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CN104017783A - 一种农作物提取过氧化氢酶的方法 - Google Patents

一种农作物提取过氧化氢酶的方法 Download PDF

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CN104017783A
CN104017783A CN201410199978.5A CN201410199978A CN104017783A CN 104017783 A CN104017783 A CN 104017783A CN 201410199978 A CN201410199978 A CN 201410199978A CN 104017783 A CN104017783 A CN 104017783A
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CN
China
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supernatant liquor
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whizzer
soybean
ammonium sulfate
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CN201410199978.5A
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Inventor
范亚东
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Anhui Wei Xian Food Co Ltd
Original Assignee
Anhui Wei Xian Food Co Ltd
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Application filed by Anhui Wei Xian Food Co Ltd filed Critical Anhui Wei Xian Food Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
    • C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
    • C12Y111/01006—Catalase (1.11.1.6)

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Abstract

本发明涉及一种生物酶的提取，具体涉及一种农作物提取过氧化氢酶的方法，所有材料取自于天然废弃农作物，由于这些农作物中含有大量的过氧化氢，所以成本较为低廉，具有经济适用性，本发明提取过程方便，提取出的过氧化氢酶干制品可用在食品工业中除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。也可被用于食品包装，防止食物被氧化。

Description

一种农作物提取过氧化氢酶的方法
技术领域
本发明涉及一种生物酶的提取，具体涉及一种农作物提取过氧化氢酶的方法。
背景技术
过氧化酶是一种类似血红素为辅基的酶，其由微生物或植物所产生，在生物中广泛存在，具有多种不同的生物功能，主要催化H2O2和有机过氧化物对多种有机物和无机物的氧化作用。它在蛋白质、多肽、激素、病毒、寄生虫、 生物降解及神经系统等方面都有应用，具有特异性强，灵敏度高等优点。
过氧化氢酶能催化很多反应，过氧化氢酶是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化氢酶体中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类。胺类毒性的双重作用，大豆和小麦属于双子叶和单子叶植物，植物体中含有大量的过氧化氢酶，因为它跟植物的呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等等许多新陈代谢反应有关，因而大豆和小麦的叶片含有大量的过氧化氢酶，
现在，科学家已然对大豆皮过氧化氢酶 ，也做过相应的性质研究，大豆皮是大豆制油工艺的副产品，占整个大豆体积的10%，占整个大豆重量的8%，大豆皮主要是大豆外层包被植物，颜色为米黄色或浅黄色，由油脂加热脱皮法或压碎筛选两种方法所得，主要成分是细胞壁和植物纤维，粗纤维含量38%，粗蛋白12.2%，氧化钙0.53%，磷0.18%，木质素含量低于2%。从大豆皮组成可知，大豆皮富含纤维素等非沉淀多糖，是一种天然膳食纤维源，作为膳食纤维源的大豆皮具有独特的生理活性，且其中所含的铁不但含量高，也不易被氧化，基于此，国外对大豆皮开发重点也在于饲料和膳食纤维的加工利用上，我国是大豆生产国，随着我国大豆榨油工业发展和对豆粕需要量的增加，我国每年要进口大量的大豆，随着全国大豆产量和加工能力的不断提高，作为副产品的大豆皮产量是非常可观的。
发明内容
    本发明公开了一种农作物提取过氧化氢酶的方法。
    其采用的技术方案如下：
本发明以大豆皮、大豆荚、大豆秸秆、小麦叶、小麦秸秆为原料，提供一种从大豆皮、大豆秸秆、小麦叶、小麦秸秆中提取过氧化物酶的工艺。
过氧化氢酶的提取工艺：
1、取100g大豆皮、100g大豆荚、100g大豆秸秆、100g小麦叶、100g小麦秸秆粉碎后放入研钵中，研碎成匀浆，过60目筛体后，用高速离心机（离心速率为4000r/min）离心15min，取上清液a。
2、不断搅拌上清液a，同时向每升上清液中慢慢加入260g硫酸铵粉末（饱和度为0.4），搅拌2小时后，置于0℃下放置12小时，得上清液b，将上清液b用虹吸管移出，下层浑浊液用离心速率为3000r/min的离心机离心15min，弃沉淀合，将上清液a和上清液b合并得上清液c，向上清液c中按每升上清液添加256g硫酸铵粉末（饱和度为0.8）边添加边搅拌，搅拌1小时，当硫酸铵全部溶解后置于0℃—4℃下放置12小时后用虹吸管吸出上清液d，浑浊部分用转速为4000r/min的离心机离心20min，保留沉淀物a，将沉淀物a悬浮于150ml蒸馏水中（至沉淀物a全部溶解为止）的混合液，将混合液放置于透析袋内，在0℃—4℃下透析48h，得到沉淀物b，将沉淀物b在转速为4000r/min的离心机内离心15min，得上清液e。将上清液e冰浴，加入-15℃的丙酮，放入离心机内离心后，收集沉淀物d并溶于少量蒸馏水中，将丙酮透析出后稀释沉淀物d，向每毫升沉淀物d中滴加1mol的硫酸锌溶液，离心后得上清液f,将上清液f透析除盐后，用微孔滤膜（孔径0.22um）过滤，经过真空冷冻干燥后得到过氧化酶干制品，置于干燥器低温保存。
本发明的优点在于：本发明取材方便，所有材料取自于天然废弃农作物，成本低廉，具有经济适用性，本发明提取过程方便，提取出的过氧化氢酶干制品可用在食品工业中除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢、也可被用于食品包装，防止食物被氧化、在纺织工业中，过氧化氢酶用于除去纺织物上的过氧化氢，保证成品不含氧化物。
具体实施方式
本发明以大豆皮、大豆荚、大豆秸秆、小麦叶、小麦秸秆为原料，提供一种从农作物中提取过氧化物酶的工艺。
过氧化氢酶的提取工艺：
1、取100g大豆皮、100g大豆荚、100g大豆秸秆、100g小麦叶、100g小麦秸秆粉碎后放入研钵中，研碎成匀浆，过60目筛体后，用高速离心机（离心速率为4000r/min）离心15min，取上清液a。
2、不断搅拌上清液a，同时向每升上清液中慢慢加入260g硫酸铵粉末（饱和度为0.4），搅拌2小时后，置于0℃下放置12小时，得上清液b，将上清液b用虹吸管移出，下层浑浊液用离心速率为3000r/min的离心机离心15min，弃沉淀合，将上清液a和上清液b合并得上清液c，向上清液c中按每升上清液添加256g硫酸铵粉末（饱和度为0.8）边添加边搅拌，搅拌1小时，当硫酸铵全部溶解后置于0℃—4℃下放置12小时后用虹吸管吸出上清液，浑浊部分用转速为4000r/min的离心机离心20min，保留沉淀物a，将沉淀物a悬浮于150ml蒸馏水中（至沉淀物a全部溶解为止）的混合液，将混合液放置于透析袋内，在0℃—4℃下透析48h，得到沉淀物b，将沉淀物b在转速为4000r/min的离心机内离心15min，得上清液d。将上清液d冰浴，加入-15℃的丙酮，放入离心机内离心后，收集沉淀物c并溶于少量蒸馏水中，将丙酮透析出后稀释沉淀物c，向每毫升沉淀物c中滴加1mol的硫酸锌溶液，离心后得上清液e,将上清液e透析除盐后，用微孔滤膜（孔径0.22um）过滤，经过真空冷冻干燥后得到过氧化酶干制品，置于干燥器低温保存。

Claims (1)

1.一种农作物提取过氧化氢酶的方法，其特征在于：其包括以下工艺步骤：
（1）、取100g大豆皮、100g大豆荚、100g大豆秸秆、100g小麦叶、100g小麦秸秆粉碎后放入研钵中，研碎成匀浆，过60目筛体后，用离心速率为4000r/min的离心机离心15min，取上清液a；
（2）、不断搅拌上清液a，按每升上清液a添加260g饱和度为0.4的硫酸铵粉末的比例，向上清液a中添加硫酸铵粉末，待搅拌2小时后，置于0℃下放置12小时，得上清液b；
（3）、将上清液b用虹吸管移出，下层浑浊液用离心速率为3000r/min的离心机离心15min，弃除沉淀物；
（4）、将上清液a和上清液b合并得上清液c，按每升上清液c添加256g饱和度为0.8的硫酸铵粉末的比例，向上清液c中添加硫酸铵粉末，搅拌1小时，当硫酸铵粉末完全溶解后置于0℃—4℃下放置12小时，用虹吸管吸出上清液d，浑浊部分用转速为4000r/min的离心机离心20min，得到沉淀物a，保留沉淀物a；
（5）、将沉淀物a悬浮于150ml蒸馏水中至沉淀物a全部溶解为止，得混合液，将混合液放置于透析袋内，在0℃—4℃下透析48h，得到沉淀物b；
（6）、将沉淀物b在转速为4000r/min的离心机内离心15min，得上清液e；
（7）、将上清液e冰浴，加入-15℃的丙酮，放入离心机内离心后，得到沉淀物c，收集沉淀物c并将其溶于少量蒸馏水中透析出丙酮后稀释沉淀物d，向每毫升沉淀物d中滴加1mol的硫酸锌溶液，离心后得上清液f，将上清液f透析除盐后，用孔径为0.22um微孔滤膜过滤，经过真空冷冻干燥后得到过氧化酶干制品。
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