CN104004060B

CN104004060B - Cyclin D蛋白抑制剂多肽及其应用

Info

Publication number: CN104004060B
Application number: CN201410281927.7A
Authority: CN
Inventors: 高军; 李剑波
Original assignee: Chongqing Medical University
Current assignee: Chongqing Medical University
Priority date: 2014-06-23
Filing date: 2014-06-23
Publication date: 2016-04-13
Anticipated expiration: 2034-06-23
Also published as: CN104004060A

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制Cyclin？D蛋白表达，治疗套细胞淋巴瘤的多肽。其序列为QAQQNMDPKAAEEEEEE是全新的序列，该多肽可体外抑制套细胞淋巴瘤细胞Mino细胞增殖，治疗套细胞淋巴瘤；在体荷瘤模型实验中，抑制Cyclin？D蛋白表达，增加了小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

Description

Cyclin D蛋白抑制剂多肽及其应用

技术领域

本发明涉及CyclinD蛋白抑制剂多肽2及其应用，具体涉及具有抑制CyclinD蛋白表达，治疗套细胞淋巴瘤的多肽。

背景技术

套细胞淋巴瘤（MCL）是一种以t（11；14）（q13；q32）和cyclinD1过度表达为特征的B细胞性非霍奇金淋巴瘤，属于中度恶性的淋巴瘤，长期生存率很低。常见于老年人，以男性居多，中位年龄60岁。MCL容易复发，是远期生存率最低的淋巴瘤亚型，中位生存期为3～5年。临床表现为侵袭性，病情进展较快，多有广泛淋巴结累及，结外病变常见，肝、脾、外周血及骨髓多有浸润，常伴多发性胃肠道累及和神经系统浸润，80%～90%的患者确诊时为AnnArborⅢ～Ⅳ期。目前治疗以化疗或合并干细胞移植为主，虽然不同程度地提高了MCL患者的CR率，但仍然不能提高患者的长期生存率。目前生物靶向治疗肿瘤是非常有前景的，靶向治疗是针对肿瘤发生过程中阻断某个或多个信号通路，达到治疗肿瘤的目的。

Cyclin蛋白作为“检查点”守卫者控制着细胞的休息、生长和分裂的周期。其中，CyclinD是控制着细胞的生长周期重要靶点。CyclinD决定了细胞何时开始生成DNA，为分裂形成新细胞做准备。在许多类型的癌症中CyclinD异常高表达，刺激细胞过快生长形成肿瘤。研究发现，阻断cyclinD1蛋白可驱使乳腺癌细胞进入衰老状态，不可逆地终止它们的生长周期。在T-ALL白血病小鼠中抑制CyclinD可引起癌细胞自毁（一个称作凋亡的程序性死亡过程）。因此，抑制CyclinD蛋白表达，抑制套细胞淋巴瘤发展，是治疗套细胞淋巴瘤的新靶点。但是，尚未有开发成熟的CyclinD蛋白抑制剂多肽的治疗套细胞淋巴瘤的药物

本专利中的CyclinD蛋白抑制剂多肽2已证明在套细胞淋巴瘤中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。

发明内容

发明目的

本发明提供全新的序列，该序列抑制CyclinD蛋白表达，对治疗套细胞淋巴瘤具有很好的疗效。

技术方案

CyclinD蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为QAQQNMDPKAAEEEEEE。

包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

所述组合物为注射剂。

所述的CyclinD蛋白抑制剂多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。

CyclinD蛋白抑制剂多肽在治疗套细胞淋巴瘤药物中的应用。

有益效果

CyclinD蛋白抑制剂多肽2，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外抑制套细胞淋巴瘤细胞Mino细胞增殖，治疗套细胞淋巴瘤；在体荷瘤模型实验中，抑制CyclinD蛋白表达，增加了小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

具体实施方式

本发明涉及多肽由吉尔生化（上海）合成。

实施例1

CyclinD蛋白抑制剂多肽2人套细胞淋巴瘤细胞Mino增殖的作用。

采用MTT比色法。将对数生长的Mino细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物CyclinD蛋白抑制剂多肽2和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。对Mino的最大增殖抑制率为70.29%。

表1整合素阻断剂多肽对Mino细胞增殖抑制作用

实施例2

CyclinD蛋白抑制剂多肽对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

取对数生长期的人套细胞淋巴瘤细胞Mino细胞株，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。试验结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。

表1多肽对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表1，紫杉醇10mg/kg组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤的抑瘤率为72.12%；恩度2.5mg/kg组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤的抑瘤率为34.45%；多肽高、中、低剂量组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达76.16%，74.26%，68.72%。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而多肽对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，多肽对人套细胞淋巴瘤细胞Mino裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人套细胞淋巴瘤细胞Mino移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应，存活率提高。

实施例3

用肿瘤模型检测CyclinD蛋白抑制剂多肽2对肿瘤中CyclinD蛋白表达的影响。

取实施例2的肿瘤组织进行CyclinD蛋白免疫结果实验，采用MoticImagesAdvanced3.2图像分析仪，在200倍镜下连续观察5个视野检测，测量灰度值，以灰度值表示CyclinD蛋白阳性表达的高低，灰度值越小，说明CyclinD蛋白阳性表达越低；灰度值越大，说明CyclinD蛋白阳性表达越高。结果，CyclinD蛋白抑制剂多肽具有抑制肿瘤CyclinD蛋白表达的作用。

SEQUENCELISTING

<110>苏州普罗达生物科技有限公司

<120>CyclinD蛋白抑制剂多肽及其应用

<130>

<160>1

<170>PatentInversion3.3

<210>1

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<400>1

GlnAlaGlnGlnAsnMetAspProLysAlaAlaGluGluGluGluGlu

151015

Glu

Claims

1.CyclinD蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为QAQQNMDPKAAEEEEEE。

2.一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。

4.如权利要求1所述的CyclinD蛋白抑制剂多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。

5.如权利要求1所述的CyclinD蛋白抑制剂多肽在制备治疗套细胞淋巴瘤药物中的应用。