CN104181296A - 胶体金试纸定量分析中的参照定时分析方法 - Google Patents
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Abstract
一种胶体金试纸定量分析中的参照定时分析法，用于为胶体金试纸的定量分析提供一个准确可靠的分析时刻。在样品液滴入试纸条加样区后，用胶体金试纸定量分析设备时刻监控检测线颜色变化。随时间的推移首先出现T线，然后过段时间出现C线。两条线的颜色均随时间的推移逐渐加深。当C线的浓度到达一个设定阈值(v1)时，开始检测T线的灰度值(v2)，并作为检测结果。和滴入样品液之后固定时间之后检测相比，在本发明提供的时间进行检测可以排除加入样品液体积不同、温湿度条件不同以及其他不同条件的影响，提高检测结果的稳定性、重复性和可靠性，提高检测精度。
Description
技术领域
本发明涉及胶体金试纸条定量分析领域，具体涉及一种胶体金试纸定量分析中的参照定时分析方法。
背景技术
免疫胶体金标记技术(immunogold labeling technique，ILT)是19世纪80年代初期继酶免疫标记、荧光免疫标记、放射性同位素免疫标记三大标记技术之后，发展起来的新型固相标记免疫测定技术。具有简便、迅速、准确、特异性强、敏度高、无污染、假阳性率低等的优势。胶体金免疫层析法的基本原理是：借助毛细管虹吸作用，使样品与喷在玻璃纤维上的胶体金标记物混合在一起在硝酸纤维膜上移动，若样品中含有抗原(或抗体)，与胶体金标记的抗体(或抗原)结合，扩散至膜上检测区再与未标记的抗体(或抗原)结合，形成金标抗原抗体复合物，滞留在检测线上并显色，可得到直观的检测结果。
胶体金试纸条上一般有两条线，检测线(简称T线)和对照线(简称C线)。T线上一般包被的是待测物的另一特异性抗体，而C线上一般包被的是金标结合垫上胶体金标记过的受体的抗体。C线用于检测此次测试是否有效，如果线上未观察到颜色即胶体金的颇色红色或紫色，则表示此次测试无效，线上的结果不可取，无意义如果线上观察到颜色，则根据T线上的颜色来判定结果。
胶体金免疫层析技术主要应用在需要定性检测的场合。当待检溶液中样本的浓度超过一定的范围时，会出现比较明显的颜色变化，反之则没有。该技术特别适用在疾病定性监测当中，分析血清、尿液中有没有异常升高的物质，例如怀孕时尿液中HCG的含量等。这种方法简单以是否超过正常参考值上限为阳性界限，检测结果为是或者不是这种二值关系。
随着生产工艺的进步，胶体金试纸条中的NC膜的质量控制越来越严格，很多专业的厂商(如Kinma-ticAutomation公司等)提供精密的加液、切割和组装器材，而且还提供自动化全套的生产流水线，因此在执行严格质量控制的条件下已能生产出性质基本一致的免疫胶体金金渗滤试剂盒和胶体金免疫层析测试条。基本保证了每次检测时加入进去的样本会和金标结合物混合在一起沿着NC膜上推进的均一性和速度的一致性，使根据T线的颜色深浅来判读样本的浓度称为可能。
肉眼判读主要是和标准比色卡进行比对，具有检测速度慢，自动化程度低的明显缺点。而且检测人员的主观性大，无法保证检测结果一直安全有效，误差率大。利用设备进行定量分析的方法主要有：光敏电阻测量方案、反射光纤传感器测量反射光强方案、图像传感器采集图像方案。利用图像传感器采集图像信号进行分析处理，是免疫层析检测设备中近年来非常流行的方法。CCD和CMOS是现在普遍采用的两种半导体图像传感器，它们具有很快速的响应时间，很高的采样精度，而且采样时受到的干扰较小，可以很好的保证采集图像的质量。利用图像处理方法标定T线区域，然后检测该区域的灰度，利用灰度值反推样品溶液的浓度是目前的主流方法。
当胶体金反应在试纸条上发生出现显色现象后，测试线的颜色浓度随时间的变化而变化，一般是逐渐加深。为了保证测试结果的准确性在一个一致的时间点进行灰度值的测量非常关键。但是样品溶液滴到样品垫上之后，在吸水垫的作用下沿NC膜移动，在加入不同体积的样品液、不同的温湿度条件以及其他不同的条件下，液体移动的速度是不一样的。所以如果选择滴入样品液后的特定时间后进行分析，不能准确描述分析结果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胶体金试纸定量分析中的参照定时分析方法，为胶体金试纸定量分析选择一个准确可靠的时间点，保证每次分析测量的重复性和准确性。
本发明提供了一种胶体金试纸定量分析中的参照定时分析方法，其内容是：
在样品液滴入试纸条加样区后，用胶体金试纸定量分析设备时刻监控检测线颜色变化。随时间的推移首先出现T线，然后过段时间出现C线。两条线的颜色均随时间的推移逐渐加深。当C线的浓度到达一个设定阈值(v1)时，开始检测T线的灰度值(v2)，并作为检测结果。对于试纸条失效的情况，设定一个较大的等待时间t0，当超过等待时间t0，C线浓度依然没有达到阈值v1，认为C线没有出现，此次检测结果无效。
设定阈值(v1)的选定应根据多次实验结果分析确定，选定一个合适的阈值对测量结果很重要。
本发明提供的方法为胶体金试纸定量分析选定了一个参照时刻，在本时刻进行检测可以排除加入样品液体积不同、温湿度条件不同以及其他不同条件的影响，提高检测结果的稳定性、重复性和可靠性，提高检测精度。
附图说明
图1是胶体金试纸条结构图。
图2是试纸条检测线灰度随时间变化曲线。
具体实施方式
下面结合附图说一下具体的实现方式。
图1是胶体金试纸条结构图，图中1是进样孔，2是T线，3是C线。T线又称检测线，C线又称为质控线。当C线没有显色时，表示检测结果无效，一般是试纸条过期或存放条件不当造成的。当C线有显色时，代表本次检测有效，T线显色颜色的灰度就与样品液的浓度相关，代表胶体金反应进行的程度。根据T线颜色的灰度值可以反推样品液的浓度，胶体金试纸定量分析仪就是依据这个原理设计的。
图2是试纸条检测线灰度随时间变化曲线，横轴是时间，纵轴是C线和T线的颜色灰度。当样品液滴入试纸条的进样孔时开始计时，认为此刻为时间轴的零点。随着样品液在试纸条的NC膜上流动，在t1时刻，T线首先出现。然后过了一段时间，在t2时刻，C线开始出现。随着时间推移，C线和T线的灰度值均越来越大。当C线的灰度值达到设定阈值v1时，记录此刻时间为t3。T线在时间t3时测得的灰度值v2就是需要的检测结果。当超过一个较大的时刻t0之后，C线浓度依然没有达到阈值v1，认为C线没有出现，此次检测结果无效，可以排除失效试纸条对本方法造成的影响。
Claims (1)
1.一种胶体金试纸定量分析中的参照定时分析方法，在样品液滴入试纸条的进样孔之后开始监测C线和T线的灰度变化；其特征在于，在C线的灰度值达到设定阈值(v1)的时刻，开始检测T线的灰度值(v2)，并作为检测结果。
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