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CN103757091B - 心源性猝死快速基因检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

心源性猝死快速基因检测试剂盒及检测方法 Download PDF

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CN103757091B CN201310419777.7A CN201310419777A CN103757091B CN 103757091 B CN103757091 B CN 103757091B CN 201310419777 A CN201310419777 A CN 201310419777A CN 103757091 B CN103757091 B CN 103757091B
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Guangzhou Research Institute Of Physical Culture
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Abstract

本发明公开了一种心源性猝死快速基因检测试剂盒，包括检测KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B基因所对应的7个SNP多态性检测。本发明还公开一种心源性猝死快速基因检测方法。本发明的有益效果如下：通过半巢式AS‑PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测，根据DNA电泳条带进行基因分型，筛选出具有潜在心源性猝死风险的个体，从而达到预防心源性猝死的目的；此方法操作简便，检测时间短、成本低，灵敏度高，特异性强，具有良好的社会效益，应用前景广阔。

Description

心源性猝死快速基因检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及生物基因检测技术领域，具体为一种心源性猝死快速基因检测试剂盒及检测方法。
背景技术
在心源性猝死(sudden cardiac death，SCD)是指由于心脏发生心电紊乱或心力衰竭使心脏失去了有效的收缩而发生的猝死。近年来，SCD案例频发，并且其数量呈逐年上升的态势。目前，临床上对SCD的常规检测手段主要是对家族史、个人史进行筛查，同时进行体格及心电图检查，若有阳性结果，则进一步查超声心动图、运动负荷试验和24小时动态心电图等。但这些检测手段针对性不强，检出率低，具有较大的局限性。
国内外对心源性猝死的研究表明，死者在基因组水平存在某些基因突变的现象，大多表现为SNP或碱基缺失多态性。SCD 具有起病急、进展快、病死率高等特点，因此，通过早期基因筛查、风险评估来规避SCD的发生就显得尤为重要。
目前，心源性猝死与基因多态性关联性研究成果使SCD基因筛查成为可能。研究表明，KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B，7基因个与心源性猝死显著相关。7个基因中，KCNE1、KCNH2、KCNJ11属于钾离子通道相关基因，SCN5A属于钠离子通道相关基因，CACNA1C、CACNB2B属于钙离子通道相关基因。这些离子通道在心肌动作电位不同时期起重要作用， 其基因突变通常会影响离子通道的结构和功能。NUP155是一个编码核孔复合物组分的基因，其主要功能是控制遗传物质mRNA由细胞核到细胞质的转运，是一处于比较上游的位置调控基因，能够对其他很多基因和蛋白质的表达进行调控，从而造成了房颤发生，通常威胁到青壮年人群的健康。NUP155基因的一些细微改变，也有可能增加常见的散发性房颤发生的危险性。
中国汉族心源性猝死人群中，广泛存在KCNE1、KCNH2、KCNJ11单核苷酸多态性改变，从而导致室性心动过速的猝死，因此，钾离子通道相关基因导致的猝死属于高危基因突变型。临床研究结果显示，钠离子通道相关基因SCN5A突变导致的猝死，在心源性猝死人群中占1-5‰；钙离子通道相关基因CACNA1C、CACNB2B突变导致的心源性猝死则占0.1-0.3‰，属于低度危险突变型；编码核孔复合物组分的基因NUP155基因是中国汉族人群中发现的与心源性猝死显著相关的特有基因，因此筛查其突变对于中国人群心源性猝死具有特殊的意义。
发明内容
本发明的目的是以上述现有技术为基础，提供一种操作简易、检测成本低，对心源性猝死能起到预防作用的心源性猝死快速基因检测试剂盒。
本发明另一目的是提供一种心源性猝死快速基因检测方法。
为了实现本发明目的，本发明采取的技术方案是：心源性猝死快速基因检测试剂盒，最少包括检测KCNE1、KCNH2、KCNJ11基因多态位点的引物混合物。
其中，检测KCNE1基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO. 1 ：5’- GTGCCTGGGAAGTTTGAGC-3’（序列1）；
SEQ NO.2 ：5’- GCAGGTCCCCCCGCAGAA-3’（序列2）；
SEQ NO.3 ：5’- GCAGGTCCCCCCGCAGAG-3’（序列3）；
SEQ NO.4 ：5’- CCGTTCTTTCCCAGTCTCAT-3’ （序列4）；
且摩尔数比为SEQ NO.1：SEQ NO.2/ SEQ NO.3: SEQ NO.4 = 1：1：1；在检测时，浓度为10uM的上述引物（SEQ NO. 1，SEQ NO.2，SEQ NO.3和SEQ NO.4）的用量为0.3ul-0.7ul。
检测KCNH2基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.5：5’- GCCGTGCTGTTCTTGCTC-3’（序列5）；
SEQ NO.6 ：5’- AGGACAAGTATGTGACGGCTC-3’ （序列6）；
SEQ NO.7 ：5’- AGGACAAGTATGTGACGGCTT-3’ （序列7）；
SEQ NO.8：5’- GATTGGGGATCTGGTGGAA-3’（序列8）。
且摩尔数比为SEQ NO.5：SEQ NO.6/ SEQ NO.7: SEQ NO.8 = 1：1：1，在检测时，浓度为10uM的上述引物引物（SEQ NO. 5，SEQ NO.6，SEQ NO.7和SEQ NO.8）的用量为0.3ul-0.7ul；
检测KCNJ11基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.9：5’- CTCATCGTGCAGAACATCGTG-3’ （序列9）；
SEQ NO.10 ：5’- CGCAAGAGCATGATCATCCA-3’ （序列10）；
SEQ NO.11 ：5’- CGCAAGAGCATGATCATCCG-3’ （序列11）；
SEQ NO.12 ：5’- TGGCCGGGCTACATACCA-3’序列12）；
且摩尔数比为SEQ NO.9：SEQ NO.10/ SEQ NO.11: SEQ NO.12 = 1：1：1；在检测时，浓度为10uM的上述引物引物（SEQ NO. 91，SEQ NO.10，SEQ NO.11和SEQ NO.12）的用量为0.3ul-0.7ul；
还包括检测SCN5A基因多态位点的引物混合物，其中，检测SCN5A基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.13 ：5’- ACAGTGATGCTGGCTGGAAG-3’（序列13）；
SEQ NO.14 ：5’- GAAGTACTTCTTCTCCCCGTC-3’（序列14）；
SEQ NO.15：5’- GAAGTACTTCTTCTCCCCGTT-3’（序列15）；
SEQ NO.16：5’- ATGTTGATGAGGCTTATCTGGTT-3’ （序列16）；
且摩尔数比为SEQ NO.13：SEQ NO.14/ SEQ NO.15: SEQ NO.16 = 0.2-0.5：1：1；在检测时，浓度为10uM的上述SEQ NO.13引物的用量为0.1ul-0.3ul, 浓度为10uM的上述SEQ NO.14，SEQ NO.15和SEQ NO.16引物用量为0.3ul-0.7ul。
且还包括检测CACNA1C、CACNB2B 基因多态位点的引物混合物，其中，检测CACNA1C基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.17：5’- GCCTGCAATAGCTTGAAATAAGG-3’（序列17）；
SEQ NO.18：5’- GGTGGGGATGTGCTCAGGTA-3’（序列18）；
SEQ NO.19 ：5’- GTGGGGATGTGCTCAGGTG-3’（序列19）；
SEQ NO.20：5’- AGAAGGGAAAGAAGGGAATGAG-3’（序列20）；
且摩尔数比为SEQ NO.17：SEQ NO.18/ SEQ NO.19: SEQ NO.20 =1：0.8-1.2：1；在检测时，浓度为10uM的上述引物（SEQ NO. 17，SEQ NO.18，SEQ NO.19和SEQ NO.20）的用量为0.3ul-0.7ul；
检测CACNB2B基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.21：5’- GCACTTGCTCTGGGACAT-3’（序列21）；
SEQ NO.22：5’- CCCAGCACCGCTCTTCCGC-3’（序列22）；
SEQ NO.23：5’- TCCCAGCACCGCTCTTCCGT-3’ （序列23）；
SEQ NO.24：5’- TGATTCTGGCTTGTTGGATA-3’ （序列24）；
且摩尔数比为SEQ NO.21：SEQ NO.22/ SEQ NO.23: SEQ NO.24= 0.125：1：1；在检测时，浓度为10uM的上述SEQ NO.21引物的用量为0.05ul-0.2ul, 浓度为10uM的上述引物SEQ NO.22，SEQ NO.23和SEQ NO.24用量为0.6ul-1ul。
还包括检测NUP155 基因多态位点，其中，检测NUP155基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.25 ：5’- GGAGAATCGCTTGAACCC-3’（序列25）；
SEQ NO.26 ：5’- CTGACGCTGGTTCATGTCAA-3’ （序列26）；
SEQ NO.27 ：5’- CTGACGCTGGTTCATGTCAG-3’ （序列27）；
SEQ NO.28 ：5’- TATTGCGTGGTGCTAAGGTT-3’ （序列28）；
且摩尔数比为SEQ NO.25：SEQ NO.26/ SEQ NO.27: SEQ NO.28 = 0.4：1：1；在检测时，浓度为10uM的上述SEQ NO.25引物的用量为0.1ul-0.3ul, 浓度为10uM的上述引物SEQ NO.26，SEQ NO.27和SEQ NO.28的用量为0.3ul-0.7ul。
所述心源性猝死快速基因检测试剂盒还包括扩增试剂，所述扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTPs混合物、热启动Taq酶和超纯水；
优选的，所述扩增试剂包括10倍PCR缓冲液（其中，Tris-HCl pH8.3 100mM； KCl500 mM； MgCl2 15mM），各组分浓度为 2.5mM 的dNTPs混合物， 5U/μl的热启动Taq酶（TaqHS）用量为0.1-0.125μl。
其中，所述PCR缓冲液（其中，Tris-HCl pH8.3 100mM; KCl 500 mM; MgCl215mM），所述dNTPs混合物的各组分浓度为 2.5mM，热启动Taq酶（Taq HS）为5U/μl。
所述试剂盒还包括扩增后的基因分型用试剂，所述扩增后的基因分型用试剂包括琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准（DNA Marker）、DNA无毒染料和DNA上样缓冲液。所述DNA无毒染料可以是Biotium Gelred无毒染料。
优选的，扩增试剂由以下体积的组分组成：
对于上述 KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B所对应的引物中，SEQ NO.1、SEQ NO.5、SEQ NO.9、SEQ NO.13、SEQ NO.17、SEQ NO.21、SEQ NO.25为内参上游引物，SEQ NO.2、SEQ NO.6、SEQ NO.10、SEQ NO.14、 SEQ NO.18、SEQ NO.22、SEQ NO.26、SEQ NO.3、SEQ NO.7、SEQ NO.11、SEQ NO.15、SEQ NO.19、SEQ NO.23、SEQ NO.27为多态性引物，SEQ NO.4、SEQ NO.8、SEQ NO.12、SEQ NO.16、SEQ NO.20、SEQ NO.24、SEQ NO.28为下游引物。所述内参上游引物的浓度为10uM, 所述多态性引物的浓度为10uM，所述下游引物的浓度为10uM。对于所述 KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B，所述内参上游引物、多态性引物和下游引物的用量按以上所述。
心源性猝死快速基因检测方法,其步骤包括：
（1）、检材基因组的DNA提取；
（2）、扩增和扩增产物的检测分析；
其中，PCR扩增试剂由以下体积的组分组成：
对于上述 KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B所对应的引物中，SEQ NO.1、SEQ NO.5、SEQ NO.9、SEQ NO.13、SEQ NO.17、SEQ NO.21、SEQ NO.25为内参上游引物，SEQ NO.2、SEQ NO.6、SEQ NO.10、SEQ NO.14、 SEQ NO.18、SEQ NO.22、SEQ NO.26、SEQ NO.3、SEQ NO.7、SEQ NO.11、SEQ NO.15、SEQ NO.19、 SEQ NO.23、SEQ NO.27多态性引物，SEQ NO.4、SEQ NO.8、SEQ NO.12、SEQ NO.16、 SEQ NO.20、SEQ NO.24、SEQ NO.28为下游引物。所述内参上游引物的浓度为10uM, 所述多态性引物的浓度为10uM，所述下游引物的浓度为10uM。对于所述 KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B，所述内参上游引物、多态性引物和下游引物的用量按以上所述。
其中，所述PCR缓冲液（其中，Tris-HCl pH8.3 100mM; KCl 500 mM; MgCl215mM），所述dNTPs混合物的各组分浓度为 2.5mM，热启动Taq酶（Taq HS）为5U/μl；
PCR 扩增程序如下 ：
（3）、做琼脂糖凝胶电泳分析。
所述扩增采用AS-PCR（等位基因特异性PCR）来进行，然后采用琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统进行多态性分型检测。
其中，所检测的人基因组DNA为使用Chelex法、磁珠提取法或酚/氯仿抽提法对来源样本进行处理得到的DNA；所述来源样本为来源于人类的滤纸片血斑/口腔拭子样本、FTA卡血斑或血液。
其中，引物SEQ NO.1、SEQ NO.5、SEQ NO.9、SEQ NO.13、 SEQ NO.17、SEQ NO.21、SEQ NO.25为内参上游引物；SEQ NO.2、SEQ NO.6、SEQ NO.10、 SEQ NO.14、SEQ NO.18、SEQNO.22、SEQ NO.26、SEQ NO.3、SEQ NO.7、SEQ NO.11、SEQ NO.15、SEQ NO.19、SEQ NO.23、SEQNO.27的 3′端第二位碱基分别为错配碱基，为检测上游引物；SEQ NO.4、SEQ NO.8、SEQNO.12、 SEQ NO.16、SEQ NO.20、SEQ NO.24、SEQ NO.28为内参和检测共用下游引物。
通过AS-PCR及琼脂糖凝胶电泳特异性检测心源性猝死基因；用于基因检测的引物为：SEQ NO.1、SEQ NO.5、SEQ NO.9、SEQ NO.13、SEQ NO.17、SEQ NO.21、SEQ NO.25、SEQNO.2、SEQ NO.6、SEQ NO.10、SEQ NO.14、SEQ NO.18、SEQ NO.22、SEQ NO.26、SEQ NO.3、SEQNO.7、SEQ NO.11、SEQ NO.15、SEQ NO.19、SEQ NO.23、SEQ NO.27、SEQ NO.4、SEQ NO.8、SEQNO.12、SEQ NO.16、SEQ NO.20、SEQ NO.24、SEQ NO.28，所述基因的扩增采用聚合酶链式反应来实现，采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。
本发明选取KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B，7个与心源性猝死显著相关的基因的多态位点作为筛查靶点，应用AS-PCR技术实现快速检测、筛查携带SCD风险基因多态位点的潜在猝死风险个体，从而达到预防SCD发生之目的。
本发明同时检测KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B7个基因的SNP（单核苷酸多态性）多态位点。每个SNP的检测需要4条PCR 引物(一对上下游引物，两条多态引物)，共需要设计28条引物。每个SNP的检测需要做两管PCR扩增，7个SNP，加一管阴控，共做15管PCR。由于15管PCR扩增反应是在同一台PCR仪上同步进行的，为了实现心源性猝死检测的高效性，特异性，要求36条PCR引物的Tm值（退火温度）相近，为此在PCR引物的设计需要做大量的DAN序列软件分析工作，Tm值的优化需要通过大量的实验结果来确定设计的合理性。基于以上原因，本试剂盒各基因SNP多态性的检测是既相对独立又相互联系的，不可分割。
本发明的有益效果如下：通过半巢式AS-PCR 扩增和琼脂糖凝胶电泳检测，根据DNA电泳条带进行基因分型，筛选出具有潜在心源性猝死风险的个体，达到预防心源性猝死的目的；此方法操作简便，检测时间短、成本低，灵敏度高，特异性强，具有良好的社会效益，应用前景广阔。
附图说明
图1是本发明心源性猝死快速基因检测试剂盒基因分型电泳图1；
图2是本发明心源性猝死快速基因检测试剂盒基因分型电泳图2（承接图1）；
图3是本发明心源性猝死快速基因检测试剂盒对各基因多态性分型电泳
图中7、22、13、35号样本对应的测序图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细的描述说明。
心源性猝死快速基因检测试剂盒，包括扩增试剂和扩增后的基因分型用试剂；
所述扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTPs混合物、热启动Taq酶、引物混合物和超纯水；所述扩增后的基因分型用试剂：试剂琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、DNA无毒染料和DNA上样缓冲液。所述 DNA上样缓冲液(DNA loading buffer，6X)，是一种经过适当改良的常规的六倍浓缩的DNA上样缓冲液，以溴酚蓝为指示剂，稀释至1X后比重仍然较大，上样时极易下沉，且颜色清晰可见，此DNA上样缓冲液在市场上可以购买到。
所述扩增试剂包括扩增试剂包括10倍PCR缓冲液（其中，Tris-HCl pH8.3 100mM;KCl 500 mM; MgCl2 15mM），各组分浓度为 2.5mM 的dNTPs混合物， 5U/μl的热启动Taq酶（Taq HS）用量为0.1-0.125μl。优选的，5U/μl的热启动Taq酶（Taq HS）用量为0.125μl。其中，dNTP 混合物为三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸 dGTP，三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸 dATP，三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸 dTTP，三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸 dCTP四中核苷酸组成。
心源性猝死快速基因检测试剂盒，还包括KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B所对应的引物混合物。
其中，检测KCNE1基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.1 ：5’- GTGCCTGGGAAGTTTGAGC-3’；
SEQ NO.2 ：5’- GCAGGTCCCCCCGCAGAA-3’；
SEQ NO.3 ：5’- GCAGGTCCCCCCGCAGAG-3’；
SEQ NO.4 ：5’- CCGTTCTTTCCCAGTCTCAT-3’；
且摩尔数比为SEQ NO.1：SEQ NO.2/ SEQ NO.3: SEQ NO.4 = 1：1：1；或者，在检测时，浓度为10uM的上述引物（SEQ NO. 1，SEQ NO.2，SEQ NO.3和SEQ NO.4）的用量为0.3ul-0.7ul。
检测 KCNH2基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.5 ：5’- GCCGTGCTGTTCTTGCTC-3’；
SEQ NO.6 ：5’- AGGACAAGTATGTGACGGCTC-3’；
SEQ NO.7 ：5’- AGGACAAGTATGTGACGGCTT-3’；
SEQ NO.8 ：5’- GATTGGGGATCTGGTGGAA-3’；
且摩尔数比为SEQ NO.5：SEQ NO.6/ SEQ NO.7: SEQ NO.8 = 1：1：1，或者，在检测时，浓度为10uM的上述引物（SEQ NO. 5，SEQ NO.6，SEQ NO.7和SEQ NO.8）的用量为0.3ul-0.7ul。
检测 SCN5A基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.9 ：5’- ACAGTGATGCTGGCTGGAAG-3’；
SEQ NO.10 ：5’- GAAGTACTTCTTCTCCCCGTC-3’；
SEQ NO.11 ：5’- GAAGTACTTCTTCTCCCCGTT-3’；
SEQ NO.12 ：5’- ATGTTGATGAGGCTTATCTGGTT-3’。
且摩尔数比为SEQ NO.9：SEQ NO.10/ SEQ NO.11: SEQ NO.12 = 0.2-0.5：1：1；或者，在检测时，浓度为10uM的上述SEQ NO.9引物的用量为0.1ul-0.3ul, 浓度为10uM的上述引物SEQ NO.10，SEQ NO.11和SEQ NO.12用量为0.3ul-0.7ul。
检测 KCNJ11基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.13 ：5’- CTCATCGTGCAGAACATCGTG-3’；
SEQ NO.14 ：5’- CGCAAGAGCATGATCATCCA-3’；
SEQ NO.15 ：5’- CGCAAGAGCATGATCATCCG-3’；
SEQ NO.16 ：5’- TGGCCGGGCTACATACCA-3’。
且摩尔数比为SEQ NO.13：SEQ NO.14/ SEQ NO.15: SEQ NO.16= 1：1：1；或者，在检测时，浓度为10uM的上述引物（SEQ NO. 13，SEQ NO.14，SEQ NO.15和SEQ NO.16）的用量为0.3ul-0.7ul。
检测 CACNA1C基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.17 ：5’- GCCTGCAATAGCTTGAAATAAGG-3’；
SEQ NO.18 ：5’- GGTGGGGATGTGCTCAGGTA-3’；
SEQ NO.19 ：5’- GTGGGGATGTGCTCAGGTG-3’；
SEQ NO.20 ：5’- AGAAGGGAAAGAAGGGAATGAG-3’；
且摩尔数比为SEQ NO.17：SEQ NO.18/ SEQ NO.19: SEQ NO.20 =1：0.8-1.2：1；或者，在检测时，浓度为10uM的上述引物（SEQ NO. 17，SEQ NO.18，SEQ NO.19和SEQ NO.20）的用量为0.3ul-0.7ul。
检测 CACNB2B基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.21 ：5’- GCACTTGCTCTGGGACAT-3’；
SEQ NO.22：5’- CCCAGCACCGCTCTTCCGC-3’；
SEQ NO.23 ：5’- TCCCAGCACCGCTCTTCCGT-3’；
SEQ NO.24 ：5’- TGATTCTGGCTTGTTGGATA-3’；
且摩尔数比为SEQ NO.21：SEQ NO.22/ SEQ NO.23: SEQ NO.24 = 0.125：1：1；或者，在检测时，浓度为10uM的上述SEQ NO.21引物的用量为0.05ul-0.2ul, 浓度为10uM的上述引物SEQ NO.22，SEQ NO.23和SEQ NO.24用量为0.6ul-1ul。
检测 NUP155基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.25 ：5’- GGAGAATCGCTTGAACCC-3’；
SEQ NO.26：5’- CTGACGCTGGTTCATGTCAA-3’；
SEQ NO.27 ：5’- CTGACGCTGGTTCATGTCAG-3’；
SEQ NO.28：5’- TATTGCGTGGTGCTAAGGTT-3’。
且摩尔数比为SEQ NO.25：SEQ NO.26/ SEQ NO.27: SEQ NO.28= 0.4：1：1；或者，在检测时，浓度为10uM的上述SEQ NO.25引物的用量为0.1ul-0.3ul, 浓度为10uM的上述引物SEQ NO.26，SEQ NO.27和SEQ NO.28的用量为0.3ul-0.7ul。
优选的，检测KCNE1基因多态位点的引物混合物SEQ NO. 1，SEQ NO.2，SEQ NO.3和SEQ NO.4的用量分别为0.3ul；检测KCNH2基因多态位点的引物混合物SEQ NO. 5，SEQNO.6，SEQ NO.7和SEQ NO.8的用量分别为0.3ul；检测KCNJ11基因多态位点的引物混合物SEQ NO. 9，SEQ NO.10，SEQ NO.11和SEQ NO.12的用量分别为0.3ul；检测SCN5A基因多态位点的引物混合物中SEQ NO.13引物的用量为0.1ul, SEQ NO.14，SEQ NO.15和SEQ NO.16引物用量分别为0.3ul；检测CACNA1C基因多态位点的引物混合物SEQ NO.17，SEQ NO.18，SEQNO.19和SEQ NO.20的用量分别为0.3ul；检测CACNB2B基因多态位点的引物混合物SEQNO.21引物的用量为0.05ul, SEQ NO.22，SEQ NO.23和SEQ NO.24用量分别为0.6ul；检测NUP155基因多态位点的引物混合物SEQ NO.25引物的用量为0.1ul,SEQ NO.26，SEQ NO.27和SEQ NO.28的用量分别为0.3ul。
优选的，检测KCNE1基因多态位点的引物混合物SEQ NO. 1，SEQ NO.2，SEQ NO.3和SEQ NO.4的用量分别为0.7ul；检测KCNH2基因多态位点的引物混合物SEQ NO. 5，SEQNO.6，SEQ NO.7和SEQ NO.8的用量分别为0.7ul；检测KCNJ11基因多态位点的引物混合物SEQ NO.9，SEQ NO.10，SEQ NO.11和SEQ NO.12的用量分别为0.7ul；检测SCN5A基因多态位点的引物混合物中SEQ NO.13引物的用量为0.3ul, SEQ NO.14，SEQ NO.15和SEQ NO.16引物用量分别为0.7ul；检测CACNA1C基因多态位点的引物混合物SEQ NO.17，SEQ NO.18，SEQNO.19和SEQ NO.20的用量分别为0.7ul；检测CACNB2B基因多态位点的引物混合物SEQNO.21引物的用量为0.2ul, SEQ NO.22，SEQ NO.23和SEQ NO.24用量分别为1ul；检测NUP155基因多态位点的引物混合物SEQ NO.25引物的用量为0.3ul,SEQ NO.26，SEQ NO.27和SEQ NO.28的用量分别为0.7ul。
每个基因所对应的SNP位点的检测需要4条引物完成，由于在一个PCR扩增体系中需要同时扩增内参条带和多态性目的条带，因此，会产生PCR竞争性反应，为了提高内参条带和多态性条带的分辨率，需要通过实验将内参引物的摩尔数/体积与多态引物的摩尔数/体积的比例调整到最佳比例，以提高检测时分辨率。
实施例1
扩增试剂由以下体积的组分组成：
所述内参上游引物为SEQ NO.1、SEQ NO.5、SEQ NO.9、 SEQ NO.13、SEQ NO.17、SEQNO.21、SEQ NO.25，多态性引物为SEQ NO.2、SEQ NO.6、SEQ NO.10、SEQ NO.14、SEQ NO.18、SEQ NO.22、SEQ NO.26、SEQ NO.3、SEQ NO.7、SEQ NO.11、SEQ NO.15、SEQ NO.19、SEQNO.23、SEQ NO.27，下游引物为SEQ NO.4、SEQ NO.8、SEQ NO.12、 SEQ NO.16、 SEQ NO.20、SEQ NO.24、SEQ NO.28，所述内参上游引物的浓度为10uM, 所述多态性引物的浓度为10uM，所述下游引物的浓度为10uM。
PCR 扩增程序如下 ：
实施例2
扩增试剂由以下体积的组分组成：
实施例3
扩增试剂由以下体积的组分组成：
为了验证上述信息，可以将扩增产物在ABI3130基因遗传分析仪上的检测分析，以验证本发明上述检测结果。
由去离子甲酰胺与分子量内标组成上样混合物，将10ul上样混合物与1ul扩增产物或等位基因分析标准物混合，避免产生气泡，95℃变性5min，做电泳，用ABI3130基因遗传分析仪检测分析验证分析结果。
所述扩增采用AS-PCR（等位基因特异性PCR）来进行，采用琼脂糖凝胶电泳进行多态性分型检测。
其中所检测的人基因组DNA为使用Chelex法、磁珠提取法或酚/氯仿抽提法对来源样本进行处理得到的DNA；所述来源样本为来源于人类的滤纸片血斑/口腔拭子样本、FTA卡血斑或血液。
通过AS-PCR及琼脂糖凝胶电泳特异性检测心源性猝死基因，KCNE1基因的引物为SEQ NO.1、SEQ NO.2、SEQ NO.3、SEQ NO.4、KCNH2基因的引物为SEQ NO.5、SEQ NO.6、SEQNO.7、SEQ NO.8、SCN5A基因的引物为SEQ NO.13、SEQ NO.14、SEQ NO.15、SEQ NO.16、KCNJ11基因的引物为SEQ NO.9、SEQ NO.10、SEQ NO.11、SEQ NO.12、NUP155基因的引物为SEQNO.25、SEQ NO.26、SEQ NO.27、SEQ NO.28、CACNA1C基因的引物为SEQ NO.17、SEQ NO.18、SEQ NO.19、SEQ NO.20、CACNB2B基因的引物为SEQ NO.21、SEQ NO.22、SEQ NO.23、SEQNO.24，所述基因的扩增采用聚合酶链式反应来实现，采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。
实施例4
本发明的试剂盒检测50个猝死个体的 DNA 样本。
1、待测样本50份，均使用以上所述“DNA提取—PCR扩增—测序”的技术方法对基因进行测序检测。其中7号、13号，22号，35号样本检出阳性结果。
2、检材的基因组DNA提取
Chelex提取法：剪下1～3mm血斑置于1.5ml离心管中，加入sdH2O 1ml,振荡离心，弃上清，重复步骤两次，弃上清，将5%Chelex-100振荡悬浮后快速用剪掉头的枪头吸取200ul 加入离心管中，振荡数秒，于56℃水浴保温30min后，振荡数秒，95℃沸水浴10min,轻微振荡数秒。2000rpm离心5min，上清为提取的DNA。
3、扩增和扩增产物的检测分析
3.1 PCR扩增体系：
3.1 PCR扩增体系：
所述内参上游引物为SEQ NO.1、SEQ NO.5、SEQ NO.9、 SEQ NO.13、SEQ NO.17、SEQNO.21、SEQ NO.25，多态性引物为SEQ NO.2、SEQ NO.6、SEQ NO.10、SEQ NO.14、SEQ NO.18、SEQ NO.22、SEQ NO.26、SEQ NO.3、SEQ NO.7、SEQ NO.11、SEQ NO.15、SEQ NO.19、SEQNO.23、 SEQ NO.27，下游引物为SEQ NO.4、SEQ NO.8、SEQ NO.12、SEQ NO.16、SEQ NO.20、SEQ NO.24、SEQ NO.28，所述内参上游引物的浓度为10uM，所述多态性引物的浓度为10uM，所述下游引物的浓度为10uM。
3.2 PCR 扩增程序：
所述扩增采用AS-PCR（等位基因特异性PCR）来进行，采用琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统进行多态性分型检测。
4、扩增产物在ABI3130基因遗传分析仪上的检测分析验证
由去离子甲酰胺与分子量内标组成上样混合物（0.2ul分子量内标×进样书+9.8ul去离子甲酰胺×进样数）。将10ul上样混合物与1ul扩增产物或等位基因分析标准物混合，避免产生气泡。95℃变性5min，并尽快电泳，用ABI3130基因遗传分析仪检测分析。
5、结论
上述实施例分型完整清晰，结果如图1和图2所示。其中，用M.DL1000 DNA分子量标准；1-6泳道为KCNE1基因的PCR扩增产物；7-10泳道为KCNH2基因的PCR扩增产物；11-16泳道为SCN5A基因的PCR扩增产物；17-20泳道为KCNJ11基因的PCR扩增产物；21-24泳道为CACNA1C基因的PCR扩增产物;25-28泳道为CACNB2B基因的PCR扩增产物;29-32泳道为NUP155基因的PCR扩增产物。7、8，11、12，25、26泳道基因分型为CC型；9、10，13、14，27、28泳道基因分型为CT型；15、16泳道基因分型为TT型；1、2泳道基因分型为AA型；3、4，19、20，23、24，31、31泳道基因分型为AG型；5、6，17、18，21、22，29、30泳道基因分型为GG型。
在图1心源性猝死基因分型电泳图中，KCNE1基因的参考片段大小为894bp,目的条带大小为754bp;KCNH2基因的参考片段大小为760bp,目的条带大小为579bp；KCNJ11基因的参考片段大小为795bp,目的条带大小为624bp;SCN5A基因的参考片段大小为764bp,目的条带大小为698bp;CACNA1C基因的参考片段大小为851bp，目的条带大小为203bp;CACNB2B基因的参考片段大小为914bp,目的条带大小为750bp;NUP155基因的参考片段大小为610bp，目的条带大小为321bp。
如图2所示，正常人的基因型为：KCNE1基因GG型，KCNH2基因CC型，KCNJ11基因GG型，SCN5A基因CC型，CACNA1C基因GG型，CACNB2B基因CC型，NUP155基因GG型。图中的其他基因型均为本实验室运用定点突变技术克隆的阳性样本电泳结果。
如图3所示，图1：7号样本心源性猝死基因分型电泳图中，A泳道和G泳道700bp位置左右出现目的扩曾条带，大小与理目的条带理论值698bp吻合，检为AG杂合，与测序结果一致，表明该个体存在较高的猝死风险。
在图1中，22号样本心源性猝死基因分型电泳图中，A泳道700bp位置左右出现目的扩曾条带，大小与理目的条带理论值698bp吻合，G泳道无目的条带出现，检为AA纯合，与测序结果一致，表明该个体存在很高的猝死风险。
在图1中，13号样本心源性猝死基因分型电泳图中，C泳道和T泳道700bp位置下方出现目的扩曾条带，大小与理目的条带理论值579bp吻合，检为CT杂合，与测序结果一致，表明该个体存在较高的猝死风险。
在图1中，35号样本心源性猝死基因分型电泳图中，A泳道和G泳道300bp位置左右出现目的扩曾条带，大小与理目的条带理论值321bp吻合，检为AG杂合，与测序结果一致，表明该个体存在较高的猝死风险。
以上实施例中所用的Taq热启动聚合酶及其他试剂和耗材均为市售产品。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例，应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明构思在现有技术基础上通过逻辑分析、推理或者根据有限的实验可以得到的技术方案，均应该在由本权利要求书所确定的保护范围之中。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州市体育科学研究所
<120> 心源性猝死快速基因检测试剂盒及检测方法
<160> 28
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<141> 2013-09-13
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GTGCCTGGGA AGTTTGAGC
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GCAGGTCCCC CCGCAGAA
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<212> DNA
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GCAGGTCCCC CCGCAGAG
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<213> 人工序列
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CCGTTCTTTC CCAGTCTCAT
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GCCGTGCTGT TCTTGCTC
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AGGACAAGTA TGTGACGGCT C
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<212> DNA
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AGGACAAGTA TGTGACGGCT T
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GATTGGGGAT CTGGTGGAA
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CTCATCGTGC AGAACATCGT G
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CGCAAGAGCA TGATCATCCA
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CGCAAGAGCA TGATCATCCG
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TGGCCGGGCT ACATACCA
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<212> DNA
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ACAGTGATGC TGGCTGGAAG
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GAAGTACTTC TTCTCCCCGT C
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<212> DNA
<213> 人工序列
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GAAGTACTTC TTCTCCCCGT T
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ATGTTGATGA GGCTTATCTG GTT
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<212> DNA
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GCCTGCAATA GCTTGAAATA AGG
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GGTGGGGATG TGCTCAGGTA
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GTGGGGATGT GCTCAGGTG
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<213> 人工序列
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<400> 20
AGAAGGGAAA GAAGGGAATG AG
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<212> DNA
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GCACTTGCTC TGGGACAT
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<212> DNA
<213> 人工序列
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CCCAGCACCG CTCTTCCGC
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<212> DNA
<213> 人工序列
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TCCCAGCACC GCTCTTCCGT
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<212> DNA
<213> 人工序列
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TGATTCTGGC TTGTTGGATA
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<212> DNA
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<400> 25
GGAGAATCGC TTGAACCC
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<212> DNA
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CTGACGCTGG TTCATGTCAA
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
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CTGACGCTGG TTCATGTCAG
<210> 28
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 28
TATTGCGTGG TGCTAAGGTT

Claims (6)

1.心源性猝死快速基因检测试剂盒，其特征在于，最少包括检测KCNE1、KCNH2、KCNJ11基因多态位点，
其中，检测KCNE1基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.1 ：5’- GTGCCTGGGAAGTTTGAGC-3’；
SEQ NO.２ ：5’- GCAGGTCCCCCCGCAGAA-3’；
SEQ NO.３ ：5’- GCAGGTCCCCCCGCAGAG-3’；
SEQ NO.４ ：5’- CCGTTCTTTCCCAGTCTCAT-3’；
检测KCNH2基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.5 ：5’- GCCGTGCTGTTCTTGCTC-3’；
SEQ NO.6 ：5’- AGGACAAGTATGTGACGGCTC-3’；
SEQ NO.7 ：5’- AGGACAAGTATGTGACGGCTT-3’；
SEQ NO.8 ：5’- GATTGGGGATCTGGTGGAA-3’；
检测KCNJ11基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.9 ：5’- CTCATCGTGCAGAACATCGTG-3’；
SEQ NO.10 ：5’- CGCAAGAGCATGATCATCCA-3’；
SEQ NO.11 ：5’- CGCAAGAGCATGATCATCCG-3’；
SEQ NO.12 ：5’- TGGCCGGGCTACATACCA-3’。
2.根据权利要求1所述的心源性猝死快速基因检测试剂盒，其特征在于，还包括检测SCN5A基因多态位点，其中检测SCN5A基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.13 ：5’- ACAGTGATGCTGGCTGGAAG-3’；
SEQ NO.14 ：5’- GAAGTACTTCTTCTCCCCGTC-3’；
SEQ NO.15 ：5’- GAAGTACTTCTTCTCCCCGTT-3’；
SEQ NO.16 ：5’- ATGTTGATGAGGCTTATCTGGTT-3’。
3.根据权利要求2所述的心源性猝死快速基因检测试剂盒，其特征在于，还包括检测CACNA1C、CACNB2B 基因多态位点，其中，检测CACNA1C基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.17：5’- GCCTGCAATAGCTTGAAATAAGG-3’；
SEQ NO.18 ：5’- GGTGGGGATGTGCTCAGGTA-3’；
SEQ NO.19 ：5’- GTGGGGATGTGCTCAGGTG-3’；
SEQ NO.20 ：5’- AGAAGGGAAAGAAGGGAATGAG-3’；
检测CACNB2B基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.21 ：5’- GCACTTGCTCTGGGACAT-3’；
SEQ NO.22 ：5’- CCCAGCACCGCTCTTCCGC-3’；
SEQ NO.23 ：5’- TCCCAGCACCGCTCTTCCGT-3’；
SEQ NO.24 ：5’- TGATTCTGGCTTGTTGGATA-3’’。
4.根据权利要求3所述的心源性猝死快速基因检测试剂盒，其特征在于， 还包括检测NUP155 基因多态位点，其中，检测NUP155基因多态位点的引物混合物为：
SEQ NO.25 ：5’- GGAGAATCGCTTGAACCC-3’；
SEQ NO.26 ：5’- CTGACGCTGGTTCATGTCAA-3’；
SEQ NO.27 ：5’- CTGACGCTGGTTCATGTCAG-3’；
SEQ NO.28 ：5’- TATTGCGTGGTGCTAAGGTT-3’。
5.根据权利要求1所述的心源性猝死快速基因检测试剂盒，其特征在于，还包括扩增试剂和扩增后的基因分型用试剂，所述扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTPs混合物、热启动Taq酶和超纯水；所述扩增后的基因分型用试剂包括琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、DNA无毒染料和DNA上样缓冲液。
6.根据权利要求5所述的心源性猝死快速基因检测试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂包括10倍PCR缓冲液：其中，Tris-HCl pH8.3 100mM; KCl 500 mM; MgCl2 15mM，各组分浓度为 2.5mM 的dNTPs混合物， 5U/μl的热启动Taq酶用量为0.1-0.125μl。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106868126A (zh) * 2017-02-20 2017-06-20 深圳美因临床检验所有限公司 荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015171370A1 (en) * 2014-05-05 2015-11-12 Medtronic, Inc. Methods and compositions for scd, crt, crt-d, or sca therapy identification and/or selection
CN104561310B (zh) * 2015-01-04 2019-02-05 西安百思达生物科技有限公司 心源性猝死突变基因检测试剂盒
CN108517357B (zh) * 2018-03-12 2022-05-24 山西医科大学 一种检测心源性猝死相关scn5a基因上心源性猝死相关snp的试剂盒及其检测方法
CN109457019B (zh) * 2018-12-31 2021-10-15 山西医科大学 Kcnh2基因scd相关snp检测试剂盒及检测方法
CN112159841B (zh) * 2020-10-10 2022-03-01 苏州大学 基于cox10基因插入缺失多态性位点的心源性猝死易感性检测试剂盒
CN112111572B (zh) * 2020-10-12 2021-10-08 苏州大学 基于stat5a基因插入缺失多态性位点的心源性猝死易感性检测试剂盒
CN112063711A (zh) * 2020-10-12 2020-12-11 苏州大学 基于stim1基因插入缺失多态性位点的心源性猝死易感性检测试剂盒

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1515680A (zh) * 2003-01-06 2004-07-28 同济大学 离子通道抑制剂在治疗心律失常中的应用
CN101580835A (zh) * 2008-05-15 2009-11-18 复旦大学附属中山医院 一种心脏钠通道基因scn5a新突变体及其检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1515680A (zh) * 2003-01-06 2004-07-28 同济大学 离子通道抑制剂在治疗心律失常中的应用
CN101580835A (zh) * 2008-05-15 2009-11-18 复旦大学附属中山医院 一种心脏钠通道基因scn5a新突变体及其检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
基因缺陷导致青壮年心脏性猝死;付译节;《心血管康复医学杂志》;20110630;第20卷(第3期);第289-292页 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106868126A (zh) * 2017-02-20 2017-06-20 深圳美因临床检验所有限公司 荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法
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