达系统。还可使用细菌表达。虽然细菌表达的蛋白质没有糖基化，但是其它变化可以弥补由原核表达可能导致的任何降低的活性如差稳定性和溶解性。

可选地，Fc区或含Fc多肽是从宿主细胞例如从宿主细胞上清液或体外转录/翻译混合物中分离的，生成一种组合物。该组合物中的分离多肽是已例如通过在免疫亲和性或离子交换柱上分级、醇沉、反相HPLC、二氧化硅或阴离子交换树脂如DEAE上的色谱法、色谱聚焦、SDS-PAGE、硫酸铵沉淀、使用例如葡聚糖凝胶G-75(Sephadex G-75)的凝胶过滤或配体亲和层析与宿主细胞、宿主细胞上清液或转录/翻译混合物中发现的至少一种其它分子分离的多肽。对于一些应用，该组合物中的分离多肽是存在的主要种类(即在摩尔基础上，其比组合物中任何各个其它种类更多)，并且优选地，包括占存在的所有大分子种类的至少约50％(在摩尔基础上)，更优选地大于约85％、约90％、约95％以及约99％。分离的Fc区或含Fc多肽可进行进一步的体外变化，例如，用酶或化学物质如蛋白酶、分子如改变糖基化的那些或对将分离的Fc区或含Fc区多肽轭合(偶联)到另一分子上有用的那些进行处理，所述另一分子如标记，包括但不限于荧光标记(例如FITC、罗丹明(rhodamine)、镧系元素、磷光剂(phosphors))、酶标记(例如辣根过氧化物酶、/3-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光标记、生物素基团、抗生物素蛋白基团或由第二报告基因(reporter)识别的多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、用于二级抗体的结合位点、金属结合域、表位标签)、糖、脂质、脂肪、顺磁性分子或声波发射体、金属或合成聚合物。

本领域已知与包括Fc区的多肽或复合物有关的活性(包括但不限于FcR结合)的筛选方法(参见例如美国专利号6737056、美国专利号7217797、美国专利号8088376，所有都通过引用并入本文)。例如，为评价含Fc多肽的ADCC活性，可分别使用例如PBMC和NK细胞或动物模型中的不同效应物:靶的比例进行体外和/或体内ADCC试验。在一个实施方案中，筛选体外和/或体内FcR受体结合亲和性或活性增强，和/或体外和/或体内ADCC活性增强的由宿主细胞表达的含Fc多肽。在一个实施方案中，通过具有本发明的修饰Fc区的含Fc多肽的FcR结合大于通过具有未修饰Fc区的相应多肽的受体结合。因此，通过将本文中描述的氨基酸序列修饰引入野生型或亲本Fc区或含Fc区多肽，获得以较好亲和性结合FcR，并在人效应细胞存在时比野生型或亲本Fc区或含Fc区多肽更有效地介导ADCC的修饰Fc区，其中野生型或亲本Fc区优选地诱导ADCC，并可选地是人Fc区，例如天然序列人Fc区人IgG序列。可溶FcR如重组可溶人CD16和重组可溶人CD32可平行地与一种或多种不同修饰Fc区接触，并鉴定出相对于未修饰Fc区具有增强与人CD16的结合但不增强与人CD32的结合的一种或多种取代的修饰Fc区。那些取代可与增强结合的其它取代组合。在Fc区或含Fc区多肽中的本发明的取代的组合可产生具有协同增强的性质的组合修饰的Fc区或组合修饰的含Fc区多肽。

鉴定具有期望性质和具有修饰Fc区的多肽(包括含修饰Fc区的抗体)和由此相应的多核苷酸序列的其它方法，其中该方法可单独使用或与上述方法联用，其包括优选在按活性筛选分子(例如具有Fc区的抗体)的情况中，使用修饰Fc区的建模例如3D-建模，以选择具有特定特征的Fc区。可通过建模筛选的特征包括但不限于靠近FcR结合位点的特定角度、绞链结构(hinge architecture)、分子外和分子内的链相互作用，例如促进或破坏疏水相互作用或稳定特定区中的构型。因此，可以用本发明的具有取代位置中的至少一个的含Fc多肽结合一种或多种其它取代的3D模型，来鉴定待引入在宿主细胞中用于表达的多核苷酸的取代组合。

不管本发明的Fc变体是否被并入异源多肽中，例如被并入具有细胞表面受体配体例如CTLR-4配体的Fc融合物或抗体重链中或是否与目标分子缀合，本发明的Fc变体以及编码那些变体的多核苷酸和宿主细胞可选地与一种或多种其它药剂例如治疗试剂或研究试剂组合，可用于各种方法中，例如筛选方法、预防疾病方法、治疗方法、兽医方法和农业方法。该一种或多种其它药剂包括其它Fc区或含Fc区多肽，包括具有未修饰Fc区的那些。在一个实施方案中，将Fc变体并入抗体或其它Fc融合多肽，该抗体或Fc融合多肽可选地与一种或多种其它有用组合物结合，用于靶向特定细胞。在一个实施方案中，含Fc变体的抗体或其抗原结合片段靶向并可选地杀死负载靶抗原的靶细胞。在另一实施方案中，含Fc变体的抗体或其抗原结合片段靶向并激活负载靶抗原的细胞，从而例如增加另一抗原如病毒或细胞抗原的表达。在一个实施方案中，本发明的Fc变体或包括Fc变体的多肽可用于预防、抑制或治疗人类或非人类包括非人哺乳动物中的各种病症或疾病。例如可将本发明含有修饰Fc区的抗体在疾病发病之前施用于有风险例如有倾向患上疾病的人类或非人动物，从而预防或抑制该疾病的一种或多种症状。可将Fc区或含Fc区多肽或其缀合物在疾病临床表现之后施用于人类或非人动物，从而抑制或治疗该疾病。在一个实施方案中，可将包含本发明抗体或Fc融合多肽的药物组合物施用于患有自身免疫性疾病、免疫性疾病、感染性疾病、炎性疾病、神经性疾病或肿瘤疾病例如癌症的人类或非人动物。可将本发明的Fc区或含Fc区的多肽以对既定目的有效的量单独施用或与一种或多种其它治疗剂联合施用，所述其它治疗剂包括但不限于细胞毒性剂，例如化疗药剂、细胞激素、生长抑制剂、抗激素剂、激酶抑制剂、抗血管形成剂、保心剂或其它治疗剂。技术熟练的医师可按经验确定可能与一种或多种其它治疗方案同期(concomitantly)施用的包括本发明的Fc或含Fc区多肽的治疗剂的合适剂量。例如，可将本发明的抗体或Fc融合多肽与化疗或其它治疗例如其它药剂如抗血管形成剂、细胞因子、放射性同位素治疗或与化疗和其它治疗二者一起施用于患者。在一个实施方案中，可将本发明的抗体或Fc融合物与可能包含或不包含本发明Fc变体的一种或多种其它抗体或Fc融合物结合施用。在一个实施方案中，将本发明的含Fc多肽与化疗药剂即用于癌症治疗的化合物一起施用。化疗或其它细胞毒性剂可作为前药施用，所述前药即与药物相比对细胞的细胞毒性较小且能被转化为药物的药学活性物质的形式。

药物组合物还预期具有可选地与一种或多种其它药剂配制的Fc区、Fc融合多肽、具有Fc区的抗体或其缀合物。本发明的抗体、Fc区或含Fc区多肽或缀合物的制剂通过将具有期望纯度的该抗体、Fc区或含Fc区多肽或缀合物与可选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合而制备储存(Remington's Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)16th edition,Osol,A.Ed.,1980)，是冻干制剂或水溶液的形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度时对接受者(recipient)是无毒的，包括缓冲剂如抗氧化剂、烷基对羟苯甲酸酯、低分子量(小于约10个残基)的多肽、亲水聚合物、氨基酸、单糖和其它碳水化合物、鳌合剂、填充剂、粘合剂、添加剂、着色剂、形成盐的反荷离子、金属络合物和/或非离子表面活性剂。其它制剂包括通过本领域中已知的方法制备的基于脂质或表面活性剂的制剂、基于微粒或纳米颗粒的制剂，包括缓释剂型制剂。

制剂中本发明的Fc区、抗体或其它含Fc区的多肽的浓度可在约0.1-100wt％内变化。在优选实施方案中，Fc区、抗体或Fc融合多肽的浓度范围为0.001-2.0M。为了治疗患者，可以施用有效剂量的本发明的Fc区或抗体或其它含Fc区多肽及其缀合物。本文中“治疗有效剂量”指施用时产生效果的剂量。剂量范围可为0.01-100mg/kg体重或更大，例如0.1、1、10或50mg/kg体重，优选1-30mg/kg，尽管其它剂量可提供有利的结果。选择施用的量以预防治疗特定的病症或疾病。本发明的Fc区或抗体或其它含Fc区的多肽及其缀合物的施用可以是连续的或间断的，取决于例如接受者的生理状况，施用的目的是治疗还是预防，以及技术熟练的从业者已知的其它因素。本发明的Fc区或抗体或其它含Fc区的多肽及其缀合物的施用可以是在预选定时间段内基本连续的或可以是一系列的间隔性给药。局部和全身施用都是预期的。

包含本发明的Fc区、抗体或其它含Fc多肽以及缀合物的药物组合物的施用可以按多种方式进行，包括但不限于口服给药、皮下给药、静脉内给药、鼻内给药、耳内(intraotically)给药、经皮给药、局部给药、腹腔内给药、肌内给药、肺内给药、吸入技术、阴道给药、肠道外给药、直肠给药或眼内给药。在某些情况下，例如用于治疗创伤、炎症等时，该抗体或Fc融合物可作为溶液或喷雾直接施用。

实施例1

克隆物FcRn结合分析。通过测定与具有未修饰Fc的野生型抗体相比的结合倍数差异(fold difference)评价FcRn结合；可根据公开方法测定结合(例如，参见Dall’Acqua,etal.,The Journal of Biological Chemistry,Vol281,Num 33,23515-23524(2006))。在pH7.4下，本发明的所有修饰Fc与FcRn的结合经显示与未修饰对照Fc区的结合相同。在pH 6.0下，本发明的所有修饰Fc与FcRn的结合显示与未修饰对照Fc区相比2-80倍的结合。

修饰Fc区与人FcRn结合的变化会导致含修饰Fc区的免疫球蛋白的半衰期的变化。具有改善的半衰期的工程化抗体可利于治疗应用，包括延长活性的半衰期增长的抗体和提高具有不期望的延长暴露性质的抗体(如放射性标记的抗体)的清除的半衰期缩短的抗体。

参考文献

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虽然在前述说明书中，已关于其某些优选实施方案描述了本发明，并且为了说明目的，已陈述了许多细节，但对本领域技术人员而言，本发明允许有其他实施方案将是显而易见的，并且在不偏离本发明的基本原则下，可以很大程度地改变本文所述的某些细节。

本文中引用的所有文献，包括但不限于出版物、专利和专利申请，均通过引用的方式并入本文。

Claims (10)

1.包含修饰Fc区的抗体，其中所述修饰Fc区相对于亲本IgG Fc区包含一个氨基酸取代，所述氨基酸取代选自E258F和V427T，其中所述Fc区中所述位置的编号是按Kabat EU索引的编号，

其中在pH 6.0下具有修饰的Fc区的抗体对FcRn的结合活性与在pH6.0下具有亲本IgGFc区的抗体对FcRn的结合活性之比为2-80。

2.如权利要求1所述的抗体，其中所述氨基酸取代为E258F。

3.如权利要求1所述的抗体，其中所述氨基酸取代为V427T。

4.如权利要求1所述的抗体，其中所述包含修饰Fc区的抗体相对于包含亲本Fc区的相应抗体具有增强的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

5.如权利要求1所述的抗体，其中所述亲本Fc区包括人IgG Fc区。

6.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的半衰期延长。

7.组合物，其包含权利要求1-6中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。

8.产生具有增强的抗体依赖性细胞毒性的抗体的方法，包括：

a)提供表达权利要求1-6中任一项所述的抗体的至少一种宿主细胞；

b)选择表达包含修饰Fc区的抗体的宿主细胞，所述包含修饰Fc区的抗体相对于包含亲本Fc区的相应抗体具有增强的抗体依赖性细胞毒性；和

c)通过在所述宿主细胞中表达抗体来产生抗体。

9.如权利要求8所述的方法，还包括从选择的宿主细胞分离所述抗体。

10.产生具有增强的抗体依赖性细胞毒性的抗体的方法，包括：

a)向抗体的亲本IgG Fc区引入一个或多个取代，以生成权利要求1-6中任一项所述的包含所述修饰Fc区的抗体；和

b)鉴定具有增强的抗体依赖性细胞毒性的包含所述修饰Fc区的抗体。