CN103977042A

CN103977042A - 冷冻技术在树舌干燥中的应用

Info

Publication number: CN103977042A
Application number: CN201410204826.XA
Authority: CN
Inventors: 刘圣梅; 马玉奎; 郭庆华; 冯立娟; 丁桂丽
Original assignee: Jinan Kangzhong Pharmaceutical Research and Development Co Ltd
Current assignee: Jinan Kangzhong Pharmaceutical Research and Development Co Ltd
Priority date: 2014-05-15
Filing date: 2014-05-15
Publication date: 2014-08-13

Abstract

本发明涉及冷冻技术在树舌干燥中的应用，取新采收的树舌，冷冻，堆置2-5天，干燥，制备的树舌，主要有效成分多糖含量高，抗癌活性强。

Description

冷冻技术在树舌干燥中的应用

发明领域

本发明涉及药品制法，特别涉及冷冻技术在树舌干燥中的应用，属医药技术领域。

背景技术

树舌(Ganodermaapplanatum(Pers.)Pat.)为担子菌多孔菌纲目树舌科树舌属真菌。其别名为赤色老母菌、扁树舌、扁木树舌、扁菌、扁芝、平盖树舌、白斑腐菌及皂角菌,民间俗称为“老牛肝”。树舌性平,气微,味微苦,具清热、解毒、止痛、抗癌之功效。

现有技术的采收与加工方法为，全年采收，阴干或在40～50℃烘干。

发明内容

本发明的目的是提供一种树舌干燥的新方法，该方法干燥的树舌，主要有效成分多糖含量高，抗癌活性强。

本发明是这样实现的：

冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：取新采收的树舌，冷冻，在阴湿处堆置2-5天，干燥。

本发明的冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：冷冻是冷冻至冻结。

本发明的冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：冷冻是冷冻至-5℃以下冻结。

本发明的冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：干燥是堆置后晒干或烘干或晾干。

本发明的冷冻至零下某℃，是在该零下某℃冷冻至冻结。

至此完成了本发明，按本发明的干燥方法制备的树舌，主要有效成分多糖含量高，抗癌活性强。

下面通过试验例进一步说明本发明的有益之处，试验例旨在进一步说明本发明的有益之处，而非对本发明的限制。

将同一批新采收的树舌，去除杂质，按以下方法进行加工。

1）晾干：阴凉通风处，摊开晾干；

2）晒干：晒干；

3）烘干：50℃以下烘干；

4）冷冻堆置烘干:冷冻至-5℃至冻结，在阴湿处堆置3天，50℃以下烘干。

一、不同方法干燥的树舌多糖含量比较

对照品溶液的制备：取葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

标准曲线的制备：分别精密量取对照品溶液0.2ml、0.4m1、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放人冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照《中国药典》紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备：取各样品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀.精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

测定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。

按干燥品计算，含树舌多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，结果见表1。

表1 不同方法干燥树舌多糖含量（%）

干燥方法	晾干	晒干	烘干	冷冻堆置烘干
					含量（%）	4.26	4.25	4.25	6.73

由表1看出，树舌“冷冻堆置后干燥”，多糖含量明显高于“晾干”、“晒干”和“烘干”。

二、不同方法干燥的树舌抗人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562试验。

1、制备树舌提取物分别取不同方法干燥的树舌粉碎，各加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为1.10（60℃）时，加入乙醇使含醇量达到75％，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎，得不同方法干燥的树舌提取物。

2、肿瘤细胞株　人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562，用RPMI-1649培养液, 37℃,5%CO2，相对湿度100%培养，贴壁细胞0.25%胰蛋白酶消化传代。

3、方法 MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞，用新鲜的RPMI-1640培养液配制成细胞悬液，悬浮细胞1×105个/ml贴壁细胞0.8×105个/ml。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中；贴壁细胞先接种于96孔培养板中，每孔90μl24h后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100μl且每组设3个平行孔，共设4组:受试药组T(培养液+细胞悬液+不同浓度受试药)、阴性对照组N(培养液+细胞悬液)、药物颜色对照组TC(培养液+不同浓度受试药)、空白对照组B(培养液+生理盐水)。受试药浓度依次为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml。置37℃,5%CO2培养箱中培养72h后，向每孔加入MTT溶液10μl震荡混匀后，继续培养4h，加入SDS90μl终止培养,37℃过夜，然后室温下在微量振荡器上震荡10min，酶标仪测定570nm波长处的吸光度(OD值),实验重复3次。

按以下公式计算生长抑制率：

生长抑制率(%)=(N组OD均值-B组OD均值)—(T组OD均值-TC组OD均值)/N组OD均值-B组OD均值×100%。

4、不同提取物对人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562的抑制率结果见表2、表3、表4。

表2 对SPCA-1的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	47.43	58.36	67.11
晒干	47.42	58.37	67.12
				烘干	47.42	58.35	67.12
冷冻堆置烘干	53.27	73.42	81.44

表3 对HepG2的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	46.72	56.54	65.57
晒干	46.41	56.51	65.58
				烘干	46.34	56.53	65.54
冷冻堆置烘干	57.61	73.37	86.18

表4 对K562的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	53.28	66.51	71.62
晒干	53.27	66.52	71.60
				烘干	53.26	66.50	71.56
冷冻堆置烘干	61.73	74.35	80.47

结果表明，不同方法干燥的树舌对SPCA-1、HepG2、K562细胞的增殖均有抑制作用，其中，冷冻堆置烘干疗效最好。

具体实施方式

实施例1

取新采收的树舌，置冻干机内，冷冻至-5℃至冻结，阴湿处堆置2天，晾干。

实施例2

取新采收的树舌，置冻干机内，冷冻至-10℃，在阴湿处堆置3天，晒干。

实施例3

取新采收的树舌，置冻干机内，冷冻至-20℃，在阴凉处堆置4天，烘干。

实施例4

取新采收的树舌，置冻干机内，冷冻至-32℃至冻结，在室外堆置3天，烘干。

实施例6

取新采收的树舌，置冻干机内，冷冻至-15℃，在室内堆置5天，晒干。

Claims

1. 冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：取新采收的树舌，冷冻，堆置2-5天，干燥。

2.根据权利要求1的冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：冷冻是冷冻至冻结。

3.根据权利要求1的冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：冷冻是冷冻至-5℃以下冻结。

4.根据权利要求1的冷冻技术在树舌干燥中的应用，其特征在于：干燥是堆置后晒干或烘干或晾干。