CN104198716A - 一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 - Google Patents
一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104198716A CN104198716A CN201410476202.3A CN201410476202A CN104198716A CN 104198716 A CN104198716 A CN 104198716A CN 201410476202 A CN201410476202 A CN 201410476202A CN 104198716 A CN104198716 A CN 104198716A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- box
- brucella
- detection
- monoclonal antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 241000589562 Brucella Species 0.000 title claims abstract description 25
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 12
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 37
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims abstract description 12
- 101150048507 SYNJ2BP gene Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100035581 Synaptojanin-2-binding protein Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 101150109940 omp25 gene Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 101150004747 omp31 gene Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 108700037148 Brucella BP26 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 8
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 claims description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 abstract description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 abstract description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 abstract 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 9
- KGRVJHAUYBGFFP-UHFFFAOYSA-N 2,2'-Methylenebis(4-methyl-6-tert-butylphenol) Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(C)=CC(CC=2C(=C(C=C(C)C=2)C(C)(C)C)O)=C1O KGRVJHAUYBGFFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 4
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 4
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 2
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920000122 acrylonitrile butadiene styrene Polymers 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IICCLYANAQEHCI-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7-tetrachloro-3',6'-dihydroxy-2',4',5',7'-tetraiodospiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C(C(=C(Cl)C(Cl)=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 IICCLYANAQEHCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001148106 Brucella melitensis Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010090127 Periplasmic Proteins Proteins 0.000 description 1
- UELITFHSCLAHKR-UHFFFAOYSA-N acibenzolar-S-methyl Chemical compound CSC(=O)C1=CC=CC2=C1SN=N2 UELITFHSCLAHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XECAHXYUAAWDEL-UHFFFAOYSA-N acrylonitrile butadiene styrene Chemical compound C=CC=C.C=CC#N.C=CC1=CC=CC=C1 XECAHXYUAAWDEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004676 acrylonitrile butadiene styrene Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- -1 collaurum pad Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 229930187593 rose bengal Natural products 0.000 description 1
- 229940081623 rose bengal Drugs 0.000 description 1
- STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N rose bengal A Natural products O1C(=O)C(C(=CC=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical group O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒，属于动物疫病检测领域。所述试剂盒由卡盒与试纸条两部分组成：卡盒包括盒盖（4）与盒底（7），卡盒内置检测试纸条。卡盒正面可见加样孔（1）和检视窗（2），盒盖正面印有加样孔标注（5）、结果判别说明（6）、信息记录栏（3）。本发明应用胶体金免疫层析技术，以工程表达的布鲁氏菌BP26、OMP25或OMP31抗原为检测抗原，以鼠源抗牛IgG单克隆抗体、鼠源抗羊IgG单克隆抗体或鼠源抗猪IgG单克隆抗体作为捕获抗体，制作“间接法”检测试剂盒，可检测牛、羊或猪血清、血浆或全血中布鲁氏菌的抗体，具有检测方法简单，结果显示准确、快速，无需特殊仪器设备的优点。
Description
技术领域
本发明属动物疫病检测技术领域，具体涉及胶体金免疫层析检测技术。
背景技术
布鲁氏菌属于兼性胞内寄生的革兰氏阴性球杆菌，无孢子和荚膜，不运动，已经确认布鲁氏菌有9个种，其中具有致病性的有7个种，包括B.abortus、B.melitensis等。绵羊、山羊、猪、牛和狗都可感染布鲁氏菌，导致流产或不孕不育，其引发的疾病简称布病。所有数据显示全世界由于布病引起的损失是严重的，既包括对动物产品所带来的直接经济损失，如奶产量下降、流产、延迟受孕等，也包括对公共卫生等所造成的间接经济损失，如治疗的费用及生育能力下降等。由于布鲁氏菌具有高致病性和快速雾化的特性，美国疾病预防控制中心（CDC）已经将布鲁氏菌的3个种列为潜在的生物武器。因为其初始症状很容易和流行性感冒相混淆，布病感染后较难做出诊断。
目前，布鲁氏菌的检测方法主要分为病原分离培养、血清学试验和核酸检测等。病原分离培养主要通过其培养特性及生化试验指标进行鉴别，该方法耗时长，不利于临床快速诊断；核酸检测主要利用各式PCR进行检测，包括多重PCR、巢式PCR、实时荧光定量PCR等，此类方法敏感度好且准确性相对较高，但需要专业的仪器设备进行检验操作；常用的血清学检测方法包括试管凝集试验（SAT）、补体结合试验（CF）、乳汁环状试验（MKT）、虎红平板凝集试验（RBT）及酶联免疫吸附试验（ELISA）等，这些方法大多需要专业的设备或操作人员进行试验，对试验条件要求较高，而胶体金免疫层析（GICA）技术可以克服其它检测方法耗时长、需要专业仪器设备等缺点。
根据徐卫民等2006年的一项研究，滴金免疫测定法的敏感性为95．35%，特异性为98．99%，其与SAT的符合率为97．89%；2008年朱明东等将GICA应用于牛布病检测，表明GICA方法具有试剂敏感、特异，而且血清用量少，操作简便的特点；2009年邵丰尧等将GICA在布病监测地区进行了现场应用，同时采用RBT进行检测，验证其检测效果，再次证明了GICA与RBT同样具有较好的敏感性，但是GICA还具有操作简便、快速、微量等优点。从以上的研究来看，GICA具有迅速、准确、方便的特点，在布病诊断中显示了广阔的应用前景。
BP26、OMP31和OMP25是三种布鲁氏菌的结构抗原。OMP是外膜蛋白的简称(outer membrane proteins，OMPs)，其中OMP25据PCR-RFLP分析表明，在布鲁氏菌种及生物型变种中是一个高度保守的基因片段，而OMP31存在于除B.abortus之外其它所有的布鲁氏菌中，免疫原性良好；BP26（periplasmic protein 26）是一种具有强免疫原性、可以由细胞内向外释放的可溶性外周浆蛋白，相对于固定的外膜蛋白来说，具有易于检测的优点。本发明以GICA技术为基础，以工程表达的BP26、OMP31和OMP25抗原为检测抗体制作检测试剂盒。
发明内容
本发明旨在提供一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒，用于牛、羊或猪血清、血浆或全血中布鲁氏菌抗体的检测，对布鲁氏菌感染进行辅助诊断。本发明可解决牛、羊或猪布病感染检测需专业仪器及耗时长等问题，提供一种检测特异性强、操作简单快速的试剂盒，可广泛用于各级医疗机构及体检普查的检测。
本发明包括卡盒和试纸条两部分。
所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，材质为ABS树脂（丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物）；盒盖与盒底由柱和柱槽以插接方式连接，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见加样孔和检视窗，加样孔为长圆形，检视窗为长方形；在检视窗位置可见反应膜、检测线T和质控线C，在加样孔位置可见试纸条样品垫；盒盖正面印有加样孔标注、结果判别说明及信息记录栏。
所述试纸条置于卡盒内部，安放在盒底上的试纸条槽中；试纸条由基板、双面胶、胶体金垫、样品垫、胶带、反应膜、吸样垫组成。基板材质为PVC塑料（聚氯乙烯），样品垫及胶体金垫材质为无纺布，反应膜为硝酸纤维素膜，吸样垫材质为吸油纸。所述试纸条以高效鼠源抗牛IgG单克隆抗体、高效鼠源抗羊IgG单克隆抗体或高效鼠源抗猪IgG单克隆抗体作为捕获抗体，用胶体金标记形成抗牛IgG-胶体金复合物（或抗羊IgG-胶体金复合物、抗猪IgG-胶体金复合物，下同。）并固化于胶体金垫上；以工程表达的布鲁氏菌BP26、OMP25或OMP31抗原包被于反应膜检测线T位置；质控线C位置包被有羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗体。
本发明应用胶体金免疫层析技术，旨在检测牛、羊或猪血清、血浆或全血中的布鲁氏菌抗体。检测时，若待测样品中含有达到阈值的布鲁氏菌抗体，足量的布鲁氏菌抗体与胶体金垫中的抗牛IgG-胶体金复合物形成 布鲁氏菌抗体-抗牛IgG-胶体金复合物，在毛细作用下，布鲁氏菌抗体-抗牛IgG-胶体金复合物在反应膜上移动，在检测线T处与工程表达的布鲁氏菌BP26、OMP25或OMP31抗原结合形成肉眼可见的红色检测线T，而未与布鲁氏菌抗体结合的抗牛IgG-胶体金复合物则越过检测线T与包被在反应膜质控线C位置的羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗体结合形成红色质控线C；若样本中无达阈值的布鲁氏菌抗体，则检测线T不可见，只见红色质控线C。
本发明调整胶体金标记技术，有效组合抗体蛋白，使所述试剂盒可在常温下（4℃~30℃）保存；同时，本发明具有免疫胶体金技术操作简单、结果判读快速、无需特殊设备的优点。
附图说明
图1是本发明的外观立体示意图。
图2是本发明的盒底（4）正面示意图。
图3是本发明的盒盖（7）背面示意图。
图4是本发明的试纸条正面示意图。
图5是本发明的试纸条侧面示意图。
图中各数字表示内容如下：1.加样孔 2.检视窗 3.信息记录栏 4.盒盖 5.加样孔标注 6.结果判别说明 7.盒底 8.柱 9.柱槽 10.试纸条槽 11.样品垫 12.胶带 13.反应膜 14.检测线 15.质控线 16.吸样垫 17.基板 18.双面胶 19.胶体金垫。
具体实施方式
提供下述实施例是为了进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征相组合而得出的任何与本发明相同或相似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
本发明包括卡盒和试纸条两部分，下面结合说明书附图，对本发明外观进行简述：
图1所示为所述试剂盒外观立体图，盒体分为盒盖（4）与盒底（7）两部分，盒盖与盒底均为圆角长方形；盒体正面可见加样孔（1）和检视窗（2），加样孔为长圆形，检视窗为长方形；在加样孔位置可见图4所示试纸条样品垫（11），在检视窗位置可见反应膜（13）、检测线（14）和质控线（15）；盒盖正面印有加样孔标注（5）、结果判别说明（6）、信息记录栏（7）。
图2和图3分别是盒体打开后，盒盖（4）背面与盒底（7）正面的示意图，整个盒体由图2所示柱（8）和图3所示柱槽（9）以插接方式连接；图4所示试纸条置于盒体内部，具体位置在图3所示盒底（7）上的卡槽（10）中；将盒底、试纸条与盒盖组装接合后呈图1所示。
图4所示为试纸条正视图，图5所示为试纸条侧视图。试纸条最底层为基板（17），材质为PVC塑料（聚氯乙烯）；基板上附着一层双面胶（18）用于固定基板与其他部件；试纸条前端（图4、图5所示左侧）放置胶体金垫（19），并覆盖一层较长样品垫（11），样品垫及胶体金垫材质为无纺布，胶体金垫上吸附有胶体金标记的抗牛IgG单克隆抗体；胶体金垫右端压在反应膜（13）上，并以胶带（12）在上端固定，反应膜材质为硝酸纤维素膜，反应膜上包被有检测抗体（即检测线T（14））和控制抗体（即质控线C（15））；试纸条末端（图4、图5所示右侧）为吸样垫（16），吸样垫左端覆盖反应膜右端，以提供毛细作用力并吸收样品余液，吸样垫材质为吸油纸。
本发明卡盒部分选择有资质的供应商进行定制，现对试纸条制备方法进行描述：
所述试纸条的胶体金垫制备方法如下：① 胶体金的制备：在浓度为0.004%~0.012%的氯金酸中加入其体积的1.3%~2%、浓度为1%~3%的柠檬酸三钠，煮沸10~20分钟，得到胶体金溶液；② 胶体金标记抗牛IgG：将①中所得胶体金溶液中用0.2M碳酸钾溶液调pH 至8.0~9.0，加入一定量抗牛IgG，置磁力搅拌器上搅拌均匀后，按0.1~0.6g/100ml在溶液中加入动物血清蛋白，4℃静置2小时；③ 将②中所得抗牛IgG-胶体金混合溶液经1000转/分钟离心30分钟，弃上清液，取沉淀物；④ 将③中所得沉淀物按4~10ml/100ml溶于0.02M pH 7.4 Tris-Hcl缓冲液（含0.2%~0.6%的动物血清蛋白和0.01%~0.06%叠氮钠）中，得到抗牛IgG-胶体金复合物溶液；⑤ 将无纺布浸入④中所得胶体金溶液中，待浸入的无纺布有液体渗出后，37℃干燥，即得包被有抗牛IgG-胶体金复合物的胶体金垫。
所述试纸条反应膜上的检测线T和质控线C的包被方法如下：取高浓度布鲁氏菌BP26、OMP25或OMP31抗原，调浓度至1mg/ml，加入适量甲醛，用专用喷膜机在反应膜中段包被检测线T；取高浓度羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗体，调浓度为2mg/ml，加入适量甲醛，用专用喷膜机在反应膜中段距检测线T 4~5mm处包被质控线C；检测线T和质控线C均按10~20μl/ml设置喷量，反应膜完成包被后，立即置入45℃烘箱中，干燥1小时即得。
本发明使用时需添加一定浓度的磷酸盐稀释液，稀释液成分如下：每1000mL稀释液含0.004M Na2HPO4，0.001M NaH2PO4，0.15M NaCl，溶剂为蒸馏水。
使用所述试剂盒检测方法如下：将干燥密封的试剂盒从包装内取出，平放在实验室台面上，用移液器吸取待测样本（血清、血浆或全血）10μL加入加样孔，再向加样孔中滴加稀释液100μL，同时将样本编号填写在盒盖正面信息记录栏，开始观察结果；20分钟内，观察检视窗处质控线C和检测线T是否显红色；若质控线C和检测线T显红色，则说明样本中有达到阈值的布鲁氏杆菌抗体IgG检测结果呈阳性；若仅质控线C显色，则检测结果呈阴性。
Claims (4)
1.一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒，其特征在于包含卡盒和试纸条两部分。
2.根据权利要求1所述的一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒，其特征在于所述卡盒分为盒盖（4）与盒底（7）两部分；盒盖与盒底由柱（8）和柱槽（9）以插接方式连接，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见加样孔（1）和检视窗（2），加样孔为长圆形，检视窗为长方形；在加样孔位置可见试纸条样品垫（11），在检视窗位置可见反应膜（13）、检测线T（14）和质控线C（15）；盒盖正面印有加样孔标注（5）、结果判别说明（6）、信息记录栏（3）。
3.根据权利要求1所述的一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒，其特征在于所述试纸条置于卡盒内部的盒底（7）上的卡槽（10）中，由基板（17）、双面胶（18）、样品垫（11）、胶体金垫（19）、胶带（12）、反应膜（13）、吸样垫（16）组成，胶体金垫上吸附有胶体金标记的单克隆抗体，反应膜上包被有检测抗原（显示为检测线T（14））和质量控制抗体（显示为质控线C（15））。
4.根据权利要求3所述试纸条，其特征在于其胶体金标记的单克隆抗体为高效鼠源抗牛IgG单克隆抗体、高效鼠源抗羊IgG单克隆抗体或高效鼠源抗羊IgG单克隆抗体，反应膜上的质控抗原为工程表达的布鲁氏菌BP26、OMP25或OMP31抗原，质量控制抗体为羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410476202.3A CN104198716A (zh) | 2014-09-18 | 2014-09-18 | 一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410476202.3A CN104198716A (zh) | 2014-09-18 | 2014-09-18 | 一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104198716A true CN104198716A (zh) | 2014-12-10 |
Family
ID=52084036
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410476202.3A Pending CN104198716A (zh) | 2014-09-18 | 2014-09-18 | 一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104198716A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105137073A (zh) * | 2015-08-06 | 2015-12-09 | 中国兽医药品监察所 | 牛布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条 |
| CN106018800A (zh) * | 2016-05-25 | 2016-10-12 | 南方医科大学 | 一种布鲁氏菌感染的检测装置 |
| CN106153902A (zh) * | 2015-04-08 | 2016-11-23 | 北京中检安泰诊断科技有限公司 | 人布氏杆菌IgG抗体检测试剂盒及其制备方法 |
| CN106526109A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-03-22 | 天津灵卫科技发展有限公司 | 一种具有记录功能的罂粟壳检测用试剂盒 |
| CN108918865A (zh) * | 2018-05-21 | 2018-11-30 | 德康润生物科技（北京）有限公司 | 荧光免疫层析试纸条及试剂卡 |
| CN109507420A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-22 | 广西大学 | 水牛大片形吸虫抗体的快速检测方法 |
| WO2020089612A1 (en) * | 2018-10-30 | 2020-05-07 | Concepta Diagnostics Limited | Personal home health testing |
| CN115166238A (zh) * | 2022-08-02 | 2022-10-11 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 羊布鲁氏菌病初筛和确诊一体化抗体检测试纸条 |
| CN117405884A (zh) * | 2023-08-14 | 2024-01-16 | 珠海朗泰生物科技有限公司 | 一种羊全血布鲁氏菌抗体检测试剂盒 |
-
2014
- 2014-09-18 CN CN201410476202.3A patent/CN104198716A/zh active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106153902A (zh) * | 2015-04-08 | 2016-11-23 | 北京中检安泰诊断科技有限公司 | 人布氏杆菌IgG抗体检测试剂盒及其制备方法 |
| CN105137073A (zh) * | 2015-08-06 | 2015-12-09 | 中国兽医药品监察所 | 牛布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条 |
| CN106018800A (zh) * | 2016-05-25 | 2016-10-12 | 南方医科大学 | 一种布鲁氏菌感染的检测装置 |
| CN106526109A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-03-22 | 天津灵卫科技发展有限公司 | 一种具有记录功能的罂粟壳检测用试剂盒 |
| CN106526109B (zh) * | 2016-12-30 | 2019-04-09 | 天津灵卫科技发展有限公司 | 一种具有记录功能的罂粟壳检测用试剂盒 |
| CN108918865A (zh) * | 2018-05-21 | 2018-11-30 | 德康润生物科技（北京）有限公司 | 荧光免疫层析试纸条及试剂卡 |
| WO2020089612A1 (en) * | 2018-10-30 | 2020-05-07 | Concepta Diagnostics Limited | Personal home health testing |
| CN109507420A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-22 | 广西大学 | 水牛大片形吸虫抗体的快速检测方法 |
| CN109507420B (zh) * | 2018-12-07 | 2022-02-01 | 广西大学 | 水牛大片形吸虫抗体的快速检测方法 |
| CN115166238A (zh) * | 2022-08-02 | 2022-10-11 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 羊布鲁氏菌病初筛和确诊一体化抗体检测试纸条 |
| CN117405884A (zh) * | 2023-08-14 | 2024-01-16 | 珠海朗泰生物科技有限公司 | 一种羊全血布鲁氏菌抗体检测试剂盒 |
| CN117405884B (zh) * | 2023-08-14 | 2024-05-17 | 珠海朗泰生物科技有限公司 | 一种羊全血布鲁氏菌检测试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104198716A (zh) | 一种动物布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 | |
| JP6553020B2 (ja) | アレルギー及び自己免疫疾患に関する診断分析を行うための自動化された免疫分析計システム | |
| KR102489679B1 (ko) | 바이러스 및 박테리아 감염의 복합 검출을 위한 방법 및 장치 | |
| CN211148670U (zh) | 一种新型冠状病毒2019-nCoV抗原快速检测试剂盒 | |
| CN102072957B (zh) | 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法 | |
| CN107167595A (zh) | 一种荧光定量检测inhb的免疫层析试剂条及其制备方法 | |
| CN106443000B (zh) | 用于检测HBs抗原的样品的预处理方法及其利用 | |
| WO2007081778A2 (en) | Multiplexed detection of anti-red cell alloantibodies | |
| CA2836236C (en) | Tsh immunoassays and processes for performing tsh immunoassays in the presence of endogenous contaminants in restricted wash formats | |
| CN101165491A (zh) | 以金磁微粒为载体检测抗双链dna抗体的方法 | |
| US20160109466A1 (en) | Tsh antibodies for point-of-care immunoassay formats | |
| CN107192832A (zh) | 一种荧光定量检测amh的免疫层析试剂条及其制备方法 | |
| JP2010281595A (ja) | リガンド分子の検出方法 | |
| CN111273017A (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒 | |
| US9068994B2 (en) | TSH immunoassays employing scavenging reagents for cross-reacting endocrine glycoprotein hormone analogues | |
| CN104090100A (zh) | 布鲁氏菌抗体金标快速检测试剂盒 | |
| CN203148947U (zh) | 赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡 | |
| CN113848325A (zh) | 肺炎支原体及肺炎衣原体抗体联检试剂盒、其制备方法及检测方法 | |
| CN204177807U (zh) | 幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM/IgG联合金标检测卡 | |
| CN109541231A (zh) | 一种检测丙型肝炎病毒抗体试剂盒及其制备方法 | |
| CN106153925A (zh) | 幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN117110604A (zh) | 检测新冠病毒抗原的免疫层析试纸条 | |
| CN102435744A (zh) | 弓形虫总抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法 | |
| CN104076147A (zh) | 人型支原体金标快速检测试剂盒 | |
| CN215415461U (zh) | 一种新型侧向层析检测装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20141210 |