CN104095912A - 治疗风湿骨病的中药组方及其中成药的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明治疗风湿骨病的中药组方，含有生物碱、黄酮、皂苷三类有效部位，所述生物碱包括麻黄生物碱、马钱子生物碱，所述黄酮包括甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮，所述皂苷包括甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷，由所述麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷中至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成。按所述治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法包含以下步骤：⑴制备生物碱；⑵制备黄酮；⑶制备皂苷；⑷配制有效部位组分；⑸制备治疗风湿骨病的中成药：片剂或胶囊。按治疗风湿骨病的中药组方制备的中成药能在治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎以及关节痛中应用。
Description
技术领域
本发明属于中医中药技术领域，涉及中药的成药组方，具体地涉及治疗风湿骨病的中药组方及其中药成药(以下简称“中成药”)的制备方法。
背景技术
风湿性疾病，俗称“风湿病”，系风、寒、湿、创伤侵入人体，形成痹毒并附于人体骨骼，从而损伤骨骼和与骨骼相关的硬组织，致使肌、韧带、滑囊、筋膜的营养供给不良而导致的一类疾病。在风湿性疾病中，99％的又为风湿骨病，是现今最为常见的慢性骨病之一。早在古时，中医对风湿性疾病就有相关描述。“风湿”属于中医“痹症”的范畴，在《素问·痹论》中就有“风寒湿三气杂至，合而为痹”之说，它从中医角度阐明了该疾病的发病机理是为“阳气不足、腠理不密、风寒湿邪入侵”等所致。在人体正气不足时，风、寒、湿、热外邪侵袭，痹阻肌肉、关节、经络之间，致使气血运行不畅，病久不愈则出现肌肉筋骨关节疼痛、麻木、展伸不利，甚至关节肿大、灼热、畸形，疼痛加剧，皮下结节，肢体僵硬，且诸症顽固难愈。中医治疗风湿病遵循辨证论治原则，首当辨明虚实寒热。病属实者，以肢体关节肿胀、疼痛、麻木为主症，无正气虚弱表现。病属虚者，伴气血损伤、脏腑亏虚证候。现代中医名家施今墨将痹症分为风湿热证、风湿寒症、气血实证和气血虚证，治痹症不可统一风寒湿三气同等，其有偏多偏少，当随其证而治之，提示中药新药研发时应考虑针对不同治则随其治而制。
现代中医药学对于不同治则的研究有不同的方法。根据《中药新药药效学研究指南》所述，考察药物是否具有治疗风湿痹症的效果需要进行免疫调节、温经通络、祛风除湿、温经止痛等相关的药效学研究。风湿痹症常与自身免疫有关，治疗痹症的药物应做免疫调节的相关研究。通过软骨细胞模型、免疫模型评价药物补肾、免疫的功效。选取骨碎补药材中黄酮提取物作为君药，选择性辅以麻黄、马钱子药材中生物碱提取物，甘草、红花中黄酮提取物，甘草、三七中皂苷提取物制备中药组方，观察其对软骨细胞增殖、免疫因子分泌的影响，评价其补肾壮骨、增强免疫的功效；通过测定细胞产生NO量来评价药物温经通络的功效。针对温经通络的治疗，选取红花中黄酮提取物作为君药，选择性辅以麻黄、马钱子药材中生物碱提取物，甘草、骨碎补中黄酮提取物，甘草、三七中皂苷提取物制备中药组方，观察其对内皮细胞产生一氧化氮的影响，评价其温经通络的效果。通过佐剂性关节炎大鼠模型评价药物祛风除湿的功效。选取甘草药材中皂苷提取物作为君药，选择性辅以麻黄、马钱子药材中生物碱提取物，甘草、红花、骨碎补中黄酮提取物，川牛膝、三七中皂苷提取物制备中药组方，观察其对佐剂性关节炎(AA)大鼠足跖肿胀的治疗效果，评价其祛风除湿的功效。通过热板法、醋酸扭体法模型评价药物的散寒止痛功效。选取甘草药材中皂苷提取物作为君药，选择性辅以麻黄、马钱子药材中生物碱提取物，甘草、红花、骨碎补中黄酮提取物，川牛膝、三七中皂苷提取物制备中药组方，观察其对醋酸致小鼠疼痛扭体反应的影响，评价其镇痛作用。
传统的中成药对治疗风湿骨病具有较好的疗效，但是，由于采用的中药药材是全粉入药的，不仅含有很多非有效物质，而且存在药理不明的毒副作用问题，同时不利于中成药的规模化生产。因此，人们还在继续努力改善药物组成，明确中药成药的作用机理。市面上现有的用于治疗风湿骨病的药物，虽各有所侧重的治则，但不能形成系统的方组，用于不同病症病程的治疗。
发明内容
本发明的目的在于解决上述问题，提供用于治疗风湿骨病的中药组方，属于系列组方，可用于不同病症病程的治疗，可以提供适应药物的选择。所述组方不是采用中药药材全粉或粗提物入药，而是采用从中药麻黄、马钱子、甘草、红花、骨碎补、川牛膝和三七中提取的有效部位入药：麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷中的至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成；本发明的再一目的是，提供按所述中药组方制备中成药的一种方法，使按所述有效部位组分的组方能制成胶囊或片剂为实际治疗所用。
为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案。
一种治疗风湿骨病的中药组方，其特征是，含有生物碱、黄酮、皂苷三类有效部位，所述生物碱包括麻黄生物碱、马钱子生物碱，所述黄酮包括甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮，所述皂苷包括甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷，由所述麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷中至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成。
进一步，所述有效部位在中药组方中的质量份数配比如下：
生物碱 0.001～2份；
黄酮 0.01～12份；
皂苷 0.01～8份。
进一步，所述有效部位组分的质量份数配制为：
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进一步，所述有效部位组分的质量份数配制为：
为实现上述第二目的，本发明采取了以下技术方案。
一种按治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，其特征是，包含以下步骤：
(1)制备生物碱
所述生物碱包括麻黄生物碱和马钱子生物碱；
称取麻黄药材或者马钱子药材(将麻黄药材或马钱子药材进行单个制备)进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤，离心，减压浓缩；旋蒸至干，称重，制得麻黄提取物或马钱子提取物；
(2)制备黄酮
所述黄酮包括甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮；
①制备甘草黄酮
称取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后过HZ915聚酰胺树脂柱；醇液减压浓缩干燥，称重，制得甘草提取物；
②制备红花黄酮
称取红花药材，超声水提，过滤，离心，减压浓缩，过HZ818大孔非极性树脂柱，用水、乙醇洗脱，TLC跟踪检测分段收集洗脱液，减压浓缩成干膏，真空干燥，称重，制得红花提取物；
③制备骨碎补黄酮
称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，离心，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，真空干燥，称重，制得骨碎补提取物；
(3)制备皂苷
所述皂苷包括甘草皂苷、川牛膝皂苷以及三七皂苷；
①制备甘草皂苷
取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，旋蒸，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；旋蒸至干，干燥，称重，制得甘草提取物；
②制备川牛膝皂苷
取川牛膝药材进行粉碎，用乙醇回流提取两次；过滤离心提取，旋蒸至浸膏；用去离子水溶解，过HZ-816大孔树脂柱，重复上样一次，收集乙醇的洗脱液；醇液旋蒸，干燥，称重，制得川牛膝提取物；
③制备三七皂苷
称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤，离心，减压浓缩，旋蒸至浸膏；用去离子水溶解，过HZ-816大孔树脂柱，重复上样一次，收集乙醇的洗脱液；乙醇洗脱液旋蒸，干燥，称重，制得三七提取物；
(4)配制有效部位组分
由步骤(1)～(3)制备的麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷、三七皂苷中的至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成组方，所述有效部位组分的质量份数配比为：
生物碱 0.001～2份，
黄酮 0.01～12份，
皂苷 0.01～8份；
(5)制备治疗风湿骨病的中成药
①将步骤(4)的有效部位组分混合均匀，然后进行喷雾干燥，干燥后有效部位组分的含水率为3～5％；干燥后加入适量乳糖、糖粉、甘露醇和糊精，粉碎过筛，以90％乙醇为粘合剂制成软材，20目筛制粒，在40～60℃下烘箱干燥至含水2％～4％，然后用10目筛整粒并加入1％的硬脂酸镁混合，压制成片剂；
②将步骤(4)的有效部位组分混合均匀，然后进行喷雾干燥，干燥后有效部位组分含水率为3～5％；加入适量二氧化硅混合，填充制成胶囊。
进一步，上述制备中成药的方法步骤(4)所述的有效部位组分的质量份数配比为：
进一步，上述制备中成药的方法步骤(4)所述的有效部位组分的质量份数配比为：
进一步，上述制备中成药的方法步骤(4)所述的有效部位组分的质量份数配比为：
进一步，上述制备中成药的方法步骤(4)所述的有效部位组分的质量份数配比为：
本发明的治疗风湿骨病的中药组方采用中药麻黄、马钱子、甘草、红花、骨碎补、川牛膝和三七的提取物：麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷中的至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成有中药有效部位组方，再按所述中药有效部位组方制成胶囊或片剂为实际治疗所用。
本发明采用的甘草是豆科甘草属植物，其根和茎是最常用的中药。甘草味甘、性平、无毒，主治五脏六腑寒热邪气，坚筋骨、长肌肉、倍气力、解毒，久服能轻身延年。甘草含有多种化学成分，其主要成分为甘草酸、甘草黄酮。所述甘草酸又称甘草皂苷，具有抗炎、抗病毒和保肝解毒及增强免疫功能等作用。多数报道认为，甘草皂苷的抗炎机理与抑制前列腺素等介质的作用有关。甘草酸可能通过对花生四烯酸水解所需的磷脂酶A2的抑制来实现抑制前列腺素的合成与释放。
本发明采用的川牛膝，又名牛膝、拐膝、天全牛膝、都牛胶等。根圆柱形，鲜时表面近白色，干后灰褐色或棕黄色；产四川、云南、贵州等地。根供药用，其性善下行，可引血(火)下行，既能逐瘀通经又能补益肝肾，在中医临床应用中发挥着重要的作用。
本发明采用的三七又名参三七、田七、血山草、六月淋、蝎子草，古时亦称昭参、血参、人参三七、田三七、山漆、三七参等；属伞形目五加科人参属多年生草本植物，是中国特有的名贵中药材，也是我国最早的药食同源植物之一；其根部入药，性温，味辛，具有散淤止血，消肿定痛的功效。常食田七，对冠心病、心绞痛有预防和治疗作用。由于三七同为人参属植物，而它的有效活性物质又高于和多于人参，因此又被现代中药药物学家称为“参中之王”。清朝药学著作《本草纲目拾遗》中记载：“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药中之最珍贵者。”扬名中外的中成药“云南白药”和“片仔癀”即以三七为主要原料制成，主治咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛。
本发明采用的红花是重要的中草药，为菊科植物干燥的花，内含红花红色素和红花黄色素，其性温、味辛，具有活血通经、祛瘀止痛、降低胆固醇、降血压等功效。所述红花黄色素是从红花的花瓣中提取的天然黄色素，为查耳酮类化合物，又称为红花黄酮。红花黄色素是中国允许使用的食用天然色素，已列入国家标准GB2760-1996中，为国家级新药。研究发现，红花黄色素不仅是一种很有价值的天然食用色素，而且还有扩张冠状动脉、抗氧化、保护心肌、降血压、免疫抑制和脑保护等多种药理功能。
本发明采用的骨碎补，其有效成分为柚皮苷等二氢黄酮苷部分，用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨折伤。
本发明的中药组方中还含有两种生物碱：麻黄生物碱和马钱子生物碱。其中，麻黄生物碱提取自麻黄，其中的麻黄碱可通过作用于α1-受体来提高中枢性痛觉阈值从而达到镇痛的作用。马钱子生物碱提取自马钱子，近代药理实验表明：马钱子生物碱具有显著的镇痛、镇静的作用，且其镇痛作用与M胆碱受体有一定的联系。
本发明的积极效果是：
(1)按照“标本兼治”的原则，采用补肾壮骨、温经通络、祛风除湿、散寒止痛的治疗方案，将麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷、三七皂苷各有效部位提取物进行设计组合，组成一个用于治疗风湿骨病的系列方组，包含六个组方，可依所选君药不同，侧重不同治则，便于科学质控，并依据中药新药药效学研究指南及相关参考文献进行多个体外细胞模型及动物实验，表现出有显著的疗效。
(2)本发明治疗风湿骨病的中药组方经体外细胞实验的结果证明：对小鼠巨噬细胞生成PGE2有明显的抑制作用，对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2水平具有明显的促进作用；对小鼠巨噬细胞产生IL-6和TNF-α亦有促进作用；对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞有显著的增殖作用，对此类细胞的损伤有明显的修复作用。此外，本发明的治疗风湿骨病的中药组方还具有显著的活血祛瘀作用，能有效的增强人脐静脉内皮细胞释放NO的能力。所述中药组方已从细胞因子水平阐明其作用机制。
(3)本发明治疗风湿骨病的中药组方经动物实验证明：能显著抑制佐剂性关节炎大鼠的急性足爪肿胀和继发性足肿胀，具有防治佐剂性关节炎及祛风除湿的作用；能显著减少醋酸致小鼠的扭体反应次数，具有止痛作用。
(4)动物实验证明：根据本发明治疗风湿骨病的中药组方制成的胶囊或片剂在补肾壮骨、祛风除湿、散寒止痛、温经通络等方面均有明显作用，对风湿骨病有良好疗效。
具体实施方式
以下介绍本发明治疗风湿骨病的中药组方及其中成药的制备方法的具体实施方式，提供11个实施例，以此来详细解释本发明的具体实施方式并分析、检查和验证本发明的治疗风湿骨病的中药组方以及根据所述中药组方制备的用于治疗风湿骨病的中成药的作用和功能。但是需要指出，本发明的实施不限于以下的实施方式。
实施例1
一种按治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，包含以下步骤：
(1)制备生物碱
所述生物碱包括麻黄生物碱和马钱子生物碱；
称取麻黄药材或者马钱子药材进行粉碎(制备麻黄生物碱或马钱子生物碱的工艺相同，但是应该分开进行)，用乙醇回流提取；过滤，离心，减压浓缩；旋蒸至干，称重，制得麻黄提取物或马钱子提取物。所述麻黄提取物中麻黄生物碱的质量百分比为20％～70％；所述马钱子提取物中马钱子生物碱的质量百分比为40％～95％。
(2)制备黄酮
所述黄酮包括甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮。
①制备甘草黄酮
称取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后过HZ915聚酰胺树脂柱；醇液减压浓缩干燥，称重，制得甘草提取物。所述甘草提取物中甘草黄酮的质量百分比为20％～80％。
②制备红花黄酮
称取红花药材，超声水提，过滤，离心，减压浓缩，过HZ818大孔非极性树脂柱，用水、乙醇洗脱，TLC跟踪检测分段收集洗脱液，减压浓缩成干膏，真空干燥，称重，制得红花提取物。所述红花提取物中红花黄酮的质量百分比为30％～50％。
③制备骨碎补黄酮
称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，离心，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，真空干燥，称重，制得骨碎补提取物。所述骨碎补提取物中骨碎补黄酮的质量百分比为35％～50％。
(3)制备皂苷
所述皂苷包括甘草皂苷、川牛膝皂苷以及三七皂苷。
①制备甘草皂苷
取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，旋蒸，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；旋蒸至干，干燥，称重，制得甘草提取物。所述甘草提取物中甘草皂苷的质量百分比为50％～95％。
②制备川牛膝皂苷
取川牛膝药材进行粉碎，用乙醇回流提取两次；过滤离心提取，旋蒸至浸膏；用去离子水溶解，过HZ-816大孔树脂柱，重复上样一次，收集乙醇的洗脱液；醇液旋蒸，干燥，称重，制得川牛膝提取物。所述川牛膝提取物中川牛膝皂苷的质量百分比为5％～30％。
③制备三七皂苷
称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤，离心，减压浓缩，旋蒸至浸膏；用去离子水溶解，过HZ-816大孔树脂柱，重复上样一次，收集乙醇的洗脱液；乙醇洗脱液旋蒸，干燥，称重，制得三七提取物。所述三七提取物中三七皂苷的质量百分比为60％～95％。
(4)配制有效部位组分
由步骤(1)～(3)制备的麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷、三七皂苷中至少一种生物碱、一种黄酮、一种皂苷按照比例混合制成有效部位组分。
实施例1的有效部位组分以每重量份10-1g计算，按下述有效部位质量份数进行配制：
配制总质量为8.9406×10-1g，标记为组方一，该质量可作为人口服的每日剂量。
实施例1的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方一(I)：
实施例1的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方一(II)：
(5)制备治疗风湿骨病的中成药
将步骤(4)配制的有效部位提取物分别混合均匀，然后进行喷雾干燥，干燥后物料的含水率为3％～5％，干燥后得到治疗风湿骨病的中药组方，按照常规方法加入适量乳糖、糖粉、甘露醇和糊精，粉碎过筛，以90％乙醇为粘合剂制成软材，20目筛制粒，在40～60℃下烘箱干燥至含水2％～4％，然后用10目筛整粒并加入1％的硬脂酸镁混合，压制成片(每片500mg)制得组方一的片剂。
实施例2
在实施例1的基础上，将实施例1步骤(4)配制的有效部位提取物分别混合均匀，然后进行喷雾干燥，干燥后物料的含水率为3％～5％，干燥后得到治疗风湿骨病的中药组方，最后按照常规方法加入适量二氧化硅混合，填充制成实施例1组方一的胶囊(每粒胶囊400mg)。
实施例3
一种按治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，基本制备步骤同实施例1，但是，实施例3与实施例1所不同的是，将甘草皂苷换为等质量的三七皂苷。
实施例3的有效部位组分按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方二：
实施例3的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方二(I)：
实施例3的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方二(II)：
对实施例3所述组方二进行质量分析，分析方法如下：
(1)麻黄的定性分析
取适量盐酸麻黄碱标准品溶于甲醇中，作为“标准品溶液”。
称取一定量的麻黄生物碱提取物溶于甲醇，制成每1mL含1mg麻黄生物碱提取物的溶液，作为“提取物溶液”。
另外配制组方二和缺麻黄的阴性药物溶液。
用毛细管吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷︰甲醇︰浓氨试液(20︰5︰0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。
由分析的TLC定性展开图能够看出：在与对照品相应高度的位置上，“提取物溶液”和组方二存在相同颜色的荧光斑点，缺麻黄的阴性药物溶液则无干扰。这表明：实施例3制备的组方二中含有麻黄碱。
(2)甘草的定性分析
取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1mL含2mg甘草酸铵对照品的溶液，作为“标准品溶液”。
称取一定量的甘草黄酮提取物溶于甲醇，制成每1mL含1mg甘草黄酮提取物的溶液，作为“提取物溶液”。
另外，配制组方二和缺甘草黄酮的阴性药物溶液。
按照薄层色谱法(附录ⅥB)进行试验：
吸取上述四种溶液各1～2μL，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯︰甲酸︰冰醋酸-水(15︰1︰1︰2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
从试验点板的结果能够明显看出：“提取物溶液”、组方二及“标准品溶液”在相应的位置上有相同颜色的点，缺甘草黄酮的阴性药物溶液则没有。这表明：实施例3制备的组方二中含有甘草黄酮。
(3)红花的定性分析
取适量羟基红花黄色素A(HSYA)标准品溶于甲醇中，作为“标准品溶液”。
称取一定量的红花黄色素提取物溶于甲醇，制成每1mL含1mg红花黄色素提取物的溶液，作为“提取物溶液”。
另外配制组方二和缺红花的阴性药物溶液。
用毛细管吸取上述四种溶液各5μL点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮︰甲醇︰水＝10︰3︰2的混合溶液作为展开剂，展开，取出，晾干。分别在日光和365nm的紫外光下检视。
由分析的TLC定性展开图能够看出：在与对照品相应高度的位置上，“提取物溶液”和组方二存在相同颜色的荧光斑点，缺红花的阴性药物溶液则无干扰。这表明：实施例3制备的组方二中含有红花黄酮。
(4)骨碎补的定性分析
取适量柚皮苷标准品溶于甲醇中，作为“标准品溶液”。
称取一定量的骨碎补黄酮提取物溶于甲醇，制成每1mL含0.5mg骨碎补黄酮提取物的溶液，作为“提取物溶液”。
另外配制组方二和缺骨碎补的阴性药物溶液。
用毛细管吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水(1︰12︰2.5︰3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。
由分析的TLC定性展开图能够看出：在与对照品相应高度的位置上，“提取物溶液”和组方二存在相同颜色的荧光斑点，缺骨碎的补阴性药物溶液则无干扰。这表明：实施例3制备的组方二中含有骨碎补黄酮。
(5)三七的定性分析
取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为“标准品溶液”。
称取一定量的三七皂苷提取物溶于甲醇，制成每1mL含0.5mg三七提取物的溶液，作为“提取物溶液”。
另外配制组方二和缺三七的阴性药物溶液。
用毛细管吸取上述四种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲醇︰水(15︰40︰22︰10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。
由分析的TLC定性展开图能够看出：在与对照品相应高度的位置上，“提取物溶液”和组方二存在相同颜色的荧光斑点，缺三七的阴性药物溶液则无干扰。这表明：实施例3制备的组方二中含有三七皂苷。
实施例4
一种按治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，基本步骤同实施例1，但是，实施例4与实施例1所不同的是，实施例4的有效部位组分按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方三：
实施例5的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方三(I)：
实施例5的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方三(II)：
对实施例4所述组方三中的麻黄生物碱进行定量分析。
配制一定浓度的麻黄碱和伪麻黄碱“标准溶液”、麻黄生物碱“提取物溶液”以及组方三(阳性药)和缺麻黄生物碱的阴性药物溶液，按照2005版中国药典所述的麻黄碱HPLC测试条件进行测试，在所获得的色谱图上，“提取物溶液”、组方三在与“标准溶液”出峰的相应位置上有吸收峰出现，而缺麻黄生物碱的阴性药物溶液则无干扰。通过峰面积结合标准曲线可求得组方三中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量分别为2.12％和0.68％。
实施例5
(一)一种按治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，基本步骤同实施例1，但是，实施例5与实施例1所不同的是，实施例5的有效部位组分按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方四：
实施例5的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方四(I)：
实施例5有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方四(II)：
(二)将实施例5的有效部位组分按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方五：
实施例5的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方五(I)：
实施例5的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方五(II)：
(三)将实施例5的有效部位组分组方四和组方五进行风湿骨病治疗作用的体外细胞实验，了解本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞增殖的影响。
1、受试药物：本发明实施例5所述组方四。
2、受试细胞：SD大鼠骨关节软骨细胞。
3、实验方法
(1)取7日龄SD大鼠脱颈处死，浸泡于酒精质量百分含量为95％的酒精数分钟后取出，取出股骨头、肩关节及膝关节软骨组织，用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗数次，加入少量PBS剪碎，用0.2％的Ⅱ型胶原酶37℃消化，移取上清液作为单个细胞悬液接种于培养皿中培养，隔天换液。
(2)待细胞基本长满后传代培养，传至第2代时，调整细胞浓度为1×107/L，接种于96孔培养板内用于实验。每孔接种200μL细胞悬液，接种24h后将培养孔分为空白对照组、IL-1β对照组、受试样品组、阳性对照组，每样3复孔，分别更换相应的培养液。
①空白对照组：换DMEM(含5％FBS，0.02％吐温-80)。
②模型组：换DMEM(含10μg/L的IL-1β，0.02％吐温-80及5％FBS)。
③受试药物及阳性对照组：换DMEM(含10μg/L的IL-1β，0.02％吐温-80，5％FBS及各浓度药物或阳性药)。
(3)将各组放入培养箱中继续培养48h用于细胞增殖检测。去除原有细胞培养基，每孔加入100μL全培养基及10μLCCK8溶液重悬，继续孵育，于给药后3h置于酶标仪450nm波长下测定每孔的光密度值(OD值)，对受试样品促增殖作用进行分析。
4、实验结果
受试药物对IL-1β诱导的大鼠骨关节炎软骨细胞的增殖影响见表1。
表1.受试药物对IL-1β诱导的大鼠骨关节炎软骨细胞的增殖影响(O.D.)
| 样品号 | 促进IL-1β诱导的大鼠软骨细胞增殖EC50 |
| 组方四 | 7.573±0.220 |
由表1可见，受试药物实施例5的有效部位组分组方四显示出显著的细胞增殖作用，本发明用于治疗风湿骨病的系列中药组方可有效治疗骨关节炎，促进软骨细胞的增殖以缓解关节炎对关节造成的伤害。
实施例6
本实施例同实施例5，不同之处在于：本实施例是对药物的免疫调节作用做出评价，以了解本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方对小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响。
1、受试药物：本发明实施例5所述组方四、组方五。
2、受试细胞：小鼠脾淋巴细胞。
3、实验方法
小鼠断颈，无菌取脾，用滤网磨碎后制备脾细胞悬液，保证原代细胞活性95％以上，调整细胞浓度至3×106个/mL。加入ConA诱导脾淋巴细胞增殖，细胞经过受试药物处理，培养72h后用ELISA法测定细胞培养上清中IL-2含量，同时加入CCK8试剂，检测细胞活力状态。
4、实验结果
受试药物对小鼠脾细胞IL-2分泌的影响见表2。
表2.受试药物对小鼠脾细胞IL-2分泌的影响(O.D.)
| 样品号 | 促进小鼠脾淋巴细胞IL-2分泌EC50 |
| 组方四 | 38.954±4.983 |
| 组方五 | 30.938±5.461* |
*与组方四组P＜0.05。
如表2所示，本发明实施例5所述组方四、组方五可对小鼠脾淋巴细胞的IL-2分泌水平有显著的正向调节作用，组方五的EC50值小于组方四，提示组方五对IL-2的调节作用优于组方四。该结果显示：本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方均可调动机体免疫应答，调节T淋巴细胞的生长与分化，通过增强机体免疫作用而达到治本的目的。
实施例7
本实施例同实施例6，不同之处在于：本实施例是对Ana-1巨噬细胞免疫功能进行的细胞实验，以了解本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方对小鼠Ana-1巨噬细胞免疫功能、抗肿瘤的影响。
1、受试药物：本发明实施例5所述组方四、组方五。
2、受试细胞：小鼠Ana-1巨噬细胞。
3、实验方法：
(1)将Ana-1小鼠巨噬细胞在37℃、5％CO2条件下，用含10％小牛血清、青霉素(1×105u·L-1)及链霉素(100mg·L-1)的DMEM培养液进行传代培养。实验用细胞均处于对数生长期。
(2)取需要的细胞量，加入需要体积的新鲜完全培养基重悬细胞，接种96孔板中，空白对照组及待测药物处理组(3.125；6.25；12.525；50；100；400μg/mL)，于37℃，5％CO2条件下培养。
(3)在加药前弃去旧培养液，用新鲜培养液洗涤3次，加入新鲜的待测药物孵育30min，用酶联法测定样品IL-6及TNF-α含量，每组重复3次。
4、实验结果
(1)受试药物对Ana-1细胞产生TNF-α的影响见表3。
表3.受试药物对Ana-1细胞产生TNF-α的影响(OD值/A)
| 样品号 | 促进Ana-1细胞TNF-α分泌EC50 |
| 组方四 | 14.417±6.551 |
| 组方五 | 13.128±3.6△ |
表3中，△与组方四组P＞0.05。
表3的结果显示：本发明实施例5所述组方四、组方五均可对小鼠脾淋巴细胞的TNF-α分泌水平有正向调节作用。TNF-α是一种能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子，是迄今为止所发现的能直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一，参与机体免疫应答和炎症反应。因此，本发明的用于治疗风湿骨病的中药系列组方可调动机体免疫应答，增强机体免疫力，能更有效地治疗风湿骨病。
(2)受试药物干预Ana-1细胞产生IL-6的影响见表4。
表4.受试药物干预Ana-1细胞产生IL-6的影响(OD值/A)
| 样品号 | 促进Ana-1细胞IL-6分泌EC50 |
| 组方四 | 14.999±1.04 |
| 组方五 | 15.548±1.932△ |
表4中，△与组方四组P＞0.05。
如表4所示，本发明实施例5所述组方四、组方五均可增强小鼠脾淋巴细胞的IL-6分泌水平，所试样品的EC50不存在显著差异。IL-6是能够活化T细胞和成纤维细胞产生的淋巴因子，能使B细胞前体成为产生抗体的细胞；IL-6与集落刺激因子协同能促进原始骨髓源细胞的生长和分化，增强自然杀伤细胞的裂解功能。因此，本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方亦可调动机体免疫应答，带动原始骨髓源细胞及NK细胞的增殖与作用，具有标本皆治的功效。
实施例8
本实施例同实施例7，不同之处在于：本实施例是对Ana-1巨噬细胞免疫功能进行的细胞实验，能同时评价药物的抗炎作用，了解本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方对小鼠Ana-1巨噬细胞产生PGE2及增殖的影响。
1、受试药物：同实施例7。
2、受试细胞：同实施例7。
3、实验方法：
(1)将Ana-1小鼠巨噬细胞在37℃、5％CO2条件下，用含10％小牛血清、青霉素(1×105u·L-1)及链霉素(100mg·L-1)的DMEM培养液进行传代培养。实验用细胞均处于对数生长期。
(2)取需要的细胞量，加入需要体积的新鲜完全培养基重悬细胞，接种96孔板中，设溶剂DMSO对照组、LPS处理组、阳性药物(环氧酶抑制剂NS-398)对照组及受试药物处理组(3.125；6.25；12.5；25；50；100；200；400μg·mL-1)于37℃、5％CO2培养。
(3)建立模型，加入诱导剂LPS(终质量浓度为1mg·L-1)进行培养(溶剂DMSO对照组不加LPS)。
(4)药物处理，弃去旧培养液，用新鲜培养液洗涤3次，分别加入新鲜的受试药物孵育30min。
(5)检测，加入底物AA(终浓度为10μmol·L-1)，37℃，温育20min，收集上清液，-20℃保存，用酶联法测定样品PGE2含量,以反映各受试药物对COX-2酶活性的直接抑制作用，每组重复3次。
(6)活力检测，加入CCK8试剂，检测细胞活力状态。
3、实验结果
(1)受试药物干预Ana-1细胞产生PGE2的影响见表5。
表5.受试药物干预Ana-1细胞产生PGE2的半数有效浓度IC50(μg·mL-1)
| 样品号 | 抑制Ana-1细胞PGE2分泌IC50 |
| 组方四 | 32.342±4.808 |
| 组方五 | 39.063±2.682* |
表5中，*与组方四组P＜0.05。
(2)受试药物对Ana-1细胞的增殖影响见表6。
表6.受试药物对Ana-1细胞的增殖影响(OD值/A)
表6中，*与空白组P＜0.05。
表5及表6分别为受试药物干预细胞后对细胞PGE2及细胞增殖的影响。
由表5可知，本发明的用于治疗风湿骨病的中药系列组方均对小鼠巨噬细胞生成PGE2产生了抑制作用，其中组方四的半数抑制浓度较低，表明抑制作用强。为了探究PGE2生成量减少是否与细胞的大量死亡有关，此实验模型还对细胞增殖进行了检测。
表6的结果显示，本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方在浓度范围内细胞增殖趋势与空白组基本一致，并未出现细胞大量死亡的情况，因此，PGE2的检测结果是可信的。由此可知，本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方对风湿骨病具有显著的抗炎疗效。
实施例9
本实施例同实施例8，不同之处在于：本实施例是对本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方用于人脐静脉内皮细胞分泌NO的影响(心血管活性)的细胞实验，以了解其温经通络的功能。
1、受试药物：本发明实施例5所述组方五。
2、受试细胞：人脐静脉内皮细胞。
3、实验方法
培养人脐静脉内皮细胞，用DMEM培养基对受试药物进行溶解和配置，所述人脐静脉内皮细胞经过不同浓度的受试药物的48～72小时处理(采用八个浓度，一个阴性对照药及一个阳性对照药，三复孔)。然后取细胞上清液，用CCK8试剂盒检测细胞的增殖；用NO试剂盒检测NO的释放。
4、实验结果
(1)受试药物对人脐静脉内皮细胞的增殖影响见表7。
表7.受试药物对人脐静脉内皮细胞的增殖影响(O.D.)
| 药物浓度(μg/ml) | Blank-溶剂 | 组方五 |
| 800 | 1.076±0.009 | 0.938±0.046 |
| 400 | 0.835±0.007 | 1.042±0.109* |
| 200 | 0.763±0.069 | 1.156±0.105 |
| 100 | 0.685±0.042 | 1.067±0.009* |
| 50 | 0.696±0.031 | 0.928±0.093 |
| 25 | 0.659±0.026 | 1.005±0.004* |
| 12.5 | 0.705±0.04 | 0.941±0.143 |
| 6.25 | 0.815±0.002 | 1.018±0.057 |
表7中，*与空白组P＜0.05。
由表7可知，受试药物浓度在6.25～400μg·mL-1范围内对人脐静脉内皮细胞皆有显著的增殖作用。该结果说明，在受试药物对人脐静脉内皮细胞的干预下，本发明实施例5所述组方五能有效地促进人脐静脉内皮细胞发生增殖，在活血化瘀、疏通经络方面具有一定的功效。
(2)受试药物干预人脐静脉内皮细胞分泌NO量见表8。
表8.受试药物干预人脐静脉内皮细胞分泌NO量(uM)
| 样品号 | 促进人脉静脉内皮细胞NO分泌EC50 |
| 组方五 | 4.676±0.748 |
表8显示，受试药物可显著促进NO释放，EC50值较小。据文献记载：NO能够抑制血小板聚集与粘附，减少白细胞的聚集，防止血栓的形成；能抑制淋巴细胞增殖，抑制巨噬细胞的氧化产物，抑制肥大细胞的活性；在慢性感染和炎症时，激活巨噬细胞、白细胞产生的NO参与杀灭细菌、病毒、寄生虫、真菌、肿瘤细胞的作用，参与其他一系列的免疫过程。因此，实施例9的实验结果说明，本发明实施例5所述组方五不仅具有活血祛瘀、通经活络的功效，还能提高机体的免疫力，达到标本兼治的效果。
实施例10
一种按治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，基本步骤同实施例1，但是，实施例10与实施例1所不同的是，实施例10的有效部位组分按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方六：
实施例10的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方六(I)：
实施例10的有效部位组分还可按下述有效部位质量份数进行配制，标记为组方六(II)：
实施例10所述组方六的样品配制、定性分析、定量分析、体外细胞药理学实验同实施例3。
本实施例的不同之处在于：将本实施例所述组方六用于治疗佐剂性关节炎大鼠的动物实验，以观察治疗风湿骨病的中药组方对佐剂性关节炎大鼠的原发性病变和继发性足跖肿胀的影响。
1、受试药物：本发明实施例10组方六。
2、受试动物：SD大鼠，SPF级别，6～8周龄，20只雄性。
3、实验方法
(1)造模前，称量每只大鼠的体重，并记录，体重在180～220g之间。
(2)将20只大鼠随机分为5组，分别是正常组(4只)，模型组(4只)，组方组方六组(4只)。用排水法测定正常状态下大鼠右踝关节以下的容积(mL)，然后于每只大鼠左后足跖皮下注射sigma弗氏完全佐剂0.1mL致炎，分别于致炎后3、6、9、24h同法测量致炎足容积，以致炎前后差值作为肿胀度，观察受试药物对AA大鼠急性炎症的影响。分别于致炎后第6、11、13天观察非致炎足容积的变化。致炎前三天开始以灌胃方式给药，受试药物组给予组方药80mg/kg，正常空白组与模型组给予生理盐水10mL/kg，每日一次，连续给药至取材的前一天。
4、实验结果
(1)受试药物对AA大鼠原发性炎症的影响见表9。
表9.受试药物对AA大鼠原发性炎症的影响
| 剂量 | 6h | 9h | 7d | 9d | |
| 正常组 | 0.9％NaCl10mL/kg | 0.24±0.20 | 0.09±0.06 | 0.32±0.13 | 0.39±0.16 |
| 模型组 | 0.9％NaCl10mL/kg | 1.10±0.08# | 1.28±0.02## | 1.4±0.16# | 1.78±0.14# |
| 组方六 | 80mg/kg | 0.8±0.44# | 0.96±0.57##* | 1.24±0.37# | 1.36±0.50# |
表9中，与模型组比较*P＜0.05，与正常组比较#P＜0.05，##P＜0.01。
由表9可知，大鼠致炎后6h，模型组、受试药物组中各给药动物致炎部位的肿胀度均显著高于正常组；致炎后9h，模型组大鼠致炎足相比于正常组显著性肿胀，受试药物组的致炎部位也发生明显肿胀，但是肿胀度显著性低于模型组；因此提示：受试药物对AA大鼠的原发性足爪肿胀有明显的抑制作用。
(2)受试药物对AA大鼠继发性炎症的影响见表10。
表10.受试药物对AA大鼠继发性炎症的影响
| 剂量 | 6d | 11d | 13d | |
| 正常组 | 0.9％NaCl10mL/kg | 0.155±0.07757 | 0.305±0.04491 | 0.36±0.04082 |
| 模型组 | 0.9％NaCl10mL/kg | 0.28±0.10614 | 0.465±0.15922 | 0.57±0.09798 |
| 组方六 | 80mg/kg | 0.235±0.2885 | 0.0975±0.10813* | 0.275±0.43493 |
表10中，*与模型组P＜0.05。
由表10可知，对AA大鼠继发性足肿胀，受试药物组在给药第11天的肿胀度值显著低于模型组，这提示：受试药物能够显著抑制AA大鼠继发性足爪肿胀。因此，实施例10的实验结果说明，本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方在试验所用的剂量水平上能改善大鼠佐剂性关节炎的症状,控制AA大鼠足爪肿胀，降低炎症反应。这同时表明：本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方对大鼠AA原发性病变和继发性病变都有显著的抑制作用，具有防治关节炎、祛风除湿的效果。
实施例11
本实施例同实施例10，不同之处在于：本实施例是采用小鼠扭体反应模型评价药物的镇痛作用。
1、受试药物：本发明实施例10组方六。
2、受试动物：昆明种小鼠，SPF级别，50只，雌雄各半，体重18-22g。
3、实验方法
(1)小鼠50只，随机分为5组，10只/组。5组分别为空白组，阳性对照组(阿司匹林)，组方组方六组。
(2)末次给药后30min，各小鼠腹腔注射0.7％的醋酸0.1ml/10g，观察记录15min内每只小鼠出现扭体反应(腹部收缩内凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕行)的次数，计算镇痛百分率。
4、实验结果
受试药物对醋酸致小鼠扭体反应的影响见表11。
表11.受试药物对醋酸致小鼠扭体反应的影响
| 组别 | 动物数 | 扭体反应数 | 抑制率(％) |
| 空白组 | 10 | 15.8±1.2 | 0 |
| 阳性对照组 | 10 | 8.7±2.9 | 44.94 |
| 组方六 | 10 | 4±0.9 | 74.68** |
表11中，**与阳性对照组P＜0.01。
由表11可知，受试药物能够显著减少醋酸致小鼠的扭体反应次数，扭体反应抑制率均显著高于阳性对照组，显示该组方有显著的镇痛效果。
本发明的用于治疗风湿骨病的中药组方，按“标本兼治”的原则，采用补肾壮骨、散寒止痛、祛风除湿、活血化瘀、温经通络的治疗方案，将麻黄生物碱、马钱子生物碱、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草黄酮、甘草皂苷、三七皂苷、川牛膝皂苷进行设计组合成六个组方。经体外细胞实验结果证实：受试组方均对小鼠巨噬细胞生成PGE2有明显的抑制作用，对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2水平具有明显的促进作用；对小鼠巨噬细胞产生IL-6和TNF-α亦有促进作用；对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞、滑膜细胞有显著的增殖作用，对此两类细胞的损伤有明显的修复作用。此外，所述中成药具有显著的活血祛瘀作用，能有效的增强人脐静脉内皮细胞释放NO的能力。经体外动物实验结果证实：受试组方可显著抑制佐剂性关节炎大鼠的急性足爪肿胀和继发性足肿胀，提示该中药有效部位具有防治佐剂性关节炎及祛风除湿的作用；可显著减少醋酸致小鼠的扭体反应次数，提示所述组方具有散寒止痛的作用。根据本发明的中药组方制备的用于治疗风湿骨病的中成药在补肾壮骨、散寒止痛、祛风除湿、活血化瘀、温经通络和补中益气增强免疫力等方面均有明显作用，对风湿骨病有良好疗效。
Claims (11)
1.一种治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，含有生物碱、黄酮、皂苷三类有效部位，所述生物碱包括麻黄生物碱、马钱子生物碱，所述黄酮包括甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮，所述皂苷包括甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷，由所述麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷及三七皂苷中至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成。
2.根据权利要求1所述的治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，所述有效部位在中药组方中的质量份数配比如下：
生物碱 0.001～2份；
黄酮 0.01～12份；
皂苷 0.01～8份。
3.根据权利要求2所述的治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，所述有效部位组分的质量份数配制为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
甘草黄酮 0.01～2；
红花黄酮 0.01～2；
骨碎补黄酮 0.01～2；
甘草皂苷或三七皂苷 0.01～5。
4.根据权利要求2所述的治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，所述有效部位组分的质量份数配制为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
甘草黄酮 0.01～2；
甘草皂苷 0.01～5；
川牛膝皂苷 0.01～2。
5.根据权利要求2所述的治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，所述有效部位组分的质量份数配制为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
马钱子生物碱 0.001～0.02688；
甘草黄酮 0.01～2；
红花黄酮 0.01～5；
骨碎补黄酮 0.01～5；
甘草皂苷或三七皂苷 0.01～5。
6.根据权利要求2所述的治疗风湿骨病的中药组方，其特征在于，所述有效部位组分的质量份数配制为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
马钱子生物碱0.001～0.02688；
甘草黄酮 0.01～2；
甘草皂苷 0.01～5；
川牛膝皂苷 0.01～2。
7.根据权利要求1所述的治疗风湿骨病的中药组方制备中成药的方法，其特征在于，包含以下步骤：
（1）制备生物碱
所述生物碱包括麻黄生物碱和马钱子生物碱；
称取麻黄药材或者马钱子药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤，离心，减压浓缩；旋蒸至干，称重，制得麻黄提取物或马钱子提取物；
（2）制备黄酮
所述黄酮包括甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮；
① 制备甘草黄酮
称取甘草药材进行粉碎，用乙醇回流提取；离心、浓缩并脱色；先过D101大孔树脂柱，浓缩后过HZ915 聚酰胺树脂柱；醇液减压浓缩干燥，称重，制得甘草提取物；
② 制备红花黄酮
称取红花药材，超声水提，过滤，离心，减压浓缩，过HZ818大孔非极性树脂柱，用水、乙醇洗脱，TLC跟踪检测分段收集洗脱液，减压浓缩成干膏，真空干燥，称重，制得红花提取物；
③ 制备骨碎补黄酮
称取骨碎补药材进行粉碎，用乙醇溶液回流提取，过滤离心，减压浓缩，离心，过D101大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，浓缩液过HZ915聚酰胺树脂柱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩成干膏，真空干燥，称重，制得骨碎补提取物；
（3）制备皂苷
所述皂苷包括甘草皂苷、川牛膝皂苷以及三七皂苷；
① 制备甘草皂苷
取甘草粉以氨性乙醇超声提取两次；过滤，旋蒸，离心；过HZ-816大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液；旋蒸至干，干燥，称重，制得甘草提取物；
② 制备川牛膝皂苷
取川牛膝药材进行粉碎，用乙醇回流提取两次；过滤离心提取，旋蒸至浸膏；用去离子水溶解，过 HZ-816大孔树脂柱，重复上样一次，收集乙醇的洗脱液；醇液旋蒸，干燥，称重，制得川牛膝提取物；
③ 制备三七皂苷
称取三七药材进行粉碎，用乙醇回流提取；过滤，离心，减压浓缩，旋蒸至浸膏；用去离子水溶解，过 HZ-816大孔树脂柱，重复上样一次，收集乙醇的洗脱液；乙醇洗脱液旋蒸，干燥，称重，制得三七提取物；
（4）配制有效部位组分
将步骤（1）～（3）制备的麻黄生物碱、马钱子生物碱、甘草黄酮、红花黄酮、骨碎补黄酮、甘草皂苷、川牛膝皂苷、三七皂苷中的至少一种生物碱、一种黄酮和一种皂苷按比例混合制成组方，所述有效部位组分的质量份数配比为：
生物碱 0.001～2份，
黄酮 0.01～12份，
皂苷 0.01～8份；
（5）制备治疗风湿骨病的中成药
① 将步骤（4）的有效部位组分混合均匀，然后进行喷雾干燥，干燥后有效部位组分的含水率为3～5%；干燥后加入适量乳糖、糖粉、甘露醇和糊精，粉碎过筛，以90%乙醇为粘合剂制成软材，20目筛制粒，在40～60℃下烘箱干燥至含水2%～4%，然后用10目筛整粒并加入1%的硬脂酸镁混合，压制成片剂；
② 将步骤（4）的有效部位组分混合均匀，然后进行喷雾干燥，干燥后有效部位组分含水率为3～5%；加入适量二氧化硅混合，填充制成胶囊。
8.根据权利要求7所述的制备中成药的方法，其特征在于，步骤（4）所述的有效部位组分的质量份数配比为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
甘草黄酮 0.01～2；
红花黄酮 0.01～2；
骨碎补黄酮 0.01～2；
甘草皂苷或三七皂苷 0.01～5。
9.根据权利要求7所述的制备中成药的方法，其特征在于，步骤（4）所述的有效部位组分的质量份数配比为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
甘草黄酮 0.01～2；
甘草皂苷 0.01～5；
川牛膝皂苷 0.01～2。
10.根据权利要求7所述的制备中成药的方法，其特征在于，步骤（4）所述的有效部位组分的质量份数配比为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
马钱子生物碱 0.001～0.02688；
甘草黄酮 0.01～2；
红花黄酮 0.01～5；
骨碎补黄酮 0.01～5；
甘草皂苷或三七皂苷 0.01～5。
11.根据权利要求7所述的制备中成药的方法，其特征在于，步骤（4）所述的有效部位组分的质量份数配比为：
麻黄生物碱 0.001～1.4406；
马钱子生物碱0.001～0.02688；
甘草黄酮 0.01～2；
甘草皂苷 0.01～5；
川牛膝皂苷 0.01～2。
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