CN104374844A - 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 - Google Patents
丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104374844A CN104374844A CN201410639741.4A CN201410639741A CN104374844A CN 104374844 A CN104374844 A CN 104374844A CN 201410639741 A CN201410639741 A CN 201410639741A CN 104374844 A CN104374844 A CN 104374844A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reference substance
- rooted salvia
- red rooted
- acid
- water soluble
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用，所述含量测定方法是以丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品为对照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90为流动相梯度洗脱的超高效液相色谱法。本发明提供的丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，能够同时测定丹参药材中多种水溶性成分的含量，并可应用于丹参药材指纹图谱的检测中。该测定方法对丹参药材中水溶性成分的分离效果好，具有快速、准确、高重现性、高回收率的特点，而且其专属性强、精密度高、重复性好、稳定性高、测量结果准确。应用该方法所测得指纹图谱的峰多，反映的信息较完全；峰形好，易于鉴别，相似度高，准确可靠。
Description
技术领域
本发明涉及丹参药材中水溶性成分含量测定方法及其应用，属于中药检测技术领域。
背景技术
丹参(拉丁学名：Salvia miltiorrhiza Bunge)又名赤参，紫丹参，红根等。根入药，含丹参酮，为强壮性通经剂，有祛瘀、生新、活血、调经等效用，为妇科要药，主治子宫出血，月经不调，血瘀，腹痛，经痛，经闭，庙痛。对治疗冠心病有良好效果。此外亦治神经性衰弱失眠，关节痛，贫血，乳腺炎，淋巴腺炎，关节炎，疮疖痛肿，丹毒，急慢性肝炎，肾孟肾炎，跌打损伤，晚期血吸虫病肝脾肿大，癫癎。外用又可洗漆疮。
丹参的主要化学成分分为脂溶性和水溶性两大类：丹参的脂溶性成分大多为共轭醌、酮类化合物，丹参的水溶性成分主要为酚酸类物质。丹参的主要药理作用为可降低沙土鼠和大鼠缺血性脑卒中的发病率和死亡率，减轻缺血后引起的脑水肿，改善冠脉循环，对心肌缺血和心肌梗死保护，改善微循环，改善血液流变性，抑制凝血、激活纤溶，抑制血小板功能和抗血栓形成，稳定红细胞膜，抗肝纤维化，降血脂和抗动脉粥样硬化，促进组织的修复与再生作用等。
丹参品种、产地和采收期的不同会造成其成品质量的差异。为保证产品质量的稳定性，对其水溶性成分的含量测定及指纹图谱研究较多。《丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱研究》(周欣等，色谱，2005年03期，292～295)中公开了一种丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱的检测方法。
现有技术中，丹参药材中水溶性成分含量测定及指纹图谱检测中，一般只测定其中一至两种成分的含量。为了减少分开多次测定丹参药材不同水溶性成分含量而产生的误差，如果能一次性测定多种成分的含量，不仅可以节约时间和成本，还可以使得同一系统条件下的测试结果更稳定、可靠。然而目前尚未有同时测定和检测丹参多种组分的含量以及指纹图谱的相关报道。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用，能够同时测定丹参药材中多种水溶性成分的含量，并检测其指纹图谱，所述测定方法对丹参药材中水溶性成分的分离效果好，具有快速、准确、高重现性、高回收率的特点。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，所述方法是以丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品为对照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90为流动相梯度洗脱的超高效液相色谱法。
具体的含量测定方法为：照超高效液相色谱法，按照以下步骤测定：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为276～306nm；流速为0.1～0.5mL·min-1；柱温为25℃～35℃；理论板数按按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL 5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
前述含量测定方法中，步骤(1)中检测波长为286nm，流速为0.2mL·min-1，柱温为30℃。
丹参药材中水溶性成分的含量测定方法在丹参药材指纹图谱检测中的应用。
前述含量测定方法的应用，是用指纹图谱软件对含量测定方法中得到的17分钟内的色谱图进行处理，即得丹参药材水溶性成分的指纹图谱。
前述含量测定方法的应用中，所述丹参药材水溶性成分的指纹图谱中有17个共有峰。
虽然丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A均属于丹参药材中水溶性成分，但其各有区别，适宜的含量测定条件往往并不相同，要同时测定它们的含量，必须对UPLC的各项条件参数进行摸索、试验。为了能将丹参药材中水溶性成分有效分离开来，对色谱条件尤其是流动相种类、流动相比例以及梯度洗脱条件的摸索、确定是非常关键的。本发明在现有技术的基础之上，继续探索，通过对流动相种类、流动相比例、梯度洗脱条件、对照品及供试品的制备方法等进行摸索、筛选，最终建立了丹参药材中水溶性成分的含量测定方法。
一、主要仪器与试药
美国WATERS超高效液相色谱(UPLC)Acquity系统，包括自动进样器，四元溶剂管理器，PDA检测器以及Empower 3色谱工作站，WATERS ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1×100mm,1.7μm)
乙腈为色谱纯，美国Fisher公司；其他试剂为分析纯，购买于国药集团。
丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸A均为HPLC级，纯度≥98％。
丹参药材共13批，其中：1～3批药材(S1、S2、S3药材)来源于四川逢春制药股份有限公司(道地药材)、4～13批药材(S4～S13药材)来源于贵州信邦中药材发展有限公司。
二、含量测定的方法与结果
1、色谱条件的选择
1.1柱温的选择
为寻找最佳柱温，采用不同柱温进行实验，观察结果，结果见表1。
表1 柱温实验表
| 柱温(℃) | 20 | 25 | 30 | 35 | 40 |
| 观察结果 | 分离度差 | 分离度较好 | 分离度良好 | 分离度较好 | 溶剂粘度大 |
由表1可知，在25～35℃分离度良好，因而选择25～35℃作为柱温均可。其中柱温30℃时，分离效果最好。
1.2流速的选择
为寻找最佳流速范围，采用不同流速进行实验，记录色谱峰，结果见表2。
表2 色谱峰记录表
由表3可知，设置流速为0.1～0.5mL/min，各峰间的分辨率良好，色谱时间短，峰面积适中，效果最好。
1.3流动相选择
为寻找最佳流动相，采用不同流动相进行UV检测，记录色谱峰，结果见表3。
表3 不同流动相UV检测表
由表3可知，选用以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90，其产生的鬼峰少，得到的峰形好且分离度高，为最佳条件。
2、对照品溶液的制备
分别取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液。
3、供试品溶液的制备
取过三号筛的丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得。
4、检测波长的选择
在276nm～306nm对2项下对照品溶液进行光谱紫外扫描，其在286nm处有极大吸收波长，丹参药材中其它水溶性成分在此波长下也有较好的显示，因此本发明中丹参药材中水溶性成分的检测波长优选为286nm。
5、线性关系的考察
精密量取2项下对照品混合溶液，分别吸取5μL、25μL、50μL、100μL、200μL、300μL、400μL、500μL定容至500μL，分别进样，测定峰面积。分别以各色谱峰面积积分值(Y)对其浓度(X)进行线性回归，结果见表4。
表4
结果表明，丹参素在1.644～82.2μg/mL范围内呈良好线性关系，原儿茶醛在0.31～15.5μg/mL范围内呈良好线性关系，迷迭香酸在0.31～37.2μg/mL范围内呈良好线性关系，丹酚酸B在10.45～522.5μg/mL范围内呈良好线性关系，丹酚酸A在0.32～32.2μg/mL范围内呈良好线性关系。
6、精密度试验
取同一批次丹参药材，按照3项下的方法制备供试品溶液，连续进样6次，色谱分离并计算各成分峰面积的RSD。结果见表5，表明该方法精密度良好。
7、稳定性实验
取同一批次丹参药材，按照3项下的方法制备供试品溶液，分别于0h,4h,8h,12h,16h,24h进行测定并计算各成分峰面积的RSD。结果见表5，表明处理后的溶液在室温下24h内稳定，稳定性良好。
8、重复性实验
取同一批次丹参药材6份，按照3项下的方法制备供试品溶液，色谱分离并计算各成分峰面积的RSD。结果见表5，表明重复性良好。
表5
9、加样回收率实验
精密称定已测知含量的丹参药材0.1g共9份，分为三组，每一组分别加入对照品含量为0.1g已测知含量的丹参药材样品中各物质含量的60％、100％及140％的对照品溶液，按照3项下的方法制备供试品溶液。计算回收率，结果见表6。计算其平均回收率和RSD，回收率高，表明本方法可行。
表6
10、样品含量测定
取5批丹参药材，精密称定，分别按对照品溶液的制备项、供试品溶液的制备项下方法进行制备，按线性关系的考察项下方法进行含量测定(供试品溶液、对照品溶液分别进样1μL)，计算出各水溶性成分的含量，结果见表7。
表7
三、指纹图谱检测的方法与结果
1、色谱条件的选择：参照上述二中1.1～1.3项确定色谱条件。
2、丹参药材水溶性成分指纹图谱的检测
2.1对照品溶液的制备：参照上述二中2项制备。
2.3供试品溶液的制备：参照上述二中3项制备。
2.4检测波长的选择：参照上述二中4项确定。
2.5线性关系的考察：参照上述二中5项进行实验。
2.6方法学考察
2.6.1精密度实验：参照上述二中6项测定。
2.6.2重复性实验：参照上述二中8项测定
2.6.3稳定性实验：参照上述二中7项测定。
2.7样品测定：参照上述二中10项测定，记录17分钟内的色谱图。
3、数据、结果分析
3.1UPLC指纹图谱
对13批丹参药材样品进行了测定，通过比较色谱峰保留时间标示其对共有峰的贡献，保留时间RSD值小于1％的峰即为丹参药材中水溶性成分在药材图谱上的归属峰。将色谱图数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)，经过设参照谱、多点校正、自动匹配、生成对照图谱及匹配数据，得到相似度值并确定17个共有峰，其指纹图谱见图1和图2。
3.2相似度计算与分析
采用相似度评价系统(国家药品监督管理局推荐的“《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)”对丹参药材的UPLC色谱图进行相似度评价。选择四川逢春制药股份有限公司提供的丹参药材作为对照指纹图谱。相似度结果见表8。
表8 13批样品的相似度
| S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 | S9 | S10 | S11 | S12 | S13 | |
| S1 | 1 | ||||||||||||
| S2 | 0.998 | 1 | |||||||||||
| S3 | 0.999 | 0.999 | 1 | ||||||||||
| S4 | 0.983 | 0.99 | 0.986 | 1 | |||||||||
| S5 | 0.969 | 0.98 | 0.972 | 0.997 | 1 | ||||||||
| S6 | 0.84 | 0.867 | 0.847 | 0.921 | 0.946 | 1 | |||||||
| S7 | 0.91 | 0.928 | 0.916 | 0.967 | 0.981 | 0.985 | 1 | ||||||
| S8 | 0.441 | 0.487 | 0.452 | 0.581 | 0.636 | 0.841 | 0.746 | 1 | |||||
| S9 | 0.995 | 0.997 | 0.996 | 0.996 | 0.987 | 0.884 | 0.943 | 0.508 | 1 | ||||
| S10 | 0.878 | 0.903 | 0.886 | 0.948 | 0.969 | 0.994 | 0.99 | 0.797 | 0.916 | 1 | |||
| S11 | 0.572 | 0.615 | 0.583 | 0.701 | 0.75 | 0.915 | 0.84 | 0.982 | 0.636 | 0.884 | 1 | ||
| S12 | 0.795 | 0.826 | 0.804 | 0.887 | 0.918 | 0.994 | 0.969 | 0.88 | 0.843 | 0.985 | 0.944 | 1 | |
| S13 | 0.91 | 0.929 | 0.916 | 0.967 | 0.982 | 0.986 | 0.997 | 0.754 | 0.942 | 0.994 | 0.848 | 0.972 | 1 |
3.3聚类分析
采用IBM SPSS Statistics 19分析软件进行聚类分析，根据squared Euclidean distance，运用Ward’s方法，结果如图3。从HCA(层序聚类分析)结果来看，若将药材分为3类，则S9可以与S1、S2、S3分为一类；S8、S11、S6、S13可分为一类；其余剩下的为一类。
本发明的有益之处在于：本发明提供的丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，能够同时测定丹参药材中多种水溶性成分的含量，并可应用于丹参药材指纹图谱的检测中。该测定方法对丹参药材中水溶性成分的分离效果好，具有快速、准确、高重现性、高回收率的特点，而且其专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确。应用该方法所测得指纹图谱的峰多，反映的信息较完全；峰形好，易于鉴别，相似度高，准确可靠。
附图说明
图1是13个批次丹参药材样品的指纹图谱叠加图；
图2是本发明测得的丹参药材样品的共有模式图谱；
图3是13个批次丹参药材聚类分析结果图；
图中附图标记的含义：1-丹参素，2-原儿茶醛，3-迷迭香酸，4-丹酚酸B，5-丹酚酸A。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。
实施例1：丹参药材中水溶性成分含量测定方法为：照超高效液相色谱法，按照以下步骤测定：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为276nm；流速为0.1mL·min-1；柱温为25℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：分别取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
实施例2：丹参药材中水溶性成分含量测定方法为：照超高效液相色谱法，按照以下步骤测定：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为306nm；流速为0.5mL·min-1；柱温为35℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：分别取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取过三号筛的丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
实施例3：丹参药材中水溶性成分含量测定方法为：照超高效液相色谱法，按照以下步骤测定：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为286nm；流速为0.2mL·min-1；柱温为30℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：分别取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取过三号筛的丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
实施例4：丹参药材中水溶性成分含量测定方法为：照超高效液相色谱法，按照以下步骤测定：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为280nm；流速为0.3mL·min-1；柱温为32℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：分别取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
实施例5：丹参药材中水溶性成分含量测定方法在指纹图谱检测中的应用，即丹参药材水溶性成分指纹图谱检测方法为：照超高效液相色谱法，包括以下步骤：
(1)色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱，梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为286nm；流速为0.2mL·min-1；柱温为30℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：分别取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取过三号筛的丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪测定，记录17分钟内的色谱图，将色谱图数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)，经过设参照谱、多点校正、自动匹配、生成对照图谱及匹配数据，即得丹参药材水溶性成分的指纹图谱。
所测得的丹参药材指纹图谱中有17个共有峰。
Claims (6)
1.丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，其特征在于：所述方法是以丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品为对照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90为流动相梯度洗脱的超高效液相色谱法。
2.根据权利要求1所述的丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，其特征在于：按照以下步骤测定：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.026％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脱：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；检测波长为276～306nm；流速为0.1～0.5mL·min-1；柱温为25℃～35℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：取丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A对照品适量，精密称定，分别加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五种对照品储备液，分别吸取各对照品储备液，加5％甲醇配制成丹参素对照品浓度为82.2μg/mL、原儿茶醛对照品浓度为15.5μg/mL、迷迭香酸对照品浓度为37.2μg/mL、丹酚酸B对照品浓度为522.5μg/mL、丹酚酸A对照品浓度为32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏备用，作为对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取丹参药材粉末0.2g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入40mL 5％甲醇，超声提取30min，用5％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
3.根据权利要求2所述的丹参药材中水溶性成分的含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中检测波长为286nm，流速为0.2mL·min-1，柱温为30℃。
4.如权利要求1～3任一项所述丹参药材中水溶性成分的含量测定方法在丹参药材指纹图谱检测中的应用。
5.根据权利要求4所述丹参药材中水溶性成分的含量测定方法的应用，其特征在于：用指纹图谱软件对含量测定方法中得到的17分钟内的色谱图进行处理，即得丹参药材水溶性成分的指纹图谱。
6.根据权利要求5所述丹参药材中水溶性成分的含量测定方法的应用，其特征在于：所述丹参药材水溶性成分的指纹图谱中有17个共有峰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410639741.4A CN104374844A (zh) | 2014-11-13 | 2014-11-13 | 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410639741.4A CN104374844A (zh) | 2014-11-13 | 2014-11-13 | 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104374844A true CN104374844A (zh) | 2015-02-25 |
Family
ID=52553889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410639741.4A Pending CN104374844A (zh) | 2014-11-13 | 2014-11-13 | 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104374844A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105486787A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-13 | 广东药学院 | 微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用 |
| CN107607646A (zh) * | 2017-09-14 | 2018-01-19 | 神威药业集团有限公司 | 一种血小板细胞膜色谱法 |
| CN110274962A (zh) * | 2018-03-13 | 2019-09-24 | 天士力医药集团股份有限公司 | 一种芪参益气滴丸中丹参多酚酸成分含量测定方法 |
| CN110646542A (zh) * | 2019-09-30 | 2020-01-03 | 贵州中医药大学 | 一种丹参药材质量检测方法 |
| CN114295738A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-04-08 | 江苏弘典中药产业研究院有限公司 | 一种丹参叶茶的质量检测方法 |
| CN116642973A (zh) * | 2023-05-29 | 2023-08-25 | 江苏神龙药业有限公司 | 一种丹参注射液批次间质量均一性的评价方法 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050037094A1 (en) * | 2003-07-31 | 2005-02-17 | Xijun Yan | Composition for heart disease, its active ingredients, method to prepare same and uses thereof |
| CN101040907A (zh) * | 2007-04-27 | 2007-09-26 | 上海现代中医药技术发展有限公司 | 扶正化瘀植物药中丹参原料指纹图谱质量控制方法 |
| CN100450501C (zh) * | 2004-03-17 | 2009-01-14 | 天津天士力制药股份有限公司 | 一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法 |
| US20110195136A1 (en) * | 2008-10-06 | 2011-08-11 | Jianming Chen | Drop pill for treating coronary heart disease and preparation thereof |
| CN102621265A (zh) * | 2012-03-27 | 2012-08-01 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法 |
| CN102621246A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-08-01 | 浙江中医药大学 | 使用hplc-dad同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法 |
| CN103149310A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-06-12 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液原料、中间体及其制剂的指纹图谱建立方法和质量控制方法 |
| CN103487516A (zh) * | 2012-06-12 | 2014-01-01 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物制剂指纹图谱的测定方法 |
| EP1388344B1 (en) * | 2002-07-31 | 2014-03-12 | Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd. | Composition comprising Salvia Miltiorrhiza, Ginseng, Borneol for treating heart disease, and cerebrovascular diseases |
-
2014
- 2014-11-13 CN CN201410639741.4A patent/CN104374844A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1388344B1 (en) * | 2002-07-31 | 2014-03-12 | Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd. | Composition comprising Salvia Miltiorrhiza, Ginseng, Borneol for treating heart disease, and cerebrovascular diseases |
| US20050037094A1 (en) * | 2003-07-31 | 2005-02-17 | Xijun Yan | Composition for heart disease, its active ingredients, method to prepare same and uses thereof |
| CN100450501C (zh) * | 2004-03-17 | 2009-01-14 | 天津天士力制药股份有限公司 | 一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法 |
| CN101040907A (zh) * | 2007-04-27 | 2007-09-26 | 上海现代中医药技术发展有限公司 | 扶正化瘀植物药中丹参原料指纹图谱质量控制方法 |
| US20110195136A1 (en) * | 2008-10-06 | 2011-08-11 | Jianming Chen | Drop pill for treating coronary heart disease and preparation thereof |
| CN102621265A (zh) * | 2012-03-27 | 2012-08-01 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法 |
| CN102621246A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-08-01 | 浙江中医药大学 | 使用hplc-dad同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法 |
| CN103487516A (zh) * | 2012-06-12 | 2014-01-01 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物制剂指纹图谱的测定方法 |
| CN103149310A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-06-12 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液原料、中间体及其制剂的指纹图谱建立方法和质量控制方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 姜新刚 等: "芪苈强心胶囊 UPLC 指纹图谱研究", 《中国实验方剂学杂志》 * |
| 李耿 等: "UPLC 法同时测定丹参中 11 种成分的含量", 《中国药房》 * |
| 杭太俊 主编: "《药物分析》", 31 August 2011 * |
| 郑林 等: "UFLC 法同时测定参芎葡萄糖注射液中 6 种主要成分", 《中成药》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105486787A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-13 | 广东药学院 | 微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用 |
| CN107607646A (zh) * | 2017-09-14 | 2018-01-19 | 神威药业集团有限公司 | 一种血小板细胞膜色谱法 |
| CN110274962A (zh) * | 2018-03-13 | 2019-09-24 | 天士力医药集团股份有限公司 | 一种芪参益气滴丸中丹参多酚酸成分含量测定方法 |
| CN110646542A (zh) * | 2019-09-30 | 2020-01-03 | 贵州中医药大学 | 一种丹参药材质量检测方法 |
| CN114295738A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-04-08 | 江苏弘典中药产业研究院有限公司 | 一种丹参叶茶的质量检测方法 |
| CN114295738B (zh) * | 2021-12-08 | 2024-04-02 | 江苏弘典中药产业研究院有限公司 | 一种丹参叶茶的质量检测方法 |
| CN116642973A (zh) * | 2023-05-29 | 2023-08-25 | 江苏神龙药业有限公司 | 一种丹参注射液批次间质量均一性的评价方法 |
| CN116642973B (zh) * | 2023-05-29 | 2024-01-12 | 江苏神龙药业有限公司 | 一种丹参注射液批次间质量均一性的评价方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104374844A (zh) | 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 | |
| WO2023024322A1 (zh) | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 | |
| CN104062374B (zh) | 益气补肾的中药组合物的检测方法 | |
| CN104897831B (zh) | 脑心通指纹图谱的构建方法 | |
| CN103149300A (zh) | 黄芪颗粒指纹图谱的测定方法及其特征指纹图谱 | |
| CN102119961A (zh) | 一种复方丹参滴丸的检测方法 | |
| CN104020235A (zh) | 一种同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷含量的方法 | |
| CN102520103B (zh) | 六味地黄丸中成分的定量检测方法 | |
| CN104764820A (zh) | 测定半夏糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法 | |
| CN107991399A (zh) | 一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法 | |
| CN110441413B (zh) | 千柏鼻炎片hplc指纹图谱的构建方法和检测方法 | |
| CN110308213B (zh) | 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用 | |
| CN107367567A (zh) | 芪枣口服液的指纹图谱构建及其质量检测方法 | |
| CN105510452A (zh) | 益肝明目口服液的多指标成分含量测定、指纹图谱构建和制备方法 | |
| CN104849384B (zh) | 建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用 | |
| CN104634911B (zh) | 一种喘可治注射液4种黄酮类有效成分检测方法 | |
| CN102680593B (zh) | 一种行气活血、化瘀通脉的药物组合物的检测方法 | |
| CN113391002B (zh) | 心通颗粒uplc指纹图谱的建立方法及其应用 | |
| CN104569200A (zh) | 一种防己指纹图谱的测定方法 | |
| CN109142563A (zh) | 一种龟龄集uplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| Liu et al. | Simultaneous determination of ginsenosides and lignans in Sheng-mai injection by ultra-performance liquid chromatography with diode array detection | |
| CN105334273B (zh) | 一种地枫皮的检测方法 | |
| CN108548885A (zh) | 二维液相色谱检测复方南星止痛膏的方法 | |
| CN104133028B (zh) | 一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法 | |
| CN102759582B (zh) | 川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150225 |