CN104119576B - 一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其活性成分由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，所述巴戟天多糖和黄精多糖的重量份比为巴戟天多糖10~250、黄精多糖1~50，该巴戟天和黄精复合多糖的纯度及活性高，具有调节肿瘤微环境的功效。还公开了上述巴戟天和黄精复合多糖的制备方法，该制备方法其工艺简单稳定高效，适合工业化生产，成本低，本发明还公开了上述巴戟天和黄精复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。
Description
技术领域
本发明属于多糖技术领域，具体涉及一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖及其制备方法和应用。
背景技术
恶性肿瘤是当前危害人类健康的严重疾病，化学治疗是应用于恶性肿瘤全身治疗的主要方法之一，但大部分抗肿瘤化学药物在杀死肿瘤细胞的同时，也严重损伤了正常细胞。肿瘤复发和转移是困扰临床肿瘤治疗的具有普遍意义的难题，究其原因，在于现有治疗的目标仍然集中在肿瘤细胞本身，而忽略了其微环境的重要性。肿瘤微环境与肿瘤细胞之间是土壤与种子的关系，肿瘤恶变过程，就是肿瘤细胞与其微环境共进化的过程，其结果就是休眠肿瘤细胞的苏醒，进入快速增殖，并发生转移。因此，改善肿瘤微环境，维持肿瘤细胞的休眠状态，是目前研究的热点和重点。近年来的研究发现，多糖具有显著地抗肿瘤活性并且对人体的毒副作用相对较小，对多糖的生物活性研究在医学领域已经成为国内外专家学者研究的热点。近年发现一些多糖及其复合物对多种疾病，如免疫紊乱、癌症、糖尿病、高血压、肝炎、血栓、肺炎、病毒等都具有显著疗效，并且参与细胞各种生命现象的调节并具有调节肿瘤微环境的作用。大量药理和临床试验表明多糖类化合物是优良的免疫调节剂，能增加巨噬细胞和白细胞的吞噬功能、诱导产生细胞坏死因子（TNF）和白细胞素，从而提高人体的免疫功能，并且对正常细胞几乎无毒副作用。
许多多糖单用虽有一定生物活性，但两种免疫增强剂包括两种多糖合用疗效会更高，从学术上讲与中药方剂原则有异曲同工之妙，把每一种多糖看作是一味中药，结合现代科学的研究进行有效优化，从而得出最佳比例并进行组合搭配，通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用，可明显提高疗效。当今，中药多糖作为一类重要的生物活性物质，因其较好的抗肿瘤活性，毒副作用低等优点，在抗肿瘤药物研发和新型保健品开发行业展现出巨大的潜力。
目前尚未有人以巴戟天和黄精为原料提取多糖并配制复合多糖，并用于调节肿瘤微环境及辅助抑制肿瘤保健食品方面的应用。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，该巴戟天和黄精复合多糖以巴戟天和黄精为原料提取获得，获得的巴戟天和黄精复合多糖纯度及活性高，具有调节肿瘤微环境的功效。
本发明的第二个目的在于提供上述具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖的制备方法，该制备方法工艺简单、稳定高效，适合工业化生产，成本低。
本发明的最后一个目的在于提供上述具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。
本发明的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其活性成分由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，所述巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖10 ~200、黄精多糖8~ 100。
作为本发明的一种优选的技术方案，本发明所述的巴戟天多糖和黄精多糖的质量份比配为巴戟天多糖30~150、黄精多糖40~ 80。
作为本发明的一种较佳的具体实施技术方案，本发明所述的巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖150、黄精多糖30。
本发明所述的巴戟天多糖或黄精多糖优选通过以下方法制备获得：选取巴戟天或黄精原料，采用沸水提取多次，合并提取液并浓缩得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋进行透析得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液b2，将透析液b2浓缩得浓缩液a3，在浓缩液a3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物即为巴戟天多糖或黄精多糖。
在上述巴戟天多糖或黄精多糖的制备过程中：采用沸水提取时，共提取1~5次，每次提取时沸水的用量为巴戟天或黄精原料总质量的10~20倍，每次提取时间为4~5h。
在上述巴戟天多糖或黄精多糖的制备过程中：所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为15~35%，其用量与浓缩液a2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为3~4h。
在上述巴戟天多糖或黄精多糖的制备过程中：所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70~95%，乙醇水溶液的用量为浓缩液a3总体积的2~4倍。
优选将透析液b1浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液a2，将透析液b2浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液a3。
透析袋的截留分子量约为3500 Da。
本发明的第二个目的是通过以下技术方案来实现的：上述具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖的制备方法，含以下步骤：
（1）选取巴戟天或黄精原料，采用沸水提取多次，合并提取液并浓缩得浓缩液a1；
（2）将浓缩液a1采用透析袋进行透析得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2；
（3）在浓缩液a2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液b2，将透析液b2浓缩得浓缩液a3；
（4）在浓缩液a3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物即为巴戟天多糖或黄精多糖；
（5）将巴戟天多糖和黄精多糖按照上述计量比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
在该巴戟天和黄精复合多糖的制备方法中：
步骤（1）中采用沸水提取时，共提取1~5次，每次提取时沸水的用量为巴戟天或黄精原料总质量的10~20倍，每次提取时间为4~5h；步骤（3）中所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为15~35%，其用量与浓缩液a2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为3~4h；步骤（4）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70~95%，乙醇水溶液的用量为浓缩液a3总体积的2~4倍。
步骤（3）中优选将透析液b1浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液a2，步骤（3）中优选将透析液b2浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液a3。
步骤（2）和步骤（3）中透析袋的截留分子量约为3500 Da。
本发明的最后一个目的是通过以下技术方案来实现的：上述具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。
本发明所述保健食品的剂型可以为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
（1）本发明中的巴戟天和黄精复合多糖，可以通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫抑制及免疫负调控等多途径调节肿瘤微环境，其具有良好的抗肿瘤活性，其可以直接口服，也可以制成药剂学上所说的多种剂型，如胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等，食用后具有调节肿瘤微环境以及辅助抑制肿瘤的功效；
（2）本发明中的巴戟天和黄精复合多糖以富含活性多糖的中草药为主料，利用各种多糖成分合理组合、配合共用，通过多种途径调节肿瘤微环境以及辅助抑制肿瘤，对亚健康保健具有良好的效果；
（3）本发明中的巴戟天和黄精复合多糖的制备方法，其工艺简单、稳定高效，适合工业化生产，成本低。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不以任何形式限制本发明。
以下实施例中采用的各原料，如无特殊说明，均为市售产品。
第一部分巴戟天和黄精复合多糖及其制备方法
实施例1
本实施例中的巴戟天和黄精复合多糖，其活性成分由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，其中巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖10、黄精多糖100。
上述巴戟天和黄精复合多糖通过以下方法制备获得：
（1）制备巴戟天多糖：选取巴戟天药材3kg，加入水30L，加热煮沸提取，共提取3次，每次提取5小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋（3500 Da，下同）和对流水进行透析大约2天后得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为30%，温度为4℃，去蛋白时间约为3~4h，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10%）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液b2（3500 Da，下同），将透析液b2浓缩至大约3L得浓缩液a3，在浓缩液a3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为85%，用量约为浓缩液a3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40℃真空干燥，所得沉淀物即为巴戟天多糖；
（2）制备黄精多糖，黄精多糖的制备方法同巴戟天多糖；
（3）将巴戟天多糖和黄精多糖按照巴戟天多糖10、黄精多糖100的质量份配比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
实施例2
本实施例中的巴戟天和黄精复合多糖，其活性成分由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，其中巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖200、黄精多糖8。
上述巴戟天和黄精复合多糖通过以下方法制备获得：
（1）制备巴戟天多糖：选取巴戟天药材3kg，加入水60L，加热煮沸提取，共提取3次，每次提取4小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为15%，温度为4℃，去蛋白时间约为3~4h，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10%）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液b2，将透析液b2浓缩至大约3L得浓缩液a3，在浓缩液a3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70%，用量约为浓缩液a3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40℃真空干燥，所得沉淀物即为巴戟天多糖；
（2）制备黄精多糖，黄精多糖的制备方法同巴戟天多糖；
（3）将巴戟天多糖和黄精多糖按照巴戟天多糖200、黄精多糖8的质量份配比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
实施例3
本实施例中的巴戟天和黄精复合多糖，由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，其中巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖30、黄精多糖80。
上述巴戟天和黄精复合多糖通过以下方法制备获得：
（1）制备巴戟天多糖：选取巴戟天药材3kg，加入水30L，加热煮沸提取，共提取3次，每次提取5小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为35%，温度为4℃，去蛋白时间约为3~4h，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10%）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液b2，将透析液b2浓缩至大约3L得浓缩液a3，在浓缩液a3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为80%，用量约为浓缩液a3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40℃真空干燥，所得沉淀物即为巴戟天多糖；
（2）制备黄精多糖，黄精多糖的制备方法同巴戟天多糖；
（3）将巴戟天多糖和黄精多糖按照巴戟天多糖30、黄精多糖80的质量份配比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
实施例4
本实施例中的巴戟天和黄精复合多糖，由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，其中巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖150、黄精多糖40。
上述巴戟天和黄精复合多糖通过以下方法制备获得：
（1）制备巴戟天多糖：选取巴戟天药材3kg，加入水60L，加热煮沸提取，共提取5次，每次提取4小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为20%，温度为4℃，去蛋白时间约为3~4h，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10%）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液b2，将透析液b2浓缩至大约3L得浓缩液a3，在浓缩液a3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为80%，用量约为浓缩液a3的4倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40℃真空干燥，所得沉淀物即为巴戟天多糖；
（2）制备黄精多糖，黄精多糖的制备方法同巴戟天多糖；
（3）将巴戟天多糖和黄精多糖按照巴戟天多糖150、黄精多糖40的质量份比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
实施例5
本实施例中的巴戟天和黄精复合多糖，由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，其中巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖100、黄精多糖30。
上述巴戟天和黄精复合多糖通过以下方法制备获得：
（1）制备巴戟天多糖：选取巴戟天药材3kg，加入水40L，加热煮沸提取，共提取5次，每次提取5小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为35%，温度为4℃，去蛋白时间约为3~4h，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10%）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液b2，将透析液b2浓缩至大约3L得浓缩液a3，在浓缩液a3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为95%，用量约为浓缩液a3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40℃真空干燥，所得沉淀物即为巴戟天多糖；
（2）制备黄精多糖，黄精多糖的制备方法同巴戟天多糖；
（3）将巴戟天多糖和黄精多糖按照巴戟天多糖100、黄精多糖30的质量份配比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
实施例6
本实施例中的巴戟天和黄精复合多糖，由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，其中巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖50、黄精多糖50。
上述巴戟天和黄精复合多糖通过以下方法制备获得：
（1）制备巴戟天多糖：选取巴戟天药材3kg，加入水50L，加热煮沸提取，共提取5次，每次提取4小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为20%，温度为4℃，去蛋白时间约为3~4h，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10%）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液b2，将透析液b2浓缩至大约3L得浓缩液a3，在浓缩液a3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为80%，用量约为浓缩液a3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40℃真空干燥，所得沉淀物即为巴戟天多糖；
（2）制备黄精多糖，黄精多糖的制备方法同巴戟天多糖；
（3）将巴戟天多糖和黄精多糖按照巴戟天多糖50、黄精多糖50的质量份配比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
实施例7
巴戟天多糖和黄精多糖的制备方法同实施例1，分别取巴戟天多糖 10g、黄精多糖1 g，以（10:1）比例混合均匀，得复合多糖组分P1。
实施例8
巴戟天多糖和黄精多糖的制备方法同实施例1，分别取巴戟天多糖 1g、黄精多糖5g，以（1:5）比例混合均匀，得复合多糖组分P2。
实施例9
巴戟天多糖和黄精多糖的制备方法同实施例1，分别取巴戟天多糖 5g、黄精多糖1g，以（5:1）比例混合均匀，得复合多糖组分P3。
实施例10
以上述实施例1-9中提供的复合多糖为主要功效成分制备保健食品，通过常规工艺，可以制成药剂学上所说的多种剂型，如胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒或口服液等。
第二部分复合多糖及复合多糖辅助抑制肿瘤活性实验
实施例11 复合多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性
C2C12细胞株购自中科院细胞库，C2C12- pGF1-BRE细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。C2C12- pGF1-BRE细胞用含10 % Gibco胎牛血清DMEM 培养基培养，置于37℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养，以1×104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔100 μL。贴壁24 h后吸去60 μL培养基，加配置好相应浓度的多糖样品（P1、P2及P3）50 μL，终浓度分别为0.5 mg/mL、0.1 mg/mL、0.02 mg/mL，10 μL BMP2调整至终浓度200 ng/mL。同时设空白组和BMP2组对照。给药16 h后吸去培养基，加20 μLReporter Lysis 1X Buffer，将溶解的细胞裂解液20 μL转移至白板，加入40 μLluciferase底物，于3分钟内读板，读取RLU值。采用SPSS 统计软件进行统计学处理。数据均以均数±标准差(.x ±s) 表示，两组间比较采用独立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析。
实施例12 复合多糖可抑制TGFβ诱导的带有SMAD2/3/4报告基因活性
HEK293T细胞株购自中科院细胞库，HEK293T-pGF1-SMAD2/3/4细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。HEK293T-pGF1-SMAD2/3/4细胞用含10%Gibco胎牛血清DMEM 培养基培养，置于37 ℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养，以2×104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔100 μL。贴壁24 h后吸去60 μL培养基，加配置好相应浓度的样品50 μL（P1、P2及P3），终浓度分别为0.5 mg/mL、0.1 mg/mL、0.02 mg/mL，10 μLTGFβ1调整至终浓度50 ng/mL。同时设空白组和TGFβ1组对照。给药16 h后吸去培养基，加20 μL Reporter Lysis 1X Buffer，将溶解的细胞裂解液20 μL转移至白板，加入40 μLluciferase底物，于3分钟内读板，读取RLU值。采用SPSS 统计软件进行统计学处理。数据均以均数±标准差(.x ±s) 表示，两组间比较采用独立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析。
实施例13 复合多糖能抑制带有NF-кB报告基因的荧光素酶的活性
THP-1细胞株购自中科院细胞库，THP-1/pGF1-NF-кB细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。THP-1/pGF1-NF-кB细胞用含10%胎牛血清RPMI-1640培养基培养。置于37℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养，以5×104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔50 μL容积。加入受试样品50 μL（P1、P2及P3），终浓度分别为0.5 mg/mL、0.1 mg/mL、0.02 mg/mL，同时设立空白组和LPS对照组。加入LPS溶液10 μL，终浓度为1μg/mL，置于37℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养过夜。培养过夜后，每空加入100 μLBright-GloTM Luciferase Assay System底物于酶标仪读板，读取RLU值。
采用SPSS 统计软件进行统计学处理。数据均以均数±标准差(.x ±s) 表示,两组间比较采用独立样本t 检验,多组间比较采用单因素方差分析。
实施例14 复合多糖可显著抑制前列腺癌成纤维细胞的生长
前列腺癌相关成纤维细胞（CAF）由南开大学生命科学院惠赠。细胞接种于96孔板，细胞密度为1×104/孔。将多糖复合物（P1、P2及P3）溶于DMEM+/+培养基中，使其浓度为分别为0.02 mg/mL、0.1 mg/mL及 0.5 mg/mL。培养8天，采用CCK检测试剂盒（北京庄盟生物公司）测定细胞生长状态。每种多糖样本量为3。
统计学分析：计量数据多组间比较采用方差分析，首先对数据进行方差齐性检验，计算Levene统计值，若方差齐，则进行组间多重比较，方法为LSD和Dennett，若方差不齐，则采用校正方法Dennett。统计软件为SPSS17.0，显著性水平为α=0.05。
将巴戟天多糖及黄精多糖按照不同比例配制成复合多糖，该复合多糖调节肿瘤微环境生物活性测定结果见表1、表2和表3。结果表明，将巴戟天多糖与黄精多糖按照3种不同比例配制成的复合多糖同时具有抑制血管生成、免疫抑制及免疫负调节生物活性。巴戟天多糖及黄精多糖单用虽有一定生物活性，但两种多糖合用，进行有效优化，从而得出最佳比例并进行组合搭配，当巴戟天多糖及黄精多糖的质量比为5:1，抗肿瘤活性效果相对较好，通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用，可明显提高疗效。综上实验证明该多糖复合物可通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫抑制及免疫负调控等多途径发挥潜在的抗肿瘤活性。
综上实验证明该多糖复合物可通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫激活及抑制小鼠移植瘤生长等多途径发挥潜在的抗肿瘤活性。
表1. 3种不同配比复合多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性
表2. 3种不同配比复合多糖可抑制TGFβ诱导的带有SMAD2/3/4报告基因活性
表3. 3种不同配比复合多糖能抑制带有NF-кB报告基因的荧光素酶的活性
表4. 3种不同配比复合多糖能抑制前列腺癌成纤维细胞的生长
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其特征是：其活性成分由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，所述的巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖30 ~150、黄精多糖40~ 80；
所述的巴戟天多糖和黄精多糖均通过以下方法制备获得：选取巴戟天或黄精原料，采用沸水提取1~5次，合并提取液并浓缩得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋进行透析得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液b2，将透析液b2浓缩得浓缩液a3，在浓缩液a3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物即为巴戟天多糖或黄精多糖；
透析袋的截留分子量为3500 Da。
2.一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其特征是：其活性成分由巴戟天多糖和黄精多糖复配而成，所述的巴戟天多糖和黄精多糖的质量份配比为巴戟天多糖150、黄精多糖30；
所述的巴戟天多糖和黄精多糖均通过以下方法制备获得：选取巴戟天或黄精原料，采用沸水提取1~5次，合并提取液并浓缩得浓缩液a1，将浓缩液a1采用透析袋进行透析得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2，在浓缩液a2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液b2，将透析液b2浓缩得浓缩液a3，在浓缩液a3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物即为巴戟天多糖或黄精多糖；
透析袋的截留分子量为3500 Da。
3.根据权利要求1或2所述的具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其特征是：采用沸水提取时，每次提取时沸水的用量为巴戟天或黄精原料总质量的10~20倍，每次提取时间为4~5h。
4.根据权利要求1或2所述的具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其特征是：所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为15~35%，其用量与浓缩液a2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为3~4h。
5.根据权利要求1或2所述的具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖，其特征是：所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70~95%，乙醇水溶液的用量为浓缩液a3总体积的2~4倍。
6.权利要求1或2所述的具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖的制备方法，其特征是包括以下步骤：
（1）选取巴戟天或黄精原料，采用沸水提取1~5次，合并提取液并浓缩得浓缩液a1；
（2）将浓缩液a1采用透析袋进行透析得透析液b1，将透析液b1浓缩后得浓缩液a2；
（3）在浓缩液a2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液b2，将透析液b2浓缩得浓缩液a3；
（4）在浓缩液a3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物经干燥即为巴戟天多糖或黄精多糖；
（5）将巴戟天多糖和黄精多糖按照计量比混匀，即制备获得巴戟天和黄精复合多糖。
7.根据权利要求6所述的具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖的制备方法，其特征是：步骤（1）中采用沸水提取时，每次提取时沸水的用量为巴戟天或黄精原料总质量的10~20倍，每次提取时间为4~5h；步骤（3）中所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为15~35%，其用量与浓缩液a2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为3~4h；步骤（4）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70~95%，乙醇水溶液的用量为浓缩液a3总体积的2~4倍。
8.权利要求1或2所述的具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。
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