CN104174019A - 四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗，包括：脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物、免疫活化剂和佐剂，该免疫活性剂为寡聚脱氧核苷酸，其序列中含有两个拷贝的5’—CGTTCGAG—3’；所述寡聚脱氧核苷酸的长度为18~38个核苷酸。本发明可以提高疫苗的免疫效果、降低疫苗抗原的用量、减少免疫针次和降低疫苗成本的脑膜炎球菌疫苗。
Description
技术领域
本发明涉及生物接种疫苗，具体涉及到一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗。
背景技术
流行性脑脊髓膜炎，是由脑膜炎双球菌感染脑膜或者脑脊髓膜引起的呼吸道传染病，临床表现主要有高烧、头痛、喷射状呕吐、脖子发硬。也可引起败血症，皮肤出现紫色淤血、瘀斑，脑膜炎会引起脑部损伤而遗留听力下降或耳聋、智力低下等后遗症。病死率在5%～10%。流脑冬春季节病例高发，一般11～12月份病例开始增多，第二年的2～5月份为发病高峰期。该病是发病率高，危险性大，是严重危害儿童健康的传染病。根据荚膜多糖的化学结构，脑膜炎球菌可分为十几个血清群，其中A、B、C、Y和W135是最主要的流行菌群。接种疫苗是预防流脑的主要途径。
用脑膜炎球菌荚膜多糖制备的疫苗具有一定的预防效果，但它是一种T细胞非依赖性抗原，对2岁以下的婴幼儿免疫效果很差，而且不能诱生免疫记忆。与载体蛋白偶联可以将多糖抗原转变为T细胞依赖性抗原，不但对婴幼儿有效，而且能诱生免疫记忆。但是这种多糖蛋白结合疫苗的生产工艺比较复杂，产量较低，价格较贵，远远不能满足计划免疫的大规模需求。因此，有必要研制一种新型的脑膜炎球菌疫苗。
为了解决现有技术中的上述不足，本发明提出了一种新的解决方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗。
为达上述目的，本发明所采用的技术方案是：提供一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗，包括： A群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；C群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；Y群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；W135群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；
免疫活性剂，该免疫活性剂为寡聚脱氧核苷酸，其序列中含有两个拷贝的5’—CGTTCGAG—3’；所述寡聚脱氧核苷酸的长度为18~38个核苷酸；其中CpG是非甲基化的；佐剂，该佐剂包括氢氧化铝和乳糖。
本发明的一个实施方案中，提供了一种可以提高疫苗的免疫效果、降低疫苗抗原的用量、减少免疫针次和降低疫苗成本的脑膜炎球菌疫苗。
附图说明
图1为实验例1中A1疫苗和B1疫苗产生特异性抗体的抗体滴度；
图2为实验例2中A2疫苗和B2疫苗产生特异性抗体的抗体滴度；
图3为实验例1和实验例2中疫苗产生的特异性抗体的特异性；
其中，带有三角形的曲线为实验例2中B2组疫苗产生的特异性抗体的特异性曲线，带有正方形的曲线为实验例1中B1组疫苗产生的特异性抗体的特异性曲线。
具体实施方式
本发明的一个实施方案中，A群、C群、Y群和W135群脑膜炎球菌，这四种脑膜炎球菌的荚膜多糖与载体蛋白的结合是通过以下方法来实现的：
步骤1：分别将四种脑膜炎球菌多糖进行活化反应与衍化反应，在反应时，首先使用溴化氰活化脑膜炎球菌多糖，然后用乙二胺衍化溴化氰活化的脑膜炎球菌多糖，最后用试剂衍化多糖。
步骤2：载体蛋白的巯基化，所用到的巯基化试剂包括但不限于2-亚氨基硫烷。
步骤3：衍化的脑膜炎球菌多糖与巯基化的载体蛋白结合。
脑膜炎球菌加膜多糖与载体蛋白的偶联方法已经被多个文献公开，因此，该耦联方法不仅限于本发明公开的方法，采用其他偶联方法同样可以达到本发明的实施目的。
在本发明的另一个实施方案中，脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物优选是脑膜炎球菌血清群A群、C群、Y群和W135群中的一种或多种荚膜多糖与破伤风类毒素或白喉类毒素或其它任何适用于人用疫苗的载体蛋白的化学偶联物。此处的破伤风类毒素或白喉类毒素均是示意性地说明本发明的，并不构成对本发明的任何限制，任何适用于人用疫苗的载体蛋白都适用于本发明
本发明的一个实施方案中，免疫活性剂为寡聚脱氧核苷酸，其序列中含有两个拷贝的5’—CGTTCGAG—3’；所述寡聚脱氧核苷酸的长度为18~38个核苷酸；其中CpG是非甲基化的。优化的，免疫活性剂的核苷酸序列为5’—TCGC CGTTCGAG CCTA CGTTCGAG CTTG—3’。进一步优化的，免疫活性剂的核苷酸序列为5’—TTCTGAC CGTTCGAG TGCACTA CGTTCGAG CAGTTG—3’。在实施本方案时，可以按照现有的任一方法制备四价脑膜炎球菌加膜多糖，然后与可以接收的载体蛋白结合，结合和可以将偶联物与免疫活性剂和佐剂简单混合，制得疫苗。
本发明的一个实施方案中，每支疫苗中脑膜炎球菌加膜多糖与载体蛋白的化学偶联物总含量为10ug~100ug，每支疫苗中佐剂中含量为1mg~100mg。
本发明的一个实施方案中，每支疫苗中还包括药学上可接受的赋形剂，比如冻干赋形剂、成型剂等。
实验例1
结合疫苗对小鼠A群脑膜炎球菌免疫应答的增强效果研究
通过现有技术制备四价脑膜炎球菌多糖与破伤风内毒素的化学偶联物，以下简称该偶联物为疫苗A1，在疫苗A1中加入佐剂氢氧化铝和免疫活性剂，得到疫苗B1。疫苗A1中，A群、C群、Y群和W135群的多糖含量相同，且多糖总含量为80ug/ml；疫苗B1中多糖总含量为80ug/ml，佐剂氢氧化铝的含量为5mg/ml。疫苗B1中的免疫活性剂序列为5’—TCGC CGTTCGAG CCTA CGTTCGAG CTTG—3’。经过人工合成，并进行全链硫代修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，溶于生理盐水，零下20℃的条件下保存备用。
选取试验小鼠，分成两组，即疫苗A1组和疫苗B1组；分别注射80ul进行免疫应答实验，在注射3周后，以同样方式和同等剂量进行再免疫，此时采集小鼠采集血液分离血清，并在再免疫2周后再次采集血液分离血清。将分离的血清分别采用PBS溶液对血清进行3倍稀释，采用ELISA方法来检测抗体滴度。
如图1所示，在注射疫苗3周和再免疫注射2周后，注射疫苗A1的疫苗A1组产生的抗多糖IgG滴度在注射3周后和2周后均较弱。相反的，注射加入疫苗活性剂和佐剂的疫苗B1组的抗多糖IgG滴度明显增加，与疫苗A1组相比，在注射3周后的疫苗B1组的IgG滴度与同期的疫苗A1相比增加了15.2倍；再免疫注射两周后，疫苗B1组的IgG滴度相比同期的疫苗A1的IgG滴度增加了10.5倍。这表明，在注射疫苗后，疫苗B1能够快速产生免疫应答，并可以诱导产生较高的抗体滴度，免疫效果增强。
实验例2
结合疫苗对小鼠C群脑膜炎球菌免疫应答的增强效果研究
通过现有技术制备四价脑膜炎球菌多糖与白喉内毒素的化学偶联物，以下简称该偶联物为疫苗A2，在疫苗A2中加入佐剂氢氧化铝和免疫活性剂，得到疫苗B2。疫苗A2中，A群、C群、Y群和W135群的多糖含量相同，且多糖总含量为100ug/ml；疫苗B2中多糖总含量为100ug/ml，佐剂氢氧化铝的含量为5mg/ml。疫苗B2中的免疫活性剂序列为5’—TTCTGAC CGTTCGAG TGCACTA CGTTCGAG CAGTTG—3’。经过人工合成，并进行全链硫代修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，溶于生理盐水，零下20℃的条件下保存备用。
选取试验小鼠，分成两组，即疫苗A2组和疫苗B2组；分别注射80ul进行免疫应答实验，在注射3周后，以同样方式和同等剂量进行再免疫，此时采集小鼠采集血液分离血清，并在再免疫2周后再次采集血液分离血清。将分离的血清分别采用PBS溶液对血清进行3倍稀释，采用ELISA方法来检测抗体滴度。
如图2所示，在注射疫苗3周和再免疫注射2周后，注射疫苗A2的疫苗A2组产生的抗多糖IgG滴度在注射3周后和2周后均较弱。相反的，注射加入疫苗活性剂和佐剂的疫苗B2组的抗多糖IgG滴度明显增加，与疫苗A2组相比，在注射3周后的疫苗B2组的IgG滴度与同期的疫苗A2相比增加了15.2倍；再免疫注射两周后，疫苗B2组的IgG滴度相比同期的疫苗A2的IgG滴度增加了10.5倍。这表明，在注射疫苗后，疫苗B2能够快速产生免疫应答，并可以诱导产生较高的抗体滴度，免疫效果增强。
实验例3
多糖特异性抗体的特异性
将接种B1疫苗的疫苗组和B2疫苗的疫苗组的小鼠血浆稀释200倍。向2种稀释的小鼠血浆分别加入A群脑膜炎多糖和C群脑膜炎多糖，用ELISA方法检测小鼠血浆中抗多糖的抗体水平。如图3所示，随着多糖加入量的增加，多糖特异性抗体结合96孔板中包被多糖的能力逐渐降低。当加入的多糖达到15微克时，两组血浆的抗体结合多糖的能力丧失。这表明小鼠产生的抗多糖抗体能够特异性地结合多糖。
Claims (6)
1.一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗，包括：
A群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；
C群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；
Y群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；
W135群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；
免疫活性剂，该免疫活性剂为寡聚脱氧核苷酸，其序列中含有两个拷贝的5’—CGTTCGAG—3’；所述寡聚脱氧核苷酸的长度为18~38个核苷酸；其中CpG是非甲基化的；
佐剂，该佐剂包括氢氧化铝和乳糖。
2.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述化学偶联物是脑膜炎球菌血清群A群、C群、Y群和W135群中的一种或多种荚膜多糖与破伤风类毒素、白喉类毒素或其它任何适用于人用疫苗的载体蛋白的化学偶联物。
3.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述免疫活性剂的核苷酸序列为5’—TCGC CGTTCGAG CCTA CGTTCGAG CTTG—3’。
4.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述免疫活性剂的核苷酸序列为5’—TTCTGAC CGTTCGAG TGCACTA CGTTCGAG CAGTTG—3’。
5.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于：每支疫苗中脑膜炎球菌加膜多糖与载体蛋白的化学偶联物总含量为10ug~100ug，每支疫苗中佐剂中含量为1mg~100mg。
6.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于：进一步包括药学上可接受的赋形剂。
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104998255A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-10-28 | 北京祥瑞生物制品有限公司 | 新型acyw135群脑膜炎球菌结合疫苗及其制备方法 |
| CN113274488A (zh) * | 2021-04-30 | 2021-08-20 | 山东省药学科学院 | 一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法 |
| CN117679500A (zh) * | 2023-11-22 | 2024-03-12 | 罗益（无锡）生物制药有限公司 | 一种四价流脑疫苗的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1090642A2 (en) * | 1995-06-07 | 2001-04-11 | SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. | Vaccines comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein |
| WO2004011027A1 (en) * | 2002-07-30 | 2004-02-05 | Baxter International Inc. | Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines |
| CN101559225A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 北京生物制品研究所 | 脑膜炎球菌疫苗 |
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2014
- 2014-09-23 CN CN201410324895.4A patent/CN104174019A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1090642A2 (en) * | 1995-06-07 | 2001-04-11 | SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. | Vaccines comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein |
| WO2004011027A1 (en) * | 2002-07-30 | 2004-02-05 | Baxter International Inc. | Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines |
| CN101559225A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 北京生物制品研究所 | 脑膜炎球菌疫苗 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104998255A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-10-28 | 北京祥瑞生物制品有限公司 | 新型acyw135群脑膜炎球菌结合疫苗及其制备方法 |
| CN113274488A (zh) * | 2021-04-30 | 2021-08-20 | 山东省药学科学院 | 一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法 |
| CN113274488B (zh) * | 2021-04-30 | 2023-08-29 | 山东省药学科学院 | 一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法 |
| CN117679500A (zh) * | 2023-11-22 | 2024-03-12 | 罗益（无锡）生物制药有限公司 | 一种四价流脑疫苗的制备方法 |
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